Life Science 8 (1) (2019)

Life Science

http://journal.unnes.ac.id/sju/index.php/LifeSci

Pertumbuhan Kalus Rejasa (Elaeocarpus grandiflorus) dari Eksplan Tangkai Daun

pada Kondisi Gelap
Nur Wijawati, Noor Aini Habibah, Fajar Musafa, Khoirul Mukhtar, Y. Ulung Anggraito, dan
Talitha Widiatningrum
Laboratorium Kultur Jaringan, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Semarang

Info Artikel Abstract

Diterima: 1 Maret 2019 Rejasa (Elaeocarpus grandiflorus) is a Salatiga identity plant which is now rarely found. Rejasa produces
Disetujui: 30 Maret 2019 secondary metabolites that have the potential as drugs. This study tested the growth of rejasa callus in the
Dipublikasikan: 25 April medium with the addition of various types and concentrations of growth regulators. The independent variables
2019 used were the type and concentration of growth regulators (2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) with
Keywords: concentrations of 1.5; 2.5 and 3.5 ppm and Picloram with a concentration of 3.5; 5; and 7.5 ppm). The
2,4-dichlorophenoxyacetic dependent variable in this study was the growth of callus regeneration (percentage of callus growth, time of
acid, callus, dark condition, callus formation and morphology of callus) observed for five months in dark conditions. Explants used were
young petiolus and the medium used in this study was medium Murashige and Skoog (MS). The results showed
Elaeocarpus grandiflorus, the lowest percentage of callus induction was found in explants with the addition of Picloram growth regulators
petiolus, picloram, kondisi with a concentration of 7.5 ppm (14%). Explants maintained in the medium with the addition of Picloram
gelap, kalus, pikloram, with a concentration of 5 ppm resulted in the highest percentage of callus induction. The time of callus induction
tangkai muda.. is in the range of 10-22 days. The explants with the addition of Picloram growth regulator substances with a
concentration of 5 ppm had the best callus induction time, which was 12 days. Most of the callus formed was
friable and yellowish. Based on the results of this research, the best medium for callus induction of rejasa in
dark conditions was medium with the addition of 5 ppm Picloram.

Abstrak

Rejasa (Elaeocarpus grandiflorus) adalah tanaman identitas Salatiga yang mulai jarang ditemukan.
Pertumbuhan populasinya memiliki perkembangan yang lambat. Perkembangan generatif melalui
perkecambahan biji terjadi dalam tingkat yang sangat rendah. Dalam kelangkaannya, rejasa
memiliki khasiat sebagai tanaman obat melalui metabolit sekunder yang dihasilkan. Penelitian ini
menguji pertumbuhan kalus rejasa dalam variasi jenis dan konsentrasi zat pengatur tumbuh.
Variabel bebas yang digunakan adalah jenis dan konsentrasi zat pengatur tumbuh (2,4-
dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) dengan konsentrasi 1,5; 2,5; dan 3,5 ppm serta pikloram dengan
konsentrasi 3,5; 5; dan 7,5 ppm). Variabel terikat dalam penelitian ini adalah pertumbuhan kalus
rejasa (persentase tumbuh kalus, waktu berkalus, dan morfologi kalus) dalam medium yang
diamati selama 5 bulan. Eksplan yang digunakan adalah tangkai muda yang ditanam dalam
medium agar Murashige & Skoog dengan penambahan zat pengatur tumbuh 2,4-D dan pikloram
dalam berbagai konsentrasi dan dipelihara dalam kondisi gelap. Hasil penelitian menunjukkan
persentase induksi kalus paling rendah terdapat pada eksplan dengan penambahan zat pengatur
tumbuh pikloram dengan konsentrasi 7,5 ppm (14%). Eksplan yang dipelihara pada medium
dengan penambahan pikloram konsentrasi 5 ppm memghasilkan persentasi induksi kalus tertinggi.
Waktu induksi kalus berada dalam rentang 10-22 hari. Eksplan dengan penambahan zat pengatur
tumbuh pikloram konsentrasi 5 ppm memiliki rerata waktu induksi kalus paling baik yaitu 12 hari.
Kalus yang terbentuk dominan berwarna kekuningan dengan jenis meremah. Berdasarkan hasil
penelitiaan, medium yang paling baik untuk induksi kalus dalam kondisi gelap adalah medium MS
dengan penambahan zat pengatur tumbuh pikloram konsentrasi 5 ppm

