Legiolert *

06-0005740-04

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Australia: +1300 443 399
Italy: +39 055 208450

IDEXX Laboratories, Inc., One IDEXX Drive, Westbrook, Maine 04092 USA
idexx.com/water
Legiolert* Test Kit
Introduction
Legiolert is a test that detects Legionella pneumophila in water samples. This test is based on a bacterial enzyme detection technology that signals the presence of Legionella pneumophila
through utilization of a substrate present in the Legiolert reagent. Legionella pneumophila cells grow rapidly and reproduce using the rich supply of amino acids, vitamins and other
nutrients present in the Legiolert reagent. Actively growing strains of Legionella pneumophila use the added substrate to produce a brown color indicator. Legiolert detects Legionella
pneumophila at 1 organism in 100 mL within 7 days.
Storage
Store at 2–25°C away from direct light and humidity.
Potable Water Sample Preparation
10 mL Protocol 100 mL Protocol1
1. Add 90 mL of sterile diluent (e.g., dechlorinated water, deionized water, 1. Collect 100 mL of sample in a sterile vessel.
phosphate buffer, Butterfield’s buffer, or 0.1% peptone) to a sterile vessel. 2. Bring sample to room temperature.
2. Add 10 mL water sample. 3. Using a hardness dip strip (supplied as part of the Legiolert Supplement kit2), follow
3. Bring sample to room temperature. the manufacturer’s instructions to determine if your sample has low or high hardness.
4. Add contents of Legiolert blister pack to sample.A, B Consider 0-2 pads positive (≤7 CaCO3 (°d)) as low; 3-4 pads positive
5. Shake until contents are dissolved. Sample may remain cloudy. (>14 CaCO3 (°d)) as high.
4. Add corresponding supplement (supplied as part of the supplement kit) as follows:
Briefly agitate the supplement vessel immediately prior to use, then for low hardness
samples add 0.33 mL and for high hardness samples add 1.0 mL.
5. Add contents of Legiolert blister pack to sample.A, B
6. Shake until contents are dissolved. Sample may remain cloudy.
Nonpotable Water Sample Preparation
0.1 mL Protocol 1.0 mL Protocol1
1. Add 100 mL of sterile diluent (e.g., dechlorinated water, deionized water, phosphate 1. Add 100 mL of sterile diluent (e.g., dechlorinated water, deionized water, phosphate
buffer, Butterfield’s buffer, or 0.1% peptone) to a sterile vessel. buffer, Butterfield’s buffer, or 0.1% peptone) to a sterile vessel.
2. Add contents of Legiolert blister pack to vessel.A, B 2. Add contents of Legiolert blister pack to vessel.A, B
3. Shake until contents are dissolved. Solution may remain cloudy. 3. Shake until contents are dissolved. Solution may remain cloudy.
4. Add 0.2 mL of Legiolert Pretreatment into a sterile microtube.3 4. Add 2.0 mL of Legiolert Pretreatment into a sterile tube.3
5. Add 0.2 mL of nonpotable water sample to the same microtube and mix well. 5. Add 2.0 mL of nonpotable water sample to the same tube and mix well.
6. Incubate the microtube at room temperature for 60 seconds (±5 seconds). 6. Incubate the tube at room temperature for 60 seconds (±5 seconds).
7. Mix the microtube contents and immediately transfer 0.2 mL to the vessel containing 7. Mix the tube contents and immediately transfer 2.0 mL to the vessel containing
Legiolert and mix well. Legiolert and mix well.
Quanti-Tray* Enumeration Procedure
For Quality Control (QC) and Proficiency Test (PT) samples only:
1. Add contents of Legiolert blister pack to sample.A,B
2. Shake until contents are dissolved. Sample may remain cloudy.
For all test samples:
3. Pour sample/reagent mixture into a Quanti-Tray/Legiolert tray.C Tap or flick the tray to remove air bubbles.D
4. Immediately seal tray in an IDEXX Quanti-Tray Sealer PLUS.
5. Incubate the sealed trays:
i. For all potable water or QC and PT samples, incubate at 39±0.5°C for 7 days.
ii. For all nonpotable water incubate at 37±0.5°C for 7 days.
6. Quanti-Tray/Legiolert must be incubated paper side down with the wells facing up in a humidified environment (approximately 85% humidity).
Stack trays in alternating directions for added stability.E Do not stack more than 10 trays.
7. Read results according to the Result Interpretation table below. Count the number of positive wells and refer to the Legiolert MPN table provided with the trays to obtain a Most
Probable Number. Multiply results by the dilution factor for the final MPN, if applicable.

A B C D E

Result Interpretation
Appearance Result

Any brown color, greater than the negative control (with or without turbidity) Positive for Legionella pneumophila

Any turbidity, greater than the negative control (with or without any brown color change) Positive for Legionella pneumophila

No brown color change and no turbidity, greater than the negative control Negative for Legionella pneumophila

• Legiolert results are definitive at 7 days. In addition, positives observed before 7 days and negatives observed after 7 days are also valid.
• Turbidity alone indicates growth of Legionella pneumophila when the indicator may not develop as quickly or strongly.
Procedural Notes
• For comparison, an incubated sterile diluent blank containing Legiolert reagent (negative control) can be used when interpreting results.
• Legiolert is a primary water test. Legiolert performance characteristics do not apply to samples altered by pre-enrichment or concentration.
• Aseptic technique should always be followed when using Legiolert. Dispose of materials in accordance with Good Laboratory Practices.
Quality Control Procedures
Note: For QC and PT samples, please use the Quanti-Tray Enumeration section above.
1. One of the following quality control procedures is recommended for each lot of Legiolert:
A. IDEXX-QC Legionella pneumophila4: Legionella pneumophila, Enterococcus faecalis.
B. For each of the American Type Culture Collection (ATCC)5 or World Data Centre for Microorganisms (WDCM)6 bacterial strains:
i. Target organisms: Legionella pneumophila ATCC 33152/WDCM 00107 and/or ATCC 33156/WDCM 00180; streak the culture onto BCYE and incubate at 35°C
for 48-72 hours.
ii. Non-target organism: Enterococcus faecalis ATCC 29212/WDCM 00087; streak onto blood agar plate and incubate at 35°C for 18–24 hours.
iii. For each bacterial strain inoculate a labeled sterile vessel containing 100 mL of sterile diluent with 102 to 103 cfu for target
organisms or 103 to 104 cfu for non-target organisms.
2. Follow the Quanti-Tray Enumeration Procedure above.
3. Results should match the Result Interpretation table above.
Note: IDEXX internal quality control testing is performed in accordance with ISO 11133:2014.
Quality Control Certificates are available at idexx.com/water.

