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    Enzimatica 1 GLUCOSA OXIDASA

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    Juan C. Ramirez
    Este documento describe la estructura primaria, secundaria, terciaria y actividad catalítica de la glucosa oxidasa producida por Aspergillus niger. La enzima cataliza la conversión de glucosa y oxígeno a D-glucono-1,5-lactona y peróxido de hidrógeno. Tiene una masa molecular de 65.6 kDa, es monomérica y contiene un cofactor FAD. Su sitio activo se encuentra en la posición 538.

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    Enzimatica 1 GLUCOSA OXIDASA

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    Este documento describe la estructura primaria, secundaria, terciaria y actividad catalítica de la glucosa oxidasa producida por Aspergillus niger. La enzima cataliza la conversión de glucosa y oxígeno a D-glucono-1,5-lactona y peróxido de hidrógeno. Tiene una masa molecular de 65.6 kDa, es monomérica y contiene un cofactor FAD. Su sitio activo se encuentra en la posición 538.

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    Este documento describe la estructura primaria, secundaria, terciaria y actividad catalítica de la glucosa oxidasa producida por Aspergillus niger. La enzima cataliza la conversión de glucosa y oxígeno a D-glucono-1,5-lactona y peróxido de hidrógeno. Tiene una masa molecular de 65.6 kDa, es monomérica y contiene un cofactor FAD. Su sitio activo se encuentra en la posición 538.

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    GLUCOSA

    OXIDASA
    Estructura
    Primaria
    ORGANISMO: Aspergillus niger

    ACTIVIDAD CATALÍTICA: beta-D-glucose + O2 = D-glucono-1,5-lactone + H2O2

    TAMAÑO: 605 aminoácidos

    MASA(Da): 65,638
    EC: 1.1.3.4

    COFACTOR: FAD

    SITIO ACTIVO: Posición 538


    Aceptor de Protones

    COMPOSICÍON: Monomérico
    1 molécula polipeptídica

    SMR: P13006

    PDB ID: 1cf3 Figura 1: Estructura primaria, color celeste (C), azul (N), rojo(O), Blanco(H)
    SECUENCIA DE AMINOÁCIDOS:
    10 20 30 40 50 510 520 530 540 550
    MQTLLVSSLV VSLAAALPHY IRSNGIEASL LTDPKDVSGR TVDYIIAGGGAMQTYFAGET IPGDNLAYDA DLSAWTEYIP YHFRPNYHGV GTCSMMPKEM
    60 70 80 90 100
    LTGLTTAARL TENPNISVLV IESGSYESDR GPIIEDLNAY GDIFGSSVDH 560 570 580 590 600
    110 120 130 140 150GGVVDNAARV YGVQGLRVID GSIPPTQMSS HVMTVFYAMA LKISDAILED
    AYETVELATN NQTALIRSGN GLGGSTLVNG GTWTRPHKAQ VDSWETVFGN
    160 170 180 190 200
    EGWNWDNVAA YSLQAERARA PNAKQIAAGH YFNASCHGVN GTVHAGPRDT
    210 220 230 240 250
    GDDYSPIVKA LMSAVEDRGV PTKKDFGCGD PHGVSMFPNT LHEDQVRSDA
    260 270 280 290 300
    AREWLLPNYQ RPNLQVLTGQ YVGKVLLSQN GTTPRAVGVE FGTHKGNTHN
    310 320 330 340 350
    VYAKHEVLLA AGSAVSPTIL EYSGIGMKSI LEPLGIDTVV DLPVGLNLQD
    360 370 380 390 400
    QTTATVRSRI TSAGAGQGQA AWFATFNETF GDYSEKAHEL LNTKLEQWAE
    410 420 430 440 450
    EAVARGGFHN TTALLIQYEN YRDWIVNHNV AYSELFLDTA GVASFDVWDL
    460 470 480 490 500
    LPFTRGYVHI LDKDPYLHHF AYDPQYFLNE LDLLGQAAAT QLARNISNSG

    Estructura

    Figura 3. Estructura secundaria de la Glucosa Oxidasa,

    Secundaria las β-plegada están representadas de color amarillo.


    Posición α-hélice
    1.-GLY25-LEU30 6.-GLY123-VAL128 11.-PRO206-ASP217 16.-SER362-ALA365 21.-ASP464-HIS468 26.-PRO530-HIS532

    2.-ASP33-VAL37 7.-HIS137-VAL147 12.-ASP249-LEU255 17.-PHE376-GLY81 22.-ASN479-ASN498 27.-PRO547-GLY551

    3.-GLY50-THR61 8.-ASN154-ALA165 13.-VAL315-SER323 18.-TYR383-THR393 23.-ALA501-TYR505 28.-VAL582-MET604

    4.-GLY81-ASP86 9.-ASN172-GLY179 14.-MET327-GLU332 19.-LEU395-ARG405 24.-PRO512-LEU516

    5.-LEU87-TYR90 10.-ASN183-HIS187 15.-PRO333-GLY335 20.-ASN410-HIS428 25.-ASP521-ILE529

    Posición β-plegada
    1.-THR41-ALA47 5.-GLU166-ALA168 9.-TYR271-SER278 13.-GLN369 - THR375 17.- PHE470 - ASP473

    2.-VAL68-ILE71 6.-VAL193-ALA195 10.-ARG285-GLY292 14.-ALA431 - ASP438 18.-PHE506 - ILE511

    3.-TYR102-GLY103 7.-GLY233-SER235 11.-THR298 - LEU309 15.-ALA443 - ASP449 19.-ARG534 - PRO535


    Figura 4: Estructura secundaria
    Estructura
    terciaria

    Figura 5. Estructura Terciaria tridimensional globular responsable directa de las propiedades


    biológicas de la enzima.

