156

Yahdiana Harahap, Nu Alia

Departemen Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Indonesia
VALIDASI METODE ANALISIS REBAMIPID
DALAM PLASMA IN VITRO SECARA
KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI-
ULTRAVIOLET
Majalah Ilmu Kefarmasian, Vol. VI, No. 3, Desember 2009, 156 - 167
ISSN : 1693-9883
ABSTRACT
Rebamipide is antiulcer agent and it is one of the drug that have to be evaluated with
bioequivalency test according to Food and Drug Administration (FDA). The objec-
tive of this research is to find out the optimum condition of rebamipide in human
plasma in vitro analysis by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) with
ultraviolet detector, and then the method was validated. The chromatography was
carried out by isocratic technique on a reversed-phase KromasilC18 (5 !m, Akzo
Nobel), column length was 250 x 4.6 mm, with mobile phase consisted of acetonitrile
- phosphate buffer pH 3.0 (40:60) at flow rate of 1.0 ml/min, and detection was
performed at wavelength of 230 nm. The sample preparation technique was liquid-
liquid extraction by phosphoric acid and ethyl acetate. Carbamazepine was used as the
internal standard. The method was valid according to FDA in Bioanalitycal Method
Validation, with coefficient correlation of 0.9993 and linear in the range concentra-
tion of 0.04 1.2 !g/ml, the lower limit of quantitation was 42.0 ng/ml, precision
less than 6% and recovery percentage was 90.32 to 113.45%. Rebamipide in plasma
was stable for 14 days storage in -20
0
C.
Keyword : Validation, HPLC, rebamipide, carbamazepine, plasma in vitro.
ABSTRAK
Rebamipid tergolong suatu obat antiulkus yang masuk dalam kategori obat wajib uji
Bioekivalensi (BE) menurut Food and Drug Administration (FDA). Penelitian
ini bertujuan untuk memperoleh kondisi optimum untuk analisis rebamipid dalam
plasma in vitro menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) detektor
ultraviolet dan melakukan validasi metode analisis tersebut. Kromatografi dilaksanakan
dengan teknik isokratik pada kolom fase terbalik KromasilC18 (5 !m, Akzo Nobel)
panjang kolom 250 x 4,6 mm, fase gerak asetonitril-dapar fosfat pH 3,0 (40:60),
dengan kecepatan alir 1,0 ml/menit, dan dideteksi pada panjang gelombang 230 nm.
Teknik penyiapan sampel dilakukan dengan cara ekstraksi cair-cair menggunakan
Corresponding author : E-mail : [email protected]
157 Vol. VI, No.3, Desember 2009
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Banyaknya obat-obat baru yang
dihasilkan untuk menanggulangi
penyakit tertentu atau pengembang-
an terhadap obat sebelumnya baik
dari segi indikasi maupun mekanisme
aksinya, membutuhkan suatu studi
untuk menguji obat tersebut dari
segala aspek, baik farmakologi mau-
pun farmakokinetik serta bioavai-
labilitasnya. Salah satunya adalah
pengembangan metode analisis
dalam cairan biologis serta uji bio-
ekivalen yang ditetapkan oleh Food
and Drug Administration (FDA) untuk
menganalisis rebamipid dalam
plasma manusia. Tujuannya adalah
untuk mendapatkan metode pene-
tapan kadar yang selektif, sensitif,
akurat, presisi dan reprodusibel.
Pengembangan metode ini kemudian
berlaku pada uji klinik untuk mem-
peroleh parameter farmakokinetik
yang akurat dalam plasma manusia.
Rebamipid atau Asam 2-(4-
kl orobenzoi l ami no)-3-[2(1H)-
kuinolinon-4-il] propionat adalah
salah satu agen gastro-protektif, yang
telah direkomendasikan untuk
penyakit digestif di J epang dan
Republik Korea. Rebamipid menun-
jukkan pencegahan atau efek pe-
nyembuhan pada mukosa lambung
atau lesi mukosa melalui peningkatan
prostaglandin endogenous. Data
preklinik obat tersebut menunjukkan
berbagai mekanisme aksi meliputi
efek penghambatan adhesi Heli-
cobacter pylori pada sel epitelial
lambung dan menekan efek aktivasi
neutrofil atau produksi sitokin infla-
matori yang disebabkan oleh H. py-
lori. Pada pemberian secara oral,
absorpsi rebamipid cenderung lam-
bat, dimana konsentrasi maksimum
plasma dicapai dalam waktu 2 jam.
