Fizykochemiczne Podstawy Zycia

Błażej GIERCZYK, Grzegorz SCHROEDER
Fizykochemiczne podstawy
życia
materiały do ćwiczeń
Uniwersytet im. A. Mickiewicza

Wydział Chemii
Poznań 2001
Autorami rozdziału 2 są Krystian Eitner i Jakub Grajewski
Recenzenci: dr Bogusława Łęska, prof. dr hab. Władysław Boczoń
ISBN 83-915657-2-6
2
SPIS TREŚCI
1 Regulamin pracowni .............................................................................................................................................. 9
2 Praca i bezpieczeństwo pracy w laboratorium chemicznym ...............................................................................10
2.1 Zasady ogólne ...................................................................................................................................................10
2.1.1 Przed przystąpieniem do pracy ......................................................................................................................10
2.1.2 W czasie wykonywania ćwiczenia.................................................................................................................10
2.1.3 Po zakończeniu ćwiczenia..............................................................................................................................10
2.2 Postępowanie w razie wypadku ........................................................................................................................10
2.2.1 Pożary, wybuchy, oparzenia termiczne..........................................................................................................10
2.2.2 Oparzenia chemiczne i zatrucia oraz sposoby udzielania pierwszej pomocy................................................11
2.2.3 Porażenie prądem elektrycznym ....................................................................................................................12
2.2.4 Skaleczenia.....................................................................................................................................................12
2.2.5 Krótkotrwała utrata przytomności..................................................................................................................13
2.2.6 Nagłe zatrzymanie czynności serca, krążenia i oddychania ..........................................................................13
2.2.7 Wyposażenie apteczki laboratoryjnej ............................................................................................................13
2.3 Wyposażenie laboratorium chemicznego .........................................................................................................13
2.3.1 Praca z odczynnikami chemicznymi ..............................................................................................................13
2.3.2. Oznaczenia na odczynnikach ........................................................................................................................14
2.3.2.1 Piktogramy ..................................................................................................................................................14
2.3.2.2 Symbole literowe R (risks) i S (safety) .......................................................................................................14
2.3.3 Oznaczenia instalacji......................................................................................................................................19
2.3.4 Oznaczenia na gaśnicach................................................................................................................................19
2.4 Sprzęt laboratoryjny ..........................................................................................................................................19
2.4.1 Waga laboratoryjna ........................................................................................................................................19
2.4.2 Sprzęt szklany ................................................................................................................................................21
2.4.2.1 Ogólne uwagi o pracy ze sprzętem szklanym .............................................................................................21
2.4.2.2 Ważniejszy sprzęt szklany stosowany w laboratorium...............................................................................21
2.4.3 Sprzęt metalowy .............................................................................................................................................32
2.4.4 Sprzęt elektryczny ..........................................................................................................................................36
2.4.4.1 Ogólne zasady bezpiecznej pracy na stanowiskach z prądem elektrycznym .............................................36
2.4.4.2 Ważniejszy sprzęt elektryczny stosowany w laboratorium ........................................................................36
2.4.5 Sprzęt porcelanowy ........................................................................................................................................39
3 Wybrane techniki laboratoryjne ...........................................................................................................................41
3.1 Chromatografia..................................................................................................................................................41
3.1.1 Podział chromatografii zależnie od dominującego mechanizmu procesu rozdziału .....................................41
3.1.2 Podział chromatografii w zależności od sposobu przeprowadzania rozdziału..............................................41
3.1.3 Wykonanie chromatogramu cienkowarstwowego .........................................................................................42
3.2 Analiza miareczkowa ........................................................................................................................................43
3.2.1 Przygotowanie do miareczkowania................................................................................................................43
3
3.2.2 Miareczkowanie .............................................................................................................................................43
4 Ćwiczenie 1 ..........................................................................................................................................................45
4.1 Równowagi w roztworach elektrolitów – wstęp teoretyczny ...........................................................................45
4.1.1 Elektrolity, dysocjacja elektrolityczna ...........................................................................................................45
4.1.2 Aktywność i współczynnik aktywności .........................................................................................................46
4.1.3 Iloczyn rozpuszczalności, efekt solny, efekt wspólnego jonu .......................................................................47
4.1.4 Iloczyn jonowy wody, wykładnik stężenia jonów wodorowych ...................................................................49
4.1.5 Wskaźniki kwasowo-zasadowe, pehametr.....................................................................................................49
4.1.6 Roztwory buforowe........................................................................................................................................52
4.1.7 Hydroliza ........................................................................................................................................................53
4.1.8 Teorie kwasów i zasad ...................................................................................................................................55
4.1.8.1 Teoria Arrheniusa........................................................................................................................................55
4.1.8.2 Teoria Lowry’ego-Brönsteda ......................................................................................................................55
4.1.8.3 Teoria Lewisa ..............................................................................................................................................56
4.2 Równowagi elektrolityczne w roztworach – część ekperymentalna ................................................................57
5 Ćwiczenie 2 ..........................................................................................................................................................61
5.1 Reakcje utleniania - redukcji – wstęp teoretyczny............................................................................................61
5.1.1 Procesy utleniania-redukcji ............................................................................................................................61
5.1.2 Potencjały normalne utleniania-redukcji........................................................................................................61
5.1.3 Stałe równowagi reakcji utleniania-redukcji..................................................................................................62
5.1.4 Wskaźniki red-ox (utleniania-redukcji) .........................................................................................................63
5.2 Reakcje utleniania-redukcji – część eksperymentalna......................................................................................65
6 Ćwiczenie 3 ..........................................................................................................................................................69
6.1 Kinetyka reakcji chemicznych – wstęp teoretyczny .........................................................................................69
6.1.1 Szybkość reakcji.............................................................................................................................................69
6.1.2 Rzędowość i cząsteczkowość reakcji.............................................................................................................69
6.1.3 Równania kinetyczne .....................................................................................................................................69
6.1.4 Czynniki wpływające na szybkość reakcji.....................................................................................................71
6.1.4.1 Wpływ temperatury.....................................................................................................................................71
6.1.4.2 Wpływ stężenia ...........................................................................................................................................71
6.1.4.3 Wpływ ciśnienia..........................................................................................................................................71
6.1.4.4 Wpływ środowiska......................................................................................................................................71
6.1.5 Teoretyczne podstawy kinetyki......................................................................................................................72
6.1.5.1 Teoria zderzeń .............................................................................................................................................72
6.1.5.2 Teoria stanu przejściowego.........................................................................................................................72
6.2 Kinetyka reakcji chemicznych – część eksperymentalna .................................................................................75
7 Ćwiczenie 4 ..........................................................................................................................................................77
7.1 Termodynamika i statyka chemiczna – wstęp teoretyczny...............................................................................77
7.1.1 Pierwsza zasada termodynamiki. Entalpia tworzenia. ...................................................................................77
7.1.2 Ciepło reakcji. Prawo Kirchhoffa. Prawo Hessa............................................................................................77
4
7.1.3 Druga i trzecia zasada termodynamiki. Entropia. ..........................................................................................78
7.1.4 Entalpia swobodna i energia swobodna .........................................................................................................79
7.1.5 Statyka chemiczna..........................................................................................................................................79
7.2 Statyka chemiczna – część eksperymentalna....................................................................................................81
8 Ćwiczenie 5 ..........................................................................................................................................................83
8.1 Kataliza – wstęp teoretyczny.............................................................................................................................83
8.1.1 Katalizatory i inhibitory .................................................................................................................................83
8.1.2 Kataliza homogeniczna, heterogeniczna i autokataliza. ................................................................................83
8.1.3 Mechanizm procesów katalitycznych ............................................................................................................84
8.2 Kataliza i termodynamika chemiczna – część eksperymentalna ......................................................................85
9 Izomeria................................................................................................................................................................87
10 Ćwiczenie 6 ........................................................................................................................................................93
10.1 Aminokwasy i białka – wstęp teoretyczny......................................................................................................93
10.1.1 Aminokwasy.................................................................................................................................................93
10.1.2 Właściwości kwasowo – zasadowe aminokwasów .....................................................................................98
10.1.3 Wiązanie peptydowe ....................................................................................................................................99
10.1.4 Peptydy, białka ...........................................................................................................................................100
10.1.5 Klasyfikacja protein ...................................................................................................................................105
10.1.5.1 Podział białek ze względu na rozpuszczalność.......................................................................................105
10.1.5.2 Klasyfikacja na podstawie kształtu .........................................................................................................105
10.1.5.3 Klasyfikacja ze względu na budowę .......................................................................................................106
10.1.6 Reakcje aminokwasów i białek ..................................................................................................................107
10.1.6.1 Reakcja z ninhydryną ..............................................................................................................................107
10.1.6.2 Odczyn ksantoproteinowy.......................................................................................................................107
10.1.6.3 Odczyn Millona.......................................................................................................................................107
10.1.6.4. Odczyn biuretowy ..................................................................................................................................108
10.1.6.5 Reakcja Adamkiewicza-Hopkinsa (odczyn na tryptofan) ......................................................................108
10.1.6.6 Odczyn Sakugachiego na argininę ..........................................................................................................108
10.1.6.7 Odczyn Pauliego na histydynę ................................................................................................................108
10.1.6.8 Reakcje aminokwasów siarkowych ........................................................................................................109
10.1.7 Strącanie, denaturacja i wysalanie białek...................................................................................................109
10.2 Aminokwasy i białka – część eksperymentalna............................................................................................111
11 Ćwiczenie 7 ......................................................................................................................................................115
11.1 Sacharydy – wstęp teoretyczny .....................................................................................................................115
11.1.1 Monosacharydy ..........................................................................................................................................115
11.1.2 Oligosacharydy...........................................................................................................................................118
11.1.3 Pochodne monosacharydów, monosacharydy o nietypowej budowie.......................................................119
11.1.4 Polisacharydy .............................................................................................................................................122
11.1.5 Glikozydy (heterozydy)..............................................................................................................................125
11.1.6 Reakcje cukrów ..........................................................................................................................................127
5
11.1.6.1 Odczyny kondensacyjne..........................................................................................................................127
11.1.6.2 Tworzenie kompleksów z jonami miedzi ...............................................................................................127
11.1.6.3 Odczyny redukcyjne................................................................................................................................128
11.1.6.4 Epimeryzacja sacharydów.......................................................................................................................128
11.1.6.5 Hydroliza sacharydów.............................................................................................................................129
11.1.6.6 Reakcje polisacharydów z jodem............................................................................................................129
11.2 Sacharydy – część eksperymentalna .............................................................................................................131
12 Ćwiczenie 8 ......................................................................................................................................................133
12.1 Lipidy – wstęp teoretyczny ...........................................................................................................................133
12.1.2 Kwasy tłuszczowe. .....................................................................................................................................133
12.1.2 Tłuszcze proste...........................................................................................................................................134
12.1.3 Tłuszcze złożone ........................................................................................................................................135
12.1.4 Sterole.........................................................................................................................................................140
12.1.5 Napięcie powierzchniowe, związki powierzchniowo czynne, micele.......................................................141
12.1.6 Koloidy.......................................................................................................................................................142
12.1.7 Reakcje lipidów..........................................................................................................................................143
12.1.7.1 Wykrywanie gliceryny ............................................................................................................................143
12.1.7.2 Zmydlanie tłuszczów...............................................................................................................................143
12.1.7.3 Wykrywanie wiązań podwójnych w lipidach .........................................................................................144
12.1.7.4 Reakcja cholesterolu ...............................................................................................................................145
12.2 Lipidy – część eksperymentalna ...................................................................................................................147
13. Ćwiczenie 9 .....................................................................................................................................................149
13.1 Otrzymywanie i chromatografia lipidów złożonych.....................................................................................149
14 Ćwiczenie 10 ....................................................................................................................................................151
14.1 Kwasy nukleinowe – wstęp teoretyczny .......................................................................................................151
14.1.1 Zasady azotowe, nukleozydy, nukleotydy .................................................................................................151
14.1.2 Kwasy nukleinowe .....................................................................................................................................153
14.2 Kwasy nukleinowe – część eksperymentalna ...............................................................................................159
15. Ćwiczenie 11 ...................................................................................................................................................161
15.1 Barwniki naturalne – wstęp teoretyczny .......................................................................................................161
15.1.1 Teoria barwy ..............................................................................................................................................161
15.1.2 Podstawy fotokolorymetrii.........................................................................................................................162
15.1.3 Ważniejsze klasy barwników naturalnych .................................................................................................163
15.1.3.1 Karotenoidy .............................................................................................................................................163
15.1.3.2 Barwniki porfirynowe i pirolowe............................................................................................................166
15.1.3.3 Flawonoidy..............................................................................................................................................169
15.1.3.4 Inne barwniki roślinne.............................................................................................................................172
15.1.3.5 Inne barwniki zwierzęce..........................................................................................................................176
15.2 Barwniki naturalne – część eksperymentalna ...............................................................................................179
16. Ćwiczenie 12 ...................................................................................................................................................181
6
16.1 Reakcje enzymatyczne – wstęp teoretyczny .................................................................................................181
16.1.1 Enzymy.......................................................................................................................................................181
16.1.2 Klasyfikacja enzymów ...............................................................................................................................181
16.1.3 Charakterystyka poszczególnych klas enzymów .......................................................................................182
16.1.4 Kinetyka reakcji enzymatycznych. ............................................................................................................183
16.1.5 Wpływ inhibitorów i aktywatorów na szybkość reakcji enzymatycznych. Enzymy allosteryczne. .........184
16.1.6 Wpływ pH i temperatury na aktywność enzymów. ...................................................................................184
16.2 Reakcje enzymatyczne – część eksperymentalna .........................................................................................185
17 Ćwiczenie 13 ....................................................................................................................................................187
17.1 Procesy utleniania-redukcji w organizmach żywych – wstęp teoretyczny...................................................187
17.1.1 Biologiczne układy utleniania-redukcji .....................................................................................................187
17.1.2 Barwniki hemowe ......................................................................................................................................188
17.2 Procesy utleniania-redukcji w organizmach żywych – część eksperymentalna...........................................191
18. Tablice i wiadomości uzupełniające ...............................................................................................................193
18.1 Sposoby wyrażania zawartości składników w mieszaninach i roztworach ..................................................193
18.2 Roztwory kwasów i zasad .............................................................................................................................193
18.3 Wartości stałych dysocjacji ważniejszych kwasów i zasad ..........................................................................194
7
8
Różnorodność pracy w laboratorium stwarza o wiele większe ryzyko wystąpienia wypadku niż podczas
ściśle opracowanych procesów produkcyjnych. Z tego względu należy przestrzegać przepisów BHP. Każde
laboratorium posiada szczegółowy regulamin uwzględniający specyfikę pracy i warunków tam panujących.
1 Regulamin pracowni
1. Studenci przebywają na pracowni wyłącznie w dniach i godzinach przewidzianych planem zajęć.
2. Student na pracowni zobowiązany jest przebywać w kitlu oraz w okularach ochronnych.
3. Zabrania się wykonywania doświadczeń nie umieszczonych w harmonogramie ćwiczeń oraz wynoszenia
odczynników w z pracowni.
4. Na stanowiskach pracy należy zachować porządek. Na stole laboratoryjnym mogą znajdować się tylko
przedmioty i rzeczy związane z bezpośrednim wykonywaniem ćwiczenia, ubrania wierzchnie należy
zostawiać w szatni.
5. Studentów obowiązuje oszczędzanie odczynników, wody destylowanej, gazu oraz energii elektrycznej.
6. Zabrania się spożywania posiłków oraz picia napojów podczas pobytu na pracowni.
7. Palenie tytoniu jest zabronione w całym gmachu Collegium Chemicum.
8. W przypadku powstania pożaru należy natychmiast zaalarmować prowadzących ćwiczenia oraz zgodnie z
ich wskazówkami, opuścić salę ćwiczeń.
9. Zaistniałe poparzenia lub skaleczenia należy natychmiast zgłaszać prowadzącym ćwiczenia.
10. W przypadku wystąpienia objawów zatrucia należy zgłosić się do osoby prowadzącej ćwiczenia. Jeśli takie
objawy zostaną zauważone po godzinach ćwiczeń należy natychmiast zgłosić się do lekarza.
11. Zabrania się pipetowania wszelkich cieczy ustami.
12. Warunkiem otrzymania zaliczenia jest wykonanie ćwiczeń przewidzianych programem oraz rozliczenie się
ze sprzętu.
13. Rażące przekroczenie obowiązujących przepisów może pociągnąć za sobą usunięcie z pracowni oraz inne
konsekwencje dyscyplinarne przewidziane regulaminem studiów.
TELEFONY ALARMOWE
Pogotowie ratunkowe 999
Straż pożarna 998
9
2 Praca i bezpieczeństwo pracy w laboratorium chemicznym
2.1 Zasady ogólne
2.1.1 Przed przystąpieniem do pracy
Praca w laboratorium powinna być poprzedzona odpowiednimi przygotowaniami:
• szczegółowe zapoznanie się z rozmieszczeniem sprzętu gaśniczego i instrukcjami jego użycia, apteczki
laboratoryjnej, telefonu alarmowego oraz wyjść ewakuacyjnych;
• zaznajomienie się z częścią teoretyczną zagadnienia;
• poznanie właściwości stosowanych odczynników, sposobów bezpiecznego obchodzenia się z nimi, ich
utylizacji oraz udzielania pierwszej pomocy w razie wypadku;
• poznanie aparatury używanej podczas wykonywania pracy;
• sprawdzenie czystości miejsca pracy oraz jego okolic, należy także sprawdzić sprawność instalacji, które
używane będą w czasie eksperymentu;
• sprawdzenie kompletności wyposażenia potrzebnego do pracy.
2.1.2 W czasie wykonywania ćwiczenia

W celu bezpiecznego przeprowadzenia eksperymentu należy:
• bezwzględnie stosować się do zaleceń prowadzącego ćwiczenia;
• nigdy nie pracować w laboratorium samemu;
• zachowywać porządek w miejscu pracy, zwracając uwagę na rodzaje powstających odpadków i związanych
z nimi zagrożeń;
• używać fartuchów ochronnych; powinny one być białe, bawełniane, zapinane z przodu, w czasie
wykonywania czynności laboratoryjnych powinny być one zapięte;
• cały czas nosić okulary ochronne lub inne osłony twarzy osłaniające oczy zarówno z przodu jak i z boku;
• wszystkie niebezpieczne doświadczenia przeprowadzać pod dygestorium ze sprawnym wyciągiem;
• unikać gromadzenia większej ilości odczynników na stole laboratoryjnym;
• ewentualne wyjścia z pracowni podczas zajęć należy zgłaszać prowadzącemu zajęcia.
2.1.3 Po zakończeniu ćwiczenia

Przed opuszczeniem laboratorium należy:
• umyć i pochować wszystkie używane naczynia;
• sprawdzić, czy wszystkie instalacje zostały wyłączone;
• zabezpieczyć używane substancje chemiczne;
• zutylizować resztki odczynników według wskazówek prowadzącego.
2.2 Postępowanie w razie wypadku

Nie wolno bagatelizować żadnego wypadku. Nawet błahe z pozoru obrażenia mogą nieść za sobą nieodwracalne
skutki. O zdarzeniu należy zawsze powiadomić prowadzącego zajęcia laboratoryjne lub kierownika
laboratorium. W przypadku utraty przytomności bezwzględnie sprawdzić drożność dróg oddechowych u
poszkodowanego, stwierdzić czy oddycha, zbadać tętno, położyć na boku, z nisko ułożoną głową.
2.2.1 Pożary, wybuchy, oparzenia termiczne

Powodem pożaru może być przeskoczenie płomienia w palniku lub nieostrożne obchodzenie się z substancjami
łatwopalnymi. W celu uniknięcia takich wypadków należy dokładnie sprawdzać szczelność aparatury, reakcje
niebezpieczne przeprowadzać pod wyciągiem, nie dopuszczać do przegrzania cieczy łatwopalnych podczas ich
ogrzewania, a używanie otwartego ognia na laboratorium ograniczyć do minimum. Substancje palne
(rozpuszczalniki organiczne) ogrzewać za pomocą elektrycznych łaźni wodnych, olejowych lub piaskowych,
bądź czasz grzejnych. Należy także pamiętać o groźbie wystąpienia pożaru w sąsiedztwie substancji
łatwopalnych o dużej prężności par. W razie pożaru nie można dopuścić do paniki. W miarę możliwości należy
10
usunąć z sąsiedztwa butle ze sprężonymi gazami oraz substancje łatwopalne. Gdy płonie ubranie
poszkodowanego nie należy dopuścić do biegania po laboratorium, co może spowodować rozprzestrzenienie się
ognia. Ogień należy gasić przez szczelne owinięcie kocem gaśniczym.
W celu uniknięcia następstw wybuchów należy reakcje grożące eksplozją przeprowadzać w oddzielnych
pomieszczeniach, przy zgaszonych palnikach i wyłączonych urządzeniach elektrycznych. Należy pamiętać o
możliwości wystąpienia implozji podczas użytkowania eksykatorów próżniowych, wyparek, przeprowadzania
destylacji pod zmniejszonym ciśnieniem.
Przy oparzeniach istotne jest stwierdzenie, czy nie doszło do uszkodzenia dróg oddechowych, co może
prowadzić do niemożności oddychania. Należy wówczas podawać tlen. Przy oparzeniach I i II stopnia
zaczerwienioną skórę należy przemywać zimną wodą (nawet około 30 min.) lub solą fizjologiczną, pokryć
jałową gazą. Na miejsce oparzenia można nałożyć Pantenol w aerozolu. Nie wolno smarować tłustymi
maściami, oliwą czy spirytusem. Nie należy przekłuwać powstałych pęcherzy. Oparzenia III stopnia przykrywa
się jałowym opatrunkiem, konieczny jest kontakt z lekarzem.
2.2.2 Oparzenia chemiczne i zatrucia oraz sposoby udzielania pierwszej

pomocy
Należy pamiętać, że każda substancja jest potencjalną trucizną. Efekt toksyczny związany jest z dawką oraz
okresem styczności toksyny. Oprócz toksyczności danej substancji należy uwzględniać także wpływ na
organizm produktów jej rozpadu i przekształceń metabolicznych.
Najczęściej zatrucie w laboratorium dokonuje się poprzez układ oddechowy. Po przedostaniu się do płuc
trucizna rozchodzi się w krótkim okresie po całym ciele za pomocą układu krwionośnego. W przypadku
kontaktu z gazami, pyłami lub parami należy stosować maski z odpowiednimi pochłaniaczami, pracować tylko
pod sprawnym wyciągiem.
Wiele substancji szkodliwych i trujących łatwo wchłania się przez skórę. Należy również zwracać uwagę nawet
na najmniejsze skaleczenia, gdyż ułatwiają one przedostanie się trucizn do krwioobiegu. Zawsze powinno się
unikać bezpośredniego kontaktu z odczynnikami, gdyż nawet substancje nie reagujące z pozoru ze skórą przy
dłuższej ekspozycji powodują uczulenia, może nawet dojść do miejscowej nekrozy skóry. Ponadto w
laboratorium skóra jest narażona na różnorodne oparzenia substancjami żrącymi. Najbardziej podatne na
poparzenia są błony śluzowe i oczy. Dla tego nie dozwolone jest wciąganie cieczy do pipety ustami oraz badanie
na smak, tarcie oczu brudnymi rękami.
Stosunkowo rzadkim jest w laboratorium zatrucie poprzez układ pokarmowy. Spowodowane jest na przykład
przez wprowadzenie trucizny wraz z jedzeniem bez uprzedniego mycia rąk.
Postępowanie w wypadku zatrucia związane jest z rodzajem toksyny. Pierwszą czynnością powinno być
odcięcie chorego od źródła trucizny i zabezpieczenie jej przed innymi użytkownikami laboratorium. W wypadku
zatrucia gazami należy wyprowadzić poszkodowanego na świeże powietrze (w tym przypadku nie stosować
bezpośrednio sztucznego oddychania). Gdy trucizna nie jest znana stosuje się odtrutkę uniwersalną opartą na
węglu aktywnym, tlenku magnezu i kwasie taninowym. Przy zatruciach substancjami żrącymi podaje się białko,
mleko lub olej parafinowy. Środków wymiotnych nie stosuje się przy zatruciach kwasami lub zasadami.
11
Najczęściej zatrucia w laboratorium spowodowane są przez substancje wymienione w Tabeli 1
Tabela 1. Najczęściej spotykane w laboratorium substancje trujące

Przyczyna zatrucia Sposób udzielania pierwszej pomocy
ACETON – należy spowodować wymioty, podać odtrutkę

uniwersalną, nie pozwolić zasnąć;
ALDEHYDY – podawać białko, mleko, środki pobudzające;
ALKOHOL METYLOWY – stosować płukanie żołądka wodą, podawać alkohol

etylowy, wskazane wyprowadzenie chorego na
świeże powietrze, w razie potrzeby stosować
sztuczne oddychanie;
ARSZENIK I ZWIĄZKI ARSENU – spowodować wymioty;
BENZEN I JEGO HOMOLOGI – w razie kontaktu wynieść chorego na świeże

powietrze, podać środki pobudzające, witaminę C;
BROM – spowodować wymioty, podać roztwór skrobi,
mleko, środki pobudzające;
CHLOROFORM – w razie potrzeby stosować sztuczne oddychanie;
CYJANKI – spowodować wymioty, podać 10 ml 3% wody

utlenionej, tlen, zawiesinę Fe(OH)2, w razie
potrzeby zastosować sztuczne oddychanie;
FENOL – spowodować wymioty, podać natychmiast alkohol
etylowy, białko jajka, olej mineralny;
GAZY TRUJĄCE (CO2, CS2, H2S, acetylen, etylen, – chorego wynieść na świeże powietrze, w razie
potrzeby podać tlen;
tlenki azotu)
GAZY ŻRĄCE (NH3, Cl2, Br2, HCl, HF, SO2) – wynieść poszkodowanego na świeże powietrze,
przy zatruciu amoniakiem podawać do wdychania
kwas octowy, a roztwór rozcieńczonego amoniaku
przy zatruciach Cl2, Br2, HCl;
KWASY MINERALNE – podać natychmiast wodę wapienną luba tlenek
magnezowy, dużą ilość wody, nie powodować
wymiotów;
NADMANGANIANY – spowodować wymioty, podawać mleko, białko
jajka;
NITROBENZEN – podać 100 ml 3% kwasu octowego, dużo wody,

spowodować wymioty;
PIRYDYNA – spowodować wymioty;
RTĘĆ I JEJ ZWIĄZKI - podać 4g Na2S2O3 w 450 ml wody;
ZASADY - zastosować 5% roztwór kwasu octowego, sok z

cytryny, mleko.
Uwaga! Omówienie wszystkich substancji z którymi można spotkać się w laboratorium jest niemożliwe, należy
więc przed każdym doświadczeniem zapoznać się szczegółowo z właściwościami stosowanych odczynników.
2.2.3 Porażenie prądem elektrycznym

Podstawową sprawą przy ratowaniu porażonego jest odizolowanie go od źródła prądu. Oparzenia skóry
traktować jako termiczne. Gdy poszkodowany jest w szoku należy okryć poszkodowanego kocem, podawać
ciepłe płyny (zapobieganie utracie ciepła, ale bez aktywnego ogrzewania ciała), zapewnić spokój.
Przed użyciem urządzeń elektrycznych należy sprawdzić ich stan, stan izolacji przewodów elektrycznych,
kontaktów i gniazdek. Wszystkie aparaty elektryczne powinny być uziemione, nie wolno samemu dokonywać
ich napraw.
2.2.4 Skaleczenia
Przy zwykłych skaleczeniach ranę należy delikatnie oczyścić, zdezynfekować i założyć opatrunek. W
przypadkach, gdy uszkodzona została tętnica krwotok należy tamować opatrunkiem uciskowym zakładanym w
miejscu krwawienia. Pierwsza pomoc w skaleczeniach oczu polega na usunięciu szkła poprzez długotrwałe
12
przemywanie oczu wodą lub roztworem soli fizjologicznej (0.9% NaCl). Nie należy wyjmować odłamków
wbitych w tkankę. Nie wolno pocierać oka. Nałożyć na oko jałowy opatrunek i udać się do lekarza. Większość
skaleczeń w laboratorium spowodowanych jest przez sprzęt szklany. W związku z tym należy zawsze przed
pracą sprawdzić stan szlifów, występowanie rys, niejednorodności szkła. Czynności te należy przeprowadzać
szczególnie dokładnie przed pracą pod zmniejszonym lub zwiększonym ciśnieniem.
2.2.5 Krótkotrwała utrata przytomności

Może wystąpić po urazie głowy, często towarzyszy jej niepamięć wsteczna, dezorientacja. Przez okres około
doby chory powinien zostać pod opieką osoby trzeciej, a nawet lekarza, gdyż nie można wykluczyć powstania
krwiaka nadoponowego i innych poważnych następstw urazu.
2.2.6 Nagłe zatrzymanie czynności serca, krążenia i oddychania

W razie zaniku akcji serca należy przeprowadzić sztuczne oddychanie (około 10 razy na minutę poprzez
umiarkowanie głębokie wdechy) połączone z masażem serca (częstość około 60 razy na minutę), podawać
środki pobudzające, sprawdzić drożność dróg oddechowych przez odgięcie głowy do tył i uniesienie żuchwy,
usunięcie ewentualnych ciał obcych z jamy ustnej, ułożenie poszkodowanego w pozycji bezpiecznej. Ważne
jest, by przywrócić przepływ mózgowy przed upływem ok. 4 minut, by nie doszło do nieodwracalnego
uszkodzenia kory mózgowej.
2.2.7 Wyposażenie apteczki laboratoryjnej

Wyposażenie apteczki laboratoryjnej zależy od rodzaju prac wykonywanych w laboratorium i możliwości
wystąpienia związanych z nimi wypadków. Zapas leków należy przechowywać w osobnej, łatwo dostępnej
szafce i uzupełniać w miarę zużycia. Wszystkie leki powinny być zaopatrzone w czytelny opis i datę ważności.
Do podstawowego wyposażenia apteczki należą:
• środki opatrunkowe (bandaże, gaza jałowa, plastry: zwykły i z opatrunkiem, wata higroskopijna);
• środki dezynfekcyjne (alkohol etylowy, jodyna, woda utleniona);
• leki różne: aspiryna, kodeina, zasypka pabiamidowa; leki związane z ratownictwem w wypadkach
specyficznych; środki nasercowe: kofeina, kardiamid, krople walerianowe;
• środki stosowane przy zatruciach i oparzeniach: roztwory kwaśnego węglanu sodowego, węglanu
sodowego, amoniaku, kwasu borowego, kwasu cytrynowego, kwasu octowego, nadmanganianu potasu,
siarczanu miedziowego, siarczanu sodowego, siarczanu magnezowego, olej rycynowy, oliwa jadalna, woda
wapienna, skrobia, tlenek magnezu;
• sprzęt pomocniczy: nożyczki, pinceta, termometr.
2.3 Wyposażenie laboratorium chemicznego

2.3.1 Praca z odczynnikami chemicznymi
Praca w laboratorium chemicznym wymaga spokoju, skupienia i ciszy. Wszelkie czynności należy wykonywać
spokojnie i rozważnie, zwracać uwagę na jakość wykonywanej pracy, przestrzegać porządku i czystości. Przed
przystąpieniem do wykonywanego ćwiczenia sprawdzić, czy wszystko jest przygotowane do odpowiedniego
wykonania zadania (odczynniki, sprzęt itd.).
Odczynniki chemiczne znajdują się w opakowaniach szklanych bądź plastikowych. Nigdy nie należy
przechowywać w laboratorium opakowań nieopisanych jak również używać do przechowywania odczynników
pojemników przeznaczonych do przechowywania żywności (butelek, słoików) gdyż może to prowadzić do
pomyłki a w efekcie, do wypadku. Wszystkie opakowania zawierające chemikalia powinny być szczelnie
zamknięte (za wyjątkiem odczynników które, przechowywane, wytwarzają gazowe produkty rozpadu, mogące
przyczynić się do rozsadzenia naczynia). Należy pamiętać, by pobierać je i odmierzać (odważać) za pomocą
odpowiednich przyrządów miarowych (cylindry miarowe, pipety, łyżki, szpatułki, naczyńka wagowe itp.) oraz w
sprzyjających ku temu warunkach (w przypadku substancji łatwopalnych, stężonych roztworów kwasów, zasad
itp. pod wyciągiem) zachowując należne zasady bezpieczeństwa. Należy pamiętać, że większość odczynników
chemicznych jest szkodliwa dla zdrowia człowieka, dlatego też wszelkie czynności z nimi związane należy
wykonywać w taki sposób, aby do minimum zmniejszyć możliwość przenikania ich do organizmu poprzez
skórę, usta, drogi oddechowe, czy przewód pokarmowy (fartuch, rękawice i okulary ochronne). Po pobraniu
określonej ilości, pojemnik w którym się znajduje odczynnik należy zamknąć i odstawić na właściwe miejsce
13
oraz zostawić czystość w miejscu jego poboru. Przed przystąpieniem do pobierania, przelewania, rozpuszczania
itd. łatwopalnych cieczy należy pogasić wszystkie znajdujące się w pobliżu płomienie palników.
2.3.2. Oznaczenia na odczynnikach

Na opisach odczynników znajdują się zawsze symbole oznaczające rodzaj i stopień niebezpieczeństwa
2.3.2.1 Piktogramy
Tabela 2. Piktogramy
E – wybuchowe
C – silnie żrące
O – utleniacz; substancja samozapalna lub mogąca wywołać pożar
F – łatwopalne
F+ - bardzo łatwopalne
T – toksyczne
T+ - bardzo toksyczne
X – szkodliwe
Xi - drażniące
2.3.2.2 Symbole literowe R (risks) i S (safety)

R (risks):
R1 – możliwość wybuchu gdy suchy;
R2 – ryzyko eksplozji na skutek wstrząsu, uderzenia, zetknięcia z ogniem;
R3 – wysokie ryzyko eksplozji na skutek wstrząsu, uderzenia, zetknięcia z ogniem;
R4 – tworzy wybuchowe związki metaliczne;
R5 – podgrzewanie może wywołać wybuch;
R6 – wybuchowe zarówno z dostępem jak i bez dostępu powietrza;
R7 – stanowi zagrożenie pożarowe;
R8 – może wywołać płomień przy kontakcie z materiałami palnymi;
R9 – wybuchowe w połączeniu z materiałami palnymi;
R10 – łatwopalny;
R11 – bardzo łatwopalny;
R12 – wyjątkowo łatwopalny;
R13 – szczególnie łatwopalny skroplony gaz;
R14 – gwałtownie reaguje z wodą;
R15 – w kontakcie z wodą wydziela łatwopalne gazy;
R16 – wybuchowy w połączeniu z utleniaczami;
R17 – samozapalny na powietrzu;
R18 – tworzy wybuchową mieszaninę z powietrzem;
R19 – może tworzyć wybuchowe nadtlenki;
R20 – niebezpieczny przy wdychaniu;
R21 – niebezpieczny przy kontakcie ze skórą;
R22 – niebezpieczny po połknięciu;
R23 – trujący przy wdychaniu;
R24 – trujący w kontakcie ze skórą;
R25 – trujący przy połknięciu;
R26 – szczególnie trujący przy wdychaniu;
R27 – szczególnie trujący w kontakcie ze skórą;
R28 – szczególnie trujący przy połykaniu;
R29 – kontakt z wodą uwalnia trujący gaz;
14
R30 – może stać się łatwopalny w czasie użycia;
R31 – kontakt z kwasami uwalnia toksyczny gaz;
R32 – kontakt z kwasami uwalnia bardzo toksyczny gaz;
R33 – niebezpieczny z powodu kumulowania się efektów toksycznych;
R34 – powoduje oparzenia ;
R35 – powoduje ciężkie oparzenia;
R36 – drażniący oczy;
R37 – drażni układ oddechowy;
R38 – drażniący dla skóry;
R39 – niebezpieczeństwo wystąpienia nieodwracalnych efektów;
R40 – możliwe wystąpienie nieodwracalnych efektów;
R41 – ryzyko ciężkiego uszkodzenia oczu;
R42 – może powodować uczulenie przy wdychaniu;
R43 – może powodować uczulenie przy kontakcie ze skórą;
R44 – niebezpieczeństwo wybuchu podczas ogrzewania w zamkniętym naczyniu;
R45 – rakotwórczy;
R46 – może powodować wady genetyczne;
R48 – przy dłuższym kontakcie powoduje ciężkie uszkodzenia;
R49 – rakotwórczy przy inhalacji;
R50 – bardzo toksyczny dla organizmów żyjących w wodzie;
R51 – toksyczny dla organizmów żyjących w wodzie;
R52 – szkodliwy dla organizmów żyjących w wodzie;
R53 – może powodować długotrwałe niekorzystne skutki dla środowiska wodnego;
R54 – toksyczny dla roślin;
R55 – toksyczny dla zwierząt;
R56 – toksyczny dla organizmów żyjących w glebie;
R57 – toksyczny dla pszczół;
R58 – niebezpieczny dla środowiska;
R59 – niebezpieczny dla warstwy ozonowej;
R60 – może zaburzać proces zapłodnienia;
R61 – powoduje uszkodzenia płodu;
R62 – możliwe zagrożenia procesu zapłodnienia;
R63 – może powodować uszkodzenia płodu;
R64 – może powodować uszkodzenia u dzieci karmionych piersią;
R65 – uszkadza płuca przy spożyciu;
R66 – wielokrotny kontakt może powodować wysuszenie i pękanie skóry
R67 – opary mogą wywoływać senność i zawroty głowy
S (safety):
S1 – przechowywać w zamknięciu;
zastosowanie: substancje toksyczne;.
zakres stosowalności: dla substancji toksycznych używanych przez ogół społeczeństwa.
S2 – przechowywać poza zasięgiem dzieci;
zastosowanie: wszystkie substancje niebezpieczne;
zakres stosowalności: dla wszystkich niebezpiecznych substancji do których dostęp może mieć ogół
społeczeństwa.
S3 – przechowywać w chłodnym miejscu;
zastosowanie: nadtlenki organiczne, substancje o temperaturze wrzenia poniżej 40oC;
zakres stosowalności: dla nadtlenków organicznych, jeżeli nie obowiązuje zwrot S47, dla innych
niebezpiecznych substancji o temperaturze wrzenia poniżej 40oC.
S4 – przechowywać z dala od pomieszczeń mieszkalnych;
zastosowanie: substancje toksyczne;
zakres stosowalności: substancje toksyczne, gdy istnieje ryzyko np. inhalacji.
S5 – przechowywać zawartość w...;
zastosowanie: substancje samorzutnie zapalne w stanie stałym na skutek kontaktu z powietrzem;
zakres stosowalności: np. sód, potas, biały fosfor.
S6 – przechowywać pod gazem obojętnym;
zastosowanie: substancje, które muszą być przechowywane w atmosferze gazu obojętnego;
zakres stosowalności: związki metaloorganiczne, rozkładające się w obecności powietrza.
15
S7 – przechowywać opakowanie szczelnie zamknięte;
zastosowanie: nadtlenki organiczne, substancje wydzielające toksyczne lub łatwopalne pary (np. w kontakcie z
wilgocią), wysoce łatwopalne substancje stałe;
zakres stosowalności: organiczne nadtlenki, substancje rozkładające się pod wpływem wilgoci.
S8 – przechowywać opakowanie w suchym miejscu;
zastosowanie: substancje gwałtownie reagujące z wodą, wydzielające toksyczne lub łatwopalne gazy;
zakres stosowalności: zwykle ograniczone dla rodzajów zastosowań wymienionych powyżej.
S9 – przechowywać opakowanie w dobrze przewietrzanym miejscu;
zastosowanie: nadtlenki organiczne, substancje lotne, uwalniające toksyczne opary, łatwopalne ciecze i gazy;
zakres stosowalności: dla substancji wymienionych powyżej.
S12 – nie przechowywać pojemnika zaplombowanego;
zastosowanie: substancje mogące uwalniać gazy, rozerwać pojemnik;
zakres stosowalności: tylko w szczególnych przypadkach.
S13 – przechowywać z dala od produktów spożywczych;
zastosowanie: substancje toksyczne i szkodliwe;
zakres stosowalności: dla substancji powszechnego użytku.
S14 – przechowywać z dala od substancji łatwopalnych;
zastosowanie: nadtlenki organiczne; utleniacze
zakres stosowalności: używane w szczególnych przypadkach dla substancji wyżej wymienionych.
S15 – przechowywać z dala od źródeł ciepła;
zastosowanie: substancje lotne, rozkładające się lub reagujące pod wpływem ciepła;
zakres stosowalności: monomery, substancje lotne, samozapalne.
S16 – przechowywać z dala od ognia;
zastosowanie: łatwopalne ciecze i gazy;
zakres stosowalności: dla substancji wymienionych wyżej.
S17 – przechowywać z dala od substancji palnych;
zastosowanie: substancje mogące tworzyć wybuchowe lub samozapalające się mieszaniny z substancjami
palnymi;
zakres stosowalności: szczególne przypadki.
S18 – trzymać i otwierać ostrożnie pojemnik;
zastosowanie: substancje zdolne wytworzyć nadciśnienie w pojemniku i tworzące wybuchowe nadtlenki;
zakres stosowalności: wypadki szczególne, gdy występuje zagrożenie dla oczu.
S20 – podczas używania nie jeść i nie pić;
zastosowanie: substancje toksyczne i żrące;
S21 – podczas używania nie palić;
zastosowanie: substancje lotne, palne oraz tworzące toksyczne produkty podczas spalania lub pirolizy;
zakres stosowalności: np. chlorowcopochodne.
S22 – nie wdychać pyłu;
zastosowanie: niebezpieczne substancje w stanie stałym;
zakres stosowalności: dla substancji stałych mogących zostać wchłoniętych przez inhalację.
S23 – nie wdychać oparów;
zastosowanie: wszystkie niebezpieczne substancje ciekłe lub gazowe;
zakres stosowalności: gdy istnieje niebezpieczeństwo związane z wdychaniem substancji, zalecane dla substancji
w formie aerozoli.
S24 – unikać kontaktu ze skórą;
zastosowanie: wszystkie substancje niebezpieczne (trujące, drażniące);
zakres stosowalności: zagrożenie związane z kontaktem ze skórą, substancje mogące wywołać uczulenia.
S25 – unikać kontaktu z oczami;
zastosowanie: substancje drażniące lub żrące;
zakres stosowalności: substancje wywołujące oparzenia, działające drażniąco na oczy i błony śluzowe.
S26 – w przypadku kontaktu z oczami przemyć wodą i skonsultować się z lekarzem;
zastosowanie: substancje drażniące lub żrące;
zakres stosowalności: gdy istnieje ryzyko poważnego oczu.
S27 – natychmiast zdjąć zabrudzoną odzież;
zastosowanie: substancje toksyczne, żrące, nadtlenki;
zakres stosowalności: zalecane dla substancji toksycznych łatwo absorbowanych przez skórę, dla substancji
żrących.
16
S28 – przemyć dużą ilością... po kontakcie ze skórą;
zastosowanie: substancje toksyczne, żrące, wchłaniające się przez skórę;
zakres stosowalności: szczególnie gdy woda nie jest najbardziej właściwym płynem przemywającym.
S29 – nie wylewać do zlewu;
zastosowanie: ciecze wysoce łatwopalne;
zakres stosowalności: ciecze łatwopalne nie mieszające się z wodą.
S30 – nie dodawać wody;
zastosowanie: substancje gwałtownie reagujące z wodą;
zakres stosowalności: metale alkaliczne, substancje typu H2SO4.
S33 – przeciwdziałać wyładowaniom elektrostatycznym;
zastosowanie: substancje wysoce łatwopalne;
S34 – uderzać wstrząsów i uderzeń;
zastosowanie: substancje wybuchowe;
zakres stosowalności: substancje mogące gwałtownie reagować na skutek uderzenia.
S35 – dzielić ostrożnie;
zastosowanie: substancje wybuchowe, toksyczne;
zakres stosowalności: zalecane dla substancji wybuchowych.
S36 – nosić odpowiednią odzież ochronną;
zastosowanie: substancje żrące, toksyczne;
zakres stosowalności: substancje toksyczne łatwo wchłaniane przez skórę, mogące wywołać zagrożenie dla
zdrowia przy przewlekłym kontakcie.
S37 – nosić rękawice ochronne;
zastosowanie: substancje żrące, toksyczne, organiczne nadtlenki;
zakres stosowalności: dla substancji drażniących, łatwo wchłanianych przez skórę, nadtlenków organicznych.
S38 – w przypadku niewystarczającej wentylacji nosić maskę przeciwgazową;
zakres stosowalności: zwykle ograniczone do specjalnych przypadków.
S39 – zabezpieczyć oczy / twarz;
zastosowanie: substancje toksyczne, żrące, drażniące;
zakres stosowalności: zwykle ograniczone do przypadków substancji toksycznych, gdy istnieje ryzyko
popryskania.
S40 – umyć podłogę i wszystkie przedmioty przy użyciu..., które miały kontakt z tą substancją;
zastosowanie: substancje niebezpieczne;
zakres stosowalności: zwykle z wyszczególnieniem środka czyszczącego w przypadku, gdy woda nie jest
wskazana.
S41 – w przypadku pożaru nie wdychać dymów;
zastosowanie: substancje uwalniające toksyczne gazy podczas spalania;
zakres stosowalności: zwykle ograniczone do specjalnych przypadków.
S42 – przy rozpylaniu nosić maskę gazową;
zastosowanie: substancje przeznaczone do rozpylania, jednak niebezpieczne przy wdychaniu;
zakres stosowalności: zwykle ograniczone do specjalnych przypadków (przemysł, rolnictwo).
S43 –w przypadku zapalenia nie używać wody;
zastosowanie: substancje palne;
zakres stosowalności: dla substancji nie mieszających się z wodą lub z nią reagujących.
S44 – skontaktować się z lekarzem w przypadku złego samopoczucia;
zakres stosowalności: zwykle ograniczone do specjalnych przypadków (gdy istnieje ryzyko trwałej utraty
zdrowia).
S45 – w razie wypadku skontaktować się natychmiast z lekarzem;
zakres stosowalności: dla substancji bardzo toksycznych.
S46 – po połknięciu natychmiast kontaktować się z lekarzem i pokazać etykietę i opakowanie;
zastosowanie: wszystkie substancje niebezpieczne;
zakres stosowalności: dla wszystkich substancji niebezpiecznych, szczególnie, gdy istnieje ryzyko połknięcia
przez dzieci.
S47 – przechowywać w temperaturze nie przekraczającej ..... stopni Celsjusza;
zastosowanie: substancje nietrwałe termicznie;
zakres stosowalności: zwykle ograniczony, np. nadtlenki organiczne, substancje niskowrzące;
17
S48 – trzymać wilgotne;
zastosowanie: substancje, które po wyschnięciu stają się wybuchowe, wrażliwe na iskrzenie;
zakres stosowalności: zwykle ograniczony (zastosowania przemysłowe).
S49 – przechowywać tylko w oryginalnym pojemniku;
zastosowanie: substancje wrażliwe na rozkład katalityczny;
zakres stosowalności: substancje wyżej wymienione.
S50 – nie mieszać z ........;
zastosowanie: substancje mogące gwałtownie reagować z ...... , uwalniać toksyczne gazy;
zakres stosowalności: dla nadtlenków, dla substancji wyżej wymienionych.
S51 – używać tylko w dobrze wentylowanych miejscach;
zastosowanie: substancje mogące stanowić zagrożenie przy wdychaniu, wydzielające łatwopalne pary;
zakres stosowalności: zalecane gdy niewłaściwe użycie jest zwrotu S38, gdy substancje są ogólnodostępne.
S52 – nie od użytku wewnętrznego lub na dużych powierzchniach;
zastosowanie: lotne substancje szkodliwe i toksyczne;
zakres stosowalności: gdy możliwe jest działanie toksyczne przy dłuższym wchłanianiu.
S53 –unikać kontaktu z substancją, zapoznać się ze specjalistyczną instrukcją w tym zakresie;
zastosowanie: kancerogeny, mutageny, substancje teratogenne;
zakres stosowalności: gdy kontakt może być przyczyną uszkodzeń genetycznych, może być przyczyną raka.
S56 – odpady i pojemnik muszą być oddane do odpowiedniego punktu utylizacji;
zastosowanie: zalecane dla substancji toksycznych, mogących spowodować długotrwałe zmiany w środowisku;
zakres stosowalności: dla wyżej wymienionych.
S57 – wykorzystać właściwy pojemnik, by uniknąć skażenia środowiska;
zastosowanie: zalecane dla substancji toksycznych dla organizmów wodnych;
zakres stosowalności: substancje szkodliwe dla fauny, flory, mikroorganizmów.
S58 – odpady traktować jako ryzykowne;
zastosowanie: odpady ryzykowne, postępować według instrukcji;
zakres stosowalności: odpady które nie powinny być utylizowane w klasyczny sposób.
S59 – zastosować się do wskazówek producenta odnośnie wtórnego wykorzystania;
zastosowanie: substancje niebezpieczne dla środowiska;
zakres stosowalności: dla odpadów szkodliwych dla warstwy ozonowej, fauny, flory, mikroorganizmów,
pszczół, mogących powodować zmiany w środowisku.
S60 – odpady substancji i pojemnik muszą być składowane jako substancje niebezpieczne;
zastosowanie: gdy możliwe jest wywołanie długotrwałych szkodliwych zmian w środowisku;
zakres stosowalności: dla substancji toksycznych, niebezpiecznych dla środowiska.
S61 – unikać wydzielania do środowiska, postępować zgodnie z właściwą instrukcją;
zastosowanie: substancje niebezpieczne dla środowiska;
zakres stosowalności: dla wszystkich substancji stanowiących zagrożenie dla środowiska, którym nie przypisano
zwrotów S56 – S60.
S62 – jeśli substancja została spożyta nie powodować wymiotów, natychmiast skontaktować się z lekarzem;
zastosowanie: substancje i mieszaniny w stanie płynnym, zawierające węglowodory alifatyczne i alkicykliczne
lub aromatyczne w ilości powyżej 10%;
zakres stosowalności: dla wyżej wymienionych, zwłaszcza w przemyśle.
18
2.3.3 Oznaczenia instalacji
W celu łatwiejszej identyfikacji przewody instalacji rurowych pomalowane są na określony kolor. Wg polskiej
normy PN/M-01085 używanymi kolorami są:
• dla wody - zielony;
• dla gazu - żółty;
• dla próżni - szary;
• dla powietrza - błękitny;
• dla pary - czerwony.
2.3.4 Oznaczenia na gaśnicach

Na gaśnicach znajdują się zawsze: atest, data ważności oraz symbole literowe oznaczające zakres ich
stosowania:
• A –do gaszenia pożarów ciał stałych pochodzenia organicznego;
• B – do gaszenia cieczy palnych i substancji topiących się pod wpływem ciepła;
• C – do gaszenia gazów;
• D – do gaszenia metali;
• E – do gaszenia materiałów należących do grup A-D znajdujących się pod napięciem.
Gaszenie urządzeń pod napięciem powinno odbywać się z odległości przynajmniej jednego metra.
2.4 Sprzęt laboratoryjny

2.4.1 Waga laboratoryjna
Ważenie - określanie masy próbki, jest jedną z najważniejszych czynności w każdym oznaczaniu.
Rozdzielczość – ilość wszystkich możliwych wskazań wagi w zakresie (0 – Max) – waga może być opisana jako
1 kg (Max) x 0,1 g (działka elementarna). Rozdzielczość takiej wagi wynosi 10 000.
Powtarzalność – ta sama masa położona wielokrotnie na szalce powinna dać ten sam (lub prawie ten sam)
odczyt za każdym razem, w warunkach stałych.
Liniowość – zdolność wagi do zachowania określonych tolerancji nie tylko w punktach kalibracji, ale w całym
przedziale ważenia.
Działka elementarna [d] – wartość różnicy między kolejnymi wskazaniami wyrażona w jednostkach masy.
Działka legalizacyjna [e] – wyrażona w jednostkach masy, umowna wartość, która jest podstawą do
klasyfikacji wag i określania błędów granicznych dopuszczalnych wagi.
Obciążenie minimalne [Min] – wartość obciążenia, poniżej której wynik ważenia może być obarczony dużym
błędem względnym.
Kalibracja wagi – zbiór operacji ustalających relacje między wartością wskazaną przez wagę a masą wzorca
(odważnika kalibracyjnego), stanowiącego obciążenie wagi oraz dokonujących korekcji wskazania, jeżeli
zachodzi taka potrzeba. Kalibracja wagi może być wewnętrzna (z odważnikiem kalibracyjnym wbudowanym w
wagę) oraz zewnętrzna (z odważnikiem kalibracyjnym stanowiącym wyposażenie wagi).
19
Tabela 3. Klasyfikacja wag laboratoryjnych
Klasyfikacja wag
Klasa Wartość Liczba działek legalizacyjnych Obciążenie

dokładności, działki n = Max / e minimalne
oznaczenie legalizacyjnej Min.
(e) Minimalna maksymalna
Klasa 1 e < 1 mg N < 50 000 - 100 d

Specjalna e ≥ 1 mg N ≥ 50 000
I
Klasa 2 0,001g ≤ e ≤ 100 100 000 20 d
Wysoka 0,05g 5 000 100 000 50 d
II 0,1g ≤ e
Klasa 3 e < 1 mg 100 10 000 20 d
Średnia e ≥ 1 mg 500 10 000 20 d
III
Klasa 4 e < 1 mg 100 1 000 10 d
Zwykła e ≥ 1 mg
III
OZNACZENIA: d – działka elementarna

e – działka legalizacyjna
n – liczba działek legalizacyjnych
Min – obciążenie minimalne
Max – obciążenie maksymalne
WYMAGANIA DODATKOWE: 1d ≤e ≤ 10d (nie dotyczy wag klasy I)

d = e (dla wag klasy III do rozliczeń handlowych)
Podstawowe zasady ważenia:

- należy dostosować rodzaj używanej wagi do wymaganej w ćwiczeniu dokładności i wielkości naważki;
- nie wolno przeciążać wagi;
- przy pracy wymagającej dużej dokładności wszystkie ważenia należy wykonywać na tej samej wadze;
- w przypadku korzystania z wag elektronicznych nie należy wyłączać ich po ważeniu (wynika to z faktu iż
wiele ich typów wymaga po włączeniu długiego czasu stabilizacji i każdorazowej kalibracji);
- ważąc na wagach szalkowych (technicznych i analitycznych) należy zwrócić uwagę aby wszelkie zmiany
obciążenia belki wagi (zmianę masy odważników, dosypywanie substancji, zdejmowanie naważki z szalki)
wykonywać przy zablokowanej wadze;
20
2.4.2 Sprzęt szklany
2.4.2.1 Ogólne uwagi o pracy ze sprzętem szklanym
Ze względu na dużą różnorodność używanego na pracowniach sprzętu laboratoryjnego należy zawsze pamiętać
o kilku zasadach, które są wspólne dla wszystkich szklanych elementów z którymi stykamy się na pracowni
chemicznej:
- szkła nie należy suszyć w piecu do prażenia;
- nie należy ogrzewać naczyń szklanych mokrych lub zawilgoconych po zewnętrznej stronie którą
ogrzewamy (odparowująca ciecz schładza punktowo szkło, a to z kolej ze względu na małą rozszerzalność
cieplną może pęknąć);
- nie ogrzewać oraz nie suszyć w suszarkach szkła miarowego;
- elementów wykonanych z tworzywa sztucznego towarzyszących kolbom miarowym i innej aparaturze nie
należy suszyć w suszarkach razem ze szkłem (ulegają z reguły stopieniu, a w najlepszym przypadku
odkształceniom);
- z racji faktu że szkło to materiał niezmiernie kruchy należy unikać uderzania nim o metalowe wyposażenie
pracowni, lub obijania i zderzania się szkła w szafkach;
- należy unikać pracy ze sprzętem wyszczerbionym, pękniętym lub posiadającym wyraźne zarysowania, w
szczególności kiedy pracujemy w warunkach podwyższonej temperatury (ogrzewanie) lub obniżonego
ciśnienia („próżnia”).
2.4.2.2 Ważniejszy sprzęt szklany stosowany w laboratorium

Probówka
A B
Probówka (A) to szklane naczynie, w którym przeprowadzamy reakcje, ogrzewamy niewielkie ilości cieczy lub
ciał stałych. W pracy z nią musimy uważać, aby jej ujścia nie kierować w kierunku własnej twarzy oraz osób
nam towarzyszących na pracowni, gdyż zdarza się że ogrzewana w probówce ciecz wypryskuje z naczynia lub
też że zaczyna zachodzić w niej niespodziewana reakcja. Podczas pracy należy zwrócić uwagę, czy probówki
przez nas używane nie mają otworów w dnie. Probówki nie należy także przegrzewać w płomieniu palnika gdyż
może pęknąć. Aby temu zapobiec ogrzewając probówką należy nią delikatnie kołysać w płomieniu, co
zapobiega przegrzewaniu się cieczy oraz szkła. Probówek wirówkowych (z dnem stożkowym) nie należy w
ogóle ogrzewać w płomieniu palnika.
Stojak (B) służy do przechowywania probówek, może być drewniany, bądź plastikowy.
Butelki
A B C
Butelki (A, B, C) służą głównie do przechowywania cieczy. Podczas pracy laboratoryjnej należy unikać
korzystania z butelek przeznaczonych do przechowywania napojów. Korzystając z butelek należy pamiętać że
nie należy ich nigdy ogrzewać.
- butelki z kołpakiem – wykorzystywane do przechowywania łatwo lotnych cieczy (np.: brom);
21
- butelki z tubusem (B) – służą do przechowywania wody destylowanej (coraz częściej wypierane są
przez pojemniki wykonane z tworzyw sztucznych);
- butelki z pipetą (C) – bardzo wygodne pojemniki posiadające zamiast korka mniej lub bardziej
dopasowaną wkładkę składającą się z pipety i korka szklanego, gumowego lub wykonanego z tworzywa
sztucznego z wywierconym otworkiem na pipetę.
Kolba okrągłodenna
– naczynie to przeznaczone jest do ogrzewania cieczy lub mieszaniny reakcyjnej; współczesne kolby
okrągłodenne posiadają wyjście doszlifowane, służące szczelnemu łączeniu ich z innymi elementami aparatury
szklanej (chłodnice, nasadki destylacyjne, reduktory); w pracy z kolbą okrągodenną należy unikać
wyszczerbionych szlifów oraz zarysowań szkła, gdyż powoduje to naprężenia podczas ogrzewania mogące
spowodować jego pękniecie.
Kolba Erlenmeyera - stożkowa
– służy do ogrzewania cieczy, miareczkowania, suszenia roztworów niewodnych
Zlewka
– naczynie to służy do ogrzewania, odparowywania cieczy, prowadzenia reakcji, wykorzystywane są także jako
łaźnie grzewcze dla mediów o różnych temperaturach wrzenia (łaźnia wodna, olejowa). Doprowadzając ciecz w
zlewce do wrzenia musimy mieć na uwadze aby nie wypryskiwała z niej, gdyż zalanie zlewki po zewnętrznej –
ogrzewanej stronie spowoduje jej pęknięcie i wydostanie się zawartości na urządzenie grzewcze. Kładąc zlewkę
na ciepłą kuchenkę lub płytkę do ogrzewania należy osuszyć szmatką lub bibułą jej zewnętrzną część
(odparowująca szybko ciecz schładza ścianki naczyń szklanych powodując pęknięcie naczynia)
Krystalizator
– można porównać go do spłaszczonej szerokiej zlewki, ale jak sama nazwa wskazuje, naczynie to służy do
prowadzenia procesów krystalizacji (dlatego jest szersze od zlewki). Krystalizator służy także do
odparowywania rozpuszczalnika z krystalizującej mieszaniny.
22
Szkiełko zegarkowe
– służy do prowadzenia reakcji kroplowych na tle dowolnej barwy oraz do przykrywania naczyń (zlewek,
krystalizatorów – pod warunkiem, że jest odpowiednio dopasowane). Można dokonywać odważania ciał stałych
na szkiełku zegarkowym.
Kolba próżniowa (ssawkowa)
– w naczyniu tym utrzymujemy warunki mocno obniżonego ciśnienia, celem sączenia osadów i
wykrystalizowanej substancji. Używamy również kolby ssawkowej jako bufora pośredniczącego w obniżeniu
ciśnienia w innej aparaturze (wyparka, pistolet do suszenia); w pracy z kolbą ssawkową należy zwrócić uwagę
na wszelkie zarysowania jej powierzchni, gdyż mogą spowodować implozje kolby. Kolb ssawkowych nie należy
ogrzewać.
Lejki
A B C
– służą do sączenie i wlewania cieczy do naczyń o wąskich szyjkach (kolby miarowe, butelki, biurety); stosuje
się lejki analityczne (A), lejki zwykłe (B), lejki z dnem porowatym, które stanowi porowata spieczona masa
szklana o dokładnie dobranej wielkości porów (C);
Lejki analityczne posiadają wąski długi wylot, który służy zassaniu cieczy sączonej i przyspieszeniu sączenia;
lejki zwykłe charakteryzują się szerszym wylotem i służą podręcznym pracom laboratoryjnym – sączeniu i
przelewaniu. Lejkom tego typu towarzyszą sączki (rysunek poniżej A i B);
Lejki z dnem porowatym (nucze) nie wymagają w swojej obsłudze sączków, a ich zadanie spełnia szklana
porowata masa wtopiona w światło przewodu sączenia
A B
Szalka Petry’ego – docelowo jest to szkło dla zastosowań hodowlanych wykorzystywane przez biologów,
biochemików i biotechnologów dla rozmnażania kultur bakteryjnych; chemicy zrobili jednak z tego szkła
pożytek i znalazło ono zastosowanie jako podstawka do odważania substancji, krystalizacji z niewielkich ilości
roztworów oraz przykrycie dla zlewek.
23
Eksykatory (A, B)
A B
- służą do zapewnienia bezwodnych warunków substancjom, które przechowujemy, studzimy lub osuszamy.
Wypełnienie eksykatora powinno zapewniać możliwie najmniejsze ciśnienie cząstkowe pary wodnej wewnątrz.
Istnieją także eksykatory próżniowe (B), które mają dodatkowo tubus wtopiony z boku lub w pokrywę.
Zapewniają one wtedy obniżenie ciśnienia wewnątrz, a co za tym idzie zwiększają intensywność odparowania
wody, która z kolej zostaje pochłonięta przez środek suszący. Eksykatorów, jako naczyń grubościennych, nie
wolno ogrzewać.
Płuczka
– służy do przemywania gazów z wytwornicy gazu cieczą, która pochłania niepożądane składniki uboczne lub
osusza gaz; w płuczce absorbuje się także gazy dla potrzeb reakcyjnych.
Pompka wodna – zasada działania została opisana pod tym samym hasłem w rozdziale o sprzęcie metalowym.
Szklany odpowiednik pompki wodnej jest stabilniejszy w działaniu i nie ulega odkształceniom pod wpływem
ciśnienia wody. Ze względu na tworzywo z jakiego została wykonana jest jednak o wiele bardziej delikatna niż
jej metalowy odpowiednik.
Rozdzielacz
– służą do rozdzielania dwóch nie mieszających się cieczy np.: przy prowadzeniu ekstrakcji w układzie ciecz –
ciecz; przy korzystaniu z rozdzielaczy należy pamiętać, że dolną ciecz spuszczamy przez dolny spust odkręcając
kran, a górną frakcję odlewamy przez górny wylot korka. Należy także uważać, by podczas wytrząsania cieczy
odpowietrzać układ od czasu do czasu, otwierając kran, po uprzednim obróceniu rozdzielacza nóżką do góry, lub
przekręcając korek w położenie pokrycia się otworu wykonanego w korku i otworu lub szczeliny wykonanej w
otworze wylotowym – górnym rozdzielacza (w szczególności należy zwrócić uwagę na regularne
odpowietrzanie kiedy pracujemy z łatwo lotnymi rozpuszczalnikami takimi jak eter dietylowy, chlorek
metylenu).
24
Wkraplacz
– w odróżnieniu od rozdzielacza, przystosowany jest do połączenia z kolbą dwu- lub trójszyjną albo naczyniem
reakcyjnym za pomocą połączenia doszlifowanego oraz posiada czasem rurkę boczną do wyrównywania
ciśnienia, jeżeli zachodzi konieczność prowadzenia reakcji odizolowanej od zewnętrznej atmosfery.
Kolby miarowe
- służą do odmierzania ściśle określonych ilości cieczy. Możemy wyróżnić kolby miarowe na 1, 2, 5, 10, 25, 50,
100, 250, 500, 1000 ml. Skalę kolby miarowej określa trwałe zarysowanie kalibracyjne kolby umiejscowione na
jej długiej szyjce; w pracy z kolbą miarową należy pamiętać, że nie można suszyć kolb miarowych w
suszarkach, gdyż równoznaczne byłoby to z ich rozkalibrowaniem. Kolby te należy po umyciu pozostawić do
samodzielnego wyschnięcia. Trzeba także zaznaczyć, że kolby miarowe są bardziej narażone na zniszczenie z
powodu zarysowania kalibracyjnego, wzdłuż którego, uderzone, najczęściej pękają.
Cylindry miarowe
– wykorzystywane są do odmierzania określonych ilości cieczy w szerokim zakresie objętości określonym skalą
wyznaczoną na zewnętrznej ściance cylindra. Objętość ta jest jednak odmierzana z mniejszą dokładnością niż w
kolbach miarowych. Przy korzystaniu z cylindrów miarowych obowiązują takie same zasady, jak przy
posługiwaniu się kolbami miarowymi.
Pipety
– posługujemy się nimi przy szybkim odmierzaniu niewielkich ilości cieczy. Wyróżniamy przy tym pipety
wielomiarowe (z podziałka na ściance) oraz jednomiarowe (z zarysowaniem kalibracyjnym wyznaczającym
przypisaną pipecie objętość). Pipety wielomiarowe posiadają skalę zaczynającą się u wylotu pipety a kończącą
się (posiadającą maksymalną wartość) na górnej jej części – w odróżnieniu od biurety.
25
Biurety
– służą do miareczkowania określonymi objętościami cieczy. Ich skala zaczyna się u góry biurety, a kończy u
wylotu. Biuretę umieszcza się na statywie i nalewa ciecz, po czym spuszcza aż do kreski, od której chcemy
zacząć miareczkowanie. Trzeba pamiętać przy posługiwaniu się biuretą, że w wylocie cieczy nie powinny
pozostawać bąbelki powietrza, gdyż wprowadza to błąd miareczkowania. Podobnie należy zadbać o szczelność
przylegania i prawidłowe funkcjonowanie kurka regulującego wypływ cieczy gdyż ma on tendencje do
przeciekania. Istnieją jeszcze biurety automatyczne zintegrowane z naczyniem – zasobnikiem cieczy, którą
miareczkujemy. Obsługa takich biuret jest o tyle prostsza, że napełnienie i miareczkowanie odbywa się w
jednym cyklu i nie wymaga dodatkowych lejków i naczyń do jej uzupełniania.
Kolumny chromatograficzne
– kiedy zachodzi potrzeba rozdzielenia mieszaniny substancji zawartej w fazie ciekłej wykorzystujemy kolumny
chromatograficzne, zbudowane z rury szklanej o różnej długości ograniczonej, u dołu, spiekiem ze szkła,
zakończonej kurkiem służącym do spuszczania cieczy. Niekiedy stosuje się odprowadzenie boczne, także
zakończone kurkiem, służące do podłączenia próżni. Wypełnienie kolumny stanowią ośrodki adsorpcyjne
(Al2O3, SiO2, celuloza), dobierane tak, aby zachodził najwydajniejszy rozdział – podobnież należy dobierać
eluent którym wymywamy substancję.
Tryskawka szklana – jest wychodzącym z mody i zastępowanym przez analogi wykonane z tworzywa
sztucznego podręcznym zasobnikiem wody destylowanej.
U-rurka
- wykorzystywana do wybiórczej adsorpcji gazów przy przepływowej ich analizie a także jako naczynie do
umieszczania środka suszącego.
26
Naczynie wagowe i pipeta wagowa
A B
- pomimo wielu zastępczych środków wykorzystywanych do odważania substancji, szkłem, docelowo

