Extrato etanolico de Senna alata no controle de Fusarium oxysporum, causador da murcha-de-fusarium do meloeiro.
Ethanolic extract of Senna alata in control of Fusarium oxysporum responsible for fusarium wilt in melonINTRODUCAO
A producao de melao no Nordeste do Brasil representa grande expressao economica e social, pois esta regiao e responsavel por 90% da producao de melao do grupo Inodorus em nivel nacional (Silva et al., 2003; Dantas et al., 2012). O Rio Grande do Norte desponta como o principal produtor e exportador desta olericola (Sales Junior et al., 2006; IBGE, 2009).
Este aumento na demanda de producao faz com que os produtores adotem praticas continuas de monocultivo somadas a mudancas para metodos cada vez mais intensivos, o que resulta no aumento do numero e severidade de doencas (Medeiros et al., 2006b). Dentre essas, a murcha-do-fusarium, causada pelo fungo Fusarium oxysporum f. sp. Melonis. Esta patologia e responsavel por perdas severas da producao no Brasil e no mundo, com relatos em diversas areas de producao (Marinho et al., 2002; Coutinho et al., 2010).
No inicio da infeccao se observam engrossamento e desintegracao de tecidos do sistema radicular do meloeiro. A murcha e o sintoma mais caracteristico e ocorre tambem em plantas jovens evoluindo a morte, causando danos em qualquer fase de desenvolvimento do meloeiro (Tavares, 2002).
Fusarium oxysporum e um fungo filamentoso que sobrevive no solo em forma de estrutura de resistencia, em resto de cultivo e em sementes infectadas sendo, portanto, um fungo de dificil controle. Alguns metodos sao usados para seu controle, como a aplicacao de micro-ondas no solo, uso de cultivares resistentes e a solarizacao com brometo de metila, sendo este uma maneira efetiva; entretanto, tem gerado grandes danos ao meio ambiente.
Dentre as formas de controle a utilizacao de extratos de S. alata pode constituir-se como uma nova opcao para inibicao de varios micro-organismos responsaveis por perdas elevadas de diversas culturas (Chomnawang et al., 2005). Este metodo pode, inclusive, ser aplicado para fitopatogenos habitantes de solo, como e o caso do Monosporascus cannonballus (Viana et al., 2008) e Myrothecium roridum (Medeiros et al., 2011) ambos importantes fitopatogenos que atacam o meloeiro.
Senna alata (L.) Roxb. e uma planta perene arbustiva pertencente a familia Leguminosae e subfamilia Caesalpinioideae. O interesse por esta planta esta crescendo devido, sobremaneira, as suas propriedades medicinais como antimicrobiana, anti-inflamatoria, anti-hepatica, atianemica, antiblenorragica, antidota e laxante, entre outras (Ibrahim & Osman, 1995; Khan et al., 2001; Somchit et al., 2003; Awal et al., 2004; Barrese Perez et al., 2005; Pieme et al., 2006) e por ser considerada planta daninha (Rodrigues et al., 2009).
Esta planta vem sendo estudada, ainda, por sua capacidade antimicrobiana, visando ao controle de micro-organismos de importancia agricola, atraves do uso de extrato de suas partes (Viana et al., 2008; Medeiros et al., 2011). Esta e uma forma promissora de controle de fitopatogenos haja vista que os produtos quimicos normalmente utilizados podem acarretar resistencia nesses micro-organismos, alem de grandes danos economicos e sociais (Castellanos et al., 2001). Alem de ser considerada planta daninha, a especie e abundante no Rio Grande do Norte e seus compostos sao facilmente biodegradados no meio ambiente; assim, o uso de suas partes vegetativas para fins de controle de fitopatogenos podera constituir-se como alternativa, sem agressao ao meio ambiente.
Tendo em vista a importancia da doenca causada por F. oxysporum em campos de producao de meloeiro e a crescente busca por formas alternativas de controle de fitopatogenos e as propriedades antimicrobianas de S. alata, o objetivo foi avaliar in vitro a eficiencia de diferentes partes de S. alata sobre o crescimento micelial de F. Oxysporum.
MATERIAL E METODOS
O isolado de Fusarium oxysporum utilizado neste experimento foi proveniente de plantas de meloeiro com sintomas de colapso, coletadas em fazendas produtoras de melao no Municipio de Mossoro, RN, maior produtor de melao nacional.