© 2019 Universitas Negeri Semarang


Alamat korespondensi:
p-ISSN 2252-6277
e-ISSN 2528-5009
Gedung D11 FMIPA Universitas Negeri Semarang
E-mail: [email protected]

17
 Nur Wijayanti dkk. / Life Science 8 (1) 2019

PENDAHULUAN

Indonesia memiliki kelimpahan sumber daya hayati yang tersebar di seluruh wilayahnya,
namun penurunan jumlah terus terjadi. Sebagai optimalisasi konservasi sumber tanaman biologi, setiap
kota menetapkan satu spesies tanaman sebagai identitas di daerah mereka masing-masing (Rahayu et al.,
2017). Tanaman rejasa (Elaeocarpus grandiflorus) merupakan tanaman identitas kota Salatiga yang
memiliki ukuran populasi yang kecil. Di Indonesia dan Malaysia, kulit batang dan daun digunakan
sebagai tapel dan ekstraknya diminum sebagai tonik (obat yang menguatkankan dan merangsang selera
makan, di Jawa digunakan untuk mengatasi sariawan. Di Sumatera, infusa dari parutan kulit kayu
diminum untuk demam, dan remukan daun muda, dioleskan di dahi untuk mengobati sakit kepala. Kayu
digunakan untuk kontstruksi interior ringan dan kayu triplek/lapis. Cocok untuk membuat papan
partikel, papan serat dan bubur kertas. Selain itu dimanfaatkan juga untuk reboisasi dan tanaman hias
serta sarana upacara agama Hindu (Siswoyo, 2012).
Rejasa merupakan tumbuhan liar dan banyak ditemukan di alam. Tanaman ini dapat digunakan
sebagai tanaman obat karena mengandung metabolit sekunder yang berfungsi dalam membantu
penyembuhan beberapa penyakit. Kandungan metabolit sekunder yang telah berhasil diisolasi terdiri dari
kelompok fenolik, terpenoid, dan alkaloid (Sagala, 2018). Hampir semua bagian/organ rejasa
mengandung senyawa bioaktif. Dalam daun rejasa telah berhasil diisolasi tannin, geraniin, dan 3,4,5-
trimethoxy geraniin (Shah et al., 2011). Ditemukan pula saponin, flavonoid, polifenol, dan tannin pada
daunnya (Vickery & Vickery, 1981); buah mengandung saponin, flavonoid, dan tannin; sedangkan kulit
batang mengandung saponin, flavonoid, dan polifenol. Kemudian, ditemukan pula senyawa golongan
alkaloid, tannin galat dan sedikit flavonoid dari ekstrak serbuk rejasa (Sagala, 2018).
Berdasarkan survei terdahulu pada awal tahun 2016, tanaman rejasa ini merupakan tanaman
identitas Salatiga yang selain belum diketahui banyak orang, juga memiliki ukuran populasi terkecil dari
yang lainnya (Rahayu et al., 2017). Berdasar penelitian Rahayu et al. (2017), jumlah populasi rejasa hanya
20-30 pohon di seluruh wilayah Salatiga dan Tegal dengan perbanyakan generatif melalui perkecambahan
biji terjadi dalam tingkat yang sangat rendah. Penelitian tentang tanaman ini masih sangat jarang
dilaporkan (Habibah et al., 2018).
Keberhasilan dari suatu teknik kultur jaringan bergantung pada penggunan zat pengatur tumbuh
(ZPT). Kombinasi antara media dasar dan ZPT akan mengoptimalkan pertumbuhan eksplan, ZPT dapat
merangsang ataupun menghambat proses fisiologis tanaman. Zat pengatur tumbuh eksogen yang
digunakan pada teknik kultur jaringan adalah auksin dan sitokinin. Efisiensi auksin dan sitokinin dalam
induksi kalus tertgantung pada usia sumber eksplan dan jenis organ yang digunakan sebagai eksplan
(Wilson et al., 1971). Induksi kalus merupakan tahapan penting dalam hibridisasi somatik melalui fusi
protoplas untuk menghasilkan tanaman hibrida serta pembentukan embrio dalam embriogenesis somatik
(Waryastuti et al., 2017).
Karakteristik pada setiap kalus berbeda-beda, terdapat kalus dengan tekstur lembut (soft), dan
remah (friable), keras dan kompak (Thomas & Davey, 1975). Karekteristik kalus sendiri tergantung pada