1. The potable water 100 mL sample protocol and the nonpotable water 1.0 mL sample protocol have not been validated in North America.
2. Legiolert Supplement kit, WLGT-SUP, 98-0005745-00
3. Legiolert Pretreatment, WLGT-PRE, 98-0007740-00
4. IDEXX-QC Legionella pneumophila, UN3373-WQC-LP, 98-0009287-00
5. ATCC American Type Culture Collection 1-800-638-6597 • atcc.org
6. WDCM World Data Centre for Microorganisms • wdcm.org
*Legiolert and Quanti-Tray are trademarks or registered trademarks of IDEXX Laboratories, Inc. or its affiliates in the United States and/or other c ountries.
Patent information: idexx.com/patents.
© 2017 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved.
Kit de test Legiolert*
Introduction
Legiolert est un test qui détecte Legionella pneumophila dans des échantillons d’eau. Ce test est basé sur une technologie de détection d’une enzyme bactérienne qui indique la présence
de Legionella pneumophila grâce à l’utilisation d’un substrat présent dans le réactif Legiolert. Les cellules de Legionella pneumophila ont une croissance rapide et se reproduisent au
moyen du milieu enrichi en acides aminés, vitamines et autres nutriments présents dans le réactif Legiolert. Les souches de Legionella pneumophila en phase de croissance active
utilisent le substrat ajouté pour produire un indicateur de couleur brun. Legiolert détecte Legionella pneumophila à partir de 1 micro-organisme dans un échantillon de 100 ml en 7 jours.
Conservation
À conserver entre 2–25°C, à l’abri de la lumière directe et de l’humidité.
Préparation de l’échantillon d’eau potable
Protocole 10 ml Protocole 100 ml1
1. Ajouter 90 ml de diluant stérile (p. ex. eau déchlorée, 1. Recueillir 100 ml d’un échantillon dans un flacon stérile.
eau désionisée, tampon phosphate, tampon Butterfield 2. Laisser l’échantillon revenir à température ambiante.
ou eau peptonée à 0,1%) dans un récipient stérile. 3. En utilisant une bandelette de test pour la dureté de l’eau (fournie dans le kit du
2. Ajouter 10 ml d’un échantillon d’eau. supplément Legiolert2), suivez les instructions du fabricant pour déterminer si la
3. Laisser l’échantillon revenir à température ambiante. dureté de votre échantillon est faible ou élevée. Considérez que 0 à 2 carré(s)
4. Ajouter le contenu d’une dose Legiolert à l’échantillon.A, B positif(s) (≤7 CaCO3 [°d]) constitue(nt) une faible dureté, et que 3 ou 4 carrés
5. Agiter jusqu’à dissolution complète du contenu. positifs (>14 CaCO3 [°d]) constituent une dureté élevée.
L’échantillon peut rester trouble. 4. Ajouter un supplément approprié (fourni dans le kit du supplément) de la manière
suivante: agiter brièvement le récipient de supplément immédiatement avant utilisation,
puis, pour les échantillons de dureté faible, ajouter 0,33 ml et pour les échantillons de
dureté élevée, ajouter 1,0 ml.
5. Ajouter le contenu d’une dose Legiolert à l’échantillon.A, B
6. Agiter jusqu’à dissolution complète du contenu. L’échantillon peut rester trouble.
Préparation de l’échantillon d’eau non potable
Protocole 0.1 ml Protocole 1.0 ml1
1. Ajouter 100 ml de diluant stérile (p. ex. eau déchlorée, eau désionisée, tampon 1. Ajouter 100 ml de diluant stérile (p. ex. eau déchlorée, eau désionisée, tampon
phosphate, tampon Butterfield ou eau peptonée à 0,1%) dans un récipient stérile. phosphate, tampon Butterfield ou eau peptonée à 0,1%) dans un récipient stérile.
2. Ajouter le contenu d’une dose Legiolert dans le récipient.A, B 2. Ajouter le contenu d’une dose Legiolert dans le récipient.A, B
3. Agiter jusqu’à dissolution complète du contenu. La solution peut rester trouble. 3. Agiter jusqu’à dissolution complète du contenu. La solution peut rester trouble.
4. Ajouter 0,2 ml du prétraitement Legiolert dans un microtube stérile.3 4. Ajouter 2,0 ml du prétraitement Legiolert dans un tube stérile.3
5. Ajouter 0,2 ml de l’échantillon d’eau non potable au même microtube et bien mélanger. 5. Ajouter 2,0 ml de l’échantillon d’eau non potable au même tube et bien mélanger.
6. Incuber le microtube à température ambiante pendant 60 secondes (±5 secondes). 6. Incuber le tube à température ambiante pendant 60 secondes (±5 secondes).
7. Mélanger le contenu du microtube, transférer immédiatement 0,2 ml au flacon contenant 7. Mélanger le contenu du tube, transférer immédiatement 2,0 ml au flacon contenant
Legiolert et bien mélanger. Legiolert et bien mélanger.

Procédure de numération Quanti-Tray*

Pour les échantillons destinés au contrôle qualité (CQ) et aux essais interlaboratoires (EI) uniquement:
1. Ajouter le contenu d’une dose Legiolert à l’échantillon.A,B
2. Agiter jusqu’à dissolution complète du contenu. L’échantillon peut rester trouble.
Pour tous les échantillons à tester:
3. Distribuer le mélange échantillon/réactif dans un Quanti-Tray/Legiolert.C Tapoter ou donner de légers coups sur le Quanti-Tray pour éliminer les bulles d’air.D
4. Fermer hermétiquement le Qanti-Tray immédiatement dans une scelleuse IDEXX Quanti-Tray Sealer PLUS.
5. Incuber les Quanti-Tray scellés:
i. Pour tous les échantillons d’eau potable ou les échantillons CQ et EI, incuber à 39±0,5°C pendant 7 jours.
ii. Pour tous les échantillons d’eau non potable, incuber à 37±0,5°C pendant 7 jours.
6. Quanti-Tray/Legiolert doit être incubé la face en papier vers le bas et les puits vers le haut dans un environnement humidifié (85% d’humidité environ).
Empiler les Quanti-Tray en alternant le sens pour plus de stabilité.E Ne pas empiler plus de 10 Quanti-Tray.
7. Interpréter les résultats en se référant à la table d’interprétation des résultats ci-dessous. Compter le nombre de puits positifs et se référer à la table NPP Legiolert
fournie avec les Quanti-Tray pour obtenir le Nombre le plus probable (NPP). Multiplier les résultats par le facteur de dilution pour obtenir le NPP final, s’il y a lieu.

