3.3.

Nucléolos
óptica_A_21-22
1. Introducción conceptual.- Los nucléolos son estructuras densas, esféricas y de número definido
en los núcleos interfásicos y profásicos de todos los organismos superiores. Los nucléolos son la
sede de la síntesis de estos ARN ribosómicos, de su metabolismo postranscripcional, de su
ensamblaje, por una parte, con los ARN ribosómicos ligeros (5S), y por otra parte, con las
proteínas de origen citoplasmático. Estos ensamblajes macromoleculares, llamados
prerribosomas. Seguidamente transitan hacia el citoplasma donde constituyen el origen de los
ribosomas.
2. Caracterers morfológicos.- En la mayoría de las células, los nucléolos son formaciones bien
individualizadas y fácilmente distinguibles con el microscopio óptico debido a su tamaño (1 a 7 μm
de ø), a su fuerte refringencia y a su afinidad por los colorantes básicos.
- En cuanto a su número, exceptuando el caso particular de los ovocitos en fase de crecimiento, su
número es generalmente inferior a 10; muy a menudo, un nucléolo por núcleo.
- De textura compacta, los nucléolos manifiestan formas groseramente esféricas y están a menudo
cruzados por alveolos rellenados por el nucleoplasma en el que se bañan.
- Su morfología es variable en función de la especie, del tipo celular y del estado fisiológico de la
célula;.
- En el curso de la profase desaparecen y se vuelven a formar en la telofase pudiendo, de esta
forma, constatar que están íntimamente asociados a lugares cromosómicos determinados.
Veremos, en efecto, que los nucléolos son el producto de la actividad de estos lugares
cromosómicos específicos a los cuales se les ha dado el nombre de organizadores
nucleolares. Estos lugares corresponden en los cromosomas en división a las constricciones
secundarias.

- En la especie humana hay un organizador en todos los brazos cortos de todos los pares de
autosomas acrocéntricos. Es decir, los 13, 14, 15, 21 y 22.
3. Estructura.- Con la microscopía electrónica se interpretó la estructura del nucléolo como la
de una esponja con tabiques irregulares interconectados entre los cuales quedan espacios
vacíos. Se distinguieron los siguientes componentes:
1. Parte amorfa (nucleoloplasma). Corresponde a los espacios de escasa densidad, que
forman cavidades intercomunicadas en la parte densa. Contiene gránulos de DNA.
2. Parte densa (nucleolonema)que comprende:
- la parte granular que son acumulaciones de ribonucleoproteínas que forman gránulos de
unos 25 nm y
- la parte fibrilar que es más densa que la anterior y está constituida por fibrillas de unos 8-
10 nm, también formadas por ribonucleoproteínas y
- un Centro fibrilar que es muy evidente en algunos nucléolos, donde puede haber varios
centros fibrilares. Su densidad es inferior a la de las partes granular y fibrilar. Consiste en
finas fibrillas de 7-9 nm. Contiene DNA y algo de RNA. Se ha considerado que los centros
fibrilares son regiones cromosómicas en fase de transcripción de RNAr.
- En muchos nucléolos se observa también una masa fibrilar densa que contiene
exclusivamente DNA, es la heterocromatina asociada al nucléolo, y corresponde a la
heterocromatina de los organizadores nucleolares.
Microfotografía electrónica del
nucléolo.
NE, Envoltura nuclear;
NO. Organizador nucleolar;
PG, Zona granular;
PF, Zona fibrilar;
C, heterocromatina adosoda
4. Organización molecular.-
Estudiaremos sucesivamente:
1. los componentes moleculares del nucléolo
2. las propiedades y la constitución del organizador nucleolar, y
3. la organización de las estructuras fibrilares y granulares de los nucléolos

4.1. Constituyentes moleculares.-

La constitución química de los nucléolos ha sido estudiada in situ mediante
métodos citoquímicos y autorradiográficos e in vitro por el análisis de fracciones de
nucléolos preparadas a partir de núcleos aislados cuya envoltura nuclear se ha roto
por acción de ultrasonidos.
- Hay tres componentes esenciales presentes en los nucléolos: el ADN, el ARN y las
proteínas.
Los nucléolos libres de los ovocitos de
anfibios constituyen un material favorable
para el estudio de la localización de sus
componentes moleculares.