Jika sekitar 0,05-5 !g/ ml rebamipid
ditambahkan ke dalam plasma in
vitro, maka 98,4-98,6% obat terikat
pada protein plasma (1,2). Rebamipid
tergolong obat antiulkus baru yang
masih memerlukan pengembangan
dalam validasi metode analisisnya di
dalam cairan biologis, karena pene-
litian untuk analisis kuantifikasinya
dalam cairan biologis terutama plas-
ma belum banyak dilakukan. Oleh
karena itu pada penelitian ini dila-
kukan analisis kuantifikasi rebamipid
dalam plasma. Dari penelitian-
penelitian yang sudah ada, metode
untuk kuantifikasi rebamipid dalam
asam fosfat dan etil asetat. Karbamazepin digunakan sebagai baku dalam. Metode ini
valid menurut FDA dalam Bioanalytical Method Validation, dengan nilai koefisien
korelasi r = 0,9993 dan linier pada kisaran konsentrasi 0,04 1,2 !g/ml, batas terendah
kuantitasi (LLOQ) 42,0 ng/ml, presisi kurang dari 6%, dan nilai perolehan kembali
antara 90,32 sampai 113,45%. Rebamipid stabil dalam plasma selama 14 hari
penyimpanan pada suhu -20
0
C.
Kata kunci: Validasi, KCKT, rebamipid, karbamazepin, plasma in vitro.
MAJALAH ILMU KEFARMASIAN 158
cairan biologis yang paling banyak
digunakan adalah Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi (KCKT) dengan fase
terbalik menggunakan detektor ul-
traviolet dan fluoresensi (3,4,5,6,7).
Metode KCKT banyak diguna-
kan karena lebih sederhana, selektif
dengan waktu analisis yang lebih
singkat. Preparasi sampel umumnya
dilakukan dengan teknik ekstraksi
fase padat/ SPE dan ekstraksi cair-
cair, baku dalam yang paling banyak
digunakan adalah ofloksasin dan
karbamazepin. Dari literatur di-
ketahui bahwa kisaran konsentrasi
rebamipid dalam plasma sekitar 20-
1200 ng/ ml, dengan batas kuantitasi
terendah (LLOQ) rebamipid dalam
plasma adalah 20 ng/ ml (6). Suatu
metode analisis dapat digunakan jika
telah dilakukan validasi dengan
kondisi yang disesuaikan dengan
laboratorium dan peralatan yang
tersedia. Dalam penelitian ini, akan
dilakukan modifikasi terhadap salah
satu metode analisis rebamipid
dalam plasma dan validasinya meng-
gunakan Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi dengan detektor ultraviolet
(6).
Penelitian ini bertujuan untuk
melakukan validasi metode analisis
rebamipid dalam plasma in vitro
secara Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi.
METODOLOGI
Bahan
Rebamipid (Korea Otsuka Phar-
maceutical Co.,Ltd), karbamazepin
(Zhejiang Jiuzhou Pharmaceutical
Co.,Ltd), asetonitril pro HPLC
(Merck), metanol pro HPLC (Merck),
aquabidestilata (Otsuka), asam fosfat
85% (Merck), etil asetat (Merck), ka-
lium dihidrogen fosfat (Merck),
natrium hidroksida (Merck), dan
plasma darah (Palang Merah Indone-
sia).
