GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT

DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

INTRODUCTION TO PARASITOLOGY

INTRODUCTION

I. SYMBIOSIS (Sym = Together; Bio = Living  “Living Together”)
­an association between two different species of organisms
­primary aim: to obtain food and seek shelter and protection from the bigger organism 
­commonly known as Living Together 
­there are three types of Symbiotic Relationships: Commensalism + Mutualism + Parasitism

ORGANISM HOST
Commensalism Favorable Not Affected
Mutualism Favorable Favorable
Parasitism Very Favorable Not Favorable

II. PARASITOLOGY
­the study of the parasites
­the science that deals with a specialized group of animals which are physiologically dependent on other 
 organisms for their survival
­Neva&Brown: science that deals with organisms that take up their abodes, temporarily or permanently, on or 
 within other living organisms for food, with the relationship of these organisms to their host 

**IMPORTANT NOTE:
o The key in studying Parasitology is in the Life Cycle
o If we know the life cycle and its important components, we would understand why it is the key 

III. DEFINITION OF TERMS
A. Parasites
­organisms ranging from microscopic to macroscopic which are known to inflict disease in man 
­exhibit great diversity in morphology and physiology
­animals depending on bigger organisms for food and shelter 
­has intimate almost always obligatory relationship with the host (ALWAYS harms the host)

**Ascaris lumbricoides
­compete for available nutrients (sugars, proteins, fats) in the food we had already eaten
­tangled worms may obstruct the gut
­may damage vital organs during erratic migration 

**Description:

1
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
 Harms its Host
 Associated closely with host and derive nutrition from host
 May kill the host

B. Hosts
­the bigger organisms in which the parasite lives
­provides the nourishment and protection needed by the parasites

**Description:
 Does not harm the parasites
 Provides shelter to its parasite (parasites need the host)
PARASITES

I. CLASSIFICATION OF PARASITES
­Parasites: organism or animal that depends upon another bigger organism for food
­parasites can be classified according to location in their hosts, degree of association, and taxonomic groups

A. According to Location
1. Ectoparasites
­found outside or on the surface of the body of the host
­may cause INFESTATION
­ex) Scabies (Sarcoptes scabiei – human itch mite) 

2. Endoparasites
­found living within the host in any internal organs (GIT, Respiratory Tract, RBCs)
­may cause INFECTION
­examples of Endoparasites :
 Ascaris (GIT Lumen) 
 Plasmodium (RBC) – Malarial Parasite
 Schistosoma (Mesenteric Veins)

B. According to Degree of Association
1. Obligate Parasite
­those who cannot survive or reproduce outside the host
­always parasitic (must always be in contact with a susceptible organism)
­ex) Trichomonas vaginalis 

2. Facultative Parasite
­those that may exist in a free living state or as a commensal 
­if opportunity presents itself, they may become Parasitic
­they can both live as free living or parasitic parasites
­ex) Strongyloides stercoralis 

3. Permanent Parasite
­if the live continuously in the host, and remain in the body of the host – from the early stage 

2
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
 until maturity 
­requires continuous contact with the host 
­ex) Pediculus, Trichomonas vaginalis 

4. Intermittent (Temporary) Parasites
­contact with the host is only temporarily – closely associated with its host temporarily to feed
­ex) Anopheles mosquitoes (they only bite when they want your blood) 

5. Accidental Parasites
­enters the host that is not normally its host 
­does not develop to full maturity since the host is not physiologically compatible 
­association lasts only for a short time 
­ex) Echinococcus, Gnathostoma, Toxocara 

6. Aberrant Parasite
­moves out of the normal location within its host 
­its Migration to ectopic sites may lead to complications
­also known as erratic 
­ex) Ascaris lumbricoides (intestines, then they migrate to bile duct, liver, or appendix) 

7. Spurious Parasite 
­organisms taken in by accident and then passed out without causing any harm to unsuitable host
­example of Commnesalism  (ex­ Fruit Fly larvae or Plant Nematode)
II. TYPES OF HOST
­Host: organism in which a parasites live
­classified according to the following:

A.  Definitive Host
­harbors the sexual or the mature stage of the parasite (site where sexual reproduction occurs, if present)
­ex) Man, Pig, Dog, Mosquitoes 
 Mosquitoes: definitive host in Malaria 
 Ascaris: man is the definitive host 

B. Intermediate Host
­host that harbors the asexual or the immature / larval forms of the parasites 
­site where the asexual reproduction occurs 
­Paratenic Host: host in which the parasite does not undergo any development 

C. Reservoir Host
­these are the animals that harbor the parasite that are also parasitic to man
­site where the asexual reproduction occurs
­ex) Dog may carry hookworm eggs from one place to another, but eggs do not hatch or pass through
 any development in these animals 

D. Accidental (Incidental) Host
3
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
­these are the hosts that accidentally ingested the Parasites (that usually affect the animal kingdom)
­infection occurs in a host other than the normal host species 
­Zoonosis: condition wherein animal parasites accidentally infect man 
­ex) Hyatid Tapeworms are usually found in dogs and sheep  Zoonosis

E. Vector
­an invertebrate animal that transmits a parasitic organism from one host to another 
­has two types: Mechanical Vector + Biological Host 

1. Mechanical Vector ­an invertebrate animal which merely transfer parasitic organisms from one host
 to another (by carrying feces on their feet)
­ex) Flies, Cockroaches 

2. Biological Vector ­there is a development of the parasite inside the host 
­harbor the parasite internally in which it may undergo further development,
 multiplication, or both 
­ex) Mosquitoes in Malaria 

III. TAXONOMIC GROUPINGS OF PARASITES 

A. Protozoans (Unicellular Eukaryotic Parasites)
o Phylum Sarcomastigophora
o Phylum Apicomplexa
o Phylum Microspora
o Phylum Ciliophora
PHYLUM REPRODUCTION LOCOMOTION SPECIES
Sarcomastigophora:  Asexual Pseudopodia Entamoeba histolytica
Sarcodina
Sarcomastigophora:  Asexual Flagella Giardia lamblia
Mastigophora  Dientamoeba fragilis

4
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
Trypnasoma spp
Loishmania spp
Apicomplexa Asexual & Sexual  None Plasmodium spp
Toxoplasma
Sarcocystis 
Ciliophora  Cilia Balantidium coli 

1. Phylum Sarcomastigophora
­has Subphylum: Sarcodina and Mastigophora
­both reproduce Asexually

a. Subphylum Sarcodina ­move by Pseudopodia (can only move in one direction)
­Pseudopodia: cytoplasmic protrusions 
­ex) Amoeba, Entamoeba (pathogen)

b. Subphylum Mastigophora ­move by flagella (Flagellates)
­Flagellum: long threadlike extension of cytoplasm 
­ex) Giardia, Trypanosoma, Leishmania, Trichomonas 

2. Phylum Apicomplexa
­no locomatory organ 
­have a complex life cycle with alternating sexual and asexual generations 
­Blood Parasites that cause Malaria: Isospora, Cyclospora, Cryptosporidium, Sarcocystis 
­Other Parasites: Taxoplasma, Sarcocystis 

3. Phylum Ciliophora
­move by beating of many Cilia
­mostly free living and symbiotic species 
­ex)  Balantidium coli (the only pathogenic ciliate)

4. Phylum Microspora
­no locomatory organ
­intracellular parasite of many kinds of vertebrates and invertebrates 
­rarely cause disease in immunocompetent persons 

B. Helminths (Metazoa; Wormlike Invertebrates)
PHYLUM ASCHELMINTHES PHYLUM PLATYHELMINTHES

5
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
CLASS NEMATODA CLASS CESTODA CLASS TREMATODA
AKA Round worms Flatworms Flukes
Shape Elongated, Cylindrical Elongated, Ribbon Like Leaf­shaped, Elongated 
Segmentation Unegmented Segmented Unsegmented 
Sexes Separate Hermaphrodite Hermaphrodite 

1. Phylum Aschelminthes
a. Class Nematoda ­Nematodes or Roundworms 
­elongated, cylindrical worms attenuated at both ends
­unsegmented worms; sexes are separate
­reproduction by:
 Oviparous (ex. Ascaris, Enterobius)
 Viviparous (ex. Trichinella, Filarial Worms) 