przeznaczonym to tej operacji jest naczynie wagowe pokazane na rysunku (A). Do odważania cieczy łatwo
lotnych służy tzw. pipeta wagowa (B), która zapewnia szczelne domknięcie naczynia podczas operacji ważenia,
a boczny wylot posiadający mały i szczelnie dopasowany kołpak służy przelewaniu takiej cieczy. Procedura
ważenia jest następująca: do odważonego naczynia wsypujemy ważoną substancję po czym wyznaczamy masę;
a następnie przenosimy substancję do naczynia docelowego i znowu ważymy naczynie wagowe (na jego
ściankach zawsze zostają przyklejone ślady ważonej substancji), z różnicy mas otrzymujemy dokładną masę (z
dokładnością określoną czułością wagi) ważonej substancji.
Piknometr
– jest naczyniem szklanym służącym wyznaczaniu wielkości fizycznej, jaką jest gęstość cieczy. Piknometrem
realizujemy pomiar wagowy w ściśle określonej temperaturze. Najpierw napełniamy go cieczą odniesienia,
której gęstość znamy w określonych warunkach i ważymy. Następnie wykonujemy taki sam pomiar dla cieczy
badanej, od obydwu pomiarów odejmujemy masę pustego piknometru i korzystamy z proporcji:
mx d
= x
mcieczy d cieczy
gdzie:
m.x, cieczy - to masa zważonej cieczy badanej i cieczy odniesienia;
dx, cieczy – to gęstość cieczy badanej i cieczy odniesienia.
Nasadki destylacyjne
- szklane elementy służące do połączenia naczynia destylacyjnego, jakim jest kolba destylacyjna okrągłodenna z
chłodnicą, nazywamy nasadkami destylacyjnymi. Mają one różne kształty w zależności od zastosowań z
pojedynczym otworem dla termometru lub z dwoma otworami dla termometru i kapilary (w przypadku
destylacji próżniowej) albo też wkraplacza (dla syntezy połączonej z oddestylowaniem rozpuszczalnika lub
produktu).
27
Deflegmatory
- dla cieczy, które się pienią i mają tendencje do wypryskiwania poza naczynie destylacyjne stosuje się nasadki z
łapaczem kropel (tzw. deflegmatory).
Odbieralniki, łączniki, reduktory
Zakończeniem chłodnicy jest odbieralnik który łączymy z chłodnicą – połączenia te także mają różne kształty –
proste odprowadzenia (mające zapewnić aparaturze sztywność i szczelność - nie zapominając, że układ do
destylacji atmosferycznej musi być układem otwartym, zabezpieczonym przed wilgocią jedynie suszką), lub
bardziej wymyślne np.: z bocznym odprowadzeniem dla par wydzielających się podczas destylacji lub też
podłączenia pompy próżniowej. W aparaturze destylacyjnej lub służącej do syntez, stosuje się różnego rodzaju i
kształtu łączniki, które mają zapewnić jej właściwe funkcjonowanie w zależności od zastosowań; odbieralniki
także muszą spełniać określone kryteria: w prostej destylacji odbieralnikiem może być zwykła kolba
Erlenmeyera lub zlewka, w destylacji w której musimy zadbać o brak dostępu wilgoci czy dwutlenku węgla
stosujemy układy otwarte zabezpieczone suszką z odpowiednim wypełnieniem (środki suszące tj.: chlorek
wapnia, wodorotlenek sodu, chloran magnezu, sita molekularne). Innym zagadnieniem jest destylacja pod
próżnią w której stosujemy układ destylacyjny działający w warunkach mocno obniżonego ciśnienia – stosujemy
w nim kapilarę zapewniającą regulację wrzenia, odbieralniki kuliste (zapewniające bezpieczeństwo pracy – a w
szczególności zabezpieczające przed implozją, której nie mogą przeciwstawić się naczynia płaskodenne);
odbieralniki w destylacji próżniowej łączy się z chłodnicą poprzez tzw. „krówkę”, która zapewnia zmianę
odbieralnika dla poszczególnych frakcji podczas destylacji, bez konieczności odizolowywania układu i
wyłączania próżni.
28
Chłodnice
– elementami wyposażenia aparatury szklanej mającymi za zadanie odprowadzanie nadmiaru ciepła są

chłodnice o różnej konstrukcji i przeznaczeniu. Na przykład do ogrzewania pod chłodnicą zwrotną potrzeba
chłodnic mających kanał chłodzący o kształcie zapewniającym możliwie największą powierzchnię wymiany
ciepła, kanałem tym może być wężownica szklana zapewniająca zwiększenie długości kanału. Do destylacji
wymaga się, aby kanał był prosty i aby nie zalegała w nim oddestylowywana ciecz. Jeżeli zachodzi potrzeba
odizolowania destylatu od wilgoci atmosferycznej lub dwutlenku węgla, stosuje się suszki z odpowiednim
wypełnieniem.
Suszka
- należy zwrócić uwagę aby całe światło suszki było wypełnione absorbentem. Wypełnieniem suszki, służącym
pochłanianiu wody są najczęściej: wodorotlenek sodu lub potasu, sita molekularne lub chlorek wapnia. Należy
zwrócić uwagę aby wypełnienie suszki nie było zbite i aby umożliwiało swobodny przepływ powietrza.
Kolumna rektyfikacyjna
– jeżeli zachodzi potrzeba dokładnego rozdziału lub oczyszczeniu rozpuszczalnika stosujemy kolumny
rektyfikacyjne, których zadaniem jest ustalenie równowagi para – ciecz destylowanej substancji, a co za tym
idzie dokładniejsze jej oczyszczenie; stosujemy zatem kolumny z wypełnieniem (w formie drobnych kulek,
paciorków, helisek lub kółek szklanych) lub też kolumny jednolite wykonane z szkła o powierzchni zwiększonej
przez wewnętrzne wypustki.
29
Wyparka próżniowa
– jeżeli chcemy odparować rozpuszczalnik, to nie stosujemy zestawu destylacyjnego ale wyparkę próżniową,
która pozwala nam proces ten przeprowadzić szybko i bez ryzyka termicznego zniszczenie substancji; proces
odparowywania prowadzimy pod zmniejszonym ciśnieniem.
Wymrażacz
– dla związków łatwo lotnych, których pary jest trudno odzyskać w procesie destylacji stosujemy wymrażacze w
których kondensacja par substancji odbywa się na powierzchni silnie schłodzonej, np. za pomocą suchego lodu
lub ciekłego azotu.
Kolby dwu- i trójszyjne
– kiedy zachodzi potrzeba wkraplania lub mieszania mieszaniny reakcyjnej stosujemy kolby wieloszyjne. Kolby
dwuszyjne stosujemy także wtedy, kiedy zachodzi potrzeba destylacji próżniowej i należy wprowadzić kapilarę.
Kolby destylacyjne oraz inne naczynia w których prowadzi się reakcje lub ogrzewanie przymocowujemy do
statywów za pomocą łapy która ma za zadanie utrzymanie jej przy łączeniu z chłodnicą; nigdy nie należy
ogrzewać kolby bezpośrednio włożonej do czaszy grzejnej i nie przymocowanej łapą. Zachodzi bowiem obawa,
że w razie pęknięcia którejkolwiek części szklanej, nie ma możliwości rozebrania zestawu i odsunięcia źródła
ciepła;
30
Termometr
– do pomiaru temperatury służą termometry; w pracy z nimi należy pamiętać o stosowaniu termometrów z
odpowiednio dobraną skalą; w razie uszkodzenia i wypłynięcia rtęci należy ją zebrać, a miejsce gdzie się rozlała
posypać siarką lub cynkiem. Nie stosować termometrów do mieszania cieczy.
Reaktor laboratoryjny
– pomimo, że większość reakcji chemicznych przeprowadzamy w kolbach, do prowadzenia syntezy

laboratoryjnej przeznaczone są także reaktory laboratoryjne, posiadające pokrywę przymocowaną klamrami, a
połączenie pomiędzy dnem a pokrywą, realizuje się poprzez powierzchnię doszlifowaną. Zasadniczą zaletą
reaktorów jest wygodniejszy dostęp do przestrzeni reakcyjnej (ma to znaczenie przy oczyszczaniu naczynia)
oraz duży wybór pokryw, posiadających wiele wyjść.
Aparat do ekstrakcji Soxletha
– do wydzielenia substancji z fazy stałej służy aparat Soxletha. Do komory tego aparatu wkłada się tubkę
wykonaną z sączka wypełnioną substancją ekstrahowaną, od dołu podłącza się kolbę z rozpuszczalnikiem
wymywającym (eluentem), a od góry chłodnicę zapewniającą zawracanie rozpuszczalnika. W czasie procesu
eluent zapełnia komorę ekstrakcyjną (ustala się równowaga ekstrakcyjna). Po zapełnieniu następuje przelanie i
znów napełnianie; w ten sposób substancja ekstrahowana zostaje przemieszczona do kolby z eluentem, a ten z
kolei zostaje odparowany i zawraca do komory ekstrakcyjnej.
31
2.4.3 Sprzęt metalowy
Na pracowni laboratoryjnej wykorzystujemy dużą ilość sprzętu metalowego. Najczęściej są to metalowe łapy,
połączenia, stojaki które nie stwarzają większego zagrożenia. Operujemy także palnikami, które ze względu na
zastosowanie powinny być utrzymywane w dobrym stanie technicznym, a także pompkami próżniowymi.
W tej części czytelnik znajdzie opis najczęściej spotykanych elementów metalowych wyposażenia pracowni.
Palnik Bunsena
-palnik służy do ogrzewania i spalania substancji. Palnik Bunsena jest w swojej konstrukcji najmniejszym i
najprymitywniej skonstruowanym palnikiem. Składa się z kominka, od dołu zasilanego przez dyszę gazem, a
dopływ powietrza regulowany jest cylindrowatym kołnierzem nałożonym na kominek. Dopływ gazu
ograniczony jest kurkiem. W celu zapalenia palnika zamykamy dopływ powietrza, przystawiamy zapałkę lub
zapalniczkę i otwieramy dopływ gazu (płomień jest kopcący – niecałkowite spalanie), następnie regulujemy
dopływ gazu do odpowiadającej nam wielkości płomienia, a na samym końcu regulujemy dopływ gazu tak, aby
płomień składał się z części redukującej (niebieska), przejściowej (czerwona) oraz utleniającej (blado niebieska
– posiadająca największą temperaturę). Z uwagi na fakt, iż w laboratorium chemicznym pracujemy często z
substancjami palnymi należy przestrzegać następujących zasad:
- nigdy nie należy ogrzewać substancji palnych za pomocą palnika gazowego
- wszystkie operacje z użyciem palnika (otwartego ognia) można prowadzić po uprzednim upewnieniu się że
w bezpośrednim sąsiedztwie nikt nie pracuje z palnymi i lotnymi odczynnikami
- nie należy pozostawiać zapalonego palnika bez kontroli, po pierwsze z powodu możliwości zgaśnięcia
płomienia, w następstwie czego dochodzi do ulatniania się gazu, po drugie ze względu na to, że płomień
palnika gazowego w jasno oświetlonym pomieszczeniu jest praktycznie niewidoczny, co sprzyja
wypadkom.
Palnik Teklu – palnik ten jest nieco większy od palnika Bunsena i można za jego pomocą uzyskiwać nieco
większe temperatury (do 900°C). Różni się także konstrukcją zasilania powietrzem – w palniku Teklu dokonuje
się regulacji za pomocą dużej płaskiej nakrętki osadzonej centralnie na gwincie wbudowanym w palnik.
Palnik Meckera
jest największym przedstawicielem stosowanych palników laboratoryjnych, a osiągana przez niego temperatura
dochodzi do 1200°C. Jego konstrukcja różni się od poprzednich tym, że zakończenie komina stanowi siatka
(stalowa lub niklowa) z jednej strony zapobiegająca przeskokowi płomienia do otworu zasilania powietrzem, z
drugiej zaś dzieli płomień na dziesiątki małych, stabilnych płomyczków o dobrych parametrach spalania gazu,
co zapewnia tak dużą temperaturę.
32
Trójnóg
– trzy punkty w przestrzeni kartezjańskiej zawsze tworzą płaszczyznę, a ta, jak wiadomo, wyklucza kiwanie się
oraz inne niestabilne ruchy zagrażające naszemu szklanemu wyposażeniu. Zasada ta zapewne przyświecała
twórcom trójnoga stanowiącego podstawę płytki do ogrzewania. Pomimo, że nogi trójnoga zawsze wyznaczają
stabilną płaszczyznę, okrąg je trzymający może znajdować się pod kątem różnym od 0° w stosunku do
płaszczyzny stołu i należy o tym pamiętać, zanim zdecydujemy się we własnym zakresie wyginać nogi trójnoga.
Siatka azbestowa i płytka metalowa
– naczyń szklanych nigdy nie należy podgrzewać bezpośrednio palnikiem (wyjątek stanowią probówki które
podgrzewamy bezpośrednio, pamiętając aby nie grzać ich punktowo cały czas, tylko poruszając nimi w
płomieniu i raz po raz wyjmując je z niego), ponieważ szkło mające niską wartość współczynnika
rozszerzalności cieplnej, ogrzewane płomieniem, pęka. Jako medium rozpraszające w miarę równomiernie
ciepło po podstawach naczyń szklanych stosujemy siatki azbestowe (z przyczyn zdrowotnych unikane na
pracowniach) oraz płytki metalowe. Zaletą płytek azbestowych jest niewątpliwie lepszy i równomierniejszy
rozkład ciepła na jej powierzchni; płytki metalowe mają tę wadę, że podczas długotrwałego stosowania wyginają
się i stanowią niestabilne podłoże dla ogrzewanych naczyń (należy o tym pamiętać w czasie opuszczania
stanowiska pracy).
Stojaki i statywy
– stanowią sprzęt służący zamocowaniu całych zestawów laboratoryjnych; składają się z pręta metalowego (∅10
– 12) przymocowanego do podstawy stalowej, na tyle ciężkiej aby zapewnić stabilność zmontowanych
zestawów.
Łapy, kółka
– sprzętem metalowym mającym bezpośredni kontakt ze szkłem są łapy, służące mocowaniu kolb i
chłodnic oraz kółka, które utrzymują na odpowiedniej wysokości lejki czy rozdzielacze. Dokręcając śrubę łapy
należy mieć na uwadze wytrzymałość mechaniczną szkła, zamocowane kolba powinna dać się jeszcze w łapie
obracać, lecz nie powinna z niej wypadać. Mocując sprzęt należy także zaopatrzyć palce łapy w materiał
zabezpieczający przed bezpośrednim kontaktem metalu ze szkłem, zapobiegnie to powstawaniu zarysowań na
szkle oraz powstawaniu naprężeń termicznych.
33
Łączniki
- łapy czy kółka należy oczywiście przymocować do statywów za pomocą łączników, zapewniających
sztywność i bezpieczeństwo połączenia. Łączniki zbudowane są z bloku metalowego posiadającego
odpowiednie wyżłobienia, w których umieszczone są śruby mocujące. Od stanu technicznego tych śrub zależy
bezpieczeństwo połączenia, a zatem należy zwracać uwagę, czy gwinty nie są zerwane (tzn. czy śruba się nie
kręci i nie zmienia położenia).
Szczypce
– szczypce laboratoryjne służą przenoszeniu elementów aparatury, tygli, parownic, których nie możemy
przenieść przez wzgląd na ich zbyt wysoką temperaturę lub ich np.: zanieczyszczenie.
Podnośniki
– służą umieszczaniu sprzętu grzewczego, odbieralników na zakładanej przez nas wysokości. Zasada działania
podnośnika opiera się na użyciu śruby o dwóch gwintach (lewym i prawym), która umieszczona w gwintach
zamocowanych na odpowiedniej konstrukcji platformach powoduje ich przemieszczanie.
Pompka wodna
– bardzo praktycznym w zastosowaniach urządzeniem metalowym na pracowniach jest pompka próżniowa,

której zasada działania opiera się na zasysaniu powietrza przez strumień wody (patrz rysunek). Istnieje również
szklana wersja pompki wodnej, jednak ze względu na jej niewielką trwałość o wiele częściej spotykamy się z jej
wersją metalową lub wykonaną z tworzywa sztucznego (pompka szklana jest za to stabilniejsza w działaniu).
34
Ściskacze
– służą zaciskaniu profilu węża elastycznego i są stosowane między innymi na wylotach butli z wodą
destylowaną.
Butla stalowa na sprężone gazy
– stosuje się do przechowanie zgromadzonego gazu pod dużym ciśnieniem. Na zawór butli zakłada się reduktory
mające za zadanie opróżnianie butli z założonym ciśnieniem i prędkością. Nie należy samodzielnie manipulować
przy butlach ze sprężonymi gazami.
35
2.4.4 Sprzęt elektryczny
2.4.4.1 Ogólne zasady bezpiecznej pracy na stanowiskach z prądem
elektrycznym
Wszelkie urządzenia elektryczne załączać do źródła prądu dopiero po zmontowaniu i połączeniu wszystkich
części połączeń (transformatory i odbiorniki prądu: czasze grzejne, mieszadła itp.).
Rozłączanie zestawów, w których wykorzystujemy prąd elektryczny rozpoczynać od odłączenia źródła zasilania
prądem.
Przy stosowaniu napięcia sieciowego (220V) w obwodach prądu przemiennego:
• nie dotykać nie izolowanych części obwodu elektrycznego;
• wystrzegać się zawilgocenia elementów sprzętu elektrycznego;
• nie stosować uszkodzonych przewodów elektrycznych, zwrócić uwagę na stan wtyczek i kontaktów.
W przypadku porażenia prądem:
• przerwać dopływ prądu;
• w przypadku ustania oddechu zastosować pierwszą pomoc, polegającą na stosowaniu sztucznego
oddychania, aż do przybycia pomocy lekarskiej.
Największe niebezpieczeństwo podczas porażenia prądem elektrycznym tkwi w fakcie skurczowego działania
prądu elektrycznego na mięśnie. Szczególnie niebezpieczne jest chwytanie otwartą dłonią, gdyż podczas
porażenia nie istnieje możliwość otwarcia dłoni i oderwania się od źródła porażenia.
Zalanie instalacji elektrycznej - niejednokrotnie zdarza się rozchlapywanie wody czy innych rozpuszczalników
w momencie uszkodzenia aparatury laboratoryjnej lub rozłączenia przewodów zasilających chłodzące elementy
aparatury, wtedy też istnieje możliwość zalania urządzeń elektrycznych, przewodów, tablicy prądu. W
przypadku zalania, czy zauważenia cieczy wokół urządzeń elektrycznych pod żadnym pozorem nie wolno ich
dotykać. Należy zorientować się, w jakim miejscu znajdują się najbliższe wtyczki, kontakty wyłączniki i odciąć
zasilanie upewniwszy się, że nie są zawilgocone. Po odcięciu źródła zasilania prądem, należy osuszyć
urządzenia elektryczne i po upewnieniu się, że nie stanowią zagrożenia można ponownie je stosować. Takie
urządzenia jak czasze grzejne z wnęką azbestową czy transformatory należy pozostawić do osuszenia na parę
dni, gdyż ich samodzielne osuszenie nie jest możliwe.
2.4.4.2 Ważniejszy sprzęt elektryczny stosowany w laboratorium

Czasze grzejne i piecyki elektryczne
piecyk elektryczny
- są jednym z najczęściej wykorzystywanych urządzeń elektrycznych na pracowni chemicznej. W pracy z nimi

należy zawsze pamiętać, że podczas korzystania mają one temperaturę mogącą powodować groźne poparzenia
skóry. Urządzenia te powinny być zawsze ustawiane w taki sposób, aby manipulacje wokół nich wykluczały ich
osuniecie, samoistne przemieszczenie, czy spadanie i zalanie. Naczynia stawiane na czaszach i piecykach nie
mogą być zawilgocone w miejscu stykania szkła z metalem, czy azbestem, ponieważ odparowująca woda obniża
punktowo temperaturę szkła (szkło jest złym przewodnikiem energii cieplnej), a różnica temperatur na
powierzchni może spowodować jego pękniecie i zalanie urządzenia elektrycznego. W momencie zalania czaszy
grzejnej należy bezzwłocznie odciąć źródło zasilania prądem poprzez wyjęcie wtyczki z kontaktu. Jeżeli istnieje
jednak jakiekolwiek ryzyko, że wtyczka mogła ulec zalaniu lub zawilgoceniu, należy odciąć źródło zasilania
poprzez wyłączenie prądu wyłącznikiem na tablicy zasilającej.
Transformatory - urządzenia te służą do redukcji napięcia podawanego na odbiornik prądu. Zagrożenia

wynikające z ich korzystania, to przede wszystkim zalanie transformatorów cieczą i zniszczone izolatory
transformatora powodujące przebicia prądu elektrycznego. Należy zwrócić uwagę przy korzystaniu z nich na
stan kontaktu oraz wtyczki i na fakt, czy obudowa ich nie nosi śladów zalania.
36
Mieszadło magnetyczne - urządzenie to składa się z rotora magnetycznego, który w czasie obracania wywołuje
wirowanie elementu magnetycznego umieszczanego w naczyniu reakcyjnym. Stosowane mieszadła
magnetyczne są często zintegrowane z urządzeniem grzejnym. Przy korzystaniu z mieszadeł należy zwrócić
uwagę, czy wszystkie przyciski i pokrętła są na swoim miejscu. Mieszadła wyposażone w urządzenia grzejne
mogą być przyczyną poparzeń.
Mieszadło mechaniczne
- w skład tego urządzenia wchodzi silnik połączony z wrzecionem mocującym mieszadło. Połączenie miedzy
wrzecionem a mieszadłem może być realizowane na dwa sposoby: bezpośrednie połączenie "na sztywno" lub
poprzez elastyczne przewód. W pracy z mieszadłem mechanicznym nie należy stosować zbyt dużych prędkości
rotora, gdyż niewielkie odchylenia od osi mieszadła mogą spowodować jego odkształcenie lub złamanie w
przypadku mieszadeł szklanych i rozpryskiwanie się szkła (oraz, w konsekwencji, obrażenia ciała).
Pistolet do suszenia - w skład tego zestawu szklanego wchodzi urządzenie podgrzewające rozpuszczalnik
organiczny do wrzenia. Zestawy współczesne posiadają kolbę z wtopioną w szkło spiralą grzejną. Podczas pracy
z tym zestawem należy pilnować, aby wrzenie cieczy nie było zbyt intensywne oraz by rozpuszczalnik nie
osiągnął zbyt niskiego poziomu, co mogło by grozić przepaleniem spirali, pęknięciem jej szklanej ochrony, a w
konsekwencji zniszczeniem sprzętu. Temperatura suszenia jest determinowana przez temperaturę wrzenia
rozpuszczalnika.
Suszarka - to urządzeni grzewcze służy do utrzymywania temperatur w zakresie ~30 - ~250°C. Z uwagi, że
przeznaczeniem suszarki jest pozbywanie się śladów wody i innych rozpuszczalników z preparatów, czy
suszenie naczyń szklanych i porcelanowych, należy pamiętać, że niektóre łatwo lotne rozpuszczalniki mogą
spowodować eksplozję tegoż urządzenia. Do suszarki nie należy wkładać papieru (chyba, że temperatura nie
przekracza 80°C - przekroczenie tej temperatury powoduje rozkład celulozy) i korków wykonanych z tworzyw
sztucznych o niskich temperaturach mięknienia. W pracy z suszarką należy pamiętać, że urządzenie to pracuje w
dość szerokim zakresie temperatur i może być także przyczyną poparzeń termicznych.
Piec - piec elektryczny jest urządzeniem w którym utrzymujemy wysokie temperatury (w stosowanych
najczęściej dochodzą one do 1500°C). Podstawowym zagrożeniem ze strony tych urządzeń są poparzenia
termiczne, gdyż w tak wysokich temperaturach zbliżanie rąk do okna pieca powoduje szybkie ich nagrzewanie,
podobnie zbliżenie twarzy może spowodować uszkodzenie termiczne oczu czy skóry. Podczas wkładania
wszelkich elementów szklanych lub porcelanowych należy używać rękawic ochronnych i specjalnych szczypiec
(nie gumowych lecz wykonanych ze skóry (rękawice spawalnicze), czy z grubego materiału (rękawice robocze)
lub azbestu). Należy zwrócić uwagę, by wszelkie naczynia porcelanowe - łopatki, tygle, rynienki porcelanowe,
szklane oraz substancje przed włożeniem do pieca były suche, tzn. wysuszone wstępnie w suszarce pozbawione
wilgoci.
Łaźnia wodna – urządzenie to stwarza wysokie niebezpieczeństwo, gdyż w komorze wypełnionej cieczą
umieszczone są grzałki i czujniki temperatury, a całość jest w obudowie zawierającej instalacje termostatującą,
istnieje zatem ryzyko kontaktu cieczy z instalacją. Przy pracy z tym urządzeniem, należy zwrócić uwagę na to,
czy z łaźni nie wycieka ciecz oraz czy pokrętła i wyłączniki nie są zalane.
37
Wirówka - urządzenie to posiada rotor o regulowanej szybkości obrotów. Współczesne wirówki posiadają
zabezpieczenia przed zalaniem cieczą oraz zabezpieczenie przed otwarciem trakcie pracy, natomiast starsze typy
wirówek w trakcie pracy których można otwierać klapę komory wirowania, stwarzają niebezpieczeństwo
mechanicznego uszkodzenia ciała. Zakazane jest zatrzymywanie ręką lub jakimkolwiek przedmiotami rotora -
rotor po odłączeniu od źródła zasilania musi zatrzymać się sam. Należy zadbać o równomierne rozłożenie
obciążenia wokół osi obrotu.
Wyparka próżniowa - jest to jedno z urządzeń elektrycznych w skład którego wchodzi także instalacja wodna.
W pracy z tym urządzeniem, należy zwracać uwagę na to, by podłączenie wyparki do źródła prądu odbywało się
w izolacji od wody czy pary wodnej.
Tablica prądu - składa się z gniazd elektrycznych, gniazd bezpiecznikowych, wyłącznika prądu, licznika
poboru mocy. Nie należy manipulować przy tablicy prądu samodzielnie poza załączaniem i wyłączaniem prądu;
niedozwolona jest również samodzielna naprawa bezpieczników. Należy zwrócić szczególną uwagę na to, by w
czasie wykonywania doświadczenia ciecze nie wypryskiwały na tablice oraz na to, by wyloty wytwornic pary
wodnej nie były skierowane w ich kierunku (jest to jedno z potencjalnych źródeł zawilgocenia urządzeń
elektrycznych).
Przewody zasilające i przesyłające prąd - należy zwrócić szczególną uwagę na to, czy przewód elektryczny
nie jest przetarty, przegrzany oraz czy nie wystają z niego żadne metalowe druciki wchodzące w jego skład.
Gniazda prądu i wtyczki przed załączeniem powinny zostać sprawdzone, czy nie są zawilgocone, pęknięte lub
uszkodzone.
38
2.4.5 Sprzęt porcelanowy
Lejek sitowy (Buchnera) – jest przeznaczony do sączenia pod próżnią. Posiada przestrzeń zakończoną dnem
dziurkowanym. Na to dno kładziemy dopasowany sączek przylegający szczelnie i dopiero wtedy umiejscawiamy
go na kolbie ssawkowej i dokonujemy sączenia.
Łopatki
– ten sprzęt porcelanowy służy do nabierania substancji ze słoików oraz przenoszenia ich do naczyń
docelowych.
Moździerz z tłuczkiem
służy do rozdrabniania niewielkich ilości substancji. W moździerzu uciera się za pomocą tłuczka. Należy
pamiętać jednak, że nie wszystkie substancje są odporne na ucieranie i mogą rozkładać się wybuchowo.
Parownica
jak sama nazwa wskazuje, naczynie to służy do odparowywania rozpuszczalników (ze względu na fakt, iż
parownice ogrzewa się za pomocą palnika, nie wolno odparowywać w niej rozpuszczalników palnych).
Tygiel
– służy do długotrwałej termicznej obróbki termicznej substancji w piecach, w których temperatura może
dochodzić do 2000 °C (w zależności od materiału z jakiego wykonany jest tygiel). W pracy z tyglem należy
pamiętać, że nie należy wkładać wilgotnego tygla do gorącego pieca, a substancje w nim się znajdujące powinny
być wstępnie osuszone w temperaturze około 120 °C w celu pozbycia się wody nie związanej chemicznie
(wilgotne tygle zawsze pękają). Przy wkładaniu i wyjmowaniu tygla z pieca należy używać długich szczypiec
przeznaczonych do obsługi pieca (korzystanie z krótkich grozi oparzeniem termicznych – przy temperaturach
jakie utrzymujemy w piecach materiał jego ścian emitują promieniowanie podczerwone o natężeniu które jest
przyczyną odczuwanych zmian ciepła).
39
Trójkąt do tygli
– prażenie niewielkich ilości substancji w stosunkowo krótkim czasie można dokonać korzystając z palnika
laboratoryjnego. Na trójnóg kładziemy wówczas trójkąt do osadzania tygli. Po prażeniu należy odczekać, aż
trójkąt wystygnie i nie należy go zdejmować chwytając za metalowy drut, gdyż jest on nagrzany (metale dobrze
przewodzą ciepło).
40
3 Wybrane techniki laboratoryjne
3.1 Chromatografia
Chromatografia jest techniką analityczną i preparatywną wykorzystującą rozdzielanie mieszanin substancji na
poszczególne składniki, bądź ich grupy (frakcje), dzięki różnicom w zachowaniu się tych składników w układzie
dwóch faz, w których jedna nie zmienia swego położenia (faza nieruchoma, stacjonarna), druga zaś porusza się
względem pierwszej w określonym kierunku (faza ruchoma, roztwór rozwijający).
3.1.1 Podział chromatografii zależnie od dominującego mechanizmu

procesu rozdziału
Ze względu na mechanizm podziału wyróżniamy następujące typy chromatografii:
a. adsorpcyjną - gdy fazą ruchomą jest ciecz lub gaz, a nieruchomą ciało stałe o właściwościach adsorbujących
i odpowiednim rozdrobnieniu (np. żel krzemionkowy, tlenek glinowy, węgiel aktywny itp.). Rozdział jest
powodowany różnicami współczynników adsorpcji.
b. podziałową - gdy fazą ruchomą jest ciecz lub gaz, a stacjonarną - ciecz zatrzymana na odpowiednim nośniku
(bibuła, ziemia okrzemkowa, kulki szklane itp.). Rozdział jest wynikiem różnic współczynników podziału.
c. jonowymienną - gdy fazą ruchomą jest ciecz, a stacjonarną wymieniacz jonowy. Rozdział zależy od różnic w
sile wiązania składników przez wymieniacz.
d. żelową - gdy fazą ruchomą jest ciecz, a nieruchomą granulowany, jednorodny spęczniały żel. Rozdział jest
powodowany różnicami w zdolnościach dyfundowania do cząsteczek żelu, a więc różnicami w wielkości
cząsteczek składników.
3.1.2 Podział chromatografii w zależności od sposobu przeprowadzania

rozdziału
Ze względu na sposób prowadzenia rozdziału wyróżniamy następujące typy chromatografii:
a. bibułową - w której fazą nieruchomą jest odpowiednio przygotowana (np. zaimpregnowana) specjalna bibuła
chromatograficzna pocięta na arkusze, paski lub krążki. W pobliżu krawędzi arkusza bądź paska lub środka
krążka nanosi się na tzw. punkt startowy (krople badanego roztworu), a następnie powoduje się przepływ fazy
ruchomej, co prowadzi do rozdzielenia składników mieszaniny (tzw. rozwijanie chromatogramu). Proces
odbywa się w odpowiednim szczelnym naczyniu tzw. komorze chromatograficznej. Po zakończeniu rozwijania
otrzymuje się plamy (lub pasma) chromatograficzne poszczególnych składników (lub frakcji), które uwidacznia
się, np. przez przeprowadzenie reakcji barwnych (tzw. wywoływanie chromatogramu), obserwację w świetle
nadfioletowym itp. Przez porównanie z analogicznie wykonanym chromatogramem mieszaniny substancji
wzorcowych identyfikuje się poszczególne składniki, a przez porównanie wielkości intensywności plam
uzyskuje się wyniki ilościowe.
b. cienkowarstwową - w której fazę nieruchomą nanosi się w postaci cienkiej równomiernej warstewki na
płytkę szklaną, arkusik folii aluminiowej czy tworzywa sztucznego. Dalsze postępowanie jest podobne jak w
chromatografii bibułowej.
c. kolumnową - kolumnę (najczęściej szklaną) wypełnia się fazą nieruchomą (adsorbentem, nośnikiem
nasyconym ciekłą fazą nieruchomą, jonitem, granulowanym żelem) i na jej szczyt wprowadza badany roztwór, a
następnie fazę ruchomą (eluent). Zachodzi rozdzielanie składników, które bądź pozostają w kolumnie (tworząc
oddzielne pasma) lub są kolejno wymywane (elucja). W poszczególnych porcjach wycieku (eluatu)
przeprowadza się oznaczenia rozdzielanych składników, np. przez miareczkowanie, pomiar refrakcji itd.
d. gazową - w której fazą ruchomą jest gaz, a faza nieruchoma jest umieszczona w kolumnie. Próbkę (gaz,
ciecz) wstrzykuje się przed kolumną do strumienia przepływającego z określoną prędkością i pod określonym
ciśnieniem gazu nośnego. Za kolumną znajduje się detektor czuły na zmiany składu gazu, którego sygnały są
41
zapisywane w postaci chromatogramu. Chromatografię gazową wykonuje się w chromatografach gazowych
wyposażonych w urządzenia sterujące przepływem gazów, temperaturą pracy, różnego typu detektory itp. W
ustalonych warunkach pracy czas wyjścia składnika z kolumny umożliwia jego identyfikację, a powierzchnia
piku jest proporcjonalna do jego zawartości. Chromatografia gazowa jest stosowana powszechnie do celów
analitycznych (chromatografia gazowa analityczna); do otrzymywania czystych substancji (chromatografia
gazowa preparatywna) oraz w badaniach fizykochemicznych.
e. cieczową - w której fazą ruchomą jest ciecz przepływająca przez kolumnę sposób ciągły i pod ciśnieniem do
kilkudziesięciu MPa. Wykonuje się ją w chromatografach cieczowych działających podobnie jak chromatograf
gazowy.
3.1.3 Wykonanie chromatogramu cienkowarstwowego

Wykonanie chromatogramu cienkowarstwowego rozpocząć należy od przygotowania komory
chromatograficznej (którą najczęściej jest zlewka przykryta szalką Petriego lub szkiełkiem zegarkowym). Na
dno komory wlewamy niewielką ilość (warstwę o wysokości ok. 0,5-1 cm) rozpuszczalnika, a następnie komorę
pozostawiamy na co najmniej 15 min. w celu wysycenia parami rozpuszczalnika. W przypadku
rozpuszczalników trudno lotnych proces ten można przyspieszyć umieszczając we wnętrzu zlewki cylinder z
bibuły filtracyjnej, przylegający do ścianek naczynia. W czasie wysycania komory przygotowujemy płytki
chromatograficzne. Szerokość płytki dostosowujemy do ilości nanoszonych substancji (przyjmuje się że odstępu
pomiędzy punktami startowymi powinny wynosić ok. 1 cm) pamiętając dodatkowo o zachowaniu min. 1 cm
marginesów na jej brzegu. Wysokość dobieramy tak aby pomiędzy linią startu a górną krawędzią płytki był
odstęp 10,5-11 cm. Płytkę wycinamy ostrymi nożyczkami uważając aby nie zarysować jej powierzchni, nie
uszkodzić warstwy sorbentu na obrzeżu oraz nie dotknąć jej powierzchni palcami. Na dolnym brzegu wyciętej
płytki, około 1,5 cm od krawędzi, cienkim ołówkiem rysujemy kreskę, nazywaną linią startu. Następnie na linii
startu zaznaczamy punktu startowe (zachowując 1 cm odstępy pomiędzy nimi oraz od boków płytki). Na punkty
startowe nanosimy za pomocą kapilar rozcieńczone roztwory wzorców oraz próbki badane, starając się, aby
średnica plamki nie przekraczała 5 mm. Następnie płytką umieszczamy w pozycji pionowej, w komorze
chromatograficznej uważając aby brzegi płytki nie stykały się ze ściankami naczynia i pozwalamy strefie
rozpuszczalnika wędrować w górę absorbentu. Po osiągnięciu przez czoło cieczy poziomu o około 0,5 cm
niższego od górnego skraju płytki rozwinięty chromatogram wyciągamy, suszymy i wywołujemy zgodnie z
zaleceniami zawartymi w ćwiczeniu. Na rysunku przedstawiono przykładowy chromatogram przed i po
rozwinięciu.
czolo rozpuszczalnika
11 cm
ok. 10 cm
plamki substancji
1 cm
linia startu
1,5 cm
42
3.2 Analiza miareczkowa
Analiza miareczkowa polega na tym, że do roztworu oznaczanej substancji wprowadza się niewielkimi
porcjami - "miareczkami" - równoważną chemicznie ilość odczynnika w postaci roztworu mianowanego, tj.
roztworu o dokładnie znanym stężeniu. W celu rozpoznania momentu, w którym to wprowadzona ilość
odczynnika jest równoważna chemicznie ilości składnika oznaczanego, dodaje się do miareczkowanego
roztworu wskaźnika (indykatora) odpowiedniego dla danego rodzaju oznaczenia.
Moment, w którym wskaźnik zmienia barwę, nazywa się punktem końcowym miareczkowania.
Zawartość oznaczanej substancji oblicza się na podstawie dokładnie zmierzonej objętości zużytego roztworu
mianowanego. Istnieją także inne metody oznaczania punktu końcowego.
3.2.1 Przygotowanie do miareczkowania

1. Dokładnie umyć biuretę tak, aby woda spływała równomiernie po ściankach, nie pozostawiając kropel.
Skrupulatne przestrzeganie czystości obowiązuje w odniesieniu do wszystkich naczyń miarowych, ponieważ
pozostające na ściankach krople roztworu mianowanego mogą być źródłem poważnych błędów przy
odmierzaniu objętości.
2. Kran biurety po wysuszeniu należy pokryć cienką warstwą wazeliny. Nasmarowany kran powinien być
przezroczysty, a nie matowy.
3. Przemyć biuretę 2-3 razy niewielkimi ilościami roztworu mianowanego, starając się przy tym, aby po każdym
przemyciu roztwór wyciekł z biurety możliwie całkowicie. Tym sposobem przeciwdziała się rozcieńczaniu
roztworu mianowanego wodą, pozostającą zwykle na ściankach i w końcówce biurety.
4. Umieścić biuretę w statywie w położeniu dokładnie pionowym.
5. Napełnić biuretę nieco powyżej kreski zerowej roztworem mianowanym. Roztwór można wlewać przez
poprzednio przepłukany lejek, pamiętając jednak o wyjęciu lejka zaraz po nalaniu roztworu, aby w czasie
miareczkowania nie spływały z niego do biurety krople roztworu. Lepiej jednak wlewać roztwór bezpośrednio z
butelki, co przy odrobinie ostrożności, nie jest trudne.
6. Całkowicie usunąć powietrze z końcówki biurety, zastępując je roztworem. W biuretach z wężykiem
gumowym osiąga się to przez zgięcie wężyka, skierowanie końcówki szklanej w górę i ostrożne otwarcie
ściskacza, natomiast w biuretach z kranem, poprzez otwarcie kranu. Pozostawienie w rurce powietrza, które w
czasie miareczkowania może się wydostać na zewnątrz, grozi błędem kilku dziesiątych cm3 przy odczycie
objętości.
7. Doprowadzić poziom roztworu w biurecie dokładnie do kreski zerowej, wylewając nadmiar roztworu do
podstawionego naczynia. Jeśli na końcu biurety pozostaje jeszcze kropla roztworu, usunąć ją przez dotknięcie
ścianki tegoż naczynia.
8. Każde miareczkowanie zaczynać od poziomu zerowego. W ten sposób unika się pomyłek w odczytach
objętości oraz zmniejsza się błędy wynikające z niedokładności podziałki.
3.2.2 Miareczkowanie
1. Nie wylewać roztworu z biurety zbyt szybko, ponieważ łatwo zdarzyć się może „przemiareczkowanie”, a przy
tym pewna ilość cieczy pozostanie na ściankach biurety, skutkiem czego objętość zużytego roztworu będzie
pozornie większa. Roztwór powinien wypływać z biurety kroplami (a nie strumieniem) z jednakową szybkością
(3-4 kropel na sekundę).
2. Szybkość wypływu cieczy z biurety oraz objętość kropli zależy od wielkości otworka w końcówce. Aby
określić objętość jednej kropli, należy wypuścić z biurety 100 kropel roztworu i na podstawie zmiany położenia
menisku określić ich objętość sumaryczną. Następnie podzielić otrzymaną objętość przez 100 i otrzymuje się
objętość jednej kropli.
3. Całość miareczkowania przeprowadzić przy jednorazowym napełnieniu biurety. Nie dopełniać biurety w
trakcie miareczkowania.
Uwaga! W trakcie sporządzania roztworów mianowanych naważka analityczna nie musi być równa obliczonej
teoretycznie masie substancji potrzebnej do przygotowania roztworu. Do obliczeń stosujemy rzeczywistą
(naważoną) masę substancji.
43
44
4 Ćwiczenie 1
4.1 Równowagi w roztworach elektrolitów – wstęp teoretyczny
4.1.1 Elektrolity, dysocjacja elektrolityczna
Wartości ciśnienia osmotycznego, prężności pary nad roztworem lub też obniżenia temperatury
topnienia, mierzone dla roztworów kwasów, zasad czy też soli, są większe niż wielkości wyliczone z praw
Roulta i van’t Hoffa. Ponieważ wartości te zależą tylko od ilości niezależnych cząsteczek znajdujących się w
danej objętości roztworu (tzw. wielkości koligatywne) wnioskować można, że cząsteczki powyższych związków
ulegają, pod wpływem rozpuszczalnika, rozpadowi na większą ilość niezależnych fragmentów. Proces ten
nazywamy dysocjacją elektrolityczną, powstające fragmenty jonami (naładowane dodatnio – kationami, ujemnie
– anionami).
W silnie rozcieńczonych roztworach soli typu AB (np.: NaCl, KCl, AgNO3) wielkości koligatywne są
około dwukrotnie większe niż oczekiwane, w roztworach soli typu A2B lub AB2 (np.: Na2SO4, CaCl2)
trzykrotnie większe itd. Zależności te są słuszne dla roztworów mocnych elektrolitów, w których równowaga
dysocjacji przesunięta jest bardziej w stronę jonów. Do elektrolitów mocnych należą wszystkie sole, kwasy i
zasady w których przeważa jonowy charakter wiązania między wodorem lub metalem a resztą wodorotlenową
lub kwasową. Mocne elektrolity, w odróżnieniu od elektrolitów słabych, dobrze przewodzą prąd elektryczny. W
roztworach o dużym stężeniu silne elektrolity pozostają nadal całkowicie zdysocjowane na jony, jednakże, na
skutek oddziaływań międzyjonowych powodujących ograniczenie swobody ruchów, zauważa się zmniejszenie
właściwości koligatywnych jonów. Sprawia to wrażenie niepełnej dysocjacji mocnych elektrolitów, efekt ten
nazywa się pozornym stopniem dysocjacji. Jest to wynik tworzenia się par i trójek jonowych (⊕\; ⊕\⊕;
\⊕\).
Pozorne stałe dysocjacji prezentuje Tabela 1. Wpływ stężenia na dysocjację kwasu octowego, będącego
słabym elektrolitem jest zaniedbywalny, jednakże wyraźnie widoczny dla roztworów silnych elektrolitów: KCl i
MgSO4.
Tabela 4. Stała dysocjacji kwasu octowego i pozorne stałe dysocjacji chlorku potasu i siarczanu magnezu
Stężenie [mol*dm-3]
Elektrolit
0,0001 0,001 0,01 0,1
CH3COOH 1,3*10-5 1,5*10-5 1,7*10-5 1,7*10-5
MgSO4 2,3*10-3 6,0*10-3 13,3*10-3 33,3*10-3
KCl 1,3*10-2 4,5*10-2 15,1*10-2 53,5*10-2
Zjawisko dysocjacji jest procesem równowagowym, możemy zatem wyrazić je ilościowo za pomocą
stałej dysocjacji, oznaczanej symbolem KD lub K.
AnBm nA- + mB+
Dla powyższego procesu równanie na wartość K przyjmuje następującą formę:
KD =
[A ] [B ]
− n + m
[An Bm ]
Wartość KD wyznaczona dla stężonych roztworów mocnych elektrolitów, odbiegająca od wartości rzeczywistej,
nosi nazwę pozornej stałej dysocjacji.
Wartość K wyraża się często jako pK, czyli ujemny logarytm dziesiętny z wartości K. Wprowadza się
ponadto pojęcie stopnia dysocjacji (α), zdefiniowanego jako stosunek ilości cząsteczek zdysocjowanych(nd) do
początkowej ilości cząsteczek (n).
nd
α=
n
Dla elektrolitów których dysocjacja przebiega wielostopniowo wprowadza się dodatkową wielkość, zwaną
ogólną stałą dysocjacji, będącą iloczynem kolejnych wartości KD, opisujących kolejne etapy jonizacji molekuły.
45
W roztworach słabych elektrolitów, np. postaci HA, zdysocjowanych w stopniu α, z C0 moli związku powstaje
C0α moli jonów H+ i tyle samo anionów A-. Reszta, wyrażona jako C0-C0α, stanowi kwas niezdysocjowany. Po
podstawieniu powyższych wartości do równania na stałą równowagi KD, otrzymujemy zależność, zwaną prawem
rozcieńczeń Ostwalda:
C0α * C0α C0α 2

KD = = ≈ C0α 2
C0 − C0α 1 − α
KD
α=
C0
Jak widać, stopień dysocjacji słabego elektrolitu zależy przede wszystkim od wartości stałej dysocjacji i
stężenia. Analogiczne rozważania prowadzić można dla roztworów słabych zasad. Wartość α jest kryterium
podziału elektrolitów ze względu na ich moc; do elektrolitów mocnych zalicza się te, których stopień dysocjacji
w roztworze o stężeniu 0,1 M jest większy niż 90% (KD>10), elektrolity słabe charakteryzują się stopniem
dysocjacji mniejszym niż 0,1% (KD<10-4), pozostałe zalicza się do elektrolitów średniej mocy.
Pamiętać należy jednak, iż w przypadku większości elektrolitów ulegających dysoscacji z
wytworzeniem więcej niż dwóch jonów, proces ten jest wieloetapowy i jego opis przy użyciu jednej wartości K
jest niemożliwy. Przykładem związku ulegającego kilkustopniowemu rozpadowi na jony może być kwas
fosforowy(V).
-H+ -H+ -H+
H3PO4 H2PO4- HPO42- PO43-
+H+ +H+ +H+
Wartości K1, K2 i K3 wyrażają się odpowiednio wzorami:
K D1 =
[H ]* [H PO ] = 7,6 *10
+
2 4
−
−3
[H 3 PO4 ]
[H ]* [HPO ] = 6,2 *10
+ 2−
−8
K D2 =
[H PO ]
4
−
2 4
=
[H ]* [PO ] = 1,0 *10
+ 3−
−12
[HPO ]
4
K D3 2−
4
Stężenia poszczególnych form (dla roztworu 0.1 mola kwasu fosforowego(V) w 1 dm3) wynoszą zatem:
c[H3PO4] = 0,0759 mol*dm-3, c[H2PO4-] = 0,0240 mol*dm-3, c[HPO42-] = 6,19*10-7 mol*dm-3, c[PO43-] =
2,58*10-17 mol*dm-3. Różnice w wartościach kolejnych stałych dysocjacji wynikają z kilku czynników:
energia potrzebna na oderwanie protonu z fragmentu naładowanego ujemnie (anion) jest większa niż
niezbędna do oderwania go z obojętnej cząsteczki;
powstałe w poprzednich stadiach dysocjacji protony wpływają na stan równowagi, przesuwając go w lewo
(głównym źródłem jonów H+ w roztworach kwasów wieloprotonowych jest pierwszy stopień dysocjacji)
inny jest czynnik statystyczny, opisujący prawdopodobieństwo oderwania kolejnego protonu od już
zdeprotonowanej cząsteczki.
Dla zasad i innych elektrolitów charakteryzujących się kilkoma stopniami dysocjacji można przeprowadzić
rozumowanie analogiczne.
4.1.2 Aktywność i współczynnik aktywności

Jak wspomniano, na skutek różnorakich procesów, takich jak przyciąganie jonów różnoimiennych,
tworzenie się par i trójek jonowych czy hydratacji, roztwór mocnego elektrolitu zachowuje się tak, jakby jego
stężenie było mniejsze od rzeczywistego. To zmniejszone, efektywne stężenie jonów w roztworze, określa się
mianem aktywności ai. Parametr ten jest zależny od stężenia. Wraz z rozcieńczaniem roztworu jego wartość
zbliża się do rzeczywistego stężenia, w roztworze nieskończenie rozcieńczonym obie te wartości są sobie równe.
46
W roztworach bardzo stężonych, w których, na skutek rozbijania przez jony elektrolitu asocjatów wody,
aktywność cząsteczek wody wzrasta, aktywność elektrolitu może być większa od jego rzeczywistego stężenia.
Stosunek aktywności (a) do stężenia (c) i-tego jonu nazywamy współczynnikiem aktywności (f).
ai
fi =
ci
Aktywność jonów zależy również od obecności innych indywiduów naładowanych w roztworze. Elektrolity
typu AB (KCl, AgNO3) w identyczny sposób wpływają na aktywność innych jonów w roztworze, natomiast
wpływ jonów o wyższym ładunku jest znacznie większy. Wpływ wszystkich jonów obecnych w roztworze
wyraża wielkość zwaną siłą jonową (a – aktywność jonu, c – stężenie jonu, z – ładunek jonu).
1 n
I= ∑
2 i =1
ci zi2
Z powyższej zależności wyprowadzić można wartość współczynnika aktywności:
log f i = −0,509 z 2 I
Na podstawie pomiarów fizykochemicznych, prowadzonych dla roztworów elektrolitów (potencjały elektrod,

przewodnictwo) wyznaczyć możemy jedynie średni współczynnik aktywności elektrolitu, związany z
aktywnościami poszczególnych jonów:
( f ± ) m + n = f +m f −n
gdzie f+ i f- oznaczają współczynniki aktywności kationu i anionu elektrolitu AmBn.
4.1.3 Iloczyn rozpuszczalności, efekt solny, efekt wspólnego jonu

W roztworach mocnych elektrolitów, których cząsteczki są całkowicie zdysocjowane, nie możemy
stosować prawa działania mas (mianownik w równaniu na stałą równowagi wynosi zero, zatem wielkość ta traci
sens fizyczny), jednakże, w pewnych warunkach, a mianowicie dla nasyconych roztworów słabo
rozpuszczalnych soli znajdujących się w stanie równowagi z osadem, prawo działania mas może być stosowane.
Rozważmy proces rozpuszczania chlorku srebra w wodzie. Proces dysocjacji (dla układu w stanie
równowagi) przedstawia się w następujący sposób:
AgCl(s) Ag(aq)+ + Cl(aq)-
W nasyconych roztworach trudno rozpuszczalnych soli prawo zachowania mas zachowuje swoje znaczenie i w
przypadku powyższego równania ma postać:
KD =
[Ag ][Cl ]
+ −
[AgCl ]
Ponieważ wartość K i stężenie chlorku srebra w osadzie jest stałe iloczyn stężeń jonów zdefiniować możemy
jako nową stałą, zwaną iloczynem rozpuszczalności L:
[ ][ ]
LAgCl = Ag + Cl − * f Ag + * f Cl −
Zależność ta mówi, że w nasyconym roztworze soli trudno rozpuszczalnej iloczyn stężeń produktów dysocjacji
pozostaje stały. Dla soli o wzorze ogólnym AnBmCo.... powyższy wzór przyjmuje postać:
L = [A] [B ] [C ] ... * f Am * f Bn * f Co * ...

n m o
Dla AgCl rozpuszczalność wynosi 1,1*10-5 mol*dm-3, zatem L=1,2*10-10. W większości przypadków wartości f
możemy przyjąć za równe 1.
47
W przypadku w którym iloczyn stężeń jonów powstałych na skutek dysocjacji związku, jest równy iloczynowi
rozpuszczalności mówimy o roztworze nasyconym. Jeśli wartość ta jest wyższa od wartości L mamy do
czynienia z roztworem przesyconym. Układy przesycone są niestabilne energetycznie dlatego też mają
skłonność, bądź to pod wpływem czynników zewnętrznych (mieszanie, wahania temperatury) bądź
spontanicznie, do „usuwania” nadmiaru rozpuszczonej substancji z roztworu. Proces ten nazywamy krystalizacją
lub strącaniem. W pierwszym przypadku wydzielanie związku z roztworu przebiega względnie powoli, z
wytworzeniem poprawnie zdefiniowanych kryształów substancji. Ma miejsce na ogół w przypadku związków
dobrze rozpuszczalnych w danym rozpuszczalniku. Strącanie jest procesem bardziej gwałtownym; wydzielona
substancja ma często charakter bezpostaciowy lub koloidalny, czasami drobnokrystaliczny. Proces ten
obserwujemy najczęściej w przypadku związków o niewielkiej rozpuszczalności oraz w roztworach bardzo
silnie przesyconych.
Rozpuszczalność trudno rozpuszczalnych soli w roztworach elektrolitów jest inna niż w czystej wodzie.
Rozważyć należy dwa przypadki:
elektrolit posiada jon(y) wspólne z osadem
Konieczność zachowania stałej wartości iloczynu rozpuszczalności L, niezależnie od środowiska,

pociąga za sobą w tym przypadku zmniejszenie rozpuszczalności soli trudno rozpuszczalnej. Prześledźmy to na
przykładzie rozpuszczania AgCl w 1 M roztworze KCl. Stężenie jonów chlorkowych w roztworze jest równe
sumie stężeń KCl i AgCl, zatem:
[ ][{
L AgCl = Ag + Cl AgCl
−
] [
−
+ Cl KCl = Ag + ]} [ ] + [Ag ][Cl ] = [Ag ] + [Ag ]*1
2 + −
KCl
+ 2 +
[Ag ] = [AgCl] = 1,2 *10

+ −10
M
Zjawisko to nosi nazwę efektu wspólnego jonu.
elektrolit nie posiada jonów wspólnych z osadem
Wprowadzenie do roztworu soli trudno rozpuszczalnej, znajdującego się w równowadze z osadem,

elektrolitu z którym nie posiada ona wspólnych jonów, pociąga za sobą wzrost jej rozpuszczalności. Efekt ten
wynika ze zmiany siły jonowej roztworu, a co za tym idzie, współczynników aktywności, co pociąga za sobą
zmianę stężeń jonów. Załóżmy, że do układu AgCl(s)/AgCl(aq) wprowadzamy KNO3, osiągając stężenie 1 M. Siła
jonowa tego roztworu wynosi zatem:
I=
1 n
∑
2 i =1
1
(
ci zi2 = c K + z K2 + + cCl − zCl2 − = 1M
2
)
Współczynnik aktywność jonów w takim roztworze jest mniejsza niż pod nieobecność elektrolitu i wynosi:
f Ag + = f Cl − = 10 −0 ,509 z = 0,3
2
I
Wartość iloczynu rozpuszczalności musi pozostać stała, zatem wzrosnąć muszą stężenia jonów srebrowych i
chlorkowych w tym układzie.
[Ag ] = [Cl ] =
+ −
L AgCl
f Ag + * f Cl −
= 3,6 *10 −5
Zjawisko to nosi nazwę efektu solnego.
48
4.1.4 Iloczyn jonowy wody, wykładnik stężenia jonów wodorowych
Dla reakcji dysocjacji wody przebiegającej w myśl równania:
H2O H+ + OH-
możemy oczywiście zapisać wzór na stałą dysocjacji (pamiętać należy że jon H+ występuje w formie
indywiduów hydratowanych, tzw. jonów hydroniowych, o strukturach odpowiadających stechiometrii H3O+ czy
H9O4+):
KD =
[ ][
H + OH − ]
[H 2O ]
wartość K wynosi około 1,80*10-16, co przy podstawieniu za c[H2O]=55,4 (stężenie „wody w wodzie”,
obliczone po podstawieniu do wzoru na stężenie molowe, masy 1 dm3 wody i jej masy molowej) daje nam
wartość licznika powyższego ułamka:
[ ][ ]
K w = H + OH − = 1,00 *10 −14
wielkość ta nazywana jest iloczynem jonowym wody, obrazującym stan równowagi pomiędzy uwodnionym
jonem wodorowym a jonem wodorotlenowym i nie zależy od tego, czy mamy do czynienia z czystą wodą, czy
też z roztworami elektrolitów (oczywiście w zakresie stężeń, w którym wpływu na stężenie tych jonów nie
zaczynają mieć inne procesy, i w którym stężenie wody nie różni się bardzo od wartości 55,4 mol*dm-3).
Wielkość tego iloczynu zależy silnie od temperatury i przyjmuje wartość 0,13*10-14 w 00C, 1,00*10-14 w 250C
osiągając 4,8*10-13 w temperaturze wrzenia wody.
Charakterystyczne właściwości kwasów i zasad są zależne od ich cech donorowo-akceptorowych, a ich
miarą jest stała dysocjacji. Dysocjacja kwasów jest więc źródłem jonów wodorowych w roztworze, zasad zaś,
źródłem anionów wodorotlenowych. Miarą kwasowości bądź zasadowości roztworu jest stężenie tych jonów,
zależne od mocy kwasu (zasady) i ich stężenia. Stężenia jonów wodorotlenowych i wodorowych w układach
wodnych są ze sobą sprzężone, zatem aby je wyrazić, wystarczy podać wartość jednego z nich. Przyjęło się za
miarę kwasowości (zasadowości) roztworu podawać wartość stężenia kationów H+. Stężenia jonów OH-
obliczyć można dzieląc iloczyn jonowy wody przez stężenie jonów wodorowych:
[OH ] [
−
=
1*10 −14
H+ ]
Roztwory z przewagą jonów H+ nazywamy kwaśnymi, z przewagą OH- zasadowymi. Aby ułatwić operowanie
wartościami stężeń, c[H+] przyjęło się podawać w formie ujemnego logarytmu dziesiętnego i oznaczać jako pH
(wykładnik stężenia jonów wodorowych):
pH = − log10 H + [ ]
Z własności logarytmów obliczyć można łatwo wykładnik stężenia jonów wodorotlenowych, pOH:
 1*10 −14 
pOH = − log10 
[ ]
+
[ ]
 = − log10 10 −14 + log10 H + = 14 − pH
 H 
Roztwory o pH<7 nazywamy kwaśnymi, pH=7 – obojętnymi, pH>7 – zasadowymi. Pamiętać należy, iż stosuje
się to wyłącznie do roztworów o temperaturze 250C.
Powyższe rozważania dotyczą stężeniowej wartości pH. Wartość termodynamiczna jest mniejsza od
stężeniowej o logarytm dziesiętny ze współczynnika aktywności jonów wodorowych. Pominięcie tego efektu nie
rzutuje zazwyczaj na wynik pomiaru, gdyż w zakresie siły jonowej od 0 do 0,5 wartość logf nie przekracza 0,10.
4.1.5 Wskaźniki kwasowo-zasadowe, pehametr.