Tais plantas foram enviadas ao laboratorio no qual se realizou o isolamento pelo metodo rotineiro de plaqueamento (Menezes & Silva-Hanlin, 1997). Atraves deste metodo fragmentos superficiais da raiz da planta foram desinfestados e submetidos a tres lavagens consecutivas em agua destilada esteril (ADE) sendo posteriormente secados e transferidos para placas de Petri contendo meio de cultura BDA (batata-dextrose-agar) acrescido de 500 ng [mL.sup.-1] de estreptomicina; cada placa continha 4 fragmentos de raizes de meloeiro com sintoma da doenca; essas placas foram mantidas a 25 [grados]C durante 14 dias, em BOD para crescimento dos fungos; posteriormente, os pontos de isolamento foram repicados para obtencao de cultura pura sendo em seguida identificados por microscopia optica e selecionado um isolado, atraves de testes de patogenicidade; apos a selecao o isolado foi repicado em culturas puras e incubado por 14 dias em estufa (BOD) a 25 [+ o -] 2 [grados]C, sob alternancia luminosa (12 h claro / 12 h escuro) para obtencao do inoculo.
Plantas de Senna alata (L.) Roxb. foram coletadas no municipio de Rafael Fernandes, RN. Em um dos exemplares foi feita uma exsicata a qual foi deposita no herbario MOSS da UFERSA que recebeu o numero de tombo 5508.
Partes vegetais, como caule, folha, raiz e vagem foram coletadas separadamente, pesadas e postas para secar durante sete dias a 65 [grados]C em estufa de circulacao de ar forcado. Apos secadas, as partes vegetais foram trituradas ate grau de po semifino. Os extratos das diferentes partes do vegetal foram preparados por extracao exaustiva com etanol (3 x 500 mL) a frio. Apos a extracao os extratos etanolicos de S. alata foram concentrados em rotavapor sob pressao reduzida e as solucoes estoque de cada parte da planta foram preparadas a partir dos extratos dissolvidos em etanol na concentracao de 1000 Hg [mL.sup.-1].
Diferentes concentracoes dos extratos de partes de Senna alata (caule, folha, raiz e vagem) foram incorporadas ao meio de cultura BDA; em seguida, foram obtidas a partir de diluicoes da solucao estoque de 1000 [micron]g [mL.sup.-1], ate obtencao das concentracoes 0,25; 0,5; 50; 75; 250 e 500 [micron]g [mL.sup.-1].
Disco de 6 mm contendo o inoculo de Fusarium foi retirado das placas de cultura pura com 14 dias e depositado na placa de Petri (9 cm de diametro) que continha BDA + o extrato etanolico de Senna alata, o tratamento controle foi constituido pelo meio BDA sem extrato; as placas foram incubadas a 25 [grados]C em B.O.D e avaliado o crescimento micelial apos 24 h.
O delineamento experimental utilizado foi do tipo inteiramente casualizado, distribuido em esquema fatorial 4 x 6 + 1, sendo 4 tipos de extrato proveniente de diferentes partes da planta e 6 concentracoes de extratos etanolicos mais a testemunha, com quatro repeticoes.
As avaliacoes foram realizadas diariamente atraves de medicao do diametro das colonias (media de duas medidas perpendiculares) ate o total crescimento do tratamento controle; enfim as variaveis analisadas foram:
- Taxa de crescimento micelial (TCM), mm
- Percentagem da inibicao do crescimento micelial (ICM) calculada pela formula de Abbott (1925): Determinada por meio da Eq. (1).
ICM(%) = [(T - t)/T]x100 (1)
em que:
T--testemunha
t--tratamento
--Area abaixo da curva de crescimento micelial (AACCM) utilizando-se a formula, de acordo com a Eq. (2):
AACCM = [suma]yi + (yi + 1)/2[d.sub.ti] (2)
sendo: [y.sub.i] e [y.sub.i+1] sao os valores de crescimento da colonia observados em duas avaliacoes consecutivas e [d.sub.ti] o intervalo entre as avaliacoes. Para efeito de analise os dados originais da ICM foram transformados em arcsen raiz (x + 0,5/100) e submetidos a analise de variancia e as medias comparadas pelo teste de Tukey, a nivel de 5% de probabilidade. Com as medias dos dados brutos foram obtidas e selecionadas curvas de regressao, tendo as concentracoes dos extratos como variavel independente. Modelos exponenciais, logaritimo, quadratico e polinomiais foram testados, e selecionados com base no coeficiente de determinacao ([R.sup.2]) e no quadrado medio do residuo (QMR), conforme Medeiros et al. (2006a).
RESULTADOS E DISCUSSAO
Houve interacao significativa (P = 0,05) entre os extratos de diferentes partes da planta de Senna alata e as diferentes concentracoes nas variaveis inibicao do crescimento micelialICM (Figura 1A) e taxa de crescimento micelial-TCM de Fusarium (Figura 1B).
A concentracao mais eficiente em inibir o crescimento micelial de Fusarium foi a de 500 ng [mL.sup.-1], com media de 9,57; 18,48 e 15,51%, respectivamente, para os extratos de caule, folha e vagem. O mais eficiente dos extratos avaliados nesta concentracao foi o extraido da raiz, com uma media de 20,35% de inibicao do crescimento, sendo quase 50% mais eficiente que o extrato do caule.