Estos nucléolos, en los anfibios, son a

menudo abundantes y se comprueba que
la zona granular forma una envoltura o
córtex alrededor de la zona fibrilar que
constituye el corazón, tal como podemos
apreciar en la siguiente micrografía
electrónica
 Experimentos de digestión con DNasa o de
marcaje isotópico con actinomicina D tritiada
demuestran que el ADN está presente a nivel del
corazón fibrilar de los nucléolos.
El ARN y las proteínas se localizan en la zona
CG
granular.
Las proteínas representan el componente
cuantitativamente más importante, (∞ 90 % del peso
CF seco de los nucléolos).
Entre estas proteínas se encuentran las histonas
asociadas al ADN nucleolar, proteínas enzimáticas
que intervienen en las diferentes etapas del
metabolismo de los ARN; por último, las proteínas
estructurales de los prerribosomas.
4.2. Organizador nucleolar (NOr).-
Estas estructuras son diferenciaciones cromosómicas funcionales organizadas en
lugares determinados de ciertos cromosomas vectores de los genes ribosómicos
pesados (28S y 18S)
√ Ha sido estudiado en los anfibios, drosófila y en los mamíferos.
√ Las primeras informaciones han sido aportados por análisis citogenéticos.
√ Cada fragmento de organizador tiene un comportamiento autonómo. (Por
irradación se producen rupturas a nivel de los NOr y posteriormente se separan los
fragmentos)
√ W. Beermann (1960), a la vista de estos resultados, concluye que el organizador
nucleolar debe de estar constituido por muchas subunidades idénticas dotadas
de una autonomía funcional.
 √ El estudio de un mutante anucleolar de xenopus ha
venido a apoyar la hipótesis según la cual el organizador
nucleolar contiene los genes ribosómicos 18S y 28S.
√ Los xenopus normales tienen 2 nucléolos en sus células;
por el contrario, los individuos heterozigóticos para la
mutación anucleolar sólo tienen un único nucléolo y
correlativamente uno de los homólogos del par de cromosomas
nucleolares está desprovisto de constricción secundaria. Los
embriones homozigóticos para la mutación están totalmente
desprovistos de nucléolo y mueren en el momento de su
eclosión en el estadio larvario. Se ha establecido (D. D. Brown y
J. B. Gurdon, 1964) que estos embriones no sintetizan ARN
ribosómicos 18S ni 28S, y por tanto tampoco las subnunidades
ribosómicas.
√ Además, pruebas directas como el aislamiento y análisis del ADN
del organizador nucleolar ha proporcionado pruebas directas de la
existencia en este ADN de los genes 18S y 28S.
√ Se ha purificado, a partir de células somáticas de xenopus, una
fracción satélite de ADN formada por largas moléculas en donde
casi el 40 % de sus secuencias se hibridizan con los ARN
ribosómicos 18S y 28S.

√ El ADN del organizador nucleolar está constituido por la

repetición de un carácter genético (unidad de transcripción) que
contiene dos tipos de segmentos de ADN unos que se transcriben y
otros que no se transcriben
Esta UNIDAD DE TRANSCRIPCIÓN EN TANDEM CONTIENE:
√ Inicialmente, un segmento transcrito formado por un ejemplar de cada uno de los
genes 18S y 28S separados por una región intercalar.
√ El intercalar contiene una secuencia que programa para un pequeño ARN 5,8S
√ El gen 18S está precedido, en relación al sentido de transcripción, por un intercalar
transcrito; está seguido por el intercalar que le separa del 28S.
√ El conjuntó de los dos genes 28S y 18S y de los dos intercalares que encierran el gen
5,8S es transcrito de una sola vez; este conjunto representa la unidad de
transcripción nucleolar
 √ En Drosófila, los genes 18S y 28S están separados por un intercalar en
el que están insertadas 2 secuencias que traducen 2 ARN pequeños, uno
5,8S y una 2S, que ulteriormente se asocian por puentes de hidrógeno a
los ARN 28S.
√ Las unidades de transcrición de los genes nucleolares de drosófila no
son homogéneas. Algunos genes 28S contienen un intrón. Además se han
observado 3 ADN satélites uno de los cuales está dispersado entre los
genes 18S y 28S, en los organizadores de esta especie.
√ La redundancia elevada de los genes ribosómicos nucleolares es
general en los eucariotas. (Genes ribosómicos, intercalares y satélites
son los ADN actualmente reconocidos a nivel de los organizadores).
√ En las células somáticas, cada organizador representa un segmento de
la molécula de ADN bicatenaria del cromosoma nucleolar que lo vehicula.
Como en las otras unidades funcionales del cromosoma, las fronteras y el
contenido en información completo de los organizadores nucleolares
todavía no se conocen.
 El dibujo de la parte superior de la figura muestra la apariencia de una porción del DNA de un nucléolo, el cual
transcribe un RNAr.
La representación de abajo ilustra una de las unidades de transcripción que codifica RNAr de Xenopus y
ratones. Las partes del DNA que codifican a los productos del RNAr maduros aparecen en azul. Las regiones del
espacio transcrito, esto es, áreas de DNA que se trancriben pero cuyos RNA correspondientes se degradan
durante el procesamiento, se muestran en amarillo. El espaciador no transcrito que permanece entre las
unidades de transcripción, contiene las regiones promotoras en el extremo 5´del gen.
2.3. Organización de las zonas fibrilares y
granulares.-
La significación de las zonas fibrilares y granulares
ha sido comprendida gracias a las observaciones de
O. L. Miller y B. R. Beatty (1969) en nucléolos
libres de anfibios.