Najprostszy, a w skutek tego najczęściej używany sposób pomiaru pH polega na stosowaniu
wskaźników. Pomiar ten obarczony jest dużą niedokładnością, wynoszącą ok. 1 jednostki pH (w szczególnych
przypadkach 0,2 jednostki). Wskaźniki (indykatory) są to związki organiczne, charakteryzujące się zdolnością
49
do zmiany barwy pod wpływem kwasu lub zasady. Budowa związków z tej grupy jest różnorodna. Ich cechą
wspólną jest to, że w roztworach wodnych ulegają dysocjacji kwasowej bądź zasadowej i są słabymi
elektrolitami. Równanie ogólne dysocjacji indykatorów ma postać:
HIn + H2O In- + H3O+
gdzie HIn i In- oznaczają odpowiednio formę kwasową i zasadową wskaźnika. Samemu procesowi dysocjacji
rzadko towarzyszy zmiana barwy, jednakże dla złożonych cząsteczek organicznych
protonowanie/deprotonowanie związane jest z silnymi zmianami elektronowymi, konformacyjnymi czy też
strukturalnymi cząsteczki. Prześledźmy te procesy na przykładzie dwóch najczęściej stosowanych indykatorów:
fenoloftaleiny i oranżu metylowego.
Oranż metylowy, przedstawiciel wskaźników dwubarwnych, występuje w środowisku zasadowym w postaci
żółtego anionu (In-) o wzorze:
N N
N SO3-
w środowisku kwaśnym następuje przyłączenie protonu i powstaje czerwony produkt (HIn) o strukturze:
H
N N N N
N SO3- N SO3-
H
Fenoloftaleina, która jest bezbarwna w roztworze kwaśnym, a czerwona w roztworach zasadowych jest
wskaźnikiem jednobarwnym. Oprócz reakcji protonowania/deprotonowania, ulegać może reakcji przyłączania
jonu OH-, co powoduje jej odbarwienie (z procesem tym możemy mieć do czynienia w roztworach silnie
zasadowych). Zmiany barwy są następstwem następujących reakcji:
HO O O-
OH
COO- COO-
- 2H+ + OH- HO
+ 2H+ - OH-
O
- -O
O
O
2- 3-
H2In In InOH
Stała równowagi procesów protonowania wskaźników ma postać:
K In =
[H ][In ]
+ −
[HIn]
O zabarwieniu roztworu decyduje stosunek stężeń obu postaci wskaźnika.
[In ] = −
K In
[HIn] [ ] H+
Dla różnych wskaźników, w zależności od barw obu form, ich intensywności, stosunek ten, decydujący o
zmianie barwy roztworu, może być różny. Zwykle przyjmuje się że gdy [In-]/[HIn] jest większy niż 1:10,
roztwór ma barwę formy kwasowej, w zakresie od 1:10 do 10:1 barwę mieszaną, która przy stosunku 10:1
przechodzi w barwę postaci zasadowej. Zmiana stosunku stężeń z 1:10 na 10:1 wiąże się ze stukrotną zmianą
stężenia jonów wodorowych, musi wynikać zatem ze zmiany pH o dwie jednostki. Na podstawie powyższych
zależności dla wskaźników dwubarwnych wyprowadzić można równanie na zakres pH przy którym następuje
zmiana barwy:
pH = pK In + log10
[In ] −
[HIn]
50
Jak widać, wartość ta zależy tylko od stosunku stężeń przy którym następuje zmiana barwy, nie zależy natomiast
od ilości dodanego indykatora. Dla wskaźników jednobarwnych równanie powyższe ma następującą postać:
pH = pK In + log10
[In ] = pK
−
[In ]
−
In + log10
[HIn] C − [In ]
In
−
gdzie CIn oznacza początkowe stężenie wskaźnika. Stężenie formy anionowej jest znacznie mniejsze od
początkowego stężenia indykatora, zależność powyższą można zatem uprościć.
pH = pK In + log10
[In ] = pK
−
[ ]
+ log10 In − − log10 C In
In
C In
Jak widać, wartość pH przy którym zaczyna się zmieniać barwa roztworu zależy w tym przypadku od ilości
wprowadzonego wskaźnika, należy zatem, stosując indykatory jednobarwne, starać się wprowadzać tę samą
ilość indykatora do roztworu. Na zakres zmiany barwy wpływać będzie oczywiście również aktywność jonów
H+, wynikająca z obecności elektrolitów obojętnych w układzie.
Do dokładniejszych pomiarów pH stosuje się pomiary pehametryczne, wykonywane za pomocą
pehametrów. Istotą ich działania jest pomiar różnic potencjału, a zatem siły elektromotorycznej ogniwa,
pomiędzy elektrodami z których jedna jest wrażliwa na stężenie jonów wodorowych. Jako podstawową
elektrodę pomiarową stosuje się elektrodę wodorową, zbudowaną z blaszki platynowej zanurzonej w badanym
roztworze, omywanej przez strumień gazowego wodoru pod ściśle określonym ciśnieniem. Powstający potencjał
jest efektem reakcji utleniania-redukcji zachodzącej na tej elektrodzie:
2H+ + 2e- H2
który jest określony równaniem Nernsta:
RT (aH + )
2
E=E + 0
ln
2F aH 2
gdzie: R - stała gazowa, T - temperatura, F - stała Faradaya, ai - aktywności wodoru i jonów wodorowych, E0 –
potencjał normalny elektrody wodorowej wynoszący, niezależnie od temperatury E0=0.
Przy stałym ciśnieniu gazowego wodoru, wynoszącym 105 Pa zależność powyższa ulega uproszczeniu:
ln (a H + ) =
RT RT 2,303 * RT 2,303 * RT
E = E0 + ln aH + = log10 aH + = −
2
pH
2F F F F
Potencjał elektrody analitycznej mierzy się względem standardowej elektrody wodorowej, zbudowanej w
analogiczny sposób, przy czym blaszka platynowa w układzie odniesienia umieszczone jest w 1M roztworze
HCl. Analityczna elektroda platynowa wykazuje liniową zależność potencjału od pH. Stosowanie elektrod
wodorowych do pomiaru pH jest kłopotliwe ze względu na konieczność używania gazowego wodoru. Jako
elektrodę pomiarową stosuje się obecnie najczęściej elektrodę szklaną, zbudowaną z rurki ze szkła o ściśle
określonym składzie, zakończonej cieniutką szklaną membraną. Wewnątrz elektrody szklanej znajduje się drut
srebrny pokryty warstwą chlorku srebra, zanurzony w 0,1 M roztworze HCl. Potencjał półogniwa wewnętrznego
(AgAgClHCl) jest zatem stały (wynosi 0,222V). Zmiany potencjału całej elektrody szklanej wynikają ze
zmian potencjałów na granicach faz roztworu i membrany szklanej. Powierzchniowa faza membrany w
kontakcie z roztworem wodnym ulega hydratacji i przebiegają w niej procesy wymiany jonowej między szkłem
a roztworem oraz dyfuzja jonów H+ wewnątrz hydratowanej części membrany. Jej zaletą jest łatwość użycia i
niewrażliwość na obecność innych substancji w roztworze. Elektrodą odniesienia jest najczęściej elektroda
kalomelowa lub chlorosrebrowa. Budowa tej drugiej jest taka sama jak półogniwa wewnętrznego elektrody
szklanej. Nasycona elektroda kalomelowa zbudowana jest a drutu platynowego, zapewniającego kontakt
elektryczny, zanurzonego w kropli rtęci pokrytej warstwą Hg2Cl2, będącej w kontakcie z 1M lub nasyconym
roztworem KCl. Potencjał normalny wynosi odpowiednio 0,2800V lub 0,2415 V. Kontakt elektrolitu ze
środowiskiem odbywa się przez wtopiony w szkło klucz elektrolityczny, zbudowany z włókna azbestowego
nasyconego roztworem KCl.
51
Pt
nasycony KCl
0,1 M HCl
0,1 M HCl
Ag Hg
Ag
Hg2Cl2
AgCl
AgCl krystaliczny KCl

klucz
membrana elektrolityczny
szklana
klucz
elektrolityczny
ELEKTRODA SZKLANA ELEKTRODA CHLOROSREBROWA ELEKTRODA KALOMELOWA
4.1.6 Roztwory buforowe

Jeżeli zmieszamy ze sobą dwa roztwory, jeden zawierający słaby kwas HA drugi sprzężoną z nim
zasadę A-, to równowagę w tym układzie określa reakcja:
HA + H2O A- + H3O+
Stałą równowagi powyższej reakcji jest stała dysocjacji kwasowej kwasu HA, równa:
KD =
[H O ][A ]
3
+ −
[HA]
Z powyższego wyrażenia wynika, że pH roztworu zależy od stężenia kwasu i sprzężonej z nim zasady:
pH = pK D + log10
[A ] = pK
−
+ log10
CA
[HA] D
C HA
Wykładnik stężenia jonów wodorowych w tak przygotowanym roztworze obliczyć można przyjmując za
stężenie kwasu oraz sprzężonej z nim zasady wartości równe stężeniom początkowym składników (obniżenie
stężenia HA i A- na skutek dysocjacji elektrolitycznej można zaniedbać z powodu niewielkich wartości pKD dla
słabych kwasów i zasad). Przykładem układów o których mowa są roztwory słabego kwasu (np.: CH3COOH,
H3BO3) i jego soli (np.: CH3COONa, Na2B4O7) lub słabej zasady (np.: NH3aq) i jej soli (np.: NH4Cl). Roztwór o
takim składzie nazywamy roztworem buforowym. Cechą roztworów buforowych jest zdolność utrzymywania
stałego pH roztworu, niezależnie od dodania niewielkich ilości kwasu lub zasady bądź też umiarkowanego
rozcieńczenia roztworu. Mechanizm działania buforu jest prosty. Jeśli do roztworu dodamy substancji
zawierającej jony wodorotlenowe, to przereagują one z cząsteczkami kwasu wchodzącego w skład buforu z
wytworzeniem sprzężonej z nim zasady i wody. Stężenie jonów wodorowych pozostanie więc praktycznie stałe.
Podobnie, dodanie do roztworu buforowego kwasu spowoduje wiązanie jonów wodorowych z jonami
(cząsteczkami) obecnej w buforze zasady i wytworzenie sprzężonego z nią kwasu, co z kolei zapobiegnie dużej
zmianie pH. Na przykład, pH roztworu buforowego, zawierającego 0,5 mola octanu sodu i 0,5 mola kwasu
octowego w litrze wynosi 4,768. Dodanie do tej objętości 1 cm3 1M HCl lub NaOH spowoduje zmianę pH o
0,002 jednostki. Ta sama ilość kwasu solnego lub wodorotlenku sodu dodana do litra wody spowoduje zmianę
pH o 4 jednostki (z 7,0 odpowiednio na 3,0 i 11,0). Zdolność buforu do przeciwdziałania zmianie pH wywołanej
52
dodaniem kwasu lub zasady wyraża się poprzez pojemność buforową, zdefiniowaną jako stosunek stężenia
dodanego kwasu lub zasady do zmiany pH:
∆C HA( B )
β=
∆pH
Pojemność opisanego buforu wynosi zatem 0,5.
4.1.7 Hydroliza
Efektem dysocjacji soli (np.: octanu sodu, chlorku żelaza(III)), są odpowiednie kationy metali i aniony
reszt kwasowych. Z punktu widzenia teorii kwasów i zasad Brönsteda anion octanowy, zdolny do przyłączenia
protonu, jest zasadą, natomiast hydratowany kation Fe3+ jest kwasem zdolnym do oddania protonu. Jednocześnie
w układzie znajdują się cząsteczki wody, zachowujące się bądź jak kwas, oddające proton zasadzie - anionowi
octanowemu, lub też jak zasada, przyłączająca proton pochodzący od kwasu - hydratowanego jonu żelaza(III).
CH3COONa CH3COO- + Na+
CH3COO + HOH
-
CH3COOH + HO-
zasada 1 kwas 1 kwas 2 zasada 2
FeCl3 + 6H2O Fe(H2O)63+ + 3Cl-
3+ 2+ +
Fe(H2O)6 + H2O Fe(OH)(H2O)5 + H3O
kwas 1 zasada 1 kwas 2 zasada 2
Powstające w pierwszym przypadku jony wodorotlenowe powodują alkalizację roztworu, jony wodorowe
tworzące się w przypadku soli roztworu soli żelaza(III) decydują o jego kwaśnym odczynie. Wykazywanie przez
roztwory obojętnych związków odczynu kwaśnego lub zasadowego, obserwowane we wszystkich roztworach
soli słabego kwasu i mocnej zasady lub słabej zasady i mocnego kwasu, nazywamy hydrolizą. Równania ogólne
dla powyższych procesów mają postać:
- + - +
CH3COO + Na + H2O CH3COOH + HO + Na
3+ - 2+ + -
Fe(H2O)6 + 3Cl + H2O Fe(OH)(H2O)5 + H3O + 3Cl
Dla procesów tych możemy oczywiście zapisać stałą równowagi Kh, np.:
Kh =
[CH 3COOH ][OH − ]
[CH COO ]
3
−
(stężenia jonów sodu nie uwzględniamy, gdyż jest ono niezmienne po obu stronach równania). Analogicznie do
procesu dysocjacji, zdefiniować możemy stopień hydrolizy jako stosunek liczby cząsteczek zhydrolizowanych
(lub stężenia formy zhydrolizowanej), do początkowej liczby molekuł (lub stężenia początkowego).
Ch
β=
C0
Podobnie jak podczas formułowania prawa rozcieńczeń Ostwalda, do równania na stałą hydrolizy podstawić
możemy wartości Ch uzyskane po przekształceniu zależności opisującej wartość stopnia hydrolizy:
Kh =
[CH 3COOH ][OH − ] = C0 β * C0 β =
C0 β 2
≈ C0 β
[CH COO ] 3
−
C0 (1 − β ) 1− β
a stąd:
Kh
β=
C0
53
Octan sodu należy do soli słabego kwasu i mocnej zasady. Rozważmy ogólny proces hydrolizy soli tego typu:
+ - + -
M + A + H2O M + HA + OH
Wykładnik stężenia jonów wodorowych w tym układzie obliczyć można przekształcając równanie na stałą
hydrolizy.
[HA] K w+
Kh =
[HA][OH ]=
[H ] = [HA]* K = K
−
[A ] [A ] [A ][H ] K
w w
− − − +
D
[HA] = [OH ] −
K w2
[HA][OH − ] [H + ]
2
Kw
= = =
Kh
[A ] −
[A ] −
KD
[A ] = C
−
0
[H ] =
+ KD * Kw
C0
1 1 1
pH = K D + K w + log10 C0
2 2 2
Roztwór soli słabego kwasu i mocnej zasady ma zatem odczyn zasadowy.
Podobne wyprowadzenie przeprowadzić możemy dla soli słabej zasady i mocnego kwasu (np.: NH4Cl). Schemat
hydrolizy ma postać:
+ - - +
BH + A + H2O B + A + H3O
Analogicznie do powyższego wyprowadzenia, zapisać możemy:
[B] Kw
Kh =
[B][H ]= [ ] +
OH − K
= w
[BH ] [ ] +
BH +
KD
[B] = [H ] +
[BH ] = C +
0
K =
[B][H ] = [H ] + + 2
[BH ] [BH ]
h + +
[H ] + 2
= K h * C0 =
K w * C0
KD
[H ] =
+ K w * C0
KD
1 1 1
pH = pK w − pK D − log10 C0
2 2 2
Odczyn tak uzyskanego roztworu jest kwaśny.
Trzecim możliwym do rozważenia przypadkiem jest hydroliza soli słabego kwasu i słabej zasady.
+ -
BH + A B + AH
54
Wartość pH takiego roztworu obliczyć możemy z równań dysocjacji kwasu HA i zasady B:
K Dkw =
[A ][H ]
− +
[HA]
K Dzas =
[BH ][OH ]
+ −
[B ]
[A ] = [BH ]
− +
[B ] = [HA]
K Dzas
=
[BH ][OH ][HA] = [OH ] = K
+ − −
[A ][H ][B] [H ] [H ]
w
− + + + 2
K Dkw
[H ] =+
K w * K Dkw
K Dzas
1 1 1
pH = pK w + pK Dkw − pK Dzas
2 2 2
4.1.8 Teorie kwasów i zasad

4.1.8.1 Teoria Arrheniusa
Na podstawie teorii dysocjacji elektrolitycznej skonstruowana została teoria kwasów i zasad
Arrheniusa. Według tej teorii kwasy to substancje, które w roztworach wodnych odszczepiają jon wodorowy,
HA H+ + A-
zasadami są zaś substancje odszczepiające jon wodorotlenowy.
+ -
BOH B + OH
Teoria Arrheniusa dobrze tłumaczy zachowanie kwasów i zasad w roztworach wodnych, zawodzi jednak w
przypadku roztworów obojętnych soli ulegających hydrolizie, których roztwory na skutek tego procesu
wykazują odczyn kwaśny lub zasadowy i są zdolne do reagowania jak typowe kwasy lub zasady. Nie tłumaczy
również zachowania substancji w wielu roztworach niewodnych, np.: mocznika, który rozpuszczony w wodzie
nie wykazuje cech kwasu ani zasady (w rozumieniu Arrheniusa), w ciekłym amoniaku zachowuje się jak kwas,
natomiast w kwasie octowym jak zasada. Podobnie kwas azotowy zmienia radykalnie swoje właściwości po
rozpuszczeniu we fluorowodorze, w którym zachowuje się jak zasada.
4.1.8.2 Teoria Lowry’ego-Brönsteda

Rozwinięciem niedoskonałej teorii Arrheniusa stała się teoria Lowry’ego-Brönsteda, zakładająca, że
dysocjacja nie polega na prostym rozpadzie na jony, lecz jest bardziej złożonym procesem związanym z reakcją
substancji rozpuszczonej z rozpuszczalnikiem. Jon wodorowy, powstający podczas dysocjacji kwasów w
roztworze wodnym jest w rzeczywistości hydratowany przez jedną lub cztery cząsteczki wody. Hydratacji
ulegają również kationy metali, aniony wodorotlenowe i reszt kwasowych. Zachowanie się w wodzie substancji
zwanych kwasami nie polega zatem na oddysocjowaniu protonu lecz na przekazanie go do cząsteczki wody:
- +
HA + H2O A + H3O
W teorii protonowej Lowry’ego-Brönsteda kwasem jest substancja zdolna do oddania protonu (protonodonor,
np.: HA), zasadą związek zdolny do jego wiązania (protonoakceptor, np.: woda). Przejścia protonu od donora do
akceptora zależne jest od tendencji odszczepiania go przez cząsteczkę kwasu i wiązania kationu wodorowego
przez zasadę. Moc różnych kwasów porównywać można tylko względem tej samej zasady, podobnie jak
porównanie różnych zasad możliwe jest tylko w odniesieniu do jednego kwasu. Woda, w zależności od
wprowadzonej substancji, może zatem być albo zasadą (akceptorem protonów, np.: w roztworze HCl), albo
zasadą (donorem protonu, np.: w roztworach cyjanków). Związki zachowujące się bądź jako zasada, bądź jako
55
kwas (amfoteryczne w sensie Lowry’ego-Brönsteda), nazywamy amfiprotonowymi. W wyniku reakcji kwasu z
zasadą powstaje sprzężona z kwasem zasada i sprzężony z zasadą kwas. W roztworze HCl w wodzie kwasem
jest chlorowodór (jest zdolny do oddania jonu H+) jak również jon hydroniowy, zasadami, woda i jon chlorkowy
(zdolne do przyjęcia protonu).
zasada 1 zasada2
HCl + H2O Cl- + H3O+
kwas 1 kwas 2
zasada 1 zasada2
CN- + H2O HCN + OH-
kwas 1 kwas 2
Mocny kwas (np.: HNO3) cechuje się silnymi tendencjami protonodonorowymi, sprzężona z nim zasada (anion
azotanowy(V)), słabymi właściwościami protonoakceptorowymi (jest zatem słabą zasadą). Podobnie, kwas
sprzężony do silnej zasady jest słabym kwasem.
4.1.8.3 Teoria Lewisa

Ogłoszona w 1923 roku przez Lewisa teoria kwasów i zasad jest uogólnieniem teorii Lowry’ego-
Brönsteda. W myśl tej koncepcji kwasem jest każdy związek będący akceptorem pary elektronowej, zasadą jej
donor. Wszystkie cząsteczki będące kwasami wg teorii Lowry’ego-Brönsteda są zarazem kwasami Lewisa,
zasady Lowry’ego-Brönsteda są zasadami Lewisa. Teoria Lewisa rozszerza jednak pojęcie kwas (zasada) na
związki których teorie Arrheniusa oraz Lowry’ego-Brönsteda nie dotyczyły. Chlorowodór, a ściślej rzecz
ujmując wchodzący w jego skład jon H+, jest kwasem Lewisa, gdyż jest zdolny do przyjęcia pary elektronowej
od zasady, którą jest cząsteczka wody, z wytworzeniem jonu hydroniowego. Podobnie, akceptorem pary
elektronowej mogą być inne cząsteczki, nie zawierające protonu, np.: BF3, AlCl3, SO3, Ag+. Wszystkie one
tworzyć mogą połączenia z donorami par elektronowych, takimi jak cząsteczki wody, amoniaku, aminami,
eterami czy anionami reszt kwasowych. Przykłady reakcji pomiędzy kwasami i zasadami w sensie Lewisa
przedstawiono poniżej:
kwas zasada
H + Cl-
+
HCl
H+ + NH3 NH4+
AlCl3 + Cl- AlCl4-
BF3 + F- BF4-
Ag+ + NH3 Ag(NH3)2+
BF3 + 2NH3 H3NBF3
56
4.2 Równowagi elektrolityczne w roztworach – część ekperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie się z pojęciem pH i wskaźnikami kwasowo-zasadowymi, właściwościami roztworów buforowych

oraz zjawiskami dysocjacji i hydrolizy związków chemicznych.
ZAKRES OBOWIĄZUJĄCEGO MATERIAŁU
Pojęcie pH, iloczyn jonowy wody, aktywność jonu, siła jonowa roztworu, stała równowagi, stała i stopień
hydrolizy, roztwory buforowe, pojemność buforu, teorie kwasów i zasad, dysocjacja elektrolityczna, stała i
stopień dysocjacji, słabe i mocne elektrolity, wskaźniki pH, mechanizm działania indykatorów, iloczyn
rozpuszczalności, efekt solny, efekt wspólnego jonu.
ODCZYNNIKI
NaOH CH3COOH NaNO3 nasycony

HCl CH3COONa PbCrO4
NH4OH KCl 10% Pb(NO3)2 nasycony
NH4Cl Mg(ClO4)2 20% Zn(CH3COO)2 nasycony
Fe(NO3)3, ZnCl2, Cu(NO3)2, K2HPO4, MgCl2, KI, K2CO3, K2SO4, AlCl3, NaCl, KNO3
Indykatory: fenoloftaleina, oranż metylowy, błękit bromotymolowy, czerwień metylowa, purpura

bromokrezolowa, papierki wskaźnikowe.
UWAGA: Wodorotlenki sodu i amonu oraz stężone kwasy: solny i octowy, są silnie żrące. Pracując z nimi
obowiązuje stosowanie rękawic ochronnych i okularów. Roztwory wskaźników są silnie plamiące. Sole
ołowiu są silnie trujące.
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW
Przygotować:
100 cm3 0,1 M roztworu NaOH

100 cm3 0,1 M roztworu HCl
OPIS ĆWICZENIA
a. Indykatory kwasowo-zasadowe
Przygotuj 15 probówek. Do pięciu nalej po około 2 ml wody, do kolejnych pięciu po 2 ml 0.1 M

roztwór kwasu solnego, do pozostałych taką samą ilość 0.1 M roztworu NaOH. Zbadaj zależność barwy
indykatora od pH roztworu dodając po 1 kropli każdego ze wskaźników kolejno, do roztworu kwaśnego,
zasadowego i obojętnego (woda destylowana). Sprawdź także wpływ pH na barwę papierka uniwersalnego i
lakmusowego nanosząc na nie roztwór kwasu, wodorotlenku i wodę za pomocą bagietki szklanej.
b. Roztwory buforowe
Przygotuj 200 cm3 roztworu buforowego (bufor octanowy lub amonowy) o stężeniu i pH podanym
przez prowadzącego. Przygotuj 7 zlewek. W pierwszej umieść 50 ml wody destylowanej, w drugiej 50 ml wody
i 5 ml 0,1 M HCl, w trzeciej 50 ml H2O i 5 ml 0,1 mol NaOH. W kolejnych trzech zlewkach przygotuj roztwory
w sposób opisany powyżej używając zamiast wody roztwór buforowy. Do siódmej zlewki wlej 25 ml buforu i 25
ml wody destylowanej. Zmierz pH roztworów za pomocą pH-metru. Oblicz pojemność buforową otrzymanego
buforu.
UWAGA: ZASADY PRACY Z pH-METREM:

- Przed użyciem pH-metr należy skalibrować zgodnie ze wskazówkami laboranta lub prowadzącego
ćwiczenia. Należy uważać aby nie zanieczyścić roztworów buforowych używanych do kalibracji!
57
- Po każdym pomiarze pH, przed zanurzeniem w kolejnym roztworze, zarówno podczas wykonywania
ćwiczenia jak i podczas kalibracji przyrządu, elektrody należy opłukać dokładnie wodą destylowaną a
następnie osuszyć czystą bibułą filtracyjną. Mycie i osuszanie elektrody należy wykonać również
przed wykonaniem ćwiczenia (po wyjęciu elektrody z roztworu w którym jest przechowywana) oraz
po jego zakończeniu.
- Końcówka elektrody jest zakończona delikatną, cienkościenną banieczką szklaną dlatego należy
posługiwać się nią delikatnie, nie uderzać o ścianki naczynia. W żadnym przypadku nie należy
mieszać roztworu elektrodą pH-metryczną!
c. Hydroliza soli
Przygotuj w 11 zlewkach o pojemności 100 cm3 po 50 cm3 1 molowych roztworów azotanu(V) potasu,
azotanu(V) żelaza(III), azotanu(V) wapnia, chlorku cynku, chlorku magnezu, chlorku glinu, chlorku sodu,
węglanu potasu, wodorofosforanu(V) potasu, jodku potasu oraz siarczanu(VI) potasu w wodzie destylowanej.
Następnie zmierz, za pomocą pH-metru pH otrzymanych roztworów. Zapisz równania reakcji oraz spróbuj
oszacować wartości stałych hydrolizy dla badanych związków.
d. Wpływ temperatury na stopień hydrolizy
W dwóch probówkach umieść niewielką ilość octanu sodu a następnie rozpuścić go w niewielkiej ilości
wody destylowanej. Do pierwszej probówki dodaj kroplę fenoloftaleiny, do drugiej kroplę roztworu błękitu
bromotymolowego. Probówki ogrzej w płomieniu palnika. Zaobserwuj zmiany w probówkach po ogrzaniu a
następnie po ochłodzeniu roztworu. Zapisz równanie reakcji hydrolizy. Czy proces hydrolizy octanu sodu jest
egzo- czy endoenergetyczny.
e. Efekt wspólnego jonu
I.
Niewielką ilość chromianu(VI) ołowiu(II) (ok. 0,5 g) umieść w zlewce zawierającej 50 cm3 wody
destylowanej a następnie ogrzej do wrzenia. Po ochłodzeniu do temperatury pokojowej roztwór przesącz przez
sączek z bibuły filtracyjnej a następnie dodaj niewielką ilość (ok. 1 cm3) nasyconego wodnego roztworu
azotanu(V) ołowiu(II).
II.
Do 10 cm3 nasyconego roztworu octanu cynku dodaj kilka kryształków octanu sodu. Zaobserwuj
zmiany zachodzące w probówce.
f. Efekt solny
W dwóch probówkach umieść po 5 cm3 roztworu chlorku potasu o stężeniu 10%. Następnie do obu
probówek dodaj kilka kropli 20% roztworu chloranu(VII) magnezu w takiej ilości, aby w probówkach wystąpiło
lekkie zmętnienie (UWAGA: Do obu probówek należy dodać taką samą ilość kropli roztworu Mg(ClO4)!).
Następnie do pierwszej probówki wlewaj porcjami po 0,5 cm3, nasycony wodny roztwór azotanu(V) sodu do
momentu całkowitego rozpuszczenia wytrąconego osadu. Do dodaniu każdej porcji zawartość probówki
dokładnie zamieszaj. Do drugiej probówki dodawaj, zamiast roztworu NaNO3, wodę destylowaną, postępując w
sposób analogiczny jak w przypadku pierwszej probówki. Porównaj objętości roztworu NaNO3 oraz wody
potrzebne do rozpuszczenia osadu KClO4.
g. Amfoteryczność
W zlewce umieść 5 cm3 1M roztworu azotanu(V) glinu a następnie, mieszając roztwór, wlej 15 cm3 1
M roztworu NaOH. Roztwór wraz z wytrąconym osadem przenieś do probówek wirówkowych i odwiruj. Zlej
supernatant a do osadu dodaj parę mililitrów wody destylowanej, starannie wytrząśnij i ponownie odwiruj osad
wodorotlenku glinu. Przygotuj dwie probówki, jedną zawierającą stężony kwas solny, drugą zawierającą 20%
roztwór NaOH (probówki napełnij do ok. ½ objętości). Do obu probówek wrzuć niewielką ilość otrzymanego
wcześniej Al(OH)3 i starannie zamieszaj zawartość probówki bagietką. Co obserwujesz? Zapisz równania
reakcji.
58
h. Miareczkowanie alkacymetryczne
Otrzymaną od prowadzącego ćwiczenia próbkę kwasu solnego rozcieńcz w kolbie miarowej do

objętości 100 cm3 i dokładnie wymieszaj. Biuretę napełnij mianowanym roztworem wodorotlenku sodu. Z kolby
miarowej pobierz, za pomocą pipety, 10 cm3 roztworu HCl, przenieś go do kolby stożkowej o pojemności 250-
300 cm3, dodaj ok. 50 cm3 wody destylowanej oraz kilka kropli roztworu oranżu metylowego a następnie
miareczkuj za pomocą roztworu NaOH do zmiany barwy z czerwonej na żółtą. Wykonaj minimum trzy
miareczkowania (różnica objętości zużytego wodorotlenku nie mogą przekraczać 0,1 cm3), oblicz średnią ilość
zużytego NaOH a następnie oblicz ilość gramów HCl w analizowanej próbce.
59
60
5 Ćwiczenie 2
5.1 Reakcje utleniania - redukcji – wstęp teoretyczny
5.1.1 Procesy utleniania-redukcji
Reakcjami utleniania-redukcji nazywamy procesy chemiczne, którym towarzyszy zmiana stopnia utlenienia.
Procesem utlenienia nazywamy przemianę związaną z oddawaniem elektronów, redukcją – z ich pobieraniem.
Reagent oddający elektrony (ulegający utlenieniu) nazywamy reduktorem, pobierający elektrony (ulegający
redukcji) – utleniaczem. Pamiętać należy iż procesy te są ściśle ze sobą powiązane, tj. procesowi utleniania
jakiegoś atomu (zwiększeniu jego stopnia utlenienia), zawsze towarzyszy proces redukcji innego atomu
(zmniejszenia jego stopnia utlenienia). Stopniem utlenienia nazywamy liczbę elektronów, związanych z atomem
danego pierwiastka w związku chemicznym, które stanowią nadmiar lub niedomiar elektronów w stosunku do
liczby atomowej tego pierwiastka. W jednoatomowych jonach nadmiar elektronów nazywamy ujemnym
stopniem utlenienia, niedomiar – dodatnim stopniem utlenienia. Ponadto, wszystkie pierwiastki w stanie wolnym
(atomowym bądź cząsteczkowym), mają stopień utlenienia równy zeru. Jednak w jonach kompleksowych lub w
związkach cząsteczkowych stopień utlenienia musi być obliczony z ładunków jonowych i stopni utlenienia
innych, obecnych w danym związku, pierwiastków. W celu ułatwienia takich obliczeń należy zwrócić uwagę na
fakt, iż w związkach pewna liczba pierwiastków charakteryzuje się zawsze tylko jednym stopniem utlenienia,
różnym od zera, np.:
• tlen ma stopień utlenienia –2 (z wyjątkiem nadtlenków)
• wodór ma stopień utlenienia +1 (z wyjątkiem wodorków)
• metale alkaliczne (litowce) mają stopień utlenienia +1
• metale ziem alkalicznych (berylowce) mają stopień utleniania +2
Korzystając z faktu, że stopień utlenienia obojętnej cząsteczki wynosi zero, a jonu kompleksowego jest z kolei
równy jego wartościowości, można obliczyć stopnie utlenienia dowolnych atomów w cząsteczce. Pamiętać
należy o możliwości występowania w cząsteczce tego samego pierwiastka na dwu różnych stopniach utlenienia
(np.: w jonie tiosiarczanowym S2O32- atomy siarki występują na stopniach utlenienia –2 i +6).
Każda reakcja utleniania-redukcji może być zapisana w formie dwóch reakcji połowicznych
(połówkowych), z których jedna przedstawia proces utleniania, druga redukcji. Zapis taki pozwala w łatwy
sposób znaleźć współczynniki stechiometryczne, mnożąc oba równania połówkowe przez czynniki prowadzące
do zbilansowania ilości wymienianych elektronów (ilość elektronów oddawanych w procesie redukcji musi być
równa ilości elektronów pobieranych w procesie utlenienia).
5.1.2 Potencjały normalne utleniania-redukcji

Często potrzebujemy informacji o zdolnościach oksydacyjno-redukcyjnych dwu substancji. Potrzebny jest zatem
parametr pozwalający określić i porównywać moc utleniającą (redukującą) substancji. Nie jest możliwe
określenie bezwzględnej tendencji do utleniania (redukcji), łatwo jednakże możemy określić względną zdolność
do ulegania tego typu reakcjom. Normalny potencjał utleniania-redukcji jest wartością różnicy potencjałów
elektrycznych standardowego półogniwa, w którym zachodzi interesujący nas proces utleniania-redukcji,
względem standardowej elektrody wodorowej. Połowiczne reakcja redukcji ma ten sam, co do wartości,
potencjał normalny co analogiczne reakcja utleniania, lecz różny co do znaku. Szeregiem elektrochemicznym
metali nazywamy tablicę potencjałów normalnych, zestawionych w kolejności malejących wartości E0,
ograniczających się do metali i wodoru.
Wartość potencjału utleniania-redukcji w oczywisty sposób zależy od stężenia i temperatury. Wartości
potencjałów normalnych odnoszą się do 298 K i stężeń (aktywności) substancji utleniającej (redukującej)
wynoszących 1 M. Potencjał dla układu w innej temperaturze i przy innych stężeniach reagentów obliczamy z
równania:
RT a prod
E = E0 − ln
nF asubstr
gdzie E0 – potencjał normalny, R – stała gazowa, T – temperatura, F – stała Faradaya, a – aktywności substratów
lub produktów, n – ilość elektronów wymienianych w reakcji utleniania (redukcji).
Wartości potencjałów normalnych pozwalają przewidzieć kierunek reakcji utleniania-redukcji.
• Porównując dwie reakcje połówkowe (1 i 2) o potencjałach normalnych E01 i E02 możemy
stwierdzić, że jeśli Eo1>Eo2 to postać utleniona z równania 2 będzie utleniała postać zredukowaną z
61
równania 1 a jeśli Eo2>Eo1, to postać utleniona z równania 1 będzie utleniała postać zredukowaną z
równania 2. Dla zobrazowania tych zależności rozpatrzmy następujące połowiczne procesy
utleniania-redukcji:
+2e- o
Sn4+ Sn2+ ESn4+/Sn2+ = + 0,14 V (A)
+e- o
Fe3+ Fe2+ EFe3+/Fe2+ = + 0,75 V (B)
Wartość potencjału normalnego dla reakcji (A) jest niższa niż w przypadku reakcji (B).
Wnioskować możemy zatem, że postać utleniona z równania (B) (jony Fe3+) będą utleniać postać
zredukowaną występującą w równaniu (A) (jony Sn2+). Równanie ogólne procesu przyjmie zatem
postać:
2Fe3+ + Sn2+ 2Fe2+ + Sn4+
co jest zgodne z wynikiem eksperymentalnym; reakcja odwrotna nie zachodzi.
• Suma potencjałów normalnych obu reakcji połówkowych, w przypadku reakcji samorzutnych,
musi być dodatnia, jeśli jest ujemna to zachodzi reakcja w kierunku przeciwnym, o ile przebiegu
reakcji nie wymusi się dostarczając energię z zewnątrz.
5.1.3 Stałe równowagi reakcji utleniania-redukcji

W stanie równowagi reakcji utleniania-redukcji potencjały wyliczone dla obu procesów połówkowych muszą
być równe. Otrzymujemy zatem:
E1 = E2
1
RT a prod
E1 = E10 + ln 1
n1 F asubst
2
RT a prod
E2 = E20 + ln 2
n2 F asubst
a 2prod a1subst
K= 2
asubst a1prod
lg K =
(E 0
1 )
− E20 n1n2
0,059
Wartości K dla reakcji utleniania-redukcji są na ogół bardzo duże i wynoszą zazwyczaj 1020 – 1080, co świadczy
o praktycznie całkowitym przesunięciu równowagi w kierunku produktów. Wartości stałych równowagi
wskazują na to, że reakcje te przebiegają w kierunku tworzenia słabszych utleniaczy i reduktorów z
mocniejszych. Reakcje utleniania-redukcji mogą być odwracalne jedynie w przypadku, jeśli wartości
potencjałów normalnych obu reakcji połówkowych są zbliżone.
Na potencjał utleniania-redukcji duży wpływ mają procesy kompleksowania oraz wytrącania osadów,
którym ulega jedna z form (utleniona bądź zredukowana) układu. Na przykład, jony Fe3+ tworzą trwałe
kompleksy fluorkowe, FeF63-, dlatego dodatek fluorków do roztworu zawierającego jony żelaza(II) i (III),
zmniejsza znacznie zawartość jonów Fe3+, co powoduje znaczne obniżenie potencjału utleniającego układu
Fe3+/Fe2+. Obniżenie to jest tak duże, że łatwo przebiegająca w zwykłych warunkach reakcja utleniania jonów I-
jonami żelaza(III) może być zahamowana.
Przykładem wpływu procesów strącania na potencjał utleniania-redukcji może być reakcja jonów miedzi(II) z
jonami jodkowymi przebiegająca zgodnie z równaniem:
2 Cu2+ + 4 I- 2 CuI + I2
Normalny potencjał utleniania-redukcji układu Cu2+/Cu+ wynosi 0,17 V, natomiast potencjał normalny układu
I2/2I- wynosi 0,53 V. Należało by zatem oczekiwać, że jony miedzi(I) powinny być utleniane przez jod do
miedzi(II). Reakcja przebiega jednak w odwrotnym kierunku, czego przyczyną jest bardzo mała rozpuszczalność
jodku miedzi(I) w wodzie.
62
Iloczyn rozpuszczalności CuI wynosi 10-12, zatem stężenie jonów Cu+ w 0,1 M roztworze jodku potasu wyniesie:
[Cu ] = K [(ICuI] ) = 100,1

−12
+ s
−
= 10 −11 M
Wobec tak niewielkiego stężenie potencjał utleniania-redukcji układu Cu2+/Cu+ wyniesie:
RT [red ] 0,059 0,1
E = E0 + ln = −0,17 + lg −11 = 0,76 V
nF [ox] 1 10
Dzięki takiemu wzrostowi potencjału jony Cu2+ utleniają jony jodkowe do jodu.
W przypadku gdy w reakcji biorą udział jony H+ lub OH- na przebieg reakcji utleniania-redukcji duży wpływ ma
pH roztworu. Na przykład, reakcja redukcji jonów nadmanganianowych(VII) w środowisku kwaśnym ma
postać:
MnO4- + 8 H+ + 5 e- Mn2+ + 4 H2O
równanie na potencjał wygląda zatem następująco:
E=E +
[
0,059 MnO4− H + ][ ] 8
= E 0 + 0,096 pH +
[
0,059 MnO4− ]
[ ] [ ]
0
lg lg
5 Mn 2+ 5 Mn 2+
Widzimy zatem, iż potencjał normalny jest funkcją pH, i maleje liniowo wraz z jego wzrostem.
5.1.4 Wskaźniki red-ox (utleniania-redukcji)

Wskaźnikami utleniania-redukcji nazywamy substancje barwne które tworzą układy utleniająco-redukujące,
przy czym barwa utleniona wskaźnika (InOx) ma inne zabarwienie niż zredukowana (InRed). Układ utlenianiacz-
reduktor utworzony przez wskaźnik ma potencjał określony wzorem:
InOx + ne- InRed
E = E In0 +
RT
ln
[InOx ]
nF [InRe d ]
przy czym E0In określa potencjał przy którym [InOx] = [InRed]. Brawa wskaźnika zależy od stężeń postaci
utlenionej i zredukowanej. Podobnie jak w przypadku wskaźników alkacymetrycznych, zabarwienie pochodzące
tylko od jednej z form obserwuje się w przypadku gdy stężenie tej formy jest ponad dziesięciokrotnie większe
niż drugiej, co prowadzi do wniosku, że zakres zmiany barwy wskaźnika red-ox opisuje zależność:
0,059
E = E In0 ±
n
Przykładem przemian chemicznych towarzyszących zmianom barwy wskaźników red-ox mogą być reakcje
difenylobenzydyny w środowisku utleniającym, która przy potencjale utleniania-redukcji wynoszącym 0,76 V z
formy bezbarwnej przechodzi w intensywnie fioletową.
ox
N N N N
H H red
63
64
5.2 Reakcje utleniania-redukcji – część eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie z pojęciem reakcji utleniania-redukcji i układaniem równań chemicznych dla tych procesów.
Pojęcie utleniania i redukcji, utleniacz, reduktor, stopień utlenienia, potencjał normalny, szereg
elektrochemiczny, stała równowagi reakcji utleniania-redukcji, wskaźniki red-ox, układanie równań w reakcjach
utleniania-redukcji.
ODCZYNNIKI
1M Cr(NO3)3 Na2SO3 MnSO4

2M NaOH K3Fe(CN)6 rozcieńczony KOH
1M NaOH 0,01 M NaOH Cu drut
10% H2O2 0,1 M CH3COOH skrobia
0,5 M K2CrO4 (NH4)2S2O8 glukoza
0,5 M Fe(NO3)3 CuCl2 NaOH
1 M Mn(NO3)2 Zn pył indygokarmin
2 M HNO3 KIO3 błękit metylenowy 0,5%
0,1 M AgNO3 NaCl agar
1 M FeSO4 H2SO4 stęż. drut miedziany
1 M H2SO4 HNO3 stęż. folia aluminiowa
0,2 M KMnO4 kwas malonowy
UWAGA: Wodorotlenek sodu i potasu, nadtlenek wodoru oraz stężone kwasy: solny, siarkowy(VI) i
azotowy są silnie żrące. Pracując z nimi obowiązuje stosowanie rękawic ochronnych i okularów. Roztwory
azotanu srebra, indygokarminu oraz błękitu metylenowego są silnie plamiące.
Przygotować:
50 cm3 5 % roztworu CuCl2

50 cm3 5% roztworu ZnCl2
OPIS ĆWICZENIA
a. Barwne reakcje utleniania-redukcji
Utlenianie Cr(III) do Cr(VI)

Do probówki z 2 ml 1 M roztworem azotanu chromu(III) dodawaj powoli 2 M roztwór NaOH, aż do
rozpuszczenia strącającego się początkowo wodorotlenku chromu(III), po czym dodaj około 1 ml 10% roztworu
nadtlenku wodoru i ogrzewaj do zmiany barwy z zielonej, pochodzącej od jonów Cr3+ na żółtą (jony CrO42-).
Redukcja Cr(VI) do Cr(III).

Do 2 ml 0,5 M roztworu chromianu potasu dodaj 0,5 ml 1M roztworu kwasu siarkowego a następnie
szczyptę siarczanu(IV) sodu. Zaobserwuj zmianę barwy.
Utlenianie Fe(II) do Fe(III)

Do 1 ml 0,5 M roztworu Fe(NO3)2 dodaj 0,5 ml 2 M roztworu NaOH, a następnie 0,5 ml 10% roztworu
nadtlenku wodoru.
Utlenianie Mn(II) do Mn(VII).

Do 0,5 ml 1 M roztworu azotanu manganu(II) dodaj roztwór sporządzony ze szczypty nadsiarczanu
amonu, 2 ml wody, 1 ml 2 M kwasu azotowego i 1 ml 0,1 M roztworu azotanu srebra. Tak sporządzony roztwór
ogrzać.
65
Redukcja Mn(VII) do Mn(II)
Do 1M roztworu FeSO4 zakwaszonego kilkoma kroplami 1 M kwasu siarkowego dodawaj kroplami 0.2 M
roztwór nadmanganianu potasu. Obserwuj zmiany barwy.
b. Redukcja Cu2+ do Cu0
Umieść w zlewce 50 cm3 5 % roztworu CuCl2. Wsyp małymi porcjami 3 g pyłu cynkowego. Zaobserwuj
zachodzące zmiany. Następnie do zlewki zawierającej 50 cm3 5% roztworu chlorku cynku wsyp ok. 3 g miedzi.
Wytłumacz różnice w zachowaniu się zawartości obu zlewek, zapisz równania zachodzących reakcji.
c. Oscylacyjne reakcje utleniania-redukcji
• Roztwór A
3,25 g jodanu(V) potasu i 20,0 cm3 1 M kwasu siarkowego(VI) rozpuścić w 200 cm3 wody destylowanej.
Roztwór kwasu przygotuj przez rozcieńczenie 1,2 cm3 stężonego H2SO4 w 18,8 cm3 wody.
• Roztwór B
2,0 g kwasu malonowego, 3,0 g jednowodnego siarczanu(VI) manganu(II) i 20,0 cm3 1% roztworu skrobi
rozpuścić w 200 cm3 wody destylowanej. Roztwór skrobi przygotuj przez rozpuszczenie 0,2 g skrobi w 5,0 cm3
wrzącej wody i rozcieńczenie do objętości 20,0 cm3.
• Roztwór C
90,0 cm3 30% nadtlenku wodoru rozpuść w 240 cm3 wody destylowanej.
Do zlewki o pojemności 1 dm3 wlej się jednocześnie roztwory A, B i C i mieszaj intensywnie mieszadłem
magnetycznym. Po około 1 minucie rozpoczynają się oscylacje pomiędzy roztworem pomarańczowym a
bezbarwnym. Po około 5 minutach w oscylacjach obok zabarwienia pomarańczowego pojawia się kolor
niebieski.
d. Wskaźniki red-ox
I.
O O
NH SO3H NH SO3H
redukcja
utlenienie
HO3S HN HO3S HN
O O
• Roztwór A
14 g glukozy rozpuścić w 700 cm3 wody destylowanej i ogrzać do 350C.
• Roztwór B
6 g wodorotlenku sodu rozpuścić w 200 cm3 wody destylowanej i ogrzać do 350C.
Zlewkę o pojemności 2 dm3 napełnij roztworem glukozy, dodaj 0,04 g indygokarminu a następnie wlej roztwór
B. Zawartość zlewki przybiera zielony kolor. Po krótkim czasie barwa zmienia się przez czerwoną do
złotożółtej. Jeśli żółty roztwór przelejemy do drugiej zlewki z wysokości co najmniej 60 cm jego kolor zmieni
się z powrotem na zielony a następnie na czerwony i złotożółty. Pokaz ten można powtórzyć kilkakrotnie.
UWAGA: Roztwór musi mieć temperaturę ok. 350C, w przeciwnym wypadku reakcja nie zajdzie.
II.
(H3C)2N S N(CH3)2 (H3C)2N S N(CH3)2
redukcja
Cl + H2 + HCl
utlenienie
N N
H
Do kolby stożkowej z korkiem szlifowanym o pojemności 500 cm3 wlej się roztwór 15 g KOH oraz 5 g glukozy
w 250 cm3 wody destylowanej. Następnie dodaj 1 kroplę 0,5% roztworu błękitu metylowego. Kolbę zatkaj
korkiem. Niebieski roztwór staje się stopniowo bezbarwny. Po wstrząśnięciu ponownie pojawia się niebieska
barwa. Cykl można powtarzać aż do 10 godzin pod warunkiem okresowego otwierania kolby w celu
dopuszczenia do niej tlenu. (UWAGA: Roztwory wodorotlenków rozpuszczają powoli szkło, powodując
66
„zapiekanie się” szlifów i uniemożliwiając w ten sposób otwarcie naczyń laboratoryjnych, dlatego po
zakończeniu eksperymentu umyj szkło dokładnie wodą!)
e. Wpływ pH na przebieg reakcji utleniania-redukcji
Do trzech probówek wlej po 1 cm3 0,2 M roztworu nadmanganianu potasu a następnie do pierwszej
probówki wlej kilka kropli 1M roztworu H2SO4 zaś do drugiej kilka kropli 1M roztworu NaOH. Po wymieszaniu
zawartości każdej probówki wkraplaj powoli 10% nadtlenek wodoru (UWAGA: Mieszanina może się silnie
pienić!). Zaobserwuj zmiany w przebiegu i produktach reakcji. Zapisz równania zachodzących procesów.
f. Korozja
Przygotuj trzy stalowe, częściowo rozprostowane spinacze biurowe. Jeden z nich owiń w połowie
długości skrawkiem folii aluminiowej, drugi odcinkiem nieizolowanego drutu miedzianego.
W zlewce o pojemności 250 cm3 umieść 1 g chlorku sodu, kilka kropli roztworu fenoloftaleiny i kilka
kropli roztworu K3Fe(CN)6. Dodaj 50 cm3 wody, roztwór ogrzej do wrzenia a następnie wsyp 0,5 g agaru i
mieszaj do całkowitego rozpuszczenia. Mieszając dodawaj kroplami 0,01 M roztwór NaOH do wystąpienia
blado różowego zabarwienia roztworu a następnie wkraplaj 0,1 M roztwór kwasu octowego do zaniku barwy
(UWAGA: Nie można dodać za dużo kwasu octowego!). Roztwór przelej do szlaki Petriego i umieść w nim
spinacze. Po 2-3 godzinach zaobserwuj zmiany. Wytłumacz różnice w wyglądzie otoczenia spinaczy.
g. Wpływ kompleksowania na reakcje utleniania-redukcji
W małej zlewce zmieszaj 5 cm3 1 M roztworu siarczanu(VI) żelaza(II) i 5 cm3 0,4 M roztworu chlorku
żelaza(III). Mieszaninę podziel na dwie równe części i przenieś do probówek. Do jednej z probówek dodaj
stężony roztwór fluorku sodu (do zaniku barwy pochodzącej od jonów żelaza), do drugiej wlej porównywalną
ilość wody. Następnie do obu próbek wlej po 1 cm3 1M roztworu jodku potasu. Zaobserwuj zmiany i podaj
wyjaśnienie zjawiska wraz z zapisem zachodzących reakcji.
67
68
6 Ćwiczenie 3
6.1 Kinetyka reakcji chemicznych – wstęp teoretyczny
6.1.1 Szybkość reakcji
Kinetyka chemiczna jest nauką zajmującą się badaniem przebiegu reakcji chemicznych w czasie, w
zależności od warunków zewnętrznych (ciśnienie, temperatura, rozpuszczalnik, stężenie reagentów). Miarą
przebiegu reakcji w czasie jest szybkość reakcji zdefiniowana jako zmiana stężenia substratu (produktu) w
jednostce czasu.
dc
v=
dt
Wartość ta jest proporcjonalna do iloczynu stężeń substratów biorących udział w reakcji (wzrost stężenia
powoduje wzrost szybkości reakcji)
lA + mB + nC + ... produkty
dc
v=− = [ A]L * [ B ]M * [C ] N * ...
dt
Jak można przypuszczać w miarę postępu reakcji, w związku ze spadkiem stężenia substratów, szybkość procesu
maleje.
6.1.2 Rzędowość i cząsteczkowość reakcji

Sumę wykładników potęg, r = L+M+N+..., w zapisanym powyżej równaniu kinetycznym, nazywamy
rzędowością reakcji chemicznej. Pamiętać należy iż wartości L, M, N... są wartościami wyznaczonymi
eksperymentalnie i są zazwyczaj różne od współczynników stechiometrycznych l, m, n... równania reakcji.
Cząsteczkowość reakcji wskazuje z kolei, ile cząsteczek bierze udział w najwolniejszym, determinującym
szybkość reakcji, etapie. Cząsteczkowość reakcji przyjmuje oczywiście wartości całkowite, nie większe niż 3
(jednoczesne spotkanie więcej niż trzech cząsteczek, prowadzące do zajścia reakcji jest mało prawdopodobne).
Wynika z tego, iż reakcje, w których po stronie substratów biorą udział więcej niż trzy cząsteczki, przebiegają w
co najmniej dwóch etapach.
6.1.3 Równania kinetyczne

Reakcją pierwszego rzędu nazywamy proces samorzutnego rozkładu lub przemiany cząsteczek
(atomów) jednego rodzaju:
A produkty
Przykładem mogą być reakcje dysocjacji termicznej cząsteczek, rozpad promieniotwórczy, samoistne
procesy izomeryzacji i inne. Równanie kinetyczne dla tego typu procesów wyprowadzić można w następujący
sposób:
69
dc
v=− = kc
dt
dc
− = kdt
c
c t
dc
−∫ = k ∫ dt
c0
c 0
ln c0 − ln c = k (t − 0)
c0
ln = kt
c
c0
k = t −1 ln
c
gdzie c0 oznacza stężenie początkowe substratu, c – stężenie substratu po czasie t.
Dla reakcji pierwszego rzędu definiuje się często okres półtrwania T1/2, określony jako czas w którym reakcji
ulegnie połowa substancji:
c = 0,5 * c0
c0
T1/ 2 = k −1 ln = k −1 ln 2 = 0,69 * k −1
0,5 * c0
Okres półtrwania nie zależy zatem od początkowego stężenia substratu.
Równie proste równania kinetyczne otrzymujemy dla reakcji drugiego rzędu.
A+B produkty
Jeśli stężenia substratów A i B są równe uzyskujemy:
dc
v=− = kc AcB
dt
c A = cB
dc
− = kc 2
dt
dc
− = kdt
c2
c t
dc
−∫ = k ∫ dt
c0
c2 0
 1 1
−  −  = k (t − 0 )
 c0 c 
1 1 
k = t −1  − 
 c c0 
Powyższe rozważania prawidłowe są wyłącznie dla reakcji nieodwracalnych, tzn. biegnących w jednym
kierunku aż do wyczerpania substratów. W przypadku reakcji odwracalnych ustala się stan równowagi określony
przez stosunek stałych szybkości obu biegnących w przeciwnych kierunkach procesów. W tym wypadku
powyższe równania kinetyczne opisują poprawnie wyłącznie początkowy przebieg reakcji odwracalnej.
70
6.1.4 Czynniki wpływające na szybkość reakcji
Różne reakcje chemiczne przebiegają z różnymi szybkościami. Najszybsze są reakcje przeniesienia
elektronu, protonu oraz procesy zachodzące między jonami; do reakcji wolnych należy wiele procesów
organicznych, takich jak np.: hydroliza, estryfikacja lub nitrowanie. Przykłady te świadczą o dużym wpływie
charakteru i budowy reagujących ze sobą substancji na szybkość reakcji. Jednocześnie, te same substancje mogę
reagować ze sobą z różną szybkością, zależnie od warunków. W przypadku reakcji konkurencyjnych, zmiana
warunków, a co za tym idzie, zmiana szybkości reakcji, prowadzić może do zmiany kierunku przebiegu reakcji
(np.: etanol w reakcji ze stężonym kwasem siarkowym w 1200C tworzy eter dietylowy, w 1600C, eliminuje
cząsteczkę wody, tworzyć eten). Istnieje szereg czynników determinujących szybkość reakcji chemicznej.
Przede wszystkim wymienić należy stężenie, temperaturę, ciśnienie, środowisko i katalizatory. Niektóre reakcje
są wrażliwe na bardziej specyficzne czynniki, takie jak promieniowanie elektromagnetyczne (głównie z zakresu
mikrofalowego i świata ultrafioletowego bądź widzialnego), promieniowanie jonizujące czy ultradźwięki.
6.1.4.1 Wpływ temperatury

Na ogół podwyższenie temperatury w znacznym stopniu zwiększa szybkość reakcji. Wpływ zmiany
temperatury określany jest przez współczynnik temperaturowy, charakteryzujący przyśpieszenie reakcji po
podgrzaniu układu o 10 K.
kT +10
α=
kT
Dla większości reakcji wartość α zawiera się pomiędzy 2 a 4, a dla wielu procesów biochemicznych wynosi
około 7.
Zależność wartości k od temperatury określa równanie Arrheniusa:
Ea
−
k = Ae RT
gdzie A i Ea oznaczają stałe, przy czym Ea ma wymiar energii i nazywana jest energią molową aktywacji reakcji,
A natomiast jest współczynnikiem proporcjonalności, nazywanym współczynnikiem częstości.
6.1.4.2 Wpływ stężenia

Wpływ stężenia na szybkość reakcji był tematem poprzednich punktów, dlatego ograniczymy się tylko
do podsumowania dotychczasowych rozważań:
szybkość reakcji chemicznej zależy od najwolniejszego jej etapu, czyli procesu elementarnego
szybkość procesu elementarnego jest proporcjonalna do iloczynu stężeń substratów uczestniczących w tym
procesie podniesionych do odpowiednich potęg, wynikających z liczby cząsteczek danego związku
biorących udział w tym procesie:
• dla reakcji pierwszego rzędu v=kc
• dla reakcji drugiego rzędu v=kc2 lub v=kcAcB
• dla reakcji trzeciego rzędu v=kc3 lub v=kcAcB2 lub v=kcAcBcC
6.1.4.3 Wpływ ciśnienia

W przypadku reakcji w fazie gazowej wpływ ciśnienia jest analogiczny do wpływu stężenia na
szybkość reakcji w fazie ciekłej (stężenia w równaniach kinetycznych zastąpić należy wartościami ciśnień
cząstkowych odpowiednich reagentów gazowych). Wpływ ciśnienia na reakcje w fazie ciekłej jest
zaniedbywalny.
6.1.4.4 Wpływ środowiska

W fazie ciekłej cząsteczki reagujące ze sobą, jak również kompleks aktywny oraz produkty, są otoczone
molekułami rozpuszczalnika (solwatacja). Pomiędzy rozpuszczalnikiem a rozpuszczoną substancją mają miejsce
różnorakiego typu oddziaływania, takie jak wiązania wodorowe, wiązania Van der Waalsa, oddziaływania
hydrofobowe, jonowe, elektrostatyczne, przeniesienia ładunku i inne. Oczywiście oddziaływania z różnymi
rozpuszczalnikami mogą mieć odmienny charakter. Efektem tego jest różna reaktywność i szybkość reakcji w
różnych mediach reakcyjnych. Szybkości reakcji mogą zmienić się, na skutek zmiany środowiska, o kilka
rzędów wielkości. Ogólnie stwierdzić można że rozpuszczalniki polarne ułatwiają dysocjację wiązań i
71
zwiększają szybkość reakcji między cząsteczkami związków polarnych. Jeśli natomiast reagenty i produkty są
molekułami niepolarnymi, reakcje biegną szybciej w środowisku niepolarnym.
6.1.5 Teoretyczne podstawy kinetyki

6.1.5.1 Teoria zderzeń
Arrhenius, korzystając z kinetycznej teorii gazów, stworzył model mechanizmów oraz kinetyki reakcji w fazie
gazowej. Według tej teorii reakcji ulegają tylko te cząsteczki których suma energii kinetycznej ruchu
translacyjnego jest większa od pewnej minimalnej, charakterystycznej dla każdej reakcji i środowiska, wartości
zwanej energią aktywacji, niezbędnej do rozerwania starych i wytworzenia nowego wiązania chemicznego.
Aktywację osiągnąć można nie tylko poprzez wzrost temperatury (wzrost szybkości cząsteczek na skutek
ruchów termicznych), ale również przez pochłonięcie kwantów promieniowania elektromagnetycznego lub
zderzenia z innymi, wysokoenergetycznymi cząstkami (np.: neutronami, elektronami, cząstkami α). Oprócz
niezbędnej energii, potrzebnej do zajścia reakcji, cząsteczki muszą mieć właściwą orientację, tak, aby zderzenie
mogło prowadzić do rozerwania i/lub wytworzenia wiązania. Parametry steryczne, determinowane przez
geometrię reagujących ze sobą molekuł, składają się na współczynniki częstości – A, w równaniu Arrheniusa.
Współczynnik ten zawiera w sobie również poprawką na fakt, że nie wszystkie zderzenia o energii wyższej niż
Ea i poprawnej orientacji przestrzennej prowadzą do produktów, możliwe wszakże jest rozdysocjowanie
wytworzonego kompleksu reagujących molekuł na substraty. Rozszerzeniem teorii Arrheniusa jest model
Lindemana, tłumaczący, w oparciu o teorię zderzeń, reakcje pierwszorzędowe. Zakłada on, że skutkiem
zderzenia jest nie tylko zmiana energii kinetycznej, ale także elektronowej, oscylacyjnej i rotacyjnej cząsteczki.
Molekuła wzbudzona ulega po pewnym czasie spontanicznemu rozkładowi wg mechanizmu
jednocząsteczkowego lub przekazuje, na skutek zderzeń, nadmiar energii innym cząsteczkom. Zależność ułamka
molowego cząsteczek w zależności od ich prędkości, a zatem energii, w różnych temperaturach prezentuje
wykres.
T3
T 1 >T 2 >T 3
c z ą s te c z e k o da ne j prę dkoś c i
Uła m e k m olowy
T2
T1
0
0 P rę dkoś ć c z ą s te c z e k ga z u
6.1.5.2 Teoria stanu przejściowego

Teoria stanów przejściowych, opracowana przez Eyringa i Hinshelwooda jest zmodyfikowaną, dostosowaną do
opisu fazy ciekłej, teorią Arrheniusa. Podobnie jak poprzednia uwzględnia konieczność pokonania przez
cząsteczki bariery energetycznej jaką jest energia aktywacji. Ogólny zapis reakcji pomiędzy cząsteczkami
substancji A i B zapisać można jako:
A+B AB produkty
Zderzenie efektywne (pod względem sterycznym i energetycznym) prowadzi do powstania kompleksu
aktywnego AB#, który może ulec przekształceniu w produkty lub z powrotem w substraty. Współczynnik
72
steryczny z równań teorii zderzeń nosi w tym przypadku miano entropii aktywacji (w teorii Eyringa wiąże się z
termodynamicznymi właściwościami cząsteczek). Wartość stałej szybkości określona jest wzorem:
ε i#
−
∑e kT
k= i
ε sj
−
∏∑
i j
i e kT
gdzie ε# oznacza energię kompleksu aktywnego, εs – energię kolejnych substratów.

Zależność energii układu od postępu reakcji przedstawić można w formie znanego wykresu:
substraty kompleks produkty

aktywny
e
n
AB
e
r E
g
i
a A+B
Q
produkty
postep reakcji
'
Widoczną, słabą stroną teorii Eyringa, jest to, że wymaga ona, aby kompleks aktywny znajdował się w
równowadze termodynamicznej z substratami reakcji. Dla wielu procesów, szczególnie takich, w których udział
biorą wolne rodniki lub molekuły elektronowo wzbudzone, warunek ten jest nie do spełnienia.
73
74
6.2 Kinetyka reakcji chemicznych – część eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie ze pojęciem szybkości reakcji i warunkującymi ją czynnikami.
Szybkość reakcji chemicznej, energia aktywacji, czynniki wpływające na szybkość reakcji, równanie
Arrheniusa, teoria zderzeń oraz stanu przejściowego, rząd i cząsteczkowość reakcji, stała szybkości, równania
kinetyczne dla reakcji I i II rzędu.
ODCZYNNIKI
0,5 M Na2S2O3 skrobia 0,5M KI

1M H2SO4 (NH4)2S2O8 5% HgCl2
KI FeSO4
Na2S2O3 CuSO4
UWAGA: Stężony kwas siarkowy(VI) jest silnie żrący. Pracując z nim obowiązuje stosowanie rękawic
ochronnych i okularów. Sole rtęci są silnie toksyczne.
Przygotować:
10 cm3 5% roztworu skrobi (odważoną ilość skrobi rozpuścić w 2 cm3 wrzącej wody, następnie rozcieńczyć do
objętości 10 cm3)
OPIS ĆWICZENIA
a. Wpływ stężenia na szybkość reakcji
W pięciu małych probówkach umieść kolejno:
2 krople 0,5 M Na2S2O3 i 8 kropli wody

4 krople 0,5 M Na2S2O3 i 6 kropli wody
6 kropli 0,5 M Na2S2O3 i 4 kropli wody
8 kropli 0,5 M Na2S2O3 i 2 kropli wody
10 kropli 0,5 M Na2S2O3
Przygotuj stoper lub zegarek z sekundnikiem i do każdej probówki dodaj 2 krople 1 M roztworu kwasu
siarkowego. Zmierz czas po którym pojawi się zmętnienie.
b. Wpływ temperatury, stężenia i katalizatora na szybkość reakcji
W kolbie miarowej o pojemności 250 cm3 umieść 12,5 g jodku potasu, 22 mg tiosiarczanu sodu oraz
dodaj 2,5 cm3 5 % roztworu skrobi. Całość rozpuść w niewielkiej ilości wody destylowanej i rozcieńcz do
kreski. Do drugiej kolby (250 ml) nasyp 1,25 g nadsiarczanu amonu (UWAGA: Przed wykonaniem ćwiczenia
skonsultuj z prowadzącym wielkość naważki, gdyż ze względu na nietrwałość nadsiarczanu amonu jej
wielkość może ulec zwiększeniu), dodaj małą ilość wody destylowanej a następnie, po rozpuszczeniu soli,
dopełnij do kreski. Katalizator przygotuj przez rozpuszczenie w jednej probówce niewielkiej ilości siarczanu(VI)
żelaza(II), w drugiej zaś odrobiny siarczanu(VI) miedzi(II) w niewielkich ilościach wody destylowanej a
następnie zmieszanie obu roztworów.
Wlej do zlewki po 100 cm3 wody destylowanej i dodaj, intensywnie mieszając, po 20 cm3 roztworów
KI i nadsiarczanu amonu, zmierz czas po którym pojawi się barwa. Następnie wykonaj pomiar używając 120
cm3 wody, 10 cm3 roztworu KI i 10 cm3 roztworu nadsiarczanu amonu oraz dla trzeciej próby, złożonej z 10 cm3
KI, 110 cm3 wody destylowanej i 20 cm3 (NH4)2S2O8.
75
Do czterech probówek wlej po 10 ml wody i 1 cm3 roztworu jodku potasu. W kolejnych czterech
umieść po 10 ml wody i 1 cm3 roztworu nadsiarczanu amonu. Pierwszą parę probówek umieść w łaźni wodnej o
temperaturze 200C. Po wyrównaniu temperatury zmieszaj zawartość obu probówek i zmierz czas pojawienie się
niebieskiego zabarwienia. Analogiczny pomiar przeprowadź dla roztworów o temperaturze 30, 40 i 500C.
Do 20 cm3 roztworu nadsiarczanu amonu dodaj kroplę roztworu katalizatora, 100 cm3 wody
destylowanej a następnie 20 cm3 roztworu KI. Zmierz czas zmiany barwy.
c. Wpływ szybkości reakcji na rodzaj produktu
Przygotuj dwie czyste probówki. Do pierwszej wlej 4 cm3 5% roztworu chlorku rtęci(II), do drugiej 4
3
cm wody i pięć kropli roztworu HgCl2. Zawartość drugiej probówki dokładnie wymieszaj. Następnie, nie
mieszając zawartości, do obu probówek wlej po 5 kropli 0,5M roztworu jodku potasu. Co obserwujesz? Jak
zmienia się zawartość probówek po kilku minutach?
76
7 Ćwiczenie 4
7.1 Termodynamika i statyka chemiczna – wstęp teoretyczny
7.1.1 Pierwsza zasada termodynamiki. Entalpia tworzenia.
Pierwsza zasada termodynamiki głosi, iż suma wszystkich zmian energii zachodzących podczas dowolnego
procesu musi być równa zero. Energię zawartą w układzie charakteryzują dwie funkcje. Pierwszą, bardziej
podstawową, nazywamy energią wewnętrzną U. Składają się na nią takie rodzaje energii jak energia jądrowa,
kinetyczna cząsteczek, oscylacyjna, elektronowa i inne.
∆U = ∆Q + w
Jeśli proces fizykochemiczny przebiega bez wymiany ciepła z otoczeniem, mówimy, że jest to proces
adiabatyczny. W tym wypadku zmiana ciepła (∆Q) układu jest równa zero, zatem zmiana energii wewnętrznej
wynika wyłącznie z pracy wykonanej na, lub wykonanej przez, układ (∆U=w). W procesie izochorycznym (przy
stałej objętości) zmiana energii wewnętrznej zależy wyłącznie od ciepła pobranego lub oddanego przez układ,
gdyż iloczyn p∆V jest równy zero. Procesem izobarycznym nazywamy proces zachodzący pod stałym
ciśnieniem. Ciepło reakcji pod stałym ciśnieniem wynosi:
w = − p∆V
Q p = ∆U + p∆V = U 2 − U1 + p (V2 − V1 ) = (U 2 + pV2 ) − (U 2 + pV2 )
Sumę energii wewnętrznej i iloczynu objętości i ciśnienia układu nazywamy entalpią H. Jest to druga ze
wspomnianych na wstępie, funkcji charakteryzujących energię w układzie. Ciepło procesu fizykochemicznego
pod stałym ciśnieniem jest równe zmianie entalpii.
H = U + pV
Q p = H 2 − H1 = ∆H
Entalpia, podobnie jak energia wewnętrzna, jest funkcją stanu, co oznacza, iż jej wielkość zależy tylko
od stanu układu, a nie od drogi, na której układ ów stan osiągnął. Zmiany entalpii dla procesów izobarycznych
zależą wyłącznie od zmian energii wewnętrznej i pracy objętościowej którą wykonał układ.
∆H = ∆U + p∆V
Dla reakcji w fazie stałej lub ciekłej zmiany ciśnienia i objętości są na ogół zaniedbywalne, zatem dla tych
procesów zmiana entalpii jest równa efektowi cieplnemu reakcji.
Dla procesów egzoenergetycznych (związanych z wydzielaniem ciepła) wartości zmiany entalpii są ujemne, dla
procesów endoenergetycznych (związanych z pobieraniem ciepła), dodatnie. Z rozważań tych wynika, że każda
substancja, w określonej temperaturze i pod określonym ciśnieniem, charakteryzuje się pewną określoną
wartością entalpii. Wyznaczenie tych bezwzględnych wartości jest jednakże niemożliwe, dlatego przyjmuje się
że entalpia wszystkich substancji prostych (pierwiastków), w warunkach standardowych, jest równa zeru.
Zarazem definiuje się standardową entalpię tworzenia (ciepło tworzenia), będącą zmianą entalpii towarzyszącą
syntezie 1 mola związku z substancji prostych. Parametr ten oznacza się najczęściej symbolem ∆Ho298. W
przypadku pierwiastków stan standardowy odnosi się do najtrwalszej, w warunkach standardowych, odmiany
alotropowej substancji prostej (np.: stanem standardowym wodoru jest jego cząsteczka, a nie forma atomowa).
7.1.2 Ciepło reakcji. Prawo Kirchhoffa. Prawo Hessa

Ciepłem właściwym nazywamy energię cieplną potrzebną do podniesienia temperatury 1 g tej substancji o 1 K.
Ciepło molowe to iloczyn masy molowej substancji i jej ciepła właściwego. Ponieważ ciepło nie jest funkcją
stanu, mamy dwa rodzaje ciepła molowego, w zależności od tego, czy ogrzewanie prowadzimy przy stałej
objętości, czy przy stałym ciśnieniu. Wartości te oznaczamy odpowiednio przez Cv i Cp. Dla gazów doskonałych
wartości te są powiązane ze sobą następującym wzorem:
C p − Cv = R
gdzie R oznacza stałą gazową.
Ciepłem reakcji Q, w warunkach standardowych (standardową entalpią reakcji), nazywamy różnicę
pomiędzy standardowy ciepłem tworzenia produktów i substratów reakcji.
∆Q o = (∑ n ∆H )
i
o
i ( tw ) produkty − (∑ n ∆H )
i
o
i ( tw ) substraty
77
gdzie ni – liczba moli i-tego reagenta, biorąca udział w reakcji, ∆Hoi(tw) – ciepło (entalpia) tworzenia tego
reagenta (substratu lub produktu).
Procesy którym towarzyszy wydzielanie energii do otoczenia nazywamy egzoenergetycznymi. W procesach tych
entalpia stanu początkowego jest wyższa niż stanu końcowego (∆H<0). Procesy endoenergetyczne są związane z
pobieraniem energii z otoczenia. Wynika z tego iż entalpia stanu początkowego jest niższa niż stanu końcowego
(∆H>0). W przypadku gdy energia jest wymieniana na sposób cieplny, mówimy o procesach egzo- bądź
endotermicznych. Procesy te mogą mieć charakter chemiczny (reakcja chemiczna) bądź fizyczny (topnienie,
wrzenia, przemiana polimorficzna). Prawo Kirchhoffa opisuje zmianę entalpii standardowej wraz ze zmianami
temperatury:
∆H T = ∆H 298
o
+ C p (T − 298)
Ciepła reakcji można z łatwością obliczyć pod warunkiem że są dostępne wszystkie potrzebne wartości
liczbowe. Obliczenia te prowadzi się w oparciu o prawo Hessa, które głosi że ciepło wydzielone lub pochłonięte
podczas dowolnej reakcji chemicznej jest stałe i nie zależy od tego, czy reakcja ta przebiega jedno- czy
wielostopniowo (nie zależy od drogi reakcji). Pomocne może być także prawo Lavoisiera-Laplace’a, głoszące że
efekt cieplny związany z rozkładem termicznym jakiegoś związku chemicznego jest równy ciepłu wydzielanemu
podczas syntezy tego związku z produktów jego rozkładu.
7.1.3 Druga i trzecia zasada termodynamiki. Entropia.

