SODIUM REAGENT

COLORIMETRIC METHOD

INTENDED USE
For the colorimetric determination of sodium in human serum and plasma.

INTRODUCTION supernatant fluids as described below, taking care not to disturb the protein 4. Precision Study:
Sodium is the major cation of the intracellular fluid. It plays a central role in the precipitate.
maintenance of the normal distribution of water and the osmotic pressure in the various Within Run
fluid compartments. The main source of body sodium is sodium chloride contained in COLOR DEVELOPMENT Mean (mEq/L) S. D. C. V.
ingested foods. Only about one-third of the total body’s sodium is contained in the skeleton 1. Label test tubes corresponding to the above Filtered tubes. % 146 7 5
since most of it is contained in the extracellular body fluids. 1, 2 2. Pipette 1.0 mL Acid Reagent to all tubes. 127 4 3
Hyponatremia (low serum sodium level) is found in a variety of conditions including the Run -Run
3. Add 50 µL of Supernatant to respective tubes and mix.
following: severe polyuria, metabolic acidosis, Addison’s disease, diarrhea, and renal Mean (mEq/L) S. D. C. V.
4. Add 50 µL of Color Reagent to all tubes and mix. % 148 5 4
tubular disease. Hyper-natremia (increased serum sodium level) is found in the following
conditions: hyperadrenalism, severe dehydration, and diabetic coma after therapy with 5. Zero spectrophotometer with distilled water at 550 nm. 139 14 10
6. Read and record absorbance of all tubes.
insulin, excess treatment with sodium salts.1, 2
REFERENCES
Note: The chemistry reaction of this procedure involves a reduction in absorbance, as 1. Tietz, N. W., Fundamentals of Clinical Chemistry , W. B. Saunders Co.,
PRINCIPLE
opposed to the usual absorbance increase. The absorbance of blank should be higher Philadelphia, PA, p. 874.
The present method is based on modifications of those first described by Maruna 3 and than the test samples.
Trinder4 in which sodium is precipitated as the triple salt, sodium magnesium uranyl
2. Henry, R.F. et al., Clinical Chemistry Principles and Techniques, 2nd Ed., Harper
and Row, Hagerstown, M. D., (1974).
acetate, with the excess uranium then being reacted with ferrocyanide, producing a CALCULATIONS
cromophore whose absorbance varies inversely as the concentration of sodium in the test Abs. = Absorbance 3. Maruna, RFL, Clin. Chem. Acta, 2:581, (1958). 4.
specimen. S = Sample Trinder, P: Analyst, 76:596, (1951).
STD = Standard
REAGENT COMPOSITION
1. Filtrate Reagent: Uranyl Acetate 2.1 mM and Magnesium Acetate 20 mM in ethyl (Abs. of Blank – Abs. of S) x Conc. of STD (mEq/L) = Conc. Of S (mEq/L) (Abs. of
alcohol. Blank - Abs. of STD)
2. Acid Reagent: A diluted acetic acid.
3. Sodium Color Reagent: Potassium Ferrocyanide, non-reactive stabilizers, and fillers. SAMPLE CALCULATIONS
Assume the Standard with a sodium value of 150 mEq/L, gave an absorbance of 0.803
4. Sodium Standard: Sodium Chloride solution: 150 mEq/L of sodium.
while the Sample and the Blank had absorbances of 0.880 and 1.406 respectively. The
sodium concentration of the Sample may then be calculated as follows:
REAGENT DETERIORATION
If turbidity has occurred, turbidity may be a sign of contamination.
(1.406 – 0.880) x 150 = 0.526 x 150 = 131 mEq/L
(1.406 – 0.803) 0.603
WARNING AND PRECAUTION
1. The reagent is for “in vitro” diagnostic use. Caution: Do not pipette the solution PROCEDURAL LIMITATIONS
by mouth. Avoid ingestion/contact.
1. When preparing filtrates, inadequate shaking or centrifugation will cause falsely
2. Specimens should be considered infectious and handled appropriately. lowered tests results.
STORAGE AND STABILITY
2. Blood calcium, chloride, and potassium levels of up to 3 times normal reportedly
exert no adverse influence on the procedure; phosphorus levels exceeding 5 times
Store all reagents at room temperature (15-30 ºC). The reagents are stable until the
normal likewise present no problems.
expiration date indicated on the label.