A B C D E

Interprétation des résultats

Aspect Résultats

Toute coloration brune, plus intense que le contrôle négatif (avec ou sans trouble) Positif pour Legionella pneumophila

Tout trouble, plus important que celui du contrôle négatif (avec ou sans variation de la coloration brune) Positif pour Legionella pneumophila

Ni changement de couleur brune ni trouble supérieur au contrôle négatif Négatif pour Legionella pneumophila

• Les résultats de Legiolert sont définitifs au bout de 7 jours. En outre, des résultats positifs observés avant 7 jours et des résultats négatifs observés après 7
jours sont également valables.
• La seule présence d’un trouble indique la croissance de Legionella pneumophila, dans les cas éventuels où l’indicateur ne se développe pas de manière
aussi rapide ou intense.
Remarques concernant la procédure
• À titre de comparaison, un blanc constitué de diluant stérile incubé contenant un réactif Legiolert (contrôle négatif) peut être utilisé lors de l’interprétation des résultats.
• Legiolert est un premier test sur l’eau. Les caractéristiques de performance de Legiolert ne s’appliquent pas à des échantillons modifiés par un pré-enrichissement ou une concentration.
• Une technique aseptique doit toujours être suivie lors de l’utilisation de Legiolert. Éliminer les matériaux conformément aux Bonnes pratiques de laboratoire.
Procédures de contrôle de la qualité
Remarque: pour les échantillons CQ et EI, veuillez suivre la procédure de numération Quanti-Tray ci-dessus.
1. L’une des procédures suivantes de contrôle qualité est recommandée pour chaque lot de Legiolert:
A. IDEXX-QC Legionella pneumophila4: Legionella pneumophila, Enterococcus faecalis.
B. Pour chacune des souches bactériennes de la collection américaine (American Type Culture Collection, ATCC)5 ou du Centre mondial de données sur
les micro-organismes (World Data Centre for Microorganisms, WDCM):
i. Organismes cibles: Legionella pneumophila ATCC 33152/WDCM 00107 et/ou ATCC 33156/WDCM 00180; ensemencer la culture sur une gélose BCYE
(Buffered Charcoal Yeast Extract, extrait de levure de charbon tamponnée) et incuber à 35°C pendant 48 à 72 heures.
ii. Organisme non cible: Enterococcus faecalis ATCC 29212/WDCM 00087; ensemencer sur une gélose agar au sang et incuber à 35°C pendant 18 à 24 heures
iii. Pour chaque souche bactérienne, inoculer un récipient stérile correctement étiqueté contenant 100 ml de diluant stérile avec 102 à 103 UFC pour les organismes
cibles ou avec 103 à 104 UFC pour les organismes non cibles.
2. Suivre la procédure de numération Quanti-Tray ci-dessus.
3. Les résultats doivent correspondre à la table d’interprétation des résultats ci-dessus.
Remarque: les tests de contrôle de la qualité internes d’IDEXX sont effectués conformément à la norme ISO 11133:2014.
Les certificats de contrôle qualité sont disponibles à l’adresse idexx.com/water.
1. Le protocole d’échantillon d’eau potable de 100ml et le protocole d’échantillon d’eau non potable de 1.0ml n’ont pas été validés en Amérique du Nord.
2. Kit du supplément Legiolert, WLGT-SUP, 98-0005745-00
3. Prétraitement Legiolert, WLGT-PRE, 98-0007740-00
4. IDEXX-QC Legionella pneumophila, UN3373-WQC-LP, 98-0009287-00
5. Collection américaine (American Type Culture Collection, ATCC) 1-800-638-6597 • atcc.org
6. Centre mondial de données sur les microorganismes (World Data Centre for Microorganisms, WDCM) • wdcm.org
*Legiolert et Quanti-Tray sont des marques ou des marques déposées de la société IDEXX Laboratories, Inc. ou de ses sociétés affiliées aux États-Unis et/ou dans d’autres pays.
Informations sur les brevets: idexx.com/patents.
© 2017 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved.
Kit per analisi Legiolert*
Introduzione
Legiolert è un test per la rilevazione di Legionella pneumophila in campioni di acqua. Questo test si basa su una tecnologia che rileva enzimi batterici per segnalare la presenza di
Legionella pneumophila tramite l’utilizzo di un substrato presente nel reagente Legiolert. Le cellule di Legionella pneumophila crescono e si riproducono rapidamente grazie al ricco
apporto di aminoacidi, vitamine e altri nutrienti presenti nel reagente Legiolert. Ceppi di Legionella pneumophila in intensa crescita utilizzano il substrato aggiuntivo per produrre un
indicatore di color marrone. Legiolert rileva, entro 7 giorni, la Legionella pneumophila al livello di 1 organismo per campione di 100 ml.
Conservazione
Conservare a 2–25°C lontano da luce diretta e umidità.
Preparazione del campione d’acqua potabile
Protocollo 10 ml Protocollo 100 ml1
1. Aggiungere 90 ml di diluente sterile (ad es., acqua declorata, acqua deionizzata, 1. Raccogliere un campione di 100 ml in un recipiente sterile.
tampone fosfato, tampone di Butterfield o peptone allo 0,1%) a un recipiente sterile. 2. Consentire al campione di raggiungere la temperatura ambiente.
2. Aggiungere 10 ml di campione di acqua. 3. Utilizzando una striscia di cartina indicatrice di durezza (fornita con il kit del supplemento
3. Consentire al campione di raggiungere la temperatura ambiente. Legiolert2), seguire le istruzioni del produttore per determinare se il campione contiene
4. Aggiungere al campione il contenuto di una confezione blister Legiolert.A, B acqua dura o soffice. Tenere presente che 0-2 caselle (pad) positive (≤7 CaCO3 (°d))
5. Agitare fino alla dissoluzione del contenuto. È possibile che il campione indicano acqua soffice; 3-4 caselle positive (>14 CaCO3 (°d)) indicano acqua dura.
rimanga torbido. 4. Aggiungere il supplemento corrispondente (fornito con il kit supplementare) come segue:
Agitare brevemente il recipiente immediatamente prima dell’uso, quindi aggiungere
0,33 ml ai campioni di bassa durezza e 1,0 ml ai campioni di durezza elevata.
5. Aggiungere al campione il contenuto di una confezione blister Legiolert.A, B
6. Agitare fino alla dissoluzione del contenuto. È possibile che il campione rimanga torbido.
Preparazione del campione d’acqua non potabile
Protocollo 0.1 ml Protocollo 1.0 ml1
1. Aggiungere 100 ml di diluente sterile (ad es., acqua declorata, acqua deionizzata, 1. Aggiungere 100 ml di diluente sterile (ad es., acqua declorata, acqua deionizzata,
tampone fosfato, tampone di Butterfield o peptone allo 0,1%) a un recipiente sterile. tampone fosfato, tampone di Butterfield o peptone allo 0,1%) a un recipiente sterile.
2. Aggiungere al recipiente il contenuto di una confezione blister Legiolert.A, B 2. Aggiungere al recipiente il contenuto di una confezione blister Legiolert.A, B
3. Agitare fino alla dissoluzione del contenuto. La soluzione potrebbe rimanere torbida. 3. Agitare fino alla dissoluzione del contenuto. La soluzione potrebbe rimanere torbida.
4. Aggiungere 0,2 ml di Legiolert Pretreatment a una microprovetta sterile.3 4. Aggiungere 2,0 ml di Legiolert Pretreatment a una provetta sterile.3
5. Aggiungere 0,2 ml del campione di acqua non potabile alla stessa 5. Aggiungere 2,0 ml del campione di acqua non potabile alla stessa provetta e
microprovetta e mescolare bene. mescolare bene.
6. Incubare la microprovetta a temperatura ambiente per 60 secondi (±5 secondi). 6. Incubare la provetta a temperatura ambiente per 60 secondi (±5 secondi).
7. Mescolare il contenuto della microprovetta e trasferire immediatamente 0,2 ml nel 7. Mescolare il contenuto della provetta e trasferire immediatamente 2,0 ml nel
recipiente contenente Legiolert e mescolare bene. recipiente contenente Legiolert e mescolare bene.
Procedura di conteggio Quanti-Tray*
Solo per i campioni da utilizzare per il controllo qualità (Quality Control, QC) e le prove valutative (Proficiency Test, PT):
1. Aggiungere al campione il contenuto di una confezione blister Legiolert.A,B
2. Agitare fino alla dissoluzione del contenuto. È possibile che il campione rimanga torbido.
Per tutti i campioni dei test:
3. Versare la miscela di campione/reagente nel vassoio Quanti-Tray/Legiolert.C Tamburellare o picchiettare sul vassoio per eliminare bolle d’aria.D
4. Sigillare immediatamente il vassoio con un IDDEX Quanti-Tray Sealer PLUS.
5. Incubare i vassoi sigillati:
i. Per tutti i campioni di acqua potabile o per QC e PT, incubare a 39±0,5°C per 7 giorni.
ii. Per tutti i campioni di acqua non potabile, incubare 37±0,5°C per 7 giorni.
6. Quanti-Tray/Legiolert deve essere incubato con il lato-carta verso il basso ed i pozzetti rivolti verso l’alto in un ambiente umidificato (umidità dell’85% circa).
Impilare i vassoi in direzioni alternate per migliorarne la stabilità.E Non accatastare più di 10 vassoi.
7. Leggere i risultati secondo la tabella di Interpretazione risultati qui sotto. Contare il numero di pozzetti positivi e fare riferimento alla tabella Legiolert MPN provvista con i vassoi, in
modo da ottenere un Numero Più Probabile. Se pertinente, per il “Numero Più Probabile” (Most Probable Number, MPN) finale, moltiplicare i risultati per il fattore di diluzione.