**Infection by:
 Ingestion of Eggs (ex. Ascaris, Trichuris)
 Skin penetration by Larvae
 Vector Borne
 Ingestion of Encysted Larvae 
2. Phylum Platyhelminthes
­also called Flatworms – multicellular animals characterized by flat, bilaterally symmetric body
­most Flatworms are Hermaphroditic, having both male and female reproductive systems 

a. Class Trematoda ­majority are transmitted by ingestion (except – Schistosoma) 
­unsegmented 
­Hermaphroditic
­flattened, leaf­shaped or cylindrical
­Order Digenea: contains all species that are parasitic to humans 
­Infection by: Metacercariae ORSkin penetration by Cercariae

b. Class Cestoda ­segmented 
­Hermaphroditic, ribbon like 
­reproduction by: Oviparous (Ex. Taenia); multiplication of larval forms 
­Infection by: Ingestion of Encysted Larvae

C. Arthropods 
1. Phylum Arthropoda
­have segmented body parts: Head Thorax and Abdomen
­have three to four pairs of jointed appendages and covered by hard chitinuous skeleton
­bilaterally symmetrical body

**Classes in Phylum Arthropoda
CLASS DESCRIPTION EXAMPLE
Crustacea Some serve as intermediate hosts Crabs, shrimps, copepods
Chilopoda Centipedes
Arachnida spiderlike Scorpions, spiders, ticks, mites

6
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
Insecta Includes most important of arthropods

**Class Insecta 
 Order Anoplura
 Order Hemiptera
 Order Coleoptera
 Order Hymenoptera
 Order Siphonaptera
 Order Diptera 
LIFE CYCLES 

I. TWO TYPES OF LIFE CYCLES:
­Parasites undergo a Life Cycle during its existence 
­it involves survival and development in the external environment and in one or more hosts 
­life cycle consists of the various morphologic forms and developmental stages 
­life cycle summarizes development of the parasite from the time it leaves the host to start a new infection in a
 new susceptible host 
­knowledge of life cycles = preventive measures 

A. Direct Life Cycle 
­there is no intermediate host required to transmit the parasite from one host to another 
­parasites are transmitted from an infected individual to a susceptible host without requiring an 
 intermediate host

**Ex1) Trichomonas vaginalis 
­direct cycle where the parasite is immediately infective when it leaves the host
­Man  Man

**Ex2) Ascaris lumbricoides
­direct life cycle where the parasite develops into the Infective Stage in the external
 environment 
­Man  Development in External Environment  Vectors (optional)  Man 

B. Indirect Life Cycle
­at least one intermediate host / vector is required for the parasite to complete its transmission from the 
 originally infected host to the susceptible potential new host 
­the infective stage of the parasite develops in the Intermediate Host and the Susceptible Host acquires
 the infection through contact or exposure to the infected intermediate host 

**Ex) Schistosoma japonicum, Capillaria phiippinensis 
­Man  Intermediate Host  Contact / Ingestion of Raw Intermediate Host  Man 
 

7
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

II. COMPONENTS OF THE LIFE CYCLE
 Infective Stage
 Portal of Entry
 Mode of Transmission
 Path or Route of Migration
 Developmental Stages
 Habitat
 Portal of Exit
 Diagnostic Stage

A. Infective Stage
­stage of development of the parasite which when ingested to the definitive host will result to infection
­in the direct life cycle: Infective Stage comes from original infected host 
­in the indirect life cycle: it originates from the Intermediate Host or Vector 
­ex) Ascaris – Infected Stage is the Embryonated Egg

B. Portal of Entry
­refers to site of opening in the susceptible host through which the infective stage enters 
­most common portal of entry: Mouth, Skin, Nose
­ex) Ascaris – Portal of Entry: Mouth

C. Mode of Transmission
­refers to the process on how a new host acquires the infective stage of the parasite
­man could acquire it by: Ingestion, Inhalation, Infected Intermediate Host, Skin penetration, Inoculation 
­ex) in Ascaris – Ingestion of Embryonated Egg; Hookworm by Skin penetration of Larva
8
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

D. Path or Route of Migration
­when the infective stage of parasite enters the new host, it usually undergoes without maturation stages
­different developmental stages of parasites may occur in different parts or organs 

E. Developmental Stages 
­the parasite undergoes different developmental stages as it moves from the original infected hosts to 
 the environment, inside the intermediate hosts & even w/in the new susceptible host before settling down
­ex) For Helminths, developmental stage is Egg, Larva, Immature Adult and Adult 

F. Habitat
­refers to the specific organ or site in the definitive host’s body where the sexually mature parasite resides
­ex) Habitat of Ascaris is in the Lumen of Small Intestines 

G. Portal of Exit
­opening or site in body wherein parasites leave the infected hosts to find a new susceptible host 
­ex) Eggs of Ascaris leave the host through the Anus 

H. Diagnostic Stage 
­stage passed out by the host or taken up by the vector or intermediate host 
­serves as a basis for establishing presence of the parasite in host or diagnosis of infection

EXPERIMENT 24: LUNG FLUKES

INTRODUCTION

I. SLIDES TO VIEW:
 Paragonimus westermani 
o Adult
o Egg 

II. PARAGONIMUS WESTERMANI
 Paragonimus westermani = Affects the Human Lungs (Lung Fluke)
 Transmission = Ingestion of Insufficiently cooked Crabs or Cray Fish infected with Metacercariae
 Infective Stage = Metacercaria 
 Diagnosis = Finding Medium Sized Operculated Ova in the Sputum 

9
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
 Pathology = Acute, Subacute Inflammations of Lung Tissue; it may also wander erratically to Brain and Skin 

**IMPORTANT Note:
o Clinically, it is usually Mistaken with Tuberculosis Symptoms due to Hemoptysis 
o TO Differentiate, we find Operculated Ova in the Sputum, instead of Acid Fast Bacilli 

III. LIFE CYCLE OF P. WESTERMANI
 Type = Indirect Life Cycle (One or Two Intermediate Hosts and One Definitive Host)
 Immature Larvae develops inside the Intermediate Host and Matures into Adult Stage inside Man 
 Mode of Transmission = Ingestion of Raw Infected Crabs / Crayfish 
 Diagnostic Stage = Eggs in Sputum / Stool 
 Infective Stage = Metacercariae from Crabs 
 Definitive Host = Man
 1st Intermediate Host = Snails
 2nd Intermediate Host = Crabs / Crayfish 

DEFINITIVE HOST = MAN     SNAILS CRABS / CRAYFISH

   Ingestion of Raw Infected               Miracidium        Cercariae 

          Crabs / Crayfish    Hatches & Penetrates Snail    Enter the Crabs

          Immature Worm   Sporocyst         Encysts to form Metacercaria 

Migrate into Peritoneal Cavity,
   Diaphragm and Lungs      Radiae
                
             Adult Worm    Cercariae      Metacercariae
    Encysted in Lung Tissue    (Infective Stage)
        (Lungs have Cavitary Lung Lesions,
         Cough, Pleuritic Pain, Hemoptysis)   Cercariae is released in the
      Water
    Eggs 
     in Sputum or Stool

III. DESCRIPTION OF THE SLIDES:
A. Paragonimus westermani Adult 
­Plump, Ovoid
­Reddish­Brown Fluke (8­20mm in length; 5­9mm in breadth)
10
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

**Diagnostic Features of this Fluke
 Scale­Like Integumental Spines 
 Two Equal­Sized Ventral & Oral Suckers located in the Anterior Half 

**Other Structures:
 Two Lobate Testes situated Side­by­Side 
 Centrally Located Lobate Ovary Anterior to the Testes 
 Laterally, the entire body is occupied by the Highly Branched Vitellaria 
 Excretory Bladder 
 Coiled Uterus 

B. Paragonimus westermani Egg 
­Medium Sized, Oval Shaped Egg (85 x 55u) 
­Operculated: has a characteristic Broader Operculated Anterior End and a Thicker Posterior End 
­expectorated in Sputum or when swallowed, it can be detected in Feces in Unembryonated Stage

