Jurnal Natural Science Maret 2016 Vol. 5.(1) p.......-.........

Optimalisasi Penerapan Bioteknologi dalam Produksi Bioetanol dari Sagu

(Metroxylon sp.)

(Optimization of the Biotechnology Application in Production of Bioethanol from

Sago (Metroxylon sp.))

Sayu Nila Widayanti1*), Mappiratu1), Jaya Hardi2)

1)
Lab. Penelitian, Jurusan Kimia Fakultas MIPA, Universitas Tadulako
2)
Lab. Kimia Fisik & Anorganik, Jurusan Kimia Fakultas MIPA, Universitas Tadulako

ABSTRACT

The research about optimization of bioethanol production from sago has been done. The optimization
covered the influence of β-amylase enzyme such as concentration and hydrolysis time to produced
glucose from sago starch hydrolysis, the fermentation time factor on levels of bioethanol production.
Statistically, it was designed by using a completely randomized design (CRD) with three levels of
replications. Variation of β-amylase enzyme concentration at 0; 0.05; 0.06; 0.07; 0.08% (v/v) with
hydrolysis time at 1; 1.5; 2; 2.5; 3 hours respectively. The glucose levels were analyzed using DNS
method. The results showed the enzyme concentration of 0.08 % with a fixed hydrolysis time (1 hour)
produces glucose levels are highest at 9.25 % and hydrolysis time of 3 hours with a fixed enzyme
concentration (0.08% v/v) produces glucose levels are highest at 11.41 %. The variations of
fermentation time at 3; 4; 5; 6; 7 days, whereas bioethanol product was purified by distillation method
and measured by alcohol meter. The results showed that highest bioethanol level at 5.75% with 7 days
of fermentation time.

Keywords : Sago, β-amylase enzyme, Hydrolysis, Glucose, Fermentation, Bioethanol.

ABSTRAK

Telah dilakukan penelitian tentang optimalisasi penerapan bioteknologi dalam produksi bioetanol dari
sagu. Optimalisasi mencangkup pengaruh konsentrasi enzim β-amilase dan waktu hidrolisis terhadap
glukosa yang dihasilkan dari hidrolisis pati sagu serta pengaruh waktu fermentasi terhadap kadar
bioetanol yang dihasilkan. Penelitian ini dirancang menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL)
dengan tiga taraf ulangan. Variasi konsentrasi enzim β-amilase dirancang dengan 5 taraf (0; 0,05; 0,06;
0,07; 0,08% (v/v)) dan waktu hidrolisis (1; 1,5; 2; 2,5; 3 jam) dimana kadar glukosa yang dihasilkan
dianalisis menggunakan metode DNS. Hasil penelitian menunjukkan konsentrasi enzim 0,08% (v/v)
dengan waktu hidrolisis tetap (1 jam) menghasilkan kadar glukosa tertinggi yaitu sebesar 9,25% dan
waktu hidrolisis 3 jam dengan konsentrasi enzim tetap (0,08% (v/v)) menghasilkan kadar glukosa
tertinggi yaitu sebesar 11,41%. Variasi waktu fermentasi dengan 5 taraf (3; 4; 5; 6; 7 hari) dimana
bioetanol yang dihasilkan dimurnikan dengan metode destilasi dan diukur dengan alkohol meter. Hasil
penelitian menunjukkan waktu fermentasi tertinggi diperoleh pada hari ke-7 dengan kadar bioetanol
5,75%.

Kata kunci : Sagu, Enzim β-amilase, Hidrolisis, Glukosa, Fermentasi, Bioetanol.

*) Corespinding author: [email protected]

Jurnal Natural Science Maret 2016 Vol. 5.(1) p.......-..........