A B C D E

Interpretazione risultati
Aspetto Risultati

Qualsiasi colorazione marrone più intensa del controllo negativo (con o senza torbidità) Positivo alla Legionella pneumophila

Qualsiasi colorazione marrone più intensa del controllo negativo (con o senza torbidità) Positivo alla Legionella pneumophila

Nessun cambiamento di colore ne torbidità più intensi del controllo negativo Negativo alla Legionella pneumophila

• I risultati Legiolert sono definitivi al 7 giorno. Inoltre, sono anche validi i positivi osservati prima di 7 giorni e i negativi osservati dopo il 7 giorno.
• La torbidità da sola è indicativa di crescita di Legionella pneumophila nei casi in cui l’indicatore potesse svilupparsi più lentamente o meno intensamente.

Note procedurali
• Per l’interpretazione, i risultati possono essere confrontati con un vuoto incubato con diluente sterile contenente il reagente Legiolert (controllo negativo).
• Legiolert è un’analisi primaria dell’acqua. Le caratteristiche di prestazioni di Legiolert non sono applicabili a campioni modificati da pre-arricchimento o che sono stati concentrati.
• Si devono sempre seguire tecniche asettiche nell’uso di Legiolert. Scartare i materiali secondo le Buone Prassi di Laboratorio.

Procedure controllo qualità

Nota: Per i campioni per QC e PT, utilizzare la sezione relativa all’enumerazione Quanti-Tray indicata sopra.
1. Per ciascun lotto di Legiolert si raccomanda una delle seguenti procedure di controllo qualità:
A. IDEXX-QC Legionella pneumophila4: Legionella pneumophila, Enterococcus faecalis.
B. Per ciascun ceppo della Collezione americana colture tipo (American Type Culture Collection, ATCC)5 o del Centro mondiale dati sui microorganismi (World Data Centre for
Microorganisms, WDCM)6:
i. Organismo mirato: Legionella pneumophila ATCC 33152/WDCM 00107 e/o ATCC 33156/WDCM 00180; strisciare la coltura su terreno BCYE e incubare a 35°C per 48–72 ore.
ii. Organismo non-mirato: Enterococcus faecalis ATCC 29212/WDCM 00087; strisciare su piastre di agar-sangue e incubare a 35°C per 18–24 ore.
iii. Per ciascun ceppo batterico, inoculare un recipiente sterile contrassegnato contenente 100 ml di diluente sterile con da 102 a 103 UFC per gli organismi mirati o da 103 a 104
UFC per gli organismi non mirati.
2. Seguire la procedura di enumerazione Quanti-Tray di cui sopra.
3. I risultati dovrebbero corrispondere alla tabella di interpretazione dei risultati di cui sopra.
Nota: I test di controllo di qualità interni IDEXX sono condotti in conformità con ISO 11133:2014. I certificati di controllo qualità sono disponibili sul sito idexx.com/water.