Z wieloletnich obserwacji przyrody i otaczających nas zjawisk wysnuć można wniosek, że procesy zachodzące
samoistnie (niewymuszone), wiążą się z oddaniem energii do otoczenia (są egzoenergetyczne). Wynika z tego,
że każdy układ dąży do maksymalnego zmniejszenia swej energii, wydzielając ciepło bądź wykonując pracę aż
do osiągnięcia najbardziej trwałego w danych warunkach stanu równowagi. Sformułowanie to, określające
kierunek procesów samorzutnych, chociaż w istocie swojej słuszne, nie wyjaśnia wszystkich spotykanych w
praktyce reakcji chemicznych i może prowadzić do nie zawsze słusznego wniosku, że jeżeli układ nie wykonuje
pracy, to samorzutnie mogą przebiegać tylko reakcje egzotermiczne (hipotezę taką wysunął w XIX w. Francuski
chemik Berthelot, stwierdzając, że miarą powinowactwa chemicznego, czyli „siły pędnej” reakcji samorzutnych,
jest wielkość ciepła wydzielonego w reakcji). Znamy jednakże wiele reakcji i procesów fizykochemicznych,
podczas których dochodzi do pobrania energii z otoczenia a zarazem przebiegają one spontanicznie (np.:
rozpuszczaniu niektórych substancji w wodzie towarzyszy obniżenie temperatury roztworu). Zatem, skoro
wydzielenie energii (spadek entalpii) nie jest warunkiem koniecznym i miarą samorzutnego przebiegu procesów,
musi istnieć inna, bardziej ogólna „siła pędna” reakcji samorzutnych. Siłą tą jest entropia, będąca miarą
nieuporządkowania układu, a co za tym idzie, określająca rozmieszczenie energii w układzie. Zgodnie z
definicją Boltzmana entropia jest funkcją prawdopodobieństwa termodynamicznego, określającego
prawdopodobieństwo znalezienia jakiegoś układu w określonym stanie energetycznym. Zmiana entropii
molowej wiąże się ze zmianami energii wewnętrznej i temperatury:
U 2 − U1 ∆Q
∆S = S 2 − S1 = =
T T
gdzie ∆Q oznacza ilość ciepła pochłoniętego przez układ podczas przejścia ze stanu 1 do 2, przy czym przejście
ma miejsce w temperaturze T. Ponieważ ciepło pochłonięte przez mol substancji podczas ogrzewania od
temperatury zera bezwzględnego do T, jest równe:
T
∆Q = ∫ C p dT
0
zatem całkowita entropia w temperaturze T wyniesie:

T
Cp
S=∫ dT
0 T
Drugą zasadę termodynamiki możemy sformułować na kilka równoważnych sposobów:
1. W układach izolowanych (o stałej energii) procesy samorzutne są nieodwracalne i są związane ze
wzrostem entropii.
2. Całkowita wartość entropii otaczającego nas świata dąży do maksimum.
3. Ciepło nie może samorzutnie przejść od ciała zimniejszego do ciała cieplejszego.
Trzecia zasada termodynamiki, zwana także teorematem cieplnym Nernsta, głosi, że entropia każdej doskonałej
substancji krystalicznej w temperaturze zera bezwzględnego wynosi zero. Podobnie jak w przypadku
standardowej entalpii reakcji, możemy zdefiniować standardową entropię reakcji:
∆S o = (∑ n S )
i
o
i produkty − (∑ n S )
i
o
i substraty
Jak wynika z II zasady termodynamiki, samorzutnie zachodzić będą procesy, dla których ∆S0 jest dodatnie.
78
7.1.4 Entalpia swobodna i energia swobodna
Zarówno zmiany entropii jak i entalpii w procesach izobarycznych lub energii wewnętrznej w procesach
izochorycznych mogą być dodatnie lub ujemne, toteż prawdopodobieństwo przebiegu określonego procesu
będzie zależało od algebraicznej sumy dwóch efektów: od zmiany entalpii (lub energii wewnętrznej, gdy
p=const) oraz zmiany entropii. W wyrażeniu wiążącym oba efekty występuje nie sama entropia, a iloczyn T∆S,
który ma ten sam wymiar co ∆H i ∆U. Zdefiniować zatem możemy dwie nowe funkcje stanu, energię swobodną
(F) i entalpię swobodną (potencjał termodynamiczny, G). Oczywiście, z powodu niemożności bezwzględnego
wyznaczenia H i U, również bezwzględne wartości G i F są poza zasięgiem naszych pomiarów, i ograniczyć się
musimy jedynie do wyznaczania wartości zmian energii i entalpii swobodnej: ∆F i ∆G.
F = U − TS
v = const
∆F = ∆U − T∆S
G = H − TS p = const
∆G = ∆H − T∆S
znak minus przed członem entropowym równań wynika z przeciwnego kierunku zmian ∆S i ∆U (∆H) w
procesach samorzutnych. Ujemne wartości entalpii (energii) swobodnej świadczą o samorzutności procesu,
dodatnie, o tym iż jest to proces nieprawdopodobny (niewykluczony proces wymuszony). Wartość zero
świadczy o tym iż układ znajduje się w stanie równowagi termodynamicznej. Oczywiście zmianę wartości
standardowej entalpii swobodnej obliczyć można z różnicy standardowych entalpii swobodnych produktów i
substratów.
7.1.5 Statyka chemiczna

Statyka chemiczna jest nauką zajmującą się stanami równowagi. Znamy wiele reakcji chemicznych które nie
zachodzą do końca, tj. w układzie zamkniętym po czasie dążącym do nieskończoności, stężenie produktów
pozostaje stałe, lecz występują one obok substratów, które nie uległy całkowitemu przereagowaniu.
Nagromadzone produkty reagują ze sobą, odtwarzając substraty, jednocześnie taka sama ilość substratów
reaguje tworząc produkty. Jak widać zjawiska równowagi dotyczą wyłącznie procesów odwracalnych. W stanie
równowagi stężenia reagentów nie ulegają zmianom w czasie (przy zachowaniu stałych warunków środowiska
reakcji), nie jest to jednak stan spoczynku, lecz stan zrównoważonej aktywności. Dwie przeciwnie skierowane
reakcje przebiegają nadal, lecz ich skutki się niwelują.
Rozpatrzmy reakcję odwracalną:
nA + mB pC + qD
Szybkość reakcji przebiegającej w prawo opisuje równanie:
v1 = k1 [A] [B ]
n m
reakcji odwrotnej:
v2 = k 2 [C ] [D ]
p q
W stanie równowagi szybkości reakcji v1 i v2 są równe, wówczas:

k1 [A] [B ] = k 2 [C ] [D ]
n m p q
Stąd:
[C ]p [D]q =
k1
=K
[A]n [B]m k2
Wyrażenie to określa prawo równowagi chemicznej. Wielkość K, będącą stosunkiem stałych szybkości reakcji
chemicznej oraz stałej szybkości reakcji do niej odwrotnej, nazywamy kinetyczną stałą szybkości reakcji.
Równanie to pozwala sformułować prawo równowagi chemicznej, brzmiące następująco: dla każdej reakcji
odwracalnej w stanie równowagi stosunek iloczynu stężeń molowych produktów tej reakcji i iloczynu stężeń
molowych reagentów, podniesionych do potęg odpowiadających współczynnikom określonym przez zależności
stechiometryczne, jest równy pewnej stałej nazywanej stałą równowagi. W przypadku reakcji w stanie gazowym
we wzorze ma wartość K zamiast stężeń występują ciśnienia cząstkowe.
79
Wpływ zmiany warunków na układ będący w stanie równowagi określa reguła Le Chatelier’a-Braun’a
mówiąca, że każdy układ będący w stanie równowagi poddany jakiemuś oddziaływaniu zewnętrznemu ulega
takim przemianom, które powodują zmniejszenie efektu tego oddziaływania. Jest to tzw. reguła przekory.
Wynika z niej, iż wprowadzenie do układu substratów, a co za tym idzie, zwiększenie ich stężenia, spowoduje
przesunięcie równowagi w prawo (wzrost stężenia produktów). Usunięcie z układu reakcyjnego części
substratów spowoduje z kolei przemianę części produktów w substrat, a co za tym idzie, przesunięcie
równowagi w lewo. W przypadku reakcji egzoenergetycznych, ogrzanie układu spowoduje przesunięcie
równowagi w stronę substratów (pochłonięcie części energii cieplnej), ochłodzenie, wywoła z kolei wzrost
stężenia produktów (a co za tym idzie wydzielenie energii cieplnej). Działanie takie, w stosunku do procesu
endoenergetycznego, wywołają oczywiście efekty przeciwne. Zgodnie z regułą przekory zmiany ciśnienia
wywołują zmianę stanu równowagi w przypadku gdy mamy do czynienia ze zmianą objętości reagentów w toku
reakcji; ma zatem znaczenie wyłącznie w przypadku reakcji w układach w fazie gazowej, w których liczba
cząsteczek po prawej stronie równania jest różna od ilości cząsteczek po jego lewej stronie. Na przykład, jeśli
objętość substratów jest mniejsza od objętości produktów, wówczas wzrost ciśnienia spowoduje przesunięcie
stanu równowagi w lewo (wzrost stężenia substratów spowoduje spadek objętości, co częściowo skompensuje
działanie podwyższonego ciśnienia).
Zależność stałej równowagi opisuje równanie izochory van’t Hoffa, wiążące ze sobą wartości stałej
równowagi reakcji K1 w pewnej temperaturze T1, z wartością stałej równowagi K2 w temperaturze T2:
K1 ∆H D  1 1 
ln =  − 
K2 R  T1 T2 
80
7.2 Statyka chemiczna – część eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie z pojęciem równowagi i czynnikami mającymi wpływ na jej położenie.
Prawo działania mas, reguła przekory, reakcje odwracalne, stała równowagi chemicznej, wpływ czynników
zewnętrznych na położenie stanu równowagi.
ODCZYNNIKI
1% fenoloftaleina FeCl3 HNO3 stęż.

0,1 M AgNO3 KSCN Cu drut
0,2 M KBr KCl mocznik
0,2 M KBrO3 FeSO4 β-cyklodekstryna
0,2 M KI CuSO4
0,2 M KIO3 1M Co(NO3)2
NaOH HCl stęż.
UWAGA: Wodorotlenek sodu, kwas solny oraz azotowy są substancjami silnie żrącymi. Pracując z nim
obowiązuje stosowanie rękawic ochronnych i okularów. Azotan srebra jest substancją plamiącą.
Przygotuj:
50 cm3 10% roztworu KSCN
50 cm3 10% roztworu KCl
50 cm3 10% roztworu FeCl3
100 cm3 1M roztworu mocznika
100 cm3 0,01 M roztworu NaOH (przez rozcieńczenie roztworu 1M)
OPIS ĆWICZENIA
a. Wpływ temperatury na stan równowagi
I.
Zatopioną ampułkę z ditlenkiem azotu umieść w zlewce z wodą w temperaturze pokojowej i lekko
podgrzej (do około 50 stopni). Drugą umieść w zlewce z lodem. Zaobserwuj zmiany. Zapisz równanie reakcji.
UWAGA: Nie ogrzewać ampułki powyżej temperatury wskazanej w ćwiczeniu ze względu na
niebezpieczeństwo eksplozji.
II.
W probówce umieść 5 cm3 nasyconego roztworu β-cyklodekstryny i dodaj 2 krople roztworu
fenoloftaleiny. Po wymieszaniu dodaj 0,5 cm3 0,5 % roztworu NaOH. Obserwuj zmiany barwy mieszaniny
podczas ogrzewania i chłodzenia w łaźni lodowej. β-Cyklodekstryna to cykliczny oligosacharyd posiadający
zdolność do kompleksowania w swoim wnętrzu wielu cząsteczek organicznych. Związana molekuła
fenoloftaleiny nie jest wrażliwa na obecność jonów OH- w roztworze. Po ogrzaniu kompleks rozkłada się a
uwolniona fenoloftaleina zmienia, pod wpływem pH środowiska, barwę. Czy proces kompleksowania
fenoloftaleiny przez cyklodekstrynę jest endo- czy egzoenergetyczny.
III.
Do zlewki nalej ok. 70 cm3 1M roztworu mocznika. Kilka kropli tego roztworu zmieszaj na szkiełku
zegarkowym z kilkoma kroplami AgNO3. Zaobserwuj wynik. Sprawdź pH roztworu mocznika w zlewce
papierkiem uniwersalnym. Następnie ogrzewaj roztwór w zlewce do wrzenia przez 10 min. i ponownie wykonaj
próbę z AgNO3 i pomiar pH, najpierw z gorącym roztworem, a następnie po jego ochłodzeniu. Wytłumacz
zmiany.
81
b. Wpływ zwiększenia stężenia jednego z reagentów
W kolbie umieść 500 cm3 wody destylowanej, 2,5 cm3 10% roztworu chlorku żelaza(III) i 2,5 cm3 10%
roztworu rodanku potasu. Po 100 cm3 tego roztworu rozlewamy do czterech jednakowych kolbek stożkowych.
Następnie do pierwszej dodaj 20 cm3 10% roztworu FeCl3, do drugiej tyle samo 10% roztworu KSCN a do
trzeciej 20 cm3 10% KCl. Czwartą dopełnij 20 ml wody i traktuj jako odnośnik. Zaobserwuj zmiany i zapisz
równania reakcji.
c. Wpływ ciśnienia
Strzykawkę zaopatrz w krótki (15-20 cm) odcinek wężyka polipropylenowego. W probówce umieść ok.
1 g miedzi włóż ją do kolby stożkowej a następnie dodaj 5 cm3 stężanego kwasu azotowego (UWAGA: W
związku z powstawaniem trujących tlenków azotu ćwiczenie wykonuj pod dygestorium). Kolbę przykryj
szkiełkiem zegarkowym pozwalając na zebranie się w niej większej ilości NO2.. Umieść koniec wężyka w
naczyniu i napełnij strzykawkę tlenkami azotu (UWAGA: Nie należy zasysać roztworu z dna probówki).
Zdejmij wężyk a wylot strzykawki szczelnie zatkaj. Następnie spręż mocno i szybko gaz w strzykawce. Co
obserwujesz zaraz po sprężeniu, co dzieje się po kilkudziesięciu sekundach? Następnie rozpręż gaz do jego
pierwotnej objętości i ponownie obserwuj zmiany.
d. Równowaga w reakcjach utleniania-redukcji
Do czterech zlewek 1, 2, 3, 4 o pojemności 250 ml wlej po 80 cm3 wody, 2 krople 0,01 M NaOH i po
3
10 cm każdego z wymienionych roztworów:
Zlewka 1: 0,2 M KI i 0,04 M KIO3

Zlewka 2: 0,2 M KI i 0,04 M KBrO3
Zlewka 3 0,2 M KBr i 0,04 M KBrO3
Zlewka 4: 0,2 M KBr i 0,04 M KIO3
Następnie do zlewek 1, 2 i 4 dodaj po 5 kropli 1M HCl, a do zlewki 3, 5 kropli stężonego HCl. Wytłumacz
zmiany i zapisz równania reakcji.
e. Wpływ temperatury na równowagę procesu wymiany ligandów
Co(H2O)62+ + 4 Cl- CoCl42- + 6 H2O

,.
rozowy niebieski
W zlewce o pojemności 100 cm3 umieść 50 cm3 roztworu azotanu(V) kobaltu(II). Następnie dodawaj
powoli stężony roztwór kwasu solnego, aż do zmiany barwy z ciemnoróżowej na wyraźnie niebieską (UWAGA:
Należy uważać aby nie dodać nadmiernej ilości roztworu kwasu). Zlewkę wraz z roztworem umieść w łaźni
chłodzącej, zawierającej pokruszony lód z chlorkiem wapnia. Co obserwujesz? Czy obserwowana reakcja jest
egzo- czy endoenergetyczna.
82
8 Ćwiczenie 5
8.1 Kataliza – wstęp teoretyczny
8.1.1 Katalizatory i inhibitory
Jak już wspomniano w paragrafie poświęconym kinetyce reakcji na wartość stałej szybkości, obok
takich czynników jak temperatura czy charakter środowiska, wpływa obecność substancji zwanych
katalizatorami. Katalizatorami nazywamy substancje chemiczne które zmieniają szybkość reakcji chemicznych
nie ulegając zużyciu podczas przebiegu reakcji. W obecności katalizatora bariera energetyczna, jaką jest
niezbędna w celu wytworzenia kompleksu aktywnego energia aktywacji, ulega obniżeniu i większa ilość
cząsteczek w mieszaninie reakcyjnej posiada energię kinetyczną wystarczającą do zajścia zderzenia
efektywnego, w następstwie którego zachodzi reakcja chemiczna (linia pogrubiona na wykresie poniżej). W
rezultacie większej ilości zderzeń efektywnych, szybkość reakcji ulega zwiększeniu.
AK BAK
AK
substraty kompleks produkty

aktywny
Eak
e
n AB
e
r Eakkat
g
i
a A+B
produkty
postep reakcji
'
Katalizator należy odróżnić od induktora, który również wywołuje i przyspiesza reakcję chemiczną jest
jednak w procesie indukcji zużywany. Przykładem induktorów mogą być związki łatwo wytwarzające wolne
rodniki, inicjujące reakcje łańcuchowe.
Jakkolwiek główną rolę odgrywają katalizatory przyspieszające reakcje chemiczne, tzw. katalizatory
dodatnie, znane są również katalizatory ujemne, inaczej inhibitory, zmniejszające szybkość reakcji. Efekt ten
wynika ze zwiększenia wartości energii aktywacji reakcji. Podobnie, rozróżnić należy inhibitory od substancji
których działanie polega na wychwytywaniu reaktywnych indywiduów (np.: wolnych rodników,
karbokationów), przez co reakcja zostaje zahamowana. Substancje te, podobnie jak induktory (inicjatory), są
zużywane w procesie reakcyjnym. Stężenia katalizatora lub inhibitora, niezbędne do wyraźnej zmiany szybkości
reakcji jest na ogół bardzo niewielkie, kilka do kilkunastu rzędów wielkości mniejsze niż stężenie reagentów.
8.1.2 Kataliza homogeniczna, heterogeniczna i autokataliza.

Proces katalityczny zachodzić może w układzie jednofazowym lub wielofazowym. W pierwszym
przypadku katalizator tworzy fazę wspólną z mieszaniną reakcyjną. Proces taki nazywamy katalizą
homogeniczną. W przypadku gry proces katalityczny zachodzi na granicy faz pomiędzy powierzchnią
83
katalizatora i reagentami mamy do czynienia z katalizą heterogeniczną. Wszystkie znane katalizatory
heterogeniczne są substancjami stałymi, często o bardzo rozbudowanej powierzchni właściwej. Katalizy
heterogenicznej nie należy mylić z katalizą przeniesienia międzyfazowego. Zjawisko to zachodzi na granicy
dwóch nie mieszających się ze sobą cieczy lub cieczy i nierozpuszczalnego w niej ciała stałego, jednakże
katalizator jest w tym przypadku rozpuszczony w mieszaninie reakcyjnej, a jego funkcja polega na przenoszeniu
cząsteczek reagentów przez granicę faz.
Pomimo iż katalizatory heterofazowe nie zmieniają w procesie katalitycznym swojego składu
chemicznego, może mieć miejsce zmiana ich struktury fizycznej (zmiana formy krystalograficznej, pojawienie
się defektów sieciowych, przejście w formę amorficzną bądź, przeciwnie, tworzenie krystalitów)
Ciekawym przypadkiem są reakcje autokatalityczne, w których katalizatorem reakcji są jej produkty.
Biegnąca początkowo wolno reakcja ulega zatem coraz większemu przyspieszeniu.
8.1.3 Mechanizm procesów katalitycznych

Chociaż mechanizm działania wielu katalizatorów nie został dotychczas należycie wyjaśniony a
katalizatory do poszczególnych reakcji dobiera się eksperymentalnie, kataliza odgrywa doniosłą rolę w chemii.
Większość procesów technologicznych stosowanych w przemyśle to właśnie reakcje katalityczne.
W przypadku katalizy heterogenicznej pierwszym etapem procesu katalitycznego jest zjawisko
adsorpcji fizycznej lub chemicznej reagentów na powierzchni katalizatora. Przyjmuje się, że powierzchnia
katalizatorów tego typu jest niejednorodna, a zjawisko katalizy ma miejsce na istniejących na niej centrach
aktywnych. Pierwszym efektem adsorpcji substratów jest zwiększenie ich stężenia w bezpośrednim sąsiedztwie
katalizatora, co już przyczynia się do wzrostu szybkości reakcji. Dalszym efektem jest deformacja chmury
elektronowej cząsteczek substratu, co prowadzi do zwiększenia ich aktywności. Czasem przyciąganie
adsorpcyjne jest na tyle duże, że prowadzi do rozerwania wiązań w cząsteczce (np.: rozbicie cząsteczki H2 na
pojedyncze atomy na powierzchni katalizatora niklowego). W przypadku chemisorpcji cząsteczki reagentów
tworzą wiązania z atomami katalizatora efektem czego jest całkowita zmiana ich reaktywności. Wiązania w
molekułach substratów są rozrywane, a cząsteczki przechodzą w nowe, pośrednie indywidua, istniejące jako
jednocząsteczkowa warstwa na powierzchni katalizatora. Potem, w procesie desorpcji tworzą się nowe wiązania,
prowadzące do tworzenia się cząsteczek produktów.
W katalizie homogenicznej katalizator reaguje z cząsteczkami jednego z substratów, tworząc produkt
pośredni, atakujące następnie cząsteczkę drugiego substratu, z odtworzeniem molekuły katalizatora (patrz
wykres). Proces ten można zapisać schematycznie jako:
A+K AK
AK + B AB + K
Przykładem katalizy homogenicznej może być utlenianie tlenku siarki(IV) do tlenku siarki(VI). Pod
nieobecność katalizatora proces ten przebiega powoli. Użycie tlenku azotu(II) jako katalizatora przyspiesza
znacznie tan proces.
1. Niek atalizowane utlenianie (proces powolny)
2SO2 + O2 2SO3
2. Katalizowane utlenianie (proces szybk i)
2NO + O2 2NO2
2NO2 + 2SO2 2SO3 + 2NO
Procesy katalityczne odgrywają olbrzymią rolę, zarówno w przemyśle chemicznych, ochronie

środowiska jak i w organizmach żywych (procesy enzymatyczne).
84
8.2 Kataliza i termodynamika chemiczna – część eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie z zagadnieniem katalizy homo- i heterogenicznej oraz z procesami endo- i egzoenergetycznymi.
Szybkość reakcji chemicznej, energia aktywacji, wpływ katalizatora na szybkość reakcji, kataliza i jej rodzaje,
katalizator a inicjator, inhibitor, termodynamika, równanie termodynamiczne, energia wewnętrzna, parametry
stanu, funkcje stanu, ciepło reakcji, prawo Hessa, jednostki ciepła.
ODCZYNNIKI
3% NH4Fe(SO4)2 Na2S2O3 CaO

5% CuSO4 MnO2 Ba(OH)2
0,001 M KMnO4 Pt drut NH4SCN
3% H2O2 Cu drut mocznik
NH4OH MnCl2 błękit bromotymolowy
H2C2O4 H2SO4 stęż.
UWAGA: Wodorotlenek amonu, tlenek wapnia oraz kwas siarkowy i szczawiowy są silnie żrące.
Wodorotlenek baru jest toksyczny. Pracując z nim obowiązuje stosowanie rękawic ochronnych i
okularów. Azotan srebra jest substancją plamiącą.
Przygotuj:
10 cm3 3% roztworu tiosiarczanu sodu
100 cm 3 2 % roztworu kwasu szczawiowego
OPIS ĆWICZENIA
a. Kataliza heterogeniczne
I.
Do trzech probówek wprowadź po 2 cm3 3% roztworu nadtlenku wodoru. Do pierwszej probówki dodaj
szczyptę MnO2, do drugiej wrzuć kawałek drutu platynowego. Zawartość trzeciej probówki służy do
porównania. Obserwuj różnice w szybkości wydzielania się gazu.
UWAGA: Myjąc probówki nie wyrzuć drutu platynowego do zlewu.
II.
W probówce przygotuj roztwór zawierający równe objętości 3% nadtlenku wodoru i roztworu
amoniaku o stężeniu 2 M. Po wymieszaniu do roztworu wprowadź drut miedziany. Zaobserwuj różnicę w
wydzielaniu się gazu w obecności i pod nieobecność miedzi.
b. Autokataliza
Do dwóch zlewek wlej po 25 cm3 2% roztworu kwasu szczawiowego. Do obu powoli wlej, mieszając
roztwór, po 0,7 cm3 stężonego kwasu siarkowego a następnie dodaj 8 cm3 0,001 M roztworu KMnO4. Do jednej
ze zlewek wrzuć kryształek chlorku manganu(II). Po zamieszaniu roztworów zaobserwuj czas zaniku barwy w
obu zlewkach. Zapisz równania reakcji.
c. Kataliza homogeniczna
Do dwóch probówek nalej po około 5 cm3 roztworu siarczanu żelaza(III) i amonu o stężeniu 3%. Do
jednej z nich dodaj 2 krople 5% roztworu siarczanu miedzi(II). Do obu probówek nalej szybko po 5 cm3 3%
roztworu tiosiarczanu sodu. Po wymieszaniu zawartości zmierz czas odbarwienia się roztworów. Zapisz
równania reakcji.
85
d. Katalityczne utlenianie amoniaku
Po kolbki stożkowej o pojemności 100 cm3 wlej stężony amoniak (tak aby utworzył około na dnie
warstwę o grubości 1 cm). Kolbkę przykryj małą zlewką i wstaw do ciepłej wody (ok. 500 C). Po ok. 5 minutach
wyjmij kolbę z łaźni wodnej. W płomieniu palnika rozgrzej spiralkę z drutu platynowego do czerwoności i
wprowadź do kolby. Wytłumacz zachodzące zjawisko.
e. Enzymatyczny rozkład mocznika
Przygotuj 100 cm3 10% wodnego roztworu mocznika. 10 g nasion soi lub pestek dyni starannie
rozdrobnij i podziel na dwie równe części. Jedną połowę umieść w probówce, dodaj kilka mililitrów wody i
ogrzewaj do wrzenia w płomieniu palnika przez 2 minuty. Do trzech małych zlewek wlej po ok. 30 cm3
otrzymanego roztworu mocznika i do każdej z nich dodaj kilka kropli roztworu błękitu bromotymolowego.
Pierwszą zlewką pozostaw jako kontrolną, do drugiej wsyp utarte nasiona, do trzeciej wlej zawiesinę nasion
przegotowanych. Co obserwujesz?
f. Reakcja tlenku wapnia z wodą.
W zlewce o pojemności 250 cm3 umieść 50 g CaO. W zlewce umocuj termometr tak, aby zbiorniczek
rtęci dotykał dna naczynia. Następnie dodaj 15 ml wody destylowanej. Zaobserwuj procesy zachodzące podczas
reakcji oraz zapisz równania.
UWAGA: Reakcję prowadź pod dygestorium. Załóż okulary ochronne. CaO i produkt jego
reakcji z wodą działają parząco na skórę.
g. Reakcja wodorotlenku baru z rodankiem amonu.
W zlewce o pojemności 200 cm3 umieść 15 g wodorotlenku baru i wymieszaj go dokładnie z 15 g

rodanku amonu. W zlewce umieść termometr. Obserwuj zachodzące zmiany.
UWAGA: Podczas reakcji wydzielają się niewielkie ilości amoniaku. Reakcję prowadź pod wyciągiem.
86
9 Izomeria
Zjawisko polegające na występowaniu związków chemicznych o jednakowym składzie chemicznym i
tej samej masie cząsteczkowej (a co za tym idzie, tym samym wzorze sumarycznym), lecz różniących się
ułożeniem atomów w cząsteczce lub przestrzeni nazywamy izomerią. Rozróżniamy trzy zasadnicze typy
izomerii:
konformeria – typ izomerii, związany z nierównocennością energetyczną indywiduów związanych z rotacją

wokół wiązań pojedynczych. Z nieskończonej ilości konformacji wyróżnia się najtrwalszą, w przypadku
której oddziaływania pomiędzy podstawnikami (lub ich brak) prowadzą do najmniejszej energii układu,
oraz najmniej trwałą, w której energia, na skutek oddziaływań sterycznych i elektronowych, osiąga
maksimum. Dla etanu proces rotacji wokół wiązania C-C powoduje następujące zmiany energii:
Energia
0 60 120 180 240 300 360

Kąt dw uścienny
H H H H
H H H H H H
H H H H H H H H HH H H H H H
H H H
H H H H H H H H H H H H H H
0 0 0
Kątom 0 , 120 , 240 odpowiada konformacja, w której protony leżą na jednej linii. Sytuacji tej nazywanej
naprzeciwległą, inaczej synperiplanarną, odpowiada maksimum energii (jest najmniej trwała). Konformacje
najbardziej trwałe odpowiadają kątom dwuściennym wynoszącym 600, 1800 i 3000. Nazywamy je
naprzemianległymi (antyperiplanarnymi), gdyż atomy wodoru są od siebie maksymalnie oddalone.
Wyróżniamy zatem dwie, skrajnie różne konformacje. Oczywiście, dla podstawionych pochodnych etanu
lub węglowodorów o dłuższych łańcuchach, wyróżniamy więcej konformerów. Z izomerią konformacyjną
mamy również do czynienia w przypadku cykloalkanów.
7 kJ/mol
Energia
46 kJ/mol
23 kJ/mol
2 4
1 3
87
W cykloheksanie zaobserwować możemy 4 konformery. Najtrwalszy, o najniższej energii, nazywamy
krzesłowym (1), mniej trwałe są konformery łodziowy (4) i zdeformowany (skręcony) łodziowy (3),
najmniej trwałym, półkrzesłowym (wypłaszczonym krzesłowym) (2). Konformacja krzesłowa jest
najuboższa energetycznie z powodu braku naprężeń, oraz z faktu że wszystkie protony znajdują się w
położeniach naprzemianległych. Atomy wodoru (lub podstawniki) w konformerze krzesłowym dzielimy na
aksjalne (Ha), znajdujące się w osi prostopadłej do płaszczyzny pierścienia, oraz ekwatorialne (He), leżące,
w przybliżeniu, w płaszczyźnie cząsteczki. Efektem szybkiej przemiany konformacyjnej jest, w przypadku
niepodstawionych i wielu podstawionych pochodnych cykloheksanu, nierozróżnialność położeń aksjalnego
i ekwatorialnego (podstawnik aksjalny staje się, na skutek inwersji pierścienia, ekwatorialnym, i
odwrotnie).
Ha Ha
He
He He
Ha
Ha
He He
He
Ha Ha
Warunkiem rozróżnialności tych form jest duża różnica energii pomiędzy pochodnymi z podstawnikami w
obu położeniach. Można to na przykład wykazać dla t-butylocykloheksanu, w którym, ze względów
sterycznych, obserwuje się wyłącznie ułożenie ekwatorialne (podstawnik tert-butylowy jest grupą
zajmującą dużą objętość, zatem jego ułożenie w pozycji aksjalnej jest energetycznie bardzo niekorzystne).
H
H H
H
Drugim, wolnym od naprężeń sterycznych ułożeniem atomów w cząsteczce cykloheksanu jest konformacja
łódkowa. Jest ona jednak mniej trwała z powodu niekorzystnego położenia atomów względem siebie.
Szczególnie niekorzystnie ułożone są dwa protony w pozycjach 1 i 4, które muszą się do siebie zbliżyć na
mniej niż 0,2 nm, co wywołuje pojawienie się silnych oddziaływań odpychających. Częściowe zniesienie
tych sił zapewnia przyjęcie przez układ konformacji skręconej łódki, gdyż powoduje to oddalenie od siebie
pozycji 1 i 4 oraz zbliżenie ułożenia pozostałych protonów do naprzemianległego.
0,183 nm >0,200 nm
H H H H
H H
H H H H H
H
H H H H H H H H
H H H H
izomeria konstytucyjna – zwana także izomerią strukturalną, jest zjawiskiem polegającym na różnicach we
wzajemnym połączeniu atomów w cząsteczkach o tym samym wzorze sumarycznym.
stereoizomeria – izomeria przestrzenna, jest zjawiskiem polegającym na tym, że związki o tym samym
składzie i wzajemnym powiązaniu atomów różnią się jedynie przestrzennym ułożeniem atomów.
Każdy typ izomerii dzielimy na kilka podtypów.
metameria – jest typem izomerii konstytucyjnej, polegającym na występowaniu dwóch lub więcej
związków o tym samym składzie chemicznym, ale różniących się grupami funkcyjnymi lub położeniem
wiązań wielokrotnych w cząsteczce. Metamery wykazują na ogół duże różnice we właściwościach
fizykochemicznych i są łatwe do rozdzielenia. Nie obserwuje się nigdy równowag pomiędzy różnymi
metamerami (nie przechodzą one spontanicznie jedne w drugie). Przykładem metamerii mogą być:
88
2-buten 1-buten
O O
2-propanon 1-propanal
(keton) (aldehyd)
O
OH
etanol eter dimetylowy

(alkohol) (eter)
izomeria łańcuchowa – jest typem izomerii konstytucyjnej, polegającym na występowaniu związków o tym
samym składzie i grupach funkcyjnych ale o różnej budowie łańcucha węglowodorowego (prosty lub
rozgałęziony), np.:
pentan 2-metylobutan 2,2-dimetylopropan

izomeria podstawienia – trzeci typ izomerii strukturalnej, polegający na różnym położeniu grupy
funkcyjnej w cząsteczce, np.:
Cl
Cl
Cl
1-chloropentan 2-chloropentan 3-chloropentan
tautomeria – jest osobliwym typem izomerii konstytucyjnej. Obejmuje związki różniące się grupami
funkcyjnymi, lecz będących w stanie równowagi dynamicznej, zdolne do swobodnego przechodzenia
jednych w drugie. Związana jest zwykle z przenoszeniem protonu (czasem innego podstawnika) i migracją
wiązania podwójnego (ewentualnie otwieraniem i zamykaniem pierścienia). Najczęściej spotykane typy
tautomerii to.:
1. Tautomeria keto-enolowa – zjawisko przekształcania się nienasyconego alkoholu (enolu) w związak

karbonylowy (keton lub aldehyd). Procentowy udział tautomerów zależy od ich budowy i warunków
środowiska, dla układu etanal/alkohol winylowy stosunek enol/aldehyd wynosi 10-7, dla układu fenol/2,4-
cykloheksadien-1-on aż 1014.
O OH O O
2. Tautomeria amido-imidowa – polega na występowaniu dynamicznej równowagi pomiędzy amidem a

jego postacią imidową.
O OH
NH2 NH
izomeria cis-trans – typ izomerii przestrzennej, polegający na różnym rozmieszczeniu atomów lub grup
funkcyjnych względem płaszczyzny odniesienia, w przypadku gdy atomy te są częścią sztywnej struktury.
Izomery cis-trans różnią się właściwościami fizycznymi i chemicznymi. Ten typ izomerii występuje
powszechnie w związkach nienasyconych (alkenach) oraz pierścieniowych. W alkenach, na skutek
zahamowania rotacji wokół wiązania C=C, rozpatrywać możemy ułożenie atomów względem płaszczyzny
odniesienia przechodzącej przez wiązania podwójne, prostopadłej do płaszczyzny w której znajdują się
podstawniki. O izomerze cis mówimy, jeśli obie grupy leżą po tej samej stronie płaszczyzny prostopadłej
do wiązania podwójnego, o izomerze trans, jeśli leżą po różnych stronach.
89
H H H Cl
C C C C
Cl Cl Cl H
cis trans
W przypadku trójpodstawionych pochodnych alkenów trudno jest mówić o izomerach cis i trans, dlatego
też przyjęło się inną nomenklaturę, opartą na regułach pierwszeństwa podstawników (reguły Cahna-
Ingolda-Preloga). Spośród podstawników przy każdym z atomów układu alkenowego wybiera się dwa, po
jednym przy każdym z atomów węgla, o największej ważności w świetle reguł CIP, a następnie określa ich
położenie względem podwójnego wiązania. Jeśli leżą one po jednej stronie układu C=C, mówimy o
izomerze Z (niem. zusammen - razem), jeśli zaś znajdują się po stronach przeciwnych, mamy do czynienia
z izomerem E (niem. entgegen - naprzeciw).
Reguła pierwszeństwa 1 – szereguje się podstawniki związane z rozpatrywanym atomem według
malejących mas atomowych pierwszego atomu podstawnika. Np.: Br>Cl>SO3H>F>CH3.
Reguła pierwszeństwa 2 – Jeżeli dla dwu lub więcej podstawników atomy bezpośrednio przyłączone do
rozpatrywanego centrum są takie same (mają tę samą masę), rozpatrywać należy odpowiednio drugie,
trzecie i kolejne atomy, aż napotka się różnice. Np.: podstawnik –CH3 i –C2H5 są równocenne wobec
reguły 1, jednak w myśl reguły 2 grupa etylowa jest ważniejsza niż metylowa (drugimi z kolei atomami, w
przypadku podstawnika etylowego są węgiel i dwa wodory, w przypadku metylowego, trzy atomy
wodoru), podobnie, podstawnik eterowy jest ważniejszy niż hydroksylowy itd.
Reguła pierwszeństwa 3 – Atomy przyłączone wiązaniami wielokrotnymi są równoważne z odpowiednią
liczbą atomów przyłączonych wiązaniami pojedynczymi, np.:
H H
O
C O C C
O
H H H
C
C C C C
C
H
H H
C C
C C H C
C H
C C
Zgodnie z powyższymi regułami możemy określić konfigurację w dowolnych alkenach, np.:

Br Cl HS C2H5 I CN
H I H3CO CH3 H3CS OCH3

izomer E izomer Z izomer E
I>Cl i Br>H HS>MeO i Et>Me I>MeS i OMe>CN
enancjomeria – zjawisko stereoizomerii występującej w związkach chiralych. Chiralność jest zjawiskiem

dotyczącym cząsteczek asymetrycznych i dyssymetrycznych, które nie pokrywają się ze swoim odbiciem
lustrzanym. Najprostszym sposobem “realizowania się” warunku chiralności są pochodne zawierające
cztery różne podstawniki umiejscowione na jednym atomie węgla, nazywanym często centrum chiralności
(centrum stereogenicznym). W tym przypadku asymetria jest efektem tetraedyczności atomu węgla.
Cząsteczki nie wykazujące chiralności nazywamy achiralnymi.
Cl Cl
CH3 H3C
H H
Br Br
chiralne – odbicia są nienakładalne
90
Chiralność jest warunkiem koniecznym wystąpienia enancjomerii, zwanej także izomerią optyczną.
Enancjomerem nazywamy każde z pary odbić lustrzanych danej molekuły. Posiadają one zdolność do
skręcania płaszczyzny światła spolaryzowanego (jeden z izomerów optycznych każdego związku skręca ją
w lewo, oznaczamy go jako izomer l lub (-), drugi, oznaczany przez d lub (+), skręca ją o ten sam kąt w
prawo). Izomery optyczne mają te same wzory strukturalne, różnią się jedynie ułożeniem atomów w
przestrzeni. Mieszanina równiej ilości enancjomeru lewo- i prawoskrętnego nie skręca płaszczyzny
polaryzacji światła. Mówimy, że jest nieczynna optycznie, i nazywamy ją mieszaniną racemiczną bądź
racematem. “Siała” skręcania płaszczyzny polaryzacji jest charakterystyczna dla danego związku i
definiowana jest jako skręcalność właściwa substancji [α]D, określona przez wartość (kąt) skręcenia światła
o długości fali 589 nm (linia D sodu) po przejściu przez roztwór substancji badanej o stężeniu 1 g/cm3 i
grubości warstwy pomiarowej wynoszącej 10 cm. W celu nomenklatury enancjomerów wykorzystuje się
wspomniane wyżej reguły pierwszeństwa podstawników CIP. W tym celu orientuje się cząsteczkę w
przestrzeni tak, aby najmniej ważny podstawnik (np.: atom wodoru) znajdował się z tyłu w stosunku do
obserwatora. Przez pozostałe trzy podstawniki prowadzi się strzałkę, zaczynając od grupy o największej, w
świetle reguł CIP, ważności, kończąc na najmniej, spośród tej trójki, ważnym. Jeśli strzałka ta ma kierunek
zgodny z kierunkiem ruchu wskazówek zegara, mówimy o izomerze R, jeśli przeciwny do ruchu
wskazówek zegara, o izomerze S, np.:
Cl Cl
CH3 H3C
H H
Br Br
CH3 CH3
Br Cl Cl Br
H H
izomer S izomer R
Br>Cl>Me>H Br>Cl>Me>H
Położenie podstawników względem centrum chiralności, oznaczone przez R i S, nazywamy konfiguracją

absolutną. Nadal stosuje się także, w stosunku do niektórych związków, nomenklaturę przyjętą w czasach
gdy nie istniały metody pozwalające na ustalenie konfiguracji absolutnej wokół chiralnego atomu węgla.
Przyjęto wówczas iż wszystkie związki, które można otrzymać z aldehydu (+)-glicerynowego na drodze
reakcji biegnących według mechanizmów zapewniających niezmienność konfiguracji, oznacza się jako D,
natomiast otrzymane z lewoskrętnej formy tego aldehydu, jako L.
Związki chiralne występują powszechnie w przyrodzie, przy czym enancjomery różnią się na ogół
właściwościami biologicznymi. Na przykład, wszystkie aminokwasy wchodzące w skład białek mają
konfigurację L na atomie węgla α (co odpowiada konfiguracji absolutnej S, z wyjątkiem cysteiny i cystyny,
gdyż grupa CH2S ma pierwszeństwo nad podstawnikiem COOH), z kolei naturalne sacharydy występują w
formie D co odpowiada konfiguracji R na atomie węgla najbardziej oddalonym od grupy karbonylowej.
Należy pamiętać, iż konfiguracja absolutne nie determinuje znaku skręcalności, tzn. R enancjomery
różnych związków mogą być zarówno lewo jak i prawoskrętne. Co więcej, w przypadku wielu związków
znak skręcalności oraz jej wielkość zależą od warunków środowiska w których prowadzono pomiar.
diastereoizomeria – gdy związek zawiera więcej niż jedno centrum chiralności możliwe jest występowanie
większej liczby stereoizomerów niż w przypadku związków z jednym atomem chiralnym, kiedy to mamy
do czynienia tylko z dwoma izomerami (enancjomerami). Na przykład, dla aminokwasu treoniny możliwe
są 4 stereoizomery:
91
COOH HOOC COOH HOOC
H NH2 H2N H H2N H H NH2
H OH HO H H OH HO H
CH3 H3C CH3 H3C
1 2 3 4
Możemy wśród nich wyróżnić dwie pary enancjomerów (1 i 2 oraz 3 i 4, odpowiednio 2R,3R;
2S,3S oraz 2R,3S oraz 2S, 3R), ale żadna struktura z pierwszej pary nie jest nakładalna, ani nie jest odbiciem
lustrzanym, związków z drugiej pary. Relację pomiędzy stereoizomerami, które nie są enancjomerami (np.:
2R,3R i 2R,3S) nazywamy diastereoizomerią. Diastereoizomery różnią się konfiguracją na jednym (w przypadku
związków zawierających dwa centra stereogenne) lub więcej atomach węgla ale maję tę samą konfiguracje na
pozostałych atomach chiralnych. Liczba stereoizomerów związków o dwóch atomach asymetrycznych lecz
posiadających płaszczyznę symetrii, wynosi trzy, co można prześledzić na pochodnych kwasu winowego.
COOH HOOC COOH HOOC

H OH HO H HO H H OH
H OH HO H H OH HO H
COOH HOOC COOH HOOC
1 2 3 4
Związki 3 i 4 (2S,3S i 2R,3R) są względem siebie enancjomerami, będąc zarazem diastereoizomerami
związków 1 i 2 (2R,3S i 2S,3R). Jednakże bliższe przyjrzenie się strukturom 1 oraz 2 wykaże, iż obie
cząsteczki są identyczne (oba wzory są nakładalne). Jest to efekt występowania płaszczyzny symetrii w
poprzek wiązania C-C. Cząsteczki posiadające centra stereogenne a zarazem zawierają płaszczyznę
symetrii, co powoduje ich achiralność, nazywamy formami mezo. Formy mezo są optycznie nieczynne.
Diastereoizomery różnią się właściwościami chemicznymi i fizycznymi.
92
10 Ćwiczenie 6
10.1 Aminokwasy i białka – wstęp teoretyczny
10.1.1 Aminokwasy
Badania mikroorganizmów w skamielinach wykazują, że aminokwasy istniały już trzy miliardy lat
temu, wykrywa się je również w niewielkich ilościach w materiałach pochodzenia meteorytowego, jak również
w skałach księżycowych.
Aminokwasy są prostymi związkami organicznymi. Na ich właściwości fizyczne i chemiczne wpływa
obecność grupy aminowej i karboksylowej. W zależności od wzajemnego usytuowania tych podstawników w
cząsteczce, mówimy o α-aminokwasach (grupa aminowa i karboksylowa przy tym samym atomie węgla), β-
aminokwasach (grupy –NH2 i –COOH znajdują się przy sąsiednich atomach węgla), γ-aminokwasach (grupy
funkcyjne oddalone o trzy węgle) itd. Pojęciem ω-aminokwas określa się związki zawierające grupę aminową
przyłączoną do atomu węgla maksymalnie oddalonego od podstawnika karboksylowego.
NH2
α-aminokwas
COOH
COOH
β-aminokwas
NH2
NH2
γ-aminokwas
COOH
COOH
δ-aminokwas
NH2
NH2
ε-aminokwas
COOH
Aminokwasy występujące w białkach to zazwyczaj kwasy α-aminokarboksylowe. Wiele

aminokwasów, występujących w formie niezwiązanej, pełni ważne funkcje biochemiczne, biorąc udział w
biosyntezie innych składników żywego organizmu, pełniąc funkcje regulatorowe i semiochemiczne (znamy
ponad 150 naturalnych aminokwasów). Zasób wolnych aminokwasów w ustroju nosi nazwę puli
aminokwasowej. Podstawowe przemiany aminokwasów ilustruje diagram:
93
porfiryny
heminy
biaka
pula pochodne fosfatydylowe
polipeptydy
kreatyna
α−oksokwasy aminokwasowa
pochodne pirymidyny i puryny
aminokwasy melanina
hormony, neurotran smitery
mocznik
amoniak
Rośliny i wiele mikroorganizmów jest w stanie wytwarzać wszystkie aminokwasy potrzebne do

budowy białek własnych komórek. Zwierzęta natomiast wytwarzają tylko 15 aminokwasów. Pozostałe muszą
być zatem dostarczone wraz z pożywieniem lub wytworzone przez symbiotyczną mikroflorę jelitową.
Aminokwasy takie nazywamy egzogennymi (w odróżnieniu od syntezowanych samodzielnie – endogennych).
Liczba i rodzaj aminokwasów których dostarczanie wraz z pożywieniem jest niezbędne do prawidłowego
funkcjonowania organizmu jest różne i zależne od stopnia rozwoju i stanu organizmu. Na przykład, niektóre
aminokwasy potrzebne ssakom w okresie wzrostu, przestają być niezbędne dla osobników dorosłych.
Zapotrzebowanie na niektóre z nich wzrasta w okresie cięży i karmienia czy też w przypadku stanów
patologicznych. Glicyna, aminokwas endogenny dla ssaków, musi być dostarczany wraz z pokarmem w
przypadku ptaków, które nie są zdolne do jego biosyntezy. U przeżuwaczy wszystkie aminokwasy egzogenne są
dostarczane, przy dostatecznym zaopatrzeniu w związki azotu, przez mikroorganizmy symbiotyczne bytujące w
przewodzie pokarmowym.
Wzory ważniejszych aminokwasów białkowych zamieszczono w Tabeli 5.
94
Tabela 5. Aminokwasy białkowe
Oznaczenie trój i Zawartość w wybranych
Aminokwasy Nazwa Struktura Uwagi
jednoliterowe białkach
fibroina jedwabiu 43,6 % endogenny;
glicyna Gly G H2N COOH
żelatyna 25,7 % nie chiralny
NH2
alanina Ala A fibroina jedwabiu 29,7 % endogenny
H3C COOH
NH2
Alifatyczne obojętne
H3C
walina Val V COOH elastyna 17,6 % egzogenny
CH3
CH3 NH2
albumina surowicy 12,8 %
leucyna Leu L egzogenny
zeina 19,0 %
H3C COOH
NH2

izoleucyna Ile I H3C COOH egzogenny
globulina 4,3 %
CH3
NH2
hydroksyaminokwasy
seryna Ser S HO fibroina jedwabiu 16,2 % endogenny

Alifatyczne
COOH
NH2
H3C keratyna (człowiek) 8,5 %

treonina Thr T COOH
egzogenny
awidyna 10,5 %
OH
95
Tabela 5. Aminokwasy białkowe (c.d.)
NH2 keratyna (człowiek) 14,4 %
Aminokwasy zawierające siarkę
cysteina Cys C HS keratyna (pióra) 8,2 % endogenny

COOH keratyna (wełna) 11,9 %
NH2
HOOC S
cystyna Cys–Cys S COOH keratyna (człowiek) 18,0 % endogenny
NH2
NH2
γ-kazeina 4,1 %
metionina Met M H3C egzogenny
owoalbumina 5,2 %
S COOH
NH2
mioglobina 15,5 %
lizyna Lys K egzogenny
H2N COOH
endogenny;
NH2
aminokwas nie kodowany
żelatyna 2,0 % w DNA, powstaje w
hydroksylizyna Hyl H2N COOH kolagen 0,93 % wyniku hydroksylowania
lizyny wcześniej
Zasadowe
OH
wbudowanej w peptyd
NH2
H salmina 86,4 %
H2N N
arginina Arg R COOH żelatyna 8,3 % egzogenny
histony 15,9 %
NH
N NH2
histydyna His H hemoglobina 7,0 % egzogenny

N COOH
H
96
Tabela 5. Aminokwasy białkowe (c.d.)
NH2
kwas asparaginowy Asp D HOOC globuliny (jęczmień) 10,3 % endogenny
COOH
Kwaśne i ich monoamidy
NH2
asparagina Asn N H2NOC endogenny
COOH
NH2 gliadyna (pszenica) 39,2 %

kwas glutaminowy Glu E gliadyna (żyto) 37,7 % endogenny
HOOC COOH zeina 22,9 %
NH2
glutamina Gln Q endogenny
H2NOC COOH
Aromatyczne i heteroaromatyczne
NH2
fenyloalanina Phe F egzogenny
γ-globulina 4,6 %
COOH
HO
NH2
tyrozyna Tyr Y fibroina jedwabiu 12,8 % egzogenny
COOH
NH2
lizozym 10,6 %
tryptofan Trp W egzogenny
N COOH α-laktoalbumina 7,0 %
H
salmina 6,9 %
prolina Pro P N
COOH kazeina 10,6 % endogenny
żelatyna 16,3 %
Iminokwasy
H
endogenny;
HO
aminokwas nie kodowany
żelatyna 13,6 % w DNA, powstaje w
hydroksyprolina Hyp
COOH kolagen 12,8 % wyniku hydroksylowania
N
H
proliny wcześniej
wbudowanej w peptyd
97
10.1.2 Właściwości kwasowo – zasadowe aminokwasów
Aminokwasy, posiadające w swojej cząsteczce zarówno grupy kwasowe jak i zasadowe, mogą
występować w formie jonu obojnaczego. Jonem obojnaczym nazywamy cząsteczkę obojętną, w obrębie której
występuję grupa o ładunku dodatnim oraz grupa o ładunku ujemnym, przy czym oba ładunki równoważą się.
R R
H2N COOH H3N COO
I II
W przypadku glicyny stosunek formy (I) do (II) ma się jak 1 do 260000. Zachowanie takie determinuje wiele
właściwości fizykochemicznych aminokwasów:
aminokwasy, w przeciwieństwie do amin i kwasów karboksylowych o podobnej długości łańcucha są
nielotnymi ciałami stałymi, topiącymi się z rozkładem w wysokich temperaturach
aminokwasy są nierozpuszczalne w niepolarnych rozpuszczalnikach, rozpuszczają się natomiast w wodzie
wartości stałych kwasowości i zasadowości dla grup –COOH i –NH2 są zaskakująco małe. Na przykład,
glicyna ma Ka = 1,6*10-10 a Kb = 2,5*10-12, podczas gdy Ka dla większości kwasów karboksylowych wynosi
około 10-5 natomiast Kb dla amin alifatycznych jest rzędu 10-4
wodne roztwory aminokwasów zachowują się jak roztwory substancji o bardzo dużym momencie
dipolowym
W rzeczywistości zatem wartość Ka nie jest stałą dysocjacji grupy –COOH lecz odnosi się do kwasowości
protonowanej grupy aminowej –NH3+, i wyraża się wzorem:
+
H3NCHRCOO- + H2O H2NCHRCOO- + H3O+
Ka =
[H O ][H NCHRCOO ]
+ −
[ H NCHRCOO ]
3 2
+ −
3
Wartość Kb’ zasady sprzężonej do kwasu o stałej dysocjacji Ka (jonu amoniowego –NH3+), czyli zasadowość
grupy –NH2, można obliczyć z zależność Ka*Kb’ = 10-14. Uzyskujemy zatem, dla wolnej grupy aminowej,
wartość stałej dysocjacji rzędu 10-5, co zgadza się z wartościami dla amin alifatycznych. Podobnie, wartość Kb
glicyny (czy innego aminokwasu), nie odpowiada zasadowości grupy –NH2, lecz odnosi się do zasadowości
anionu karboksylanowego –COO-, i wyraża się wzorem:
+
H3NCHRCOO- + H2O +
H3NCHRCOOH + OH-
=
[OH ][ H NCHRCOOH ]
− +
[ H NCHRCOO ]
3
Kb + −
3
Podobnie jak poprzednio wyliczyć możemy kwasowość Ka’ kwasu sprzężonego z tą zasadą. Jest nim grupa
karboksylowa, -COOH i, po skorzystaniu z wzoru Ka’*Kb = 10-14, uzyskujemy stałą dysocjacji grupy –COOH
wynoszącą około 10-3, co nie jest sprzeczne z wartościami uzyskiwanymi dla kwasów karboksylowych (bliskie
sąsiedztwo grupy aminowej, wyciągającej elektrony, zwiększa kwasowość)
Zawartość poszczególnych form w roztworze zależy od jego pH:
H+ H+
H2NCHRCOO- +H NCHRCOO-
3
+H NCHRCOOH
3
OH- OH-
II I III
Wzrost zasadowości powoduje zwiększenie udziału formy (II), wzrost kwasowości z kolei, wzrost stężenia
formy (III).
W roztworach zasadowych, w których przeważa udział formy (II), cząsteczki aminokwasu migrują, po
umieszczeniu próbki w polu elektrycznym, do anody. W środowisku kwaśnym, z powodu przewagi jonów (III),
zachodzi migracja do katody. Przy pH przy którym udział form (II) i (III) pewnego aminokwasu jest równy nie
obserwuje się żadnej migracji. Punkt ten nazywamy punktem izoelektrycznym danego aminokwasu (pHi). W
punkcie izoelektrycznym stężenie jonów obojnaczych jest największe. Współczynnik pH równy pHi odbiega na
ogół w od wartości 7, odpowiadającej roztworowi obojętnemu. Na przykład, dla glicyny, obserwuje się
przewagę właściwości kwasowych (Ka>Kb). Po rozpuszczeniu w wodzie, udział formy II będzie nieznacznie
większy niż formy III, w związku z tym, aby osiągnąć stan równowagi, do roztworu należy dodać niewielką
ilość kwasu. Stąd pHi ≠ 7,0 i punkt izoelektryczny znajduje się przy pH=6,1.
98
W aminokwasach kwaśnych lub zasadowych, w związku z obecnością dodatkowej grupy –COOH lub –
NH2 mamy do czynienia z większą ilością równowag. Grupa aminowa w lizynie czy też guanidynowa w
argininie są bardziej zasadowa niż grupy α-aminowa tych aminokwasów, zatem to one uczestniczą w tworzeniu
jonu obojnaczego. Z kolei grupy α-karboksylowe wykazują silniejszy charakter kwasowy, co powoduje iż ich
udział w tworzeniu form jonowych jest istotniejszy.
NH3 NH2
O H3N O
HOOC
O O
NH2 NH2
H H
H2N N O H2N N O
NH2 O NH2 O
NH2
H
H2N N O
NH2 O
Charakter jonów obojnaczych lub polijonów wykazują także białka, ze względu na obecność wolnych
grup aminowych i karboksylowych. Z tego powodu możemy mówić także o punkcie izoelektrycznym peptydów
i białek.
10.1.3 Wiązanie peptydowe

Aminokwasy są zdolne do tworzenia międzycząsteczkowych wiązań amidowych pomiędzy grupami α-
aminową i α-karboksylową. Tak wytworzone wiązanie (-CO-NH-) nazywamy wiązaniem peptydowym.
O
R2 R2 O
NH2 -H2O
H + HO NH2
HOOC N HOOC N
R1
H H R1
Długość wiązania C-N w wiązaniu peptydowym jest krótsza niż normalne pojedyncze wiązanie C-N, np.: w
aminach. Jest to efekt mezomerycznego charakteru wiązania peptydowego, które ma charakter częściowo
podwójny (ok. 50%). Jest ono zatem płaskie, a dodatkowym efektem charakteru podwójnego jest utrudniona
rotacja wokół tego wiązania, a co za tym idzie, stabilizacja dwu płaskich struktur, cis i trans.
R H R H
N N
O R O R
mezomeria wiązania peptydowego
99
R
R H R
N N
H
O R O
forma trans forma cis
W naturalnych peptydach występuje wyłącznie forma trans wiązania peptydowego. Wynika to z oddziaływań
sterycznych i elektrostatycznych, efektem których jest mniejsza energia takiego układu, a co za tym idzie,
większa stabilność. Wiązanie cis występuje wyłącznie w niewielkich peptydach cyklicznych, w których z
oczywistych względów, tego typu struktura jest wymuszona.
R
O
HN
NH
O
10.1.4 Peptydy, białka