LATAR BELAKANG dengan perlakuan agitasi penuh dan 21,21±2,83

g/l pada agitasi yang dihentikan pada jam ke-6
Indonesia mempunyai potensi sagu dengan menggunakan enzim alfa amilase dan
nasional yang sangat besar. Khusus untuk glukoamilase. Handoko dan Miryanti (2009),
daerah Sulawesi Tengah, seperti Buol dan memproduksi bioetanol dari sagu menggunakan
Morowali sagu hanya dijadikan sebagai enzim glukoamilase dan alfa amilase dengan
makanan pokok. Alternatif lain, sagu dapat hasil yang lebih tinggi dibandingkan dengan
digunakan sebagai bahan baku industri. Salah hasil Rafida (2004) dan Yuniarsih (2009) yaitu
satu industri tersebut adalah industri bioetanol 25 mL/200 g tepung yaitu sekitar 12,5 %.
(Handoko dan Miryanti, 2009). Perlakuan yang diterapkan oleh Handoko dan
Pembuatan bioetanol dari bahan yang Miryanti masih terbatas pada kekentalan dan
mengandung pati tinggi diawali dengan proses jumlah enzim glukoamilase, belum dikaji
hidrolisis untuk memperoleh glukosa. Proses waktu hidrolisis dan penggunaan beta amilase
hidrolisis amilosa dan amilopektin dari pati serta waktu fermentasi. Penelitian ini bertujuan
dapat dilakukan melalui metode enzimatis untuk mengetahui kondisi optimum hidrolisis
seperti menggunakan enzim α-amilase, β- pati sagu dan fermentasi bioetanol dari hasil
amilase dan glukoamilase yang akan hidrolisis pati sagu.
menghasilkan sakarida dengan rantai yang
lebih pendek (Mappiratu dan Nurhaeni, 2013). BAHAN DAN METODE
Enzim alfa amilase bersifat endoenzim yang
dapat memutus ikatan glikosidik secara acak Bahan dan Peralatan
membentuk maltosa dan dekstrin. Enzim beta
amilase dan glukoamilase bersifat eksoenzim Bahan yang digunakan pada penelitian
yang dapat memutus ikatan glikosidik dari ini yaitu tepung sagu (Metroxylon sp.) yang
bagian ujung molekul membentuk glukosa diperoleh dari Desa Toinasa Kabupaten Poso,
(Bastian, 2011). akuades, enzim alfa dan beta amilase murni
Tepung sagu dikonversi menjadi gula (Lab. Kimia FMIPA UNTAD, Indonesia), ragi,
melalui proses likuifikasi dan sakarifikasi. NaOH 0,1 N, HCl 0,1 N, CaCl2 1000 ppm,
Enzim alfa amilase ditambahkan pada tahap pereaksi DNS (dinitrosalisilat), pupuk NPK dan
likuifikasi sedangkan enzim beta Urea.
amilase/glukoamilase ditambahkan pada tahap
sakarifikasi. Hasil dari proses likuifikasi yaitu Alat yang digunakan yaitu ayakan
berupa maltosa dan dekstrin akan dihidrolisis ukuran 60 mesh, alkohol meter (Richter-
lebih lanjut oleh enzim beta amilase pada Tralles, Jerman), waterbath (memmert,
proses sakarifikasi menghasilkan glukosa yang Jerman), hotplate (Cole Parmer, USA),
selanjutnya digunakan pada proses fermentasi serangkaian alat fermentor, spektrofotometer
menjadi bioetanol (Pratiwi dan Muliapakarti, UV-Visibel (PerkinElmer), seperangkat alat
2011). destilasi dan alat-alat gelas yang umum
Penelitian produksi bioetanol dari sagu digunakan di Laboratorium Kimia.
secara kimiawi telah dilakukan oleh Rafida
(2004), namun hasilnya belum memuaskan Metode
sebab kadar bioetanol yang dihasilkan dari hasil
Persiapan pati sagu
hidrolisis dengan HCl (asam klorida) hanya
Sagu disaring menggunakan kain
sekitar 3,87%. Bioetanol juga telah dihasilkan
saring Wifon untuk memisahkan kotoran-
oleh Yuniarsih (2009), dari dekstrin dan sirup
kotoran yang terikut pada sagu. Larutan
glukosa sagu dengan hasil 26,96±1,80 g/l
kemudian didiamkan selama beberapa menit
Jurnal Natural Science Maret 2016 Vol. 5.(1) p.......-..........