1. Il protocollo relativo al campione di acqua potabile di 100 ml e Il protocollo relativo al campione di acqua non potabile di 1.0 ml non sono stati convalidati in Nord America.
2. Legiolert Kit Supplementare, WLGT-SUP, 98-0005745-00
3. Legiolert Pre-trattamento, WLGT-PRE, 98-0007740-00
4. IDEXX-QC Legionella pneumophila, UN3373-WQC-LP, 98-0009287-00
5. ATCC American Type Culture Collection 1-800-638-6597 • atcc.org
6. WDCM World Data Centre for Microorganisms • wdcm.org
* Legiolert e Quanti-Tray sono marchi commerciali o marchi registrati di IDEXX Laboratories, Inc. o delle sue affiliate negli Stati Uniti e/o in altri Paesi.
Informazioni brevetti: idexx.co/patents.
© 2017 IDEXX Laboratories, Inc. Tutti i diritti riservati.
Legiolert* Test Kit
Einführung
Legiolert ist ein Test zum Nachweis von Legionella pneumophila in Wasserproben. Dieser Test basiert auf einer bakteriellen Enzymdetektionstechnik, die die Gegenwart von Legionella
pneumophila mit Hilfe eines Substrats im Legiolert-Reagenz signalisiert. Die Legionella pneumophila-Zellen wachsen schnell und reproduzieren sich, indem sie das große Angebot an
Aminosäuren, Vitaminen und anderen Nährstoffen im Legiolert-Reagenz nutzen. Aktiv wachsende Legionella pneumophila-Stämme produzieren mit dem zugefügten Substrat einen
braunen Indikator. Legiolert weist Legionella pneumophila bei 1 Organismus in einer 100-ml-Probe innerhalb von 7 Tagen nach.
Lagerung
Bei 2–25°C und vor Licht und Feuchtigkeit geschützt lagern.
Trinkwasserprobenvorbereitung
10 ml Protokoll 100 ml Protokoll1
1. 90 ml steriles Verdünnungsmittel (z. B. entchlortes Wasser, entionisiertes Wasser, 1. 100 ml der Probe in ein steriles Gefäß geben.
Phosphatpuffer, Butterfield-Puffer oder 0,1%iges Pepton) in ein steriles Gefäß geben. 2. Probe auf Raumtemperatur bringen.
2. Eine 10-ml-Wasserprobe hinzugeben. 3. Folgen Sie den Herstelleranweisungen, um mithilfe eines Teststreifens zum Eintauchen
3. Probe auf Raumtemperatur bringen. (im Lieferumfang des Legiolert Ergänzungsmittel-Kits enthalten2) den Härtegrad der
4. Inhalt des Legiolert-Blisterpacks zur Probe geben.A, B Wasserprobe zu ermitteln. Stufen Sie Pads mit 0-2-positiv (≤7 CaCO3 (°d)) als gering;
5. Schütteln, bis der Inhalt aufgelöst ist. Die Probe kann trüb bleiben. Pads mit 3-4-positiv (>14 CaCO3 (°d)) als hoch ein.
4. Entsprechendes Ergänzungsmittel (im Lieferumfang des Ergänzungsmittel-Kits
enthalten) wie folgt hinzugeben: Das Gefäß mit dem Ergänzungsmittel unmittelbar vor
der Verwendung kurz schütteln und anschließend bei Proben mit niedrigem Härtegrad
0,33 ml und bei Proben mit hohem Härtegrad 1,0 ml Ergänzungsmittel hinzufügen.
5. Inhalt des Legiolert-Blisterpacks zur Probe geben.A, B
6. Schütteln, bis der Inhalt aufgelöst ist. Die Probe kann trüb bleiben.
Brauchwasserprobenvorbereitung
0.1 ml Protokoll 1.0 ml Protokoll1
1. 100 ml steriles Verdünnungsmittel (z. B. entchlortes Wasser, entionisiertes Wasser, 1. 100 ml steriles Verdünnungsmittel (z. B. entchlortes Wasser, entionisiertes Wasser,
Phosphatpuffer, Butterfield-Puffer oder 0,1%iges Pepton) in ein steriles Gefäß geben. Phosphatpuffer, Butterfield-Puffer oder 0,1%iges Pepton) in ein steriles Gefäß geben.
2. Inhalt des Legiolert-Blisterpacks in das Gefäß geben.A, B 2. Inhalt des Legiolert-Blisterpacks in das Gefäß geben.A, B
3. Schütteln, bis der Inhalt aufgelöst ist. Die Lösung kann trüb bleiben. 3. Schütteln, bis der Inhalt aufgelöst ist. Die Lösung kann trüb bleiben.
4. 0,2 ml Legiolert Vorbehandlung in ein steriles Mikroröhrchen geben.3 4. 2,0 ml Legiolert Vorbehandlung in ein steriles röhrchen geben.3
5. Eine Probe von 0,2 ml nicht trinkbaren Wasser in dasselbe Mikroröhrchen 5. Eine Probe von 2,0 ml nicht trinkbaren Wasser in dasselbe röhrchen geben
geben und gut mischen. und gut mischen.
6. Das Mikroröhrchen bei Raumtemperatur 60 Sekunden (±5 Sekunden) lang inkubieren. 6. Das röhrchen bei Raumtemperatur 60 Sekunden (±5 Sekunden) lang inkubieren.
7. Den Inhalt des Mikroröhrchens gut mischen und sofort 0,2 ml in das Gefäß mit 7. Den Inhalt des röhrchens gut mischen und sofort 2,0 ml in das Gefäß mit Legiolert
Legiolert geben und gut mischen. geben und gut mischen.
Quanti-Tray*-Auszählverfahren
Nur für Qualitätskontrollproben (QK) und Eignungsprüfungsproben (EP):
1. Inhalt des Legiolert-Blisterpacks zur Probe geben.A,B
2. Schütteln, bis der Inhalt aufgelöst ist. Die Probe kann trüb bleiben.
Für alle Testproben:
3. Die Probe-Reagenz-Mischung in ein Quanti-Tray/Legiolert-Tray geben.C Gegen das Tray klopfen oder schnippen, um Luftbläschen zu entfernen.D
4. Das Tray sofort in einem IDEXX Quanti-Tray Sealer PLUS versiegeln.
5. Die versiegelten Trays inkubieren:
i. Alle Trinkwasser-, QK- und EP-Proben bei 39±0,5°C 7 Tage lang inkubieren.
ii. Alle Nicht-Trinkwasser-Proben bei 37±0,5°C 7 Tage lang inkubieren.
6. Das Quanti-Tray/Legiolert-Tray muss mit der Papierseite nach unten, also mit den Vertiefungen nach oben, in einer befeuchteten Umgebung (ungefähr 85%
Luftfeuchtigkeit) inkubiert werden. Für zusätzliche Stabilität die Trays in wechselnder Ausrichtung stapeln.E Nicht mehr als 10 Trays aufeinanderstapeln.
7. Die Ergebnisse mit Hilfe der nachfolgenden Tabelle zur Ergebnisauswertung ablesen. Die Anzahl der positiven Vertiefungen zählen und mit der im Lieferumfang
der Trays enthaltenen Legiolert-MPN-Tabelle vergleichen, um eine wahrscheinlichste Zahl (most probable number, MPN) zu bestimmen. Ergebnisse ggf. mit dem
Verdünnungsfaktor multiplizieren, um die endgültige MPN zu erhalten.

A B C D E

Ergebnisauswertung
Aussehen Ergebnis

Braunfärbung jeder Art, stärker als die Negativkontrolle (mit oder ohne Trübung) Positiv für Legionella pneumophila

Trübung jeder Art, stärker als die Negativkontrolle (mit oder ohne Braunfärbung) Positiv für Legionella pneumophila

Keine Braunfärbung und keine Trübung, stärker als die Negativkontrolle Negativ für Legionella pneumophila