Alat
Kromatografi cair kinerja tinggi
model LC 6A (Shimadzu), detektor
ultraviolet SPD-6A (Shimadzu),
pemroses data CBM 102 (Shimadzu),
kolom KromasilC18 (5 !m, Akzo
Nobel) dengan panjang kolom 250 x
4,6 mm.Spektrofotometer UV-Vis
(Jasco V530), pengaduk ultrasonik
(Elma S40H Elmasonic), pH meter
(Eutech instruments pH 510),
sentrifugator (Profuge 14D), vortex
(Health), pengering nitrogen (Turbo
pav LV), mikropipet (Soccorex),
sample cup, blue tip dan yellow tip,
timbangan analitik, alat-alat gelas,
syringe 25,0 !l (Hamilton).
Cara Kerja
1. Penyiapan Bahan Percobaan
a. Pembuatan larutan induk reba-
mipid dan larutan uji
Ditimbang secara seksama lebih
kurang 10,0 mg rebamipid, kemudian
dimasukkan ke dalam labu ukur 10,0
ml dan dilarutkan dengan metanol
sampai batas. Diperoleh larutan
rebamipid lebih kurang 1,0 mg/ ml.
Kemudian dilakukan pengenceran
159 Vol. VI, No.3, Desember 2009
untuk mendapatkan konsentrasi
tertentu.
b. Pembuatan larutan induk karba-
mazepin (baku dalam) dan larutan uji
Ditimbang secara seksama lebih
kurang 10,0 mg karbamazepin,
kemudian dimasukkan ke dalam labu
ukur 10,0 ml dan dilarutkan dengan
metanol sampai batas, dan diperoleh
larutan karbamazepin lebih kurang
1,0 mg/ ml. Kemudian dilakukan
pengenceran untuk mendapatkan
konsentrasi tertentu.
2. Kondisi Kromatografi
Kondisi optimum untuk analisis
rebamipid dalam plasma in vitro
menggunakan KCKT dengan detek-
tor ultraviolet, kolom KromasilC18
(5 !m, Akzo Nobel), panjang kolom
250 x 4,6 mm adalah menggunakan
fase gerak asetonitril-dapar fosfat pH
3,0 (40:60), kecepatan alir 1,0 ml/
menit pada panjang gelombang 230
nm.
3. Validasi metodebioanalisis rebamipid
dalam plasma in vitro (8)
a. Penyiapan sampel rebamipid
dalam plasma
Ke dalam tabung sentrifugasi
10,0 ml dimasukkan 500,0 !l sampel
plasma yang mengandung 1,0 !g/ ml
rebamipid, kemudian ditambah
100,0 !l baku dalam (karbamazepin
100,0 !g/ ml), tambahkan 0,5 ml asam
fosfat 1 mol/ l dikocok dengan
vorteks selama 3 detik, kemudian
tambahkan 2,0 ml etil asetat, dikocok
dengan vorteks selama 2 menit,
selanjutnya disentrifugasi selama 5
menit dengan kecepatan 3000 rpm.
Sebanyak 1,0 ml fase organik di-
uapkan sampai kering pada suhu
60
0
C menggunakan gas nitrogen.
Residu dilarutkan dalam 200,0 !l
metanol, kemudian dikocok dengan
vorteks selama 2 menit, dan disen-
trifugasi selama 5 menit dengan
kecepatan 10.000 rpm. Suntikkan
supernatan hasil sentrifugasi se-
banyak 20,0 !l ke alat KCKT
b. Pengukuran limit kuantitasi
(LOQ) dan limit kuantitasi terendah
(LLOQ)
Dibuat larutan rebamipid dalam
plasma dengan konsentrasi 0,02;
0,08; 0,2; 0,4; 1,0 dan 1,2 !g/ ml,
selanjutnya masing-masing konsen-
trasi diambil sebanyak 500,0 !l dan
ditambahkan 100,0 !l baku dalam
(karbamazepin 100,0 !g/ ml). Ke-
mudian diekstraksi sesuai prosedur.
Sebanyak 20,0 !l masing-masing
larutan disuntikkan ke alat KCKT.