hingga semua pati sagu mengendap, lalu diinkubasi pada suhu ruang dengan waktu
didekantasi dan dikeringkan di bawah sinar masing-masing 3 hari (C1), 4 hari (C2), 5 hari
matahari. Pati kering diblender kering dan (C3), 6 hari (C4) dan 7 hari (C5) dengan
diayak dengan ayakan ukuran 60 mesh untuk pengulangan sebanyak tiga kali. Produk
memperoleh tepung pati yang halus dan fermentasi dipisahkan massa sel dengan cara
selanjutnya digunakan dalam penelitian penyaringan yang dilanjutkan dengan destilasi.
(Rafida, 2004). Alkohol yang dihasilkan dari proses destilasi
diukur volumenya dan ditentukan kadarnya
Hidrolisis Pati Sagu secara Enzimatis menggunakan alkohol meter (Rafida, 2004).
Larutan CaCl2 1000 ppm dibuat
dengan cara melarutkan CaCl2.2H2O sebanyak Penetapan Kadar Glukosa dengan Metode
1 g ke dalam 1000 mL aquadest. Tepung sagu DNS
sebanyak 5 g dilarutkan ke dalam 50 mL
Sebanyak 1 mL larutan gula hasil
larutan CaCl2 1000 ppm. pH diatur hingga pH 7
hidrolisis dimasukkan ke dalam tabung reaksi
dengan NaOH 0,1 N. Suspensi pati dimasukkan
dan ditambahkan dengan 3 mL pereaksi DNS,
dalam erlenmeyer di atas waterbath berisi air.
selanjutnya dipanaskan pada penangas air
Enzim α-amilase ditambahkan sebanyak 0,09%
mendidih selama 5 menit kemudian
(v/v) sambil diaduk. Campuran dipanaskan
didinginkan pada suhu ruang. Larutan
sampai 90oC selama 2,5 jam. Campuran
dipindahkan ke dalam kuvet, absorbansi diukur
didinginkan dengan air dingin sampai suhu
pada panjang gelombang maksimum 550 nm.
30-40oC. pH diatur sampai pH 3-4 dengan
Kadar gula ditentukan dengan menggunakan
HCl 0,1 N lalu dipanaskan pada air
persamaan regresi absorbansi larutan standar
mendidih untuk menghentikan aktivitas enzim.
(Daud dkk., 2012).
Selanjutnya suhu diatur hingga mencapai 60oC
lalu enzim β-amilase ditambahkan sesuai Analisis Kadar Bioetanol
perlakuan (0% (A1), 0,05% (A2), 0,06% (A3), Kadar alkohol dalam produk destilasi
0,07% (A4) dan 0,08% (A5) v/v). Larutan ditentukan dengan metode Brix-Hidrometer.
dibiarkan pada suhu tersebut selama 1 jam (B1), Sampel hasil destilasi dimasukkan ke dalam
1,5 jam (B2), 2 jam (B3), 2,5 jam (B4) dan 3 jam gelas ukur 100 ml, kemudian dimasukkan alat
(B5). Selanjutnya larutan dipanaskan hingga alkohol meter dan kadarnya ditentukan
mendidih untuk menginaktifasi enzim. Larutan berdasarkan skala alkohol meter (Rafida,
didinginkan hingga suhu ruang, kemudian 2004).
volume gula hasil hidrolisis diukur (Modifikasi
Metode Chafid dan Khusumawardani, 2010). HASIL DAN PEMBAHASAN

Fermentasi Glukosa Menjadi Bioetanol Glukosa Hasil Hidrolisis Pati dengan α dan
Konsentrasi enzim β-amilase dan β-amilase
waktu hidrolisis yang terbaik digunakan dalam Hasil pengukuran kadar glukosa
proses fermentasi. Pelaksanaan fermentasi dengan metode DNS pada berbagai konsentrasi
sebagai berikut: gula hasil hidrolisis dengan enzim β-amilase dapat dilihat pada Gambar 1.
konsentrasi enzim β-amilase sebanyak 0,08%
(v/v) dan waktu hidrolisis 3 jam pada pH 4
sebanyak 200 ml, ditambahkan ragi roti 2 g,
urea 2 g, pupuk NPK 0,2 g, kemudian
dimasukkan ke dalam fermentor yang telah
dirangkai dan disterilisasi. Campuran
Jurnal Natural Science Maret 2016 Vol. 5.(1) p.......-..........

10 Hasil pengukuran kadar glukosa

Rendemen Glukosa (%)

9,25 dengan variasi waktu hidrolisis yaitu 1 jam, 1,5
8 7,58 jam, 2 jam, 2,5 jam dan 3 jam dapat dilihat
6 6,17 6,24 pada Gambar 2.