Peptydy są amidami utworzonymi w wyniku reakcji tworzenia wiązań peptydowych pomiędzy dwu lub więcej
aminokwasami. W zależności od ilości reszt aminokwasowych w cząsteczce peptydu jest on nazywany
dipeptydem (2 reszty), tripeptydem (3 reszty), tetrapeptydem (4 reszty), itd. aż do polipeptydów. Przyjmuje się,
że cząsteczki poli(aminokwasowe) o masie do 10000 u są uznawane za peptydy, o masach większych – za
białka. Właściwości tego typu połączeń zależne są wyłącznie od natury i porządku aminokwasów wchodzących
w ich skład. Oprócz wiązań peptydowych za strukturę białek lub peptydów odpowiedzialne są także inne typy
oddziaływań kowalencyjnych bądź niekowalencyjnych.
wiązania disiarczkowe (disulfidowe) – są drugim, ważnym wiązaniem kowalencyjnym spotykanym w

cząsteczkach peptydów, będących dla nich swoistym. Jest to efekt utleniania grup –SH reszt cysteiny
wchodzących w skład łańcucha polipeptydowego. Rozróżniamy wewnątrzłańcuchowe (a) wiązania
disulfidowe, które występują pomiędzy resztami cysteiny w obrębie tego samego łańcucha peptydowego,
oraz międzyłańcuchowe (b) wiązania disiarczkowe, łączące dwa oddzielne łańcuchy białkowe. Energia
wiązania wynosi około 210 kJ*mol-1.
HN
a
O S S
NH Ala Cys Gly Phe Gly Cys Ala Lys Cys Leu
O S S NH
S
O b
S
HN
Arg Val Ile Trp Cys Ser
O
wiązania wodorowe – są to oddziaływania międzycząsteczkowe lub wewnątrzcząsteczkowe atomu wodoru

w grupie X–H (gdzie X jest atomem elektroujemnym, np.: O, N, S) z grupą elektrodonorową Y, typu X-
H.....Y. Grupę XH nazywamy protonodonorem, grupę Y, protonoakceptorem. Typowe wiązania wodorowe
występujące w białkach, to: OH.....O; OH.....N; NH.....O; NH.....N. Jest to oddziaływanie w dużej mierze
elektrostatyczne. Atom X, silnie elektroujemny, wywołuje polaryzację wiązania X–H, w skutek czego na
atomie wodoru pojawia się cząstkowy ładunek dodatni. Elektroujemny atom Y charakteryzuje się
cząstkowym ładunkiem ujemnym, co prowadzi z kolei do coulombowsciego oddziaływania atomu wodoru z
atomem Y. W peptydach i białkach istnieje wiele elementów zdolnych do tworzenia wiązań wodorowych,
zarówno wewnątrzcząsteczkowych, odpowiedzialnych za wiele aspektów strukturalnych polipeptydów, jak
również międzycząsteczkowych, odpowiedzialnych za strukturę czwartorzędową, wiązanie substratów do
100
enzymów, oddziaływanie z receptorami, hydratację itd. W tworzeniu wiązań wodorowych uczestniczą
zarówno grupy NH i CO wiązań peptydowych, jak też podstawniki protonodonorowe bądź akceptorowe
łańcuchów bocznych aminokwasów. Energia tych wiązań wynosi 12-29 kJ*mol-1.
δ− δ+ δ−
X H Y
oddziaływania hydrofobowe – jest to oddziaływanie pomiędzy niepolarnymi resztami aminokwasów
alifatycznych, będące efektem sił dyspersyjnych (wiązań Van der Waalsa). Jest szczególnie istotne w
przypadku reszt waliny, leucyny i izoleucyny. Pomimo niewielkiej mocy biorą udział w stabilizacji
struktury wielu białek. Dodatkowo oddziaływania hydrofobowe są wzmacniane na skutek oddziaływań z
cząsteczkami wody. Wokół grup niepolarnych molekuły wody tworzą „grona”, związane ze sobą
wiązaniami wodorowymi. Zwiększa to lokalnie ich stopień uporządkowania i, co za tym idzie, zwiększa
energię swobodną w otoczeniu reszt niepolarnych. Z drugiej strony wzajemna asocjacja reszt alifatycznych
zmniejsza przestrzeń hydrofobową dostępną dla cząsteczek wody. To z kolei minimalizuje ich
uporządkowanie, co powoduje wzrost entropii i spadek energii swobodnej, w efekcie stabilizując takie
ułożenie podstawników. Moc wiązania 4-8 kJ*mol-1.
wiązania jonowe – są efektem oddziaływań elektrostatycznych zjonizowanych reszt aminowych i
karboksylanowych. Stwarzają one dodatkową możliwość stabilizacji struktury peptydu. Mogą mieć
charakter przyciągający (między grupami różnoimiennie naładowanymi) lub odpychający (między grupami
naładowanymi równoimiennie). Moc wiązania 160-460 kJ*mol-1.
oddziaływania typu π-π – w białkach występują aminokwasy aromatyczne (Phe, Tyr, Trp, His).
Oddziaływania elektronów π dwóch różnych reszt aminokwasowych stanowi słaby, aczkolwiek istotny,
element determinujący strukturę białka.
oddziaływania elektrostatyczne – pomiędzy grupami nie obdarzonymi całkowitym ładunkiem elektrycznym,
lecz posiadającymi ładunki cząstkowe będące efektem polaryzacji wiązań, dochodzi często do oddziaływań
coulombowskich, które, pomimo niewielkiej siły, grają pewną rolę w determinowaniu struktur białek.
Pierwszorzędową strukturę peptydu (białka) określa liczba, budowa chemiczna i kolejność reszt
aminokwasowych. Jest ona zatem determinowana przez wiązania peptydów pomiędzy aminokwasami. W
ramach struktury pierwszorzędowej uwzględnia się także położenie wiązań disiarczkowych. Jak wiadomo
wiązanie peptydowe, ze względu na częściowy charakter podwójny, jest płaskie. Może jednak mieć miejsce
swobodny obrót wokół wiązań pomiędzy węglem alfa a grupą karbonylową i amidową. Struktura łańcucha
polipeptydowego jest zatem półsztywna, pewne jej fragmenty są koplanarne, inne posiadają swobodę obrotu,
stabilizacja jednej z możliwych konformacji jest efektem wiązań niekowalencyjnych. Konformację łańcucha
opisuje się przez podanie wartości kątów dwuściennych wiązań pomiędzy Cα-CO (kąt ψ) oraz Cα-NH (kąt φ).
Geometrię łańcucha polipeptydowego prezentują rysunki (kolorem zaznaczono obszary planarne).
101
Efektem rotacji wokół wiązań Cα-N i Cα-CO jest przyjmowanie przez łańcuch polipeptydowy różnych
konformacji przestrzennych. Pod pojęciem struktury drugorzędowej rozumiemy przestrzenne współzależności
między aminokwasami w łańcuchu. W zależności od środowiska w którym znajduje się białko oraz oddziaływań
niekowalencyjnych, łańcuch może przyjmować strukturę od całkowicie nieuporządkowanej do silnie skręconej
helisy. Z punktu widzenia strukturalnej chemii protein istotne są dwie stabilne konformacje. Pierwszą z nich jest
α-heliks. W strukturze tej łańcuchy boczne aminokwasów wystają na zewnątrz od centrum helisy, natomiast
łańcuch główny (-NH-CO-C-NH-CO-) przyjmuje strukturę śrubową. Na jeden skok helisy, wynoszący 0,54 nm,
przypada 3,6 reszty aminokwasowej, odstęp przypadający na jedną resztę wynosi 0,15 nm; średnica kanału
utworzonego przez heliks wynosi 5 nm. Właściwości α-helisy są następujące:
• Strukturę α-helisy stabilizują międzyaminokwasowe wiązania wodorowe, występujące pomiędzy grupą NH
wiązania peptydowego jednego aminokwasu a grupą CO aminokwasu oddalonego o cztery reszty w
strukturze pierwszorzędowej. Należy pamiętać iż każde wiązanie peptydowe obszaru helikalnego
uczestniczy w tworzeniu wiązań wodorowych.
• Zaangażowanie wszystkich atomów azotu i tlenu łańcucha peptydowego w ten typ oddziaływań znacznie
zmniejsza charakter hydrofilowy tego regionu.
• Heliks prawozwojowy jest bardziej stabilny niż lewozwojowy.
• Helisa formuje się spontanicznie, ponieważ stanowi najbardziej stabilną konformację łańcucha
polipeptydowego (najniżej energetyczną)
• Resztami destabilizującymi helisę są aminokwasy o elektrycznie nieobojętnych lub dużych łańcuchach
bocznych, które na skutek oddziaływań elektrostatycznych lub sterycznych przeszkadzają w utworzeniu
struktury helikalnej. Fragmenty helikalne kończy prolina lub hydroksyprolina, która, na skutek wbudowania
grupy aminowej w pierścień, nie posiada możliwości rotacji wokół wiązania Cα-N.
102
0,15 nm 0,54 nm
0,5 nm
Drugim, strukturalnie i biochemicznie istotnym, typem struktury drugorzędowej jest tak zwana struktura β
nazywana również harmonijką β. W konformacji tej łańcuch pozostaje prawie całkowicie rozprostowany.
Struktura β nosi nazwę antyrównoległej (przeciwrównoległej), jeśli dwa sąsiednie łańcuchy biegną w
przeciwnych kierunkach. Jeśli łańcuchy podążają w tym samym kierunku mamy do czynienia ze strukturą
równoległą, nie występującą w naturalnych peptydach. Struktura harmonijkowa może mieć postać kilku
łańcuchów równoległych do siebie. Wiązania wodorowe, stabilizujące strukturę β, występują pomiędzy
odległymi od siebie, w sensie struktury pierwszorzędowej, fragmentami cząsteczki, leżącymi równolegle do
siebie. Mogą również tworzyć się między różnymi łańcuchami polipeptydowymi. Odległość sąsiednich
aminokwasów wzdłuż osi cząsteczki wynosi 0,35 nm.
Ostre zmiany kierunku łańcucha peptydowego są możliwe dzięki tak zwanym zakrętom β (strukturom spinki do
włosów), ciasnym pętlom, w których tlen grupy karbonylowej jednej reszty aminokwasowej tworzy wiązanie
wodorowe z protonem amidowym aminokwasu oddalonego o 3 reszty do przodu. W zakrętach β często
103
występuje prolina i glicyna, pierwsza ze względu na strukturalne wymuszenie konformacji sprzyjającej zmianie
kierunku, druga, gdyż podstawniki wodorowe ze względów sterycznych nie przeszkadzają w tworzeniu takiej
konformacji a ponadto może działać jako giętki zawias pomiędzy zakrętem a resztą peptydu.
Czasami do zagadnień związanych ze strukturą drugorzędową zalicza się tworzenie trimetycznych struktur
helikalnych, występujących w cząsteczce kolagenu. Tworzą ją trzy łańcuchy polipeptydowe, zawierające w
swojej cząsteczce regularnie powtarzające się sekwencje. Co trzecim aminokwasem peptydu jest glicyna,
poprzedzające na ogół resztę proliny i często poprzedzona resztą hydroksyproliny. W obrębie pojedynczej nici
nie tworzą się wiązania wodorowe, natomiast helikalność każdego z trzech łańcuchów jest determinowana przez
odpychające oddziaływania pierścieni pirolidynowych i hydroksypirolidynowych wchodzących w skład Pro lub
Hyp. Na jeden aminokwas przypada 0,286 nm a na jeden skręt helisy przypadają trzy aminokwasy. Tworzenie
trójniciowej superstruktury determinowane jest z kolei przez oddziaływania wodorowe pomiędzy aminokwasami
trzech różnych łańcuchów. Trzy jednakowe nici, skręcające się wokół siebie tworzą strukturę superhelikalnej
liny, o dużej odporności mechanicznej i elastyczności. Struktura kolagenu jest czasami zaliczana do struktur
czwartorzędowych.
Mówiąc o strukturze trzeciorzędowej, mamy na myśli ułożenie łańcucha białkowego, uorganizowanego już w
strukturę drugorzędową (alfa-helisa lub beta-harmonijka) w przestrzeni. Ułożenie regionów lub domen
względem siebie jest często trudne do rozgraniczenia od wzajemnego ułożenia aminokwasów, czyli od struktury
drugiego rzędu. Jednakże, pomimo nieostrej granicy, przyjmuje się, iż struktura trzeciorzędowa dotyczy
fragmentów znacznie od siebie oddalonych w sensie budowy pierwszorzędowej. Istnieje wiele motywów
strukturalnych, zliczanych do uporządkowania trzeciego rzędu, powtarzających się w wielu biologicznie
ważnych peptydach. Struktura trzeciorzędowa jest determinowana przez oddziaływania kowalencyjne (mostki
disiarczkowe) lub niekowalencyjne. Duże znaczenie w stabilizacji tej struktury odgrywa specyficzna forma
oddziaływań hydrofobowych. Jest ona efektem oddziaływania reszt aminokwasowych z rozpuszczalnikiem.
Ostateczna konformacja białek rozpuszczalnych w wodzie jest taka, że większość apolarnych reszt
aminokwasowych koncentruje się we wnętrzu cząsteczki, wypychając z niej wodę, natomiast reszty polarne -
niosące ładunek elektryczny wysuwają się na zewnątrz i ulegają hydratacji. Cząsteczka białka jest otoczona
warstwą związanej wody hydratacyjnej.
Struktura czwartorzędowa jest charakterystyczna dla białek oligomerycznych. (zawierających kilka
podjednostek). Podjednostki białek są to niezależnie sfałdowane łańcuchy polipeptydowe lub całe białka, będące
tylko składnikiem dużego kompleksu białkowego. Nazywamy je także monomerami lub protomerami. Jeśli
podjednostki mają tę samą strukturę pierwszorzędową, mówimy o homogennej strukturze czwartorzędowej
oligomeru, jeśli zaś podjednostki różnią się między sobą, mamy do czynienia ze strukturą heterogenną.
Oddziaływania pomiędzy poszczególnymi łańcuchami są efektem sił elektrostatycznych, wiązań wodorowych,
wiązań jonowych czy Van der Waalsa. Niektórzy zaliczają tutaj również oddziaływania disulfidowe, jednakże
przyjmuje się, iż w tworzeniu struktur czwartego rzędu mogą uczestniczyć wyłącznie wiązania niekowalencyjne,
104
a podjednostki muszą, przynajmniej potencjalnie, dać się rozdzielić bez niszczenia wiązań kowalentnych. W
tworzeniu się form oligomerycznych wydatnie uczestniczą również oddziaływania o naturze hydrofobowej.
Powierzchnie styku poszczególnych podjednostek oligomeru zawierają dużą ilość aminokwasów niepolarnych.
Efektem tego jest "sklejenie" podjednostek i "uszczelnienie" przed wniknięciem rozpuszczalnika. Białka
oligomeryczne odgrywają szczególną rolę w regulacji wewnątrzkomórkowej ponieważ monomery, na skutek
oddziaływań z czynnikami środowiska, mogą przyjmować różne ułożenie względem siebie, co często prowadzi
do istotnych zmian w ich właściwościach. Najmniejsze białka oligomeryczne zawierają po 2 podjednostki
(dimery, np.: laktoglobulina), największe, po kilka tysięcy cząsteczek monomeru (wirus mozaiki tytoniowej,
2130 podjednostek).
10.1.5 Klasyfikacja protein

Przyjmuje się kilka różnych sposobów klasyfikacji związków poli(aminokwasowych). Do ważniejszych
należą następujące sposoby podziału: na podstawie rozpuszczalności, ze względu na kształt cząsteczek, ze
względu na budowę, na podstawie funkcji fizjologicznych.
10.1.5.1 Podział białek ze względu na rozpuszczalność

Podział ze względu na rozpuszczalność należy do najstarszych prób klasyfikacji białek i jest nadal, choć
w ograniczonym stopniu, stosowany w biochemii klinicznej, jednakże rozgraniczenia pomiędzy poszczególnymi
klasami nie są ostre i przekonujące.
♦ albuminy – białka o niewielkich masach cząsteczkowych, łatwo krystalizujące, rozpuszczalne w wodzie i

roztworach soli o pH mieszczącym się w przedziale 4-8,5. Nie zawierają żadnych szczególnych
aminokwasów. Do grupy tej zaliczamy na przykład albuminy surowicy, laktoalbuminę, owoalbuminę i
albuminy roślinne.
♦ globuliny – są białkami słabo rozpuszczalnymi w wodzie ale dobrze rozpuszczalnymi w roztworach soli. W
swojej strukturze nie zawierają żadnych szczególnych aminokwasów. Mają większe masy molowe niż
albuminy. Do klasy tej zaliczyć można wiele białek plazmy, wiele enzymów, przeciwciał, białek mleka i
roślinnych białek zapasowych (np.: edestyna z konopi, zeina z kukurydzy, arachidyna z orzechów
ziemnych, glicynina z soi).
♦ prolaminy – rozpuszczalne w 70-80% etanolu, nierozpuszczalne w wodzie i etanolu absolutnym. Są
szeroko rozpowszechnione w świecie roślinnym. Zawierają duże ilości kwasu glutaminowego i proliny.
Przykładami mogą być gliadyna (pszenica i żyto) oraz hordeina (jęczmień). Nie ulegają koagulacji podczas
ogrzewania.
♦ histony – rozpuszczalne w roztworach soli i kwasów organicznych zasadowe białka o małych masach
molowych (100-250 reszt aminokwasowych). Spotyka się je we wszystkich tkankach organizmów
eukariotycznych, gdzie stanowią istotny składnik chromatyny.
♦ protaminy – rozpuszczalne w wodzie i kwasach białka o niewielkich cząsteczkach. Są bardzo silnie
zasadowe, zawierają duże ilości aminokwasów zasadowych: argininy i lizyny. Występują w dużych
ilościach w spermie, zarówno w płynie nasiennym jak i samych plemnikach, jądrach komórkowych,
krwinkach. Punkt izoelektryczny przypada na 9,8-12.
♦ gluteiny – nierozpuszczalne w wodzie, alkoholu i roztworach soli, rozpuszczalne w roztworach kwasów i
zasad. Nie koagulują podczas ogrzewania. Występują w nasionach zbóż (aweniana w owsie, oryzeina w
ryżu).
♦ skleroproteiny – nierozpuszczalne w wodzie, roztworach soli, kwasów i zasad, Odporne na działanie
enzymów białka występujące w organizmach zwierzęcych. Wzbogacone w glicynę, alaninę i prolinę.
Należą do nich kolagen, elastyna, kreatyna, fibroina.
10.1.5.2 Klasyfikacja na podstawie kształtu

Na podstawie stosunku osiowego cząsteczki białka (stosunek długości do szerokości) możemy
wyodrębnić dwie grupy. Białka globularne, dla których wartość tego stosunku jest mniejsza od 10 i na ogół nie
przekracza 3-4, mają łańcuchy poliproteinowe silnie pofałdowane i zwinięte. Należą do nich albuminy,
globuliny osocza, insulina, wiele enzymów. Białka włókienkowe (fibrylarne), dla których wartość stosunku
osiowego jest większa niż 10, zawierają odcinki łańcuchów polipeptydowych zwiniętych śrubowo. Ich
przedstawicielami są kolagen oraz kreatyna.
105
10.1.5.3 Klasyfikacja ze względu na budowę
Ogólnie, substancje białkowe podzielić możemy na dwie grupy: białka proste i białka złożone. Do
pierwszej, nazywanej proteinami, zaliczamy te spośród białek, których cząsteczki są zbudowane wyłącznie z
aminokwasów. Oczywiście jest to grupa szalenie zróżnicowana, którą możemy dzielić dalej, na przykład ze
względu na rozpuszczalność czy funkcje. Do drugiej zaliczamy związki zbudowane z łańcuchów
polipeptydowych oraz zawierające dodatkowo wbudowane substancje lub grupy niebiałkowe. Klasę tą
nazywamy proteidami. Grupę niebiałkową nazywamy często także grupą prostetyczną, albo, jeśli łatwo
oddysocjowuje od części białkowej, koenzymem. Grupa prostetyczna może być związana z komponentem
białkowym w różnym stopniu, silniej lub słabiej, dzięki występowaniu różnego typu oddziaływań. Ze względu
na różnorodność grup nieaminokwasowych proteidy dzielimy na:
♦ fosfoproteidy – są to białka zawierające resztę kwasu fosforowego, zwykle połączoną wiązaniem estrowym
z grupą hydroksylową seryny lub, rzadziej, treoniny. Do grupy tej należy wiele ważnych fizjologicznie
białek, na przykład kazeiny i witelliny. Stopień fosforylacji może być, w różnych białkach, różny.
♦ chromoproteidy – białka te zawierają chromoforową (barwną) grupę prostetyczną. Część barwna może
mieć różną strukturę: karotenoidową, flawonoidową, porfirynową i inne. Do ważnych chromoproteidów
należą hemoproteidy, zawierające jako grupy prostetyczne porfirynowe kompleksy żelaza. Wiele białek z tej
grupy pełni ważne funkcje w łańcuchu oddechowym.
♦ lipoproteidy – są kompleksami białek z lipidami. Pełnią ważne funkcje fizjologiczne, związane z
transportem lipidów, sterydów i witamin lipofilnych w ustroju. Wchodzą w skład błon cytoplazmatycznych.
Dzieli się je, w zależności od wielkości cząsteczek oraz proporcji białko/lipid, na kilka podgrup.
♦ glikoproteidy – są to pochodne białek, zawierające fragmenty oligosacharydowe przyłączone do łańcuchów
bocznych niektórych aminokwasów wiązaniami glikozydowymi. Możliwe jest przyłączenie reszty cukrowej
na kilka różnych sposobów:
1. za pomocą wiązań O-glikozydowych do reszt hydroksylowych Thr, Ser lub Tyr
2. poprzez wiązania N-glikozydowe do wolnych grup aminowych Lys lub reszt N-końcowych oraz azotu
amidowego Asn i Gln
3. poprzez wiązania estrowe z wolnymi resztami karboksylowymi aminokwasów kwaśnych oraz C-
końcowych.
Fragmenty węglowodanowe zawierają głównie heksozy, heksozoaminy i kwas slajowy. Łańcuchy
oligosacharydowe są zwykle krótkie, zawierające 8-10 reszt sacharydowych. Glikoproteidy mogą zawierać
jeden fragment węglowodanowy (np.: owoalbumina), znane są również takie, które zawierają znacznie
większą ich ilość (np.: glikoproteid podszczękowy owcy zawiera 800 fragmentów oligosacharydowych).
Łańcuchy cukrowe wprowadzane są do cząsteczek białka w fazie posttranslacyjnej przy udziale
specyficznych glikozylotransferaz. Brak kontroli genetycznej na tym etapie prowadzi niekiedy do
mikroheterogeniczności materiału. Glikoproteidy są szeroko rozpowszechnione w świecie roślinnym i
zwierzęcym. Są składnikami błon, enzymami, przeciwciałami, czynnikami grupowymi krwi, hormonami,
wchodzą w skład śluzów, białek plazmy. Są często odpowiedzialne za transport aktywny.
♦ nukleoproteidy – są kompleksami kwasów nukleinowych i białek. Składnik białkowy ma na ogół charakter
silnie zasadowy. Występują we wszystkich komórkach roślinnych jak i zwierzęcych, zarówno w jądrach
komórkowych jak i w cytoplazmie. Odgrywają ważną rolę w replikacji DNA i kontroli genetycznej.
Czystymi nukleoproteidami są fitofagi.
♦ metaloproteidy – są kompleksami metali z białkami. Zdolność wiązania jonów niektórych metali z
proteinami jest efektem oddziaływań z grupami aminowymi, karboksylanowymi, tiolowymi i
imidazolowymi. Najczęściej wiązanymi metalami są żelazo, miedź, chrom, mangan, molibden, cynk i wapń.
Nie należy mylić metaloproteidów z chromoproteidami zawierającymi jony metali. W metaloproteidach
wiązanie metalu odbywa się bezpośrednio z cząsteczką białka, w chromoproteidach jon związany jest z
niebiałkowym ligandem, np.: porfiryną, a dopiero tak uzyskany kompleks wiąże się z łańcuchem
polipeptydowym.
106
10.1.6 Reakcje aminokwasów i białek
10.1.6.1 Reakcja z ninhydryną
Wolne grupy aminowe aminokwasów reagują z ninhydryną z uwolnieniem amoniaku i dwutlenku
węgla. Aminokwas w tych warunkach utlenia się do odpowiedniego aldehydu, natomiast ninhydryna, w
obecności powstającego amoniaku, ulega redukcji do niebieskofioletowego barwnika.
O O
R OH O H
+ R + + CO2 + NH3
H2N COOH OH H OH
H
O O
O O O
OH
+ NH3 N
OH
O O O
Metoda ta, ze względu na dużą czułość, stosowana jest do spektrofotometrycznego oznaczania aminokwasów
oraz do ich szybkiego wykrywania. Oczywiście podobną reakcję wykazują peptydy co wiąże się z obecności
wolnych grup aminowych (podczas reakcji z peptydami nie wydziela się CO2). Reakcja ta nie jest specyficzna,
ulegają jej również aminocukry i niektóre inne związki aminowe.
10.1.6.2 Odczyn ksantoproteinowy

Efektem działania na peptydy, zawierające aminokwasy aromatyczne, kwasem azotowym jest proces
nitrowania reszt arylowych tyrozyny. Powstała pochodna nitrofenolu, jak wiele związków nitrowych, wykazuje
żółte zabarwienie. Dodanie do próbki roztworu zasady, prowadzące do zalkalizowania środowiska, wywołuje
zmianę barwy na pomarańczową, będącą efektem deprotonowania fenolu, przebiegającym z wytworzeniem
intensywnie barwnego jonu fenolanowego (zjawisko podobne do mechanizmu działania niektórych wskaźników
pH)
OH OH O O O
NO2 NO2 N
HNO3 O
OH-
peptyd peptyd peptyd peptyd
10.1.6.3 Odczyn Millona

W wyniku reakcji tyrozyny z kwaśnym roztworem azotanu(V) rtęci(II) tworzą się pochodne
nitriofenoli, które w połączeniu z jonami Hg2+ wywołują ciemnoczerwone zabarwienie roztworu.
107
10.1.6.4. Odczyn biuretowy
W wyniku reakcji związków zawierających wiązanie peptydowe z jonami miedzi(II) w środowisku
zasadowym powstają barwne, niebieskofioletowe kompleksy. Podobną reakcję wykazuje mocznik, który, w
obecności zasady, tworzy dimer zdolny do kompleksowania jonów miedzi w sposób podobny do peptydów.
O R O
H
N
N
H O R
R O Cu2+
H
N
N
H
O R
Barwa jest tym intensywniejsza, im dłuższy jest peptyd (im więcej wiązań peptydowych wchodzi w skład
cząsteczki)
10.1.6.5 Reakcja Adamkiewicza-Hopkinsa (odczyn na tryptofan)

W środowisku kwaśnym tryptofan ulega sprzęganiu z aldehydami, dając barwne produkt kondensacji.
Do wykrywania tryptofanu i białek go zawierających najczęściej wykorzystuje się kwas glioksalowy lub
formalinę.
COOH COOH HOOC
NH2 O NH2 NH2

-H2O
OH H
2 +
H C
N N N
H O COOH
H H
10.1.6.6 Odczyn Sakugachiego na argininę

Arginina i inne pochodne guanidyny pod wpływem podbrominu sodu utleniają się i ulegają sprzęganiu
z α-naftolem do barwnych produktów. Dalsze utlenianie produktu prowadzi do odbarwienia roztworu na skutek
rozpadu układu amidynowego.
OH O
COOH
H COOH
NaBrO H
N NH2 +
H2N N
H2N
NH
NH2
10.1.6.7 Odczyn Pauliego na histydynę

Związki imidazolowe, w tym histydyna, dają czerwone produkty w reakcji diazowania z kwasem
sulfanilowym. Powstałe produkty wykazują zmiany barwy w zależności od pH.
HO3S
COOH N2+ Cl-

+
N N + HCl
NH NH2 N
HO3S
COOH
N
NH NH2
108
10.1.6.8 Reakcje aminokwasów siarkowych
W reakcji cysteiny lub cystyny z gorącym roztworem NaOH powstaje siarczek sodu który w obecności
rozpuszczalnych soli ołowiu(II) tworzy czarny osad PbS.
10.1.7 Strącanie, denaturacja i wysalanie białek.

Białka wykazują dużą zmienność rozpuszczalności w zależności od pH roztworu, jego siły jonowej,
stałej dielektrycznej rozpuszczalnika oraz temperatury.
Dodanie do wodnego roztworu białka mniej polarnego rozpuszczalnika, np.: etanolu czy acetonu,
powoduje obniżenie względnej przenikalności elektrycznej układu. W efekcie obniża się stopień hydratacji i
rozpuszczalność białek i peptydów. Wprowadzenie odpowiednio dużej ilości takiego rozpuszczalnika powoduje
wytrącenie się białka.
Większość białek wykazuje najmniejszą rozpuszczalność w roztworze o pH bliskim ich punktowi
izoelektrycznemu. W punkcie tym ładunek cząsteczki białka wynosi zero, zatem na cząsteczki nie działają
odpychające siły elektrostatyczne (w pH różnym od punktu izoelektrycznego molekuły białka są obdarzone
ładunkiem, zatem, na skutek oddziaływań coulombowskich odpychają się), co sprzyja agregacji molekuł białka.
Ze względu na występowanie w cząsteczkach białek aminokwasów zasadowych lub kwasowych, na powierzchni
molekuły tworzą się często centra (rejony), obdarzone lokalnym ładunkiem. By zapobiec oddziaływaniom
przyciągającym miejscowych różnoimiennych ładunków pomiędzy molekułami protein, konieczna jest obecność
w roztworze pewnej ilości jonów, które poprzez oddziaływania elektrostatyczna wiążą się z cząsteczkami białka,
równoważąc w ten sposób ładunki lokalne, a co za tym idzie, zapewniając symetrię rozkładu potencjału
elektrycznego i, gromadząc się na powierzchni cząsteczki, znoszą międzymolekularne oddziaływania
elektrostatyczne, dodatkowo podwyższając stopień hydratacji, uniemożliwiając tym samym agregację i
wytrącanie peptydu. Efekt ten, polegający na zwiększeniu rozpuszczalności białek w wyniku dodania pewnej
ilości związków jonowych do roztworu obserwuje się szczególnie wyraźnie dla białek o dużej asymetrii
rozkładu ładunków (np.: albuminy). Z drugiej strony, dodatek dużej ilości związków jonowych powoduje
wytrącanie białek (tzw. wysalanie). Jest to spowodowane odciąganiem cząsteczek wody, solwatującej molekuły
białka, przez wprowadzone do roztworu jony soli których hydratacja jest bardziej uprzywilejowana. Zniszczenie
otoczki solwatacyjnej powoduje pojawienie się oddziaływań elektrostatycznych pomiędzy cząsteczkami białka i
w następstwie ich aglomerację a w następstwie wypadanie z roztworu. Fakt, iż różne białka wytrącają się z
roztworu przy różnym stężeniu czynnika wysalającego, stosowany jest do frakcjonowania mieszanin białek.
Procesy wysalanie i wytrącania rozpuszczalnikami organicznymi nie mają większego wpływu na przestrzenną
strukturę białka.
Denaturacją nazywamy takie procesy, przeprowadzone drogami fizycznymi lub chemicznymi, które
prowadzą do zmiany w strukturze białka, co prowadzi do utraty bądź zmniejszenia aktywności lub innej cechy
charakterystycznej tego białka, przy czym struktura pierwszorzędowa pozostaje niezmieniona. Procesy
denaturacji wiążą się ze zniszczeniem wiązań wodorowych, stabilizujących drugo- trzecio- i czwartorzędową
strukturę proteiny, oraz, w warunkach redukujących, rozerwaniem mostków (wiązań) disiarczkowych. W
przypadku denaturacji łańcuch białkowy traci swoją, stabilizowaną niekowalencyjnymi oddziaływaniami oraz
wiązaniami disulfidowymi, konformację i przechodzi, na skutek drgań termicznych, w strukturę
nieuporządkowaną, o charakterze statystycznym (tzw. kłębek statystyczny). Forma taka nie wykazuje
aktywności biologicznej. Usunięcie czynnika denaturującego powoduje wytworzenie wiązań wodorowych oraz
disiarczkowych między różnymi miejscami łańcucha w sposób przypadkowy, a co za tym idzie ustabilizowanie
nieaktywnej struktury. Umieszczenie białka w formie kłębka statystycznego w buforze o pH fizjologicznym,
odpowiedniej sile jonowej i w warunkach pozwalających na zerwanie nieprawidłowych mostków S-S, prowadzi
zazwyczaj do powolnej odbudowy aktywnej formy proteiny. Czynnikiem stosowanym do zrywania wiązań
wodorowych jest za zwyczaj stężony roztwór mocznika lub guanidyny (oba związki charakteryzują się wieloma
centrami protonodonorowymi i protonoakceptorowymi, co w połączeniu z ich małymi rozmiarami umożliwia im
konkurowanie z wewnątrzcząsteczkowymi wiązaniami wodorowymi molekuły białka). Niszczeniu struktury
drugorzędowej wielu protein sprzyja także pH mocno kwaśne bądź mocno zasadowe. Do zrywania mostków
disiarczkowych używa się merkaptoetanolu, który, sam tworząc dimer, oddaje protony cząsteczce białka.
Denaturacja pociąga za sobą również zmiany rozpuszczalności oraz położenie punktu izoelektrycznego
(wyeksponowanie nowych grup zjonizowanych). Do fizycznych metod denaturacji należą: ogrzewanie,
naświetlanie promieniowaniem ultrafioletowym, rentgenowskim lub jonizującym, działanie ultradźwiękami
oraz, w niektórych przypadkach, silne mieszanie.
Jony metali ciężkich również wytrącają białka z roztworu. Mechanizm tego procesu polega na
tworzeniu soli oraz kompleksów metali ciężkich (np.: ołowiu, rtęci, srebra, miedzi, kadmu itd.) z białkami -
białczanów. W tworzeniu tego typu wiązań uczestniczą wolne reszty karboksylanowe (aminokwasów kwaśnych
109
lub C-terminalnych), aminowe (aminokwasów zasadowych lub N-terminalnych), guanidynowe, imidazolowe i
indolowe (Arg, His i Trp) oraz, w wiązaniu rtęci, ołowiu, złota, srebra i kadmu, reszty SH. Połączenia te
charakteryzują się małymi wartościami stałych dysocjacji oraz niewielkimi iloczynami rozpuszczalności. W
białczanach białko jest zatem anionem lub ligandem.
Właściwości kationowe cząsteczek białek wykorzystuje się podczas ich wytrącania za pomocą anionów.
Tworzenie soli białek z jonami kwasów takich jak trichlorooctowy, sulfosalicylowy czy fosforowolframowy
możliwe jest dzięki obecności w molekule proteiny reszt aminowych, argininowych, imidazolowych i
indolowych.
110
10.2 Aminokwasy i białka – część eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie z podstawowymi reakcjami i właściwościami białek i aminokwasów.
Wzory aminokwasów, enancjomery, diastereoizomery, konformery, aminokwasy egzo- i endogenne,

aminokwasy jako jony obojnacze, punkt izoelektryczny, reakcje charakterystyczne dla aminokwasów, wiązanie
peptydowe, białka, koloidy, struktura I, II, III i IV rzędowa protein, reakcje charakterystyczne dla białek,
wysalanie i denaturacja.
ODCZYNNIKI
15% HgSO4 w 3 M H2SO4 1M CH3COOH formalina
30% NaOH (NH4)2SO4 nasycony roztwór kwas glioksalowy
0,1% ninhydryna w acetonie 5% HgCl2 tryptofan
50% NaOH 5% Cu(CH3COO)2 H2SO4 stęż.
0,01 M CuSO4 10% CCl3COOH arginina
10% NaOH 20% kwas sulfosalicylowy histydyna
5% Pb(CH3COO)2 30% kwas fosforowolframowy kazeina
5% alfa-naftol w etanolu 0,1 M HCl 1M NaOH
podbromin sodu (roztwór Br2 0,9 % NaCl błękit bromotymolowy
w 10% NaOH) żelatyna zieleń bromokrezolowa
kwas sulfanilowy w HCl NaNO2 mocznik
20% NaOH HNO3 stęż.
UWAGA: Wodorotlenek sodu, kwas siarkowy, trichlorooctowy, solny, azotowy oraz formalina są silnie
żrące. Sole rtęci i ołowiu są toksyczne. Pracując z nim obowiązuje stosowanie rękawic ochronnych i
okularów.
Przygotuj:
5 cm3 roztworu chlorowodorku argininy (rozpuść niewielką ilość aminokwasu w 5 cm3 1 M HCl)
5 cm3 roztworu chlorowodorku histydyny (rozpuść niewielką ilość aminokwasu w 5 cm3 1 M HCl)
5 cm3 roztworu chlorowodorku tryptofanu (rozpuść niewielką ilość aminokwasu w 5 cm3 1 M HCl)
50 cm 3 1 % roztworu żelatyny (odważoną ilość żelatyny wsyp do 20 cm3 gorącej wody, pozostaw na 20 minut
do spęcznienia, a następnie rozpuść w temperaturze wrzenia i rozcieńcz do 50 cm3)
50 cm3 ok. 3% roztworu albuminy (dopełnij białko jaja do objętości 50 cm3 a następnie dokładnie wymieszaj)
5 cm3 5% roztworu azotynu sodu
OPIS ĆWICZENIA
a. Reakcja Millona
Do dwóch probówek nalej po 3 ml 2% roztwór albuminy i 1 % żelatyny. Dodaj 1 ml 15% roztworu

siarczanu rtęci w 3M kwasie siarkowym i ogrzewaj na wrzącej łaźni wodnej przez 10 minut. Następnie dodaj 1
ml 1% roztworu azotynu sodu. Które z białek wykazuje intensywniejsze zabarwienie roztworu.
b. Odczyn ksantoproteinowy
Do 3 ml roztworów żelatyny i albuminy umieszczonych w dwóch probówkach dodaj po 1 ml stężonego

kwasu azotowego i ogrzej do wrzenia nad palnikiem. Po ochłodzeniu dodawaj kroplami 30% roztwór NaOH do
zalkalizowania roztworu. Co dzieje się po dodaniu kwasu, jak zachowuje się białko po ogrzaniu z HNO3 a jak po
zalkalizowaniu.
111
c. Reakcja ninhydrynowa
Do 3 ml roztworów białek dodaj 0,5 ml 0,1% roztworu ninhydryny w acetonie. Roztwory ogrzej do
wrzenia i zanotuj wynik reakcji.
d. Odczyn biuretowy
Do 3 ml roztworów białek umieszczonych w 2 probówkach dodaj po 1 ml nasyconego roztworu NaOH

i zamieszaj. Dodaj 1-5 krople 0,01 M roztworu siarczanu miedzi. Wystąpienie niebiesko-fioletowej barwy
świadczy o obecności białek. Przeprowadź analogiczną reakcję używając roztworu mocznika zamiast białka.
e. Wykrywanie aminokwasów siarkowych
Do dwóch probówek wlej po 3 ml używanych poprzednio roztworów białek. Do daj po 3 ml 10%

roztworu NaOH a następnie dodaj 2-3 krople 5% roztworu octanu ołowiu. Mieszaninę ogrzewać do wrzenia.
Czarne zabarwienie pochodzące od siarczku ołowiu świadczy o obecności siarki.
f. Wykrywanie tryptofanu (reakcja Adamkiewicza-Hopkinsa)
Do 1 ml 1% roztworu tryptofanu dodaj 1 ml roztworu kwasu glioksalowego lub formaliny, zamieszaj i

wprowadź, po ściance, 1 ml stężonego kwasu siarkowego. Reakcję powtórz z roztworem albuminy.
h, Wykrywanie argininy (odczyn Sakaguchiego)
Do 1 ml roztworu argininy dodaj 2-3 krople 5% roztworu α-naftolu w etanolu, zamieszaj a następnie
dodawaj kroplami roztwór podbrominu sodu. Czerwone zabarwienie wskazuje na obecność argininy. Reakcję
powtórz z roztworem albuminy.
i. Wykrywanie histydyny (odczyn Pauly’ego)
Do 1 ml roztworu histydyny dodaj 2 ml kwasu sulfanilowego (0,9 g kwasu sulfanilowego rozpuść w 9

ml stężonego HCl i rozcieńczyć wodą destylowaną do 100 ml) oraz 1 ml 5% roztworu NaNO2 (świeżo
przygotowanego), następnie zamieszaj i dodaj 1 ml 20% NaOH. Histydyna daje barwę żółto-czerwoną. Reakcję
przeprowadź również dla roztworu albuminy.
j. Wytrącania izoelektryczne białek
Do probówki wlej 2 ml 2% roztworu albuminy i ogrzewaj na wrzącej łaźni wodnej przez kilka minut, a
następnie dodaj 2 krople 1 M roztworu kwasu octowego. Powstaje obfity osad wytrąconego białka.
k. Wytrącanie silnym elektrolitem
Do 2 ml roztworu albuminy wlej taką samą objętość nasyconego roztworu siarczanu amonu.
Zaobserwuj zmiany.
l. Wytrącanie jonami metali ciężkich
Do 3 probówek wlej po 2 ml roztworu albuminy. Do pierwszej dodawaj kroplami 5% roztwór chlorku

rtęci(II), do drugiej 5% roztwór octanu ołowiu a do trzeciej 5% roztwór azotanu miedzi. Po dodaniu każdej
kropli mieszaj roztwór. Po ile kropel każdego z roztworów trzeba dodać w celu uzyskania zmętnienia a ile w
celu uzyskania osadu.
ł. Wytrącania anionem
W trzech probówkach umieść po 2 ml roztworu albuminy a następnie dodawaj kroplami następujące

odczynniki:
- 10% roztwór kwasu trichlorooctowego
- 20% roztwór kwasu sulfosalicylowego
- 32% roztwór kwasu fosforowolframowago
Zanotuj, ile potrzeba kropli każdego z odczynników w celu uzyskania trwałego osadu.
112
m. Wytrącanie alkoholem
Do 2 ml roztworu albuminy dodaj 10 ml 96% etanolu i probówkę odstaw na 5-10 minut. Osad odwiruj i
sprawdź jego rozpuszczalność w:
- wodzie destylowanej
- 0,9% roztworze NaCl
- 0,1 M roztworze HCl
n. Wyznaczanie punktu izoelektrycznego kazeiny
Do kolbki miarowej o pojemności 50 cm3 wsyp 0,25 g kazeiny i dodaj 25 ml wody destylowanej
(ogrzanej uprzednio do 400C) oraz 5 cm3 1 M roztworu NaOH. Zawartość naczynia mieszaj do całkowitego
rozpuszczenia białka a następnie dodaj 5 cm3 1 M roztworu CH3COOH i uzupełnij wodą do kreski. Otrzymuje
się w ten sposób roztwór kazeiny w 0,1 M roztworze octanu sodu.
Przygotuj 9 probówek. Do pierwszej odmierz 3,2 cm3 1 M roztworu kwasu octowego i 6,8 cm3 wody a
następnie dokładnie wymieszaj. Do pozostałych ośmiu probówek wlej po 5 cm3 wody destylowanej. Następnie
przenieś 5 cm3 roztworu z pierwszej probówki do drugiej, a z niej, po wymieszaniu, przelej 5 cm3 do trzeciej itd.
Następnie do każdej z probówek dodaj 1 cm3 otrzymanego na wstępie roztworu kazeiny i jej zawartość
zamieszaj. Zaobserwuj zmiany w wyglądzie zawartości probówek zaraz po wymieszaniu oraz po 30 minutach.
pH w buforu octanowego uzyskanego w dziewięciu kolejnych probówkach wynosi odpowiednio: 3,5; 3,8; 4,1;
4,4; 4,7; 5,0; 5,3; 5,6 oraz 5,9. W której probówce wystąpił najobfitszy osad białka? Ile wynosi punkt
izoelektryczny kazeiny.
o. Właściwości amfoteryczne białek
Przygotuj cztery probówki. Do 1 i 3 wlej po 5 cm3 wody destylowanej natomiast do 2 oraz 4 taką samą
objętość roztworu żelatyny. Następnie do 1 i 2 probówki dodaj 2-3 krople roztworu zieleni bromokrezolowej zaś
do 3 i 4 roztwór błękitu bromotymolowego. Do próbek 1 i 2 wkraplaj (licząc ilość kropli dodanych do każdej z
probówek) 0,01 M HCl do zmiany zabarwienia roztworu na żółte. Z kolei do probówek 3 i 4 dodawaj kroplami
0,01 M NaOH do momentu uzyskania barwy niebieskiej. Porównaj objętość roztworu kwasu oraz roztworu
zasady potrzebne do wywołania zmiany barwy wskaźnika w probówkach zawierających wodę destylowaną oraz
roztwór białka.
113
114
11 Ćwiczenie 7
11.1 Sacharydy – wstęp teoretyczny
Sacharydy (węglowodany) to grupa związków organicznych, będących integralnymi składnikami
komórek roślinnych i zwierzęcych, o charakterze alkoholi wielowodorotlenowych zawierających grupy
aldehydowe bądź ketonowe. Sacharydy dzielimy na cukry proste (monosacharydy) i złożone (polisacharydy i
oligosacharydy).
11.1.1 Monosacharydy
Monocukry, będące pod względem chemicznym wieloalkoholoaldehydami (aldozy) lub
wieloalkoholoketonami (ketozy), dzielą się w zależności od liczby węgli w cząsteczce na triozy, tetrozy,
pentozy, heksozy, heptozy itd. Mówimy zatem np. o aldotriozach, ketoheksozach itp. Numerację łańcucha
węglowego węglowodanu rozpoczyna się od grupy aldehydowej (w przypadku aldoz) lub grupy
hydroksymetylenowej połączonej z grupą ketonową (w przypadku ketoz).
CH2OH C-1 CH2OH
HC OH C-2 C O
HO CH C-3 HO CH
HO CH C-4 HO CH
HC OH C-5 HC OH
CH2OH C-6 CH2OH
Grupa karbonylowa w naturalnych ketozach występuje na atomie węgla C-2. Wszystkie cukry posiadają w
cząsteczkach centra chiralności zatem wraz ze wzrostem długości łańcucha węglowego wzrasta liczba
możliwych izomerów. W zależności od konfiguracji przy przedostatnim (licząc od grupy karbonylowej) atomie
węgla dzielimy je na D oraz L. Cukry proste możemy ułożyć w szereg, w zależności od liczby atomów węgla.
Na poniższym rysunku przedstawiono szereg D aldoz.
CHO
HC OH
CH2OH
aldehyd D-glicerynowy
CHO CHO
HC OH HO CH
HC OH HC OH
CH2OH CH2OH
D-erytroza D-treoza
CHO CHO CHO CHO
HC OH HO CH HC OH HO CH
HC OH HC OH HO CH HO CH
HC OH HC OH HC OH HC OH
CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH
D-ryboza D-arabinoza D-ksyloza D-liksoza

CHO CHO CHO CHO CHO CHO CHO CHO
HC OH HO CH HC OH HO CH HC OH HO CH HC OH HO CH
HC OH HC OH HO CH HO CH HC OH HC OH HO CH HO CH
HC OH HC OH HC OH HC OH HO CH HO CH HO CH HO CH
HC OH HC OH HC OH HC OH HC OH HC OH HC OH HC OH
CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH
D-alloza D-altroza D-glukoza D-mannoza D-guloza D-idoza D-galaktoza D-taloza
115
Podobny szereg utworzyć można dla ketoz
CH2OH
C O
HC OH
CH2OH
D-erytruloza
CH2OH CH2OH
C O C O
HC OH HO CH
HC OH HC OH
CH2OH CH2OH
D-rybuloza D-ksyluloza
C O C O C O C O
HC OH HO CH HC OH HO CH
HC OH HC OH HO CH HO CH
HC OH HC OH HC OH HC OH
D-aluloza D-fruktoza D-sorboza D-tagatoza
Związki o tej samej liczbie atomów węgla, należące do poszczególnych szeregów są względem siebie
diastereoizomerami. Parę diastereoizomerów różniących się tylko konfiguracją wokół atomu węgla C-2 (w
przypadku ketoz C-3) nazywamy epimerami. Parami epimerów są zatem np.: alloza i altroza, glukoza i mannoza,
ksyloza i liksoza itd.
Znaną właściwością alkoholi jest uleganie szybkim, odwracalnym reakcjom addycji nukleofilowej do
grup karbonylowych aldehydów i ketonów, dając hemiacetale i acetale.
O OH
-H2O
OR4
+ R3 OH + R4 OH
R1 R2 +H2O
R1 R2 R1 R2
OR3 OR3
hemiacetal acetal
Obecność, w cząsteczkach cukrów, grup hydroksylowych i karbonylowej umożliwia tworzenie się tego typu
połączeń na skutek procesów wewnątrzcząsteczkowej addycji grupy –OH, oddalonej o cztery lub pięć atomów
węgla od reszty C=O. Efektem tego procesu jest powstawanie hemiacetalowych form cyklicznych o
pierścieniach pięcio- lub sześcioczłonowych, nazywanych odpowiednio furanozami lub piranozami.
CHO
HC OH
HO CH
HC OH
OH HO
CH2OH OH H
H
OH O O
D-ksyloza OH
OH
OH
OH
HO HO
O O OH O O OH
OH OH OH OH
OH OH OH
OH
OH OH OH OH
α−D-ksylopiranoza β−D-ksylopiranoza α−D-ksylofuranoza β−D-ksylofuranoza
116
Oczywiście atak grupy hydroksylowej na węgiel karbonylowy może odbywać się z dwu stron (od góry lub od
dołu) płaszczyzny grupy karbonylowej, otrzymujemy zatem mieszaninę produktów (tzw. anomerów) z grupą
hydroksylową, połączoną z pierwszym (w przypadku ketoz z drugim) atomem węgla, nazywanym centrum
anomerycznym, skierowaną w górę (izomer β) lub ku dołowi (izomer α). W roztworach mamy zazwyczaj do
czynienia z równowagą pomiędzy izomerami α i β form piranozowych i furanozowych. Aldopentozy i
ketoheksozy występują zazwyczaj w formach pięcioczłonowych, aldoheksozy zaś w formach
sześcioczłonowych. Pierścienie trój- i czteroczłonowe, ze względu na efekty steryczne, nie tworzą się. Z reguły
formy β sacharydów są bardziej trwałe (mają niższą energię) niż formy α, co powoduje iż przeważają one w
roztworze. Szybkość przejść jednego anomeru w drugi jest często na tyle mała że możliwe jest ich
rozseparowanie. Z punktu widzenia stereochemii anomery są diastereoizomerami, różnią się zatem wartościami
współczynników skręcalności. Na przykład α-D-glukopiranoza ma skręcalność właściwą wynoszącą
[α]D=+112,20, natomiast dla β-D-glukopiranozy wielkość ta wynosi +18,70. Jeśli rozpuścimy w wodzie czystą
próbkę jednego z anomerów będziemy obserwować powolną zmianę skręcalności, aż do osiągnięcia wartości
+52,60. Jest to efekt występowania równowagi pomiędzy formami cyklicznymi a formą liniową. Po
rozpuszczeniu jednego z anomerów, na skutek rozpadu wiązania C-O tworzy się niewielka ilość formy
łańcuchowej (w stanie równowagi około 0,5%), która może ulegać cyklizacji do jednej z dwu form
anomerycznych.
CHO
CH2OH CH2OH
HC OH
O O OH
HO CH
OH OH
HC OH
HO OH HO
HC OH
OH OH
CH2OH
W stanie równowagi, dla glukozy, stosunek izomeru β do α wynosi 64:36. Proces ustalania się równowagi
pomiędzy formami anomerycznymi nazywamy mutarotacją.
Pierścienie cukrowe, podobnie jak cykloalkany, występują w kilku, różnych pod względem energetycznymi
konformacjach, pomiędzy którymi w roztworach ustala się równowaga. Stabilne są konformacje krzesłowe, przy
czym najbardziej uprzywilejowana jest ta, w której maksymalna liczba podstawników znajduje się w położeniu
ekwatorialnym, w szczególności zaś najbardziej objętościowa grupa hydroksymetylenowa. Spośród heksoz
jedynie β anomer glukozy może przyjąć strukturę, w której wszystkie podstawniki znajdują się w tym położeniu,
czym tłumaczy się wyjątkową trwałość i rozpowszechnienie glukozy w przyrodzie.
Monosacharydy pełnią ważne funkcje, zarówno w stanie wolnym, jak i w formie związanej.
Tabela 6. Ważniejsze monosacharydy i ich występowanie

Występowanie
Cukier
w stanie wolnym w stanie związanym
L-Arabinoza w rdzeniu drewna drzew iglastych (np.: glikozydy, hemicelulozy, gumy,
Picea) oraz buka polisacharydy bakteryjne, pektyny, lektyny
D-Ksyloza gumy, śluzy, hemicelulozy, ksylany
D-Ryboza kwasy nukleinowe, nukleotydy, koenzymy
D-Rybuloza we wszystkich roślinach w niewielkich fosforylazy
ilościach
D i L-Ksyluloza mocz chorych na pentozurię
D-Galaktoza owoce bluszczu, soja, kora wiązu, mocz i glikozydy, glikolipidy, oligosacharydy
krew chorych na galaktozemię mleka, hemicelulozy, śluzy
L-Galaktoza nasiona lnu, łodygi kukurydzy agar, śluzy nasion lnu, niektóre gumy
D-Glukoza owoce, soki i tkanki roślinne, miód, krew, liczne oligosacharydy, celuloza, skrobia,
płyn mózgowo-rdzeniowy, mocz glikogen, pektyny, laminaran, izolichenina
D-Mannoza w pewnych gatunkach mchów i innych mannany, hemicelulozy, śluzy
roślin torfotwórczych, łupiny pomarańczy
D-Taloza antybiotyki
D-Fruktoza owoce, soki i tkanki roślinne, plazma oligosacharydy, inulina, lewan
nasienia, w moczu chorych na cukrzycę i
fruktozurię
L-Sorboza fermentujące owoce, owoce jarzębiny, porosty
niektóre porosty
Sedoheptuloza we wszystkich roślinach
D-Mannoheptuloza owoce Persea gratissima, korzeń
pierwiosnka wyniosłego
117
11.1.2 Oligosacharydy
Jak wspomniano wcześniej, w wyniku reakcji grupy karbonylowej z grupą hydroksylową tworzą się
hemiacetale. Związki te mogą reagować z kolejną cząsteczką alkoholu, tworząc acetale. Reakcja ta jest
odpowiedzialna za łączenie się kilku cząsteczek monosacharydów, co prowadzi do powstania oligosacharydów i
polisacharydów. O oligosacharydach mówimy w przypadku cząsteczek złożonych z mniej niż 10 fragmentów
monocukrów (nazywamy je np.: mono-, di-, tri-, tetrasacharydami itd.). Związki o większych cząsteczkach
nazywamy polisacharydami. Wiązanie pomiędzy dwoma molekułami monosacharydów nazywamy wiązaniem
glikozydowym. W zależności od konfiguracji wokół węgla C-1, mówimy o wiązaniu β-glikozydowym (atom
tlenu skierowany ponad płaszczyznę) lub o wiązaniu α-glikozydowym (atom tlenu skierowany pod
płaszczyznę).
CH2OH
O CH2OH CH2OH
CH2OH O O
O O ∴α
β
O
Wzory ważniejszych oligosacharydów prezentuje Tabela 7.
Tabela 7. Ważniejsze oligosacharydy i ich występowanie

Nazwa zwyczajowa i
Wzór strukturalny Występowanie
systematyczna
CH2OH CH2OH
produkt hydrolizy skrobi, występuje w
O O Maltoza
OH OH
wielu organach roślinnych (w
O
szczególności w korzeniach), w
OH OH 4-(α-D-glukozydo)-D-glukoza
owocach bananowca
OH OH
CH2OH
O
CH2OH OH Celobioza
O
produkt rozpadu celulozy i licheniny,
O OH
OH
składnik niektórych glikozydów
OH 4-(β-D-glukozydo)-D-glukoza
OH
OH
CH2OH CH2OH
DISACHARYDY
O O Trehaloza rozpowszechniona wśród grzybów,

OH OH glonów, bakterii, występuje w
O organizmach bezkręgowców
OH OH 1-(α- D-glukozydo)-α-D-glukoza
OH OH
CH2OH
O
CH2OH OH Laktoza główny cukier mleka, składnik pyłku
O O OH niektórych roślin (np.: forsycji),
OH składnik glikozydów
OH 4-(β-D-galaktozydo)-D-glukoza
OH
OH
CH2OH
O
OH
OH Sacharoza składnik energetyczny trzciny

CH2OH O
OH O cukrowej, buraka cukrowego oraz
2-(α-D-galaktozydo)-β-D-fruktoza innych roślin
OH
CH2OH
OH
118
11.1.3 Pochodne monosacharydów, monosacharydy o nietypowej budowie
Produkty przemian monocukrów jak również monosacharydy o nietypowej budowie, występują
powszechnie w tkankach roślinnych i zwierzęcych, w których gromadzą się często w dużych ilościach i pełnią
ważne funkcje strukturalne i fizjologiczne. Możemy wyróżnić kilka zasadniczych grup pochodnych cukrów, w
zależności od ich charakteru chemicznego:
• aminocukry – są to związki o szkielecie cukrowym, zawierające grupę aminową w miejsce hydroksylowej.
Grupa -NH2 jest często zacetylowana. Związki te wchodzą w skład wielu substancji wielkocząsteczkowych,
np.: chityny czy mukopolisacharydów. Do najważniejszych związków z tej grupy należą glukozoamina i jej
acetylopochodna, kwas muraminowy oraz kwas neuraminowy. Dwa ostatnie związki wchodzą w skład
antygenów komórkowych, występują w wątrobie, nadnerczu, tkance nerwowej, nasieniu, mleku i śluzie
żołądka. Są elementami budulcowymi niektórych hormonów glikopeptydowych.
CH2OH
OH
CH2OH CH2OH CH3CH2OH HO
O O O O OH
OH OH HOOC O OH
OH OH OH OH OH OH NH2 COOH
NH2 H3C NH H3C NH
O O
glukozoamina N-acetyloglukozoamina kwas muraminowy kwas neuraminowy
• kwasy aldonowe – są to związki powstające w wyniku utlenienia w cząsteczce aldozy grupy aldehydowej
(C-1) do karboksylowej. W organizmach żywych występują stosunkowo rzadko, jednakże u większości
organizmu stwierdzono istnienie aparatu enzymatycznego umożliwiającego przekształcenie cukrów
(glukozy i galaktozy) w odpowiednie kwasy aldonowe. Produkowane są przez wiele gatunków bakterii i
kropidlaki. Stanowią produkty pośrednie w procesach skracania łańcucha węglowego. Pochodne o
charakterze kwasów aldonowych, powstałe z disacharydów nazywamy kwasami aldobionowymi. Ich
funkcje w komórkach również nie są do końca wyjaśnione.
COOH COOH
HO OH
OH OH
HO HO
HO HO
CH2OH CH2OH
kwas L-glukonowy kwas L-mannonowy
• kwasy uronowe – są efektem utlenienia końcowej grupy alkoholowej aldozy. Mają one znacznie większe
znaczenie niż kwasy aldonowe. Biorą udział w procesach skracania łańcucha węglowego sacharydu, są
produktami pośrednimi w syntezie polisacharydów oraz uczestniczą w wydalaniu metabolitów i
detoksykacji organizmu.
COOH COOH
HO
O O OH
OH OH
OH OH
OH OH
kwas glukuronowy kwas galakturonowy
119
• kwasy aldarowe – są produktami powstałymi z aldoz na skutek utlenienia obu skrajnych atomów węgla.
Przykładem może być kwas glukarowy.
COOH
HO
OH
HO
HO
COOH
kwas D-glukarowy
• estry sacharydów – na skutek estryfikacji grup hydroksylowych resztami kwasów nieorganicznych

(głównie siarkowego(VI) i fosforowego(V)) powstają pochodne pełniące istotne funkcje metaboliczne i
strukturalne. Fosforany monosacharydów stanowią intermedianty w wielu ważnych procesach
biochemicznych (glikoliza, cykl Kelvina, glikoneogeneza) i są elementami wielu ważnych biologicznie
cząsteczek (nukleozydy, ATP i inne wysokoenergetyczne związki fosforowe, NADH i inne koenzymy). W
pentozach estryfikacji ulegają głównie pozycje C-1, C-5 oraz C-3, w heksozach C-1 i C-6. Siarczany(VI)
występują jako składniki polisacharydów (agar, karnegina). Reszta kwasu siarkowego przyłączona jest
zazwyczaj do grup hydroksylowych związanych z węglami C-5 lub C-6.
CH2OH CH2OH
O O
OH OH
OH
HO O OH HO O OH
P S
OH O O OH
O
α−D-glukozo-1-fosforan α−D-glukozo-5-siarczan
• Alkohole wielowodorotlenowe – związki z tej grupy są produktami redukcji grup aldehydowych lub
ketonowych sacharydów. Alkoholowe pochodne cukrów dzieli się na alifatyczne (liniowe), czyli alditole,
oraz cykliczne, traktowane jako pochodne cykloheksanu, czyli cyklitole. Alkohole poliwodorotlenowe
powstają przez bezpośrednią redukcję wolnych monosacharydów z udziałem dehydrogenaz. Alkohole te
mogą stanowić produkty pośrednie przemian aldoz w ketozy. Kilka z nich występuje powszechnie jako
składniki substancji zawartych we wszystkich organizmach żywych, np.: glicerol wchodzący w skład
lipidów, rybitol będący składnikiem koenzymów flawinowych. Niektóre stanowią materiały zapasowe.
Wiele z nich występuje również w stanie wolnym jako składnik tkanek roślinnych (rzadziej zwierzęcych).
Spośród tetrytoli i pentytoli (polialkoholi zawierających cztery lub pięć atomów węgla) wymienić należy
erytrytol (produkt redukcji erytrozy) występuje w znacznych ilościach w glonach, grzybach, mchach i
porostach, rybitol (powstaje z rybozy) jest substancją zapasową niektórych roślin wyższych (znaleziono go
w bulwach tojadu oraz nadziemnych częściach miłka wiosennego), arabitol (substancjami macierzystymi są
ksyloza i rybuloza) znaleziono w porostach, grzybach oraz niektórych roślinach wyższych. Z heksytoli
najważniejszymi są mannitol (tworzy się przez redukcję fruktozy), występujący w tkankach roślin wyższych
oraz u glonów i grzybów gdzie pełni funkcje substancji regulujących ciśnienie osmotyczne, gdyż ze
względu na swoją nieaktywność fizjologiczną może gromadzić się w organizmach w dużych ilościach, nie
wpływając na przebieg procesów biochemicznych. Znaleziono go również w formie związanej w wielu
brunatnicach, gdzie występuje jako jeden z głównych produktów fotosyntezy. Sorbitol (powstaje z glukozy,
sorbozy lub fruktozy) występuje w znacznych stężeniach w soku owoców oraz tkankach roślin z rodziny
różowatych jak również w wielu glonach. Pełni funkcje zapasowe.
CH2OH CH2OH
CH2OH CH2OH
CH2OH HC OH HC OH
CH2OH HC OH HO CH
HC OH HC OH HO CH
HC OH HC OH HO CH
HC OH HC OH HO CH
CH2OH HC OH C OH
CH2OH HC OH HC OH
CH2OH CH2OH
CH2OH CH2OH
glicerol erytrytol D-rybitol D-arabitol D-mannitol sorbitol

Cyklitole są substancjami o charakterze alkoholi, biogenetycznie pochodzące od 6-fosforanu glukozy. Są to
pochodne wielohydroksycykloheksanu (liczba grup –OH wynosi zazwyczaj 6, choć znane są również
tetrahydroksy i pentahydroksypochodne). Związki z tej grupy są szeroko rozpowszechnione zarówno w
świecie roślinnym jak i zwierzęcym. Odgrywają rolę jako składniki fosfolipidów oraz błon komórkowych.
120
Ich pochodne fosforanowe (np.: kwas fitynowy) jest dla organizmów roślinnych rezerwuarem fosforu.
Pełnią również funkcję materiałów zapasowych. Najbardziej rozpowszechniony jest mezo-inozytol,
występujący we wszystkich organizmach żywych, Traktuje się go jako witaminę dla wielu gatunków
zwierząt, jest również substancję wzrostową dla grzybów niższych. L-inozytol wchodzi w skład soku
mlecznego wielu roślin (mniszek lekarski, mlecz polny, wilczomlecz), scylitol jest pospolity w tkankach
palm i wielu innych roślin wyższych oraz krasnorostów. Produkty metylowania jednej (np.: sekwoitol) lub
większej ilości grup hydroksylowych (np.: dambonitol) występują w drewnie i pyłku wielu gatunków drzew
iglastych (sekwoja, sosna, cis), tkankach roślin kauczukodajnych i innych roślinach wyższych. Z
deoksycyklitoli najbardziej znane są D-kwercytol (alkohol pięciowodorotlenowy) występujący w dębach
oraz konduritol (4 grupy –OH).
OH OH OH
OH OH OH OH
OH OH OH
OH OH OH
OH OH
OH OH OH
mezo-inozytol L-inozytol scylitol
OH OH OH OH
H3C H3C
O OH O OH
H3C
OH OH OH O OH OH
OH OH OH
OH OH OH OH
sekwoitol dambonitol kwercytol konduritol
• Deoksycukry – produktami redukcji sacharydów mogą być związki pozbawione jednej, lub większej ilości
grup hydroksylowych. Do najważniejszych należy deoksyryboza, składnik DNA. Ramnoza występuje
powszechnie w stanie wolnym (np.: liście sumaka jadowitego) oraz w formie związanej, jako składnik
glikozydów, saponin, gum i śluzów roślinnych, polisacharydów roślin wyższych glonów bakterii i grzybów.
Pełni funkcje zapasowe. W oligosacharydach mleka ssaków, polisacharydach bakteryjnych, glikoproteinach
krwi wykryto inny deoksycukier – L-fukozę. Wchodzi ona ponadto w skład polisacharydów wielu glonów
(tzw. fukozanów), np.: listownicy palczastej oraz gum roślinnych. Izomer D tego związku znaleziono jako
składnik glikozydów roślinnych oraz saponin. Digitoksoza, sacharyd nie zawierający atomów tlenu przy
dwóch atomach węgla występuje jako składnik oligosacharydów naparstnicy.
CH3 CH3 CH3
CH2OH
O O OH O OH O OH
OH OH OH
OH OH OH OH
OH OH OH
2-deoksyryboza L-ramnoza D-fukoza D-digitoksoza

• Cukry o rozgałęzionym łańcuchu, etery metylowe sacharydów – są składnikami oligo- i polisacharydów
roślinnych. W stanie wolnym występują rzadko. Najczęściej spotyka się je w roślinach niższych, zwłaszcza
bakteriach i grzybach. Przykładem może być tewetoza (składnik glikozydów barwinka i innych roślin),
deoksycukier cymaroza (glikozydy w korzeniu naparstnicy i barwinku). Interesującą strukturę na apioza,
pentoza występująca w glikozydach pietruszki, selera i ścianach komórkowych roślin wodnych oraz roślin
kauczukodajnych. Hamameloza wchodzi w skład garbników oczaru.
CH3 CH3
CHO
O OH O OH OH
CH3 O
HC OH HO
O
C
OH OH HOH2C CH2OH OH
OH
OH O OH OH
CH3
D-tewetoza D-cymaroza D-apioza D-hamameloza
121
11.1.4 Polisacharydy
Połączenie wiązaniami glikozydowymi większej ilości cząsteczek monosacharydów prowadzi do
powstania liniowych bądź rozgałęzionych biopolimerów, zwanych polisacharydami. Pełnią one w organizmach
roślinnych i zwierzęcych ważne funkcje strukturalne, zapasowe i fizjologiczne. W zależności od budowy
polisacharydy dzielimy na homoglikany (jeśli składają się z powtarzających się jednakowych elementów) lub
heteroglikany (w przypadku, gdy w ich składzie wyróżniamy więcej niż jeden typ monosacharydu). Większość
polisacharydów pochodzenia naturalnego składa się z setek a nawet tysięcy merów (podjednostek
monocukrowych). Polisacharydy tworzą, ze względu na duże masy cząsteczkowe, koloidy, które w efekcie
występowania dużej liczby grup hydroksylowych na powierzchni cząsteczek, wykazują własności hydrofilowe.
Cząsteczki policukrów różnią się kształtem. Sacharydy o cząsteczkach nitkowatych i nierozgałęzionych, na
skutek tworzenia międzycząsteczkowych wiązań wodorowych, wykazują niską rozpuszczalność. Z drugiej
strony struktury tego typu charakteryzują się dużą odpornością mechaniczną (np.: celuloza). Natomiast cukry
wielkocząsteczkowe o strukturach rozgałęzionych mają mniejszą tendencję do asocjacji, co poprawia ich
rozpuszczalność, jednakże obniża ich wytrzymałość mechaniczną. Ważniejsze polisacharydy zebrano w Tabeli
8.
Tabela 8. Ważniejsze polisacharydy i ich występowanie