Dari data pengukuran kemudian
dihitung nilai LOQ. Nilai limit kuan-
titasi terendah (LLOQ) diperoleh
dengan mengencerkan konsentrasi
LOQ hingga setengah atau seper-
empatnya. Hitung nilai % diff dan
koefisien variasinya (KV).
c. Pembuatan kurva kalibrasi dan
linearitas
Dibuat sampel blanko (plasma
tanpa baku dalam) dan sampel zero
(plasma dengan baku dalam), serta
larutan rebamipid dalam plasma
MAJALAH ILMU KEFARMASIAN 160
dengan konsentrasi lebih kurang
0,04; 0,08; 0,2; 0,4; 1,0 dan 1,2 !g/ ml,
selanjutnya masing-masing konsen-
trasi diambil sebanyak 500 !l dan
ditambahkan 100 !l baku dalam (kar-
bamazepin 100,0 !g/ ml). Kemudian
diekstraksi sesuai prosedur. Se-
banyak 20 !l masing-masing larutan
disuntikkan ke alat KCKT. Dari data
pengukuran dibuat kurva kalibrasi
dengan menggunakan persamaan
garis regresi linear (y = a + bx),
dimana x adalah konsentrasi reba-
mipid dan y adalah perbandingan
luas puncak rebamipid dengan baku
dalam. Selanjutnya dihitung koefisien
korelasi (r) yang menunjukkan
linearitas
d. Presisi, Akurasi dan Perolehan
Kembali
Dibuat larutan rebamipid dalam
plasma dengan konsentrasi 126,0;
567,0; dan 1008,0 ng/ ml, selanjutnya
masing-masing konsentrasi diambil
sebanyak 500 !l dan ditambahkan
100,0 !l baku dalam (karbamazepin
100,0 !g/ ml), kemudian diekstraksi
sesuai prosedur. Sebanyak 20 !l
masing-masing larutan disuntikkan
ke dalam alat KCKT dan diulangi
sebanyak lima kali untuk tiap-tiap
konsentrasi (intra-day), dan se-
lanjutnya dilakukan selama 5 hari
berturut-turut (inter-day). Kemudian
presisi dihitung sebagai nilai sim-
pangan baku relatif atau koefisien
variasi (KV) dari masing-masing
konsentrasi, dan akurasi dihitung
sebagai perbedaan nilai terukur
dengan nilai sebenarnya (% diff), juga
dihitung prosentase perolehan
kembali (% recovery).
e. Uji selektivitas
Konsentrasi pada LLOQ dibuat
dengan menggunakan 6 blanko
plasma manusia yang berbeda, se-
lanjutnya masing-masing konsentrasi
diambil sebanyak 500 !l dan ditam-
bahkan 100,0 !l baku dalam (karba-
mazepin 100,0 !g/ ml), kemudian
diekstraksi sesuai prosedur. Seba-
nyak 20 ! masing-masing larutan
disuntikkan pada alat KCKT. Diamati
waktu retensinya dan ada atau
tidaknya gangguan (interferensi)
dari ekstrak plasma pada waktu
retensi tersebut, kemudian dihitung
nilai % diff (akurasi).
f. Uji stabilitas
1) Uji stabilitas larutan stok
rebamipid
Dibuat larutan rebamipid
dengan konsentrasi 1,0 !g/ ml
dengan penambahan baku dalam
(karbamazepin 100,0 !g/ ml).
Kemudian masing-masing la-
rutan disimpan pada temperatur
kamar pada rentang waktu 0, 6
dan 24 jam, dan sebagian larutan
disimpan dalam lemari pen-
dingin (temperatur 4
0
C) pada
rentang waktu 1, 7 dan 14 hari.
Sebanyak 20 !l masing-masing
larutan disuntikkan pada alat
KCKT. Diamati adanya gejala
ketidakstabilan zat dengan
mengamati luas puncaknya dan
menghitung % diff.