4 4,45
12
11,41

Rendemen Glukosa (%)

2 10
9,34
8 8,58
0 6,99 7,05
0 0,05 0,06 0,07 0,08 6
Konsentrasi Enzim β-amilase 4
(% v/v) 2
Gambar 1. Kurva hubungan konsentrasi enzim 0
β-amilase (% v/v) dengan % 1 1,5 2 2,5 3
rendemen glukosa yang dihasilkan Waktu Hidrolisis (Jam)

Gambar 2. Kurva hubungan waktu hidrolisis

Konsentrasi enzim β-amilase
(jam) dengan % rendemen glukosa
divariasikan untuk mendapatkan konsentrasi
yang dihasilkan
enzim terbaik yang menghasilkan glukosa
tertinggi yaitu mulai dari 0%, 0,05%, 0,06%, Rendemen glukosa terendah (6,99%)
0,07%, dan 0,08% (v/v) dengan waktu terdapat pada penggunaan waktu hidrolisis 1
hidrolisis tetap (1 jam). jam dan waktu hidrolisis 3 jam menghasilkan
Hasil yang diperoleh menunjukkan rendemen glukosa tertinggi (11,41%) dengan
semakin tinggi penggunaan enzim β-amilase, konsentrasi enzim 0,08% (v/v). Pada kurva
semakin tinggi pula konsentrasi glukosa yang memperlihatkan bahwa terdapat kemungkinan
dihasilkan. Hal ini disebabkan karena semakin rendemen glukosa meningkat jika waktu
banyak sisi aktif enzim yang membentuk hidrolisis dinaikkan. Hal ini dipengaruhi lama
kompleks dengan substrat (pati) sehingga waktu kontak antara enzim dan substrat pati
semakin banyak pula produk (glukosa) yang membentuk kompleks enzim substrat (ES),
terbentuk. Konsentrasi glukosa terendah yang mengakibatkan semakin banyak terjadi
(4,45%) ditemukan pada penggunaan enzim β- pemotongan rantai pati untuk membentuk
amilase 0%, dan tertinggi (9,25%) terdapat produk glukosa. Saryono (2011) menyatakan
pada penggunaan enzim β-amilase 0,08% (v/v). hal yang sama, yakni semakin lama waktu
Hasil yang diperoleh lebih rendah dari hidrolisis semakin tinggi rendemen glukosa
Yunianta dkk. (2010), yang melaporkan bahwa yang dihasilkan.
hasil hidrolisis secara sinergis pati garut pada Hasil yang diperoleh lebih rendah dari
produksi sirup glukosa menggunakan enzim α- Jamilatun dkk. (2004), yang melaporkan bahwa
amilase yaitu sebesar 24,26% dengan hasil terbaik pengambilan glukosa dari tepung
konsentrasi enzim 0,065% (b/b) dan lama biji nangka dengan cara hidrolisis enzimatik
likuifikasi 120 menit. Hal ini kemungkinan kecambah jagung adalah 43,50% dengan waktu
disebabkan karena enzim β-amilase yang hidrolisis 20 jam. Hal ini disebabkan pada
digunakan aktivitasnya rendah. hidrolisis biji nangka menggunakan waktu
Glukosa dengan rendemen tertinggi hidrolisis yang lebih lama. Pada waktu
pada variasi konsentrasi enzim β-amilase hidrolisis tertentu maka kerja enzim akan
diterapkan untuk penentuan waktu hidrolisis mencapai maksimum sehingga produk
terbaik. (glukosa) yang dihasilkan tidak berubah secara
Jurnal Natural Science Maret 2016 Vol. 5.(1) p.......-..........

signifikan. Glukosa dengan rendemen tertinggi 48 jam, 72 jam, 96 jam, dan 120 jam yaitu
selanjutnya digunakan untuk penentuan waktu berturut-turut 2,4%, 2,67%, 2,93% dan 3,87%.
fermentasi terbaik untuk memperoleh kadar Hal ini sesuai dengan hasil bioetanol yang
bioetanol tertinggi. dihasilkan yaitu semakin tinggi waktu
fermentasi maka semakin tinggi pula kadar
Kadar Bioetanol pada Berbagai Waktu bioetanol karena waktu kontak antara khamir
Fermentasi Saccharomyces cerevisiae dengan sumber
karbon (glukosa) semakin lama sehingga
Fermentasi dilakukan dengan ragi roti
menghasilkan bioetanol yang lebih banyak.
sebagai sumber khamir yaitu Saccharomyces
cerevisiae sebanyak 2 g dalam 200 mL glukosa Berdasarkan hasil penelitian yang
hasil hidrolisis pati sagu. diperoleh dapat disimpulkan bahwa:
Hasil pengukuran kadar bioetanol 1. Konsentrasi enzim β-amilase 0,08% (v/v)
dengan variasi waktu fermentasi 3, 4, 5, 6, dan menghasilkan rendemen glukosa tertinggi
7 hari dapat dilihat pada Gambar 3. pada hidrolisis pati sagu yaitu 9,25%.
2. Waktu hidrolisis 3 jam menghasilkan
7 glukosa tertinggi pada hidrolisis pati sagu
Kadar Bioetanol (%)

6 5,75 yaitu 11,41%.