18
 Nur Wijayanti dkk. / Life Science 8 (1) 2019

komposisi media pengulturan, khususnya zat pengatur tumbuh, dan jenis eksplan. Sehingga dari induksi
kalus yang dilakukan melalui kultur jaringan inilah nantinya akan didapatkan metabolit sekunder
(Sugiyarto & Kuswandi, 2014).
Potensi pelestarian tanaman rejasa dapat dilakukan dengan mengkultur guna menemukan
formulasi optimal pertumbuhan kalus rejasa. Penelitian dalam keadaan terang telah dilakukan. Untuk
itu, penelitian dengan menggunakan kondisi gelap dilakukan guna mengetahui konsentrasi optimal zat
pengatur tumbuh dalam pertumbuhan kalus tangkai rejasa.

METODE

Tanaman
Eksplan tangkai rejasa diperoleh dari bibit berumur 2 tahun yang terdapat pada Rumah Kaca
Universitas Negeri Semarang. Tangkai rejasa yang digunakan merupakan tangkai muda nomor 3-5 dari
pucuk. Variabel bebas yang digunakan adalah jenis dan konsentrasi zat pengatur tumbuh. Dua tipe
auksin yang digunakan adalah 2,4-D dengan konsentrasi 1,5; 2,5; dan 3,5 ppm, serta pikloram dengan
konsentrasi 3,5; 5; dan 7,5 ppm. Variabel terikat yang ada antara lain persentase eksplan yang tumbuh,
waktu inisiasi kalus, dan morfologi kalus. Variabel kontrol: pH medium, temperatur ruang penanaman
dan tempat inkubasi: 23-25˚C
Sterilisasi Permukaan pada Eksplan
Tangkai muda disterilisasi dengan mencuci pada air mengalir dan dilanjutkan dengan
perendaman menggunakan fungisida dan bakterisida selama 30 menit. Setelah itu, tangkai dibilas dengan
air steril. Tangkai muda tersebut disterilisasi permukaan dengan Clorox 20% selama 10 menit di dalam
laminar air flow diikuti dengan pembilasan taangkai muda dengan air steril kembali.
Induksi Kalus
Medium yang digunakan sebagai induksi kalus adalah medium MS (Murashige and Skoog,
1962) untuk pertumbuhan eksplan. Pengatur tumbuh tanaman 2,4-D dan pikloram digunakan sebagai
penginduksi kalus. Eksplan steril yang sudah dibilas kemudian dikultur ke dalam medium yang telah
disiapkan dengan ukuran pemotongan eksplan sepanjang 2 cm. Botol kultur berisi eksplan dibungkus
kertas wrap dan disimpan dalam ruang inkubasi dengan suhu 24-25˚C. Kultur dipelihara selama lima
bulan. Pemantauan dilakukan untuk melihat pertumbuhan kalus dan morfologi yang terbentuk.
Persentase eksplan yang terbentuk, kecepatan pembentukan kalus, dan morfologi kalus dicatat sebagai
data.
Analisis Data dan Uji Statistik
Analisis varian dihitung pada persentase pertumbuhan kalus dan kecepatan pertumbuhan kalus.
Perhitungan menggunakan analisis anova dua jalur dengan taraf kesalahan 0.05% dari tiga pengulangan.
Data dianalisis dengan sistem SPSS.

