UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA

FACULTAD DE INGENIERÍA Y

ARQUITECTURA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

CURSO: BIOTECNOLOGIA

CICLO: VII

INFORME GRUPAL
TEMA: ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA

DOCENTE: SOTO GONZALES, HEBERT HERNAN

DESARROLLADO POR:
• CCALLI CALLATA, MARK ANTONY – 2021205074

• BUSTAMANTE FLORES JHON ENRIQUE - 202120568

• VILLANUEVA LIENDO JONATAN RENE -2021205111

• CHACON CHAMBILLA ADRIAN EMILIO - 2020205072

Moquegua - Ilo – Perú

2024
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índice
1. INTRODUCCIÓN. ................................................................................................................. 3

2. OBJETIVOS. .......................................................................................................................... 4

2.1. Objetivo General. ............................................................................................................. 4

2.2. Objetivos Específicos. ...................................................................................................... 4

3. MARCO TEORICO................................................................................................................ 4

4. EQUIPOS Y MATERIALES. ................................................................................................. 6

4.1. EQUIPOS ......................................................................................................................... 6

4.2. MATERIALES ................................................................................................................. 7

5. PROCEDIMIENTO. ............................................................................................................... 8

6. RESULTADOS. .................................................................................................................... 14

7. DISCUSIÓN ......................................................................................................................... 16
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RESUMEN

La electroforesis en gel de agarosa es una técnica esencial en biología molecular para separar y
analizar fragmentos de ADN según su tamaño mediante un campo eléctrico. En este
experimento, se evaluó la influencia de la concentración de agarosa, el voltaje y el tiempo de
corrida en la resolución de fragmentos de ADN, además de comparar diferentes métodos de
tinción.
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1. INTRODUCCIÓN.

La electroforesis en gel de agarosa es una técnica fundamental en biología

molecular utilizada para separar, visualizar y analizar fragmentos de ADN y ARN
según su tamaño. A través de un campo eléctrico, los ácidos nucleicos migran a
través de una matriz de agarosa, moviéndose a diferentes velocidades en función de
su longitud y conformación. Esta técnica es ampliamente empleada en
investigaciones genéticas, diagnósticos moleculares y en la verificación de
productos de reacciones de PCR, clonación y otros procesos de manipulación de
ácidos nucleicos. La capacidad de observar y cuantificar fragmentos de ADN y
ARN hace que la electroforesis en gel de agarosa sea una herramienta esencial para
el análisis de estructuras genéticas y sus variaciones, permitiendo la identificación
de patrones de restricción, calidad del ADN y niveles de expresión genética, entre
otros.

2. OBJETIVOS.

2.1. Objetivo General.

• Comprender el principio de separación de ácidos nucleicos mediante la

electroforesis en gel de agarosa y su aplicación en el análisis de
fragmentos de ADN y ARN.

2.2. Objetivos Específicos.

• Analizar los efectos de la concentración de agarosa en la resolución de

fragmentos de ADN de diferentes tamaños.
• Identificar la utilidad de los marcadores de peso molecular en la
determinación del tamaño de los fragmentos de ADN.

3. MARCO TEORICO.

Principios de la Electroforesis
La electroforesis es un método de separación de moléculas cargadas basado
en el uso de un campo eléctrico que impulsa la migración de estas a través de
una matriz. En el caso de los ácidos nucleicos, las moléculas de ADN y ARN
están cargadas negativamente debido a los grupos fosfato de su esqueleto, lo
que permite su migración hacia el polo positivo o ánodo. El principio de este
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proceso se fundamenta en la relación entre el tamaño de los fragmentos y su

velocidad de migración; fragmentos de menor tamaño migran más
rápidamente, mientras que los más grandes encuentran mayor resistencia en
la matriz y avanzan con menor velocidad (Sambrook & Russell, 2001).

