Total Protein

C Método colorimétrico para la determinación de proteínas

totales en suero y plasma

SIGNIFICACION CLINICA Los Reactivos Provistos son corrosivos. RH315 + H320:

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, Provoca irritación cutánea y ocular. H314: Provoca quema-
ampliamente distribuidos en el organismo, esenciales para la duras graves en la piel y lesiones oculares graves. P262:
vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte y Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. P305 +
aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS:
factores de coagulación, etc. Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios minutos.
En el plasma, las proteínas contribuyen a mantener el vo- Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir
lumen del fluido circulante, transportan sustancias relativa- enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CONTACTO CON
mente insolubles y actúan en la inactivación de compuestos LA PIEL: Lavar con agua y jabón abundantes. P280: Llevar
tóxicos y en la defensa contra agentes invasores. guantes/prendas/gafas/máscara de protección.
La determinación de proteínas totales es útil para el monitoreo Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de cambios ocasionados por diversos estados de enfermedad. de trabajo en el laboratorio de química clínica.
En condiciones patológicas como pérdidas renales, desnutri- Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
ción, infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse hipo- acuerdo a la normativa local vigente.
proteinemias, mientras que en otras como mieloma múltiple,
endocarditis bacteriana y hemoconcentración de diversos ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
orígenes, (ej.: deshidratación) se observan hiperproteinemias. ALMACENAMIENTO
Reactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC)
FUNDAMENTOS DEL METODO hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
En medio alcalino, los enlaces peptídicos de las proteí- Una vez abiertos, no deben permanecer destapados ni fuera
nas reaccionan con el ión cúprico formando el complejo del refrigerador por períodos prolongados.
violeta-púrpura del biuret. La intensidad de absorción de Puede observarse una ligera alteración del color del Reactivo
este complejo a 540 nm es directamente proporcional a la B sin cambios en el desempeño del mismo.
concentración de las proteínas totales en la muestra. Evitar contaminaciones.
El tartrato de sodio y potasio presente en el reactivo, inhibe Proteger de la luz.
la formación de hidróxido de cobre, evitando así su preci-
pitación. El ioduro de potasio previene la reducción del ión MUESTRA
cúprico a óxido cuproso. Suero o plasma
Medio alcalino a) Recolección: obtener la muestra de la manera usual.
Proteínas (enlace peptídico) + Cu b) Aditivos: en caso de emplear plasma como muestra, se
+2

complejo Cu-Proteína recomienda el uso de heparina o EDTA (Anticoagulante W

de Wiener lab.) como anticoagulantes.
REACTIVOS PROVISTOS c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan
A. Reactivo A: hidróxido de sodio, 600 mmol/L; tartrato interferencias por dextrán hasta 30 g/L, hemoglobina hasta
sódico-potásico 127,6 mmol/L. 750 mg/dL, triglicéridos hasta 4000 mg/dL, ni bilirrubina hasta
B. Reactivo B: hidróxido de sodio, 600 mmol/L; tartrato 20 mg/dL (200 mg/L).
sódico-potásico 127,6 mmol/L; ioduro potásico 120 mmol/L; Las muestras que poseen precipitados deben ser centrifu-
sulfato de cobre 48,9 mmol/L. gadas previo a su ensayo.
Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
REACTIVOS NO PROVISTOS drogas en el presente método.
- Calibrador A plus de Wiener lab. d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la
- Solución fisiológica (NaCl 9 g/L). muestra debe ser preferentemente fresca. Puede conser-
varse hasta una semana en refrigerador (2-10oC) o 6 meses
INSTRUCCIONES PARA SU USO a -20oC.
Reactivos Provistos: listos para usar.
MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
PRECAUCIONES - Micropipetas para medir los volúmenes indicados.
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro". - Analizador automático