IV. ANSWERS TO QUESTIONS
 Discuss the Specimens of Choice in confirming the Diagnosis of Paragonmiasis
o Stool
o Sputum

 Give the Characteristic Morphological Feature of Paragonimus westermani Ova
o Broader Operculated Anterior End
o Thickened Posterior End 

11
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

EXPERIMENT 27: SPOROZOANS

INTRODUCTION
 Sporozoans = Group of Unicellular Parasites with a characteristic Apical Complex
 Has NO Locomotory Organelles (except for Flagellated Microgametes in some groups) 
 Plasmodium = Commonly seen in Man which can cause Malaria
 Classification of Sporozoans (Based on Affected Organ)
o Blood Sporozoans
o Tissue Sporozoans 

I. SLIDES TO VIEW:
 P. falciparum = Trophozoites, Schizonts, Gametocytes
 P. vivax = Trophozoites, Schizonts, Gametocytes
 P. malariae = Trophozoites, Schizonts, Gametocytes
 P. ovale = Trophozoites, Schizonts, Gametocytes

II. PROCEDURE
 Stained Blood Smears are shown 
 Pay attention to the Size of the Normal and Parasitized RBC, number of Chromatin Dots, Amount of Hemozoin 
Pigments, Appearance of the Cytoplasm, and presence / absence of Stippling on the Infected RBC’s Cytoplasm

III. STRUCTURE OF THE PARASITE (PLASMODIUM)

Host RBC
  Stippling

Cytoplasm

  Chromatin            Vacuole

12
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
IV. LIFE CYCLE OF MALARIA PARASITES 
 Type of Life Cycle = Indirect Cycle
 Infective Stage = Sporozoites
 Diagnostic Stage = Gametocytes 
 Biologic Vector = Female Anopheles Mosquito
 Definitive Host = Female Anopheles Mosquito
 Intermediate Host = Human 
 Two Phases = Human Phase + Mosquito Phase

V. OTHER IMPORTANT SPOROZOANS:
 Cryptosporidium
 Isospora
 Blastocystis
 Pneumocystis carinii
 Toxoplasma gondii 

V. STAGES OF THE PARASITE 
 Asexual Stages = Trophozoites + Schizonts
 Immature Sexual Stages = Gametocyte
 NOTE: Man is just an Intermediate Host in Malarial Infections because they harbor only the Immature Forms of 
the Parasite (the Mature forms are found in the Mosquito) 

A. Trophozoites (Ring Form) 
­it is the earliest stage 
­they develop from Sporozoites in the Pre­Erythrocytic (Hepatic Schizogony) Cycle; in the Blood Cycle,
 it develops from Merozoites – therefore, we see Throphozoites in BOTH Cycles of Human Phases 
­with ONE or TWO Chromatin Dots
­ring­like structures with Few Malarial Pigment 

**Chromatin Dots:
 Usually only ONE!
 P.falciparum (exception) = More than One in Trophozoite Stage (thin ring like cytoplasm)

**Cytoplasms:
 Compact Cytoplasm = P.ovale and P.malariae
 Thin Delicate Cytoplasm = P. falciparum
 Amoeboid Cytoplasm = P.vivax
 Band form Cytoplasm = P.malariae

B. Schizonts
­once the Chromatin Dot divides by Binary Fission, Parasite is now a Schizont 

13
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
­with Two or More chromatin Dots (Chromatin Dots now develop to form Merozoites) 
­with plenty or increasing amount of Malarial Pigment (Hemozoin Pigment) in Cytoplasm 
­can be divided into Growing / Immature and Mature (Cryptozoites) in the Pre­Erythrocytic Cycle 

**Merozoites
 P.falciparum = 12­32
 P.vivax = 12­24
 P.malariae = 6­12
 P.ovale = 4­12 

**Tissue Schizonts:
 Primary Tissue Schizonts 
 Secondary Tissue Schizonts

C. Gametocytes 
­it is only an Immature form of the Sexual Forms of the Parasite 
­Banana Shaped in P.falciparum or special with definite Chromatin material 
­develops from Merozoites 

DECSRIPTION OF THE SPECIES

I. MORPHOLOGY (From Lab Manual) 
P. falciparum P. vivax P. malariae P. ovale
Trophozoite Size: Small­Medium Size: Small­Large Size: Small Size: Smaller than vivax
Number: Numerous Number: Few­Moderate Number: Few Number: Few
Shape: Ring&Comma Form Shape: Broken Ring Shape: Ring to Round Shape: Ring to Round
Chromatin: Two Dots Chromatin: Single  Chromatin: Single  Chromatin: Single
Cytoplasm: Regular Cytoplasm: Irregular Cytoplasm: Regular  Cytoplasm: Regular 
Mature Forms: Compact Mature Forms: Compact  Pigment: Scattered  Pigment: Course, Scatter
Pigment: Coarse Grains  Pigment: Fine Scattered

Schizont  Associate w/ Ring Forms Size: Large  Size: Small, Compact Size: like malariae

Size: Small, Compact Number: Few­Moderate Number: Few Number: Few
Number: Few Mature Form:12­24 Merozoite Mature Form:6­12 Merozoite Mature: 4­12 Merozoite
Mature Form:12­13 Merozoites Pigment: Loose Mass Pigment: Concentrated Pigment: Concentrated 
Pigment: Single Dark Mass Daisy Flower Like 

14
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
Gametocyte Mature: Banana Shaped  Mature: Round Mature: Round  Mature: Round 
Chromatin: Single  Pigment: Scattered  Chromatin: Single  Chromatin: Single 
Pigment: Scattered  Pigment: Scattered  Pigment: Scattered 
Peripherally 

II. GENERAL CHARACTERISTICS (From Notes)
FORM P. falciparum P. vivax P. malariae P. ovale
Infected RBC Size Not Enlarged Enlarged Not Enlarged Enlarged

Shape Round but may be Crenated Round Round Oval; Fimbriated

Stipplings Maurer’s Dots Shuffner’s Dots Zieman’s or James Dots Shuffner’s Dots

Trophozoites  Small Rings  Small & Large Rings Small Compact Rings Small; Compact Rings

Multiple w/ Acole Forms Amoeboid Band Forms 

Schizont Rare (Seen in Severe Cases) Irregular Contours  Compact; Round Compact

# of Merozoites 12­32 12­24 6­12  4­12

Forms Regular Rosette­ Forms Irregular Rosette­
Like Clusters Like Clusters

Gametocyte Banana / Sausage Shape Round­Large Round, Compact Round, Small 

ANSWERS TO QUESTIONS
 Plasmodium falciparum Schizont VS Plasmodium vivax Schizont 
FEATURES P. falciparum P. vivax
Size Small & Compact Large
Number Few, Uncommon Few to Moderate
Mature Forms 12­32 Merozoites  12­24 or More Merozoites
Cluster Compact Clusters  Irregular Clusters
Pigment  Single Dark Mass Loose Mass

EXPERIMENT 28: BLOOD & TISSUE FLAGELLATES
INTRODUCTION
 Trypanosoma and Leishmania Flagellates belong to Order Kinetoplastida of Superclass Mastigophora
 They Multiply in the Blood (Hemoflagellates) or Tissue of Humans 
 All Species require an Arthropod Intermediate Host 

15
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
I. SLIDES TO VIEW
 Trypanosoma brucei gambiense (Trypomastigote)
 Leishmania tropica (in Culture) 
 Leishmania tropica (Hamster)

II. MORPHOLOGIC DIFFERENCES
AMASTIGOTE PROMASTIGOTE EPIMASTIGOTE TRYPOMASTIGOTE
AKA Leishmania Leptomonas Crithidia Trypanosoma
Morphology Ovoidal / Spherical  Spindle Shaped Spindle Shaped Spindle Shaped
Flagellum Intracellular Axoneme Free Flagellum  Free Flagellum Free Flagellum
Course of  Intracellular (Not Free) Arise from Kinetoplast  Ends in Kinetoplast  Ends in Kinetoplast 
Flagellum in the Anterior End  Anterior to Nucleus Posterior to the Nucleus 
Found in Macrophages Vector
Reticuloendothelials
Stage Leishmania Diagnostic Stage Leishmania Infective Stage  Typanosoma Trypanosoma Infective Stage
 Leishmania = Amastigote + Promastigote 
 Trypanosoma = Trypomastigote + Epimastigote