5 3. Waktu fermentasi 7 hari menghasilkan
4 4,37
3,88 kadar bioetanol tertinggi yaitu 5,75%.
3 2,72
2 2,34
1 DAFTAR PUSTAKA
0
3 4 5 6 7 Bastian, F. 2011. Teknologi Pati dan Gula.
Waktu Fermentasi (Hari) Hibah Penulisan Buku Ajar Bagi
Tenaga Akademik. Universitas
Hasanuddin. Makassar.
Gambar 3. Kurva hubungan waktu fermentasi
Chafid, A. dan Kusumawardhani, G. 2010.
(hari) dengan kadar bioetanol yang
Modifikasi Tepung Sagu menjadi
dihasilkan (%)
Maltodekstrin menggunakan Enzim α-
Peningkatan waktu fermentasi amilase. Skripsi. Universitas
meningkatkan kadar bioetanol yang dihasilkan. Diponegoro. Semarang.
Hal ini disebabkan waktu kontak antara khamir Daud, M., Safii, M. dan Syamsu, K. 2012.
Saccharomyces cerevisiae dengan sumber Biokonversi Bahan Berlignoselulosa
karbon (glukosa) semakin lama sehingga Menjadi Bioetanol Menggunakan
menghasilkan bioetanol yang lebih banyak. Aspergillus niger Dan Saccharomyces
Kadar bioetanol tertinggi (5,75%) ditemukan cereviceae. Jurnal Perennial. 8 (2) : 43
pada penggunaan waktu fermentasi 7 hari, dan – 51.
kadar bioetanol terendah (2,34%) terdapat pada Handoko, T. dan Miryanti, A. 2009. Pengaruh
penggunaan waktu fermentasi 3 hari. Terdapat Ukuran Baume, Jenis dan Jumlah
peluang kadar bioetanol meningkat dengan Enzim Glukoamilase terhadap
meningkatnya waktu fermentasi. Perolehan Bioetanol dari Sagu.
Hasil yang diperoleh lebih tinggi dari Laporan Penelitian. Fakultas Teknologi
Rafida (2004), yang melaporkan bahwa hasil Industri Universitas Katolik
produksi bioetanol dari sagu secara kimiawi Parahyangan. Bandung.
dengan waktu fermentasi yang digunakan yaitu
Jurnal Natural Science Maret 2016 Vol. 5.(1) p.......-..........

Jamilatun, S., Sumiyati, Y. dan Handayani,

R.N. 2004. Pengambilan Glukosa dari
Tepung Biji Nangka dengan Cara
Hidrolisis Enzimatik Kecambah
Jagung. Jurnal. Program Studi Teknik
Kimia, Fakultas Teknologi Industri,
Universitas Ahmad Dahlan.
Yogyakarta.
Mappiratu dan Nurhaeni. 2013. Penuntun
Praktikum Enzim Pangan. Jurusan
Kimia FMIPA Universitas Tadulako.
Palu
Pratiwi, D. B. dan Muliapakarti, R. 2011.
Tugas Akhir Perancangan Pabrik
Etanol dari Singkong Kering (Gaplek)
dengan Proses Enzimatis Kapasitas
140 KL/Tahun. Skripsi. Jurusan
Teknik Kimia Fakultas Teknik
Universitas Sebelas Maret. Surakarta.
Rafida. 2004. Biosintesis Bioetanol dari Pati
Sagu menggunakan Inokulum Ragi
Roti. Skripsi. Universitas Tadulako.
Palu.
Saryono. 2011. Biokimia Enzim. Nuha Medika.
Jogjakarta.
Yunianta, Sulistyo,T., Apriliastusi, Estiasih, T.,
dan Wulan, S.N. 2010. Hidrolisis
Secara Sinergis Pati Garut (Marantha
arundinaceae L.) Oleh Enzim α-
Amilase, Glukoamilase, dan
Pullulanase Untuk Produksi Sirup
Glukosa. Jurnal Teknologi Pertanian.
11 (2) : 78 – 86.
Yuniarsih, F. N. 2009. Pembuatan Bioetanol
Dari Dekstrin dan Sirup Glukosa Sagu
(Metroxylon sp.) menggunakan
Saccharomyces cerevisiae var.
ellipsoideus. Skripsi. Institut Pertanian
Bogor. Bogor.