• Legiolert-Ergebnisse sind nach 7 Tagen definitiv. Darüber hinaus sind auch positive Ergebnisse gültig, die vor dem Ablauf von 7 Tagen beobachtet werden,
sowie negative Ergebnisse, die nach dem Ablauf von 7 Tagen beobachtet werden.
• Eine Trübung allein weist auf das Wachstum von Legionella pneumophila hin, wenn sich der Indikator unter Umständen nicht so schnell oder stark entwickelt.
Verfahrenshinweise
• Zu Vergleichszwecken kann bei der Auswertung der Ergebnisse eine inkubierte Blindprobe mit sterilem Verdünnungsmittel und Legiolert-Reagenz (Negativkontrolle)
verwendet werden.
• Legiolert ist ein Primärwassertest. Die Leistungsmerkmale von Legiolert gelten nicht für Proben, die durch Voranreicherung oder Konzentration verändert wurden.
• Bei der Verwendung von Legiolert sind immer aseptische Arbeitstechniken anzuwenden. Die Materialien sind gemäß der Guten Laborpraxis zu entsorgen.
Qualitätskontrollverfahren
Hinweis: Für QK- und EP-Proben den obigen Abschnitt zum Quanti-Tray-Auszählverfahren beachten.
1. Eines der folgenden Qualitätskontrollverfahren wird für jede Legiolert-Charge empfohlen:
A. IDEXX-QC Legionella pneumophila4: Legionella pneumophila, Enterococcus faecalis.
B. Für jeden American Type Culture Collection (ATCC)5- oder World Data Centre for Microorganisms (WDCM)6-Bakterienstamm:
i. Zielorganismen: Legionella pneumophila ATCC 33152/WDCM 00107 und/oder ATCC 33156/WDCM 00180; die Kultur auf BCYE streichen und
48–72 Stunden lang bei 35°C inkubieren.
ii. Nicht-Zielorganismus: Enterococcus faecalis ATCC 29212/WDCM 00087; auf eine Blutagarplatte streichen und 18–24 Stunden lang bei 35°C inkubieren.
iii. Für jeden Bakterienstamm ein gekennzeichnetes steriles Gefäß mit 100 ml sterilem Verdünnungsmittel mit 102 bis 103 KbE für Zielorganismen oder 103 bis
104 KbE für Nicht-Zielorganismen inokulieren.
2. Das oben beschriebene Quanti-Tray-Auszählverfahren befolgen.
3. Die Ergebnisse sollten mit der Tabelle zur Ergebnisauswertung (siehe oben) übereinstimmen.
Hinweis: Die internen Qualitätskontrollprüfungen von IDEXX werden im Einklang mit ISO 11133:2014 durchgeführt. Qualitätskontrollzertifikate sind unter idexx.com/water erhältlich.
1. Das Protokoll für die Trinkwasserprobe von 100 ml und das Protokoll für die Brauchwasserprobe von 1.0 ml sind in Nordamerika nicht offiziell bestätigt worden.
2. Legiolert Ergänzungsmittel-Kit, WLGT-SUP, 98-0005745-00
3. Legiolert Vorbehandlung, WLGT-PRE, 98-0007740-00
4. IDEXX-QC Legionella pneumophila, UN3373-WQC-LP, 98-0009287-00
5. ATCC American Type Culture Collection 1-800-638-6597 • atcc.org
6. WDCM World Data Centre for Microorganisms • wdcm.org
*Legiolert und Quanti-Tray sind Marken oder eingetragene Marken der IDEXX Laboratories Inc. oder ihrer angeschlossenen Unternehmen in den Vereinigten Staaten und/oder in anderen Ländern.
Patentinformationen: idexx.com/patents.
© 2017 IDEXX Laboratories, Inc. Alle Rechte vorbehalten.
Kit para la prueba Legiolert*
Kit para la prueba Legiolert*
Legiolert es una prueba que detecta la Legionella pneumophila en muestras de agua. Esta prueba se basa en tecnología de detección de enzimas bacterianas que señala la presencia de
Legionella pneumophila mediante la utilización de un sustrato presente en el reactivo de Legiolert. Las células de Legionella pneumophila crecen y se multiplican con rapidez debido al
gran aporte de aminoácidos, vitaminas y otros nutrientes en el reactivo de Legiolert. Las cepas de Legionella pneumophila en crecimiento activo utilizan el sustrato añadido para producir
un indicador de color marrón. Legiolert detecta Legionella pneumophila en un organismo en 100 ml en 7 días.
Almacenamiento
Conservar a una temperatura de entre 2–25°C, lejos de la luz directa y la humedad.
Preparación de muestras de agua potable
10 ml Protocolo 100 ml Protocolo1
1. Añada 90 ml de diluyente estéril (p. ej., agua sin cloro, agua desionizada, tampón 1. Recoja 100 ml de muestra en un recipiente estéril.
de fosfato, tampón de Butterfield o 0,1% de peptona) en un recipiente estéril. 2. Lleve la muestra a temperatura ambiente.
2. Añada la muestra de agua de 10 ml. 3. Utilizando una tira reactiva para la dureza (suministrada como parte del kit del
3. Lleve la muestra a temperatura ambiente. suplemento Legiolert2), siga las instrucciones del fabricante para determinar si la
4. Añada el contenido del paquete del blíster de Legiolert a la muestra.A, B muestra es de baja o alta dureza. Considere un resultado positivo (≤7 CaCO3 [°d])
5. Agite hasta que se disuelva el contenido. La muestra puede permanecer turbia. en 0-2 almohadillas como baja dureza, y un resultado positivo (>14 CaCO3 [°d])
en 3-4 almohadillas como alta dureza.
4. Añada el suplemento correspondiente (suministrado como parte del kit de suplemento)
según se indica a continuación: Agite brevemente el recipiente del suplemento justo
antes de usarlo; después, para muestras de dureza baja añada 0,33 ml y para muestras
de dureza alta añada 1,0 ml.
5. Añada el contenido del paquete del blíster de Legiolert a la muestra.A, B
6. Agite hasta que se disuelva el contenido. La muestra puede permanecer turbia.
Preparación de muestras de agua no potable
0.1 ml Protocolo 1,0 ml Protocolo1
1. Añada 100 ml de diluyente estéril (p. ej., agua sin cloro, agua desionizada, tampón 1. Añada 100 ml de diluyente estéril (p. ej., agua sin cloro, agua desionizada, tampón de
de fosfato, tampón de Butterfield o 0,1% de peptona) en un recipiente estéril. fosfato, tampón de Butterfield o 0,1% de peptona) en un recipiente estéril.
2. Añada el contenido del paquete del blíster de Legiolert al recipiente.A, B 2. Añada el contenido del paquete del blíster de Legiolert al recipiente.A, B
3. Agite hasta que se disuelva el contenido. La solución puede mantenerse turbia. 3. Agite hasta que se disuelva el contenido. La solución puede mantenerse turbia.
4. Añada 0,2 ml de Pretratamiento Legiolert en un microtubo estéril.3 4. Añada 2,0 ml de Pretratamiento Legiolert en un tubo estéril.3
5. Añada 0,2 ml de la muestra de agua no potable en el mismo microtubo y mezcle bien. 5. Añada 2,0 ml de la muestra de agua no potable en el mismo tubo y mezcle bien.
6. Incube el microtubo a temperatura ambiente durante 60 segundos (±5 segundos). 6. Incube el tubo a temperatura ambiente durante 60 segundos (±5 segundos).
7. Mezcle el contenido del microtubo y transfiera inmediatamente 0,2 ml al recipiente 7. Mezcle el contenido del tubo y transfiera inmediatamente 2,0 ml al recipiente que
que contiene Legiolert y mezcle bien. contiene Legiolert y mezcle bien.