Estos nucléolos contienen uno o varios corazones

fibrilares rodeados por un córtex granular.

En un medio alcalino de baja fuerza inónica, las

dos regiones estructuralmente diferentes se separan,
el córtex granular se desagrega completamente,
mientras que los corazones fibrilares se despliegan
en fibras circulares que están periódicamente
cubiertas por secuencias fibrilares.
1. La micrografía de la figura muestra
numerosos genes que codifican el RNAr
situados uno después del otro a lo largo
de una sola molécula de DNA, la cual
revela la ordenación en tandem de los
genes de RNAr repetidos.
2. La micrografía revela una imagen estática
de sucesos dinámicos que ocurren en el
nucléolo. La micrografía provee con gran
detalle la información acerca de los
procesos de la transcripción del RNAr.
Cada una de las más de 100 fibras que
emergen del DNA, como las ramas de un
árbol de Navidad, es una transcripción del
RNAr que aparece en el proceso de
elongación.
Fig. 7
- Los gránulos oscuros en la base de cada fibrilla que son visibles en la imagen magnificada, son
moléculas de RNA polimerasa I.
- La longitud de las fibrillas se incrementa de forma gradual desde uno de los extremos del tronco del
árbol de navidad al otro extremo.
- Las fibrillas cortas son moléculas de RNA de pocos nucleótidos que se unen por moléculas de
polimerasa al DNA muy cercano al sitio de iniciación de la transcripción. Las fibrillas más largas están
más cerca de la terminación de la transcripción.
- La longitud del DNA entre las fibrillas más cortas y más largas de RNA corresponde a una sola unidad
de transcripción. La elevada densidad de las moléculas de RNA polimerasa a lo largo de cada unidad
de transcripción (cerca de uno por cada 10 PB de DNA) refleja gran velocidad de síntesis de RNAr en
los nucléolos de estos oocitos.
El constituyente granular está formado por partículas ribonucleoproteicas. Estas partículas
provienen de las fibrillas, que, cuando la transcripción de su ARN ha finalizado, se despegan de la
fibra. Cada fibrilla terminada se repliega en un pelotón que migra a la periferia del corazón fibrilar.

En la figura se observa que los transcritos nacientes de RNA contienen partículas asociadas. Estas
partículas consisten en RNA y proteína que trabajan en conjunto para convertir los precursores de
RNAr en sus productos finales de RNAr y ensamblarlos en subunidades ribosómicas. Tales
fenómenos de procesamiento ocurren mientras se sintetizan las moléculas de RNAr.
Fisiología del nucléolo.-
√ El nucléolo es el lugar de formación de los prerribosomas. Esta actividad reviste dos aspectos esenciales:
(1) la biosíntesis y el metabolismo postranscripcional de los ARN prerribosómicos y (2) el autoensamblaje
de los ARN y de las proteínas para dar la ribonucleoproteina.
1. Biosíntesis y metabolismo postranscripcional de los ARN prerribosómicos.- La zona fibrilar es el
lugar de síntesis de los ARN ribosómicos. La organización y el modo de transcripción de los genes
nucleolares es muy parecida en los eucariotas, donde han sido estudiadas.
√ Los tres segmentos que programan los ARN 18S, 5,8S y 28S que forman cada unidad de transcripción
tienen una posición relativa idéntica y son transcritos en una molécula única de ARN prerribosómico. El
gen 18S es transcrito en primer lugar y el 28S en último.
√ La molécula de ARN prerribosómico de gran tamaño tiene una constante de sedimentación de 45S en los
mamíferos y de 40S en los anfibios; presenta secuencias autocomplementarias contiguas que son el
origen de las estructuras secundarias en forma de pinzas de cabello que se pueden poner de manifiesto con
microscopía electrónica; estas estructuras son utilizadas como puntos de referencia topográficos de las
diferentes regiones de la molécula.
 Moléculas de ARN
prerribosómico
células humanas
HeLa. Imagen del
ARN 45S