161 Vol. VI, No.3, Desember 2009
2) Uji stabilitas jangka panjang
rebamipid dalam plasma
Dibuat larutan rebamipid
dalam plasma dengan konsen-
trasi 126,0; 567,0; dan 1008,0 ng/
ml dengan penambahan 100,0 !l
baku dalam (karbamazepin
100,0 !g/ ml). Kemudian masing-
masing larutan disimpan pada
lemari pendingin (temperatur -
20
0
C), dan masing-masing larut-
an diambil pada rentang waktu
0, 7 dan 14 hari. Kemudian la-
rutan diekstraksi sesuai prose-
dur dan disuntikkan sebanyak
20 !l pada alat KCKT. Diamati
adanya gejala ketidakstabilan zat
dengan mengamati luas puncak-
nya dan menghitung % diff.
3) Uji stabilitas beku dan cair
(freeze and thaw)
Dibuat larutan rebamipid
dengan konsentrasi 126,0; 567,0;
dan 1008,0 ng/ ml dengan pe-
nambahan 100,0 !l baku dalam
(karbamazepin 100,0 !g/ ml).
Kemudian dilakukan siklus beku-
cair sebanyak tiga kali. Dieks-
traksi sesuai prosedur dan disun-
tikkan sebanyak 20 !l pada alat
KCKT. Diamati adanya gejala
ketidakstabilan zat dengan
mengamati luas puncaknya dan
menghitung % diff.
4) Uji stabilitas jangka pendek
rebamipid dalam plasma
Dibuat larutan rebamipid
dalam plasma dengan kon-
sentrasi 126,0; 567,0; dan 1008,0
ng/ ml dengan penambahan
100,0 !l baku dalam (karba-
mazepin 100,0 !g/ ml). Disimpan
pada temperatur kamar dalam
rentang waktu 0, 6, dan 24 jam.
Kemudian diekstraksi sesuai
prosedur dan disuntikkan se-
banyak 20 !l pada alat KCKT.
Diamati adanya gejala ketidak-
stabilan zat dengan mengamati
luas puncaknya dan menghitung
% diff.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada pencarian kondisi analisis
optimum diperoleh kondisi kro-
matografi untuk analisis rebamipid
dalam plasma in vitro menggunakan
KCKT dengan detektor ultraviolet,
kolom KromasilC18 (5 !m, Akzo
Nobel), panjang kolom 250 x 4,6 mm
adalah menggunakan fase gerak
asetonitril-dapar fosfat pH 3,0
(40:60), kecepatan alir 1,0 ml/ menit
pada panjang gelombang 230 nm,
dengan karbamazepin sebagai baku
dalam, waktu retensi rebamipid dan
karbamazepin (baku dalam) ber-
turut-turut adalah 4,10 dan 7,10 menit
(Gambar 1).
Validasi diawali dengan pengu-
kuran batas kuantitasi dan batas ku-
antitasi terendah (LOQ dan LLOQ).
Rentang konsentrasi dalam plasma
yang digunakan berdasarkan litera-
tur adalah 201200 ng/ ml (6). Ber-
dasarkan perhitungan statistik,
diperoleh nilai LOQ sebesar 163,16
ng/ ml. Kemudian dihitung nilai
LLOQ dengan melakukan pengen-
MAJALAH ILMU KEFARMASIAN 162
ceran konsentrasi LOQ menjadi se-
tengah atau seperempatnya, lalu
dihitung nilai % diff dari lima kali
penyuntikan. Berdasarkan hasil
pengukuran dan perhitungan, diper-
oleh nilai LLOQ sebesar 42,0 ng/ ml.
Nilai LLOQ yang diperoleh lebih
besar dari yang terdapat pada bebe-
rapa literatur dengan menggunakan
KCKT detektor ultraviolet, yaitu
sekitar 20 ng/ ml. Nilai LLOQ yang
diperoleh tidak sebaik nilai yang ada
pada literatur, hal ini mungkin karena
faktor ekstraksi. Setelah nilai LLOQ
diperoleh, maka dilakukan pem-
buatan kurva kalibrasi dan uji
linearitas rebamipid dalam plasma
dengan rentang konsentrasi 42,0-
1260,0 ng/ ml. Pemilihan rentang
konsentrasi ini berdasarkan rentang
konsentrasi rebamipid dalam plasma
dan mencakup nilai LLOQ yaitu
42,0 ng/ ml. Untuk analisis rebamipid
dalam plasma, kurva kalibrasi terdiri
dari plasma blanko (plasma tanpa
penambahan rebamipid dan baku
dalam), plasma zero (plasma dengan
penambahan baku dalam), dan 6-8
larutan rebamipid dalam plasma
dengan penambahan baku dalam.