Procedimiento de enumeración de Quanti-Tray*

Solamente para muestras de control de calidad (Quality Control, QC) y de prueba de aptitud (Proficiency Test, PT):
1. Añada el contenido del paquete del blíster de Legiolert a la muestra.A,B
2. Agite hasta que se disuelva el contenido. La muestra puede permanecer turbia.
Para todas las muestras de prueba:
3. Vierta la mezcla de la muestra/el reactivo en una bandeja de Quanti-Tray/Legiolert.C Golpee o palmee la bandeja para eliminar las burbujas de aire.D
4. Selle inmediatamente la bandeja en un sellador IDEXX Quanti-Tray Sealer PLUS.
5. Incube las bandejas selladas:
i. Para todas las muestras de agua potable o QC y PT, incube a 39±0,5°C durante 7 días.
ii. Para las muestras de agua no potable, incube a 37±0,5°C durante 7 días.
6. Quanti-Tray/Legiolert debe incubarse con el lado del papel hacia abajo y los pocillos hacia arriba en un ambiente humidificado (aproximadamente 85% humedad).
Apile las bandejas en direcciones alternas para una mayor estabilidad.E No apile más de 10 bandejas.
7. Lea los resultados de acuerdo con la tabla de interpretación de resultados que aparece a continuación. Cuente el número de pocillos positivos y consulte la tabla de NMP de
Legiolert que se proporciona con las bandejas para obtener un número más probable. Multiplique los resultados por el factor de dilución para hallar el NMP final, si procede.

A B C D E

Interpretación del resultado

Aspecto Resultados

Cualquier coloración marrón superior al control negativo (con o sin turbiedad) Positivo para Legionella pneumophila

Cualquier turbiedad superior al control negativo (con o sin cualquier cambio en la coloración marrón) Positivo para Legionella pneumophila

Sin cambios en la coloración marrón y sin turbiedad superiores al control negativo Negativo para Legionella pneumophila

• Los resultados de Legiolert son definitivos en 7 días. Además, los positivos observados antes de 7 días y los negativos observados después de 7 días también son válidos.
• La turbiedad por sí sola indica crecimiento de Legionella pneumophila cuando el indicador no puede desarrollarse de una manera tan rápida o intensa.

Notas del procedimiento

• Para las comparaciones, puede utilizarse diluyente estéril incubado blanco que contenga reactivo Legiolert (control negativo) al interpretar los resultados.
• Legiolert es una prueba primaria de agua. Las características del rendimiento de Legiolert no se aplican a las muestras alteradas mediante enriquecimiento previo o concentración.
• Siempre deben seguirse técnicas asépticas al utilizar Legiolert. Deseche los materiales de acuerdo con las buenas prácticas de laboratorio.

Procedimientos de control de calidad

Nota: Para las muestras de QC y PT, utilice la sección de Enumeración de Quanti-Tray anterior.
1. Se recomienda utilizar uno de los siguientes procedimientos de control de calidad para cada lote de Legiolert:
A. IDEXX-QC Legionella pneumophila4: Legionella pneumophila, Enterococcus faecalis.
B. Para cepas bacterianas según la Colección de Cultivos Tipo Estadounidense (American Type Culture Collection, ATCC)5 o el Centro Mundial de Datos sobre Microorganismos
(World Data Centre for Microorganisms, WDCM)6:
i. Organismos diana: Legionella pneumophila ATCC 33152/WDCM 00107 y/o ATCC 33156/WDCM 00180; extienda el cultivo en agar BCYE e incube a 35°C durante
entre 48 y 72 horas.
ii. Organismo no diana: Enterococcus faecalis ATCC 29212/WDCM 00087; extienda en una placa de agar sangre e incube a 35°C durante entre 18 y 24 horas.
iii. Para cada cepa bacteriana, inocule un recipiente estéril etiquetado que contenga 100 ml de diluyente estéril con entre 102 y 103 UFC para organismos diana o
entre 103 y 104 UFC para organismos no diana.
2. Siga el procedimiento de enumeración Quanti-Tray mencionado anteriormente.
3. Los resultados deben coincidir con los de la tabla de interpretación de resultados anterior.
Nota: Las pruebas de control de calidad interna de IDEXX se realizan según la ISO 11133:2014.
Los certificados de control de calidad se encuentran disponibles en idexx.com/water.
1. El protocolo de la muestra de 100 ml de agua potable y el protocolo de la muestra de 1.0 ml de agua no potable no han sido validados en América del Norte.
2. Kit de suplemento Legiolert, WLGT-SUP, 98-0005745-00
3. Pretratamiento Legiolert, WLGT-PRE, 98-0007740-00
4. IDEXX-QC Legionella pneumophila, UN3373-WQC-LP, 98-0009287-00
5. Colección de Cultivos Tipo Estadounidense (American Type Culture Collection, ATCC) 1-800-638-6597 • atcc.org
6. Centro Mundial de Datos sobre Microorganismos (World Data Centre for Microorganisms, WDCM) • wdcm.org
*Legiolert y Quanti-Tray son marcas comerciales o marcas comerciales registradas de IDEXX Laboratories, Inc. o sus empresas filiales en Estados Unidos y/o en otros países.
Información de la patente: idexx.com/patents.
© 2017 IDEXX Laboratories, Inc. Todos los derechos reservados.
Kit de ensaio Legiolert*
Introdução
Legiolert é um ensaio que detecta a Legionella pneumophila em amostras de água. Esse ensaio é baseado na tecnologia de detecção de enzimas bacterianas que sinalizam a presença da
Legionella pneumophila através da utilização de um substrato presente no reagente do Legiolert. As células da Legionella pneumophila crescem rapidamente e se reproduzem usando o
suprimento rico em aminoácidos, vitaminas e outros nutrientes presentes no reagente do Legiolert. Cepas da Legionella pneumophila em crescimento ativo usam o substrato adicionado
para produzir um indicador de cor marrom. O Legiolert detecta a Legionella pneumophila em 1 organismo com uma amostra de 100 ml de até 7 dias.
Armazenamento
Armazene entre 2–25°C, longe da luz e da umidade direta.
Preparação de amostra de água potável
10 ml Protocolo 100 ml Protocolo1
1. Adicione 90 ml de diluente estéril (p. ex., água desclorada, água deionizada, 1. Colete 100 ml de amostra em um recipiente estéril.
tampão fosfato, tampão de Butterfield ou peptona a 0,1%) em um recipiente estéril. 2. Mantenha a amostra em temperatura ambiente.
2. Adicione 10 ml de amostra de água. 3. Usando uma tira de teste de dureza (fornecida como parte do kit de suplemento
3. Mantenha a amostra em temperatura ambiente. Legiolert2), siga as instruções do fabricante para determinar se a sua amostra possui
4. Adicione o conteúdo das cartelas Legiolert à amostra.A, B dureza baixa ou alta. Considere 0-2 pads positivos (≤7 CaCO3 (°d)) como dureza baixa
5. Agite até que o conteúdo se dissolva. A amostra pode ficar turva. e 3-4 pads positivos (>14 CaCO3 (°d)) como dureza alta.
4. Adicione o suplemento correspondente (fornecido como parte do kit de suplemento)
como segue: Agite rapidamente o recipiente do suplemento imediatamente antes de
usá-lo; em seguida, para as amostras de dureza baixa adicione 0,33 ml, e para as
amostras de dureza alta adicione 1,0 ml.
5. Adicione o conteúdo das cartelas Legiolert à amostra.A, B
6. Agite até que o conteúdo se dissolva. A amostra pode ficar turva.
Preparação de amostra de água não potável
0.1 ml Protocolo 1.0 ml Protocolo1
1. Adicione 100 ml de diluente estéril (p. ex., água desclorada, água deionizada, tampão 1. Adicione 100 ml de diluente estéril (p. ex., água desclorada, água deionizada, tampão
fosfato, tampão de Butterfield ou peptona a 0,1%) em um recipiente estéril. fosfato, tampão de Butterfield ou peptona a 0,1%) em um recipiente estéril.
2. Adicione o conteúdo das cartelas Legiolert à amostra.A, B 2. Adicione o conteúdo das cartelas Legiolert à amostra.A, B
3. Agite até que o conteúdo se dissolva. A solução pode permanecer turva. 3. Agite até que o conteúdo se dissolva. A solução pode permanecer turva.
4. Adicione 0,2 ml de Pré-tratamento Legiolert em um microtubo estéril.3 4. Adicione 2,0 ml de Pré-tratamento Legiolert em um tubo estéril.3
5. Adicione 0,2 ml da amostra de água não potável ao mesmo microtubo e misture bem. 5. Adicione 2,0 ml da amostra de água não potável ao mesmo tubo e misture bem.
6. Incube o microtubo em temperatura ambiente por 60 segundos (±5 segundos). 6. Incube o tubo em temperatura ambiente por 60 segundos (±5 segundos).
7. Misture o conteúdo do microtubo, transfira imediatamente 0,2 ml do mesmo para o 7. Misture o conteúdo do tubo, transfira imediatamente 2,0 ml do mesmo para o recipiente
recipiente contendo Legiolert e misture bem. contendo Legiolert e misture bem.