19
 Nur Wijayanti dkk. / Life Science 8 (1) 2019

HASIL DAN PEMBAHASAN

Persentase Pertumbuhan Kalus dan Waktu Inisiasi Kalus

Perlakuan yang diuji menghasilkan rerata persentase tertinggi eksplan yang tumbuh kalus yaitu
pada perlakuan pikloram 5 ppm (63%) (Tabel 1). Persentase tersebut tidak berbeda jauh dengan pikloram
3,5 ppm yang memiliki persentase pertumbuhan kalus 62,5%. Hasil konsentrasi lain tidak memiliki jarak
cukup jauh dengan interaksi eksplan 2,4-D 1,5 ppm sebesar 60%; 2,4-D 3,5 ppm sebesar 55%; dan 2,4-D
2,5 ppm sebesar 50%. Dapat dilihat pada Gambar 1 bahwa persentase pertumbuhan kalus terendah
dihasilkan oleh perlakuan pikloram 7,5 ppm dengan persentase 14%. Eksplan yang mengalami
pertumbuhan kalus ditandai dengan munculnya jaringan kecil berwarna terang pada tangkai muda
eksplan. Perlakuan 2,4-D menghasilkan daya hidup yang tinggi karena auksin endogen yang terdapat
pada jaringan eksplan dapat berpengaruh dan menyebabkan sel terus aktif membelah (Waryastuti et al.,
2017).
Eksplan yang mati ditandai dengan pencoklatan dan gosong pada permukaanya. Perlakuan
dengan tingkat kematian lebih tinggi adalah pikloram 7,5 ppm. Perlakuan sebelumnya dengan pikloram
3,5 ppm, serta 5 ppm memiliki nilai tumbuh kalus yang relatif tinggi di atas 60% (berturut-turut 62,5%
dan 63%) yang berbanding terbalik pada pikloram 7,5 ppm dengan persentase tumbuh kalus sebesar 14%
(Gambar 2). Hal ini karena terjadi banyak kontaminasi jamur pada eksplan tangkai muda rejasa pada
perlakuan pikloram 7,5 ppm dengan tingkat kematian sebesar 86% (Tabel 2).
Waktu Inisiasi Kalus
Munculnya kalus pada eksplan ditandai dengan pembengkakan atau munculnya jaringan
berwarna putih bening seperti titik-titik air/lendir pada bekas irisan eksplan dan sayatan di permukaan
tangkai eksplan yang kemudian berkembang menjadi bulatan-bulatan kecil yang jelas dan agregat kalus.
Pemberian zat pengatur tumbuh 2,4-D dan pikloram pada eksplan memberikan variasi waktu inisiasi
yang nyata terhadap kalus.
Perlakuan pikloram 5 ppm menghasilkan rerata waktu inisiasi kalus paling cepat dengan waktu
selama 12 HIS (Tabel 1). Perlakuan dengan penambahan pikloram 7,5 ppm tidak memiliki perbedaan
jauh dengan waktu inisiasi 13 HSI. Perlakuan 2,4-D 2,5 ppm dan 3,5 ppm yang memiliki perbedaan yang
tidak terlalu signifikan pada persentase tumbuh kalus, memiliki waktu inisiasi kalus yang sama dengan
rerata lama waktu 16,25 HSI. Disusul dengan perlakuan pikloram 3,5 ppm dan 2,4-D 1,5 ppm dengan
lama waktu berturut-turut 18 HSI dan 19 HSI. Perlakuan 2,4-D memiliki waktu inisiasi kalus paling lama
dengan 19 HSI.
Pada penelitian ini penggunaan pikloram lebih baik dibandingkan 2,4-D. Hal ini terlihat dari
rerata waktu inisiasi kalus dan pada dua perlakuan pikloram 3,5 ppm dan 5 ppm dengan persentase
tumbuh kalus tertinggi, mengabaikan pada kontaminasi pada pikloram 7,5 ppm. Pikloram memiliki
respon pembentukan kalus 0,21 kali lebih cepat dibandingkan 2,4-D, namun untuk rerata tumbuh kalus,
2,4-D memiliki persentase tumbuh kalus 15% lebih tinggi daripada pada perlakuan pikloram. Pemilihan
ZPT yang tepat dapat menentukan keberhasilan persentase tumbuh kalus dan waktu inisiasi kalus.

