Prof. Dr.

Maximiliano Zierer
 Objetivo

Mapear o patrimônio
genético do Homem
• Avanços na Medicina
– Preventiva
– Diagnóstico (específico, sensível, efetivo e
seguro)
– Tratamento (desenhos de fármacos
específicos)
 1956- Evolução da Genética Médica
• 1956- Estabelecimento do número de
cromossomos e a determinação da estrutura de
dupla-hélice do DNA por Watson e Crick;

• A partir deste ano a genética se estabelece como

especialidade clínica;

• 1959, descrita a 1º síndrome (Down). Nos anos 60

uma série de anormalidades começaram a ser
descritas (nº, translocação, deficiência, mosaicos,
triploidias e microdeleções).
• Devido aos avanços nas técnicas de
identificação de cromossomos, como a
citogenética molecular e a hibridização in
situ possibilitaram um avanço na
identificação clínica de muitas doenças.

• Ex: cromossomo Filadélfia (1960-1973);

Mapeamento Genético
• Provavelmente o 1º gene a
ser mapeado foi o do
Daltonismo (1911-1968)
• 1980- análise de células
somáticas através do uso de
sondas (“diretamente no
gene afetado);
• 1981- uso de sondas, em
genes de cópia única;
• Construção de marcadores
genéticos para serem
utilizados em famílias
(RFLP, Seq TANDEM,
Microsatélites, etc).
• 1983-1993- Mapeamento da 1ª doença pela técnica de
marcadores de DNA (Huntington) localizada no braço
curto do cromossomo 4 (alta taxa de recombinação.
Outras doenças importantes puderam ser mapeadas
como em 1986 a Granulomatose Crônica e a Distrofia
Muscular de Duchenne, e em 1989 a Retinoblastia e a
Fibrose Cística.
• A possibilidade da descoberta de doenças despertou
nos pesquisadores um grande impulsos, pois as
possibilidade que se abriam eram evidentes.
• Com o mapeamento de gene era possível traçar o
perfil da doença, a localização, o padrão de
transmissão, mutações correlatas, determinar genes
candidatos, etc.
O Seqüenciamento do Genoma Humano
• Antes mesmo do lançamento do PGH ser lançado,
uma variedade genes já haviam sido descritos;
• 1944- 1ª apresentação do material genético por Avery,
McLeod e McCArty em pneumococcus;
• 1953- Watson e Crick deduziram a dupla-hélice do
DNA por difração de radiografia;
• 1966- dedução dos nucleotídeos (para codificação de
aminoácidos- o código genético);
• 1960s – Uso de enzimas de restrição;
• 1970s- Clonagem de genes em plasmídeos
bacterianos e a técnica do DNA recombinante;
• 1977- aprimoramento da técnica de seqüenciamento por
Maxam e Gilbert e por Sanger et al. O método
estabelecido por Sanger (didesóxi) permanece como a
base do PGH. Esse método foi modificado
exaustivamente até se conseguir a sua automatização.
• 1981- Feito o 1º seq. completo, pelo grupo de Sanger de
uma organela citoplasmática com 16569 nucleotídeos.
• 1980- O Departamento de Energia dos EUA propõem do
seqüenciamento do genoma humano devido a
preocupação de mutações ocorridas devido a radiação
que seus trabalhadores estavam expostos.
Década de 1980- Primeiras discussões  PGH;

1984- PG: EUA  mapear patrimônio genético

humano.
Japão e Austrália: organismo de coordenação
internacional HUGO (Human Genome Organization)
 facilitar e coordenar  mapear, seqüenciar e
analisar: genoma humano e sua aplicação;

1990- PGH internacional: pesquisadores

americanos e europeus.
• 1988- acreditava-se que o mapeamento e o
seqüenciamento completo do genoma humano
seria possível ser feito em 10-15 anos (2005),
com um custo de $200 milhões de dólares ao
ano liberado pelo congresso nacional americano.

• O Comitê assessor do PGH recomendou que se

fizesse o seqüenciamento a partir da construção
dos mapas genéticos e físicos dos cromossomos
e que fossem sendo feitos modelos de outros
organismos em paralelo.
• 1985-1990- Discussão do PGH
• 01/10/1990: foi lançado nos EUA do PGH:
patrocinado pelo NIH (National Institutue of
Health) e pelo DOE (Departament of Energy).
• Foi criado o grande consórcio mundial para o
seq. do genoma humano formado pela Europa,
Japão e Austrália.
• HUGO (Human Genome Organization)-
sintonizar o trabalho e organizar o
conhecimento em um banco de dados.
 Quem participou do PGH ?
• Setor Público  dados - qualidade e precisão:
detalhes das células humanas.

• Setor Privado  genes interessantes.