Las estructuras secundarias en forma de pinza de cabello dan a la molécula 28S una configuración que
permite identificarla y orientarla.
Se observan en efecto dos grandes bucles adyacentes unidos en una figura característica hacia el centro de la
molécula. Los dos extremos de la molécula contienen también estructuras secundarias; pero mientras que el
extremo 5` forma una serie de pequeños bucles consecutivos, el extremo 3', que es también el extremo 3' de la
molécula 45S, contiene un solo bucle. Las dos zonas intermedias entre el doble bucle medio y los dos extremos
forman cada una un pequeño bucle.
 La molécula 18S no
tiene estructura
secundaria. En el seno
de la molécula 45S la
porción correspondiente
a la molécula 28S se
hace fácilmente
distinguible.
En las condiciones
desnaturalizantes
utilizadas para realizar
estas preparaciones la
molécula 5,8S se disocia
del ARN 28S. X 90 000
 √ Las modificaciones metabólicas de los ARN prerribosómicos son igualmente
parecidas en las diferentes especies.
√ En las células HeLa, por ejemplo, en el curso de su transcripción, el ARN
prerribosómico 45S sufre una metilación rápida de unas 110 ribosas de su
molécula agrupadas esencialmente, si no exclusivamente, a nivel de las
regiones de los genes de los ARN 18S, 5,8S y 28S.
√ Esta molécula sufre seguidamente un clivaje nucleásico por etapas
quedando fragmentada en los tres ARN nucleolares definitivos (18S, 28S y
5,8S), mientras que las secuencias intercalares son degradadas. Se cree que hay
una relación entre metilación y clivaje. La metilación protegería a los ARN
conservados contra un ataque nucleolítico por las ribonucleasas.
Funcionamiento del nuclelo.-
Las unidades de transcripción del organizador nucleolar son transcritas a RNA prerribosomico 45S.
A medida que transcurre la elongación las proteínas que han sido previamente sintetizadas en el
citoplasma y que han migrado hacia el núcleo se asocian a este ARN para dar, cuando su elongación
ha terminado, un primer tipo de partícula ribonucleoprotéica: el prerribosoma 80S.
Participa también en el ensamblaje de este prerribosoma inicial una molécula de RNA 5S, transcrita
a nivel de un lugar cromosómio extranucleolar vector de los genes 5S.
El espacio de ADN que contiene el NOR y en el cual tiene lugar la transcripción y el ensamblaje de
las partículas 80S corresponde a la zona fibrilar del nucléolo. La partícula 80S dará a continuación
de una evolución compleja en diversas etapas – que comprenden especialmente el clivaje en
subunidades ribosómicas 60S y 40S.
Las partículas 60S contiene una molécula RNAr 28S, una 5,8S, una 5S y 40 proteinas ribosómicas.
La partícula 40 S contiene una molécula de ARN 18S y 30 proteinas ribosómicas.
Esta maduración de los prerribosomas en las 2 subunidades ribosómicas definitivas se realiza
especialmente en la zona granular cortical del nucléolo.
Las subunidades ribosómicas atraviesan la envoltura nuclear y se ensamblan en el citoplasma en
polisomas.
Las unidades de transcripción del
organizador nucleolar son transcritas
a RNA prerribosomico 45S.
A medida que transcurre la
elongación las proteínas que han sido
previamente sintetizadas en el
citoplasma y que han migrado hacia
el núcleo se asocian a este ARN para
dar, cuando su elongación ha
terminado, un primer tipo de
partícula ribonucleoprotéica: el
prerribosoma 80S.
Participa también en el ensamblaje
de este prerribosoma inicial una
molécula de RNA 5S, transcrita a
nivel de un lugar cromosómio
extranucleolar vector de los genes
5S.