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    Informe 8. Electroforesis

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    Nelly Chacaguasay
    La práctica describe el procedimiento para realizar una electroforesis de ácidos nucleicos. Se prepara un gel de agarosa al 1% y tampón TBE 1X. Las muestras de ADN se cargan en el gel y se aplica un campo eléctrico para separar los fragmentos por tamaño. Luego se visualizan las bandas de ADN usando un transiluminador. El estudiante aprende sobre la teoría de la electroforesis y cómo separa el ADN, y discute los resultados obtenidos.

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    Informe 8. Electroforesis

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    Nelly Chacaguasay
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    La práctica describe el procedimiento para realizar una electroforesis de ácidos nucleicos. Se prepara un gel de agarosa al 1% y tampón TBE 1X. Las muestras de ADN se cargan en el gel y se aplica un campo eléctrico para separar los fragmentos por tamaño. Luego se visualizan las bandas de ADN usando un transiluminador. El estudiante aprende sobre la teoría de la electroforesis y cómo separa el ADN, y discute los resultados obtenidos.

    Título original

    INFORME 8. ELECTROFORESIS

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    La práctica describe el procedimiento para realizar una electroforesis de ácidos nucleicos. Se prepara un gel de agarosa al 1% y tampón TBE 1X. Las muestras de ADN se cargan en el gel y se aplica un campo eléctrico para separar los fragmentos por tamaño. Luego se visualizan las bandas de ADN usando un transiluminador. El estudiante aprende sobre la teoría de la electroforesis y cómo separa el ADN, y discute los resultados obtenidos.

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    Informe 8. Electroforesis

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    La práctica describe el procedimiento para realizar una electroforesis de ácidos nucleicos. Se prepara un gel de agarosa al 1% y tampón TBE 1X. Las muestras de ADN se cargan en el gel y se aplica un campo eléctrico para separar los fragmentos por tamaño. Luego se visualizan las bandas de ADN usando un transiluminador. El estudiante aprende sobre la teoría de la electroforesis y cómo separa el ADN, y discute los resultados obtenidos.

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    de 8

    ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

    VICERRECTORADO ACADÉMICO
    DIRECCIÓN DE DESARROLLO
    ACADÉMICO

    FACULTAD: RECURSOS NATURALES


    CARRERA: AGRONOMÍA

    GUÍA DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA VEGETAL

    PRÁCTICA N.8 “ELECTROFORESIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS”

    1.- DATOS GENERALES

    NOMBRE: CÓDIGO:

    Nelly Chacaguasay 6761

    GRUPO No.5

    FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

    11/12/2023 11/01/2024
    I. TEMA
    Electroforesis de ácidos nucleicos
    II. INTRODUCCIÓN
    La electroforesis en geles de agarosa o poliacrilamida es una de las metodologías más utilizadas
    en el laboratorio en todo lo relacionado con el trabajo con ácidos nucleicos. Mediante la
    electroforesis podemos separar fragmentos de ADN y ARN en función de su tamaño, visualizarlos
    mediante una sencilla tinción, y de esta forma determinar el contenido de ácidos nucleicos de una
    muestra, teniendo una estimación de su concentración y grado de entereza. Podemos además
    extraer del gel los fragmentos de ADN que sean de interés, para posteriormente utilizarlos en
    diferentes aplicaciones.
    III. OBJETIVOS
    3.1. General
    Conocer el procedimiento para la elaboración de la electroforesis de ácidos nucleicos.
    3.2. Específicos
    • Adquirir conocimiento básico para el manejo y aplicabilidad de una electroforesis y la
    interpretación de esta.
    • Adquirir práctica con los procesos de la electroforesis horizontal sobre gel.
    IV. MARCO TEÓRICO
    4.1. Electroforesis
    La electroforesis es una técnica utilizada en biología molecular y bioquímica para separar
    moléculas, como fragmentos de ADN, ARN o proteínas, en función de su tamaño y carga
    eléctrica. Se realiza mediante la aplicación de un campo eléctrico a través de un gel
    (generalmente de agarosa o poliacrilamida) en el que se han cargado las muestras. Las
    moléculas migran a través del gel de acuerdo con su carga, tamaño y forma, lo que permite su
    separación y posterior análisis. (Genove.gov, 2024)
    4.2. Frangmentos de ADN
    Los fragmentos de ADN son porciones más pequeñas de la molécula de ácido
    desoxirribonucleico. Estos fragmentos se obtienen mediante procesos de fragmentación del ADN
    original, ya sea por enzimas de restricción, PCR u otras técnicas. En el contexto de la
    electroforesis, la longitud de los fragmentos de ADN se evalúa comparando su migración en el gel
    con estándares de tamaño conocido. (Chilebio, 2018)
    4.3. Transiluminador
    Un transiluminador es un dispositivo utilizado en el laboratorio para visualizar y fotografiar geles
    de agarosa o poliacrilamida después de la electroforesis. Emite luz ultravioleta (UV) para excitar
    colorantes fluorescentes, como el bromuro de etidio, que se utilizan para teñir los fragmentos de
    ADN. La emisión de luz UV permite ver los fragmentos de ADN como bandas luminosas en el
    gel cuando están expuestos al transiluminador. Es importante utilizar precauciones de
    seguridad, como gafas protectoras, al trabajar con luz UV. (CROMTEK, 2021)