• 18 Países : EUA, Alemanha, Austrália, Brasil,

Canadá, China, Coréia, Dinamarca, França, Holanda,
Israel, Itália, Japão, México, Reino Unido, Rússia,
Suécia e União Européia.
 MAPEAMENTO E
SEQUENCIAMENTO DO GENOMA

GENOMA: DNA  células - determinado organismo.

• Mapeamento  Divisão dos cromossomos 

fragmentos menores  propagados, caracterizados e
ordenados  respectivas posições nos cromossomos.

• Sequênciamento  Seqüência de bases  fragmentos

de DNA já ordenados  genes na seqüência do DNA.
 VANTAGENS DO PGH

• Doenças fator genético;

• Tecnologias clínicas  diagnósticos de DNA;

• Terapias novas classes de remédios;

• Técnicas imunoterápicas;
• Prevenção Doenças condições ambientais: mal
de Alzheimer, hipertensão, obesidade, artrite
reumática, suscetibilidade ao câncer de mama e
ovário, osteoporose, câncer do cólon, doenças
cardiovasculares, mal de Parkinson, calvície;

• Genes defeituosos  Terapia Gênica

• Drogas medicinais  organismos geneticamente

alterados
 COMO É FEITO O SEQUENCIAMENTO

• Mapeamento

• Sequenciamento
1. Picotando o DNA
2. Clonagem
• Etapas do
3. Marcação com
Sequenciamento
Fluorencência
4. Separação
5. Leitura
 1. Picotando o DNA 4. Separação

Fig . 1 : Bases nitrogenadas do DNA

2. Clonagem

3. Marcação com
Fluorescência Fig . 3: Fragmentos de DNA separados
pelo tamanho

5. Leitura

Fig . 2 : Cromatograma de 4 cores

Fig . 4 : Dados processados

Os resultados são mostrados num
cromatograma de quatro cores.

• Depois os computadores reunem as

sequências em longos e contínuos trechos.
• 1º organismo livre seq. foi a bactéria
Haemophilus influenzae, com 1800 genes que
codificam proteínas. Este seq. foi feito pelo grupo
do J. Craig Venter utilizando a técnica de
aproximação.
• Helicobacter pylori, Mycobacterium tuberculosis
e Treponema pallidum.
• 1996- 1º eucarioto seq. completamente, o
Saccharomyces cereviae.
• 1998- 1º organismo multicelular completamente
seq. foi o nematoíde Caenorhabditis elegans.
• 2000/ março - Drosophila melanogaster.
• Inspirado nos resultados dos seq.
anteriores, Venter e • O consórcio mundial para o
colaboradores criaram a seq do PGH aceita o
companhia privada para desafio competitivo e
sequenciar o genoma humano acelerou o seq com a ajuda
(Celera Genomics Inc) de vários laboratórios
• Técnica para seq é por (EUA, Inglaterra, Japão,
aproximação, clonagem ao França e Alemanha sob a
acaso. direção de Francis Colins.
• Os dados eram fornecidos a • Técnica para seq é por
investigadores acadêmicos, sobreposição de clones
laboratórios não farmacêuticos, • Os resultados eram de
sob uma taxa bastante domínio público.
considerável.
• 26 de junho de 2000
– Na Casa Branca, Colins e Venter anunciaram a
conclusão inicial do PGH
– O grupo do Colins publicou na “Nature”
– O grupo do Venter publicou na “Science”

A maior conclusão deste grande projeto

foi explicar que a complexidade do ser
humano esta baseada codificação de
diferentes proteínas e não no número
de genes.
Venter et al. Colins et al.
• O sequênciamento do genoma humano não
corresponde ao genoma específico de
determinada pessoa.
Sequenciamento dos genes

“É cada vez maior o

esforço dos cientistas
para colocar à
disposição um número
crescente de genomas
inteiros sequenciados
dos mais diferentes
organismos.”
Fig.7 : Representação do mapeamento genético no cromossomo humano
 • O DNA humano é formado por 3.1
bilhões de pares de base, com 4
nucleotídeos diferentes (A, C, G,
T). Essas combinações se repetem
ao longo do genoma em diferentes
ordens para formar aa, que
combinado formaram as proteínas
necessárias.