Gel de Agarosa: Naturaleza y Preparación

El gel de agarosa se obtiene de polisacáridos extraídos de algas marinas,
formando una matriz porosa cuando se enfría, que actúa como un tamiz
molecular. La concentración de agarosa determina el tamaño de los poros y,
en consecuencia, la resolución de los fragmentos: concentraciones bajas (0.5-
1%) son útiles para fragmentos grandes (>1 kb), mientras que
concentraciones altas (1.5-3%) separan eficientemente fragmentos más
pequeños (Sambrook et al., 1989). La preparación del gel incluye la
disolución de agarosa en un buffer de electroforesis y el vertido de esta
mezcla caliente en una bandeja donde se solidifica, formando una red estable
de poros.

Migración y Visualización de Ácidos Nucleicos

El ADN se carga en pocillos en uno de los extremos del gel, y al aplicar un
campo eléctrico, los fragmentos migran a través de la matriz. El tamaño de
los fragmentos es inferido comparando la distancia recorrida con la de un
marcador de peso molecular, el cual contiene fragmentos de tamaño
conocido. La visualización del ADN se realiza mediante tinción,
tradicionalmente con bromuro de etidio, un intercalante fluorescente que se
une al ADN y permite su detección bajo luz UV. Existen métodos alternativos
menos tóxicos, como SYBR Safe y GelRed, que también facilitan la
observación sin comprometer la seguridad del operador (Green & Sambrook,
2012).
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Factores que Afectan la Resolución de la Electroforesis en Agarosa

Diversos factores influyen en la efectividad de la electroforesis. La
concentración del gel, el voltaje aplicado y el tiempo de corrida son variables
críticas para lograr una separación óptima. Altos voltajes pueden acelerar el
proceso, pero con riesgo de sobrecalentamiento, lo que podría distorsionar las
bandas. Asimismo, el buffer de corrida, como el TBE o TAE, proporciona
iones que ayudan a mantener un pH estable, asegurando una migración
constante y evitando la degradación del ADN. Cada uno de estos factores
debe optimizarse según el tipo de muestra y los objetivos del análisis
(Sambrook & Russell, 2001).

4. EQUIPOS Y MATERIALES.

4.1. EQUIPOS
• Fuente de poder para electroforesis: Suministra el voltaje necesario

para generar el campo eléctrico que impulsa la migración de los ácidos

nucleicos en el gel.

• Cámara de electroforesis: Contenedor donde se coloca el gel de agarosa

y se conecta a la fuente de poder.

• Micropipetas y puntas: Se usan para transferir volúmenes precisos de

ADN, marcadores y colorantes a los pocillos del gel.

• Bandeja para gel: Base donde se coloca la agarosa líquida para que se

solidifique formando el gel.

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• Lámpara de luz ultravioleta (UV) o transiluminador: Permite visualizar

las bandas de ADN teñidas con un agente intercalante como bromuro de

etidio o alternativas más seguras.

4.2. MATERIALES

• Agarosa en polvo: Polímero que se disuelve en el buffer para formar el

gel.

• Buffer de electroforesis (TAE o TBE): Solución conductora que

estabiliza el pH y permite el flujo de corriente eléctrica.

• Marcador de peso molecular (ladder): Mezcla de fragmentos de ADN

de tamaños conocidos que sirve de referencia para estimar el tamaño de

las muestras.

• Colorante de carga (loading dye): Mezcla de colorantes que facilita la

visualización de la muestra durante la carga en los pocillos y permite

seguir su avance en el gel.

• Agente de tinción (por ejemplo, bromuro de etidio, SYBR Safe,

GelRed): Sustancia que se une al ADN y permite su visualización bajo

luz UV.
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5. PROCEDIMIENTO.