867029122 / 00 p. 1/9
 de otras marcas comerciales pueden obtenerse valores dife-
PROCEDIMIENTO rentes al rango especificado, dado que los mismos dependen
(Analizador automático) del método o sistema utilizado.
A continuación se detalla un procedimiento general para
Total Protein en un analizador automático. Cuando se PERFORMANCE
implemente la técnica en un analizador en particular, siga a) Precisión: basado en el protocolo EP5-A2 del CLSI, se
las instrucciones de trabajo del mismo. En una cubeta obtuvieron los siguientes coeficientes de variación como
mantenida a la temperatura elegida, colocar: estimadores de la precisión intraensayo (CVi) y total (CVt):
Muestra o Calibrador 3 uL Nivel CVwr CVt
Reactivo A 120 uL 4,4 g/dL 0,36% 0,96%
6,7 g/dL 0,65% 1,16%
Incubar durante 120 segundos a 37oC. Leer a 540 nm 7,3 g/dL 0,57% 0,88%
de longitud de onda primaria y 700 nm de longitud de
onda secundaria. b) Linealidad: la linealidad se evaluó utilizando un protocolo
basado en el EP6-A de la CLSI. La reacción es lineal hasta
Reactivo B 40 uL
12 g/dL. Para valores superiores, diluir la muestra 1+4 partes
Incubar durante 300 segundos a 37oC. Leer a 540 nm con solución fisiológica (NaCl 9 g/L), repetir la determinación
de longitud de onda primaria y 700 nm de longitud de y multiplicar el resultado por el factor de dilución.
onda secundaria. c) Límite de cuantificación: se evaluó utilizando un protoco-
Los analizadores Wiener lab. calculan automáticamente lo basado en el EP17-A de la CLSI. El límite de cuantificación
la concentración del analito de cada muestra. es de 2,5 g/dL.

PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS

CALIBRACION Para las instrucciones de programación consultar las adap-
El Calibrador A plus es procesado de la misma manera que taciones correspondientes a los analizadores de la línea
las muestras y a partir de él se calcula el factor correspon- Wiener lab. para el método Total Protein. Para la calibración
diente. Los valores de concentración de proteínas totales son debe utilizarse Calibrador A plus de Wiener lab.
variables lote a lote. Consultar los valores en el manual de
instrucciones de Calibrador A plus de Wiener lab. PRESENTACION
3 x 125 mL Reactivo A
METODO DE CONTROL DE CALIDAD 1 x 125 mL Reactivo B
Procesar 2 niveles de un material de control de calidad (Cód. 1999736)
(Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidas
de proteínas totales, con cada determinación. BIBLIOGRAFIA
- Doumas, B; Bayse, D; Carter, R; Peters, T schaffer, R.- A
VALORES DE REFERENCIA candidate reference method for determination of total pro-
Adultos: 6,4 - 8,3 g/dL (64 - 83 g/L) tein in serum. I. development and validation. - Clin. Chem.
Sangre de cordón: 4,8 - 8,0 g/dL (48 - 80 g/L) 27/10:1642, 1981.
Prematuros: 3,6 - 6,0 g/dL (36 - 60 g/L) - Glick, M; Ryder, K; Jackson, S. - Graphical comparisons of
Neonatos: 4,6 - 7,0 g/dL (46 - 70 g/L) interferences in clinical chemistry instrumentation. - Clin.
1 semana: 4,4 - 7,6 g/dL (44 - 76 g/L) Chem. 32:470, 1986.
7 meses -1 año: 5,1 - 7,3 g/dL (51 - 73 g/L) - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
1-2 años: 5,6 - 7,5 g/dL (56 - 75 g/L) AACC Press, 4th ed., 2001.
> 3 años 6,0 - 8,0 g/dL (60 - 80 g/L) - Tholen, D; Kallner, A; Kennedy, J; Krouwer,J; Meier, K. - Eva-
Estos valores son sólo orientativos. Se recomienda que cada luation of precision of quantitative measurement methods;
laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia, Approved Guideline - Second Edition. Vol. 24 Nº 25, 2004.
dentro de su población de pacientes. - Tholen, D; Kroll, M; Astles, J; Happe, T; Krouwer, J; Las-
ky, F. EP6-A. - Evaluation of the Linearity of quantitative
CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI Measu-rement Procedures: A Statical approach; Aproved
Proteínas totales (g/dL) x 10 = Proteínas totales (g/L) Guideline. - Vol. 23 Nº 16, 2003.
- Tholen, D; Linnet, K; Kondratovich, M; Armbruster, D; Garret,
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO P; Jones, R; Kroll, M; Lequin, R; Pankratz, T; Scassellati, G;
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. Schimmel, H; Tsai, J. EP17-A. - Protocols for Deter-mination
Para preservar la integridad de los reactivos deben evitarse of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved
todo tipo de contaminaciones, empleando para la medición Guideline. - Vol. 24 Nº 34, 2004.
únicamente micropipetas perfectamente limpias y secas.
Se recomienda utilizar Standatrol S-E 2 niveles de Wiener
lab, como material de control de calidad, ya que con controles

867029122 / 00 p. 2/9
Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
M Elaborado por:

P Representante autorizado en la Comunidad

Europea Nocivo

V Uso diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Cáustico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Límite de temperatura (conservar a)

 No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biológico

Volumen después de la reconstitución

b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Número de lote h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944

Wiener lab.
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
PM-1102-78 2000 Rosario - Argentina
867029122 / 00 p. 3/9 UR161018