• Ele é formado por grandes desertos

e alguns oásis. Só 3% do DNA
contém regiões codificadoras
(centrais).
“A complexidade dos seres • O genoma humano é idêntico em
humanos surgiu de alguma 99,9%, os 0,1% é que traz as
outra fonte” Colins 12/02/01 variações e pistas de muitas
doenças
 PGH- Resultados
• Total de espécies já sequenciadas- 908
(NCBI- fev/2002)
– 70 genomas bacterianos (13 archae e 57 bact);
– 695 genomas de vírus, retrovirus, etc;
– 39 plasmídeos
– 15 eucariotos
– 307 organelas
Atualmente: dos 70 genomas bacterianos 7 foram
feitos através do consórcio e 1 foi brasileiro.
Existem 107 genomas em andamento (15 dop
consórcio e 5 brasileiros)
– out/2001- seq completo de rato pelo grupo Celera.
• O Brasil também participa do Projeto Genoma Humano .
• As principais iniciativas tomadas foram a da clonagem dos
genes pelo laboratório da pesquisadora Mayana Zatz;
• Projeto Genoma Humano do Câncer está em andamento
graças a união da Fapesp, Instituto Ludwig, Unicamp,
EPM e da Faculdade de Medicina da USP;
• O Genoma Cana leva o Brasil a liderar a pesquisa em
genoma de plantas (Copersucar à FAPESP em 1998)
• O seqüenciamento de uma praga de lavoura de laranja
chamada de Xylella fastidiosa.
Câncer e o Projeto Genoma

Fig . 8 : Representação da porcentagem dos tipos de câncer

 Genoma Câncer

• Pretende gerar entre 500mil e 700mil

sequenciamentos

• Acesso a regiões codificadoras ainda não

exploradoas

• Elucidação no sequenciamento genético do

Homo sapiens

• Descoberta de uma cura do câncer

• O Futuro: A Medicina do Século 21

– Saber a função de todas essas proteínas

– Saber as variações, padrões, estruturas e fenótipos
– Identificar alelos para suscetibilidade
– Buscar marcadores
– Especificar diagnósticos (mendelianos ou não)
– Conhecer a vulnerabilidade ou resistência
– Influência: medicina reprodutiva, preditiva, no conceito
de doenças que levem os médicos a interpretar genes
como hemogramas, diagnósticos específicos e clínicos,
caracterização precisa das doenças, busca de terapias
personalizadas (fármacos), impressão digital dos
tumores (2020).
 Aplicações
• Polycystic (ARPKD), doença renal autossômica recessiva.
A identificação de genes de ARPKD, através do
sequenciamento PKD1.
• Descoberta do 1º gene específico para a suscetibilidade
para o Cancer de pâncreas. Localizado no cromossomo 4.
Sendo a 4ª causa de mote nos EUA (Jimmy Carter).
• Desenvolvimento da droga STI – 571 que bloqueia a
atividade da Kinase de BCR-ABL. Essa proteína é produzida
como conseqüência da translocação do cromossomo 9-22,
causando a leucemia mieloide. A STI-571, bloqueia a
atividade da kinase de BCR-Abl de fosforilar o seu substrato.
 Ética no Projeto Genoma

• Passado - origem, formas  justificar

• Presente - irresponsabilidade  futuro

• Patrimonio individual

• Patentes
 Disseminação e testes
genéticos para identificação de
genes “doentes”

• Potencialidade do indivíduo

• Discriminação  exclusão social 

desemprego  nova classe social

• Seguradoras - aumento de preços

 IMPLICAÇÕES FARMACÊUTICAS
•Surgimento de drogas a partir do genoma pode levar
anos

Altos Gastos

Indústria Desenvolvimento
Pesquisas
Farmacêutica

Poucos Benefícios Instantâneos

PGH  identificar a funcionalidade dos Genes

Principal trabalho para a indústria farmacêutica

• Mais de cinco mil genes podem ser
importantes na determinação de doenças

• Indústria Farmacêutica  450 classes de

drogas

• Informação do genoma humano  descoberta

e desenvolvimento de drogas

• Melhor compreensão das causas das doenças

 novas drogas  necessidade de cada paciente

• Mudanças devem levar a medicamentos com

menos efeitos colaterais e custo menor
 • As primeiras aplicações clínicas do PGH
estarão na área de diagnósticos
Estudo de variabilidade em resposta
Farmacogenética de droga e toxicidade devido a fatores
genéticos

Aplica a informação ganhada pela

Farmacogenômica farmacogenética ao desenvolvimento
de medicamentos
O genoma, considerado a ferramenta biológica mais poderosa
para explorar os mistérios do desenvolvimento do organismo
humano e suas doenças, teve sua seqüência revelada, após 13
anos de intenso trabalho em vários laboratórios do mundo e ter
consumido um orçamento de US$ 3 bilhões.

O DNA humano contém 3.16 bilhões de bases (letras) e o total

das informações genéticas, contidas nos 23 pares de
cromossomos, nos mostra que o ser humano possui cerca de 30
mil genes.

Estes genes se espalham pelo DNA, mas ocupam somente 1,2-

3,% de seu tamanho. No entanto, eles são essenciais para a
produção de proteínas necessárias para o desenvolvimento,
metabolismo e outras funções vitais no organismo.