20
 Nur Wijayanti dkk. / Life Science 8 (1) 2019

Berdasarkan data pada Tabel 1 terlihat bahwa tangkai muda rejasa lebih responsif apabila dikultur pada
media pikloram 5 ppm dibandingkan yang lain. Rerata tumbuh kalus pada perlakuan pikloram 5 ppm
sebesar 63% dengan waktu inisiasi kalus 12 HSI.
Tabel 1. Waktu Inisiasi Kalus serta Persentase Tumbuh Kalus pada Berbagai ZPT dan Konsentrasi

ZPT dan konsentrasi Waktu inisiasi kalus (HSI) Persentase tumbuh kalus (%)
D1,5 19.5 60
D2,5 16.25 50
D3,5 16.25 55
P3,5 18 62.5
P5 12 63
P7,5 13 14
Keterangan: HSI = hari setelah inokulasi

Tabel 2. Persentase tangkai tumbuh kalus dan kalus mati pada berbagai ZPT dan konsentrasi pada
20 MSI
ZPT dan konsentrasi (ppm) Tangkai tumbuh kalus (%) Kalus mati (%)
D1,5 50 50
D2,5 33,3 66,7
D3,5 41,7 58,3
P3,5 41,7 58,3
P5 66,7 33,3
P7,5 8 92
Keterangan: MSI = minggu setelah inokulasi

Grafik Waktu Inisiasi Kalus dan Persentase Tumbuh

Kalus
70
60
50
Waktu inisiasi kalus
40
(HSI)
30
Persentase tumbuh
20 kalus (%)
10
0
D1,5 D2,5 D3,5 P3,5 P5 P7,5

Gambar 1. Grafik rerata waktu tumbuh kalus dan persentase tumbuh kalus selama 20 MSI

21
 Nur Wijayanti dkk. / Life Science 8 (1) 2019

Grafik Persentase Pertumbuhan Kalus dan

Kematian Kalus

persentase pertumbuhan/kematian kalus (%)

100%
90%
80%
70%
60%
50% Tangkai
40% tumbuh
kalus
30%
20%
10%
0%
D1,5 D2,5 D3,5 P3,5 P5 P7,5
Jenis medium dan konsentrasi ZPT
Gambar 2. Grafik rerata persentase pertumbuhan kalus dan kematian kalus selama 20 MSI

A B C

Gambar 3. Morfologi kalur rejasa (A) kalus yang tumbuh pada perlakuan Pikloram 3,5 ppm dengan kalus
meremah warna kekuningan (B) kalus yang tumbuh pada perlakuan 2,4-D 3,5 ppm dengan
kalus meremah warna putih (C) kalus yang tumbuh pada perlakuan pikloram 5 ppm dengan
kalus meremah warna hijau kekuningan.