Dari hasil analisis, diperoleh per-
samaan regresi linear y = 0,0051 +
0,0007x dengan nilai koefisien
korelasi r = 0,9993, dimana kriteria
linearitas untuk sediaan dalam
matriks biologis adalah r = 0,95 atau
lebih. Maka dapat disimpulkan
bahwa metode analisis rebamipid
dalam plasma dengan rentang
konsentrasi 42,01260,0 ng/ ml me-
menuhi kriteria uji linearitas dan
dapat diterima untuk suatu metode
bioanalisis.
Langkah validasi selanjutnya
adalah uji selektifitas, yaitu dengan
cara melakukan analisis terhadap
Gambar 1. Kromatogram larutan standar rebamipid konsentrasi 1,0 !g/ml dan
baku dalam karbamazepin 106,0 !g/ml.
163 Vol. VI, No.3, Desember 2009
6 plasma dari sumber yang berbeda
pada konsentrasi LLOQ, yaitu 42,0
ng/ ml. Berdasarkan hasil perhi-
tungan, nilai koefisien variasi yang
diperoleh kurang dari 20%, nilai %
diff tidak lebih dari -20% dan +20%,
dan tidak adanya gangguan dari
senyawa lain atau komponen endo-
gen plasma pada kromatogram,
sehingga dapat disimpulkan bahwa
metode analisis yang digunakan
memenuhi syarat uji selektifitas
(Tabel 1).
Pada uji akurasi, presisi, dan
perolehan kembali (recovery), dilaku-
kan analisis terhadap tiga konsen-
trasi, yaitu konsentrasi rendah (126,0
ng/ ml), konsentrasi sedang (567,0
ng/ ml), dan konsentrasi tinggi
(1008,0 ng/ ml). Dilakukan uji intra-
day dan uji inter-day selama lima hari
berturut-turut. Berdasarkan hasil
perhitungan, untuk uji akurasi diper-
oleh nilai % diff tidak menyimpang
lebih dari -15% dan +15% untuk
masing-masing konsentrasi selama
satu hari (intra-day), dan nilai % diff
dari tiap konsentrasi tidak berubah
secara signifikan dari hari ke hari (in-
ter-day). Untuk uji presisi intra-day,
diperoleh nilai koefisien variasi
kurang dari 15% untuk masing-
masing konsentrasi. Pada uji presisi
inter-day, diperoleh nilai koefisien
variasi sebesar 1,37% untuk konsen-
trasi rendah, 6,57% untuk konsentrasi
sedang, dan 5,52% untuk konsentrasi
tinggi. Data yang diperoleh menun-
jukkan bahwa metode analisis yang
digunakan mempunyai keterulangan
yang baik dari hari ke hari (inter-day),
karena nilai koefisien variasi yang
dihasilkan tidak lebih dari 15%.
Selanjutnya untuk uji perolehan
kembali secara keseluruhan nilai
persen perolehan kembali berada
Tabel 1. Data uji selektivitas rebamipid dalam plasma in vitro
dengan karbamazepin baku dalam
Nomor
Konsentrasi Konsentrasi
Rata-rata SD KV (%) %diff
plasma
RB/CBZ RB terukur
(ng/ml) (ng/mL)
1 42,0/106000,0 42,36 46,09 2,40 5,22 0,86
41,75 -0,57
2 42,0/10600,0 46,50 10,73
47,83 13,89
3 42,0/106000,0 43,59 3,80
44,82 6,71
4 42,0/106000,0 46,22 10,06
47,62 13,39
5 42,0/106000,0 48,56 15,62
44,22 5,30
6 42,0/106000,0 43,16 2,77
45,61 8,60
MAJALAH ILMU KEFARMASIAN 164
dalam rentang 80-120%. Dari hasil
tersebut, dapat disimpulkan bahwa
metode analisis yang digunakan
memenuhi kriteria untuk uji akurasi
dan presisi (Tabel 2).