    V. MATERIALES Y EQUIPOS.
    5.1. Materiales
    • Micropipetas de 0,5 a 10 µL.
    • Puntas de 0,5 a 10 µL.
    • Gradillas- Soportes plásticos
    • Microtubos de 1,5-0,2 mL.
    • Guantes de nitrilo.
    • Papel film
    5.2. Reactivos
    • Agua Ultrapura
    • Muestra de ADN producto de PCR
    • Tampón de carga de muestras (loadying buffer)
    • Agarosa
    • Amortiguador TBE (Tris-acetato-EDTA)
    • Intercalante UniSafe
    • Agua destilada estéril
    5.3. Equipos
    5.3.1. Cámara de electroforesis
    5.3.2. Transiluminador

    VI. INSTRUCCIONES
    Preparación de buffer y gel de agarosa
    1. Diluir el Tris-Borate-EDTA buffer (TBE) de 10x a 1x en agua destilada estéril
    2. Preparar el gel de agarosa al 1% (1g de agarosa en 100mL de TBE).
    3. Con la ayuda de un microondas disolver la agarosa por tiempos de 15 a 10
    segundos. La solución debe quedar transparente.
    4. Posteriormente, cuando la solución se encuentre tibia colocar el agente intercalante
    (UniSafe 5µL en 100mL de solución de agarosa).
    5. Verter la solución en la cuba para formar el gel, colocar el peine para formar los pocillos.
    Importante, cubrir el gel a la luz para evitar la desintegración del agente intercalante.
    Carga de muestras en el gel
    1. Antes de cargar las muestras, cubrir la superficie del gel con la solución buffer TBE.
    2. Sobre una cinta para film mezclar 2 µL de loadying buffer y 2 µL de la muestra de ADN.
    3. Cargar las muestras en los pocillos del gel.
    4. En el primer pocillo cargar el marcador molecular (3 µL del marcador molecular y 2 µL de
    loadying buffer).
    5. Además, en otro pocillo cargar el control negativo de la pcr.
    6. Conectar las cubas y correr la electroforesis:
    - Cuba del bentolab: 60V por 50 minutos
    - Cuba azul: 80V por 80 minutos.
    Las bandas de ADN migrarán hacia el polo positivo.
    1. Tomar el gel y ponerlo en el transiluminador y observar que paso con las bandas
    VII. RESULTADOS OBTENIDOS
    Enunciar el fundamento y resultados de la electroforesis. Discutir la información con
    literatura existente.

    La electroforesis se basa en el principio de que los ácidos nucleicos, como el ADN


    y el ARN, tienen carga negativa debido a los grupos fosfato presentes en su
    estructura. Al aplicar una corriente eléctrica a través de un gel, que actúa como
    un medio poroso, los fragmentos de ácidos nucleicos se desplazan hacia el polo
    positivo. Este desplazamiento ocurre a una velocidad que depende de su
    tamaño, permitiendo la separación de los fragmentos según su movilidad
    eléctrica.
    ¿Cómo se mueven los fragmentos de ADN a través del gel?
    Se pudo observar que al momento que se colocó gel en la cámara, las muestras
    de ADN que se quiere analizar se transfieren a uno de los pozos, en la
    electroforesis de ácidos nucleicos, los fragmentos de ADN se mueven a través
    del gel en respuesta a una corriente eléctrica aplicada. El movimiento de los
    fragmentos de ADN se produce debido a la carga eléctrica negativa de estas
    moléculas
    VIII. CONCLUSIONES
    Se concluye que al realizar el procedimiento para la elaboración de una electroforesis de los
    ácidos nucleicos se debe tener en cuenta los factores que pueden afectar y contribuir a la
    contaminación de los medios ya que la electroforesis es utilizada para separar fragmentos de
    ADN por su tamaño y carga.
    Se logro obtener un conocimiento básico para el manejo de la electroforesis la misma que nos
    permite ver cuántos fragmentos diferentes de ADN están presentes en una muestra y cuan
    grandes son unos con respectos a otros.
    IX. RECOMENDACIONES
    Se recomienda preparar el gel correctamente, teniendo en cuenta un adecuado espacio entre las
    muestras.
    Manipular las muestras con las debidas normas de bioseguridad como son los guantes para evitar
    la contaminación con ADN y otras fuentes.
    Tomar en cuenta el debido manejo de los geles para evitar daños.
    X. CUESTIONARIO