Procedimento de enumeração do Quanti-Tray*

Apenas para amostras de controle de qualidade (CQ) e teste de proficiência (TP):
1. Adicione o conteúdo das cartelas Legiolert à amostra.A,B
2. Agite até que o conteúdo se dissolva. A amostra pode ficar turva.
Para todas as amostras de teste:
3. Pingue a mistura da amostra/reagente em uma placa Quanti-Tray/Legiolert.C Bata levemente a cartela para retirar as bolhas de ar.D
4. Sele a cartela imediatamente em uma seladora IDEXX Quanti-Tray Sealer PLUS.
5. Incube as cartelas seladas:
i. Para todas as amostras de água potável ou amostras de CQ e TP, incube a 39±0,5°C por 7 dias.
ii. Para todas as amostras de água não potável, incube a 37±0,5°C por 7 dias.
6. O Quanti-Tray/Legiolert deve ser incubado com o lado de papel voltado para baixo e com as cavidades para cima, em um ambiente umidificado (aproximadamente 85% de umidade).
Empilhe as cartelas em sentidos alternados para aumentar a estabilidade.E Não empilhe mais do que 10 cartelas.
7. Leia os resultados de acordo com a Tabela de interpretação de resultados abaixo. Conte o número de cavidades positivas e consulte a Tabela MPN Legiolert fornecida juntamente às
cartelas para obter o número mais provável. Multiplique os resultados pelo fator de diluição para obter o MPN final, se aplicável.

A B C D E

Interpretação dos resultados

Aparência Resultados

Qualquer cor marrom, maior do que o controle negativo (com ou sem turbidez) Positivo para Legionella pneumophila

Qualquer cor marrom, maior do que o controle negativo (com ou sem turbidez) Positivo para Legionella pneumophila

Sem alteração de cor marrom e sem turbidez, maior do que o controle negativo Negativo para Legionella pneumophila

• Os resultados do Legiolert são definitivos em 7 dias. Além disso, positivos observados antes de 7 dias e negativos observados após 7 dias também são válidos.
• Turbidez isolada pode indicar crescimento de Legionella pneumophila em situações em que o indicador não se desenvolve tão rápida ou fortemente.

Observações procedimentais
• Como forma de comparação, pode-se usar um controle de diluente estéril incubado contendo reagente Legiolert (controle negativo) para a interpretação dos resultados.
• Legiolert é um ensaio baseado primordialmente em água. As características de desempenho do Legiolert não se aplicam a amostras alteradas por pré-enriquecimento ou concentração.
• Deve-se usar sempre técnicas assépticas ao usar o Legiolert. Descarte de materiais de acordo com as Boas práticas de laboratório.
Procedimentos de controle de qualidade
Observação: Para amostras de CQ e TP, use a seção de enumeração do Quanti-Tray acima.
1. Recomenda-se um dos seguintes procedimentos de controle de qualidade para cada lote de Legiolert:
A. IDEXX-QC Legionella pneumophila4: Legionella pneumophila, Enterococcus faecalis.
B. Para cada cepa bacteriana de Coleta de cultura do tipo americano (American Type Culture Collection, ATCC)5 ou do Centro mundial de dados de microrganismos (World Data
Centre for Microorganisms, WDCM)6:
i. Organismos-alvo: Legionella pneumophila ATCC 33152/WDCM 00107 e/ou ATCC 33156/WDCM 00180; espalhe a cultura em ágar de extrato de leveduras com carvão
tamponado (Buffered Charcoal Yeast Extract, BCYE) e incube a 35°C por 48–72 horas.
ii. Organismo não classificado como alvo: Enterococcus faecalis ATCC 29212/WDCM 00087; espalhe a cultura na lâmina de ágar-sangue e incube a 35°C por 18–24 horas.
iii. Para cada cepa bacteriana, inocule um recipiente estéril e rotulado contendo 100 ml de diluente estéril com 102 a 103 cfu para organismos-alvo ou 103 a 104 cfu para
organismos não classificados como alvo.
2. Siga o Procedimento de enumeração do Quanti-Tray acima.
3. Os resultados devem coincidir com a Tabela de interpretação de resultados acima.
Observação: o teste de controle de qualidade interno da IDEXX é realizado de acordo com a norma ISO 11133:2014.
Os certificados de controle de qualidade estão disponíveis no idexx.com/water.

1. O protocolo de amostra para 100 ml de água potável e o protocolo de amostra para 1.0 ml de água não potável não foram validados na América do Norte.
2. Kit de suplemento Legiolert, WLGT-SUP, 98-0005745-00
3. Pré-tratamento Legiolert, WLGT-PRE, 98-0007740-00
4. IDEXX-QC Legionella pneumophila, UN3373-WQC-LP, 98-0009287-00
5. Coleta de cultura do tipo americano (American Type Culture Collection, ATCC) 1-800-638-6597 • atcc.org
6. Centro mundial de dados para microrganismos (World Data Centre for Microorganisms, WDCM) • wdcm.org
*Legiolert e Quanti-Tray são marcas registradas ou marcas comerciais da IDEXX Laboratories, Inc. ou suas afiliadas nos Estados Unidos e/ou em outros países.
Informações sobre patente: idexx.com/patents.
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