III. TRYPANOSOMA SPECIES 
A. Comparison of Diseases and Vectors 
SPECIES DISEASE VECTOR
T. brucei gambiense West African Sleeping Sickness Riverine Tsetse Fly 
T. brucei rhodesiense East Sleeping Sickness Woodland Tsetse Fly 
T. cruzi Chaga’s Disease, Megacolon Reduviid Bug (Triatoma)

B. Life Cycles:
1. T. brucei gambiense
 Infective Stage = Metacyclic Trypopmastigote
 Diagnostic Stage = Trypomastigote 
 Stage that develops in the Salivary Glands of the Vector (Tsetse Fly) = Epimastigote
 Mammalian Hosts = Humans, Pigs, Wild Animals
 Vector = Riverine Tsetse fly (Glossina palpalis) = Day time biters 
 NOTE: Epimastigotes are NOT found in the Human’s Blood (it develops in the Tsetse Fly)

2. T. brucei rhodesiense
 Infective Stage = Metacyclic Trypopmastigote
 Diagnostic Stage = Trypomastigote 
 Stage that develops in the Salivary Glands of the Vector (Tsetse Fly) = Epimastigote
 NOTE: Epimastigotes are NOT found in the Human’s Blood (it develops in the Tsetse Fly)

3. T. cruzi 
 Infective Stage = Metacyclic Trypomastigote 
16
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
 Epimastigote Develops inside the Reduviid Bug (Vector)
 Diagnostic Phases:
 Blood = Trypomastigote 
 Heart Tissues = Amastigote 
IV. LEISHMANIA SPECIES
 
            
 A. Comparison of the Diseases Caused:
LEISHMANIA DESCRIPTION DISEASES
Leishmania tropica Old World Cutaneous  Dry, Chronic, Urban Cutaneous Leishmaniasis 
Leishmaniasis Oriental Sore
Aleppo or Baghad Boil
Recividans or Chronic Relapsing Cutaneous L.

Leishmania major Old World Cutaneous  Wet or Acute Rural Cutaneous Leishmaniasis 

Leishmaniasis
Leishmania aethiopica Old World Cutaneous  Diffuse / Disseminated Cutaneous Leishmanisis 
Leishmaniasis
Leishmania mexicana New World Cutaneous  Diffuse / Disseminated Cutaneous Leishmaniasis
Leishmaniasis Chiclero Ulcers 

Leishmania braziliensis Mucocutaneous  Mucocutaneous Leishmaniasis

Leishmaniasis Espundia (disfigures face)

Leishmania donovani Visceral Leishmaniasis  Visceral Leishmaniasis

Kala­Azar or Black Disease 
(Zoonotic) 

B. Life Cycle
o Infective Stage = Metacyclic Promastigote
o Diagnostic Stage = Amastigote (inside Macrophages)
o Vector = Sandflies (Phlebotomus or Lutzomyia) 
o Reservoir Hosts = Humans, Dogs, Wild Animals
o Habitat = Reticular Endothelial System

17
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

EXPERIMENT 29: FILARIAL WORMS

INTRODUCTION
 Filarial Worms = Slender Tissue dwelling Nematodes with Reduced Lips and Buccal Capsules 
 All Species employ Arthropods as Intermediate Host
 Transmission = through Arthropod Vector Bite
 Infective Stage = Third Stage Larva (L3) 

I. SLIDES TO VIEW (Blood Smears with):
 Wuchereria bancrofti
 Brugia malayi 

II. PROCEDURE
 Blood Smears with Microfilariae 
 Take note of Morphological Differences between the Two Species and Tabulate based on the following: Shape & 
Size of the Larvae relative to the Host Cells, presence / absence of a Membrane Sheath and Number of Nuclei at 
the Posterior or Tail End 

III. FILARIAL WORMS OF MEDICAL IMPORTANCE
FILARIASIS VECTOR DEFINITIVE HOST DISTRIBUTION
Wuchureria bancrofti Lymphatic Mosquitoes Man Philippines 
Brugia malayi Lymphatic Mosquitoes Man Philippines
Brugia timori Lymphatic Mosquitoes Man Indonesia
Onchoceria volvulus Subcutaneous Fly Man
Loa loa Subcutaneous Fly Man
Manzonella perstan Animal Midget  Animal
Manzonella ozzardi  Animal Midget Animal
18
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

IV. LIFE CYCLE
 Infective Stage = L3 (Third Stage Larvae) 
 Diagnostic Stage = Microfilariae
 Definitive Host = Man, Chimpanzee, Gorilla  
 Mosquito Borne

L3 (Infective Stage)  Migrates to Lymph Gland  L1  L2  L3 

      Human Phase Mosquito

EXAMINATION OF THE SLIDES

I. STAGES OF THE PARASITE
A. Adult Stage
­found in Lymph Glands (they can create Obstruction, leading to Edema)
­long slender, creamy white roundworm, smooth cuticle 
 
1. Viviparous Female
­Vulva opens to the Surface of the Worm near the middle of the Pharynx
­gives birth to a Prelarval Form (Microfilariae)
­6­10cm in length; 0.3cm wide

2. Males
­possess Caudal Alae with two Spicules
­40­50mm in length, 0.3wide 

B. Microfilariae 
­also known as the Pre­Larval Form (L1) 
­it is NOT an Infective Stage – it is a Diagnostic Stage 

19
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
­given birth by a Viviparous Female Worm (there is NO egg stage) 
­Body Nuclei = represents are Rudiments of Internal Organs 

**Morphology:
 Morphology varies with Species
 May contain sheath with or without striations
 Body Nuclei represent Rudiment of Internal Organs 
 Stained with Giemsa 

**Comparison of Microfilariae between the Two Species:
W. bancrofti B. malayi
Cuticular Sheath Present Present 
Cephalic Space Short  Long 
Length = Width Length > Width 
Body Curves Regular, Large  Irregular, Kinky, Small
Body Nuclei Round Medium­Size Small, Angular
Well Separated Overlapping (not separated)
Tail No Terminal Nuclei  With Two Terminal Nuclei 
Pointed End Blunt Tip

*NOTE: Microfilariae are found in the Blood only at Night Time

II. COMPARISON OF LYMPHATIC AND SUBCUTANEOUS WORMS (BASED ON MICROFILARIAE)
W. bancrofti B malayi Onchocerca volvulus Loa loa
Sheath Present Present Absent Absent 
Cephalic Space Short Long Short Short
Body Curves Regular Irregular Rigid Irregular 
Body Nuclei Separated Overlapping Separated Overlapping
Tail No Nuclei With Terminal Nucleus No Nucleus  With Terminal Nuclei

III. ENDEMIC PLACES OF FILARIASIS IN THE PHILIPPINES
 Luzon
 Leyte
 Marinduque
 Mindoro
 Palawan
 Samar 
EXPERIMENT 30: SCHISTOSOMA (BLOOD FLUKES)

INTRODUCTION
 Schistosoma = Comprises the Blood Flukes or the Blood Trematodes 
 They only require ONE Intermediate Host – have NO Metacercarial Stage 
 Adults have Separate Sexes 

20
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

I. SLIDES TO VIEW:
 Schistosoma japonicum = Egg, Cercaria, Adult
 Schistosoma mansoni = Egg, Adult
 Schistosoma mekongi = Egg, Adult

II. THREE MAJOR SPECIES 
MAJOR SNAIL HABITAT DISEASE DISTRIBUTION
SPECIES INTERMEDIATE HOST
Schistosoma  Oncomelania Hupensis­ Veins of the Small  Oriental Schistosomiasis  Philippines (Misamis Oriental)
japonicum Quadrasi Intestines Katayama Disease China, Sulawesi in Indonesia, 
Schistosomiasis japonica Japan, Taiwan

Schistosoma  Biomphalaria spp  Veins of the Large  Intestinal Bilharziasis Africa, South America, West 

mansoni (Biomphalaria glabrata) Intestines Schistosomiasis mansoni Indies, Puerto Rico
Schistosoma  Bulinus spp Veins of  Schistosomal Hematuria Middle East, Africa, Southern 
haematobium (Bulinus 21truncates) Genitourinary Tract Vesical Schistosomiasis Tip of Europe
Urinary Bilharziasis