Langkah validasi selanjutnya
adalah uji stabilitas. Stabilitas reba-
mipid dalam plasma maupun stabi-
litas larutan standar rebamipid perlu
diperhatikan untuk mengetahui
seberapa lama stabilitasnya mulai dari
pengambilan sampel sampai analisis
dilakukan. Uji stabilitas yang dilaku-
kan adalah stabilitas larutan stok
rebamipid, stabilitas beku-cair,
stabilitas jangka pendek dan jangka
panjang rebamipid dalam plasma.
Dilakukan analisis terhadap tiga
konsentrasi untuk masing-masing uji
stabilitas, yaitu konsentrasi rendah
(126,0 ng/ ml), konsentrasi sedang
(567,0 ng/ ml), dan konsentrasi tinggi
(1008,0 ng/ ml). Berdasarkan uji
stabilitas larutan stok, diperoleh
kesimpulan bahwa larutan stok
rebamipid masih stabil sampai 1 hari
penyimpanan (temperatur 4
0
C), hal
ini ditunjukkan oleh nilai % diff yang
tidak menyimpang lebih dari 2%
terhadap larutan stok yang baru
dibuat (stabilitas larutan stok jam
ke-0). Untuk uji stabilitas beku-cair,
stabilitas jangka pendek, dan sta-
bilitas jangka panjang rebamipid
dalam plasma selama 14 hari (tem-
peratur -20
0
C), diperoleh nilai % diff
yang juga tidak menyimpang lebih
dari -15% dan +15%. Sehingga ber-
Tabel 2. Data uji akurasi dan presisi rebamipid dalam plasma in vitro
dengan penambahan baku dalam selama 5 hari uji (uji inter-day)
Konsentrasi
Hari
Konsentrasi
Rata-rata SD KV (%) %diff RB/CBZ
ke-
RB terukur
(ng/ml) (ng/mL)
1008,0/106000,0 1 1108,61 1054,36 0,0413 5,52 9,98
2 1018,61 1,05
3 1060,57 5,21
4 993,15 -1,47
5 1090,90 8,22
567,0/106000,0 1 568,72 556,98 0,0259 6,57 0,30
2 595,02 4,94
3 515,26 -9,12
4 520,25 -8,24
5 585,69 3,29
126,0/106000,0 1 120,71 123,02 0,0012 1,37 -4,19
2 121,79 -3,34
3 123,65 -1,86
4 125,33 -0,53
5 123,64 -1,87
165 Vol. VI, No.3, Desember 2009
Tabel 3. Data uji stabilitas jangka pendek rebamipid dalam plasma in vitro
Konsentrasi rebamipid/ Jam Konsentrasi rebamipid %diff
karbamazepin (ng/ml) ke- terukur (ng/ml)
1008,0/106000,0 0 989,11 -1,87
992,57 -1,53
6 1128,87 11,99
1094,29 8,56
24 1151,30 14,21
1139,84 13,07
567,0/106000,0 0 552,24 -2,60
537,73 -5,16
6 615,24 8,50
615,23 8,50
24 583,99 2,99
528,87 -1,47
126,0/106000,0 0 123,43 -2,03
128,53 2,00
6 116,24 -7,73
116,12 -7,83
24 111,34 -11,62
112,62 -10,61
Tabel 4. Data uji stabilitas jangka panjang rebamipid dalam plasma in vitro
Konsentrasi rebamipid/ Hari Konsentrasi rebamipid %diff
karbamazepin (ng/ml) ke- terukur (ng/ml)
1008,0/106000,0 0 1021,32 1,32
1106,88 9,80
7 1063,55 5,51
1086,84 7,82
14 864,69 -14,21
927,97 -7,93
567,0/106000,0 0 542,43 -4,33
558,87 -1,43
7 511,74 -9,74
514,74 -9,21
14 634,51 11,90
627,74 10,71
126,0/106000,0 0 119,14 -5,44
117,84 -6,47
7 138,85 10,20
138,97 10,29
14 143,79 14,29
143,83 14,15
MAJALAH ILMU KEFARMASIAN 166
dasarkan hasil tersebut dapat di-
simpulkan bahwa larutan rebamipid
dalam plasma memenuhi kriteria uji
stabilitas beku-cair, stabilitas jangka
pendek dan stabilitas jangka panjang
(Tabel 3, 4 dan 5).