QUALITY CONTROL
It is recommended that controls be included in each set of assays. Commercially
SPECIMEN COLLECTION
available control material with established sodium values may be used for quality
1. Freshly drawn serum is the specimen of choice and a 50 µL (0.05 mL) amount is required.
control. The assigned value of the control material must be confirmed by the chosen
Plasma from non-sodium containing anticoagulants (e.g., lithium, calcium, magnesium or
application. Failure to obtain the proper range of values in the assay of control
heparin) is an acceptable alternative. Sodium is stable for at least 24 hours at room
material may indicate reagent deterioration, instrument malfunction, or procedural
temperature and 2 weeks when refrigerated.1, 2 errors.
MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED
1. Spectrophotometer. Expected Values1, 2
2. Centrifuge.
3. Test tubes/rack. 135 – 155 mEq/L
PROCEDURE
Filtrate preparation: PERFORMANCE CHARACTERISTICS
1. Label test tubes: blank, standard, control, patient, etc. 1. Linearity: 200 mEq/L.
2. Pipette 1.0 mL of Filtered Reagent to all tubes. 2. Sensitivity: Based on an instrument resolution of A = 0.001, the present method
has a sensitivity of 0.5 mEq/L.
3. Add 50 µL of sample to all tubes and distilled water to the blank.
4. Shake all tubes vigorously and mix continuously for 3 minutes. 3. Comparison: A comparison between this procedure and flame photometric
analysis produced a regression equation of y = 0.69x + 4.5 with a coefficient of
5. Centrifuge tubes at high speed (1,500 G) for 10 minutes and test the correlation of 0.92.
 SODIO
MÉTODO COLORIMÉTRICO

USO
Para la determinación colorimétrica de sodio en suero y plasma humanos. 3. Añadir 50 µL de muestra a todos los tubos y agua destilada al blanco. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
INTRODUCCIÓN
El sodio es el principal catión del fluido extracelular. Desempeña un papel central en el
4. Agitar enérgicamente todos los tubos y mezclar de forma continua durante 3 1. Linealidad: 200 mEq/L.
minutos. 2. Sensibilidad: Basado en un instrumento de resolución de A =
mantenimiento de la distribución normal de agua y la presión osmótica en los diversos
compartimentos de fluidos. La principal fuente de sodio en el cuerpo es cloruro de sodio 5. Centrifugar los tubos a alta velocidad (1,500 G) durante 10 minutos y probar los 0.001, el presente método tiene una sensibilidad de
contenido en los alimentos ingeridos. Sólo alrededor de un tercio del sodio total del cuerpo fluidos sobrenadantes tal como se describe a continuación, teniendo cuidado de 0.5 mEq/L.
entero está contenido en el esqueleto ya que la mayoría de ellos está contenido en los no perturbar el precipitado de proteína. 3. Comparación: Una comparación entre este procedimiento y el análisis
fotométrico de llama produce una ecuación de regresión de
fluidos extracelulares.1, 2 DESARROLLO DEL COLOR y = 0.69x + 4.5 con un coeficiente de correlación de 0.92.
La hiponatremia (nivel de sodio bajo en suero) se encuentra en una variedad de
1. Identifique los tubos de ensayo correspondiente a los tubos Filtrados anteriores. 4. Estudio de precisión:
condiciones incluyendo las siguientes: poliuria severa, acidosis metabólica, la enfermedad 2. Pipetear 1.0 mL reactivo de ácido a todos los tubos.
de Addison, diarrea, y la enfermedad tubular renal. Hiper-natremia (aumento del nivel de 3. Añadir 50 µL de sobrenadante a los tubos respectivos y mezclar. Entre Corridas
sodio) se encuentra en las siguientes condiciones: hiperadrenalismo, deshidratación 4. Añadir 50 µL de reactivo de color a todos los tubos y mezclar. Promedio (mEq/L) S. D. C. V.
severa y coma diabético después de la terapia con insulina, el tratamiento con exceso de 5. Cero el espectrofotómetro con agua destilada a 550 nm. % 146 7 5
127 4 3
sales de sodio.1, 2 6. Leer y registrar la absorbancia de todos los tubos.
Corrida-a-Corrida
PRINCIPIO Promedio (mEq/L) S. D. C. V.
