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Instituto de Engenharias e Ciências do Mar – UTA
Licenciatura em Ciências Biológicas
Unidade curricular: Microbiologia
Relatório nº1 MORFOLOGIA MICROSCÓPICA DE BACTERIA E COLORAÇÃO PELO METÓDO DE GRAM
Docente: Natalina Spencer
Discentes: Endrikson Alves Elainy Ramos Luana Oliveira Junho de 2024 Índice geral
Índice geral.......................................................................................................................................1 Objetivos...........................................................................................................................................2 Matérias e métodos..........................................................................................................................3 Materiais.......................................................................................................................................3 Metodologia..................................................................................................................................3 Resultados e Discussão.....................................................................................................................4 Resultados.....................................................................................................................................4 Discussão.......................................................................................................................................5 Conclusão..........................................................................................................................................7 Referências Bibliográficas...............................................................................................................8
1 Objetivos
• Corar uma lâmina pelo método de Gram;
• Reconhecer os principais tipos morfológicos bacterianos; • Observar os principais arranjos das células bacterianas; • Reconhecer bactérias Gram positivas e Gram negativas ao microscópio; • Compreender a importância dessa coloração para microbiologia clínica; • Compreender cada etapa do processo de coloração, bem como a função de cada substância utilizada.
2 Matérias e métodos Materiais
- Meios de cultura contendo crescimento bacteriano
- Lâminas para preparação do esfregaço - Solução salina - Alça bacteriológica - Bico de Bunsen - Bateria de corantes para o Gram
Metodologia
I. Preparação do esfregaço a partir de cultura prévia
Primeiramente limpou-se uma lâmina de vidro (passar algodão embebido em álcool) e identificou-se o lado da lâmina onde será feito o esfregaço, assim como sua procedência. Quando a cultura for em meio sólido, colocou-se uma gota de água destilada esterilizada ou salina esterilizada sobre a lâmina e com uma alça bacteriológica (estéril descartável), colheu-se uma pequena quantidade de crescimento bacteriano da superfície do agar e suspendê-la na gota de água destilada, espalhando suficientemente para obter um esfregaço fino. De seguida deixou- se a lâmina secar à temperatura ambiente e fixou-se na chama do bico de Bunsen, cortando a chama por 3x. Observação: quando se usa alça bacteriológica de plantina, esta deve ser aquecida ao rubro antes (para não contaminar a cultura bacteriana) e após (para não desprezar contaminada na bancada) o contato com a cultura bacteriana, tomando-se o cuidado de deixá-la esfriar dentro do campo de esterilidade da chama (próximo ao bico de Bunsen).
II. Técnica de Gram
Cobriu-se o esfregaço bacteriano com cristal violeta, deixar agir 1 minuto e verter o corante na cuba. Removeu-se o excesso da solução de cristal violeta da lâmina, lavando-a levemente com água corrente (opcional). Cobriu-se o esfregaço com solução de lugol, deixar por 1 minuto e retirar a seguir, lavando com um filete de água. De seguida descorou-se o esfregaço usando uma solução de álcool acetona, rapidamente 10 seg. e lavando-o com água corrente, imediatamente. Cobriu-se o esfregaço com a Fucsina, deixando por 1 minuto antes de retirar. Depois lavou-se com água corrente e pro fim secou-se com papel absorvente. Para observar a lâmina, colocou-se uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço corado e analisou-se no microscópio, com objetiva de 100X.