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian
dapat disimpulkan bahwa hasil
validasi dari metode bioanalisis yang
digunakan menunjukkan bahwa
kriteria validasi yaitu LLOQ, se-
lektifitas, kurva kalibrasi, linearitas,
presisi, akurasi, perolehan kembali,
dan stabilitas memenuhi syarat yang
ditetapkan oleh FDA (Food and Drug
Administration) dalam Guidance for
Industry : Bioanalytical Method Valida-
tion, sehingga dapat digunakan untuk
menentukan kadar rebamipid in vivo
DAFTAR ACUAN
1. Fujioka T, et al. 2003. Effect of
Rebamipide, a Gastroprotective
Drug on the Helicobacter pylori
Status and Inflammation in the
Gastric Mucosa of Patients with
Gastric Ulcer: A Randomized
Double-Blind Placebo-Con-
trolled Multicentre Trial. Aliment
Pharmacol Ther. 18 : 146-152.
2. Mucosta

Film Coated Tablet 100

(Rebamipide). 2009. Badan
Pengawasan Obat dan Makanan.
www.pom.go.id/ io/ monograf/
mucosta.html. Tanggal 4 Juni
2009. Pukul 23:45 WIB.
Tabel 5. Data uji stabilitas beku-cair (freeze and thaw) rebamipid
dalam plasma in vitro
Konsentrasi rebamipid/ Siklus Konsentrasi rebamipid %diff
karbamazepin (ng/ml) ke- terukur (ng/ml)
1008,0/106000,0 0 1114,40 10,55
1092,68 8,34
3 1134,35 12,58
1142,58 13,35
567,0/106000,0 0 600,70 5,94
632,48 11,54
3 574,95 1,40
616,80 8,78
126,0/106000,0 0 138,19 9,67
141,62 12,40
3 109,39 -12,78
113,67 -9,89
167 Vol. VI, No.3, Desember 2009
3. Manglani UR, IJ Khan, K Soni, P
Loya, MN Saraf. 2006. Develop-
ment and Validation of HPLC-
UV Method for the Estimation of
Rebamipide in Human Plasma.
Indian Journal of Pharmaceutical
Sciences. 68: 475-478.
4. Joung SK, CH Park, HJ Lee, H
Kim, Y Lee, and SB Han. 2006.
Determination of Rebamipide in
Human Plasma by Column-
Switching High Performance Liq-
uid Chromatography. Dari
www.aapspharmsci .org/ ab-
stracts/ AM_2006.
5. Jeoung MK, et al. 2004. Determi-
nation of rebamipide in human
plasma by HPLC. Journal of liq-
uid chromatography & related tech-
nologies. 27: 1925-1935.
6. Zhao RS, JL Duan, BX Yan. 1999.
HPLC assay for determination of
rebamipide in plasma and its
pharmacokinetic investigation.
Chinese Pharmaceutical Journal. 34:
689-692.
7. Ning Z, Li Li. 2002. Determina-
tion of Rebamipide in Plasma by
High Performance Liquid Chro-
matography. Chinese Journal of
Hospital Pharmacy. 6: 869-876.
8. Guidance for I ndustry Bio-
analytical Method Validation.
2001. Centre for Drug Evaluation
and Research (CDER). http:/ /
www.fda.gov/ cder/ Guidance/
index.htm. Tanggal 31 Agustus
2008. Pukul 11.45 WIB.