El presente método se basa en modificaciones descritas por primera vez por Maruna3 y Nota: La reacción química de este procedimiento implica una reducción en la
% 148 5 4
absorbancia, en oposición al aumento de absorbancia habitual. La absorbancia del
Trinder4 en el que el sodio se precipita en forma de la sal triple, acetato de uranilo de blanco debe ser más alta que la de las muestras de prueba.
139 14 10
magnesio y de sodio, con el exceso de uranio a continuación, se hace reaccionar con REFERENCIAS
ferrocianuro, produciendo un cromóforo cuya absorbancia varía inversamente con la CÁLCULOS 1. Tietz, N. W., Fundamentals of Clinical Chemistry , W. B. Saunders Co.,
concentración de sodio en la muestra del ensayo. Abs. = Absorbancia Philadelphia, PA, p. 874.
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO S = Muestra 2. Henry, R.F. et al., Clinical Chemistry Principles and Techniques, 2nd Ed., Harper
1. Filtrado Reactivo: Acetato de Uranilo 2.1 mM y Acetato de Magnesio 20 mM STD = Estándar and Row, Hagerstown, M. D., (1974).
en alcohol etílico. 3. Maruna, RFL, Clin. Chem. Acta, 2:581, (1958). 4.
2. Reactivo de ácido: Un ácido acético diluido. (Abs. de blanco – Abs. de S) x Conc. de STD (mEq/L) = Conc. de S (mEq/L) (Abs. de Trinder, P: Analyst, 76:596, (1951).
3. Reactivo Color de sodio: Estabilizadores de ferrocianuro de potasio, no reactivos, blanco – Abs. de STD)
y materiales de relleno.
4. Estándar de sodio: Solución de cloruro sódico: 150 mEq/L de sodio. EJEMPLOS DE CÁLCULOS
Suponga el estándar con un valor de sodio de 150 mEq/L, una absorbancia de 0.803,
DETERIORO DEL REACTIVO mientras que la muestra y el blanco tienen absorbancias de 0.880 y 1.406,
Si se produce turbidez, puede ser una señal de contaminación. respectivamente. La concentración de sodio de la muestra puede entonces ser
calculada de la siguiente manera:
ADVERTENCIA Y PRECAUCIÓN
1. El reactivo es para uso diagnóstico "in vitro”. Precaución: No pipetear la solución (1.406-0.880) x 150 = 0.526 x 150 = 131 mEq/L
con la boca. Evitar ingestión / contacto. (1.406-0.803) 0.603
2. Las muestras deben ser consideradas infecciosas y manejadas
adecuadamente. LIMITACIONES DE PROCEDIMIENTO
1. Al preparar filtrados, agitación o centrifugación inadecuada causará pruebas
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD con resultados bajos falsos.
Almacene todos los reactivos a temperatura ambiente (15-30ºC). Los reactivos son 2. Calcio en la sangre, el cloro y los niveles de potasio de hasta 3 veces lo
estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. normal al parecer no ejercen influencia negativa sobre el procedimiento, los niveles
de fósforo superiores a 5 veces el valor normal del mismo modo no presentan
RECOLECCIÓN DE LAS MUESTRAS problemas.
Suero recién obtenido es la muestra de elección y se requiere una cantidad 50 µL (0.05
mL). El plasma de anticoagulantes que no contienen sodio (por ejemplo, litio, calcio, CONTROL DE CALIDAD
magnesio o heparina) es una alternativa aceptable. El sodio es estable durante al Se recomienda que los controles se incluyan en cada serie de ensayos. Material de
menos 24 horas a temperatura ambiente y 2 semanas en el refrigerador. 1, 2 control comercialmente disponible con los valores establecidos de sodio pueden ser
MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS utilizados para el control de calidad. El valor asignado del material de control debe ser
1. Espectrofotómetro. confirmado por la aplicación elegida. Si no se obtiene el rango apropiado de valores
en el ensayo del material de control puede indicar deterioro del reactivo, mal
2. Centrifuga.
funcionamiento de instrumentos, o errores de procedimiento.
3. Tubos de prueba / gradilla.
PROCEDIMIENTO
VALORES ESPERADOS1, 2
Preparación de filtrado:
135-155 mEq/L
1. Identifique los tubos: blanco, estándar, control, paciente, etc.
2. Pipetear 1.0 mL de reactivo filtrada a todos los tubos.