Amyloza
Jest liniowym polimerem złożonym z cząsteczek α-D-glukopiranozy połączonych
wiązaniami 1,4-glikozydowymi, średnia masa cząsteczkowa wynosi 10000-20000
u. Łańcuchy amylozy mają tendencję do tworzenia form spiralnie skręconych.
Składnik skrobi (15-25 %).
CH2OH CH2OH
Pełni funkcje zapasowe
O O
OH OH
O O O
OH OH
n
Celuloza
Jest polisacharydem liniowym, zbudowanym z cząsteczek β-D-glukopiranozy
połączonych wiązaniami 1,4-glikozydowymi. Średnia masa cząsteczkowa tego
biopolimeru wynosi 300000-600000 u. Strukturę celulozy stabilizują liczne Najczęściej występujący
wiązania wodorowe. polisacharyd roślinny.
CH2OH CH2OH Główny składnik ścian
O O komórkowych.
O OH OH
O O
OH OH
n
Kaloza
Tworzy liniowe cząsteczki powstałe z około 100 molekuł β-D-glukozy,
połączonych wiązaniami 1,3-glikozydowymi. Składbik floemu (rurek
CH2OH CH OH
sitowych), pojawia się
2
O O
także w tkankach
O O O przyrannych.
OH OH
OH OH
n
Lichenina
Jest polisacharydem liniowym, w skład którego wchodzą cząsteczki β-D-glukozy,
połączone wiązaniami 1,3 oraz 1,4 glikozydowymi, przy czym te pierwsze
stanowią 27% ogólnej liczby wiązań pomiędzy resztami cukrowymi. Niektóre
źródła podają, że jest to sacharyd rozgałęziony. Zbudowana z 150-200 cząsteczek Występuje w licznych
monocukru. porostach oraz roślinach
CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH wyższych.
O O O O
OH OH OH O O
O O O
OH
OH OH OH OH
122
Tabela 8. Ważniejsze polisacharydy i ich występowanie (c.d.)
Inulina
Liniowy polisacharyd zbudowany z cząsteczek β-D-fruktofuranozy, połączonych Występują najczęściej w
wiązaniami 1,2-glikozydowymi. W większości przypadków każda cząsteczka tego organach podziemnych,
cukru zawiera jedną cząsteczkę glukozy. Masa cząsteczkowa wynosi około 5000 u. pełniących funkcje
CH2OH CH2OH zapasowe wielu gatunków
HO HO
roślin wyższych (kosaciec,
O O
topinambur, mniszek
OH OH
HC O HC O
pospolity, cykoria).
2 2
n
Amylopektyna
Polisacharyd rozgałęziony, zbudowany, podobnie jak amyloza, z cząsteczek α-D-
glukopiranozy, połączonych wiązaniami 1,4- oraz, w punktach rozgałęzień, 1,6-
glikozydowymi. Masa molowa wynosi 200000-6000000 u. Każda cząsteczka
zawiera około 50 punktów rozgałęzienia (średnio jedno rozgałęzienia na 25-30
reszt głównego łańcucha).
CH2OH
Główny składnik skrobi
O
OH
(75-85%). Pełni funkcje
zapasowe.
O O
OH CH2 CH2OH
O O
OH OH
O O O
OH OH n
Glikogen
Jest bardzo silnie rozgałęzionym polisacharydem, zbudowanym z cząsteczek α-D-
Zapasowy polisacharyd
glukopiranozy, połączonych wiązaniami 1,4- i 1,6- glikozydowymi (w miejscach
zwierzęcy, występujący w
rozgałęzienia). Na 10-18 reszt cukrowych głównego łańcucha przypada jedno
wątrobie i mięśniach.
rozgałęzienie. Masa oscyluje w granicach 1000000 do 5000000.
(struktura jak w przypadku amylopektyny ale więcej rozgałęzień)
Dekstran
Polisacharyd rozgałęziony, złożony z cząsteczek α-D-glukopiranozy połączonych
wiązaniami 1,6-glikozydowymi. W miejscach rozgałęzień występują wiązania typu
1,2-, 1,3- lub 1,4-.Cząsteczki o bardzo różnej wielkości, do kilkunastu milionów
jednostek masy.
O
Polisacharydy pochodzenia
O
bakteryjnego.
OH
O HO O
O HO O
OH OH
HO O O
HO HO n
Agaropektyna
Polisacharyd liniowy, zawierający łańcuch reszt β-D-galaktopiranozy, połączonych
wiązaniami 1,3-glikozydowymi, z których niektóre zestryfikowane są kwasem
siarkowym. Nie wykazuje tendencji do żelowania.
CH2OSO3H
Składnik agaru, złożonego
OH O
O sacharydu produkowanego
CH2OH
O przez krasnorosty.
OH O
O
OH
OH
n
123
Agaroza
Jest polisacharydem liniowym, którego cząsteczka zbudowana jest z podjednostek
zwanych agarobiozą, połączonych ze sobą wiązaniami 1,3-glikozydowymi.
Fragmenty agarobiozy utworzone są z cząsteczki β-D-galaktopiranozy i 3,6-
anhydro-α-L-galaktopiranozy pomiędzy którymi występuje wiązanie typu 1,4.
Wykazuje tendencje do żelowania. Składnik agaru, złożonego
CH2OH
O
sacharydu produkowanego
OH O O CH2OH przez krasnorosty.
O
O OH OH O
O
O O OH
OH O
OH n
agarobioza
Kwas alginowy
Liniowy polisacharyd zbudowany z podjednostek kwasu β-D-mannuronowego
połączonych wiązaniami 1,4-glikozydowymi. Masa molowa wynosi 12000-120000
u.
COOH COOH Polisacharyd izolowany z
O O
brunatnic.
O OH OH OH OH
O O
Kwasy pektynowe
Zbudowane są z długich łańcuchów kwasu poli(β-D-glukuronowego), utworzonego
z piranozowej formy kwasu β-D-glukuronowego, połączonej wiązaniami 1,4-
glikozydowymi. Część grup karboksylowych jest zestryfikowana metanolem.
Istnieje również możliwość powiązania kilku łańcuchów kwasu pektynowego na
skutek tworzenia wiązań diestrowych za pośrednictwem kwasu fosforowego,
wiążącego grupy OH przy C-2 i C-3 (tzw. protopektyna). Kwas pektynowy posiada
skłonność do tworzenia silnych, wewnątrz- i międzycząsteczkowych wiązań
wodorowych pomiędzy grupami COOH i podstawnikami hydroksylowymi. Substancje zlepiające
Dodatkowo, w niektórych roślinach, wykazano możliwość estryfikacji grup 2-OH komórki roślinne w
lub 3-OH kwasem octowym. Strukturę przestrzenną stabilizuje możliwość tkankach.
chelatowego wiązania jonów metali. Masy molowe wynoszą 25000 do 3600000 u.
Wykazują skłonność do żelowania.
COOH COOCH3 COOH COOH
O O O O
O OH OH OH OH
O O O O
OH OH OH OH
n
Chityna
Jest liniowym poli(aminosacharydem). Zbudowana jest z podjednostek N-acetylo-
2-amino-β-D-2-deoksyglukozy połączonych wiązaniami typu 1,4.
Jeden z najważniejszych
CH2OH CH2OH
sacharydów strukturalnych
O O
u bezkręgowców. Główny
O OH OH
O O składnik skrzydeł owadów
i pancerzy skorupiaków.
HN CH3 HN CH3
O O n
124
Kwas chondroitynosiarkowy A i C
Heteroglikan liniowy, zbudowany z naprzemiennie występujących cząsteczek
kwasu β-D-glukuronowego i N-acetylo-2-amino-β-D-2-deoksygalaktozy
estryfikowanej kwasem siarkowym w pozycji 4 (typ A) lub 6 (typ C). Wiązania Występują łącznie z
typu 1,4 i 1,3. Masa 5000 do 50000 u. kolagenem. Występują w
CH2OSO3H COOH tkance kostnej, chrzęstnej i
CH2OSO3H COOH rogówce. Pełnią też rolę
HO O O
O O
OH HO O O substancji polianionowych
O OH wiążących mono- i
O
O
HN CH OH
polikationy.
3
HN CH3 OH
O
O n
Kwas hialuronowy
Heteroglikan liniowy, zbudowany z naprzemiennie występujących cząsteczek
kwasu β-D-glukuronowego i N-acetylo-2-amino-β-D-2-deoksyglukozy. Wiązania
typu 1,4 i 1,3. Masa pomiędzy 4000 a 8000000 u. Wchodzą w skład płynu
CH2OH COOH stawowego, tkanki łącznej,
O O
CH2OH COOH ciałka szklistego, ułatwiają
O OH O O migrację komórek, są
O
OH
O O
OH również odpowiedzialne za
O
HN CH OH
OH sprężystość chrząstek.
3
HN CH3 OH
O
O n
Heparyna Ma silne właściwości

Liniowy polisacharyd różnoskładnikowy, zbudowany z estryfikowanego kwasem antykoagulacyjne.
siarkowym (w pozycji 2) kwasu α-D-glukuronowego, oraz estryfikowanych resztą Wchodzi w skład błon
SO3H w pozycji 6 i sulfonowanych w pozycji 2 cząsteczek 2-amino-α-D-2- komórkowych gdzie może
deoksyglukozy. Wiązania typu 1,4. Masa 6000 do 25000 u. działać jako receptory i
uczestniczy w adhezji
CH2OSO3H COOH CH2OSO3H COOH
komórek oraz w
O O O O
oddziaływaniach komórka
OH OH OH
– komórka. Determinuje
O O O O O
także selektywność filtracji
OSO3H HN OH OSO3H
HN
S
OH
S kłębuszkowej zależną od
O O O O ładunku. Jest składnikiem
n
synaps.
Gumy roślinne
Rozgałęzione sacharydy złożone z D-galaktozy, L-arabinozy, L-ramnozy, ksylozy,
fukozy oraz kwasu D-glukuronowego. Przykładem może być guma arabska której Powstają zazwyczaj jako
zasadniczym elementem strukturalnym są łańcuchy poli(galaktozy), utworzone na efekt zranienia tkanki.
skutek tworzenia wiązań 1,3-glikozydowych (α lub β). Pozostałe składniki są
związane z pozycjami 6 głównego łańcucha.
Śluzy roślinne
Są to polisacharydy, rozgałęzione w mniejszym stopniu niż gumy roślinne, złożone Pełnią funkcję związków
z pentoz, heksoz oraz kwasów cukrowych. W ich budowie można często wyróżnić zapasowych i rezerwę
homoglikanowy łańcuch (np.: złożony z cząsteczek mannozy w przypadku śluzów wody. Stanowią koloid
roślin motylkowatych) do którego w wybranych pozycjach (najczęściej 6) ochronny.
przyłączone są kolejne fragment mono- lub polisacharydowe.
11.1.5 Glikozydy (heterozydy)

Glikozydy powstają na skutek reakcji hydroksylu hemiacetalowego (związanego z węglem C-1 w
aldozach lub węglem C-2 w ketozach) ze związkiem niecukrowym. Część niecukrową cząsteczki heterozydu
nazywamy aglikonem lub geniną, cukrową zaś glikonem. W zależności od usytuowania tego podstawnika
względem płaszczyzny pierścienia sacharydu, rozróżniamy α-glikozydy (genina znajduje się ponad płaszczyzną
pierścienia) lub β-glikozydy (aglikon znajduje się pod płaszczyzną pierścienia).
125
Aglikon
O O
Aglikon
α-glikozyd β-glikozyd
Z reguły pochodne typu β wykazują większą trwałość i są częściej spotykane w przyrodzie. W zależności od
charakteru atomu części aglikonowej, związanego z glikonem, wyróżniamy:
• O-glikozydy, w których grupa cukrowa związana jest z grupą hydroksylową geniny. Jest to najczęściej
występujący typ heterozydów.
O O
OH
CH3
CH3
CH3 OH
O O
CH3
lanatozyd C (Digitalis lanata)
O O
OH
CH3 CN
O O CH2OH
OH O O
CH2OH
CH2OH
OH
O O
OH O CH3 O O
OH OH
OH OH
O OH proteacyna (Goodia latifolia)
OH
OH
• S-glikozydy, w których połączenia glikozydowe występuje pomiędzy grupą tiolową (-SH) aglikonu a
cukrem.
O
N SO3H
CH2OH
O S
OH
OH
OH
synigryna (Brassica; Synapis)
• C-glikozydy, inaczej połączenia C-glikozydowe, w których połączenia aglikonu z cukrem następuje poprzez
atom węgla.
O
OH
HO O
CH2OH
O
OH
OH
OH
OH
witeksyna (Crataegi sp.)
• N-glikozydy, reprezentowane przez nukleozydy, zawierają wiązanie pomiędzy azotem aglikonu a cukrem
O
HN
HO O N
O
OH OH
urydyna
126
Jak widać z powyższych przykładów, glikonem może być zarówno no mono-, jak i polisacharyd. Fragmenty
cukrowe mogą być przyłączone do jednego lub kilku miejsc w cząsteczce geniny. Obok sacharydów w
heterozydach, spotyka się także kwasy uronowe i alkohole cukrowe.
11.1.6 Reakcje cukrów

11.1.6.1 Odczyny kondensacyjne
Monosacharydy, ogrzewane ze stężonymi kwasami (octowym, siarkowym, solnym) mogą ulegać
dehydratacji. Z pentoz powstaje wówczas furfural, z heksoz zaś 5-hydroksymetylofurfural. Najłatwiej
odwodnieniu ulegają pentozy i ketoheksozy. W przypadku oligo- i polisacharydów proces ten, poprzedzony
hydrolizą cukru, przebiega wolniej wraz ze wzrostem długości łańcucha sacharydowego.
OH H H OH H CH2OH
HC C HC C -3 H2O
OH -3 H2O OH
OH OH
HC C CHO HC C HOH2C CHO
O O
OH H CHO furfural OH H CHO
5-hydroksymetylofurfural
Powstałe aldehydy mogą kondensować z fenolami, tworząc barwne połączenia, np.:
- z 1-naftolem (odczyn Molischa)
OH HO
O
OHC
2 + O
O
HOH2C
HOH2C
- z rezorcyną (odczyn Seliwanoffa)

HO O O
OHC
HO OH
2 + O
O
HOH2C
HOH2C
- z floroglucyną (odczyn Tollensa)

HO O O
OHC
HO OH
2 + O
OH OH
O
OH HOH2C
HOH2C
11.1.6.2 Tworzenie kompleksów z jonami miedzi

Obecność grup hydroksylowych w cząsteczkach cukrów umożliwia tworzenie rozpuszczalnych
barwnych kompleksów z jonami miedzi w środowisku zasadowym.
CH2OH
CH2OH
O
O
+ Cu(OH)2
OH OH
OH OH
HO OH
OH OH Cu
HO OH
127
11.1.6.3 Odczyny redukcyjne
Jak już wcześniej wspomniano grupy aldehydowe lub ketonowe sacharydów uczestniczą w tworzeniu
ugrupowań hemiacetoalowych bądź hemiketalowych. W roztworach, na skutek równowagi pomiędzy formami
łańcuchową i cykliczną istnieje jednakże niewielki odsetek molekuł danego cukru w formie liniowej, z wolną
grupą karbonylową. W środowisku zasadowym udział tej formy jest jeszcze większy. Obecność wolnej grupy
aldehydowej lub ketonowej decyduje o redukujących własnościach cukrów. Przejawiają się one w reakcjach z
łagodnymi utleniaczami, takimi jak jony metali ciężkich (Cu2+, Bi3+, Ag+). Nie jest możliwe podanie
organicznych produktów tych reakcji gdyż w środowisku zasadowym dochodzi do rozerwania łańcucha
sacharydu na mniejsze fragmenty, wydaje się jednak, że pierwszym produktem jest kwas uronowy. Jony metali
obecne są w roztworze w formie kompleksów ze związkami polihydroksylowymi (kwas winowy, glicerol) lub
amoniakiem, co uniemożliwia ich wytrącenie (w formie wodorotlenków) w środowisku silnie zasadowym. Do
najważniejszych odczynów redukujących należą:
• odczyn Fehlinga i Benedicta – w reakcji cukrów z jonami miedzi(II) (w formie kompleksu z winianem
sodowo-potasowym lub cytrynianem trisodowym) w środowisku zasadowym powstaje, po ogrzaniu,
ceglasty tlenek miedzi(I)
• odczyn Tollensa – w reakcji sacharydów z amoniakalnym roztworem wodorotlenku srebra(I) powstaje
metaliczne srebro, wydzielające się w formie błyszczącego lustra na ściankach probówki
• odczyn Nylandera – polega na reakcji cukrów redukujących z jonami bizmutu(III) w środowisku
zasadowym (w formie kompleksu z kwasem winowym) w wyniku czego powstaje czarny osad
metalicznego bizmutu
Cukry posiadające zablokowaną hemiacetalową grupę hydroksylową (w heterozydach lub oligosacharydach) nie
wykazują odczynów redukcyjnych bez uprzedniej hydrolizy wiązania glikozydowego.
11.1.6.4 Epimeryzacja sacharydów

W środowisku zasadowym następuje wzrost ilości łańcuchowych form cukrów, kosztem struktur
cyklicznych. Formy liniowe, z racji obecności grup karbonylowych, mogą ulegać, szczególnie w obecności
jonów metali dwuwartościowych, zdolnych do tworzenia kompleksów chelatowych, procesowi enolizacji.
glukopiranoza glukoza cis-1,2-endiol trans-1,2-endiol mannoza
H O OH H H O
OH OH
CH2OH OH H HO HO
O HO HO HO HO
OH
OH OH OH OH
OH OH
OH OH OH OH
OH
CH2OH
O
HO
OH
OH
CH2OH
fruktoza
Zostają wówczas zniesione różnice pomiędzy węglem C-1 i C-2, co prowadzi, po cofnięciu się reakcji z
odtworzeniem formy karbonylowej, do powstania mieszaniny odpowiednich epimerów formy aldolowej oraz
ketozy (np.: z glukozy powstaje mannoza oraz fruktoza). Pomiędzy powstającymi produktami oraz substratem
ustala się stan równowagi. W środowisku silnie zasadowym wiązanie enolowe może, na skutek izomeryzacji,
przemieszczać się wzdłuż łańcucha węglowego, co prowadzi do powstania innych związków, zawierających
grupę karbonylową przy węglu C-3, C-4 itd. W środowisku bardzo silnie zasadowym (2-5 molowy NaOH)
powstają produkty rozerwania łańcucha węglowego: aldehyd glikolowy, triozy, tetrozy, formaldehyd oraz
produkty ich polimeryzacji.
128
11.1.6.5 Hydroliza sacharydów
W wyniku reakcji sacharydów z wodą następuje zrywanie wiązań glikozydowych efektem czego jest
powstanie oligosacharydów o krótszych łańcuchach, prowadzące w końcu do monosacharydów. Reakcja ta,
nazywana hydrolizą sacharydów, przebiega szczególnie szybko w środowisku słabo kwaśnym (środowisko silnie
kwaśne prowadzi do dehydratacji cukrów). Szczególnie łatwo pękaniu ulegają wiązania 1,1 oraz 1,2
glikozydowe (np.: w sacharozie).
11.1.6.6 Reakcje polisacharydów z jodem

Roztwory niektórych polisacharydów (skrobia, glikogen, agar, ksylany), pod wpływem wodnego
roztworu jodu przyjmują intensywnie niebiesko-granatowy kolor. Jest to efekt adsorpcji jodu na cząsteczkach
policukru. Proces ten nosi cech adsorpcji kanałowej, tj. cząsteczki dwuatomowe jodu wnikają do kanałów
utworzonych przez spiralnie zwinięte molekuły cukru, pełniącego w tym wypadku rolę liganda. Na każdy skręt
tak utworzonej spirali przypada około 6 reszt monosacharydowych wchodzących w skład łańcucha.
Oddziaływanie pomiędzy ligandem a kompleksowanym jodem ma charakter niekowalencyjny, opiera się
głównie na siłach Van der Waalsa i wiązaniach typu przeniesienia ładunku (charge transfer). Molekuły jodu we
wnętrzu kanału tworzą łańcuchy wzdłuż których mogą przemieszczać się elektrony. Efektem tej delokalizacji
jest silne pochłanianie światła przez powstały kompleks, co prowadzi do intensywnego zabarwienia. Podczas
ogrzewania roztworu dochodzi do zniszczenia spiralnej struktury łańcuchów polisacharydu, w efekcie zaś do
rozpadu kompleksu z jodem co objawia się zanikiem granatowej barwy. Po ochłodzeniu, na skutek
samoorganizacji, pierwotna struktura przestrzenna cukru odtwarza się, co przywraca barwę.
O
O O
O
O O
O O
O O
O
O O
O
O
O O O I2 O O O
O
O
O O
O O
O
O O
O O
O
O
O
W procesie częściowej hydrolizy skrobi tworzą się poli- i oligosacharydy o krótszych łańcuchach, dających inne
zabarwienie z jodem. W pierwszym etapie powstają amylodekstryny wybarwiające się z jodem na fioletowo,
następnie sacharydy o krótszych łańcuchach, erytrodekstryny dające czerwone zabarwienie, w końcu
achrodekstryny, nie tworzące kompleksów z jodem. Te ostatnie hydrolizują do maltozy a w ostateczności do
glukozy.
129
130
11.2 Sacharydy – część eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie z podstawowymi reakcjami i właściwościami chemicznymi sacharydów.
Mono-, oligo- i polisacharydy, reakcje charakterystyczne dla cukrów, aldozy, ketozy, piranozy, furanozy, reakcje
epimeryzacji, hydrolizy, enancjomery, diastereoizomery, wzory ważniejszych sacharydów (glukoza, galaktoza,
sacharoza, fruktoza, maltoza, laktoza, ryboza, dezoksyryboza, skrobia, celuloza, glikogen), produkty pośrednie i
końcowe hydrolizy skrobi.
ODCZYNNIKI
5% 1-naftol w etanolu odczynnik Benedicta skrobia

H2SO4 stęż. 10% AgNO3 arabinoza
HCl stęż. 10% NaOH fruktoza
2M NaOH 2M HCl sacharoza
2% CuSO4 fenoloftaleina floroglucyna
Ba(OH)2 nasycony roztwór 5% CH3COOH 0,5 M H2SO4
odczynnik Seliwanoffa 0,02 M I2 w 0,1 M KI NH4OH
odczynnik Fehlinga I 1M NaOH
odczynnik Fehlinga II glukoza
UWAGA: Wodorotlenki sodu i baru, kwas siarkowy, octowy i solny są silnie żrące. Sole baru są
toksyczne. Pracując z nim obowiązuje stosowanie rękawic ochronnych i okularów. Roztwory jodu i
azotanu srebra są silnie plamiące.
Przygotuj:
100 cm3 0,1M roztworu glukozy
10 cm3 0,1M roztworu arabinozy
10 cm3 0,1M roztworu sacharozy
10 cm3 0,01M roztworu fruktozy
100 cm3 1% roztworu skrobi (odważoną ilość skrobi rozpuścić w 10 cm3 wrzącej wody i rozcieńczyć do 100
cm3)
OPIS ĆWICZENIA
a. Reakcje ogólne wszystkich sacharydów-reakcja Molischa
Do 1 ml roztworu 0,1M glukozy dodaj 2 krople roztworu 1-naftolu (5% w etanolu) i wymieszaj.
Następnie, przechyliwszy probówkę, wlej pipetą po ściance probówki 1 ml stężonego kwasu siarkowego. Na
granicy roztworów tworzy się czerwono-fioletowy pierścień.
b. Wykrywanie pentoz
Do 1 ml roztworu arabinozy dodaj 1 ml stężonego kwasu solnego i kilka kryształków flogoglucyny.

Mieszaninę ogrzewaj do wrzenia przez kilkanaście sekund. Powtórz reakcję z roztworem glukozy. W obecności
pentoz tworzy się zabarwienie różowe.
c. Wykrywanie grup -OH
Do 1 ml 2 M roztworu NaOH dodaj kilka kropel 2% roztworu siarczanu miedzi. Do wytrąconej

zawiesiny wkraplaj 0,1M roztwór glukozy. Powstanie szafirowego zabarwienie świadczy o obecności grup
hydroksylowych.
131
d. Epimeryzacja heksoz
Przygotuj 5 probówek. Do trzech odmierz po 0,5 ml 0,1 M roztworu glukozy, do czwartej 0,5 ml 0,01
M roztworu fruktozy a do ostatniej 0,5 ml 0,1 M roztworu sacharozy. Do pierwszej i ostatniej probówki dodaj
0,5 ml wody, do pozostałych po 0,5 nasyconego roztworu wodorotlenku baru. Probówkę pierwszą i drugą
ogrzewaj we wrzącej łaźni wodnej przez 5 minut. Po ochłodzeniu do każdej próbki dodaj 3,5 ml odczynnika
Seliwanoffa (0,5% roztwór rezorcyny w 20% kwasie solnym), wstaw do wrzącej łaźni wodnej i obserwuj
powstawanie zabarwienia.
e. Właściwości redukujące cukrów-reakcja Fehlinga oraz Tollensa
I.
W dwóch probówkach zmieszaj po 1 ml odczynników Fehlinga I i II a następnie dodaj, do pierwszej z
nich, 2 ml roztworu glukozy (0,1M) a do drugiej 2 ml 0,1M roztworu sacharozy. Probówki umieść we wrzącej
łaźni wodnej. Ceglasty osad Cu2O świadczy o obecności substancji redukujących.
odczynnik Fehlinga I - 34,65 g CuSO4*5H2O w 500 ml wody
odczynnik Fehlinga II - 125 g NaOH oraz 173 g winianu sodu i potasu w 500 ml wody
II.
Przygotuj dwie probówki (UWAGA: Użyj probówek dokładnie umytych chromianką). Do pierwszej
nalej 2 ml roztworu glukozy, do drugiej tyle samo roztworu sacharozy. Następnie do obu probówek wlej po 3 ml
odczynnika świeżo przygotowanego Tollensa. Probówkę umieść w łaźni wodnej o temperaturze 60-700C.
Odczynnik Tollensa przygotować przez zmieszanie równych objętości 10% roztworu azotanu srebra i
10% roztworu wodorotlenku sodu. Powstający osad wodorotlenku srebra rozpuszcza się dodając kroplami
stężony roztwór amoniaku.
UWAGA: Resztki odczynnika oraz mieszaniny reakcyjnej po wykonaniu próby należy niezwłocznie wylać
gdyż podczas stania w amoniakalnych roztworach wodorotlenku srebra powstaje silnie wybuchowy
piorunian srebra.
f. Hydroliza sacharozy
Do 10 ml 2% roztworu sacharozy umieszczonego w kolbie stożkowej dodaj 2 ml 2 M roztworu kwasu

solnego i ogrzewaj około 15 min. we wrzącej łaźni wodnej. Po oziębieniu w łaźni lodowej do mieszaniny dodaj
kroplę fenoloftaleiny i wkraplaj 2 M roztwór NaOH do pojawienia się słabo różowej barwy a następnie powoli
dodaj 5% kwas octowy do jej zaniku. Wykorzystaj otrzymany roztwór do reakcji na cukry redukujące (odczyn
Fehlinga) oraz do odczynu Seliwanoffa.
g. Wykrywanie wielocukrów-odczyn Lugola
Do 1 ml roztworu skrobi dodaj 1 kroplę roztworu jodu w jodku potasu. Niebiesko-fioletowe

zabarwienie świadczy o obecności skrobi. Roztwór ogrzej do wrzenia a następnie ochłodź w łaźni lodowej.
Zaobserwuj zmiany barwy.
h. Hydroliza skrobi
Przygotuj 2 szeregi po 10 probówek. Do probówek pierwszego szeregu wlej po 1 kropli roztworu jodu,
do probówek drugiego szeregu po 0,5 ml roztworu NaOH (1 M). W kolbie stożkowej umieść 30 ml 1 %
roztworu skrobi (przygotować bezpośrednio przed ćwiczeniem) i 10 ml 0,5 M kwasu siarkowego. Z mieszaniny
pobierz 2 ml roztworu i dodaj po 1 ml do pierwszych probówek obu szeregów. Kolbę wstaw do wrzącej łaźni
wodnej. Pobieranie próbek powtarzaj co 2 minuty. Ogrzewanie kontynuuj do momentu gdy próbka nie będzie
wykazywać zabarwienia z odczynnikiem Lugola. W probówkach z roztworem jodu wyróżnij kolejne etapy
hydrolizy skrobi. Do probówek drugiego szeregu dodaj po 1 ml odczynnika Benedicta. Zawartość ogrzej we
wrzącej łaźni wodnej. Zaobserwuj zmiany intensywności odczynu redukcyjnego.
odczynnik Benedicta - 173 g cytrynianu sodu, 90 g węglanu sodu i 17,3 g siarczanu miedzi w 1 dm3
roztworu
132
12 Ćwiczenie 8
12.1 Lipidy – wstęp teoretyczny
Lipidy (tłuszczowce) są to estry wyższych kwasów tłuszczowych i jedno- lub wielowodorotlenowych
alkoholi. Dzielimy je na tłuszcze proste i złożone. Pierwsze z nich, zwane również tłuszczami obojętnymi,
składają się wyłącznie z kwasów tłuszczowych i alkoholi, drugie zaś oprócz tych dwóch komponentów
zawierają inne składniki, jak kwas fosforowy, zasady azotowe itd.
12.1.2 Kwasy tłuszczowe.

Kwasy tłuszczowe są kwasami jednokarboksylowymi, w większości wypadków składające się z
liniowego, alifatycznego, nierozgałęzionego łańcucha o parzystej liczbie atomów węgla (od 4 do 26 atomów
węgla). Kwasy tłuszczowe dzielimy na nasycone (łańcuch nie zawiera wiązań podwójnych) oraz nienasycone,
przy czym te ostatnie dzielimy, ze względu na ilość ugrupowań alkenowych w cząsteczce, na jednonienasycone,
dwunienasycone itd. Wiązania podwójne występować mogą oczywiście w formach cis lub trans. Forma cis jest
najszerzej rozpowszechniona w naturze, izomery trans w lipidach naturalnych praktycznie nie występują,
powstają natomiast na skutek izomeryzacji z kwasów o konfiguracji cis pod wpływem czynników zewnętrznych.
Jedynie w lipidach mleka i tkanek przeżuwaczy stwierdzono obecność większych ilości tych izomerów.
Powstają one w efekcie działania enzymu izomerazy, produkowanego przez mikroflorę bakteryjną układu
pokarmowego tych zwierząt. Większe ilości izomerów trans wykrywa się z tłuszczach poddanych
katalitycznemu utwardzaniu (np.: w margarynie). Izomery trans pełnią jedynie funkcje energetyczne, gdyż nie
mogą być zużyte przez organizmy do produkcji związków fizjologicznie czynnych (np.: prostaglandyn i
tromboksanów). Kwasy tłuszczowe zawierające grupy hydroksylowe, rozgałęzienia łańcucha lub fragmenty
pierścieniowe spotyka się rzadko. Wzory najważniejszych kwasów tłuszczowych zestawiono w Tabeli 9.
Tabela 9. Wzory ważniejszych kwasów tłuszczowych

Główne miejsca
Nazwa Cn Wzór
występowania
Kwas 1-butanowy masło
4 COOH
(kwas masłowy)
Kwas 1-heksanowy COOH
masło
6
(kwas kapronowy) olej kokosowy
Kwas 1-oktanowy COOH
masło
8
(kwas kaprylowy) olej kokosowy
Kwas 1-dekanowy masło
10 COOH
(kwas kaprynowy) olej kokosowy
Kwas 1-dodekanowy olej laurowy
12 COOH
(kwas laurynowy) olej kokosowy
Kwas 1-tetradekanowy masło kokosowe
14 COOH
Kwasy nasycone
(kwas mirystynowy)
Kwas 1-heksadekanowy tłuszcze zwierzęce i
(kwas palmitynowy) 16 COOH roślinne
Kwas 1-oktadekanowy tłuszcze zwierzęce i
(kwas stearynowy) 18 COOH roślinne
Kwas 1-eikozanowy olej z orzechów
(kwas arachinowy) 20 COOH ziemnych
Kwas 1-dokozanowy olej z orzechów
(kwas behenowy) 22 COOH ziemnych
Kwas 1-tetrakozanowy olej z orzechów
(kwas lignocerynowy) 24 COOH ziemnych
Kwas 1-heksakozanowy lanolina
(kwas cerotynowy) 26 COOH
133
Tabela 9. Wzory ważniejszych kwasów tłuszczowych (c.d.)
Kwas trans-2-buten-1-owy COOH olej krotonowy
4
(kwas krotonowy)
Kwas cis-9-heksadecen-1-owy tłuszcze roślinne i
(kwas palmitooleinowy) 16 COOH zwierzęce
Kwasy jednonienasycone
Kwas cis-9-oktadecen-1-owy tłuszcze roślinne i

(kwas oleinowy) 18 zwierzęce
COOH
Kwas trans-9-oktadecen-1-owy tłuszcze

(kwas elaidynowy) 18 COOH przeżuwaczy
Kwas cis-13-dokozenowy-1-owy olej rzepakowy

(kwas erukowy) 22 COOH tran
Kwas cis-11-dokozen-1-owy tran,
(kwas cetolowy) 22 COOH tłuszcz wieloryba
Kwas cis-15-tetrakozen-1-owy tran,
(kwas nerwonowy) 24 COOH tkanka nerwowa
Kwas cis,cis-9,12-oktedecadien-1-owy oleje roślinne
(kwas linolowy) 18
COOH
Kwas cis,cis,cis-9,12,15-oktedecatrien- olej lniany i inne

Kwasy wielonienasycone
1-owy (kwas α-linolenowy) 18 tłuszcze roślinne

COOH
Kwas cis,cis,cis-6, 9,12-oktedecatrien- tłuszcze i tkanki

1-owy (kwas γ-linolenowy) 18 zwierzęce
COOH
Kwas cis,cis,cis,cis-5,8,11,14- tłuszcze i tkanki

eikozatetraen -1-owy 20 zwierzęce
(kwas arachidonowy) COOH
Kwas cis,cis,cis,cis,cis-5,8,11,14,17- tłuszcze i tkanki

eikozapentaen-1-owy 20 zwierzęce
COOH
12.1.2 Tłuszcze proste

Jak już wspomniano do tej grupy zalicza się lipidy zawierające w swoich cząsteczkach wyłącznie
fragment kwasu tłuszczowego oraz alkohol. Związki z tej grupy dzielimy na dwie klasy:
• woski – są substancjami popularnymi zarówno w świecie roślin jak i zwierząt. Z chemicznego punktu
widzenia woski są estrami wyższych kwasów tłuszczowych i długołańcuchowych alkoholi
jednowodorotlenowych (powstających z kwasów tłuszczowych w wyniku redukcji grupy –COOH do
CH2OH), zazwyczaj zbudowanych z parzystej liczby atomów węgla. Z alkoholi wchodzących w skład tych
estrów wymienić należy alkohol cetylowy (C16H33OH), stearylowy (C18H37OH), cerylowy (C26H53OH),
mirycylowy (C30H61OH), melisylowy (C31H63OH) oraz jednonienasycony alkohol oleilowy (C18H35OH).
Wśród kwasów wchodzących w skład wosków znajdujemy związki o łańcuchach złożonych z 16 do 36
atomów węgla. Jest rzeczą znamienną, że estry tworzące woski zbudowane są często z alkoholi i kwasów o
tej samej liczbie atomów tworzących łańcuch. Dodatkowo w skład naturalnych wosków wchodzą wolne
kwasy tłuszczowe oraz węglowodory parafinowe. Znamy woski płynne (np.: tzw. olej olbrotowy z czaszki
wieloryba) oraz stałe (wszystkie woski roślinne, wosk pszczeli, wosk wełny owczej). Pełnię rolę substancji
ochronnych oraz funkcje semiochemiczne.
O
mirysyna (składnik wosku pszczelego)
134
• tłuszcze właściwe – tłuszcze właściwe (glicerydy), są estrami kwasów tłuszczowych i alkoholu
trójwodorotlenowego - gliceryny (1,2,3-propanotriolu). Pamiętać należy, że rodniki acylowe przyłączone do
cząsteczki gliceryny są bardzo często różne (pochodzą od różnych kwasów tłuszczowych), ponadto często
zdarza się, że zestryfikowane są nie trzy (jak to ma miejsce w trójglicerydach), a dwie (w
dwuglicerydach) lub jedna (monoglicerydy) grupa hydroksylowa. Należy zdawać sobie sprawę z faktu, że
wszystkie trzy pozycje w cząsteczce gliceryny są nierównocenne, zatem ilość możliwych kombinacji
jeszcze bardziej wzrasta. Położenie podstawników acylowych nie jest przypadkowe, i zależy od typu
glicerydu. I tak na przykład w lipidach mleka długołańcuchowe nasycone kwasy tłuszczowe zajmują
pozycję przy węglu C-1, a krótkołańcuchowe przy C-3. W tłuszczach tkanek zwierzęcych z kolei w
pozycjach zewnętrznych (1 i 3) przyłączone są długołańcuchowe kwasy nasycone, zaś w pozycji 2
(wewnętrznej) reszta kwasu nienasyconego. Wyjątek stanowi tłuszcz wieprzowy, w którego cząsteczkach w
pozycjach C-1 i C-3 najczęściej znajdujemy kwasy nienasycone.
O O O
1 1 1
CH2O C C17H35 CH2O C C15H31 CH2O C C15H31
2 2 2
C15H31 C OCH C15H31 C OCH H OCH
3 3 3
O CH2O C C17H35 O CH2OH CH2O C C17H35
O O
trigliceryd diglicerydy
1,3-distearylo-2-palmityloglicerol 1,2-dipalmityloglicerol 1-palmitylo-3-stearyloglicerol
O
1 1
CH2O C C17H35 CH2OH
2 2
HOCH C15H31 C OCH
3 3
CH2OH O CH2OH
monoglicerydy
1-stearyloglicerol 2-palmityloglicerol
12.1.3 Tłuszcze złożone

Tłuszczowce złożone, w zależności od charakteru nielipidowej części cząsteczki dzielimy na trzy duże
grupy:
• fosfolipidy – lipidy, w skład których cząsteczki wchodzi reszta kwasu fosforowego. Jest ona przyłączona do
organicznej części cząsteczki poprzez wiązanie estrowe (jest związana poprzez grupę –OH alkoholu).
Znamy wiele różnych fosfolipidów o różnej budowie cząsteczek i różnych dodatkowych podstawnikach,
pełniących różne funkcje biologiczne. Związki z tej grupy wchodzą w skład wszystkich błon
półprzepuszczalnych ustroju. Oprócz funkcji strukturalnych uczestniczą w aktywnym transporcie jonów,
wchodzą w skład lipoprotein odpowiedzialnych z transport tłuszczowców w ustroju, są odpowiedzialne za
transport elektronów w mitochondriach. Do najważniejszych fosfolipidów należą:
kwasy fosfatydylowe – są pochodnymi mono- lub diglicerydów których cząsteczka zawiera
fosforylowaną grupę hydroksylową. Reszta fosforanowa przyłączona jest do grupy alkoholowej przy
węglu C-3. Pochodne monoacylowe nazywamy kwasami lizofosfatydylowymi. Występują one często
w stanie wolnym, prawdopodobnie pełnię funkcje infochemiczne, stymulują produkcję DNA i wzrost
komórek, wpływają na gospodarkę jonami wapnia oraz na cytoszkielet i apoptozę, są ponadto
prekursorami wielu innych fosfolipidów.
O O
CH2O C R1 CH2O C R1
R2 C OCH O HO CH O
O CH2O P OH CH2O P OH
OH OH
kwas fosfatydylowy kwas lizofosfatydylowy
135
fosfatydylocholina – jest pochodną kwasu fosfatydylowego zawierającą zamiast grupy –OH resztę
aminy biogennej – choliny, przyłączoną wiązaniem estrowym do atomu fosforu. Analogicznym
produktem estryfikacji kwasu lizofosfatydylowego jest lizofosfatydylocholina. Związki te znane są
również pod nazwami lecytyna i lizolecytyna. Lecytyna stanowi ponad połowę fosfolipidowej frakcji
tłuszczów komórkowych zwierząt, wchodzi w skład błon biologicznych. Fosfatydylocholina
zawierająca dwie reszty kwasu palmitynowego jest doskonałym związkiem powierzchniowo czynnym
(surfaktantem) obniżającym napięcie powierzchniowe na granicy faz pomiędzy tkanką płucną a gazami
oddechowymi i zapobiegającą sklejaniu się pęcherzyków płucnych, lizolecytyny pełni funkcje
semiochemiczne (są odpowiedzialne za agregacje leukocytów).
O O
CH2O C R1 CH2O C R1
R2 C OCH O HO CH O
O CH2O P O CH3 CH2O P O CH3
N N
OH CH3 OH CH3
CH3 CH3
fosfatydylocholina lizofosfatydylocholina
fosfatydyloetanoloamina – tak zwana kefalina, jest związkiem o strukturze analogicznej do lecytyny,
zawierającym zamiast choliny cząsteczkę etanoloaminy. Jest głównym fosfolipidem bakteryjnym. W
komórkach roślinnych i zwierzęcych występuje również, ale w mniejszych ilościach niż lectyna. Z
wielu organizmów wyizolowano także pochodne N-acylowe, powstałe w wyniku wytworzenia wiązania
amidowego pomiędzy grupą aminową fosfatydyloetanoloaminy a cząsteczką kwasu karboksylowego. Z
reguły są to długołańcuchowe kwasy tłuszczowe (stearynowy, palmitynowy).
O O
CH2O C R1 CH2O C R1
R2 C OCH O R2 C OCH O O
O CH2O P O O CH2O P O
NH2 N
OH OH H
fosfatydyloetanoloamina N-arachidonylofosfatydyloetanoloamina
fosfatydyloseryna – jest analogiem lecytyny, zawierającym w miejsce reszty choliny cząsteczkę
seryny. Jest to jedyny fosfolipid zawierający aminokwas, izolowany z tkanek zwierzęcych. Stanowi on
około 10% puli fosfolipidowej u zwierząt. Jest kluczowym związkiem odpowiedzialnym za aktywację
kinazy proteinowej C, uczestniczy ponadto w koagulacji komórek krwi.
O
CH2O C R1
R2 C OCH O NH2
O CH2O P O
COOH
OH
fosfatydyloseryna
fosfatydyloinozytol – jest fosfolipidem zawierającym w swojej budowie cząsteczkę mezo-inozytolu
przyłączoną do grupy fosforanowej poprzez hydroksyl związany z węglem C-1 cyklitolu. Ponadto
wyodrębniono fosforylowane pochodne fosfatydyloinozytolu, w których cząsteczkach znajdują się
dodatkowe grupy fosforanowe w pozycji 4 lub 4 i 5 inozytolu. W organizmach pełnią funkcje
infochemiczne.
O O O
CH2O C R1 CH2O C R1 CH2O C R1
R2 C OCH O OH OH R2 C OCH O R2 C OCH O
OH OH OH OH O
O CH2O P O O CH2O P O O CH2O P O
P
OH OH OH OH O OH
OH OH
OH OH
OH O OH O OH
OH P P
OH OH
O O
fosfatydyloinozytol fosfatydylo-4-fosfoinozytol fosfatydylo-4,5-difosfoinozytol
136
fosfatydyloglicerol – jest fosfolipidem zawierającym dwie reszty glicerolu przyłączone do jednej grupy
fosforanowej, przy czym jedna z nich jest acylowana. W tkankach zwierząt występują w niewielkich
ilościach, w tkankach roślinnych stanowią 20% frakcji fosfolipidowej (występują głównie w
chloroplastach), są również bardzo rozpowszechnione u bakterii.
O
CH2O C R1
R2 C OCH O
O CH2O P O CH2
OH HC OH
HO CH2
fosfatydyloglicerol
difosfatydyloglicerol – związki z tej grupy nazywane są kardiolipinami i powstają na skutek
przyłączenia dwóch fragmentów kwasu fosfatydylowego do molekuły glicerolu. Stanowią istotny
składnik błon mitochondrialnych oraz błon komórkowych bakterii. Na skutek hydrolizy
enzymatycznej z cząsteczki kardiolipiny oderwane mogą być dwie reszty acylowe, co prowadzi do
powstania cząsteczki lizodifosfatrydyloglicerolu.
O O
CH2O C R1 CH2O C R1
R2 C OCH O HO CH O
OH OH
HC OH C H OH
OH OH
R2 C OCH O HO CH O
CH2O C R1 CH2O C R1
O O
difosfatydyloglicerol lizodifosfatydyloglicerol
lipoaminokwasy – są to związki zawierające resztę aminokwasową przyłączoną poprzez wiązanie
estrowe do wolnych grup –OH w pozycji 2 lub 3 w difosfatydyloglicerolu. Wspomniane reszty
aminokwasowe mogą być uwikłane w strukturę peptydową (najdłuższy wyizolowany lipopeptyd
zawierał 10 reszt amniokwasowych).
O O
CH2O C R1 CH2O C R1
R2 C OCH O R2 C OCH O
O CH2O P O CH2 CH3 O CH2O P O CH2 CH3 O
H
OH HC O C C NH2 OH HC O C C N C C NH2
H H H
HO CH2 O HO CH2 O
H3C CH3
lipoaminokwas lipopeptyd
plazmalogeny – znane są przypadki uwikłania grupy hydroksylowej przy węglu C-1 gliceryny w
wiązanie eterowe z enolową formą cząsteczką aldehydu, utworzonego z któregoś z długołańcuchowych
kwasów karboksylowych. Powstały alkohol diwodorotlenowy, zawierający w cząsteczce ugrupowanie
eterowe, ulega fosforylacji w pozycji 3, tworząc kwas lizoplazmelinowy, który acylowany kwasem
tłuszczowym w pozycji 2 daje w efekcie kwas plazmelinowy. Kwas plazmelinowy, podobnie jak kwas
fosfatydylowy, tworzy estry z alkoholami takimi jak cholina czy etanoloamina. Pochodne te nazywamy
odpowiednio plazmalogenem cholinowym i plazmalogenem etanoloaminowym. Związki te stanowią co
najmniej 10% fosfolipidów mózgu i mięśni. Znaczenie biologiczne tych związków nie jest do końca
poznane.
137
R1 R1
CH2O O CH2O
HO CH O R2 C O CH O
CH2O P OH CH2O P OH
OH OH
kwas lizoplazmelinowy kwas plazmelinowy

R1 R1
O CH2O O CH2O
CH3
R2 C O CH O R2 C O CH O
NH2 CH3
N
CH2O P O CH2O P CH3
OH OH
plazmalogen etanoloaminowy plazmalogen cholinowy

• sfingomieliny – są to pochodne 2-amino-1,3-dialkoholi, zwanych sfingozynami. Cząsteczki sfingozyny
zbudowane są z wielowęglowych łańcuchów alifatycznych (C16-C20) mogących zawierać do kilku wiązań
podwójnych i, sporadycznie, dodatkową grupę hydroksylową w pozycji 4. Najczęściej w tkankach
zwierzęcych występuje sfingozyna d18:1 i dihydrosfingozyna d18:0, natomiast w tkankach roślinnych
dominuje fitosfingozyna t18:0. Wzory ważniejszych sfingozyn zestawiono w Tabeli 10.
Tabela 10. Wzory ważniejszych sfingozyn

Nazwa zwyczajowa i chemiczna Wzór strukturalny
NH2
sfingozyna d18:1 OH
trans-2-D-aminooktadec-4-en-1,3-diol
OH
NH2
dihydrosfingozyna d18:0 OH
2-D-aminooktadekan-1,3-diol
OH
NH2
C20-dihydrosfingozyna d20:0 OH
2-D-aminoeikozan-1,3-diol
OH
OH NH2
fitosfingozyna t18:0 OH
2-D-aminooktadekan-1,3,4-triol
OH
OH NH2
C20-fitosfingozyna t20:0 OH
2-D-aminoeikoza-1,3,4-triol
OH
OH NH2
dehydrofitosfingozyna t18:1 OH
trans-2-D-aminooktadec-8-en-1,3,4-triol
OH
NH2
sfingadienina d18:2 OH
trans,trans-2-D-aminooktadeka-4,8-dien-1,3-diol
OH
Sfingozyny reagują z kwasami tłuszczowymi, tworząc amidy nazywane ceramidami. Obecność wolnych
grup hydroksylowych umożliwia z kolei fosforylację tych związków poprzez wytworzenie wiązań
estrowych z resztą kwasu fosforowego, przy czym ze źródeł naturalnych wyizolowano wyłącznie produkt
reakcji fosforylacji grupy –OH znajdującej się w pozycji C-1 (terminalnej) łańcucha ceramidu. Tak
wytworzone estry fosforanowe łączą się z kolei z cząsteczką choliny z wytworzeniem ważnych biologicznie
138
pochodnych – sfingomielin. Związki te występują głównie w tkance nerwowej i wątrobie, przy czym
frakcje sfingomielin z obu tych źródeł różnią się charakterem podstawników acylowych (głównym
acylowym składnikiem sfingomielin wątroby jest kwas palmitynowy, mózgu – stearynowy i
lignocerynowy). Są głównym składnikiem otoczki mielinowej, uczestniczą w przekazywaniu sygnałów
przez błony komórkowe. W organizmach owadów wykazano obecność analogów sfingomielin
zawierających, w miejsce choliny, cząsteczkę etanoloaminy.
R1 O
NH
OH
OH
ceramid
R1 O
CH3
NH O CH3
N
O P O CH3
OH
OH
sfingomielina
• glikolipidy – są to związki zawierające wiązanie eterowe pomiędzy cząsteczką cukru a cząsteczką
glicerolu bądź sfingozyny. W pierwszym przypadku mówimy o glikoglicerolipidach, w drugim o
glikosfingozydach.
glikoglicerolipidy – w wytworzenie wiązania eterowego zaangażowana jest grupa –OH przy
anomerycznym atomie węgla sacharydu oraz grupa –OH w położeniu 3 glicerolu. Znane są
nieliczne przypadki przyłączenie dwu reszt cukrowych do cząsteczki gliceryny, wówczas drugie
wiązanie glikozydowe tworzy się poprzez grupę hydroksylową przy drugim atomie węgla 1,2,3-
propanotriolu (tzw. diglikoglicerolipidy). Fragmenty cukrowe mogą być zarówno mono- jak i
oligosacharydami. Grupy cukrowe mogą być sulfonowane, mogą mieć też charakter aminocukru.
W części lipidowej cząsteczki zazwyczaj acylowane są wszystkie wolne grupy –OH. Do klasy
glikoglicerolipidów zalicza się także pochodne w których połączenie cukier – lipid odbywa się
poprzez wiązanie fosfodiestrowe (tzw. fosfatydylosacharydy), jak też związki w których, zamiast
cząsteczki diacyloglicerolu (ew. monoacyloglicerolu) występuje molekuła fosfatydyloglicerolu.
Przykłady struktur różnych klas glikoglicerolipidów podano poniżej. Występują one głównie u
organizmów fotosyntetyzujących (roślin wyższych, glonów, bakterii), gdzie wchodzą w skład błon
chloroplastów.
O
HOH2C O
O
O CH2O C R1
CH2O C R1
R2 C O CH CH2OH CH2OH
O CH
CH2O O CH2O O
OH OH
OH OH
OH OH
OH OH
glikoglicerolipid diglikoglicerolipid
CH2OSO3H O
O O O CH2O C R1
O CH2O C R1 R2 C O CH O
R2 C O CH CH2O OH CH2O P OH CH2OH
CH2O O OH OH O O
OH OH
OH OH
OH OH
sulfonowany glikoglicerolipid fosfatydylosacharyd
139
O
O CH2O C R1 CH2OH CH2OH
R2 C O CH O HC O O
CH2O P OH2C NH2
OH OH
OH
glikofosfatydyloglicerol (pochodna aminocukru)

glikosfingozydy – są szeroko rozpowszechnione w tkankach żywych organizmów, zwłaszcza w
tkance nerwowej. W śród nich wyróżniamy cerebrozydy (zawierające jedną resztę cukrową,
przyłączoną do grupy hydroksylowej przy C-1 sfingozyny) oraz gangliozydy, zawierające w tej
pozycji łańcuch oligosacharydowy. W cerebrozydach sacharydem jest zazwyczaj glukoza lub
galaktoza, różnią się one ponadto strukturą fragmentu acylowego, przyłączonego do grupy
aminowej sfingozyny. Reszta cukrowa może być dodatkowo zestryfikowana resztą kwasu
siarkowego, efektem czego są sulfoglikosfingolipidy nazywane również sulfatydami. W skład
fragmentów oligosacharydowych gangliozydów wchodzą głównie glukoza, galaktoza, kwas
acetyloneuraminowy (slajowy) lub N-acetylogalaktozoaminę.
OH OH
H H
N R1 N R1
H3C H3C
CH2OH CH2OSO3H
O O
O O O O
OH OH
OH OH
OH OH
cerebrozyd sulfatyd
OH
H
N R1
H3C
CH2OH
O
O O
CH2OH CH2OH OH
OH O O
O OH
CH2OH
OH O HC NH OH
3 OH
OH
OH O
HO O OH
OH H3C NH O COOH
gangliozyd
12.1.4 Sterole
Do lipidów, obok wosków, tłuszczów właściwych oraz tłuszczów złożonych, zalicza się również
związki zwane sterolami. W skład wszystkich steroli wchodzi układ czteropierścieniowy, zwany układem
steroidowym.
18
12 17
11 13
19
1
C D 16
9 14
2 15
10 8
A B
3 5 7
4 6
układ steroidowy – numeracja węgli i oznaczenie pierścieni
najczęściej występujące struktury przestrzenne układu steroidowego
140
Do najważniejszych steroli zwierzęcych należy cholesterol, będący istotnym składnikiem lipoprotein, błon
komórkowych oraz prekursorem większości związków sterydowych występujących w organizmie, takich jak
kwasy żółciowe i hormony sterydowe: androgeny, estrogeny, progesterony czy kortykoidy. Pewna część
cholesterolu wchodzącego w skład błon biologicznych występuje w formie estrów z kwasami tłuszczowymi.
Kolejnym ważnym biologicznie sterolem jest ergosterol, będący prekursorem witaminy D2 oraz 7-
dehydrocholesterol – prekursor witaminy D3.
HO O
cholesterol stearynian cholesterylu (ester cholesterolu)
HO HO
ergosterol 7-dehydrocholesterol
12.1.5 Napięcie powierzchniowe, związki powierzchniowo czynne, micele

Pod pojęciem napięcia powierzchniowego rozumiemy skłonność powierzchni cieczy do kurczenia się
(zmniejszania swojej powierzchni), spowodowaną siłami wciągającymi cząsteczki znajdujące się w fazie
powierzchniowej do wnętrza cieczy. Przeniesienie cząsteczki z wnętrza cieczy na granicę faz wiąże się z
wkładem energetycznym (zwanym energię powierzchniową), zatem występowanie maksymalnie rozwiniętej
powierzchni pomiędzy fazami jest, z punktu widzenia termodynamiki, niekorzystne, czego efektem są
wspomniane wyżej siły. Siły napięcia powierzchniowego działają stycznie do powierzchni, przeciwdziałając jej
zwiększaniu. Ilościowo siły napięcia powierzchniowego definiuje się jako równe pracy potrzebnej na
powiększenie powierzchni na granicy faz o jednostkę bądź równe sile działającej stycznie do powierzchni na
jednostkowej długości.
Doświadczenie wykazuje że roztwory wielu substancji organicznych w wodzie wykazują znacznie
niższe napięcie powierzchniowe niż czysty rozpuszczalnik. Ponieważ efekt ten musi być wywołany obecnością
cząsteczek tych substancji w fazie powierzchniowej (inaczej nie można by zrozumieć ich wpływu na energię
swobodną tej fazy), a jednocześnie proces obniżania napięcia powierzchniowego jest termodynamicznie
korzystny, możemy oczekiwać, że cząsteczki te wykazywać będą tendencję do gromadzenia się na powierzchni
cieczy. Innymi słowy, molekuły tych substancji (zwanych powierzchniowo czynnymi lub kapilarnie aktywnymi)
będą adsorbować się na powierzchni cieczy. Większość związków powierzchniowo czynnych wykazuje
podobieństwo w budowie, tj. zawiera polarną grupę funkcyjną (aminową, hydroksylową, estrową, tiolową,
karboksylową) wykazującą powinowactwo do wody (tzw. grupę hydrofilową) oraz długi łańcuch
węglowodorowy, który, nie posiadając możliwości tworzenia wiązań wodorowych i jonowych, „ucieka” od
powierzchni wody (jest hydrofobowy).
hydrofobowy
"ogon"
hydrofilowa
"gl/ owa"
WODA
141
Napięcie powierzchniowe powoduje że ciecz dąży do przyjęcia kształtu kuli (stosunek objętości do powierzchni
jest w tym przypadku największy), jednakże krople cieczy na powierzchni ciała stałego, na skutek oddziaływań
pomiędzy molekułami podłoża a cząsteczkami cieczy, które są tym większe, im większa jest powierzchnia
kontaktu pomiędzy fazami, przyjmują kształt mniej lub bardziej spłaszczony. Jeśli oddziaływanie pomiędzy
cząsteczkami cieczy a powierzchnią (adhezja) są przynajmniej równe sile wzajemnego oddziaływania pomiędzy
cząsteczkami cieczy (kohezji), mamy do czynienia z całkowitym zwilżaniem (np.: czystego szkła przez wodę).
Jeśli jednak siły adhezji są mniejsze niż siły kohezji, dochodzi do formowanie kropli, tym bardziej sferycznych,
im większa jest dysproporcja pomiędzy tymi efektami. W celu opisania stopnia zwilżania podłoża przez ciecz
wprowadzono pojęcie kąta zwilżania θ, zdefiniowanego jako kąt pomiędzy stycznymi do obu faz w punkcie
styku. Jego wartość jest zależna od relacji pomiędzy napięciem powierzchniowym na granicy faz ciecz-ciało
stałe oraz ciecz-powietrze.
ciecz
θ
.
podoze
Wraz ze wzrostem wartości napięcia powierzchniowego na granicy faz ciecz-powietrze, wzrasta wymagana
wartość adhezji, niezbędna do dobrego zwilżenia. Środki powierzchniowo czynne, zmniejszając wartość
napięcia powierzchniowego (kohezji) pozwalają na dobre przyleganie wody nawet do substancji których
zwilżanie, w zwykłych warunkach, jest bardzo słabe (np.: podłoża brudnego lub pokrytego substancjami
tłustymi). Dodatkowym czynnikiem sprzyjającym zwilżaniu jest adsorpcja substancji powierzchniowo czynnych
na powierzchniach hydrofobowych na skutek oddziaływań Van der Waalsa z hydrofobowymi łańcuchami
węglowodorowymi substancji kapilarnie aktywnych. Tym samym w stronę cieczy skierowane są hydrofilowe
“główki”, co powoduje wzrost adhezji.
Substancje powierzchniowo czynne, na skutek oddziaływań typu Van der Waalsa, tworzą agregaty,
zwane micelami. W micelach zbudowanych z cząsteczek tego typu łańcuchy węglowodorowe skierowane są do
środka agregatu, gdzie dochodzi do niekowalencyjnych wiążących oddziaływań pomiędzy nimi, reszty
hydrofilowe skierowane są na zewnątrz miceli, gdzie oddziałują z cząsteczkami wody. We wnętrzu takiej miceli
zamknięte (enkapsulowane) mogą być substancje o charakterze hydrofobowym. Możliwe jest utworzenie
warstwy podwójnej, wówczas wnętrze miceli wypełnia, z racji jego hydrofilowego charakteru, roztwór wodny.
Taki agregat zbudowany z podwójnej (lub wielokrotnej) warstwy cząsteczek związku powierzchniowo czynnego
nazywamy liposomem.
micela liposom
12.1.6 Koloidy
Układem koloidalnym (układem mikrojednorodnym) nazywamy układ dwu- lub wielofazowy, w
którym jedna faza jest fazą zwartą stanowiącą ośrodek dyspersyjny dla pozostałych, będących fazami
rozproszonymi, których wymiary cząsteczek leżą w granicach od kilku do kilkuset nanometrów. Zajmują one, z
punktu widzenia stopnia zdyspergowania fazy rozproszonej, miejsce pośrednie pomiędzy zawiesinami (cząstki
są dostrzegalne pod mikroskopem optycznym) a roztworami właściwymi (dyspersja na poziomie molekularnym,
cząstki rzędu 1 nm). Podział koloidów w zależności od stanu skupienia ośrodka dyspersyjnego i fazy
rozproszonej prezentuje Tabela 11.
142
Tabela 11. Typy koloidów
Ośrodek dyspersyjny Faza rozproszone Nazwa Przykłady
Gaz - brak
Gaz Ciecz mgły mgła, chmura
Ciało stałe gazozole kurz, dym
Gaz piany, azozole piana
Ciecz Ciecz emulsje mleko, emulsje tłuszczu
Ciało stałe lizozole, suspensoidy zole metali, tlenków, siarczków
Gaz piany stałe pumeks, okluzje gazowe
Ciało stałe Ciecz emulsje stałe kwarc dymny, okluzje ciekłe
Ciało stałe zole stałe szkło rubinowe, perły fosforanowe
Wyróżniamy następujące grupy układów koloidalnych:
koloidy dyspersyjne – otrzymywane przez rozdrobnienie fazy zwartej lub poprzez wytrącenie na drodze
chemicznej z roztworu właściwego. Cząstki rozproszone zawierają 103 – 109 atomów lub cząsteczek.
koloidy asocjacyjne – powstają na skutek samorzutnego skupiania większej (103 – 104) liczby cząsteczek w
agregaty (micele). Ten typ koloidów tworzą związki powierzchniowo czynne.
koloidy cząsteczkowe – tzw. eukoidy, w których fazę rozproszoną stanowią pojedyncze, solwatowane
molekuły związków wielkocząsteczkowych, takich jak białka, polisacharydy, kwasy nukleinowe, polimery
syntetyczne.
Według innej klasyfikacji koloidy dzielimy na liofobowe, których cząsteczki nie ulegają solwatacji,
zawdzięczające trwałość ładunkowi elektrycznemu pochodzącemu od zaadsorbowanych na ich powierzchni
jonów, oraz liofilowe, o cząstkach silnie solwatowanych. Jeśli wielkość cząsteczek zdyspergowanych jest różna,
mówimy o koloidach polidyspersyjnych, jeśli zaś taka sama, o monodyspersyjnych. Cząsteczki koloidu nie
ulegają sedymentacji (wytrącaniu) w normalnych warunkach (w ziemskim polu grawitacyjnym), gdyż ich
rozmiary są tak małe, że chaotyczny ruch cieplny (tzw. ruchy Browna) mają przewagę nad siłami ciężkości.
Każda cząstka koloidu składa się z „jądra”, utworzonego z cząsteczek (jonów) fazy rozproszonej, oraz
warstwy elektrycznej, złożonej z jonów oraz dipoli fazy dyspersyjnej trwale związanej z „jądrem” koloidu (tzw.
warstwa Helmholtza – Sterna). Warstwa ta jest warstwą podwójną, z jednej strony tworzą ją jony zaadsorbowane
na powierzchni drobiny koloidu lub zjonizowane, hydrofilowe grupy funkcyjne cząsteczek tworzących micelę, z
drugiej, związane siłami elektrostatycznymi przeciwjony obecne w roztworze.
Cechą układów koloidalnych jest zdolność do koagulacji, tj. tworzenia przez cząsteczki koloidu coraz to
większych agregatów, co prowadzi w końcu do wytworzenia drobin na tyle dużych, że siły ciężkości przeważają
nad siłami Browna, czego następstwem jest wytrącenie się koloidu. Stabilność koloidu liofobowego zapewnia
obecność warstwy podwójnej, związane elektrostatycznie jony odpychają się, co uniemożliwia zbliżenie się
zdyspergowanych cząstek i ich agregację. Dodanie do układu silnego elektrolitu powoduje odebranie drobinom
koloidu części jonów tworzących warstwę Helmholtza (zostają one zaangażowane w tworzenie par i trójek
jonowych ze składnikami dodanego elektrolitu), a w następstwie koagulacje. W przypadku koloidów liofilowych
proces koagulacji opiera się na niszczeniu przez elektrolit otoczek solwatacyjnych, stabilizujących cząstki
zdyspergowane.
12.1.7 Reakcje lipidów

12.1.7.1 Wykrywanie gliceryny
W środowisku słabo kwaśnym, podczas ogrzewania, glicerydy ulegają rozpadowi z wytworzeniem
lotnego aldehydu – akroleiny, o charakterystycznym zapachu.
CH2OH
- 2 H2O
HC OH H2C CHO
CH2OH
12.1.7.2 Zmydlanie tłuszczów

Na skutek zasadowej hydrolizy lipidów powstaje gliceryna i sole wyższych kwasów tłuszczowych –
mydła. Mydła będące solami litowców są rozpuszczalne w wodzie ale w reakcji z solami metali dwu i
143
trójwartościowych tworzą, na skutek wymiany, sole nierozpuszczalne. W reakcji roztworów mydeł z kwasami
mineralnymi powstają wolne kwasy tłuszczowe. Mydła, podobnie jak lipidy, tworzą układy koloidalne i micele
(gwarantuje to obecność reszty polarnej - jonu karboksylanowego, oraz części niepolarnej – łańcucha
alifatycznego). Mydła należą do związków powierzchniowo czynnych, tzn. posiadają zdolność zmniejszania
napięcia powierzchniowego cieczy, przez co mogą stabilizować układy koloidalne (np.: lipidów lub białek). Na
reakcji tworzenia mydeł opiera się wyznaczanie tzw. liczby zmydlania, tj. liczby miligramów wodorotlenku
potasu zobojętniającej kwasy tłuszczowe zawarte w 1g badanego tłuszczu.
O
CH2 O C R CH2 OH O
KOH
R C O CH HO CH + 3 R C OK
O CH2 O C R CH2 OH
O O
M2+
2 R C OK R C O M + 2 K+
2
O O
H+
R C OK R C OH + K+
12.1.7.3 Wykrywanie wiązań podwójnych w lipidach

Obecność wiązań wielokrotnych C=C w kwasach tłuszczowych powoduje że lipidy dają odczyny
charakterystyczne dla związków nienasyconych. Najbardziej znanymi są:
reakcja z zasadowym roztworem nadmanganianu potasu – w wyniku reakcji jonów MnO4- z alkenami
dochodzi do utlenienia wiązania podwójnego, prowadzące do postania dialkoholu lub rozerwania cząsteczki
z wytworzeniem dwóch molekuł aldehydu, oraz redukcji jonu manganianowego(VII) z wytworzeniem
tlenku manganu(IV), co powoduje odbarwienie roztworu.
reakcja z jodem (odczyn Hübla) – w reakcji z jodem dochodzi do addycji cząsteczki I2 do wiązania
podwójnego, co prowadzi do powstania dijodopochodnej oraz powoduje odbarwienie roztworu jodu.
Katalizatorem tej reakcji jest chlorek rtęci(II). Na reakcji z jodem opiera się wyznaczanie tzw. liczby
jodowej, tj. liczby gramów jodu przyłączanego przez kwasy nienasycone zawarte w 100 g badanego
tłuszczu. Jest to wartość charakterystyczna dla tłuszczu z danego źródła, pozwalająca wykryć ewentualne
zafałszowania.
H3C COOH
KMnO4 I2
HO OH I I
KMnO4
H3C COOH H3C COOH

H H
O + O
H3C COOH
144
12.1.7.4 Reakcja cholesterolu
Pod wpływem stężonego kwasu siarkowego tworzą się produkty kondensacji, dehydratacji i
sulfonowania cholesterolu (odczyny Salkowskiego oraz Liebermanna-Burcharda). Powstałe produkty są
intensywnie zabarwione, co umożliwia identyfikacje i oznaczanie ilościowe tego sterolu.
-2 H2O
HO
H2SO4
HO3S
SO3H
145
146
12.2 Lipidy – część eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie z podstawowymi reakcjami i właściwościami lipidów oraz steroli.
Lipidy proste i złożone, woski, kwasy tłuszczowe, wzory ważniejszych kwasów tłuszczowych, reakcje lipidów,
zmydlanie, micele, czynność powierzchniowa, koloidy, sterole, sterydy.
ODCZYNNIKI
1 M NaOH 2 M HNO3 CCl4
30% NaOH 1 M molibdenian amonu etanol
1 M CaCl2 10% KOH w etanolu eter dietylowy
1 M BaCl2 KNO3 + Na2CO3 1:1 aceton
1 M Pb(CH3COO)2 kwas oleinowy chloroform
1 M H2SO4 detergent (np. Ludwik) bezwodnik kwasu octowego
1% I2 w etanolu KHSO4 roztwór mydła
2 M NaOH NaCl gliceryna
80% CH3COOH H2SO4 stęż. I2 roztwór nasycony w KI
UWAGA: Wodorotlenki sodu i potasu, kwas siarkowy, octowy oraz azotowy są silnie żrące. Sole rtęci,
baru i ołowiu są toksyczne. Pracując z nim obowiązuje stosowanie rękawic ochronnych i okularów.
Roztwory jodu są silnie plamiące. Rozpuszczalniki organiczne są łatwopalne. Pracuj z nimi z dala od
otwartych źródeł ognia. Ogrzewaj wyłącznie przy użyciu elektrycznych źródeł ciepła, najlepiej pod
dygestorium.
OPIS ĆWICZENIA
a. Emulgowanie tłuszczów
Do 7 probówek wlej po 3 ml wody i dodaj po 4 krople oliwy. Następnie dodaj:

I - probówka pierwsza stanowi układ kontrolny, tak że nie dodajemy nic, II - 4 krople 30% roztworu NaOH, III -
4 krople 30% NaOH i 1 kroplę kwasu oleinowego, IV - 1 kroplę kwasu oleinowego, V - kroplę roztworu mydła,
VI - kroplę detergentu, VII - 1 kroplę roztworu soli kwasu żółciowego. Probówki zakorkuj i każdą z nich
wytrząsaj dokładnie przez około 30s. Odczekaj kilka minut i zaobserwuj która z emulsji jest trwała a która ulega
rozdzieleniu na tłuszcz i wodę.
b. Wykrywanie gliceryny
Przygotuj 2 probówki. Do pierwszej z nich wlej 2 krople glicerolu, do drugiej 2 krople oleju. Do obu
probówek dodaj szczyptę wodorosiarczanu potasu. Probówki ogrzej w płomieniu palnika. Wydzielająca się
akroleina ma charakterystyczny zapach. Jej obecność można też wykryć umieszczonym u wylotu probówki
papierkiem nasączonym amoniakalnym roztworem azotanu srebra. Akroleina redukuje jony srebra do czarnego
srebra metalicznego.
c. Tworzenie mydeł i ich właściwości
1 ml oleju ogrzewaj przez 5 minut w probówce z 4 ml 30% roztworu NaOH i 1 ml etanolu. Następnie
mieszaninę wlej do zlewki zawierającej 40 ml gorącej wody i ogrzewaj do całkowitego rozpuszczenia
wytworzonego mydła. Otrzymany roztwór przelej do 5 probówek w celu zbadanie jego własności.
- Wysalanie koloidu:
Do probówki zawierającej roztwór mydła dodaj szczyptę chlorku sodu i dobrze wymieszaj. Wytrącony
osad mydła oddziel przez dekantację i zbadaj jego rozpuszczalność w wodzie destylowanej.
147
- Strącanie mydeł nierozpuszczalnych
Do trzech probówek zawierających roztwór mydła dodaj kolejno po kilka kropli roztworu chlorku
wapnia, chlorku baru i octanu ołowiu. Po oddzieleniu osadów przez dekantację zbadaj ich rozpuszczalność w
wodzie.
- Wytrącanie kwasów tłuszczowych

Do probówki z roztworem mydła dodaj 1 M kwas siarkowy aż do odczynu kwaśnego. Zbadaj
rozpuszczalność wytrąconego kwasu tłuszczowego, po oddzieleniu go przez dekantację, w CCl4.
d. Wykrywanie nienasyconych kwasów tłuszczowych
Do 3 probówek dodaj niewielką ilość oliwy, masła i margaryny. Następnie wlej kilka kropli roztworu
jodu w alkoholu i kilka kropli roztworu chlorku rtęci (UWAGA: sole rtęci są toksyczne). W probówkach
zawierających tłuszcze zbudowane z nienasyconych kwasów tłuszczowych obserwuje się odbarwienie roztworu.
e. Wykrywanie choliny i fosforanów w lecytynie
I.
Grudkę lecytyny zalej w parowniczce 4 ml 2M roztworu NaOH i ogrzewaj łagodnie, stale mieszając,
przez 5 minut. Uzupełnij ubytek odparowanej wody wodą destylowaną. Do roztworu dodaj 80% kwas octowy do
wystąpienia odczynu kwaśnego wobec papierka wskaźnikowego. Wytrącone kwasy tłuszczowe odsącz przez
zwitek waty a do kropli przesączu dodaj kroplę nasyconego roztworu jodu. Zaobserwuj powstawanie kryształów
jodku choliny.
II.
W małym tyglu rozetrzyj bagietką grudkę lecytyny z niewielką ilością mieszaniny azotanu potasu i
węglanu sodu. Tygiel praż w płomieniu palnika do szarego zabarwienia mieszaniny (czynność wykonuj pod
dygestorium). Po ostygnięciu tygla dodaj do niego 1 ml 2 M HNO3 i kilka kropli molibdenianu amonu. Żółte
zabarwienie świadczy o obecności fosforanów.
f. Izolacja cholesterolu
Żółtko jaja zalej w kolbie 80 cm3 mieszaniny ekstrahującej, złożonej z etanolu i eteru zmieszanych w
stosunku 3:1. Mieszaj przez 10 minut, a następnie przesącz. Osad na sączku przepłucz kolejnymi 20 cm3
mieszaniny ekstrahującej. Przesącz odparuj na wyparce. Pozostałość rozpuść w 3 cm3 eteru a następnie dodaj 10
cm3 acetonu. Osad lecytyn odwiruj. Supernatant odparuj pod próżnią do ¼ objętości, dodaj 5 cm3 alkoholowego
roztworu KOH a następnie ogrzewaj we wrzącej łaźni wodnej przez 30 min. Po oziębieniu dodaj 10 cm3 eteru.
Odwiruj osad wytrąconych mydeł. Przesącz odparuj do sucha na wyparce rotacyjnej, dodaj 2 cm3 gorącego
etanolu, przenieś do probówki wirówkowej i dodawaj kroplami wodę. Wypadający osad cholesterolu odwiruj.
Reakcje cholesterolu:
- Odczyn Salakowskiego
Do suchej probówki wlać 0,5 ml chloroformowego roztworu cholesterolu, a następnie 0,5 ml stężonego
kwasu siarkowego. Czerwona barwa świadczy o obecności cholesterolu.
- Odczyn Liebermanna-Burcharda
Do suchej probówki wlać około 0,5 ml roztworu cholesterolu w CHCl3, a następnie 0,5 ml bezwodnika
kwasu octowego i kilka kropli stężonego kwasu siarkowego. Powstaje barwa zielona.
148
13. Ćwiczenie 9
13.1 Otrzymywanie i chromatografia lipidów złożonych
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie z metodą chromatografii cienkowarstwowej i analiza składu frakcji lipidów organizmów żywych.
Chromatografia: podział, podstawy teoretyczne, współczynnik Rf, eluenty, polarność, lipidy proste i złożone i
ich rola w organizmach żywych.
ODCZYNNIKI
eter dietylowy molibdenian amonu (1 g w 8 L-α-lizofosfatydylocholina

etanol ml wody + 3 ml HCl i 3 ml 12 sfingomielina
aceton M HClO4 w 86 ml acetonu) galaktocerebrozyd
chloroform 50% kwas siarkowy sulfatyd
metanol CdCl2 w etanolu kardiolipina
chlorek metylenu gangliozyd 1-monooleilo-rac-glicerol
heksan L-α-fosfatydylocholina 1,3-dioleina
kwas octowy L-α-fosfatydyloetanolamina trioleina
dipikryloamina 0,2% w L-α-fosfatydyloinozytol oleinian cholesterylu
acetonie L-α-fosfatydyolseryna cholesterol
UWAGA: Kwasy: siarkowy, solny i nadchlorowy są żrące. Sole kadmu są toksyczne. Obowiązuje praca w
rękawicach i okularach ochronnych. Rozpuszczalniki organiczne są palne, ogrzewanie prowadź z dala od
źródeł ognia, przy pomocy elektrycznych źródeł ciepła.
Przygotuj:
100 cm3 30% etanolu
OPIS ĆWICZENIA
a. Izolacja lecytyn
Żółtko jaja oddziel od białka, zważ i zalej w kolbie stożkowej 75 ml mieszaniny eter-etanol (1:2) a
następnie mieszaj intensywnie przez 10 minut, później osad odwiruj. Zlej klarowny supernatant, odparuj
rozpuszczalnik na wyparce rotacyjnej a następnie rozpuść pozostałość w eterze dietylowym (10 ml). Mieszając
roztwór wkraplaj do niego aceton (50 ml). Osad fosfolipidów odwiruj, przemyj acetonem (15 ml). Pobierz z
osadu niewielką ilość (ok. 10 mg) i pozostaw do analizy TLC. Resztę frakcji fosfolipidowej rozpuść w 5 ml
etanolu i dodaj 5 ml roztworu chlorku kadmu w C2H5OH. Po 10 minutach osad odwiruj a przesącz odrzuć.
Pozostałość rozpuść w chloroformie (15 ml). Dodaj 25 ml 30% etanolu, wytrząśnij energicznie a następnie
odwiruj w celu dokładnego rozdzielenia warstw. Warstwę etanolowo - wodną (górną) odrzuć. Proces ekstrakcji
CdCl2 powtórz czterokrotnie. Roztwór chloroformowy, po ostatniej ekstrakcji, odparuj na wyparce, pozostałość
rozpuść w eterze dietylowym (5 ml), i dodaj do niego acetonu (45 ml). Odwiruj osad lecytyn, przemyj go
acetonem (3*10 ml), wysusz i zważ.
b. Izolacja lipidów mózgu lub wątroby
Około 25 g mózgu cielęcego lub wątroby zmiksuj, przenieś do kolby stożkowej i zalej 250 ml acetonu.
Mieszaninę dokładnie wytrząśnij. Po przesączaniu pod próżnią osad pozostaw rozłożony na bibule celem
wysuszenia.
149
5 g sproszkowanego w moździerzu suchego mózgu (lub wątroby) umieść w kolbie okrągłodennej
zaopatrzonej w chłodnicę zwrotną i zalej 25 ml mieszaniny chloroform-metanol (2:1). Ogrzewaj do wrzenia
przez 15 minut, mieszając okresowo zawartość kolby. Po ochłodzeniu osad odsącz przez sączek karbowany do
wytarowanej kolby, rozpuszczalnik odparuj do sucha na wyparce rotacyjnej, zważ a następnie rozpuść
pozostałość w 5 ml chlorku metylenu.
c. Ekstrakcja lipidów z osocza
0,5 ml surowicy krwi wkraplaj powoli do 9,5 ml mieszaniny eteru etylowego z etanolem (3:1),
wymieszaj i podgrzej umieszczając probówkę w gorącej wodzie na 2-3 minuty, mieszając ciągle zawartość.
Osad odwirowuj a warstwę organiczną odparowuj na wyparce rotacyjnej. Suchą pozostałość przemyj trzykrotnie
1 ml porcjami heksanu. Wyciągi heksanowe zagęść do objętości 0,5 ml.
d. Chromatografia cienkowarstwowa lipidów
Przygotuj dwie komory chromatograficzne, na dno pierwszej nalej mieszaninę chloroform-metanol-woda

(65:25:4) - faza 1, do drugiej heksan-eter dietylowy-kwas octowy (80:20:1) - faza 2. Komory pozostaw na 1 h w
celu nasycenia parami rozpuszczalników. Przygotuj 4 płytki chromatograficzne, pokrytych żelem
krzemionkowym, 2 o wymiarach 10x10 cm i 2 o wymiarach 5x10 cm. Na punkty startowe nanieś:
a. na płytkę do rozdziału lipidów polarnych (faza 1, większe płytki):

-ekstrakt lipidów z tkanki zwierzęcej
-ekstrakt lipidów z surowicy
-surową lecytynę (roztwór w chlorku metylenu)
-wzorce: gangliozyd, L-α-fosfatydylocholinę, L-α-fosfatydyloetanolaminę, L-α-fosfatydylinozitol,
L-α-fosfatidyloserynę, L-α-lizofosfatydylcholinę, sfingomielinę, galaktocerebrozyd, sulfatyd, kardiolipinę
b. na płytkę do rozdziału lipidów niepolarnych (faza 2, mniejsze płytki)

-ekstrakt lipidów z tkanki zwierzęcej
-ekstrakt lipidów z surowicy
-wzorce: 1-monooleilo-rac-glicerol, 1,3-dioleilo-rac-glicerol, trioleilo-rac-glicerol, cholesterol, oleinian
cholesterolu
Po rozwinięciu płytki wyjmij z komór, wysusz a następnie:
a. obejrzyj pod lampą UV (obie płytki)
b. wywołaj w parach jodu (tą samą którą oglądano pod ultrafioletem, obie płytki)
c. spryskaj 50% kwasem siarkowym i ogrzej w suszarce do 1500C (obie płytki)
150
14 Ćwiczenie 10
14.1 Kwasy nukleinowe – wstęp teoretyczny
14.1.1 Zasady azotowe, nukleozydy, nukleotydy
Nukleotydy są estrami fosforanowymi N-glikozydowych pochodnych heterocyklicznych zasad
azotowych. Zasady azotowe są związkami o szkielecie puryny (tzw. zasady purynowe) bądź pirymidyny (tzw.
zasady pirymidowe). Pierścienie heterocykliczne (purynowy i pirymidynowy) mają strukturę płaską, co nie
pozostaje bez znaczenia dla struktury kwasu nukleinowego. Głównymi zasadami pirymidynowymi są tymina,
cytozyna i uracyl. Do najważniejszych związków z drugiej grupy należy adenina i guanina. Ponadto z
naturalnych kwasów nukleinowych izolowano niewielkie ilości innych związków, których funkcje nie są do
końca poznane.
N
N N
N N N
H
pirymidyna puryna
O O NH2
NH NH N
N O N O N OH
H H
uracyl tymina cytozyna
NH2 O
N N
N HN
N H2N N N
N
H H
adenina guanina
Zasady azotowe wykazują tautomerię keto-enolową, odgrywającą dużą rolę w mutagenezie i parowaniu zasad.
N-glikozydowe pochodne zasad azotowych nazywamy nukleozydami. Komponentem cukrowym tych połączeń
jest D-ryboza (w przypadku RNA) lub D-2-deoksyryboza (w przypadku DNA). Wiązanie glikozydowe łączy
pozycje C-1’ cukru z pozycją N-1 pirymidyny lub N-9 puryny i ma ono konfiguracje β. Nukleozydy zawierające
rybozę (rybozydy) nazywają się odpowiednio: adenozyna (A), guanozyna (U), cytydyna (C), urydyna (U) i
tymidyna (T). Nazwy pochodnych deoksyrybozy tworzymy dodając do nazw rybozydów przedrostek deoksy- i
oznaczamy dodając do skrótów jednoliterowych d (np.: dA, dT). Ze względu na zawadę steryczną w przewadze
występują nukleozydy o konfiguracji anty. Numerację pierścienia cukrowego oznaczamy „primami” np. C-1’ w
odróżnieniu od numeracji zasady heterocyklicznej.
151
O O NH2
NH NH N
N O N O N O
HO HO HO
O O O
OH R OH R OH R
R = OH - urydyna R = OH - tymidyna R = OH - cytydyna
R = H - 2-deoksyurydyna R = H - 2-deoksytymidyna R = H - 2-deoksycytydyna
O H2N
NH N
N N
NH2
N N
N N
HO HO
O O
OH R OH R
R = OH - guanozyna R = OH - adenozyna
R = H - 2-deoksyguanozyna R = H - 2-deoksyadenozyna
H2N NH2
N N
N N
N N
N N
HO HO
O O
OH OH OH OH
anti syn
Nukleotydami nazywamy nukleozydy zestryfikowane resztami kwasu fosforowego(V). Reszta fosforanowa(V)
przyłączona jest zazwyczaj do węgla C-5’ pierścienia cukrowego. Monofosforany nukleozydów oznaczamy
dodając do skrótów przypisanych nukleozydom końcówkę MP (np.: AMP, dCMP). Zamiast reszty kwasu
fosforowego(V) w cząsteczce nukleotydu może znajdować się reszta pochodząca od kwasu difosforowego(V)
lub trifosforowego (V) (kwasu pirofosforowego). Związki te, nazywane di- lub trifosforanami nukleozydów i
zapisujemy dodając do skrótu litery DP (dla difosforanu) lub TP (w przypadku trifosforanu) np.: ADM, dTDP,
ATP, dCTP.
H2N
N
N
N
O O O N
O O O O
P P P
O
O O O
OH OH
adenozyno-5'-monofosforan (AMP)
adenozyno-5'-difosforan (ADP)
adenozyno-5'-trifosforan (ATP)
152
14.1.2 Kwasy nukleinowe
Produktami polikondensacji nukleotydów są kwasy nukleinowe. W organizmach żywych występują
dwa ich typy, rozróżniane ze względu na charakter pierścienia cukrowego i skład nukleotydowy, różniące się
zasadniczo właściwościami i funkcjami. Pierwszym z nich jest kwas deoksyrybonukleinowy – DNA,
zawierający reszty 2-deoksyrybozy oraz adeninę, guaninę, cytozynę i tyminę. W skład kwasu rybonukleinowego
(RNA) wchodzą cząsteczki rybozy oraz adenina, guanina, cytozyna i uracyl. Obok wymienionych zasad
azotowych w skład obu kwasów wchodzą niewielkie ilości zasad modyfikowanych o odmiennej strukturze.
Proces polikondensacji „cegiełek” nukleotydowych polega na wytworzeniu wiązania estrowego pomiędzy resztą
fosforanową w pozycji C-5’ jednej cząsteczki monofosforanu a grupą hydroksylową w pozycji C-3’ kolejnej
molekuły. Cząsteczki tych polimerów są polarne, na jednym z końców występuje wolna grupa 3’ hydroksylowa,
na drugim 5’ hydroksylowa. Wykazują one charakter polianionów, zdolnych do wiązania zasadowych białek
oraz jonów metali wielowartościowych, co nie pozostaje bez znaczenia dla ich struktury i właściwości.
Z - zasada azotowa
O
X = OH w RNA lub X = H w DNA
O
P
O OCH2 Z
O
O X
O
P
O OCH2 Z
O
O X
O
P
O OCH2 Z
O
O X
Badania wykazały, że skład procentowy frakcji zasad azotowych izolowanych z RNA jest zmienny i nie
obserwuje się większych zależności pomiędzy ich wzajemnymi proporcjami. W przypadku DNA sytuacja
przedstawia się odmiennie. W hydrolizacie wykazano obecność równych ilości adeniny i tyminy oraz guaniny i
cytozyny, przy czym proporcje pomiędzy obiema parami są różne, w zależności od źródła materiału.
Wywnioskowano na tej podstawie, że DNA występuje w formie dimerycznej, przy czym powstawanie dimeru
odbywa się na zasadzie tworzenia wiązań wodorowych pomiędzy resztami A i T oraz G i C (mówimy że zasady
te są komplementarne). Procesy tworzenia tych wiązań nazywamy parowaniem zasad. Tak duża selektywność
oddziaływań wynika z geometrii centrów protonodonorowych i protonoakceptorowych w cząsteczkach zasad
azotowych, stabilności forma tautomerycznych w których występują (np. o ile najbardziej stabilny tautomer
tymidyny ulega parowaniu z resztą adenozyny, to w przypadku enolowej formy tymidyny dochodzi do
oddziaływania z cząsteczką guanozyny) oraz geometrii wiązania N-glikozydowego.
153
CH3 H
O N
H H H
N O
N N N N
cukier H N cukier H
N N
N
O O
N H
N N N N
cukier cukier
H
para A - T para G - C
CH3
O
H
O
N N
cukier H N
N
O
H
N N N
cukier
H
nieprawidowa para G - T
Tak więc sekwencja nukleotydów w jednej nici DNA determinuje kolejność nukleotydów w drugiej nici dimeru,
zgodnie z zasadami komplementarności. Oba łańcuchy DNA cechuje przeciwna polaryzacja, tj. koniec 3’ jednej
nici sąsiaduje z końcem 5’ drugiej.
5' T T C T C A A C T T G G A C G 5'
3' A A G A G T T G A A C C T G C 3'
Dwa łańcuchy polinukleotydowe, tworzące cząsteczką DNA, biegnące w przeciwnych kierunkach, okręcają się
wokół wspólnej osi śrubowej tworząc prawoskrętną, dwuniciową helisę. Do wnętrza helisy skierowane są reszty
purynowe i pirymidynowe natomiast jej powierzchnia zewnętrzna utworzone jest przez fragmenty
fosfosacharydowe. Istnienie struktury helikalnej determinowane jest przez oddziaływania pomiędzy
cząsteczkami zasad azotowych wchodzących w skład jednej nici, o tworzeniu struktury dwuniciowej
(dimerycznej) decydują wzajemne oddziaływania pomiędzy zasadami dwu łańcuchów. Pierścienie purynowe i
pirymidynowe jednej pary komplementarnych zasad nie leżą dokładnie w jednej płaszczyźnie lecz są skręcone
względem siebie jak łopaty śmigła.
plaszczyzna zasady pirymidynowej
plaszczyzna zasady purynowej ,

skrecenie
, smiglowe
Struktura przestrzenna DNA jest układem dynamicznym. Stopień skręcenia łańcuchów jest różny i zależy od
lokalnej sekwencji nukleotydów oraz czynników zewnętrznych takich jak siła jonowa czy pH środowiska.
Ponadto helisa może wyginać się w łuki lub przyjmować formy superhelikalne bez większych lokalnych zmian
strukturalnych. Na powierzchni heliksu wyróżnić można dwa zagłębienia, zwane większym i mniejszym
rowkiem (bruzdą). Powstają one dlatego, że wiązania N-glikozydowe komplementarnych par zasad nie leża
dokładnie naprzeciwko siebie. Rowki są wyściełane atomami lub grupami funkcyjnymi, będącymi donorami
bądź akceptorami protonu (tj. mogącymi uczestniczyć w tworzeniu wiązań wodorowych), przez co są
odpowiedzialne za tworzenie kompleksów kwas nukleinowy – białko.
duzy rowek
N
N
N N
N cukier
cukier N
maly rowek
154
Podczas badań rentgenograficznych wykazano istnienie trzech zasadniczych typów (form), jakie może
przyjmować molekuła DNA.
Zasadnicze różnice pomiędzy nimi zestawiono w Tabeli 12.
Tabela 12. Porównanie A, B i Z DNA

Parametr Typ helisy
A B Z
Kształt najszersza pośrednia najwęższa
Przyrost długości helisy na parę 0,23 nm 0,34 nm 0,38 nm
zasad
Średnica helisy 2,55 nm 2,37 nm 1,84 nm
Kierunek skręcenia prawoskrętna prawoskrętna lewoskrętna
Wiązanie glikozydowe anti anti anti dla C i T
syn dla G
Konformacja pierścienia C3’-endo C2’-endo C3’-endo
cukrowego
Liczba par zasad na skręt helisy 11 10,4 12
Skok helisy 2,53 nm 3,54 nm 4,56 nm
Odchylenie pary zasad od 19o 1o 9o
położenia prostopadłego do osi
helisy
Duży rowek wąski i bardzo głęboki szeroki i dość głęboki płaski
Mały rowek bardzo szeroki i płytki wąski i dość głęboki bardzo wąski i głęboki
C2’ C3’
C2’-endo C3’-endo
Kwas rybonukleinowy (RNA) występuje w formie monomeru, tj. nie tworzy się kompleks zbudowany z
dwóch nici, związanych wiązaniami wodorowymi. W związku z tym, wzajemny stosunek zasad
komplementarnych nie musi być równy. Jednakże często dochodzi do parowania się odcinków
komplementarnych znajdujących się w obrębie jednej nici. Struktura przestrzenna RNA jest różna i zależna od
funkcji danej jego formy. We wszystkich organizmach prokariotycznych i eukariotycznych występują 3 główne
typy kwasu rybonukleinowego.
155
• informacyjny RNA (mRNA) – klasa najbardziej heterogenna pod względem wielkości cząsteczek, ich
struktury pierwszorzędowej (kolejności zasad) oraz stabilności. Służą jako przenośniki informacji z DNA do
miejsc syntezy białek, gdzie pełnią funkcję matryc na których zachodzi polikondensacja aminokwasów
według określonej sekwencji, której następstwem jest wytworzenie łańcucha polipeptydowego. Cząsteczka
mRNA wykazuje kilka specyficznych cech strukturalnych. Koniec 5’ łańcucha polinukleotydowego
zbudowany jest z 2’-O-metylowanej reszty nukleotydowej, połączonej poprzez resztę 5’-OH z trifosforanem
7-metyloguanozyny. Kolejną cechą informacyjnego kwasu rybonukleinowego jest obecność, w 3’
końcowym odcinku łańcucha, fragmentu poliA zawierającego 200-250 reszt adenylanowych. Modyfikacje
te chronią cząsteczkę mRNA przed atakiem 3’- oraz 5’-egzonukleaz.
OH OH
O
H2N N N H2CO
O
P
N O
N
O
CH3 P
O O O
O
P
O OCH2 Z
O
O OCH3
O
P
O OCH2 Z
O
O OH
O
P
O OCH2 Z
O
O OH
NH2
O N
N
O
P
O OCH2 N N
O
O OH 200-250
H
• transferowy RNA (tRNA) – cząsteczki tRNA składają się z ok. 73-93 rybonukleotydów (masa ok. 25 kDa).
Służą one jako łączniki w procesie translacji informacji zapisanej w sekwencji nukleotydów matrycowego
RNA na swoiste aminokwasy. Każdemu aminokwasowi (z wyjątkiem aminokwasów powstających na
drodze modyfikacji posttranslacyjnej) przyporządkowany jest przynajmniej jeden rodzaj transferowego
RNA. Każda swoista molekuła tRNA różni się od innych sekwencją nukleotydową, jednakże w ich
strukturze znaleźć można wiele wspólnych cech. Struktura pierwszorzędowa wszystkich cząsteczek
transferowego kwasu rybonukleinowego pozwala na jego sfałdowanie, a wewnątrzcząsteczkowa
komplementarność niektórych odcinków umożliwia wytworzenie struktury drugorzędowej, podobnej do
liścia koniczyny. W cząsteczkach tRNA występuje wiele nietypowych zasad azotowych, zazwyczaj 7-15 na
156
cząsteczkę. Modyfikacje takie zapobiegają parowaniu pewnych odcinków łańcucha rybonukleotydowego,
co jest ważne dla zachowania i stabilizacji geometrii cząsteczki. Ponadto wpływają one na hydrofobowość
molekuły, własność istotną dla prawidłowego wiązania z białkami rybosomalnymi oraz wpływającą na
strukturę trzeciorzędową cząsteczki. Najważniejsze cechy cząsteczki przedstawiono na przykładzie
alaninowego transferowego RNA izolowanego z drożdży. Zasady oznaczone czcionką pogrubioną są
wspólne dla wszystkich molekuł tRNA. Zaciemnionymi kółkami oznaczono zasady nietypowe (UH2 –
dihydrourydyna; mI – metyloinozyna; T – rybotymidyna; I – inozyna; mG – metyloguanozyna; m2G –
dimetyloguanozyna; Ψ - pseudourydyna). W molekule wyróżnić możemy następujące fragmenty:
• ramię akceptorowe – składa się z szypuły, utworzonej ze sparowanych zasad. W jego skład wchodzą
oba końce (tj. 3’ i 5’) łańcucha rybonukleotydowego. Koniec 5’ jest fosforylowany (nukleotydem 5’
końcowym jest zwykle guanozyna). Cztery ostatnie nukleotydy końca 3’ są wolne, przy czym ostatnie
trzy tworzą sekwencję CCA. Do reszty 3’-OH terminalnej adenozyny przyłączany jest, poprzez
wiązanie estrowe, aminokwas.
• pętla TΨC – nazwa pochodzi od wspólnej dla wszystkich tRNA sekwencji rybotymidyna –
pseudourydyna – cytydyna występującej w tej pętli.
• pętla DHU – nazwa pochodzi od obecnego w ramieniu, we wszystkich typach tRNA, dihydrouracylu.
Liczba reszt tej modyfikowanej zasady jest zmienna.
• pętla antykodonowa – zawiera miejsce wiązania cząsteczki tRNA z odpowiednią sekwencją mRNA
(tzw. antykodon). Zawiera siedem zasad o następującej sekwencji: pirymidyna – uracyl – antykodon (3
zasady) – zmodyfikowana puryna – zmienna zasada.
• ramię dodatkowe – najbardziej zmienny fragment cząsteczki tRNA. Stanowi podstawę do klasyfikacji
cząsteczek transferowego kwasu rybonukleinowego. Klasa 1 tRNA ma dodatkowe ramię długości 3 – 5
par zasad (75% wszystkich tRNA), klasa 2 tRNA 13 – 21 par zasad (często o strukturze szypuła –
pętla).
Cząsteczka tRNA ma kształt litery L (w zgięciu znajdują się pętle TΨC oraz DHU). Na końcach ramion
litery L znajdują się pętla antykodonowa oraz ramię akceptorowe. W cząsteczce znajdują się dwa
dwuniciowe fragmenty helikalne, każdy o długości ok. 10 par zasad. Większość zasad znajdujących się w
odcinkach jednoniciowych jest uwikłana w nietypowe dla kwasów nukleinowych wiązania wodorowe (GG;
AA; AC). W wiele wiązań wodorowych uwikłany jest także szkielet poli(rybozofosforanowy).
miejsce przylaczenia
,
3' aminokwasu
OH
fosforylowany C
koniec 5' C
5'p
A
G ramie, petla
,
petla
, C
DHU receptorowe TΨC
G C
C G
G C
UH2 U U
mG
G C
U U
A G G C C A
G A U
U G C G G
C
U C C G G C
G G C G C T
C
G A
C G A G
G Ψ
m2G UH2
U A
UH2
C G ramie, dodatkowe
(zmienne)
C G
C G
Ψ
U
U
C mI
G
petla
,
antykodonowa
157
• rybosomalny RNA (rRNA) – rybosom jest strukturą nukleoproteinową w której 2/3 masy stanowią kwasy
rybonukleinowe. Rybosom ssaków składa się z dwóch podjednostek różniących się masą, oznaczanych jako
40S (1,4*106 Da) oraz 60S (2,8*106 Da). W skład podjednostki 40S wchodzi pojedyncza cząsteczka RNA
(oznaczana jako 18S) zawierająca 1900 zasad (ok. 7*105 Da). Większa podjednostka 60S zawiera 3
łańcuchy rybonukleotydowe: 5S; 5,8S oraz 28S o masach odpowiednio 35kDa; 45 kDa oraz 1,6*106 Da (co
odpowiada ok. 120; 160 i 4700 zasadom). Rybosomalne RNA tworzą w przestrzeni ściśle określone
struktury z wieloma odcinkami helikalnymi, powstającymi na drodze wewnątrzcząsteczkowego parowania
odcinków komplementarnych.
158
14.2 Kwasy nukleinowe – część eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Otrzymanie preparatu DNA i zbadanie jego składu.
Nukleozydy, nukleotydy, zasady azotowe, DNA. RNA, chromatografia-podstawy teoretyczne i techniki.
ODCZYNNIKI
NaCl HClO4 72% uracyl

NaHCO3 etanol cytozyna
sulfododecylan sodu HCl stęż. adenina
izopropanol tymina guanina
UWAGA: Kwasy: solny i nadchlorowy są silnie żrące. Rozpuszczalniki są łatwopalne, operacje z nimi
prowadź z dala od źródeł ognia. Ze względu na niebezpieczeństwo wybuchu ogrzewanie z kwasem
nadchlorowym prowadź pod dygestorium, dbając o to, by w łaźni wodnej znajdowała się woda. Pracuj w
okularach ochronnych!
Przygotować:
10 cm3 80% etanolu
OPIS ĆWICZENIA
a. Izolacja DNA
Rozpuścić w 120 ml wody destylowanej 1,5 g chlorku sodu, 5 g wodorowęglanu sodu i 0,6 g detergentu
(sulfododecylan sodu). Przygotowany bufor ozięb w łaźni lodowej do 2-40C (w celu obniżenia temperatury łaźni
lodowej do pokruszonego lodu dodaj chlorku sodu lud chlorku wapnia). W homogenizatorze umieść cebulę
(bądź banan), dodaj około 20 ml wody i starannie zmiksuj. 50 ml uzyskanej papki zmieszaj z przygotowanym
buforem, a następnie mieszaj energicznie przez 5 minut. Osad tkanek roślinnych odwiruj przy 2000 obrotów a
klarowny supernatant, po ochłodzeniu w łaźni lodowej, przelej do czystego cylindra miarowego o pojemności
250 cm3. Następnie, z pomocą pipety, nawarstw na warstwę wodną schłodzony do ok. –200C izopropanol (ok.
100 cm3). Przez warstwę alkoholu przeprowadź bagietkę (uważając by nie pomieszać warstw), tak by jej
końcówka znajdowała się tuż poniżej granicy warstw, a następnie obracaj bagietką i poruszaj nią delikatnie w
górę i w dół, tak aby gromadzący się na granicy DNA przyczepił się do bagietki. Bagietkę wyjmij, a uzyskany
surowy dna przenieś do probówki wirówkowej, dodaj 10 ml 80% etanolu, schłodzonego do –200C i odwiruj.
Osad kwasu dezoksyrybonukleinowego użyj do dalszych reakcji.
b. Hydroliza DNA
Około 5 mg DNA umieść w probówce, dodaj 0,2 ml 72% kwasu nadchlorowego i umieść w wrzącej
łaźni wodnej na ok. 1h, co jakiś czas uzupełniając ubytek kwasu wodą destylowaną. Po oziębieniu dodaj 0,6 ml
wody, zamieszać i odwiruj przy 3000 obr./min.
c. Chromatografia cienkowarstwowa
Na płytkę chromatograficzną o wymiarach 6x10 cm pokrytą żelem krzemionkowym, nanieś roztwory

wzorcowe tyminy, uracylu, guaniny, cytozyny i adeniny oraz próbkę hydrolizatu. Chromatogram rozwiń w
układzie chloroform - metanol (0,75:0,25). Płytki wysusz w strumieniu powietrza. Plamy zasad zlokalizuj za
pomocą UV.
159
160
15. Ćwiczenie 11
15.1 Barwniki naturalne – wstęp teoretyczny
15.1.1 Teoria barwy
Oko ludzkie jest odpowiedzialne za odbieranie promieniowania elektromagnetycznego z przedziału
400-800 nm. Barwą nazywamy efekt neurofizjologiczny (wrażenie wzrokowe) wywołane przez promieniowanie
elektromagnetyczne z zakresu widzialnego o określonej długości fali. Jeśli do oka dociera światło o pewnej
określonej częstotliwości z powyższego zakresu (monochromatyczne), wówczas odbieramy wrażenie barwne,
odpowiadające czystej barwie widmowej, zwanej również barwą prostą (w widmie światła białego wyróżniamy
7 barw prostych: czerwoną, pomarańczową, żółtą, zieloną, niebieską, błękitną i fioletową oraz kilka barw
pośrednich). Jeśli do oka dochodzi promieniowanie elektromagnetyczne będące mieszaniną fal o różnych
długościach i różnym natężeniu, oko odbiera je jako pewien wypadkowy bodziec, zwany barwą złożoną
(mieszaną). Barwy mieszane ulegają rozszczepieniu w pryzmacie na wiązki promieniowania
monochromatycznego. Większość barw złożonych wywołuje takie samo wrażenie wzrokowe, jak pewne
„czyste” częstotliwości z widma światła białego, wyjątek stanowię barwy purpurowe, które nie odpowiadają
żadnym pojedynczym długościom fali. W przypadku powstawania barw złożonych jako efektu nałożenia się
promieniowania o kilku długościach, mówimy o addytywnym mieszaniu (powstawaniu) barw. Wykazano, iż
przez zmieszanie addytywne trzech długości fali: czerwonej (700 nm), zielonej (546,1 nm) i fioletowej (435,8
nm), tzw. barw podstawowych, w różnych proporcjach (tj. o różnym natężeniu) można uzyskać dowolną barwę
chromatyczną (kolorową) jak i achromatyczną (niekolorową). Promieniowania złożone o takim składzie i takich
stosunkach natężeń, jakie występują w świetle słonecznym wywołuje wrażenia światła białego. Wystarczy
jednak usunąć z widma którąkolwiek z częstotliwości lub zmienić stosunek natężeń, by zamiast światła białego
otrzymać wrażenia barwne. Sposób wywoływania barw poprzez usuwanie pewnych składników padającego
promieniowania nazywamy substraktywnym. Na przykład usunięcie z widma promieniowania białego fal o
częstotliwościach odpowiadających barwie żółtej wywoła wystąpienie barwy niebieskiej. Takie pary barw, które
w sumie dają wrażenia światła białego nazywamy barwami dopełniającymi (często jedną z pary nazywa się
barwą zasadniczą, drugą – dopełniającą). W Tabeli 13 zebrano kilka zestawów barw dopełniających.
Tabela 13. Barwy zasadnicze dopełniające

Barwa zasadnicza Długość fali Barwa dopełniająca Długość fali
Fioletowa 400-440 nm Żółta 570-572 nm
Indygo 440-470 nm Żółta 572-575 nm
Błękitna 470-480 nm Żółtopomarańczowa 575-580 nm
Niebieska 480-490 nm Żółtopomarańczowa i 580-600 nm
pomarańczowa
Niebieskozielona 490-495 nm Pomarańczowoczerwona i 600-700 nm
czerwona
Zielona 495-560 nm Czerwonopurpurowa -
Zielonożółta 560-570 nm Purpurowofioletowa -
Żółta 570-575 nm Fioletowa i indygo 400-470 nm
Żółtopomarańczowa 575-590 nm Błękitna i niebieska 470-486 nm
Pomarańczowa 590-600 nm Niebieska 486-490 nm
Pomarańczowoczerwona 600-620 nm Niebieskozielona 490-493 nm
Czerwona 620-700 nm Niebieskozielona 493-495 nm
Efekt koloru dowolnego ciała lub ośrodka nie świecącego polega na wywoływaniu wrażenia barwy pod
wpływem promieniowania oświetlającego. Zabarwienie ciał jest wynikiem różnorodnych procesów fizycznych z
których najważniejszymi są:
• selektywne pochłanianie – w najprostszym przypadku zjawisko to obserwuje się przy przechodzeniu światła
przez ośrodek pochłaniający promieniowanie o pewnych długościach fali, odpowiadających określonym
obszarom widma. Barwa takiego ciała jest wrażeniem będącym efektem złożenia tych wszystkich części
widma widzialnego, które nie uległy pochłonięciu przez ośrodek. Taki typ zabarwienia wykazuje np.:
kolorowe szkło, roztwory itd. Pochłanianie selektywne jest również przyczyną zabarwienia ciał
rozpraszających. W tym przypadku światło padające na obiekt wnika w niego na pewną głębokość, ulegając
pochłanianiu w pewnym obszarze widma, i następnie wychodzi z powrotem jako światło rozproszone o
161
zmienionym składzie widmowym. Efekt taki obserwuje się np.: w przypadku liści czy też powierzchni
pokrytych farbą.
• selektywne odbicie – efekt ten występuje wtedy gdy selektywne pochłanianie staje się bardzo silnie.
Zdolność odbijająca jest wówczas największa dla promieniowania o tej długości fali, która ulega
najsilniejszemu pochłanianiu. Należy zwrócić uwagę, iż w tym przypadku barwa w świetle przechodzącym
jest inna niż w odbitym i mają się one do siebie na ogół jak barwy dopełniające. Zabarwienie na skutek
selektywnego odbicia wykazują przede wszystkim metale jak też niektóre roztwory, np.: czerwony atrament
w świetle przechodzącym jest czerwony, zaś roztwór chlorofilu zielony, w świetle odbitym ciecze te
przyjmują odpowiednio zabarwienie zielone i czerwone.
• rozproszenie światła na skutek niejednorodności ośrodka – niejednorodność ośrodka przez który przechodzi
światło powoduje, iż w przypadku gdy rozmiary „niejednorodności” są porównywalne z długością fali,
obserwuje się zabarwienie wynikające z różnic w rozpraszaniu promieniowania. Najsilniej rozpraszane są
fale najkrótsze (tj. niebieskie i fioletowe), natomiast najsłabiej najdłuższe (czerwone). Zdolność
rozpraszająca dla niejednorodności o określonej wielkości jest odwrotnie proporcjonalna do λ4.
Rozpraszanie jest efektem np.: błękitnego zabarwienia nieba czy też purpurowego zabarwienia złota
koloidalnego.
• zabarwienie na skutek interferencji – zjawisko to obserwowane jest głównie przy odbiciu wiązki światła od
dwóch powierzchni ograniczających cienką, przezroczystą warstwę przy czym dla danego kąta padania i
danej grubości warstwy w świetle odbitym wygaszone zostają te barwy, dla których różnice dróg
optycznych wynoszą nieparzystą wielokrotność połowy długości fali. W świetle przechodzącym ciała takie
wykazują zabarwienie będące barwą dopełniającą światła odbitego.
15.1.2 Podstawy fotokolorymetrii

Absorpcja światła widzialnego przez różne materiały jest uwarunkowana pochłanianiem kwantów
promieniowania przez cząsteczki. Energia fotonów światła widzialnego i ultrafioletowego zużywana jest do
wzbudzenia stanów elektronowych molekuł. Energia potrzebna na wzbudzenie elektronów należących do
różnych typów atomów lub wiązań w cząsteczce jest różna, zatem przez różne związki absorbowane są różne
długości fali. Najwyższa energia potrzebna jest do wzbudzenia elektronów walencyjnych tworzących wiązanie
pojedyncze (wiązanie typu σ) i odpowiada promieniowaniu z zakresu dalekiego ultrafioletu, mniejsza - na
wzbudzenie elektronów wiązań podwójnych oraz elektronów orbitali d jonów metali (te przejścia energetyczne
leżą w zakresie bliskiego ultrafioletu i światła widzialnego). Atomy i grupy funkcyjne odpowiedzialne za
absorpcje światła, a tym samym nadawanie materii barwy nazywamy chromoforami. Są to najczęściej wiązania
podwójne: C=C, C=N, C=O, C=S, grupy nitrowe i układy aromatyczne. Silną absorpcję światła widzialnego
wykazują także niektóre jony metali bloku d i f, między innymi.: Cu2+, Ni2+, Fe2+, Fe3+, Co2+. Jeśli dwa (lub
więcej) układów chromoforowych występuje w bezpośrednim sąsiedztwie, dochodzi pomiędzy nimi do tzw.
sprzężenia efektem czego jest przesunięcie pasma absorpcji w stronę fal dłuższych. Przykładem sprzężeń
pomiędzy chromoforami może być seria węglowodorów aromatycznych:
antracen tetracen
, pentacen
bezbarwny pomaranczowy niebieski
heksacen heptacen
zielony ciemnozielony
Wiele grup funkcyjnych przyłączonych do chromoforu lub sprzężonego układu chromoforów powoduje zmianę
długości fali absorbowanej przez związek oraz intensywności tej absorpcji. Podstawniki takie nazywamy
auksochromami (najważniejszymi są halogeny, grupy hydroksylowe i aminowe). Efekt ten polega na
oddziaływaniu podstawnika z elektronami chromoforu, skutkiem czego są zmiany energii potrzebnych na ich
wzbudzenie. Zmiany podobne jak na skutek działania auksochromów obserwuje się często pod wpływem
162
rozpuszczalnika. W przypadku gdy zmiana położenia pasma absorpcji następuje w stronę większych długości
fali (mniejszych częstości) mówimy o przesunięciu batochromowym (przesunięcie ku czerwieni), jeśli w stronę
przeciwną – o przesunięciu hipsochromowym (przesunięcie w stronę fioletu). Zwiększenie intensywności pasma
absorpcji pod wpływem podstawnika lub rozpuszczalnika nazywamy efektem hiperchromowym, zaś
zmniejszenie – efektem hipochromowym.
Podstawą fotokolorymetrii jest prawo Berra, obowiązujące dla roztworów gazowych, ciekłych i stałych
o niezbyt dużym stężeniu. Stwierdza ono, że natężenie I światła monochromatycznego, przechodzącego przez
warstwę pochłaniającą o grubości l i o stężeniu substancji pochłaniającej promieniowania wynoszącym c, maleje
wykładniczo.
I = I 0 e −εlc
gdzie I0 oznacza początkowe natężenie promieniowania, ε - współczynnik charakterystyczny dla każdej
substancji pochłaniającej, zwany współczynnikiem ekstynkcji. Wartość współczynnika ekstynkcji dla każdego
materiału jest zależna od długości fali. Logarytm naturalny ze stosunku natężeń wiązki padającej do
przechodzącej przez ośrodek nazywamy absorbancją .
I0
A = ln = ε lc
I
15.1.3 Ważniejsze klasy barwników naturalnych

15.1.3.1 Karotenoidy
Związki z tej grupy są pochodnymi rozgałęzionych węglowodorów zawierających 40 atomów węgla,
zwanych tetraterpenami. Obecność w ich cząsteczkach wielu sprzężonych ze sobą wiązań podwójnych jest
przyczyną intensywnej barwy tych układów. Wiązania podwójne występują prawie wyłącznie w konfiguracji
trans. Barwniki z tej grupy są bardzo rozpowszechnione w świecie roślinnym (dotychczas wyizolowano ponad
600 substancji tego typu). Dzieli się je na węglowodory zwane karotenami oraz ich pochodne tlenowe (alkohole,
ketony, aldehydy, kwasy, epoksydy) – tzw. ksantofile. Różnorodność wzrasta dodatkowo na skutek możliwości
tworzenia przez karotenoidy zawierająca grupy hydroksylowe lub karboksylowe, estrów z naturalnymi kwasami
(np. tłuszczowymi) i alkoholami. Dodatkowo istnieje możliwość tworzenia się, na skutek różnorakich procesów
metabolicznych, karotenowców o krótszych łańcuchach jak również elongacja cząsteczki (do 50 atomów węgla).
Karotenowce występują zarówno u roślin wyższych, glonów, sinic i bakterii jak również w tkankach niektórych,
niezdolnych do fotosyntezy, grzybów. W komórkach roślinnych zlokalizowane są głównie z chloro- jak i
chromoplastach. W procesie fotosyntezy odpowiedzialne są za pochłanianie energii świetlnej niesionej przez
kwanty promieniowania widzialnego odpowiadające długościom fal nie absorbowanych przez chlorofile. Pełnią
ponadto funkcje ochronne, selektywnie pochłaniając niepożądane częstotliwości fal świetlnych. Są prekursorami
hormonów roślinnych i naturalnych substancji zapachowych. Ksantofile są prawdopodobnie odpowiedzialne za
zachowanie równowagi pomiędzy stężeniem ATP a NADPH w tylakoidach. Występują również powszechnie,
często w dużych ilościach, w świecie zwierząt lecz nie mogą być przez nie syntezowane i pochodzą jedynie z
treści pokarmowej (są jednak czasami w organizmach zwierzęcych modyfikowane). Są związkami
macierzystymi z których powstaje witamina A. Wchodzą również w skład błon komórkowych gdzie pełnią
funkcje antyoksydantów. Mają barwy od czerwonej do żółtej czasami o odcieniu brązowozielonym. Barwniki z
tej grupy nadają kolor wielu owocom (cytrusy, truskawki, papryka, pomidory itd.), liściom (ich kolor jest
zazwyczaj maskowany przez chlorofile, uwidacznia się jednak często, np. jesienią, kiedy to barwnik zielony
ulega rozkładowi), kwiatom (narcyzy) oraz niektórym zwierzętom (pióra kanarka, wiele owadów, tkanki
łososia).
karoteny – głównymi przedstawicielami są β-, α- i γ-karoten, przy czym izomer β- stanowi 75-80% ogółu
karotenów roślinnych i jest zarazem głównym prekursorem witaminy A. Cząsteczki wyżej wymienionych
związków zawierają fragmenty cykliczne. Znane są także karoteny otwartołańcuchowe. Przykładem może
być neurosporen izolowany z grzybów i likopen występujący w pomidorach i papryce. Cząsteczki
zawierające tylko jeden pierścień bądź nie zawierające go wcale są na ogół produktami pośrednimi na
drodze syntezy związków o dwóch pierścieniach w molekule. Z organizmów morskich (gąbek) oraz bakterii
fotosyntezujących otrzymano karoteny zawierające pierścienie aromatyczne (np.: chlorobakten)
163
α−karoten
β−karoten
γ −karoten
neurosporen
likopen
chlorobakten
ksantofile – są to pochodne karotenów zawierające, zazwyczaj umieszczone symetrycznie, grupy

alkoholowe, karboksylowe, aldehydowe, ketonowe i epoksydowe. Występują, obok karotenowców, w
tkankach roślinnych (stanowią 60-70% związków karotenoidowych) i zwierzęcych. Najczęściej spotykane
są pochodne o charakterze alkoholi i epoksydów. Najprostszym związkiem z tej klasy jest luteina
(ksantofil), będąca 3,3’-dihydroksypochodną α-karotenu. Występuje praktycznie w tkankach wszystkich
roślin zielonych. Jej izomer – zeaksantynę, wyizolowano z nasion kukurydzy. Bardzo rozpowszechniony
jest epoksyd zeaksantyny – wiolaksantyna. Rzadziej spotykane w świecie roślinnym są pochodne ketonowe
(np. rodoksantyna z igieł cisa pospolitego), jednakże stanowią one jedne z ważniejszych ksantofili
zwierzęcych (np.: astaksantyna – barwnik pancerzy skorupiaków, jeżowców, piór i nóg ptasich; występuje
w formie wolnej jak również w postaci estrów z kwasami tłuszczowymi). Z form niesymetrycznie
podstawionych wymienić należy kryptoksantynę (pomarańczowy barwnik owoców papryki i pomarańczy)
oraz fukoksantynę – barwnik brunatnic uczestniczący w fotosyntezie. Do ksantofili należą również, pomimo
niewielkich różnic strukturalnych, główne barwniki papryki: kapsorubina i kapsantyna.
164
OH
HO luteina
OH
HO zeaksantyna
OH
O
HO wiolaksantyna
O rodoksantyna O
OH
HO astaksantyna
HO kryptoksantyna
O
HO
O
O
O
HO fukoksantyna
HO kapsantyna
HO HO
O
kapsorubina
HO
produkty degradacji karotenoidów – na drodze degradacji karotenoidów powstaje kilka ważnych

barwników naturalnych. Najważniejszym jest witamina A (retinal), będąca niebiałkowym składnikiem
rodopsyny – chromoproteidu odpowiedzialnego za odbieranie bodźców świetlnych przez liczne zwierzęta i
niektóre organizmy roślinne (bakterie i glony jednokomórkowe). Mechanizm widzenia opiera się na
procesie izomeryzacji jednego z wiązań podwójnych w cząsteczce retinalu. Innymi barwnikami
wywodzącymi się z karotenoidów są krocetyna (intensywnie żółty barwnik o charakterze glikozydowym
izolowany z szafranu) oraz biksyna (pomarańczowy pigment arnoty właściwej).
165
O
izomeraza
H retinalowa
hν
all-trans-retinal 11-cis-retinal
O H
glukoza
O
O
O
O glukoza
krocetyna
HOOC
biksyna
15.1.3.2 Barwniki porfirynowe i pirolowe

Porfirynami nazywamy związki heterocykliczne zawierające cztery pierścienia pirolowe połączone
mostkami jednowęglowymi, tworzące duży układ cykliczny. Charakterystyczną cechą porfiryn jest zdolność do
tworzenia trwałych połączeń z jonami metali, koordynowanymi atomami azotu.
N
H
N N
H
N
Barwniki porfirynowe stanowią grupę związków pełniących najistotniejsze funkcje fizjologiczne. Występują u
wszystkich grup systematycznych. Do najważniejszych pigmentów z tej grupy należą chlorofile, występujące u
roślin i bakterii fotosyntetyzujących oraz pochodne hemowe, wchodzące w skład hemoglobiny oraz
cytochromów.
chlorofile – są zielonymi barwnikami porfirynowymi zawierającymi skoordynowany atom magnezu. Mają

fundamentalne znaczenie w procesie fotosyntezy. W chloroplastach występują w formie związanej z
białkami. W chlorofilu do pierścienia porfirynowego przyłączone są liczne podstawniki, determinujące
właściwości fotochemiczne cząsteczki. U roślin wyższych głównymi barwnikami z tej grupy są chlorofile a
i b, u bakterii i sinic tzw. bakteriochlorofile (oznaczane literami od a do g). Cząsteczki chlorofili zawierają
dwie grupy karboksylowe, z których jedna jest zawsze zestryfikowana długołańcuchowym niepolarnym
alkoholem (najczęściej tzw. fitolem). Zawartość chlorofili w zielonych tkankach roślin wynosi około 10%
ich suchej masy.
166
CHO
N N
Mg
N N
O
O
O
O O
chlorofil a
N N
Mg
N N
O
O
O
O O
chlorofil b
N N
Mg
N N
O
O
O
O O
bakteriochlorofil b
Barwniki hemowe – związki z tej grupy są kompleksami protoporfiryny IX z jonami żelaza(II) (tzw.
ferrohem) lub żelaza(III) (tzw. ferrihem). Barwniki te wchodzą w skład licznych chemoprotein,
odpowiedzialnych z transport tlenu (hemoglobina), jego magazynowanie w tkankach (mioglobina), transport
elektronów (cytochromy) oraz pełniących funkcje enzymatyczne (katalazy, peroksydazy). Mają zabarwienie
czerwone lub brunatnoczerwone. Fragment porfirynowy jest związany z białkiem bądź poprzez wiązania
koordynacyjne, bądź kowalencyjne (poprzez podstawniki winylowe). Bliższe właściwości chemiczne tych
związków zostaną przedstawione w rozdziale poświęconym reakcjom utleniania-redukcji w układach
biologicznych.
167
N N
Fe
N N
HOOC COOH
hem
barwniki pirolowe – występują w organizmach roślinnych (fikobiliny) i zwierzęcych (bilany). Związki z tej
grupy zawierają, podobnie jak porfiryny, cztery pierścienie pirolowe, z tym że w tym wypadku nie tworzą
one struktury cyklicznej. Mają zabarwienie od żółtobrunatnego poprzez pomarańczowe do
czerwonofioletowego i niebieskiego. Fikobiliny pełnią funkcje barwników asymilacyjnych, absorbując
światło w zakresie długości fali nie pochłanianych przez chlorofile (tzw. barwniki wspomagające). U roślin
niższych (sinice i krasnorosty) występują jako tzw. biliproteiny w formie kowalencyjnych połączeń z
białkami. W zależności od barwy kompleksu białkowo-fikobilinowego rozróżnia się fikocyjaniny
(niebieskofioletowe) i fikoerytryny (czerwone). Fikobiliny roślin wyższych to tzw. fitochromy. Są one,
podobnie jak u roślin niższych, połączone z fragmentem białkowym. Kompleksy te uczestniczę w wielu
procesach fizjologicznych regulowanych przez światło, regulują ekspresję genów, syntezę i aktywność
enzymów oraz szybkość metabolizmu. Chromofor fitochromów występuje w dwóch formach, różniących
się widmem absorpcyjnym i ulegających wzajemnym przemianom pod wpływem światła oraz
specyficznych układów enzymatycznych.
HOOC COOH HOOC COOH

proteina proteina
S S
O O O O
N N N N N N N N
H H H H H H
fikocyjanina fikoerytryna
HOOC COOH
proteina
S
O O
N N N N
H H H
fitochrom
Bilany zwierzęce są produktami katabolizmu porfiryn (głównie hemu). Nadają one zabarwienie żółci, kału i
moczu oraz, w stanach patologicznych (żółtaczka), skóry, błon śluzowych i oczu. Mają zabarwienie
żółtopomarańczowe do brunatnego; wiele z nich w stanie wolnym jest bezbarwna lub bardzo słabo
zabarwiona i ciemnieje na skutek oddziaływania z tlenem. Najważniejszymi związkami z tej grupy są:
urobilinogen (bezbarwny prekursor urobiliny, występuje w świeżym moczu); urobilina (brunatny barwnik
moczu, powstaje z urobilinogenu na skutek utleniania tlenem atmosferycznym oraz z bilirubiny pod
wpływam bakteryjnej flory jelitowej); bilirubina (żółtopomarańczowy barwnik żółci, występuje w formie
rozpuszczalnych soli, w formie nierozpuszczalnych soli wapniowych tworzy kamienie żółciowe);
biliwerdyna (żółtozielony barwnik żółci, jest prekursorem bilirubiny, pod wpływem enzymów bakteryjnych
lub tlenu możliwa jest reakcja odwrotna); sterkobilina (żółtobrązowy barwnik kału, powstaje w wyniku
utleniania produktów enzymatycznych przekształceń bilirubiny i biliwerdyny przez bakterie jelitowe,
rozpada się do żółtych barwników dwupirolowych – mezobilifuscyny i bilifuscyny).
168
HOOC COOH HOOC COOH
HO OH HO OH
N N N N N N N N
H H H H H H H
urobilinogen urobilina
HOOC COOH HOOC COOH
O O O O
N N N N N N N N
H H H H H H H
bilirubina biliwerdyna
HOOC COOH
HO OH
N N N N
H H H
sterkobilina
HOOC COOH
O OH HO O
N N N N
H H H H
mezobilifuscyna bilifuscyna
15.1.3.3 Flawonoidy
Flawonoidy stanowią ogromną grupę barwników roślinnych o strukturze określanej jako C6-C3-C6, w
skład której wchodzą dwa pierścienie fenylowe połączone trówęglowym mostkiem – w większości przypadków
tworzącym pierścień zawierający heteroatom tlenu. Literatura podaje struktury ponad 2500 tysięcy flawonoidów
(liczba ta wynika z faktu, iż wiele związków z tej grupy występuje w formie glikozydów). Związki z tej grupy są
nadzwyczaj szeroko rozpowszechnione wśród roślin, szczególnie wśród roślin kwiatowych. Stosunkowo rzadko
spotyka się je w tkankach roślin zarodnikowych i bakterii. Związki flawonoidowe są głównymi barwnikami
kwiatów i owoców (czasami również innych części rośliny). Mają zabarwienie od kremowożółtego do
niebieskiego, niektóre zaś są bezbarwne i pełnią inne funkcje fizjologiczne. Dzieli się je na 11 zasadniczych klas,
w zależności od charakteru mostka trówęglowego. Zmienność w obrębie każdej z klas wynika z ilości i
lokalizacji w cząsteczce grup hydroksylowych, możliwości tworzenia przez nie połączeń eterowych (najczęściej
z alkoholem metylowym), estrowych oraz miejsca przyłączenia i charakteru grup glikozydowych. Flawonoidy
mogą być zarówno mono- jak i poliglikozydami, zawierającymi reszty jedno- jak i oligosacharydowe
(największe bogactwo pochodnych cukrowych wykazuje kwercetyna – ponad 80 związków).
• flawanony – związki z tej grupy są w większości bezbarwnymi prekursorami barwników flawonowych.

Występują w tkankach roślin w niewielkich ilościach, wyjątek stanowią naryngenina i cytronetyna
(występują w formie glikozydu w skórce pomarańczy) oraz pinostrobina (wyizolowana z sosny wejmutki).
Niektóre związki z tej grupy mają intensywnie gorzki, piekący smak, pełnią zatem funkcje repelentów
pokarmowych. Występują często w pąkach, gdzie obok roli związków odstraszających zwierzęta, znoszą
działanie giberelin.
CH3
OH O
HO O HO O HO O
OH O OH O OH O
naryngenina cytronetyna pinostrobina
169
• chalkony i aurony – są pigmentami o barwach żółtych i złotych, występującymi w dużych stężeniach w
kwiatach wielu roślin, głównie z rodziny złożonych (Compositae). Związki te wykazują zdolność zmiany
barwy na ciemnopomarańczową wraz z silnym zalkalizowaniem środowiska, co odróżnia je od barwników
karotenoidowych. Do najważniejszych barwników z grupy chalkonów należy izosalipurpol, izolowany z
kory wierzby purpurowej oraz buteina, szeroko rozpowszechniona wśród różnych gatunków roślin. Z grupy
auronów wymienić należy sulfuretynę, barwnik kwiatów z rodzaju kosmos, oraz arensydynę, obecną w
kwiatostanach szczawiu oraz wyżlina wielkiego. Wszystkie substancje z tych grup występują w tkankach
roślinnych głównie w formie glikozydów.
OH OH HO OH HO OH
OH OH
HO OH HO OH HO O HO O
O OH O
O O
buteina izosalipurpol sulfuretyna arensydyna
• flawony – mają zabarwienie od jasno- do ciemnożółtego i są szeroko rozpowszechnione w świecie roślin.