**NOTE: Schistosoma japonicum: produces the Most Number of the Eggs

III. LIFE CYCLE 
 Infective Stage = Cercaria
 Diagnostic Stage = Eggs in Feces 
 Form which Enter the Snails = Miracidia 
 Intermediate Host = Snails (different species for specific species of parasites – see table) 
 Mode of Transmission = Skin Penetration 

21
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

EXAMINATION OF THE SLIDES

I. PROCEDURE:
 Note Morphologic Features of the Parasites and the Striking Differences between them

II. MORPHOLOGY
A. Adult Worms
­0.6­2.5cm in length with Oral and Ventral Suckers
­Narrow Elongated Shape; has separate Sexes; Integument is Smooth or Tuberculated depending upon species
­number of Testes in Males and the length of the Uterus & Number of Eggs are Distinctive to the species
­Excretory System = Flame Cells, Collecting Tubules leading into a Small Bladder with Terminal Excretory Pore

MALE ADULT WORM FEMALE ADULT WORM
Shorter by more Sturdy; Grayish Longer
Has a Cylindrical Anterior End  More Slender
Body Folded to form a Gynecophoral Canal Darker

 **Gynecophoral Canal = Found in Males in which the Female is embraced during copulation

B. Ova / Egg
­with Spine or Knob­Like Projections 
­depending on the Stage of Development at the time they are passed out with the Feces, one may find 
   them from Multicellular Stage to full Embryonation with a developed Miracidium within the 
Shell
S. japonicum Egg S. mansoni Egg S. haematobium Egg
*Developed Miracidium *Developed Miracidium  *Developed Miracidium
*Lateral Knob *Large Lateral Spine  *Large Terminal Spine 
*Small Lateral Spine

C. Miracidium
­ciliated, pyriform in shape with a Primitive Gut 

D. Cercariae
­forked­tailed when Discharged from the Snail 
­fork situated at the Posterior­Third of the Tail
­Oral and Ventral Suckers are developed 

III. ANSWERS TO QUESTIONS
 Differentiate the Appearance of the Ova of the Different Species of Schistosoma 

22
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
S. japonicum S. mansoni S. haematobium S. mekongi
Oval Light Yellow=Brown Terminal Spine Oval
With minute Spine or  Elongate Lateral Spine or Knob 
Knob Lateral Spine 
Acid Fast

 What Specimen are you going to collect to demonstrate the Ova of Schistotoma japonicum?
o Feces are Collected
o When eggs cannot be found in Feces, a Rectal Biopsy may be done 

EXPERIMENT 36: INTESTINAL AMOEBA 
 INTRODUCTION  
 Protozoans in the Intestines obtain nutrients from the Parasitized Host or Predigested Food in the GIT
 Trophozoite = Active or Feeding Stage 
 Cysts = form when the Environment is Unfavorable for Survival (Not Active, Non­Feeding) 

I. SLIDES TO VIEW:
 Entamoeba histolytica = Cyst, Trophozoite
 Entamoeba coli = Cyst, Trophozoite
 Entamoeba nana = Cyst, Trophozoite

II. ENTAMOEBA HISTOLYTICA
 The ONLY Pathogen (others are Commensals) 
 It has the Potential to Invade the Intestinal Wall & other Organs 
 Entamoeba dispar = another Intestinal Commensal which is morphologically similar w/ E. histolytica 
 They could be differentiated using Specific Tests (Isoenzyme Analysis, Immunoassays, PCR) 

**NOTE: LIFE CYCLE Discussed Below

EXAMINATION OF THE SLIDES

I. TROPHOZOITES AND CYSTS:

TROPHOZOITES CYSTS
Entamoeba histolytica  *Karyosome = Center *1­4 Nuclei (Mature Cyst) 
*Nucleus = Eccentric w/ Fine Chromatin Granules *Diffuse Glycogen Mass
*Directional Movements (Active Progressive) *Cigar­Shaped Chromatoidal Bars 
*Defined Ectoplasm   
*Blade­Like Hyaline Pseudopodia
*Indistinct Nucleus 
23
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
*Ingested RBC
 

Entamoeba coli *Karyosome = Eccentric Karyosome in Nucleus *As many as 8­Nuclei (Mature Cyst) 

*Nucleus = w/ Course Chromatin Granules *Larger; Slender
*More Sluggish Non­Directional Movements *More Granular Cytoplasm
*More Granular Cytoplasm *Splinter­Like Chromatoidal Bodies 
*Contain Ingested Bacteria
*Narrower; Less Differentiated Ectoplasm
*Blunter and Broader Pseudopodia 
*Heavier
*Irregular Peripheral Chromatin
*NO RBC inside  

Endolimax nana *Karyosome = Eccentric, Large Irregular  *Has 4­Nuclei 

*No Peripheral Chromatin Granules  

II. ANSWERS TO QUESTIONS
 What is the Morphologic Feature of Entamoeba histolytica that signifies Pathogenicity?
o Trophozoite of E. histolytica is Active, Motile Feeding Stage that causes Pathology in the Colon
o It is Anaerobic with no mitochondria 
o Erythrophagocytosis 

EXPERIMENT 37: INTESTINAL FLAGELLATES & CILIATE

INTRODUCTION

I. SLIDES TO VIEW:
 Giardia lamblia
 Dientamoeba fragilis
 Chilomastix mesnili
 Balantidium coli

II. FLAGELLATES VS CILIATES 
A. Flagellates
o Possesses one or more Flagella – Long Thread­Like Extrusions of the Cytoplasm
o The Pathogenic Intestinal Flagellate of Man is Giardia lamblia 
o Classified into Two Groups (According to Habitat): 
 Intestinal, Oral, and Genital Flagellates
 Blood and Tissue Flagellates

**NOTE: ALL have Trophozoite and Cystic Stage (EXCEPT Trichomonas) 
24
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
 Dientamoeba fragilis was originally grouped under Amoebas (now it is a Flagellate) 
 Now, it is in the Order Trichomonadida 
 Dientamoeba fragilis has Two Nuclei and NO Cystic Stage 

B. Ciliates
o Move by means of Cilia – Threads of Cytoplasm (shorter and more numerous than Flagella) 
o The only Pathogenic Ciliate of Man is Balantidium coli

III. REVIEW OF PROTOZOANS
Entamoeba histolytica Giardia lamblia Dientamoeba fragilis Balantidium coli
Disease Amoebiasis Giardiasis Balantidiasis
Amoebic Dysentery Lambiasis Balantidosis
Amoebic Hepatitis  Traveller’s Diarrhea  Balantidial Dysentery
Infective Stage  Mature Cyst  Mature Cyst Trophozoite Mature Cyst
Habitat  Large Intestine (Cecum) Small Intestines Large Intestines (Cecum) Large Intestines
Diagnosis  Parasite in Feces  Cyst & Trophozoites  Binucleate Trophozoites  Cysts & Trophozoites
Pathology Flask Shaped Ulcer  Malabsorption Syndrome
Steatorrheac Stool
Transmission  Ingestion  Ingestion Uncertain Ingestion 
Drugs of Choice  Metronidazole Metronidazole  Iodoquinol  Tetracycline 
Trophozoite
Nucleus Single & Eccentric  Two Nuclei (Binucleate) Two Nuclei (Binucleate) Macro / Micro
Karyosome  Center Center
Movement  Unidirectional  4­Flagella  Pseudopods  
Twisting Movements  Non­Directional
Others Easily Destroyed  Sucking Disk Ventrally No Flagella  Surrounded by Cili 
Pear Shaped (Old Man) Cytosome & Cytopyge
2­Parabasal Bodies 
2­Axonemes 
Cyst 
Description  Cigar­Chromatoid Bodies Ellipsoidal  NONE Thick Cyst Wall 
1­4 Nuclei   2­4 Nuclei  Round or Oval

EXAMINATION OF THE SLIDES

I. TROPHOZOITES AND CYSTS
TROPHOZOITE CYST
Giardia lamblia *Sucking Disk on Ventral Surface *2­4 Nuclei
*Pear Shaped  *Surrounded by a Cyst Wall
*Old Man’s Face *Ellipsoidal (9­12um)
*Two Nuclei with Large Central Karyosomes
*Two Axonemes