Morfologi Kalus Rejasa

Berdasarkan tekstur dan komposisi selnya, kalus dapat dibedakan menjadi kalus yang kompak
dan remah. Kalus kompak mempunyai tekstur padat dan keras, yang tersusun dari sel-sel kecil yang
sangat rapat, sedangkan kalus remah mempunyai tekstur lunak dan tersusun dari sel-sel dengan ruang
antar sel yang banyak. Perbedaan struktur kalus menimbulkan adanya perbedaan kemampuan
memproduksi metabolit sekunder (Sugiyarta & Kuswandi, 2014). Struktur kalus dalam penelitian ini ada
dua jenis, yaitu remah dan kompak. Berdasarkan warna, kalus tangkai muda rejasa memiliki warna yang
berbeda-beda, yaitu putih, kuning, coklat, dan hitam. Warna kalus yang terbentuk rereta merupakan
kombinasi beberap warna dari keempat warna tersebut.
Penampakan kalus pada semua perlakuan, awalnya berwarna putih bening hingga 5 MSI,
kemudian memasuki 6 MSI warna kalus berubah warna menjadi kuning kecoklatan. Hal ini disebabkan
adanya metabolisme senyawa fenol yang berlebihan pada jaringan yang mulai terbentuk. Warna kalus
yang berwarna kekuningan terdapat pada hampir semua perlakuan yang terbentuk kalus dan sering
terangsang akibat sterilisasi eksplan (Indah & Ermavitalini, 2013). Penambahan ZPT dalam media kultur
akan merangsang pembelahan dan pembesaran sel pada eksplan sehingga dapat memacu pembentukan
22
 Nur Wijayanti dkk. / Life Science 8 (1) 2019

dan pertumbuhan kalus serta meningkatkan senyawa kimia alami flavonoid (Bekti et al., 2003). Hal
serupa juga disampaikan oleh (Pierik, 1987), yang menyatakan bahwa 2,4-D dapat menyebabkan
elongasi sel, pembengkakan jaringan, dan pembentukan kalus.
Penambahan pikloram sebagai ZPT memberi warna kekuningan dan tekstur meremah pada
hampir seluruh eksplan pada semua konsentrasi. Pada perlakuan pikloram 3,5 ppm tekstur kalus yang
dihasilkan meremah dengan warna kekuningan (Gambar 3a). Hal ini tidak jauh berbeda dengan
perlakuan pada kalus pikloram 5 ppm dengan tekstur meremah warna hijau kekuningan. Pertumbuhan
kalus yang dialami perlakuan pikloram 5 ppm mengalami pengembangan rerata sampai 3 kali lebih
banyak daripada perlakuan yang lainnya (Gambar 3c). Perlakuan pikloram 7,5 ppm juga memberi warna
kekuningan dengan tekstur meremah.
Pada penambahan 2,4-D sebagai ZPT, pembentukan kalus memiliki tektur meremah dan
kompak pada setiap konsentrasinya. Perlakuan 2,4-D 1,5 ppm didominasi tekstur kalus dengan tekstur
kompak dengan warna kuning kecoklatan. Tekstur meremah rerata berada pada perlakuan 2,4-D 2,5
ppm dan 3,5 ppm. Pada perlakuan 2,4-D 2,5 ppm dijumpai warna putih pada kalus, namun warna
tersebut tidak dominan (Gambar 3b). Dominasi warna kalus para perlakuan 2,4-D 2,5 ppm adalah
kuning kehitaman. Selanjutnya pada perlakuan 2,4-D 3,5 ppm rerata memiliki tekstur meremah dengan
warna kecoklatan. Berdasarkan data hasil penelitian, rerata kalus yang dihasilkan memiliki tekstur
meremah dengan warna kekuningan.

SIMPULAN

Kalus tangkai muda rejasa memberikan persentase tumbuh kalus (63%) dan waktu tumbuh
kalus (12 HSI) paling optimal pada perlakuan pikloram 5 ppm. Rerata waktu tumbuh kalus optimal
dengan penambahan zat pengatur tumbuh pikloram dibandingkan dengan 2,4-D. Kemudian,
pertumbuhan kalus memiliki tekstur meremah dengan warna kekuningan pada hampir setiap perlakuan.
Perlakuan dengan pikloram berbagai konsentrasi memberikan tekstur meremah dan warna kekuningan
pada keseluruhan kalus yang terbentuk.