    1. ¿Por qué en la electroforesis se usa tampón de sales (TAE o TBE) para la


    conducción de electricidad y no agua?
    El tampón de sales se utiliza en la electroforesis para proporcionar una conductividad eléctrica
    constante. El agua pura no es un buen conductor eléctrico, mientras que los tampones de sales,
    como TAE (Tris-Acetato-EDTA) o TBE (Tris-Borato-EDTA), mejoran la conductividad y mantienen
    un entorno estable durante el proceso de separación de moléculas.
    2. ¿Qué es la agarosa, de dónde se la obtiene y porqué es comúnmente usada en la
    electroforesis?
    La agarosa es un polisacárido que se extrae de algas marinas rojas. Se utiliza comúnmente en la
    electroforesis debido a su capacidad para formar geles porosos a través de los cuales las
    moléculas de ADN pueden migrar y separarse según su tamaño. La agarosa es fácil de manejar,
    no es tóxica y permite una visualización clara de los fragmentos de ADN.
    3. ¿Qué reactivo permite la visualización de los fragmentos de ADN, mediante la
    estimulación de los rayos UV, cómo funciona ese reactivo?
    El reactivo comúnmente utilizado para la visualización de ADN es el bromuro de etidio. Este se
    intercala entre las cadenas del ADN y, cuando se expone a luz ultravioleta (UV), emite
    fluorescencia, lo que permite la detección de los fragmentos de ADN en un gel. La fluorescencia
    del bromuro de etidio se intensifica al unirse al ADN, lo que facilita la observación y
    documentación de los resultados de la electroforesis.
    4. ¿Cuál es la aplicación del ADN en pruebas de diagnóstico de enfermedades?
    El ADN se utiliza en pruebas de diagnóstico de enfermedades para identificar mutaciones
    genéticas, marcadores genéticos asociados con enfermedades hereditarias y para realizar
    pruebas de paternidad. También se emplea en técnicas como la PCR (Reacción en Cadena de la
    Polimerasa) para amplificar segmentos específicos de ADN y detectar la presencia de agentes
    patógenos como virus o bacterias.
    5. ¿Qué sucedería si no colocásemos tampón y en su lugar agua destilada en la
    solución de la cuba o en la del gel?
    Si se utiliza agua destilada en lugar de tampón en la solución de la cuba o en el gel, la
    conductividad eléctrica sería baja y no se proporcionaría un medio eficiente para la migración de
    las moléculas de ADN durante la electroforesis. La falta de un tampón podría dar lugar a una
    variabilidad en los resultados, una migración irregular de las muestras y la posibilidad de dañar el
    equipo debido a cambios en el pH. El tampón ayuda a mantener un entorno estable y asegura
    una conducción eléctrica consistente durante el proceso de separación.
    XI. ANEXOS
    XII. BIBLIOGRAFIA
    Bibliografía
    Chilebio. 2018. La Estructura del ADN, los genes y el código genético. [En línea] 2018.
    https://www.chilebio.cl/el-adn-los-genes-y-el-codigo-
    genetico/#:~:text=Los%20genes%20son%20fragmentos%20de,un%20tipo%20particular%20de%
    20prote%C3%ADna..
    CROMTEK. 2021. Transiluminador: tipos y aplicaciones en el laboratorio. [En línea] 2021.
    https://www.cromtek.cl/2021/01/13/transiluminador-tipos-y-aplicaciones-en-el-laboratorio/.
    Genove.gov. 2024. Electroforesis. [En línea] 2024. https://www.genome.gov/es/genetics-
    glossary/Electroforesis#:~:text=Definici%C3%B3n,gel%20o%20de%20otra%20matriz..

    PABLO ISRAEL Firmado digitalmente


    ALVAREZ ROMERO
    por PABLO ISRAEL
    ALVAREZ ROMERO
    ---------------------------------------------------
    Dr. Sc. Pablo I. Álvarez-Romero
    Profesor de Biotecnología
    Vegetal

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