25
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
*Two Blepharoplasts
*Two Deeply Staining Bars (Parabasal Bodies)
*4­Pairs of Flagella

Dientamoeba fragilis  *Sluggish Non­Directional Motility NONE

*Two Nuclei 
*NO Flagella!!!
*May Ingest RBC

Chilomastix mesnili *One Nucleus *One Nucleus

*Four Anterior Flagella  *Lemon­Pear­Shaped 
*Cytosomal Groove  *Clear Knob
*Curved Posteriorly *Cytosome 

Balantidium coli *Surrounded by Cili *Almost similar: Round or Oval 

*Has Vacuoles and Inclusions in the Cytoplasm *Thick Cyst Wall 
*Some unique structures:
 Cytostome = Primitive Mouth
 Cytopyge = Excretory Pore 
 Macronucleus = Bean / Kidney Shaped
 Micronucleus = within the Macronucleus 

II. ANSWERS TO QUESTIONS
 Give the Characteristic Morphologic Features
FLAGELLATE / CILIATE LOCOMOTORY ORGANELLE DISTINCT FEATURES
Giardia lamblia 1­4 Flagella Two­Nuclei 
Large Central Karyosome 

Dientamoeba fragilis Amoebaflagellate  Two­Nuclei (Binucleate) 

No Cysts!

Chilomastix mesnii  Flagella Trophozoite = Tear Drop Shape

Evident Nucleus
Has a Cystosome (Cell Mouth) 
Cysts = Lemon Shaped 

Balantidium coli Cilia  Trophozoites: Large & Oval 

26
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

EXPERIMENT 38: INTESTINAL NEMATODES

INTRODUCTION

I. SLIDES TO VIEW 
A. Adult Forms:
o Ascaris lumbricoides
o Trichuris trichiura
o Enterobius vermicularis
o Hookworms (Necator americanus, Ancylostoma ceylanicum, Ancylostoma caninum)
o Capillaria philippinensis
o Trichinella spiralis

B. Larva
o Strongyloides stercoralis
o Hookworms (Necator americanus, Ancylostoma ceylanicum) 
o Trichinella spiralis

C. Ova 
o Ascaris lumbricoides (Fertilized, Unfertilized, and Decorticated Ova)
o Trichuris trichiura
o Hookworms (Necator americanus, Ancylostoma ceylanicum)
o Capillaria philippinensis
o Enterobius vermicularis 

II. NEMATODES 
 Nematodes / Roundworms = comprise a Large Group of Helminths of simple structure
 Elongated, Unsegmented, Bilaterally Symmetrical 
 Separate Sexes 
 Males < Females 
 Males have one or two Copulatory Spicules 

27
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

EXAMINATION OF THE SLIDES

I. OVERALL CHARACTERISTICS
Ascaris Trichuris Enterobius Hookworms Strongyloides Capillaria
lumbricoi trichiur vermic stercoralis philippinensis
des a ularis
General Characteristics
Common  Giant Round  Whipworm  Pinworm /  Hookworms Threadworm 
Name Worm Seatworm
Diseases Ascariasis Trichuriasis Enterobiasis Ancylostomiasis Strongyloides Capillariasis
Ascaris Infection Trichocephaliasis Oxyuriasis Uncinariasis Strongyloidosis Pudoc’s Disease
Necatoriasis Cochin­China 

Habitat Small Intestines Large Intestines  Large Intestines Small Intestines Small Intestines  Small Intestines 

Heart­Lung Route Heart­Lung Route Heart­Lung Route
Infective  Embryonated Egg Embryonated Egg Embryonated Egg Filariform Larva Filariform Larva  Third Stage Larva 
Stage
Diagnosis  Eggs in Stool Eggs in Stool  Eggs in Perianal  Eggs in Feces Rhabditiform  Eggs in Feces 
Region Larva 
Transmission  Ingestion  Ingestion  Ingested Skin Penetration  Skin Penetration Ingestion 
Definitive  Man Man (Monkeys)  Man ONLY  Man Man Man
Host
Intermediate  NONE NONE  NONE  NONE  NONE Freshwater Fish 
Host 
Pathology  Loeffler’s  Rectal Prolapse Pruritus Ani Creeping Eruptions Larva Curens Borborygmi 
Syndrome MH­Anemia  Gurgling Stomach 
Pneumonia­Like

Treatment  Mebendazole Mebendazole Mebendazole Mebendazole Albendazole  Mebendazole

Pyrantel Pamoate Albendazole Pyrantel Pamoate Pyrantel Pamoate Thiabendazole Albendazol
Albendazole Albendazole Albendazole Thiabendazole

Morphology
Female Adult Pointed Ends  Blunt Posterior  Sharp Pointed  Parasitic  Atypical = 2­3 
End  Free­Living Rows
Typical = 1­Row

28
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
Male Adult  Curved Poserior  Curved Posterior  Curved Posterior Bursa to hold  No Parasitic Male  Long Spicular 
End Single Spicule Single Spicule  female Free­Living  Sheath
Retractile Sheet

Eggs  Fertilized =  Lemon /Barrel  D­Shaped 2­8  Cell Stage Peanut Shaped 

Embryo Shaped With Embryo 
Unfertilized =  Bipolar Mucus 
Granules Plug
Rhabditiform  ­­ ­­ ­­ Long Buccal  Short Buccal 
Larva  Capsule Capsule
Filariform  ­­ ­­ ­­ Pointed Tail   Forked Tail 
Larva
Distinct  3­Buccal Lips  Anterior Whip like Cephalic Alae Rounded Ends 
Features  Posterior Round

II. RHABDITIFORM & FILARIFORM LARVAE
HOOKWORMS STRONGYLOIDES

Rhabditiform Larva
Buccal Cavity Long Buccal Cavity  Short Buccal Cavity 
Genital Primordium  Small Genital Primordium  Large Genital Primodrium 

Filariform Larva
Tail  Pointed Tail Notched / Forked Tail
Esophagus  Shorter Esophagus Longer Esophagus 
EXPERIMENT 39: DIRECT FECAL SMEAR

INTRODUCTION

I. PRINCIPLES
 Direct Fecal Smear (DFS) = Simplest and most Rapid of all Fecal Examination Techniques 
 Recommended for Identification of Protozoan Trophozoites and Detection of Helminthic Infection 
 One Direct Fecal Smear Preparation contains approximately 2mg of Feces 
 Saline and / or Lugol’s Iodine Solution can be used to Emulsify the Fecal Material 

A. Unstained Film
­useful for the Study of Living Parasite Objects 
­ex) Motile Protozoan Trophozoites, Helminth Eggs, and Nematode Larva 

B. Iodine Film
­employed to study the Diagnostic Features of Protozoan Cysts 

II. PROCEDURE

29
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
 Place 1­2 Drops Saline at the Center of a Glass Slide
 With an Applicator Stick, poke at various portions of the Specimen (it with blood streaks, make sure you touch 
your applicator at this portion)
 Make a smooth uniform emulsion in the drop of saline by Rotatory Motion starting from the Center 
 Place the edge of Cover Slip in the slide so that it touches the edge of the water 
 Slowly lower the coverslip to prevent Air Bubbles 
 Examine slide (first with LPO, then with High Power)

ANSWERS TO QUESTIONS
 Give the Advantage of using Logol’s Iodine over Saline Solution in Direct Fecal Smear
o Lugol’s Iodine or D’Antoni’s Iodine helps visualize internal structures of Trophozoites and Cysts
o Because Stains will kill Motile Trophozoites, it is recommended that a Saline Smear and an Iodine Smear 
be prepared Separately

 Briefly Discuss the Advantages and Disadvantages of a Direct Fecal Smear 
o Advantages
 Allows the viewer to Detect Motile Protozoa
 Can view Helminth Eggs / Larvae, Protozoan Cysts, WBCs, Some Yeast 

o Disadvantages
 Should NOT be performed on Preserved Specimens
 Should be used for Fresh Stool Specimens that are very Soft or Liquid
 Cannot be examined using Oil Immersion 