DAFTAR PUSTAKA

Bekti, R., Solichatun, E. & Anggarwulan. (2003). Pengaruh 2,4-diklorofenoksiasetat (2,4-D) terhadap
pembentukan dan pertumbuhan kalus serta kandungan flavonoid kultur kalus Acalypha indica L.
Biofarmasi, 1(1), 1-6.
Habibah, N.A., Widiatningrum, T., Anggraito, Y.U., Rahayu, E.S., Mukhtar, K., Wijawati, N., Musafa,
F. (2018). Growth of Elaeocarpus grandiflorus callus cultures in MS medium with various
concentrations of growth regulators. International Conference on Mathematics, Science and Education
2018 (ICMSE2018). 984-1.
Indah, P.N. & Ermavitalini, D. (2013). Induksi kalus daun nyamplung (Calophyllum inophylum L.) pada
beberapa kombinasi konsentrasi 6-benzylaminopurine (BAP) dan 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-
D). Jurnal Sains dan Seni Pomits, 2(1), 23-37.
Pierik, R.M.L. (1987). In vitro culture of higher plants. Dordrecht, The Netherlands: Martinus Nijhoff
Publishers.

23
 Nur Wijayanti dkk. / Life Science 8 (1) 2019

Rahayu, E.S., Dewi, N.K. & Bodijantoro, F.P.M.H. (2017). Profile of Elaeocarpus grandiflorus and
Ziziphus mauritiana as identity plants of Salatiga and Tegal towns, Central Java Province,
Indonesia. International Conference on Mathematics, Science and Education 2017 (ICMSE2017). 983-1.
Sagala, D. (2018). Deskripsi, metabolit sekunder dan kegunaan anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus
J.E. Smith). INA-Rxiv. February 10. osf.io/preprints/inarxiv/3unv8.
Shah, G., Singh, P.S., Mann, A.S., Shri, R. (2011). Scientific basis for the chemical constituent and
therapeuticuse of Elaeocarpus species: A Review. International Journal of Institutional Pharmacy and
Life Sciences, 1(1), 267-278.
Siswoyo, P.D.M. (2012). Reintroduksi tanaman langka di Hutan Lindung Batukaru, Tabanan, Bali.
Udayana Mengabdi, 11(2), 80-85.
Sugiyarto, L. & Kuswandi, P.C. (2014). Induksi kalus daun binahong (Anredera cordifolia L.) dalam upaya
pengembangan tanaman obat tradisional. Jurnal Sains Dasar, 3(1), 55-60.
Thomas, E. & Davey, M.R. (1975). From Single Cell to Plant. London: Wykehan Publisher Ltd.
Vickery, M.L. & Vickery, B. (1981). Secondary plant metabolism. The Mac Milan Press.
[WARINTEK] Warung infornasi Teknologi Kementerian Riset dan Teknologi. 2014. Elaeocarpus
grandiflorus J.E. Smith. On line at <http://www.warintek.ristek.go.id/pangan_kesehatan/
tanaman_obat/depkes/3-011.pdf> [Diakses 20 Maret 2014].
Waryastuti, D.E., Setyobudi, L. & Wardiyati, T. (2017). Pengaruh tingkat konsentrasi 2,4-D dan BAP
pada media MS terhadap induksi kalus embrionik temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.). Jurnal
Produksi Tanaman, 5(1), 140-149.
Wilson, S.B., King, P.J. and Street, H.E. (1971). Studies on the growth in culture of plant cells. XII. A
versatile system for the large-scale batch or continuous culture of plant cell suspensions. Journal of
Experimental Botany, 22(70), 177-207.
Yelnititis. (2012). Pembentukan kalus remah dari eksplan daun ramin (Gonystylus bancanus (Miq) Kurz.)
[Friable callus induction from leaf explant of ramin (Gonystylus bancanus (Miq) Kurz.)]. Jurnal
Pemuliaan Tanaman Hutan, 6(3), 181-194.

24