5.1. COMPOSICIÓN Y PREPARACIÓN DEL GEL DE AGAROSA

5.1.1. Agarosa
Polisacárido natural obtenido de algas que forman una matriz de gel estable y porosa

5.1.2. Tampón
El tampón de electroforesis proporciona el entorno iónico adecuado para la migración de
las muestras

5.2. PREPARACIÓN
La agarosa se funde y mezcla con el tampón, luego se vierte en un molde para formar el
gel

Imagen 1: pesaje en g

fuente: elaboración propia

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Imagen 2: cantidad de ml en el matraz pesado

Fuente: elaboración propia

Imagen 3: Fotodocumentador

Fuente: elaboración propia

5.2.1. Carga y migración de las muestras

• Aplicación

Las muestras se cargan cuidadosamente en los pocillos del gel

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Imagen 4: Campo eléctrico

Fuente: elaboración propia

Imagen 5: baño maría

Fuente: elaboración propia

Al aplicar un voltaje las moléculas cargadas migran a través del gel de agarosa
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Imagen 6: gel de agarosa en el campo eléctrico

Fuente: elaboración propia

Imagen 7: ADN ladder

Fuente: elaboración propia

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Imagen 8: gel solidificado

Fuente: elaboración propia

Separación

Las moléculas se separan en bandas según su tamaño y su carga

5.2.2. Visualización y análisis de los resultados

Imagen 9: configuración bio rad rectificador

Fuente: elaboración propia

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Imagen 10: liberación de hidrogeno y oxigeno

Fuente: elaboración propia

Imagen 12: resultado final

Fuente: elaboración propia

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6. RESULTADOS.

Línea de marcador o escalera de peso molecular (extremo izquierdo):

En la primera columna (extrema izquierda), se observa lo que parece ser una

escalera de peso molecular. Esta es una referencia utilizada para comparar el tamaño
de las otras bandas presentes en el gel. Las bandas bien definidas indican que el
marcador está bien cargado y que las condiciones de la electroforesis permitieron
una adecuada separación de los fragmentos de ADN.

Bandas en las muestras (filas restantes):

Cada pozo representa una muestra diferente. Se pueden ver varias bandas en las
diferentes columnas, lo que sugiere que en las muestras se obtuvo ADN de
diferentes tamaños. Algunas bandas son más nítidas y otras más difusas.
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La nitidez de las bandas generalmente refleja la cantidad y calidad del ADN

presente en la muestra. Las bandas más intensas indican una mayor concentración
de ADN. Si hay bandas difusas o arrastradas, podría indicar degradación del ADN o
impurezas en la muestra.

Posibles resultados por muestra:

Bandas únicas: Esto puede indicar la presencia de un ADN de un solo tamaño, lo

que es común en experimentos de PCR con un blanco específico.

Bandas múltiples: Si en algunas columnas se observan múltiples bandas, esto puede

sugerir la presencia de ADN de diferentes tamaños o amplificación de productos no
específicos en un ensayo de PCR.

Control de calidad:

Si alguna de las columnas no muestra ninguna banda o aparece muy tenue en

comparación con las otras, podría indicar que hubo problemas en la carga de la
muestra o que la concentración de ADN era demasiado baja.

En caso de que todas las muestras muestren una banda única y clara, podrías estar
observando un buen resultado de amplificación o extracción. Por el contrario,
bandas dispersas o arrastradas podrían indicar contaminación o degradación.

Posibles observaciones adicionales:

Ausencia de bandas en algunas muestras: Si hay algún pozo sin bandas, puede
deberse a un problema en la preparación de la muestra (por ejemplo, una baja
concentración de ADN o fallas en la amplificación de la PCR).
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Desplazamiento de las bandas: Si las bandas en un carril no están bien alineadas en

comparación con el marcador, puede deberse a problemas en la carga o en la corrida
del gel, como un voltaje inadecuado o una mala preparación del gel de agarosa.

7. DISCUSIÓN

La electroforesis en gel de agarosa demostró ser una técnica efectiva para la

separación y análisis de fragmentos de ADN, cumpliendo con el objetivo general de
comprender su principio de funcionamiento y su aplicación práctica. Esta técnica
aprovecha la carga negativa de los ácidos nucleicos, los cuales migran hacia el
ánodo en un campo eléctrico, permitiendo su separación en función del tamaño de
los fragmentos. El proceso confirmó que, en una matriz de agarosa, los fragmentos
de ADN más pequeños migran más rápidamente que los fragmentos grandes, dado
que encuentran menos resistencia en el gel. Este comportamiento se alinea con el
principio de tamizado molecular, donde la estructura de la matriz de agarosa influye
directamente en la velocidad de migración, un aspecto crucial en biología molecular
para la caracterización y comparación de fragmentos de ácidos nucleicos.