EXPERIMENT 40: CELLULOSE TAPE PERIANAL SWAB

INTRODUCTION

I. PRINCIPLES
 Pinworm Infection (Enterobius vermicularis) is suspected in children with Perianal Itching, Insomnia, and 
Restlessness
 Evidence depends on recovery of Adult Worms, Eggs, or Both 

30
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
 They are RARELY Found in Stool Examination 
 Pinworm Infection can be best diagnosed by Swabbing Perianal Area using Graham’s Cellophane (Cellulose) 
Tape Method 

II. GRAHAM’S CELLOPHANE TAPE METHOD
 Highest Sensitivity and Specificity Results 
 Best to Collect Specimens in the Morning before the Patient bathes or defecates 

III. PROCEDURE
 Place a Strip of Cellulose Tape, Sticky Side Down, on a slide and on one end a Small Strip of Paper 
 Hold a Slide Against a Tongue Depressor one inch from the end and lift the tape away from the Slide
 Loop the Tape over the end of the Tongue Depressor to expose the Gummed Surface (Hold the Tape by the Paper 
Tab attached to its End Portion
 Hold the Tape and Slide against the Tongue Depressor 
 Press the gummed surface of the tape against several areas of the Perianal Area 
 Replace the tape on the slide and examine directly under the microscope for Pinworm Eggs or Taenia Eggs 

ANSWERS TO QUESTIONS
 Why is Early Morning the BEST Time to collect Specimens?
o The highest Positive Results and Greatest Number of Eggs can be detected in the morning
o Specimens are best obtained a few hours after the Person has retired (10­11pm) or the first thing in the 
morning before bowel movement or bath 

31
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

EXPERIMENT 41: KATO THICK SMEAR AND KATO­KATZ THICK SMEAR

 KATO THICK SMEAR  (CELLOPHANE THICK SMEAR)

I. PRINCIPLES
 Kato Thick Smear = Qualitative Method to detect Helminthic Infections (better than Direct Fecal Smear)
 Requires 50­60mg Fresh Fecal Material so that even Light Infection can be detected 
 Cellophane Strips used is Soaked in Glycerine­Malachite Green Solution for 24 hours before use 
 This method is very useful in Mass Examination of Common Soil­Transmitted Helminthic Infecitons

**Glycerine­Malachite Green Solution
o Glycerine = clears the Fecal Film to visualize the Helminth Eggs
o Malachite Green = Dye used to protect the eyes from Intense Light Needed in examining Thick Smear 
o Preparation: 500ml Distilled Water + 500ml Glycerine + 5ml 3% Malachite Green Solution in H 2O

**NOTE: This Method is NOT Suitable for Diarrheic Stool and CANT Detect Protozoan Cysts and Trophozoites

II. PROCEDURE
 Place 50­60mg of Stool at the Center of a Glass Slide and Cover with a Square Piece of Pre­Treated Cellophane
 Using a Rubber Stopper, press the Cellophane gently to spread the Stool Specimen evenly, approximating the 
Circumference of the Rubber Stopper
 Leave the prepared slide at room temperature for 10­20minutes – during this time, the Microscopic Field becomes
clear due to the action of Glycerine on the Stool Constituents 
 Examine the Slide (The slide should be examined after 10­20 minutes or within 1 hour after preparation 
 Allowing the slide to stand for Long Periods of time will cause Drying and Shells of Hookworm Ova will become
transparent and difficult to see 

III. ADVANTAGES VS DISADVANTAGES:
A. Advantage
o Time Saving, Simple, Economical
o Useful in Mass Examination of Common Soil­Transmitted Helminth Infections 

B. Disadvantages:
o Not Suitable for Diarrheic Stool
o Cannot be used to detect Protozoan Cysts & Trophozoites 

32
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

 KATO­KATZ THICK SMEAR  (MODIFIED THICK SMEAR) 

I. PRINCIPLES
 Kato­Katz Thick Smear is a Modification of Kato­Thick Smear Method
 It is a Quantitative Method for counting Helminthic Eggs
 The Number of Eggs per gram (NPEG) of Feces can be computed by Multiplying the Number of Eggs 
Observed per Thick Smear by 24

II. PROCEDURE
 Place about Half a Gram of Fecal Sample on Filter Paper 
 Place the wire net or screen on top of the fecal sample 
 Using a Flat­Sided Applicator Stick, scrape across the upper surface of the screen to sieve the Fecal Material
 Place a Template on a Clean Microscope Slide
 Transfer a small amount of Sieved Fecal Material into the hole of the Template and carefully fill the hole 
 Remove the Template carefully so that all the Fecal Material is left on the slide 
 Cover the Fecal Sample on the slide with a Glycerine­Malachite Soaked Cellophane Strip
 Invert the Slide and Press the Fecal Sample against the Cellophane gently on a Smooth Surface to spread evenly
 Let stand for about 20 minutes and examine  
 Count all eggs seen in the whole preparation 
 Multiply the Total Eggs counted by Factor 24 to express the Count as Eggs per Gram Feces (EPG)

**IMPORTANT Notes:
o The Wire­Mesh Net is used to Separate Fecal Material from the Large Debris which may affect the 
Approximate Fecal Weight and Clearing of Fecal Film by Glycerol

33
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

ANSWERS TO QUESTIONS
 Discuss the Advantages of Thick Smear over the Direct Fecal Smear
o Thick Smear can be used to Obtain an Accurate measure of the Number of Eggs in a given amount of 
Sample so that the Worm Burden can be inferred 
o However, Adult Schistosomes take weeks to months to pass eggs into the Feces 

 Give the Rationale of using Glycerine­Malachite Green Solution in these two procedures 
o It is a dye used to Dye the Smear and Protect the Eyes from the Intense Light that is required for the 
Microscopic Examination of the Specimen 

EXERCISE 42: INTESTINAL TAPEWORMS AND FLUKES

INTRODUCTION
 Cestoda (Tapeworms) & Trematoda (Flukes) of Phylum Platyhelminthes (or Flatworms) are Exclusively Parasitic

I. SLIDES TO VIEW
A. Trematodes 
1. Adult, Egg
 Fasciolopsis buski
 Echinostoma ilocanum
 Clonorchis sinensis
 Opisthorchis sp
 Fasciola hepatica / gigantica 

34
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

2. Adult
 Fasciola hepatica
 Metagonimus yokogaeai
 Haplorchis taichui

3. Metacercaria 

B. Cestodes 
1. Adult
 Taenia solium
 Taenia saginata 

2. Egg, Scolex, Mature / Gravid Proglottid of:
 Taenia solium
 Taenia saginata
 Diphyllobothrium latum
 Hymenolepis nana
 Hymenolepis diminuta
 Dipylidium caninum 

3. Cysticercus cellulosae

II. TREMATODES (Flukes)
 Have Conspicuous Suckers 
 Leaf­Shaped, Unsegmented, and Dorsoventrally Flattened 
 External Cuticle which most species may be covered with Scales, Spines, Tubercles, Ridges 
 They have Complex Life Cycles, involving one or more Intermediate Hosts 
 Transmission (Majority) = Eating Inadequately Cooked Second Intermediate Host containing the Infective 
Metacercariae

III. CESTODES (Tapeworms)
 Endoparasitic Worms with Elongated, Segmented, and Flat Body devoid of a Body Cavity
 Adult Tapeworm = Scolex (Head) + Neck + Proglottids that comprise the Strobila or Body of the Tapeworm
 Each proglottid contains one or two sets of Male and Female Reproductive Organs 

EXAMINATION OF SLIDES:

I. TREMATODES (FLUKES)

35
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

A. Intestinal Flukes (Trematodes)
Fasciolopsis buski Echinostoma ilocanum Heterophyes heterophyes Metagonimus yokogawai
Disease  Fasciolopsiasis Echinostomiasis Heterophyiasis  Mentagonimiasis 
Common Name Giant Intestinal Fluke Garrison’s Fluke None None 
Life Cycle Indirect Indirect Indirect Indirect
Definitive Host Humans, Hogs, Dogs Humans, Mammals,  Humans, Fish­Eating  Humans, Fish­Eating 
Birds Mammals Mammals 
1st Intermediate Planorbid Snails Planorbid Snails  Brakish­Water Snails Snails
2nd Intermediate Water Plants Snails (Pila luzonica) Freshwater Fish Freshwater Fish 
Habitat Small Intestines  Small Intestines Small Intestines Small Intestines 
Infective Stage Metacercaria Metacercaria Metacercaria Metacercaria 
Diagnostic Stage Eggs in Feces  Eggs in Feces  Eggs in Feces Eggs in Feces