    Esta enzima se aplica para la determinación de glucosa en fluidos corporales y en la eliminación de


    glucosa u oxígeno residual de alimentos y bebidas. Además, los mohos productores de glucosa
    oxidasa como las especies de aspergillus y penicillium se utilizan para la producción biológica de
    ácido glucónico.

    La enzima cuenta con los siguientes dominios :

    CAT A01 A02 A02 A03 A02 A01 A03 A01 A03 A01 A03 A01
    H GLY25 SER75 LEU115 THR132 THR240 ASN258 ASN347 TYR457 PRO474 GLY541 THR576 ILE593
    - - - - - - - - - - - -
    GLY74 GLU103 GLY131 ASN239 PRO257 LEU346 GLY456 ASP473 VAL540 PRO575 LYS592 GLN605

    PF00732 PF05199 IPR012132


    PFAM InterPro
    VAL42 - THR353 PRO452 - ILE593 ILE26 - GLN605

    EC 6.5.1.1 - DNA ligase (ATP)

    EC 6 Unión de dos moléculas por síntesis de nuevos enlaces C-O, C-S, C-N o C-C con la rotura
    simultánea de ATP

    EC 6.5 Forma ésteres fosfóricos

    EC 6.5.1 Ligasas que forman enlaces éster fosfórico

    EC 6.5.1.1 ADN ligasa (ATP)

    La enzima cataliza la ligadura de hebras de ADN con terminales 3'-hidroxilo y 5'-fosfato, formando
    un fosfodiéster y sellando ciertos tipos de roturas de hebra única en DNA dúplex.

    La catálisis ocurre por un mecanismo de tres pasos:

    1.-Activación de la enzima por ATP, formando un enlace fosforamida entre el adenilato y el


    residuo de la lisina.

    2.- El grupo adenilato se transfiere luego al terminal 5'-fosfato del sustrato, formando la estructura
    cubierta 5 '- (5'-difosfoadenosina) - (ADN).

    3.- Finalmente, la enzima cataliza un ataque nucleofílico del 3'-OH


    EC 5.3.1.1 - triose-phosphate isomerase

    EC 5 Isomerización de una molécula.

    EC 5.3 Oxidorreductasas intramoleculares

    EC 5.3.1 Interconvierten aldosas y cetosas

    EC 5.1.1.1 triosa-fosfato isomerasa

    Es una enzima que cataliza la interconversión entre gliceraldehído-3-fosfato (GADP) y


    dihidroxiacetona fosfato (DHAP), reacción que tiene lugar a través de un intermediario enediol.
    EC 3.2.1.17 - lysozyme

    EC 3 Formación dos productos de un substrato por hidrólisis.

    EC 3.2 Glicosidasas.

    EC 3.2.1 Glicosidasas, es decir, enzimas que hidrolizan compuestos de O- y S-glicosilo

    EC 3.2.1.17 Lisozima

    Es una enzima que cataliza la hidrólisis de las uniones beta 1,4 entre los residuos de ácido N-
    acetilmurámico y N-acetil-D-glucosamina en un peptidoglicano.
    MECANISMO DE REACCIÓN
    UN POLIPÉPTIDO QUIMOTRIPSINA

    El sustrato se une a la enzima

    COMPLEJO ES

    1.-La inestabilidad de la carga negativa


    sobre el oxígeno carbonílico del sustrato
    colapsa al intermediario tetraédrico.

    2.-Se desplaza el enlace entre el carbono


    y el grupo amino de la unión peptídica al
    reformarse el doble enlace.

    1.-La interacción de la Ser 195 y la His57


    genera un ion alcóxido.

    2.-Este ion ataca al grupo carbonilo del


    enlace peptídico, formando un
    intermediario tetraédrico acil-enzima.
    INTERMEDIARIO DE VIDA CORTA

    INTERMEDIARIO DE VIDA CORTA


    El grupo amino saliente es
    protonado por la His57

    1.-Una molécula de oxígeno entra y


    se desprotona generando un ion
    hidróxido.

    2.-Este ion hace un ataque


    nucleofílico sobre la unión éster
    generando un segundo
    INTERMEDIARIO ACIL-ENZIMA
    intermediario tetraédrico.

    1.-El colapso del


    intermediario tetraédrico
    forma el segundo producto.

    INTERMEDIARIO ACIL-ENZIMA

    INTERMEDIARIO DE VIDA CORTA

    (DESACILACIÓN)
    1.-El segundo producto es un anión
    carboxilato y desplaza la Ser 195.

    2.-La difusión del segundo producto


    desde el sitio activo regenera la
    enzima libre.

    QUIMOTRIPSINA LIBRE

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