La aplicación de esta técnica fue efectiva no solo en la separación, sino también en

la visualización y cuantificación de los fragmentos de ADN al usar agentes de
tinción y un marcador de peso molecular. El marcador fue indispensable para
estimar el tamaño de los fragmentos y evaluar la eficacia de la separación,
reafirmando su utilidad en la identificación y análisis de estructuras genéticas en el
contexto de estudios de clonación, secuenciación y diagnóstico.
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8. CONCLUSIONES.

• Calidad y pureza del ADN: Los resultados obtenidos en el gel de electroforesis

muestran la presencia de ADN de diferentes tamaños en varias de las muestras,

lo que indica que el proceso de extracción o amplificación fue exitoso en la

mayoría de los casos. La claridad y nitidez de las bandas sugieren que algunas

muestras tienen ADN de buena calidad, aunque algunas bandas difusas o

arrastradas podrían reflejar contaminación o degradación del ADN.

• Variación en el tamaño de los fragmentos: La distribución de las bandas a lo

largo de las muestras indica que hubo variabilidad en los tamaños de los

fragmentos de ADN, lo que sugiere que las muestras contienen productos de

diferente peso molecular. Esto podría deberse a diferencias en los fragmentos

amplificados durante una reacción de PCR o a fragmentos generados por

cortes enzimáticos durante la digestión del ADN.

• Eficiencia del protocolo experimental: En términos generales, el protocolo de

electroforesis utilizado fue efectivo para separar y visualizar los fragmentos

de ADN. El marcador de peso molecular permitió identificar con precisión el

tamaño de los fragmentos presentes, lo que aporta confianza en la correcta

ejecución de la técnica y en la interpretación de los resultados.

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9. RECOMENDACIONES.

• Optimizar la concentración de agarosa: Ajustar la concentración del gel

según el tamaño de los fragmentos de ADN a analizar para obtener una

mejor resolución.

• Controlar el voltaje y tiempo de corrida: Usar un voltaje moderado y no

extender demasiado el tiempo de corrida para evitar el

sobrecalentamiento del gel y posibles distorsiones en las bandas.

• Utilizar equipos de seguridad: Siempre emplear guantes y gafas de

protección, especialmente si se utiliza bromuro de etidio, debido a su

toxicidad.

• Elegir métodos de tinción más seguros: Considerar alternativas al

bromuro de etidio, como SYBR Safe, para reducir riesgos sin sacrificar

la claridad en la visualización.

• Mantener un registro detallado: Documentar las condiciones

experimentales (concentración de gel, voltaje, tiempo, tipo de tinte) para

facilitar la reproducibilidad y comparación de resultados en futuras

pruebas.
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10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.

• Green, M. R., & Sambrook, J. (2012). Molecular cloning: A laboratory manual (4ª ed.).
Cold Spring Harbor Laboratory Press.

• Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molecular cloning: A laboratory manual (3ª ed.).
Cold Spring Harbor Laboratory Press.

• Brown, T. A. (2016). Gene cloning and DNA analysis: An introduction (7ª ed.). John
Wiley & Sons.

• González, J., & Valdivia, M. (2013). Manual de prácticas de biología molecular.

Editorial UNAM.

ANEXOS

CALAMEO
https://www.calameo.com/read/0077688983510179a3b08
SLIDSHARE
https://es.slideshare.net/slideshow/informe-de-extraccion-de-adn-de-un-platano-
pdf/272179814
SCRIBD
https://es.scribd.com/document/776098836/Informe-de-Platano-ADN
STUDOCU
https://www.studocu.com/pe/document/universidad-nacional-de-
moquegua/biotecnologia/informe-de-platano-adn/106277442?origin=library-
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