Morphology
Testes Dendritic  Lobed Lobate Oval
Tandem  Tandem Side by Side (Opposite) Obliquely Side by Side 
Suckers Oral + Ventral Oral + Ventral  Oral + Ventral + Genital Oral + Ventral + Genital
Egg Unembryonated Unembryonated Embryonated Embryonated
Operculated  Operculated  Operculated Operculated 

Unique Char. Vitellaria Lateral to  Surrounded by Crown of  Fan­Shaped Vitellaria

the Ceca  Spines 

B. Liver Flukes (Trematodes) 
Fasciola spp Clonorchis sinensis Opisthorchis spp

General Characteristics
Disease  Fascioliasis Clonorchiasis Opisthorchiasis 
Liver Rot
Pharyngeal Fascioliasis
Halzoun 

Common Name  Sheep Liver Fluke (F. hepatica) Chinese / Oriental Liver Fluke  Cat Liver Fluke 

Liver Fluke (F. gigantica)

Life Cycle Indirect  Indirect Indirect

Infective Stage Metacercariae  Metaceracariae Metaceracariae
Definitive Host  Man, Sheep, Cow, Deer, etc Man and Dog Man and Dog
Diagnostic Stage Ova in Feces Ova in Feces Ova in Feces
1st Intermediate  Lymneid Snail  Planorbid (Operculate) Snails Planorbid Snails 
2nd Intermediate Water Plants  Freshwater Fish (Cyprinoid) Freshwater Fish (Cyprinoid)
Reservoir Host None None
Habitat  Bile Ducts & Biliary Passages Bile Ducts & Biliary Passages Bile Ducts & Biliary Passages

Morphology
Shape Leaf Shape Oblong, Lanceolate Shaped Oblong, Lanceolate Shaped
Suckers  Oral < Ventral  Oral > Ventral Oral = Ventral 
Testes Dendritic; Tandem Branched; Tandem  Lobate; Oblique 
Ovary Fan­Shaped Oval  Oval

36
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
Egg Unembryonated  Embryonated Embryonated 
Intestinal Ceca Branched  Simple Simple
Vitellaria Branched Diffuse, Irregularly Distributed Cluster / Compressed Follicles
Unique Feature Cephalic Cone / Shoulder  Eggs smaller than C. sinensis

II. CESTODES 
Taenia solium Taenia saginata Diphyllobothrium Hymenolepis nana Hymenolepis Dipylidium
latum diminu caninum
ta

General Characteristics
AKA Pork Tapeworm  Beef Tapeworm  Broad­Fish­Tapeworm Dwarf Tapeworm  Rat Tapeworm  Dog Tapeworm 
Disease Taeniasis  Taeniasis  Diphyllobothriasis  Hymenolepiasis  Hymenoleipasis  Dipylidiasis 
(Adult) (Adult)
Cysticercosis  Sparganosis 
(Larva) (Larva)

Habitat Small Intestines  Small Intestines  Small Intestines  Small Intestines  Small Intestines Small Intestines 

Larval Form  Cysticercus  Cysticercus bovis Plerocercoid Larva  Cysticercoid  Cysticercoid  Cysticercoid 
cellulosae
Infective  Cysticercus  Cysticercus  Plerocercoid Larva  Embryonated Egg Cysticercoid  Cysticercoid 
Stage Egg Procercoid Larva 
Diagnostic  Gravid Proglottids Gravid Proglottids Unembryonated Egg  Embryonated Egg  Embryonated Egg Embryonated 
Stage Embryonated Egg  Embryonated Egg  (Packets) 
Definitive  Man Only Man Only  Man, Dog, Cat, etc Man, Mice, Rats  Rat, Mouse, Man  Dogs, Cats, Man
Host
Intermediate  Pig  Cattle  First: Copepod NONE Required  Fleas, Beetle  Fleas, Louse 
Host Second: Fish  (Rat Fleas) 
Transmission Ingestion  Ingestion  Ingestion  Ingestion  Ingestion Ingestion

Morphology
Scolex Globular  Pyriform  Spatulate / Almond Globular  Club­Shaped Rows of Spine
Armed Rostellum No Rostellum  Bothria (Grooves)  Retractile.Rostellum Unarmed /  Four Suckers  
Four Suckers Four Suckers Grooves  Four Suckers   Rudiment
Rostellum
Mature  Trilobed Ovary Bilobed Ovary Bilobed Ovary  Bilobed Ovary Bilobed Ovary Pumpkin­Seed 
Segment More Testes  Broader > Long 3­Testes  3­Testes Like
Rosette Like Uterus  2­Sets of Repro. 
Organ 
Gravid  <13 Branches  >13 Branches  Saccular Uterus  Membranous 
Segment Egg Masses  Capsules
Egg Embryonated  Embryonated  Unembryonated  Embryonated  Embryonated  Embryonated 
(Packets)
Distinct  Longest Tapeworm  Egg Bigger than  Rice Grain 
Feature H.nana Appearance

37
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

ANSWERS TO QUESTIONS

I. CLASSIFICATION OF FLUKES
A. Classification of Flukes According to Size (Those in Bold Letters are the Intestinal Flukes)
1. Large Flukes (2­8cm)
 Fasciolopsis buski (largest) 
 Fasciola spp 

2. Medium Fluke (1­2cm)
 Echinostoma ilocanum
 Clonorchis sinensis
 Opisthorchis spp 
 Paragonimus westermanii

3. Small Flukes (<1cm) 
 Heterophyes heterophyes
 Metagonimus yokogawai
 Phanerophsolus bonnie
 Haplorchis spp

B. Classification of Flukes According to Second Intermediate Host 
1. Water Plant­Borne
 Fasciolopsis buski
 Fasciola spp.

2. Snail­Borne
 Echinostoma ilocanum

38
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 

3. Fish­Borne
 Heterophyes heterophyes
 Metagonimus yokogawai
 Clonorchis sinensis
 Opisthorchis spp

C. Classification of Trematode Eggs
1. Large Unembryonated Eggs (100­160u)
 Fasciolopsis buski
 Echinostoma ilocanum
 Fasciola spp

2. Medium Unembryonated Eggs (70­90u)
 Paragonimus westermanii

3. Small Embryonated Eggs (23­32u)
 Heterophyes heterophyes
 Metagonimus yokogawai
 Clonorchis spp
 Opisthorchis spp

II. SCOLICES OF THE DIFFERENT SPECIES:
CESTODE TYPE OF SCOLEX SCOLEX
Taenia solium Globular Sucking Disks (4) 
Rostellum with Chitinous Hooks
Taenia saginata Pyriform  Sucking Disks (4) 
Diphyllobothrium latum Elongated / Spatulate  2­Elongated Suctorial Grooves = Bothria 

MICROBIOLOGY PRACTICAL EXAM: PARASITOLOGY

INTRODUCTION:
INTRODUCTION TO PARASITOLOGY

EXPERIMENT 24: 
LUNG FLUKES

39
GALANG, JIREH  MASICLAT, RMT
DEPARTMENT OF PATHOLOGY
MOLECULAR MEDICINE 
EXPERIMENT 27: 
SPOROZOANS

EXPERIMENT 28: 
BLOOD & TISSUE FLAGELLATES

EXPERIMENT 29: 
FILARIAL WORMS

EXPERIMENT 30: 
SCHISTOSOMA (BLOOD FLUKES)

EXPERIMENT 36: 
INTESTINAL AMOEBA

EXPERIMENT 37: 
INTESTINAL FLAGELLATES & CILIATE

EXPERIMENT 38: 
INTESTINAL NEMATODES

EXPERIMENT 39: 
DIRECT FECAL SMEAR

EXPERIMENT 40: 
CELLULOSE TAPE PERIANAL SWAB

EXPERIMENT 41:
KATO THICK SMEAR AND KATO­KATZ THICK SMEAR

EXERCISE 42: 
INTESTINAL TAPEWORMS AND FLUKES

40