Do najczęściej spotykanych, zarówno w stanie wolnym jaki i w formie glikozydów, flawonów, należą:
apigenina (w stanie wolnym występuje w kwiatach georginii, w formie związanej w koszyczkach rumianu i
częściach zielonych wyki drobnokwiatowej i pietruszki), chryzyna (pączki topoli), luteolina (w formie
glikozydów i stanie wolnym w kwiatach janowca bawierskiego, naparstnicy, rezedzie i innych roślin).
OH
OH OH
HO O HO O HO O
OH O OH O OH O
apigenina chryzyna luteolina

• flawonole – są pigmentami o intensywnie żółtej barwie, wykazującymi zielonkawą fluorescencję.
Występują zarówno w stanie wolnym jak i w postaci połączeń z sacharydami. Do najważniejszych
flawonoli, najszerzej rozpowszechnionych w świecie roślin, zaliczyć należy: kempferol (izolowany, w
formie glikozydów, m.in. z kwiatów traganka chińskiego, koniczyny czerwonej, kasztanowca z liści
herbaty), herbacetyna (w formie glikozydów w kwiatach i liściach bawełny i herbaty), kwercetyna (jeden z
najszerzej rozpowszechnionych barwników z tej grupy, stanowi barwnik łusek cebuli, kory dębu, kwiatów
fiołka wonnego, tytoniu, roślin psiankowatych i gryki).
OH
OH OH OH
OH
HO O HO O HO O
OH OH OH
OH O OH O OH O
kempferol kwercetyna herbacetyna
• antocyjanidyny – do tej grupy zalicza się wiele najważniejszych i najbardziej rozpowszechnionych

barwników roślinnych. Występują głównie w kwiatach i dojrzałych owocach, którym nadają barwy od
jasnoczerwonej poprzez ciemnoniebieską do prawie czarnej. Występują prawie wyłącznie w formie
glikozydów – antocyjanin. Barwa nadawana kwiatom przez antocyjanidyny zależy od kilku czynników:
• budowa barwnika – główny efekt związany jest z miejscem przyłączenia grup hydroksylowych
• stężenie barwnika
• obecność kopigmentów flawonoidowych – na skutek tworzenia słabych kompleksów pomiędzy
antocyjaninami a innymi flawonoidami następuje zmiana barwy, tj. wzrost intensywności barwy
niebieskiej
• obecność metali trójwartościowych – powoduje wzrost intensywności barwy niebieskiej
• obecność podstawników aromatycznych – powoduje wzrost intensywności barwy niebieskiej
170
• podstawniki hydroksylowe w pierścieniu heterocyklicznym – wzrost intensywności barwy
czerwonej
• metylowania barwnika - wzrost intensywności barwy czerwonej
• obecność innych barwników
• pH środowiska tkankowego – ma duży wpływ na barwę antocyjanin. W środowisku o odczynie
kwaśnym czyste antocyjaniny mają zabarwienie czerwonopomarańczowe, w obojętnym – prawie
bezbarwne, w zasadowym przyjmują kolor niebieski. Przemiany barwnika wraz ze zmianami pH
prezentuje rysunek
OH OH
HO O HO O
OH-
OH
H+
OH OH
OH OH
pH < 7 pH 7,0
,
pomaranczowoczerwona +H2O bezbarwna
-H2O
O
HO O
OH
OH
pH 8-9
niebieskofioletowa
Do najważniejszych antocyjanin należą: cyjanidyna (najczęściej występujący związak z tej grupy, występuje w
kwiatach chabrów, fiołków, róż, maku polnym, jagodach bzu czarnego i innych roślinach), pelargonidyna
(szeroko rozpowszechniona u roślin tropikalnych m.in. w astrze chińskim, pelargonii, daliach, owocach granatu),
delfinidyna (często spotykana u roślin alpejskich, w kwiatach malwy czarnej, wyki, szałwi i innych), peonidyna
(wyizolowana m.in. z piwonii), petunidyna (barwnik petunii ogrodowej) oraz malwidyna (kwiaty pierwiosnków,
ślazu dzikiego, owoce borówek).
OH OH
OH OH OH
HO O HO O HO O
OH
OH OH OH
OH OH OH
pelargonidyna cyjanidyna delfinidyna
OCH3 OCH3 OCH3
OH OH OH
HO O HO O HO O
OH OCH3
OH OH OH
OH OH OH
peonidyna petunidyna malwidyna
Kombinacje ważniejszych barwników i odpowiadające im zabarwienie kwiatów zestawiono w Tabeli 14.
171
Tabela 14. Wpływ składu mieszaniny barwników roślinnych na barwę
Barwa Barwniki Przykłady
Biała, kość słoniowa, flawony (np.: luteolina) i/lub flawonole większość biało kwitnących gatunków
kremowa (np. kwercetyna) roślin
Żółta • tylko karotenoidy • większość żółto kwitnących gatunków
• tylko żółte flawonole • pierwiosnek, bawełna, chryzantemy
• tylko chalkony i aurony • lnica, szczawik, dalie
• karotenoidy + żółte flawonoidy • nachyłek, rudbekia
Pomarańczowa • tylko karotenoidy • nagietek, lilie
• pelargonidyna + aurony • wyżlin większy (lwia paszcza)
Szkarłatna • czysta pelargonidyna • wiele gatunków, np.: szałwia
• cyjanidyna + karotenoidy • tulipany
Brązowa cyjanidyny + karotenoidy lak pospolity, storczykowate
Purpurowa, większość o czerwonych kwiatach
czysta cyjanidyna
karmazynowa np.: róża
Różowa czysta peonidyna piwonia, róża pomarszczona
Fiołkoworóżowa
czysta delfinidyna wiele gatunków, np.: werbena
fioletowa
Niebieska • cyjanidyna + flawonoid lub jon metalu • chabry
• delfinidyna + flawonoid lub jon metalu • większość niebiesko kwitnących, np.
goryczki
Czarna,
delfinidyna w bardzo dużym stężeniu czarne tulipany, bratki
purpurowoczerwona
Zielona chlorofile ciemiernik
15.1.3.4 Inne barwniki roślinne

W świecie roślinnym występuje, obok powyżej opisanych, wiele innych klas barwników o ciekawych
właściwościach i funkcjach biologicznych.
• barwniki chinonowe – różnorodna pod względem struktury, biosyntezy i funkcji grupa pigmentów
zawierających w cząsteczkach fragment benzo-, nafto-, antro- lub fenantrochinonu. Większość z nich
występuje w formie glikozydów. Charakteryzują się żółtym, pomarańczowym bądź czerwonym
zabarwieniem. Wiele ze związków chinonowych występuje w świecie roślinnym (a także zwierzęcym)
asystematycznie (np.: ubichinony, witamina K, plastochinony), pełniąc różnorakie funkcje fizjologiczne nie
związane bezpośrednio z ich zabarwieniem. Obok nich izoluje się z roślin wiele innych substancji o nie do
końca wyjaśnionej roli biologicznej. Niektóre z nich są barwnikami kwiatów (nodozyna w płatkach
strączyńca, hiperycyna w kwiatach dziurawca), drewna (lapachol w zdrewniałych tkankach Tecoma stans),
liści (lawson występujący w częściach zielonych lawsonii, ekstrakt z tej rośliny stosowany jest do
farbowania włosów jako tzw. henna), korzeni (droseron w częściach podziemnych rosiczek, alkanina w
alkannie bawierskiej), antybiotykami (adriamycyna), inne pełnię dużą rolę w alopatii (juglon wydzielany
przez korzenie orzecha czarnego) lub jako toksyny produkowane przez rośliny wyższe i będące
substancjami obronnymi przed szkodnikami oraz patogennymi mikroorganizmami (tekochinon z drzewa
tekowego), kolejne powstają w mikroorganizmach i służą jako toksyny skierowane przeciwko roślinom i
zwierzętom (np.: skyrina wytwarzana przez workowca Endothia parasitica atakującego drzewa kasztana
jadalnego). Wiele substancji chinonowych jest odpowiedzialnych za barwę grzybów wyższych (np.:
brązowofioletowy kwas poliporowy występujący w owocnikach grzyba nadrzewnego - żagwi zimowej;
kwas teleforowy, pigment o barwie fioletowej, obecny w tkankach grzybów z rodzaju kolczak oraz sarniak;
aurancyjanina – pomarańczowa substancja odpowiedzialna za kolor kolczakówki).
172
BENZOCHINONY
O OH HO
O O O
HO O HO O
OH O O OH
O O O
HO O OH
kwas poliporowy kwas teleforowy aurancyjanina

NAFTOCHINONY
OH O O OH O O OH O OH
OH OH OH
CH3
O O O O OH O
juglon lawson droseron lapachol alkanina
ANTRACHINONY
OH O OH
O OH O HO CH3
CH3 OH HO CH3
H3C CH3
O OH O OH OH O OH
tekochinon nodozyna hiperycyna
OH O OH
O O
OH
OH
HO OH
O
skyrina
O
OCH3 O O
HO OH adriamycyna
H3C O
HO
NH2
OH O OH
• barwniki diterpenowe – obok karotenoidów, stanowiących najliczniejszą grupę barwników o charakterze

terpenowym znanych jest kilka innych barwników izoprenoidowych, zawierających trzy lub cztery
pierścienie zbudowane z ok. 20 atomów węgla. Pigmenty te odznaczają się barwą pomarańczową do
ciemnoczerwonej. Większość z nich zawiera w swoich molekułach ugrupowanie chinonowe, jednakże ze
względu na drogę biosyntezy zaklasyfikowano je jako odrębną grupę. Substancje te dzieli się na 3 klasy:
tanschinony, rojleanony oraz koleony. Do pierwszej zalicz się 10 substancji, pochodnych nor-abietanu.
Wykryto je w korzeniach pewnych gatunków szałwi oraz rozmarynu. Do najważniejszych przedstawicieli
tej klasy należą: tanschinon, izotanschinon oraz miltrion. Rojleanony wykazują mniej intensywne
173
zabarwienie (najczęściej żółtopomarańczowe). Ich występowanie, o odróżnieniu od substancji z poprzedniej
klasy, nie ogranicza się do tkanek korzeni, jednakże tam występują w największych stężeniach. Ich szkielet
węglowy wykazuje strukturę abietanu. Do najbardziej rozpowszechnionych należą: rojleanon (wyizolowany
z szałwi), taksochinon (obecny w tkankach cyprysika błotnego) oraz nemoron (podobnie jak rojleanon
występuje w tkankach pewnych gatunków szałwi). Do trzeciej klasy zalicza się substancje barwne
zgromadzone w wyspecjalizowanych gruczołach występujących na spodniej stronie liści niektórych
gatunków roślin. Do najbardziej reprezentatywnych przedstawicieli tej klasy zaliczyć można: koleon B
(jasnożółty pigment izolowany z liści szałwi ognistej), złotożółty taksodion (nasiona i igły cyprysika
błotnego) oraz silnie czerwony fuerstion występujący w roślinie Fuerstia africana.
abietan nor-abietan
O O O
O O O
O
O
tanschinon II A izotanschinon I miltrion
OH OH OH
O O O
O H
O O O
OH O
taksochinon O
rojleanon nemoron
OH O O
OH
HO
O
OH
OH O
koleon B taksodion fuerstinol
• barwniki alkaloidowe – alkaloidy stanowią ważną grupę metabolitów roślinnych o różnorodnej budowie i
funkcjach fizjologicznych. Niektóre z nich pełnią rolę barwników. Najważniejszymi przykładami są
berberyna (izochinolinowy alkaloid izolowany z tkanek berberysu i odpowiedzialny za ich kolor) oraz
betaksantyny i betacyjaniny. Betaksantyny stanowią grupę żółtych barwników, których występowanie jest
ograniczone do roślin rzędu śródzłożonych (Centrospermae). Są pochodnymi aminokwasów alifatycznych,
wykazującymi charakter zasad Schiffa. Do najważniejszych przedstawicieli należy indykaksantyna i
wulgaksantyna – barwniki bulwy buraka pastewneg oraz miraksantyna znaleziona w kwiatach dziwaczka
polnego. Do betacyjanin zalicza się intensywnie czerwone oraz czerwonopurpurowe barwniki występujące,
zarówno w formie wolnej jak i związanej, w korzeniu i innych tkankach buraka czerwonego i liściach oraz
kwiatach szarłatu (np.: betanidyna) oraz owocnikach muchomora czerwonego (pomarańczowa
muskaflawina). Wykazują, podobnie jak antocyjaniny, zależność barwy od pH roztworu. Warto zaznaczyć,
174
że obecność w roślinie związków z grupy betaksantyn oraz betacyjanin wyklucza obecność antocyjanin w
tkankach.
O
N OCH3
O
OCH3
berberyna
O HO
HO
HOOC S HOOC COOH
HO
COOH COOH HO
N N N N
N
HOOC N COOH HOOC N COOH HOOC N COOH HOOC N COOH HOOC N COOH
H H H H H
miraksantyna indygaksantyna betanidyna wulgaksantyna I muskaflawina
• barwniki ksantonowe – są stosunkowo mało rozpowszechnioną klasą związków o barwie żółtej lub
pomarańczowej. Są charakterystyczne dla rodziny goryczkowatych i dziurawcowatych oraz niektórych
paproci. Mogą tworzyć glikozydy. Przykładem może być gentyzyna (izolowana z goryczki żółtej).
O OH
HO O OCH3
gentyzyna
• kurkumina – intensywnie żółtopomarańczowy barwnik z korzeni Curcuma longa.
O O
H3CO OCH3
HO OH
• indygo – jeden z najbardziej znanych barwników roślinnych. Wyizolowany z indygowca bawierskiego oraz
urzetu bawierskiego. Cechuje się intensywnie niebieską barwą. W tkankach występuje w formie
bezbarwnego glikozydy – indykanu, z którego powstaje podczas ekstrakcji. Dibromopochodna indyga (tzw.
purpura tyryjska) jest barwnikiem zwierzęcym, otrzymywanym z tkanek ślimaka Purpura lapilus, w
starożytności stosowanym do farbowania szat.
O O
H H
N N Br
N N
Br
H H
O O
indygo purpura Tyryjska
• barwniki fenolowe – wiele związków fenolowych wykazuje słabe żółte lub brązowożółte zabarwienie,
przez co są odpowiedzialne za barwy tkanek pewnych gatunków roślin. Do najważniejszych należą kwas
elagowy, otrzymany z kory dębu, świerka, korzeni granatu i wilczomlecza formozańskiego.
OH
O O OH
HO O O
OH
175
15.1.3.5 Inne barwniki zwierzęce
Obok opisanych powyżej barwników wchodzących w skład tkanek zwierzęcych wymienić należy
jeszcze kilka, należących do mniej licznych, ale zarazem bardzo istotnych grup.
• melaniny – barwniki z tej grupy należą do heteropolimerów o złożonej i zróżnicowanej budowie. Nadają
kolor włosom, skórze oraz tęczówce. Wywodzą się z tyrozyny. Często zawierają dodatkowe podstawniki,
pochodzące z układów terpenoidowych lub pirolowych. W zależności od składu dzielimy je na:
feomelanini – wielkocząsteczkowe produkty polimeryzacji benzotiazyn, kolor czarny i ciemnobrązowy
trichochromy – związki podobne do feomelanin lecz charakteryzujące się mniejszą masą cząsteczkową
eumelaniny – produkty kondensacji dopachinonu i dopachromu, kolor żółty do jasnobrązowego
melaniny typu mieszanego
Skrócony schemat biosyntezy melanin oraz przykładową strukturę melaniny typu mieszanego poniżej.
COOH
NH2
HO
O COOH
NH2
O O
dopachinon
O
HO
COOH COOH
S N
HO
H
NH2
H2N COOH leukodopachrom
cysteinodopachinon
EUMELANINY O
O
COOH
N COOH N
HO
dopachrom
O
S
H2N COOH O N
H
benzotriazyna
indolochinon
FEOMELANINY
TRICHOCHROMY
MELANINY TYPU MIESZANEGO
176
OH
HOOC
HN OH
N N O
H2N
N HO
OH
HOOC N O
NH
O
S
HOOC O NH
NH O
COOH COOH HO
O O HOOC
NH2
O NH HO OH O O
N S
N NH N O NH
N
O O NH NH NH
HO OH HN NH COOH
HO
S NH2
HN HO NH
HO O
HN HOOC O NH N O
NH2
NH
O N
N
N NH N
N N
O O
melanina
• pteryny – stosunkowo nieliczna grupa barwników heterocyklicznych odpowiedzialnych z kolor oczu i

skrzydeł wielu owadów oraz skóry ryb i płazów. Ponadto wyizolowano je z niektórych sinic. Do tej
klasy zalicza się również kwas foliowy. Do najważniejszych związków z tej grupy należą: leukopteryna
(bezbarwny pigment skrzydeł bielinka kapustnika); ksantopteryna (żółtozielony pigment skrzydeł
listkowca cytrynka) oraz biopteryna (niebieska), drosopteryna (pomarańczowa), sapiopteryna (żółta),
izoksantoptreyna (fioletowa) będące barwnikami oczu owadów.
OH OH OH
N OH N OH N
N N N
H2N N N OH H2N N N H2N N N OH
leukopteryna ksantopteryna izoksantopteryna
HO HO HO
OH OH OH
H H
N N N
N OH N OH N OH
H2N N N H2N N N H2N N N

H
drosopteryna sepiapteryna biopteryna
177
178
15.2 Barwniki naturalne – część eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie z metodą chromatografii cienkowarstwowej oraz analiza składu barwników roślinnych.
Chromatografia: podział, podstawy teoretyczne, współczynnik Rf, eluenty, polarność, barwniki roślinne:
karoteny, likopeny, ksantofile, chlorofile, antocyjaniny, flawonoidy - budowa i rola.
ODCZYNNIKI
aceton metanol chlorek metylenu

krzemionka chloroform MgSO4 bezw.
eter dietylowy benzen 2M HCl
heksan tetrachlorek węgla 2M NaOH
UWAGA: Kwas solny jest żrący, podobnie jak wodorotlenek sodu. Obowiązuje praca w rękawicach i
okularach ochronnych. Rozpuszczalniki organiczne są palne, ogrzewanie prowadź z dala od źródeł ognia,
przy pomocy elektrycznych źródeł ciepła.
OPIS ĆWICZENIA
a. Chromatografia cienkowarstwowa barwników terpenowych i pirolowych
W moździerzu umieść się ok. 2 g posiekanej natki pietruszki i rozetrzyj ją z niewielką ilością
krzemionki i szczyptą Na2CO3. Następnie dodaj 10 ml acetonu i rozetrzyj powtórnie. Drugą porcję liści rozetrzyj
w analogiczny sposób z eterem naftowym (5 ml), po roztarciu przenieś mieszaninę do kolbki, dodaj 22 ml eteru
etylowego i 2 ml etanolu i po zatkaniu korkiem mieszaninę wytrząsaj energicznie przez około 5 minut. Roztwór
acetonowy i eterowy należy przesączyć przez watę do dwóch oddzielnych kolbek i suszyć bezwodnym
siarczanem magnezu przez ok. 5 minut. Następnie pobierz po 1 ml każdego z roztworów, przelej do małych
zlewek i ogrzewaj suszarką w celu odparowania rozpuszczalnika do 1/10 objętości.
Około 2 g pasty pomidorowej wymieszaj w probówce z 3 ml metanolu, zawiesinę przesącz przez zwitek
waty. Watę wraz z osadem przenieś do probówki. Do osadu dodaj 4 ml mieszaniny metanol-chloroform (1:1),
probówkę zatkaj korkiem i mocno wytrząśnij. Po odsączeniu osadu, przesącz rozdziela się samoistnie na dwie
warstwy. Warstwę dolną, chloroformową, zbierz za pomocą pipety Pasteura i wytrząśnij ją w probówce z 2 ml
wody. Po oddzieleniu warstwy chloroformowej osusz ją pomocą bezwodnego siarczanu magnezu, pobierz z niej
około 0,5 ml i odparuj rozpuszczalnik w strumieniu ciepłego powietrza.
W tym czasie przygotuj trzy komory chromatograficzne, na ich dno nalej po około 0,5 cm eluentów: do
pierwszej mieszaninę benzen/aceton (7:3), do drugiej heksan/aceton/tetrachlorek węgla (3:1:1), do ostatniej
czysty heksan. Komory pozostaw do nasycenia parami rozpuszczalników co trwa około 10 minut. Na trzech
płytkach chromatograficznych narysuj miękkim ołówkiem linię w odległości ok. 1 cm od jednego z krótszych
boków płytki. Na linii zaznacz, w równych odstępach od siebie i boków płytki, trzy punkty startowe. Za pomocą
kapilary nanieś po kilka mikrolitrów badanych roztworów do uzyskania plamek o średnicy < 0,5 cm. Po
wysuszeniu w strumieniu ciepłego powietrza powtórz czynność nanoszenia próbek. Płytki umieść w komorach
chromatograficznych i odczekaj aż czoło rozpuszczalnika osiągnie wysokość około 10 cm. Następnie wyjmij
płytki z komór, wysusz je w strumieniu ciepłego powietrza i obejrzyj plamy pochodzące od rozdzielonych
związków, w świetle widzialnym, UV-254 nm oraz UV-366 nm a następnie wywołaj chromatogramy parami
jodu.
b. Izolacja i chromatografia pigmentów papryki
Około 50 mg sproszkowanej ostrej papryki umieść w probówce, dodaj 0,5 ml chlorku metylenu,
wstrząsaj kilka minut a następnie odwiruj. Analogiczną procedurę przeprowadź dla papryki słodkiej. Nanieś po
kropli ekstraktu na płytki do TLC (3x10 cm) i rozwiń chromatogramy w CH2Cl2 oraz w eterze dietylowym.
179
c. Właściwości antocyjanin i betacyjanidyn
Rozdrobnij po 10 g czerwonej kapusty i buraka a następnie umieść je w oddzielnych w zlewkach, zalaej

50 ml wody i zagotowuj. Do 4 probówek wlej po 2 ml ekstraktów. Do dwóch probówek dodać po 2-3 krople 2M
HCl, do dwu kolejnych 2M NaOH. Ponadto wyciągami z kapusty i buraków nasyć paski bibuły, wysusz je a
następnie trzymaj kilka minut w oparach amoniaku.
180
16. Ćwiczenie 12
16.1 Reakcje enzymatyczne – wstęp teoretyczny
16.1.1 Enzymy
Pod pojęciem enzymów rozumiemy grupę naturalnych biokatalizatorów makromolekularnych. Prawie
wszystkie enzymy są białkami, za wyjątkiem kilku znanych przypadków kwasów rybonukleinowych o
własnościach katalitycznych. W przeciwieństwie do wielu katalizatorów niebiałkowych enzymy cechuje wielka
specyficzność katalizowanych reakcji oraz duża stereo-, regio- oraz enancjoselektywność reakcji. Wykazują
również często dużą swoistość w stosunku do substratu (w przypadku substratów optycznie czynnych wiele z
nich jest aktywna wyłącznie w stosunku do jednego z enancjomerów).
Cząsteczki enzymów mogą mieć charakter czysto białkowy (ureaza, pepsyna, trypsyna itd.) mogą także
zawierać części apeptydowe. Zgodnie z przyjętą nomenklaturą enzym jako całość nazywamy holoenzymem,
jego część białkową – apoenzymem zaś reszty apeptydowe – grupami prostetycznymi lub koenzymami. Do
najważniejszych koenzymów należą grupy hemowe, wolne oraz fosforylowane witaminy i ich pochodne
(NADP, FAD, CoA), flawonoidy, fosforany nukleozydów, chinony. Aktywność wielu enzymów jest zależna od
obecności jonów metali jak też niektórych anionów nieorganicznych.
W bezpośredni kontakt z substratem wchodzi nie całe białko lecz tylko pewne jego ugrupowanie
aminokwasowe. Ugrupowania te nazywamy centrami katalitycznymi lub centrami aktywnymi enzymu. Każdy
enzym ma przynajmniej jedno centrum aktywne, znamy jednak wiele posiadających po kilka miejsc wiązania
substratu. W centrum aktywnym, obok skierowanych do jego wnętrza reszt aminokwasowych, znajdują się
związane kowalencyjnie lub koordynacyjnie grupy prostetyczne oraz ewentualne jony potrzebne do wystąpienia
prawidłowej aktywności enzymatycznej. Aminokwasy tworzące centrum aktywne (zwane czasami
aminokwasami kontaktowymi) mają zazwyczaj charakter polarny i aktywne chemicznie grupy funkcyjne, przez
co są zdolne do oddziaływań kowalencyjnych, koordynacyjnych, jonowych i wodorowych zarówno z substratem
jak i koenzymem. Siła wiązania jest niewielka, rzędu 10-50 kJ*mol-1. Centra katalityczne umiejscowione są na
ogół w zagłębieniu cząsteczki, izolowanym od środowiska zewnętrznego. Specyficzność wiązania zależy od
precyzyjnie określonego ułożenia atomów w miejscu aktywnym. Substrat musi mieć odpowiedni kształt aby
dopasować się do miejsca aktywnego. Obok czynnika geometrycznego istotny jest aspekt stereoelektronowy.
Wiązana molekuła musi charakteryzować się, obok właściwego kształtu, właściwym rozkładem gęstości
elektronowej, umożliwiającym wiązania z polarnymi grupami funkcyjnymi znajdującymi się w miejscu
wiązania. Miejsca aktywne wielu enzymów nie są strukturami sztywnym, a ich kształt ulega często zmianie po
skompleksowaniu cząsteczki substratu. Wynika z tego iż komplementarny względem substratu kształt miejsca
katalitycznego pojawić się może w tym przypadku dopiero do związaniu substratu. Enzymy wykazujące takie
właściwości cechuje często mniejsza specyficzność i większa różnorodność katalizowanych reakcji.
Wiele reakcji w organizmach żywych katalizowanych jest przez enzymy o podobnym działaniu lecz
odmiennej strukturze. Mówimy wówczas o izoenzymach. Różnice takie są dostrzegalne przede wszystkim w
materiale pochodzącym z tkanek różnych gatunków, jednakże często preparat enzymatyczny uzyskany z jednego
organizmu jest niehomogeniczny i można go rozdzielić na białka o takiej samej aktywności biologicznej lecz
odmiennej strukturze. Izoenzymy są szczególnie często spotykane w przypadku enzymów wykazujący strukturę
oligomeryczną (są zbudowane z kilku podjednostek – protomerów). Często jedna tkanka wytwarza głównie
jeden protomer a inna – drugi protomer. Protomery pochodzące z różnych źródeł mogą łączyć się w różnych
kombinacjach, tworząc różne izoenzymy.
16.1.2 Klasyfikacja enzymów

Rosnąca ilość poznanych enzymów spowodowała konieczność wprowadzenia ich ujednoliconej
nomenklatury. Nazwy systematyczne składają się z dwóch części. Cześć pierwsza nazwy, o końcówce –aza,
mówi o typie katalizowanej reakcji. Druga część nazwy enzymu wskazuje na substrat (substraty) na który działa
enzym. W przypadku transferaz i oksydoreduktaz w nazwach uwzględnia się donor i akceptor. Przy
transferazach jako przedrostek podaje się grupę przenoszoną. W grupie ligaz podaje się (w nawiasie) produkt
powstały z rozpadu nukleotydu wysokoenergetycznego, wykorzystanego w reakcji. Nazwę substratu podaje się
w dopełniaczu liczby pojedynczej (np.: oligonukleotydaza dezoksyrybonukleinianu), w przypadku gdy w reakcji
biorą udział dwa substraty ich nazwy podaje się w mianowniku liczby pojedynczej, rozdzielone dwukropkiem
(np.: N-metylotransferaza S-adenozylometionina : guanidynooctan). Jeżeli dany enzym katalizuje dwa,
następujące po sobie przekształcenia, nazwa drugiego powinna być ujęta w nawias i znajdować się jako trzeci
człon nazwy (np.: oksyreduktaza L-aminokwas : NAD (dezaminująca)). Dodatkowo utworzono kod liczbowy
181
służący do klasyfikacji enzymów. Każdemu enzymowi przyporządkowany jest czteroliczbowy ciąg. Pierwsza
liczba określa przynależność enzymu do jednej z sześciu zasadniczych grup:
1. oksydoreduktazy
2. transferazy
3. hydrolazy
4. liazy
5. izomerazy
6. ligazy (syntetazy)
Kolejna liczba określa podklasę w danej grupie enzymów. Liczba trzecia oznacza przynależność danego enzymu
do podpodklasy. Czwarta, ostatnia, określa konkretny enzym. I tak w poszczególnych klasach liczby oznaczają
(w nawiasach podano przykłady):
Tabela 15. Oznaczenie liczbowe enzymów

klasa druga liczba trzecia liczba
1. oksydoreduktazy - utleniana grupa w donorze (CHOH, akceptor (NAD, NADP, cytochromy itd.)
CHNH2 itd.)
2. transferazy - przenoszona grupa (jednowęglowa; - dla fosfotransferaz: akceptor reszty kwasu
acyl, glikozyl, reszta kwasu fosforowego) fosforowego (alkohol, kwas karboksylowy,
amina itd.)
- dla pozostałych transferaz: bliższa informacja
o przenoszonej grupie (formyl, metyl itd.)
3. hydrolazy - hydrolizowane wiązanie (peptydowe, - bliższe informacje o hydrolizowanym
estrowe itd.) wiązaniu (estrowe w estrach kwasów
karboksylowych, w estrach fosforanowych itd.)
4. liazy - rozszczepiane wiązanie (C-C, C-O, C-N - odszczepiana od substratu grupa (CO2, H2S,
itd.) H2O itd.)
5. izomerazy - typ izomeryzacji (oksydoredukcja - forma przekształcenia lub atakowany substrat
wewnątrzcząsteczkowa, izomeryzacja lub grupa (zmiana konfiguracji, aminokwas,
cis-trans itd.) aldozy, grupa enolowa itd.)
6. ligazy - powstające wiązanie (C-O, C-C itd.) - substraty syntezy (kwas : tiol, kwas : amoniak
itd.)
16.1.3 Charakterystyka poszczególnych klas enzymów

• oksydoreduktazy - katalizują reakcje utleniania-redukcji, polegające na przenoszeniu elektronów i atomów
wodoru lub przyłączaniu atomów tlenu do substratu. Gdy nazwa enzymu pochodzi od donora atomów
wodoru mówimy o dehydrogenazach (np.: oksydoreduktaza alkohol : NAD zwana dehydrogenazą
alkoholową; katalizuje redukcję alkoholu do aldehydu z NAD jako akceptorem protonów). Jeśli nazwa
enzymu pochodzi od akceptora atomów wodoru a donorem jest NADH2 mówimy o reduktazach (np.:
oksydoreduktaza zredukowany NAD : L-cystyna zwana reduktazą cystynową; katalizuje redukcje cystyny
do cysteiny przy udziale NADH2 jako donora protonów). Gdy jony wodorkowe przenoszone są z jednego
układu nikotynoamidowego na drugi enzymy takie nazywamy transhydrogenazami (np.: oksydoreduktaza
zredukowany NADP : NAD, nazywana transhydrogenazą NADP; katalizuje przemianę NADPH2 w NADP
przy jednoczesnej redukcji NAD do NADH2). Jeśli akceptorem wodoru podczas utleniania substratu jest
tlen enzymy katalizujące tą reakcję nazywamy oksydazami, jeśli jest nim nadtlenek wodoru –
peroksydazami (np.: oksydoreduktaza L-askorbinian : tlen, inaczej oksydaza askorbinianowa, katalizuje
dehydrogenacje witaminy C przy udziale tlenu i z wytworzeniem wody). Przyłączanie tlenu do substratu
umożliwiają oksygenazy (np.: oksydoreduktaza tlen : tryptofan, nazywana oksygenazą tryptofanową,
umożliwia utlenienie tryptofanu tlenem cząsteczkowym). Jednoczesne przyłączenie tlenu do dwóch
substratów (dokładniej przyłączenie do jednego z substratów grupy hydroksylowej z jednoczesną
dehydrogenacją drugiego substratu i wytworzeniem częsteczki wody) umożliwiają hydroksylazy (np.:
oksydoreduktaza 3,4-dwuhydroksyfenyloetyloamina, askorbinian : tlen (hydroksylująca), inaczej
hydroksylaza DOPA-aminy, utlenia DOPA-aminę do noradrenaliny za pomocą tlenu cząsteczkowego z
jednoczesną dehydrogenacją cząsteczki witaminy C). Grupami prostetycznymi są najczęściej mono- lub
dinukleotydy flawinowe – FAD, FMN (pochodne witaminy B2); dinukleotydy nikotynoamidoadeninowe –
NAD, NADP (pochodne witaminy PP); witamina B2; hem; jony miedzi żelaza i cynku.
182
• transferazy – są to enzymy umożliwiające przenoszenie rodnika lub grupy z jednego związku na drugi albo
wymianę rodnika lub grupy z atomem wodoru lub tlenu innego związki. Z ważniejszych enzymów z tej
grupy wymienić należy: metylotransfetazy, hydroksymetylotransferazy, formylotransferazy,
karboksylotransferazy, transketolazy, aransaldolazy, acylotransferazy (np.: acetylotransferazy),
aminoacylotransferazy (np.: alaninylotransferazy), glikozylotransferazy (np.: galaktozylotransferazy),
kinazy (fosforylotransferazy), nukleotydotransferazy i inne. Koenzymami są: witamina B1 i jej fosforan;
fosforan witaminy B6; kwas liponowy; kwas pangamowy; koenzym A; kwas foliowy i inne.
• hydrolazy – katalizują rozbicie wiązań przy udziale wody. W zależności od charakteru hydrolizowanych
wiązań rozróżniamy hydrolazy: działająca na wiązania estrowe (estrazy, lipazy, hydrolazy tioestrów),
wiązania monoestrów fosforanowych (fosfatazy, nukleotydazy), działające na związki glikozydowe,
peptydy (aminopeptydazy, karboksypeptydazy, dipeptydazy), działające na di- i trifosforany (ATPaza,
pirofosfataza nieorganiczna) i inne
• liazy – są enzymami które katalizują rozbicie różnych wiązań nie na drodze hydrolitycznej, przy czym z
substratu na który działa enzym uwalniane są związki małocząsteczkowe. Ze względu na rodzaj
odszczepianych grup wyróżniamy między innymi: dekarboksylazy (uwalniają CO2), aldolazy (uwalniają
małocząsteczkowe aldehydy), dehydratazy (uwalniają wodę), amoniakoliazy (uwalniają amoniak).
• izomerazy – umożliwiają wewnątrzcząsteczkową izomeryzację substratu. Proces może obejmować zmianę
konfiguracji przy węglu asymetrycznym (racemazy i epimerazy), przeniesienie atomu wodoru (izomerazy)
lub grupy funkcyjnej (mutazy).
• ligazy – są odpowiedzialne za syntezę (powstawanie nowych wiązań), związaną z pobraniem energii z
fosforanów wysokoenergetycznych.
16.1.4 Kinetyka reakcji enzymatycznych.

W odróżnieniu od reakcji niekatalizowanych, szybkość reakcji enzymatycznej nie jest prostoliniową
funkcją stężenia substratu, lecz graficznie przedstawia krzywą przypominającą hiperbolę.
v
s
z
y
b
k
o,
s,
c v
r 1/2
e
a
k
c
j
i
[V]
Km .
stezenie
, substratu [S]
Reakcje enzymatyczne przebiegają etapowo, z wytworzeniem kompleksów enzym-substrat (ES) a następnie
enzym-produkt (EP).
k +1 k +2 k +3
E+S ES EP E+P
k -1 k -2 k -3
Maksymalną szybkość reakcji, vmax osiągamy w przypadku całkowitego wysycenia miejsc aktywnych enzymu
substratem. Dla scharakteryzowania własności katalitycznych enzymów wprowadzono pojęcie stałej Michaelisa-
Menten, zdefiniowanej jako stężenie substratu (wyrażone w mol*dm-3) przy którym szybkość reakcji jest równa
połowie szybkości maksymalnej.
183
16.1.5 Wpływ inhibitorów i aktywatorów na szybkość reakcji
enzymatycznych. Enzymy allosteryczne.
Inhibicja enzymów przez małe cząsteczki organiczne oraz jony ma zasadnicze znaczenia dla regulacji i
kontroli procesów enzymatycznych w żywym organizmie. Inhibicja może być procesem odwracalnym bądź
nieodwracalnym. W inhibicji nieodwracalnej inhibitor łączy się kowalencyjnie z enzymem lub wiąże się z nim w
sposób na tyle silny, że rozdysocjowanie kompleksu jest praktycznie niemożliwe. W przeciwieństwie do
inhibicji nieodwracalnej, inhibicję odwracalną cechuje szybki rozpad kompleksu enzym – inhibitor.
Najprostszym typem odwracalnego hamowanie funkcji enzymu jest inhibicja kompetencyjna. W tym przypadku
cząsteczka inhibitora wiąże się z enzymem w miejscu wiązania substratu, zmniejszając w ten sposób liczbę
molekuł enzymu zdolnych do katalizowania reakcji, zmniejszając zatem szybkość katalizy. Inhibitory
kompetencyjne są geometrycznie i stereoelektronowo podobne do substratu. Inhibitory niekompetencyjne wiążą
się z enzymem jednocześnie z wiązaniem substratu. Spowalniacz tego typy zmienia własności enzymu,
uniemożliwiając tym samym katalizowanie przez niego reakcji.
substrat substrat
inhibitor kompetencyjny
inhibitor niekompetencyjny
enzym enzym
enzym
Grupą enzymów charakteryzującą się odmiennymi właściwościami kinetycznymi oraz cechami procesów
inhibicji i aktywacji są enzymy allosteryczne. W przypadku biokatalizatorów z tej grupy w każdej molekule
występuje kilka (przynajmniej dwa) miejsca wiązania substratu, przy czym związanie substratu w jednym z tych
miejsc zmienia powinowactwo (zmniejsza lub zwiększa) pozostałych centrów aktywnych do kolejnych
cząsteczek substratu. Takie wiązanie substratu nazywamy wiązaniem kooperatywnym. Aktywność enzymu
allosterycznego zależy ponadto od obecności cząsteczek regulujących, wiążących się podobnie jak inhibitory
niekompetencyjne, poza centrum katalitycznym lecz zmieniających własności katalityczne cząsteczki enzymu.
Mogą one mieć zarówno wpływ aktywujący jak i dezaktywujący na biokatalizator.
16.1.6 Wpływ pH i temperatury na aktywność enzymów.

Dla każdego enzymu istnieje optymalne pH, w którym wykazuje on maksymalną aktywność. Ponieważ
pH wpływa na ładunek cząsteczki enzymu jak i częsteczki substratu, największą szybkość reakcji
zaobserwujemy przy stężeniu jonów wodorowych gwarantującym największą różnicę pomiędzy ładunkiem
substratu i enzymu (w szczególności zaś miejsca katalitycznego). Dodatkowo zmiany pH wpływają, na skutek
jonizacji pewnych grup funkcyjnych białka, na zmianę struktury trzeciorzędowej a zatem i geometrii, cząsteczki
enzymu, co pociąga za sobą zmiany aktywności katalitycznej. Poszczególne enzymy różnią się pH optymalnym.
Pepsyna, karboksylaza drożdżowa czy też amylaza słodowa wykazują maksimum własności katalitycznych w
środowisku o odczynie kwaśnym (odpowiednio 1,7; 4,8 i 4,5 jednostki pH). Z kolei większość enzymów
trawiennych (lipaza trzustkowa, trypsyna, arginaza wątrobowa) najefektywniej działa w warunkach zasadowych
(odpowiednio 7,8; 9 i 9,8 jednostki pH).
Podwyższenie reakcji o 100C powoduje wzrost szybkości reakcji 2-3 krotnie. W przypadku żywych
organizmów prawo to dotyczy niewielkiego zakresu temperatur, w którym nie zachodzą zmiany strukturalne w
białkach. Na ogół powyżej 450C zaczynają zachodzić zmiany w geometrii białek, prowadzące w ok. 700C do
całkowitej inaktywacji enzymów. Wyjątek stanowią biokatalizatory izolowane z bakterii żyjących w pobliżu
gorących źródeł, przystosowanych do życia w temperaturach bliskich punktowi wrzenia wody.
184
16.2 Reakcje enzymatyczne – część eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie z podstawowymi cechami reakcji enzymatycznych.
Enzymy, enzymy allosteryczne, kinetyka reakcji enzymatycznych, stała Michaelisa, inhibitory, wpływ
czynników środowiska na aktywność enzymów, hydroliza enzymatyczna skrobi, bufory, pH.
ODCZYNNIKI
2M NaHCO3 0,02 M I2 w 0,1 M KI skrobia

1% NaCl kwas cytrynowy
0,1M HCl Na2HPO4
UWAGA: Roztwory jodu są silnie plamiące.
Przygotuj:
100 cm3 0,1M roztworu kwasu cytrynowego
100 cm3 0,2M roztworu wodorofosforanu sodu
100 cm3 1% roztworu skrobi (odważoną ilość skrobi rozpuścić w 10 cm3 wrzącej wody i rozcieńczyć do 100
cm3)
OPIS ĆWICZENIA
a. Wstępne oznaczanie stężenia amylazy
Przepłukać usta wodą destylowaną, zebrać ślinę, rozcieńczyć 4-krotnie wodą i przesączyć przez watę.
Przygotować cztery probówki, do których odmierzyć kolejno 2, 1 0,5 i 0,2 ml roztworu śliny. Rozcieńczyć
zawartość probówek wodą destylowaną do objętości 2 ml (odpowiednio 0, 1, 1,5 i 1,8 ml). Dodać po 2 ml
buforu cytrynianowego o pH=6,6. Probówki umieścić w łaźni wodnej o temperaturze 370C i po 5 minutach do
każdej wlać po 2 ml 1% roztworu skrobi ogrzanego do tej samej temperatury (roztwór skrobi przygotować
bezpośrednio przed ćwiczeniem). Inkubować mieszaninę w podanej temperaturze przez 5 minut, a następnie
dodać po 2 ml 0,02 M roztworu jodu w jodku potasu. Do dalszych eksperymentów należy wybrać tę najmniejszą
objętość śliny, która w podanym czasie powoduje całkowitą hydrolizę skrobi. Jeżeli barwa nie wystąpi w żadnej
probówce, to roztwór śliny należy jeszcze bardziej rozcieńczyć.
b. Wpływ temperatury na aktywność enzymu
Przygotować 40 probówek zawierających po 1 ml roztworu I2 w KI. Oddzielnie zmieszać w probówce 2

ml roztworu skrobi z 2 ml buforu cytrynianowego (pH=6,6) i ogrzewać na łaźni wodnej w 200C. Dodać objętość
roztworu śliny wyznaczoną w poprzednim etapie. Zanotować czas zero. Dokładnie co 1 minutę pobierać po 0,2
ml mieszaniny i dodawać do kolejnych probówek z jodem. Inkubację przerwać w momencie całkowitej
hydrolizy skrobi do achrodekstryn (nie pojawia się barwa z jodem). Zanotować czas jaki był na to potrzebny.
Wykonać analogiczny pomiar w 40, 60 i 800C. Wykazać temperaturę optymalną dla amylazy.
c. Wpływ pH na aktywność amylazy
Przygotować szereg probówek zawierających po 1ml roztworu jodu w KI. W łaźni wodnej o
temperaturze 370C ogrzać mieszaninę 2 ml buforu o badanym pH z 2 ml roztworu skrobi. Po 5 minutach dodać
wyznaczoną wcześniej objętość śliny. Przenosić po 0,2 ml mieszaniny po kolejnych probówek z jodem.
Wyznaczyć czas potrzebny na zhydrolizowanie skrobi do achrodekstryn. Pomiar wykonać dla pH=5,0; 6,0; 6,6;
7,5; 8,0.
185
Tabela 16. Skład buforu cytrynianowego o zadanym pH
pH 5,0 6,0 6,6 7,5 8,0
0,2 M Na2HPO4 (ml) 10,3 12,63 14,55 17,39 19,45
0,1 M kwas cytrynowy (ml) 9,7 7,37 5,46 2,61 0,55
d. Wpływ aktywatorów i inhibitorów
Przygotować 4 szeregi po 10 probówek zawierających roztwór jodu w KI. W łaźni wodnej o temperaturze 370C
umieścić 4 probówki zawierające po 2 ml roztworu skrobi i 2 ml buforu o pH=6,6. Do pierwszej probówki dodać
2 ml wody, do drugiej 2 ml 1% NaCl, do trzeciej 2 ml 0,1 M HCl, a do czwartej 2 ml 2M NaHCO3. Następnie do
każdej dodać wyznaczą wcześniej objętość śliny. Co 1 minutę pobierać 0,2 ml cieczy z każdej probówki i
wprowadzać do płynu Lugola. Wyznaczyć czas potrzebny na hydrolizę do achrodekstryn.
186
17 Ćwiczenie 13
17.1 Procesy utleniania-redukcji w organizmach żywych – wstęp
teoretyczny
Olbrzymia część procesów zachodzących w organizmach żywych polega na procesach utleniania –
redukcji. W związku z tym w tkankach istnieje szereg wyspecjalizowanych enzymów katalizujących te reakcje
jak i liczna grupa związków będących donorami lub akceptorami elektronów, atomów wodoru lub tlenu
pobieranych bądź uwalnianych w tych procesach oraz służących do ich transportu, zarówno w obrębie komórki
jak i w całym organizmie. Zagadnienia te są na tyle szerokie, że omówione zostaną jedynie problemy związane z
procesami badanymi podczas ćwiczeń.
17.1.1 Biologiczne układy utleniania-redukcji

Jak wspomniano w części poświęconej reakcjom utleniania – redukcji, własności układu utlenianicz-
reduktor scharakteryzować można poprzez podanie potencjału normalnego. Dla układów biologicznych, ze
względu na ich specyfikę, wprowadzono pojęcie pozornego potencjału oksydacyjno-redukcyjnego, mierzonego
w warunkach o pH=7,0. W Tabeli 17 zestawiono potencjały pozorne E0’ dla najważniejszych biologicznie
układów utleniacz-reduktor.
Tabela 17. Najważniejsze biologiczne układy utleniania-redukcji

Układ Pozorny potencjał utleniania-redukcji
[V]
H2/2H+ + 2e- -0,420
Cysteina/cystyna -0,340
NAD/NADH2 -0,320
Liponian/dihydroliponian -0,290
Glutation zredukowany/glutation utleniony -0,220
Kwas mlekowy/kwas pirogronowy -0,180
Flawoproteina zredukowna/flawoproteina utleniona -0,120
Etanol/aldehyd octowy -0,090
Kwas bursztynowy/kwas fumarowy 0,030
Kwas askorbinowy/kwas dehydroaskorbinowy 0,060
Cytochrom b Fe3+/cytochrom b Fe2+ 0,080
Ubichinon/ubichinol 0,100
Cytochrom c Fe3+/cytochrom c Fe2+ 0,220
Cytochrom a Fe3+/cytochrom a Fe2+ 0,290
O2-/O2 0,820
Do najważniejszych związków biorących udział w reakcjach utleniania redukcji należą:

• dinukleotyd nikotynamidoadeninowy (NAD)
H2N
O
N
NH2 N
O O O N
N P P N
O O
O OO O
OH OH OH OH
Proces redukcji NAD polega na oderwaniu od cząsteczki substratu dwóch atomów wodoru, z których jeden, jako
anion wodorkowy (H-) ulega przyłączeniu w pozycji 4 nikotynamidu (witamina PP), drugi przechodzi do
roztworu jako kation wodorowy (H+).
187
O O
H H
AH2 A + H+
NH2 NH2
N N
R R
+
Zredukowany dinukleotyd nikotynamidoadeninowy (NADH + H ) może być z kolei donorem atomów wodoru w
procesach redukcji innych związków.
NADP (fosforan dinukleotydu nikotynamidoadeninowy) jest pochodną NAD, zawierającą resztę kwasu
fosforowego przyłączoną poprzez wiązanie estrowe w pozycji 2’ pierścienia cukrowego adenozyny. Warto
pamiętać, iż dehydrogenazy współpracujące z NAD są na ogół swoiste i nie reagują (bądź reagują wolno) w
obecności NADP, i odwrotnie NADP-zależne dehydrogenazy nie współpracują z NAD.
• dinukleotyd flawinoadeninowy (FAD)
H2N
N
N
O O O N
P P N
O
O OO O
HO
OH
OH OH OH
H3C N N O
NH
H3C N
O
Proces utleniania-redukcji FAD związany jest z odrywaniem (przyłączaniem) jonów H+ i elektronów do
pierścienia heterocyklicznego witaminy B2 wchodzącej w skład dinukleotydu.
R R R
H H
H3C N N O H+ + e- H C N N O H+ + e- H3C N N O
3
NH NH NH
H3C N H3C N H3C N
H
O O O
Nukleotydy flawinowe wchodzą w skład oksydaz, enzymów zdolnych do przenoszenia wodoru bezpośrednio na
tlen cząsteczkowy.
17.1.2 Barwniki hemowe

W procesach utleniania wewnątrzkomórkowego udział biorą liczne chromoproteiny zawierające, jako
grupy protetyczne, cząsteczki hemu. Pełnią one funkcje enzymów, przenośników elektronów oraz przenośników
i magazynów tlenu. Tak szerokie rozpowszechnienie i różnorodne funkcje wynikają z właściwości utlenianijąco-
redukujących oraz własności koordynacyjnych hemu. Do najbardziej znanych białek hemowych należą
hemoglobina i mioglobina. Pierwsza z nich pełni funkcje transportera i dostarczycielem tlenu do tkanek w
organizmach zwierzęcych, druga służy magazynowaniu tlenu w tkankach. Hemoglobina jest białkiem
wykazującym strukturę czwartorzędową. Składa się z czterech niezależnych łańcuchów białkowych (po dwa
łańcuchy dwóch różnych typów) i zawiera cztery reszty hemowe. Każdy z łańcuchów ma długość ok. 145 reszt
aminokwasowych. Mioglobina nie ma struktury oligomerycznej. Zbudowana jest z jednego łańcucha
polipeptydowego, złożonego z ok. 150 aminokwasów, i zawiera jeden element porfirynowy. Jej cząsteczka jest
pofałdowana i ma kształt dysku. Mioglobiny pochodzące od różnych gatunków wykazują pewne, niewielkie
różnice strukturalne. Mioglobiny nie są białkami jednorodnymi; część białkowa mioglobiny człowieka składa się
z co najmniej pięciu, różnych elektroforetycznie, frakcji. Żelazo w czynnych hemoglobinach i mioglobinach
znajduje się zawsze na drugim stopniu utlenienia. Hem zawierający Fe2+ nazywamy ferrohemem. W obu
188
białkach hem jest związany niekowalencyjnie, poprzez wiązania koordynacyjne pomiędzy jonem żelaza a resztą
histydyny. W obu przypadkach atom żelaza nie leży dokładnie w płaszczyźnie pierścienia tetrapirolowego
porfiryny lecz jest wysunięty nieznacznie w kierunku kompleksującej jon Fe2+ histydyny (o ok. 0,03 nm). Żelazo
dwuwartościowe cechuje obecność sześciu miejsc koordynacyjnych. W nieutlenowanej hemoglobinie bądź
mioglobinie cztery miejsca wykorzystane są przez porfirynowe atomy azotu, piąte bierze udział w wiązaniu z
resztą His natomiast ostatnie, szóste, jest wolne. Proces wiązania cząsteczki tlenu nie wiąże się ze zmianą
stopnia utleniania atomu Fe. Molekuła O2 ulega dokoordynowaniu do atomu żelaza wykorzystując ostatnie
wolne miejsce koordynacyjne. Procesowi temu towarzyszy zmiana położenia jonu Fe2+, który przesuwa się o
około 0,02 nm w stronę cząsteczki tlenu. Pociąga to za sobą zmianę kształtu całej molekuły białka.
HN His
HN
N , , , ,
pierscien porfirynowy N
Fe + O2
Fe
- O2
O
O
wolne miejsce
koordynacyjne
Wolne miejsce może być również zajęta przez inne cząsteczki, na przykład tlenek węgla (czad), wiążący się
ponad 200 razy silniej niż tlen, siarkowodór i inne. W przypadku zmiany stopnia utlenienia żelaza w hemie z II
na III dochodzi do dezaktywacji hemoglobiny (lub mioglobiny) i utraty przez nie funkcji biologicznych.
Produktu utlenienia hemoglobiny nazywamy methemoglobinami i zaliczmy je do barwników ferrihemowych
(zawierających hem z jonami Fe3+, tzw. ferrihem). W ferrihemoglobinie wolne miejsce koordynacyjne zajmuje
cząsteczka wody.
Białkami zawierającymi hem z żelazem na trzecim stopniu utlenienia są katalazy i peroksydazy.
Katalaza jest białkiem o masie około 240 kDa, zawierającym 4 reszty ferrihemowe. Występuje głównie w
świecie zwierzęcym i jest odpowiedzialna za rozkład nadtlenku wodoru w myśl reakcji:
katalaza
2H2O2 2H2O + O2
Aktywność katalazy jest imponująca. Jedna jaj cząsteczka rozkłada w ciągu minuty 5 mln cząsteczek H2O2 (w
00C). Peroksydazy są szerzej rozpowszechnione w organizmach roślinnych. Obok hemu w jej centrum
katalitycznym znajduje się selen (związany w selenocysteinie). Jej funkcja, podobnie jak funkcja katalazy,
polega na rozkładzie nadtlenku wodoru, jednakże w myśl nieco odmiennego mechanizmu:
peroksydaza
H2O2 + RH2 2H2O + R
Donorem atomów wodoru jest najczęściej zredukowany cytochrom c, chinony lub kwas askorbinowy.
Proteinami zawierającymi żelazo na zmiennym stopniu utlenienia są cytochromy. Najważniejszymi są
proteiny oznaczane literami a, b, c i d. Cytochrom a zawiera dwie cząsteczki zmodyfikowanego hemu
(zawierającego grupę aldehydową zamiast jednej z reszt metylowych i łańcuch politerpenowy w miejsce
podstawnika winylowego), związanego kowalencyjnie z białkiem poprzez wiązanie tioeterowe. Zawiera ponadto
dwa jony miedzi. W skład cząsteczki cytochromu b wchodzą dwie molekuły niezmodyfikowanego hemu, nie
połączonego z łańcuchem polipeptydowym w sposób kowalencyjny. Cytochrom c zawiera dwie molekuły hemu
związane, podobnie jak w cytochromie a, kowalencyjnie. W cytochromie d grupą prostetyczną jest
żelazodihydroporfiryna.
Cytochromy są białkami łańcucha oddechowego, wbudowanymi w błonę mitochondrialną, odpowiedzialnymi za
transport elektronów
189
190
17.2 Procesy utleniania-redukcji w organizmach żywych – część
eksperymentalna
CEL ĆWICZENIA
Zapoznanie ze zagadnieniem reakcji utleniania-redukcji zachodzących w żywym organizmie.
Pojęcie utleniania i redukcji, utleniacz, reduktor, stopień utlenienia, stała równowagi reakcji utleniania-redukcji,
barwniki pirolowe w organizmach żywych, chromoproteiny, transport tlenu w organizmie zwierzęcym, widma
elektronowe.
ODCZYNNIKI
kwas askorbinowy (wit. C) 2M NaOH 1% NaCl

K3[Fe(CN)6] 1% fenol roztwór Stokesa
0,01 M HCl 1% pirogallol NH4OH
0,01 M NaOH 1% gwajakol papierki wskaźnikowe
Na2S 3% H2O2 hemoglobina
2 M H2SO4 4% benzydyny w CH3COOH cytochrom c
NaHSO3 1% KCN CO
UWAGA: Wodorotlenek sodu oraz kwasy: solny, siarkowy i octowy, są silnie żrące. Cyjanek potasu jest
silną trucizną, podobnie jak siarkowodór i tlenek węgla. Pracując z nimi obowiązuje stosowanie rękawic
ochronnych i okularów. Roztwory wskaźników są silnie plamiące.
Przygotować:
10 cm3 1% roztworu K3[Fe(CN)6]

100 cm3 8 mM roztworu kwasu askorbinowego
OPIS ĆWICZENIA
a. Cytochromy - Redukcja i utlenianie cytochromu c
Przygotować roztwór 5 mg cytochromu c w 5 ml 1% roztworu chlorku sodu. Do 3 probówek odmierzyć

po 1 ml roztworu cytochromu c i 1 cm3 wody. Do 2 i 3 probówki dodać po ok. 50µl (1 kropla) 8 mM roztworu
kwasu askorbinowego (wit. C). Wreszcie do probówki 3 dodać 1 kroplę sześciocyjanożelazianu(III) potasu.
Zmierzyć widma UV-VIS uzyskanych roztworów.
b. Reakcje utleniania-redukcji i wymiany ligandów w cząsteczce hemoglobiny
Rozpuść 10 mg hemoglobiny w 10 ml 1% NaCl. Nalać po 1 cm3 roztworu do 9 probówek a następnie
1. nasycić tlenem
2. nasycić tlenem, a następnie tlenkiem węgla
3. nasycić tlenkiem węgla
4. dodać roztworu Stokesa
5. dodać roztworu Stokesa i nasycić tlenkiem węgla
6. dodać kroplę 1% roztworu sześciocyjanożelazianu(III) potasu (K3[Fe(CN)6]), doprowadzić pH do 6 za
pomocą 0,01 M HCl lub NaOH
7. dodać kroplę 1% roztworu sześciocyjanożelazianu(III) potasu (K3[Fe(CN)6]), doprowadzić pH do 10 za
pomocą 0,01 M HCl lub NaOH
191
8. nasycić tlenem a następnie siarkowodorem1
9. dodać szczyptę wodorosiarczanu(IV) sodu, zalkalizować 2M NaOH (pH powyżej 12), ogrzać do powstania
czerwonego zabarwienia
Roztwór Stokesa: 20g siarczanu żelaza(II) rozpuścić w 0,5 dm3 i dodać roztwór 30 g kwasu winowego w 0,5
dm3 wody. Przed użyciem do potrzebnej objętości roztworu dodawać kroplami, intensywnie mieszając, stężony
amoniak do momentu rozpuszczenia osadu wytrącającego się w początkowym etapie. Zmierz widma UV-Vis
otrzymanych roztworów.
UWAGA: Z powodu toksycznego działania H2S i CO nasycanie gazami prowadź pod dygestorium
c. Oksydazy i peroksydazy
- Przygotowanie preparatu oksydaz
Utrzeć na tarce ziemniak, miazgę włożyć do płóciennego woreczka, zanurzyć w zlewce z 200 ml wody
destylowanej i przepłukać miazgę. Zdekantować otrzymany roztwór znad wypłukanej skrobi.
- Badanie oksydaz
Do 4 probówek wlać po 5 ml wyciągu z ziemniaka i dodać do kolejnych probówek po 10 kropli 1%

roztworu fenolu, 1% roztworu pirogallolu i 1% roztworu gwajakolu. Zawartość wymieszać i wstawić do łaźni o
temperaturze 400C. Po godzinie obserwuje się zmiany barwy roztworów.
- Reakcje peroksydaz
Do probówki wlać kilka mililitrów wyciągu ziemniaczanego i dodać kroplę 4% roztworu benzydyny w
CH3COOH oraz kilka kropel 3% wody utlenionej. Równolegle wykonać próbę utleniania benzydyny:
-bez wyciągu ziemniaczanego
-po uprzednim zagotowaniu i ostudzeniu wyciągu
-po dodaniu do wyciągu kropli 1% roztworu cyjanku sodu
-z wodą destylowaną zamiast utlenionej
- Reakcje katalaz
Do dwu probówek wlać po 2 ml soku ziemniaka, a do kolejnych dwóch po 2 ml świeżego mleka. Jedną
probówkę z sokiem ziemniaczanym i jedną z mlekiem ogrzać do wrzenia i ostudzić, a następnie do wszystkich
dodać po 2 ml 3% roztworu nadtlenku wodoru. Zaobserwować zmiany w poszczególnych probówkach.
1
siarkowodór otrzymuje się w zestawie do wytwarzania gazów w wyniku reakcji Na2S z 2M kwasem
siarkowym
192
18. Tablice i wiadomości uzupełniające
18.1 Sposoby wyrażania zawartości składników w mieszaninach i
roztworach
Mol jest to taka ilość materii, która zawiera liczbę cząstek równą liczbie atomów zawartych w 0,012 kg 12C
(węgla 12). Przy stosowaniu pojęcia mola należy określić rodzaj cząstek. Mogą nimi być: atomy, drobiny
(cząsteczki), jony, elektrony, inne cząstki albo określone zespoły takich cząstek.
Poniżej podano definicje sposobów wyrażania zawartości składnika w roztworze lub mieszaninie.
Stężenie molowe - stosunek liczby moli składnika do objętości układu zawierającego ten składnik.
cB = nB /V, gdzie nB - liczba moli składnika B,
V - objętość roztworu;
wymiar: mol/l, mol/dm3, M.
Stężenie masowe - stosunek masy określonego składnika do objętości układu zawierającego tę masę.
pB = mB /V, gdzie m - masa składnika B,
V - objętość układu
Ułamek masowy - stosunek masy określonego składnika do masy całego układu (ułamek masowy wyrażony w
% nazywany jest stężeniem procentowym).
wB = mB /mG, gdzie mB - masa składnika B,
mG - masa całego układu G
wymiar: kg/kg, ppm - 10-6, ppb - 10-9
Ułamek objętościowy - stosunek objętości określonego składnika do objętości całego układu.

VB = VB /VG,
gdzie VB - objętość składnika B,
VG - objętość całego układu G
wymiar: m /m , ppm (v/v), ppb(v/v)
Ułamek molowy - stosunek ilości moli określonego składnika do sumy ilości materii wszystkich składników
układu.
xB = nB /Σni ,
gdzie nB - ilość moli składnika B,
Σni - suma liczby moli wszystkich składników układu
Molarność - stosunek ilości moli określonego składnika do masy rozpuszczalnika.

mB = nB/m , gdzie nB - ilość moli składnika B, m - masa rozpuszczalnika
wymiar: mol/kg
18.2 Roztwory kwasów i zasad

Kwas solny HCl
stężony: 38% (12 M) roztwór chlorowodoru w wodzie; d=1,19 g*cm-3
Kwas siarkowy(VI) H2SO4

stężony: 96% (18 M) roztwór wodzie; d=1,84 g*cm-3, t.w. 3300C
Kwas azotowy HNO3

stężony: 68% (15 M) roztwór w wodzie; d=1,40 g*cm-3, t.w. azeotropu 1200C
Kwas chlorowy(VI) HClO4

stężony: 70% (11 M) roztwór w wodzie; d=1,60 g*cm-3
Kwas fluorowodorowy HF
stężony: 40% (22 M) roztwór fluorowodoru w wodzie; d=1,12 g*cm-3
193
Kwas octowy CH3COOH
stężony (zwany lodowatym): 100% (17,5 M); d=1,05 g*cm-3
Woda amoniakalna (NH3*H2O)

stężony: 25% (13 M) roztwór amoniaku w wodzie; d=0,91 g*cm-3
18.3 Wartości stałych dysocjacji ważniejszych kwasów i zasad

Tabela 18. Wartości pKa wybranych kwasów nieorganicznych
Kwas/zasada sprzężona pKa Kwas/zasada sprzężona pKa
H3O+/H2O -1,74 H2Te/HTe- 2,64
H2O/OH- 15,97 HTe-/Te2- 5,00
OH-/O2- >36 H2Se/HSe- 3,77
H2O2/HO2- 11,62 HSe-/Se2- 10,0
HClO4/ClO4- <-8 H2S/HS- 7,04
HClO3/ClO3- 0,92 HS-/S2- 14,92
HClO2/ClO2- 2,00 HIO/JO- 11,00
HClO/ClO- 7,43 HIO3/IO3- 0,72
HNO3/NO3- <0 H5IO6/H4IO6- 1,64
HNO2/NO2- 3,35 H4IO6-/H3IO62- 8,40
H2N2O2/HN2O2- 7,05 H3IO62-/H2IO63- 15,00
HN2O2-/N2O22- 11,00 HBrO/BrO- 8,70
H2SO4/HSO4- <-3 HBrO3/BrO3- 0,70
HSO4-/SO42- 1,70 H3SbO4/H2SbO4- 4,40
H2SO3/HSO3- 1,77 H2AsO4/HAsO4- 2,32
HSO3-/SO32- 7,20 HAsO2/AsO2- 9,22
H4P2O7/H3P2O7- 0,85 H3AsO3/H2AsO3- 9,20
H3P2O7-/H2P2O72- 1,96 H2AsO3-/HAsO32- 13,77
H2P2O72-/HP2O73- 6,54 H3AsO4/H2AsO4- 2,22
HP2O73-/P2O74- 8,44 H2AsO4-/HAsO42- 6,98
H4P2O6/H3P2O6- 2,39 HAsO42-/ AsO43- 11,41
H3P2O6-/H2P2O62- 2,81 H2CO3/HCO3- 6,46
H2P2O62-/HP2O63- 7,27 HCO3-/CO32- 10,22
HP2O63-/P2O64- 10,03 H3BO3/H2BO3- 9,24
H3PO3/H2PO3- 1,30 H2BO3-/HBO32- 12,74
H2PO3-/HPO32- 4,70 HBO32-/BO33- 13,80
H3PO2/H2PO2- 2,00 HBO2/BO2- 9,12
H3PO4/H2PO4- 2,12 H2B4O7/HB4O7- 4,00
H2PO4-/HPO42- 7,23 HB4O7-/B4O72- 9,00
HPO42-/PO43- 12,44 H2CrO4/HCrO4- 0,74
HF/F- 3,14 HCrO4-/CrO42- 6,49
HCl/Cl- <-7 H3AlO3/H2AlO3- 12,20
HBr/Br- <-9 H3GaO3/H2GaO3- 10,30
HI/I- <-10 H2GaO3-/HGaO32- 11,70
HCNS/CNS- 4,00 H2GeO3/HGeO3- 8,77
HSCN/SCN- 0,5 HGeO3-/GeO32- 12,72
HOCN/OCN- 3,92 H2S2O3/HS2O3- 0,66
HCN/CN- 9,14 HS2O3-/S2O32- 1,56
HN3/N3- 4,72 H2SeO3/HSeO3- 2,52
H2SiO3/HSiO3- 9,66 HSeO3-/SeO32- 7,30
HSiO3-/SiO32- 11,80 H2TeO3/HTeO3- 2,50
H4SiO4/H3SiO4- 9,70 HTeO3-/TeO32- 7,70
H3SiO4-/H2SiO42- 11,70 H2TeO4/HTeO4- 7,64
H2SiO42-/HSiO43- 12,00 HTeO4-/TeO42- 11,19
HSiO43-/SiO44- 12,00 H3Fe(CN)6/H2Fe(CN)6- <1
Cd(H2O)x2+/Cd(H2O)x-1OH+ 11,70 H4Fe(CN)6/H3Fe(CN)6- <1
Co(H2O)x2+/Co(H2O)x-1OH+ 9,60 H3Fe(CN)6-/H2Fe(CN)62- <1
194
Tabela 18. Wartości pKa wybranych kwasów nieorganicznych (c.d.)
Ga(H2O)x3+/Ga(H2O)x-1OH2+ 3,20 H2Fe(CN)62-/HFe(CN)63- 2,20
2+ +
Ca(H2O)x /Ca(H2O)x-1OH 12,63 HFe(CN)63-/Fe(CN)64- 4,20
2+ +
Mg(H2O)x /Mg(H2O)x-1OH 11,40 H2MoO4/HMoO4- 1,80
3+ 2+
Al(H2O)x /Al(H2O)x-1OH 4,89 HMoO4-/MoO42- 4,10
3+ 2+
Cr(H2O)x /Cr(H2O)x-1OH 4,00 N2H62+/N2H5+ -0,60
3+ 2+
Fe(H2O)x /Fe(H2O)x-1OH 2,13 N2H5+/N2H4 8,1
2+ +
Fe(H2O)x-1OH /Fe(H2O)x-2OH 3,26 HONH3+/HONH2 6,10
2+ +
Fe(H2O)x /Fe(H2O)x-1OH 10,14 NH4+/NH3 9,48
2+ +
Zn(H2O)x /Zn(H2O)x-1OH 9,60 H2SnO2/HSnO2- 12,2
2+ +
Cu(H2O)x /Cu(H2O)x-1OH 10,14 H2SnO3/HSnO3- 9,40
Tabela 19. Wartości pKa wybranych kwasów organicznych

Kwas/zasada sprzężona pKa Kwas/zasada sprzężona pKa
Kwas mrówkowy/ Kwas szczawiowy/ 1,27
3,74
mrówczan szczawian 4,27
Kwas octowy/ Kwas benzoesowy/
4,72 4,18
octan benzoesan
Kwas trifluorooctowy/ Kwas pikrynowy/
0,23 0,71
trifluorooctan pikrynian
Kwas chlorooctowy/ Kwas askorbinowy/ 4,10
2,83
chlorooctan askorbinian 11,79
Kwas dichlorooctowy/ Fenol/
1,3 10,0
dichlorooctan fenolan
Kwas trichlorooctowy/ Jon pirydyniowy/
0,7 5,3
trichlorooctan pirydyna
Kwas winowy/ 2,98 Jon trimetyloamoniowy/
9,9
winian 4,34 trimetyloamina
2,1 3,1
Kwas wersenowy/ 2,8 Kwas cytrynowy/ 4,8
wersenian 6,2 cytrynian 6,4
10,3 >16
195

Fizykochemiczne Podstawy Zycia

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Fizykochemiczne Podstawy Zycia

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Fizykochemiczne Podstawy Zycia

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Błażej GIERCZYK, Grzegorz SCHROEDER

Uniwersytet im. A. Mickiewicza

Recenzenci: dr Bogusława Łęska, prof. dr hab. Władysław Boczoń

2.1.2 W czasie wykonywania ćwiczenia

2.1.3 Po zakończeniu ćwiczenia

2.2 Postępowanie w razie wypadku

2.2.1 Pożary, wybuchy, oparzenia termiczne

2.2.2 Oparzenia chemiczne i zatrucia oraz sposoby udzielania pierwszej

Tabela 1. Najczęściej spotykane w laboratorium substancje trujące

ACETON – należy spowodować wymioty, podać odtrutkę

ALKOHOL METYLOWY – stosować płukanie żołądka wodą, podawać alkohol

BENZEN I JEGO HOMOLOGI – w razie kontaktu wynieść chorego na świeże

CYJANKI – spowodować wymioty, podać 10 ml 3% wody

NITROBENZEN – podać 100 ml 3% kwasu octowego, dużo wody,

RTĘĆ I JEJ ZWIĄZKI - podać 4g Na2S2O3 w 450 ml wody;

ZASADY - zastosować 5% roztwór kwasu octowego, sok z

2.2.3 Porażenie prądem elektrycznym

2.2.5 Krótkotrwała utrata przytomności

2.2.6 Nagłe zatrzymanie czynności serca, krążenia i oddychania

2.2.7 Wyposażenie apteczki laboratoryjnej

2.3 Wyposażenie laboratorium chemicznego

2.3.2. Oznaczenia na odczynnikach

O – utleniacz; substancja samozapalna lub mogąca wywołać pożar

2.3.2.2 Symbole literowe R (risks) i S (safety)

2.3.4 Oznaczenia na gaśnicach

2.4 Sprzęt laboratoryjny

Klasa Wartość Liczba działek legalizacyjnych Obciążenie

Klasa 1 e < 1 mg N < 50 000 - 100 d

OZNACZENIA: d – działka elementarna

WYMAGANIA DODATKOWE: 1d ≤e ≤ 10d (nie dotyczy wag klasy I)

Podstawowe zasady ważenia:

2.4.2.2 Ważniejszy sprzęt szklany stosowany w laboratorium

Kolba Erlenmeyera - stożkowa

– służy do ogrzewania cieczy, miareczkowania, suszenia roztworów niewodnych

Kolba próżniowa (ssawkowa)

- pomimo wielu zastępczych środków wykorzystywanych do odważania substancji, szkłem, docelowo

Odbieralniki, łączniki, reduktory

– elementami wyposażenia aparatury szklanej mającymi za zadanie odprowadzanie nadmiaru ciepła są

Kolby dwu- i trójszyjne

– pomimo, że większość reakcji chemicznych przeprowadzamy w kolbach, do prowadzenia syntezy

Aparat do ekstrakcji Soxletha

Siatka azbestowa i płytka metalowa

– bardzo praktycznym w zastosowaniach urządzeniem metalowym na pracowniach jest pompka próżniowa,

Butla stalowa na sprężone gazy

2.4.4.2 Ważniejszy sprzęt elektryczny stosowany w laboratorium

- są jednym z najczęściej wykorzystywanych urządzeń elektrycznych na pracowni chemicznej. W pracy z nimi

Transformatory - urządzenia te służą do redukcji napięcia podawanego na odbiornik prądu. Zagrożenia

3.1.1 Podział chromatografii zależnie od dominującego mechanizmu

3.1.2 Podział chromatografii w zależności od sposobu przeprowadzania

3.1.3 Wykonanie chromatogramu cienkowarstwowego

3.2.1 Przygotowanie do miareczkowania

C0α * C0α C0α 2

4.1.2 Aktywność i współczynnik aktywności

Z powyższej zależności wyprowadzić można wartość współczynnika aktywności:

Na podstawie pomiarów fizykochemicznych, prowadzonych dla roztworów elektrolitów (potencjały elektrod,

gdzie f+ i f- oznaczają współczynniki aktywności kationu i anionu elektrolitu AmBn.

4.1.3 Iloczyn rozpuszczalności, efekt solny, efekt wspólnego jonu

L = [A] [B ] [C ] ... * f Am * f Bn * f Co * ...

elektrolit posiada jon(y) wspólne z osadem