[FIGURA 1 OMITIR]
O extrato proveniente desta parte da planta tambem foi o mais eficiente em estudo realizado por Viana et al. (2008), os quais obtiveram, avaliando extratos da mesma planta diante do crescimento de um fitopatogeno tambem habitante do solo, M. cannonballus, indices de inibicao em media de 36,7% muito superiores aos extratos do caule e vagem que apresentaram indices de inibicao do crescimento de 28,6 e 27,99%; entretanto, os autores nao avaliaram o extrato da folha que, no presente experimento, foi o segundo mais eficiente em inibir o crescimento micelial de Fusarium, com media de inibicao de 18,48%.
Houve interacao entre os fatores concentracao e partes da planta de Senna alata diante do crescimento micelial de Fusarium para a variavel TCM. As curvas de regressao que melhor se ajustaram para explicar tais dados foram as polinomiais, com coeficientes de determinacao que variaram de 0,84 a 0,91.
A parte vegetal que permitiu um desenvolvimento maior do micelio de Fusarium, foi o caule que, na concentracao de 500 Hg [mL.sup.-1], permitiu um crescimento de 80,75 mm do referido fungo, enquanto o mais eficiente, o extrato proveniente da raiz, nesta concentracao, permitiu apenas 70,5 mm. Extratos de outras plantas tambem foram efetivos contra este fungo, como Azardiachta indica, Rheum emodi, Eucalyptus globulus, Artemisia annua e Ocimum sanctum (Joseph et al., 2008).
Na area abaixo da curva de crescimento micelial de Fusarium ocorreu efeito significativo apenas para os fatores isolados: concentracao de extrato (Figura 1C) e partes da planta.
A curva polinomial foi a que melhor se enquadrou para descrever o comportamento da variavel AACCM com coeficiente de determinacao de 0,97 (Figura 1C); dentre as concentracoes a que apresentou uma AACCM melhor, foi a de 90 [micro]g [mL.sup.-1].
Em relacao a variavel AACCM, o extrato da parte de Senna alata que apresentou o maior indice foi o proveniente do caule, com media de 30,17, seguido dos extratos etanolicos de raiz, vagem e folha, com medias de 25, 32, 24,14 e 17,00, respectivamente, todos diferindo estatisticamente entre si.
Para o fitopatogeno Myrothecium roridum, as partes de Senna alata que apresentaram maior AACCM, foram os extratos provenientes da vagem e influorescencia, seguidos de caule e raiz (Medeiros et al., 2011). Este fato comprova que os extratos etanolicos de partes vegetais de Senna alata podem atuar de forma especifica para cada tipo de micro-organismo devido as propriedades bioativas especificas contidas em cada um dos orgaos da referida planta.
Tais compostos sao sintetizados pelo metabolismo secundario das plantas que atuam como mecanismo de defesa contra fatores adversos e suas concentracoes em diferentes partes da planta podem variar pela influencia de varios tipos de fatores, sejam eles principalmente ambientais e/ou geneticos. A prevalencia neste trabalho da efetividade dos extratos da raiz e da folha de S. alata sobre F. oxysporum pode ter sido devido, provavelmente, por essas partes estarem em constante atividade metabolica e de crescimento e acabarem concentrando maior quantidade de metabolitos bioativos com atividade antimicrobiana. Fatores como estresse ambiental, atividade de parasitas, alem da idade do vegeta, podem influenciar especificamente no aumento da concentracao de bioativos (Gobbo Neto & Lopes, 2007; Viana et al., 2008).
CONCLUSOES
1. Os extratos etanolicos de todas as partes de Senna alata foram eficazes no controle in vitro de Fusarium oxysporum.
2. Extratos de raiz e vagem foram os mais eficientes em inibir o crescimento micelial de F. oxysporum, na concentracao 500 Hg [mL.sup.-1].
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Erika V. de Medeiros (1), Marcelino G. Viana (2), Cynthia C. de Albuquerque (3), Francisco A. Viana (3) & Kathia M. B. e Silva (4)
(1) UFRPE, Unidade Academica de Garanhuns (UAG), CEP 55292-455, Garanhuns, PE. Fone: (87) 9921.0507. E-mail: [email protected]
(2) UFERSA, Departamento de Ciencias Animais (DCAN). CEP 59625-900, Mossoro, RN. Fone: (84) 9654.1651
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(4) UERN, Departamento de Quimica (DQ), CEP 59625-620, Mossoro, RN. Fone: (84) 8801.3585. E-mail: [email protected]
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| Title Annotation: | articulo en portugues |
|---|---|
| Author: | de Medeiros, Erika V.; Viana, Marcelino G.; de Albuquerque, Cynthia C.; Viana, Francisco A.; e. Silv |
| Publication: | Revista Brasileira de Engenharia Agricola e Ambiental |
| Date: | Nov 1, 2012 |
| Words: | 3103 |
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