3 Resultados e Discussão
Resultados Tabela 1 Observação de Lâminas de cultura prévia
Figura 1 Lâminas coradas pela Técnica de coloração de Gram
4 Discussão A morfologia celular pode ser facilmente reconhecida, observando a célula bacteriana que foi submetida a um processo de coloração. Geralmente este é um indicador inadequado das demais propriedades de uma célula bacteriana. Assim, com rarı́ssimas exceções, é impossı́vel prever-se a fisiologia, ecologia, filogenia, potencial patogênico ou praticamente qualquer outra propriedade de uma célula procariótica simplesmente conhecendo-se sua morfologia. Em 1884, o médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram observou que bactérias apresentavam cores distintas quando submetidas a um processo de coloração, o que o fez classificá- las em dois grupos distintos, Gram-positivas e Gram-negativas (TEIXEIRA, 2001; SANTIAGO, 2003). O processo inicial de coloração proposto por Gram consiste em colorir as bactérias com corante violeta e em seguida usar um fixador; posteriormente é feita uma descoloração com uma mistura alcoólica para posterior novo tingimento com o segundo corante, fucsina. As Gram-positivas se mantêm na coloração violeta, ao contrário das Gram-negativas, que adquirem nova coloração, vermelha (TEIXEIRA, 2001).
Figura 2 Estrutrura típica da parede celular de bactérias: a) gram negativa e b) gram positivas.
A morfologia celular pode ser facilmente reconhecida, observando a célula bacteriana que foi submetida a um processo de coloração. Geralmente este é um indicador inadequado das demais propriedades de uma célula bacteriana. Assim, com rarı́ssimas exceções, é impossı́vel prever-se a fisiologia, ecologia, filogenia, potencial patogênico ou praticamente qualquer outra propriedade de uma célula procariótica simplesmente conhecendo-se sua morfologia. O método de coloração de Gram é diferencial pois baseia-se na diferença química existente entre as bactérias e consequentemente na reação diferente que as bactérias podem apresentar frente a um determinado corante. É utilizada para distinguir diferentes tipos de bactérias. É o mais empregado na rotina bacterioscópica, pois permite: - Identificação e classificação das bactérias - dividir as bactérias em dois grupos Gram-positivas e Gram-negativas; -Observação da forma celular e o tipo de agrupamento; -Prestar informações a respeito do comportamento da composição da parede celular (Gram positiva e Gram negativa) frente aos corantes básicos;
5 -Fácil execução; - Visualização da morfologia da célula bacteriana: cocos ou bacilos e dos arranjos entre as células (células isoladas, em cachos, em cadeias). Não compreendida por muitos anos, a diferença entre os dois tipos de bactéria está na estrutura da parede celular (HOGG, 2005).As bactérias Gram-positivas (Fig. 2b) possuem, na parede celular, uma camada de peptidoglicano mais espessa do que as bactérias Gram-negativas (Fig. 2a). Quando aplicado em células Gram-positivas e Gram-negativas, o corante cristal violeta (violeta de genciana) e o iodo (Lugol) penetram facilmente. Porém, dentro das células eles se combinam para formar o complexo violetalugol (iodo-pararosanilina). Nas bactérias Gram-positivas, por causa da maior quantidade de peptidoglicano, o complexo iodopararosanilina não é removido facilmente pelo tratamento com álcool e, assim, estas células mantêm a cor roxa. Nas bactérias Gram-negativas, o álcool penetra a membrana externa e o complexo violeta-lugol é removido da camada fina de peptidoglicano. Estas células são, em seguida, coradas pelo segundo corante (corante de contraste ou de fundo), a Fucsina ou Safranina, adquirindo a coloração rosa (HOGG, 2005; Gram Stain Protocols). Esta coloração é o ponto de partida na identificação da maioria das bactérias de interesse médico ou ambiental. Para identificação final da bactéria, deverão ser realizadas provas bioquímicas e outras provas.
Figura 3 Processo de elaboração da Técnica de coloração de Gram
6 Conclusão A realização deste relatório descreve o sucesso no alcance dos objetivos inicialmente propostos, sendo fundamental para o entendimento e a prática da microbiologia clínica, uma vez que a coloração de Gram é uma técnica essencial na identificação e classificação de bactérias. Ao corar uma lâmina pelo método de Gram, adquiriu-se habilidades práticas importantes, como a manipulação adequada de materiais de laboratório e o entendimento das propriedades químicas das células bacterianas.
Ao reconhecer os principais tipos morfológicos bacterianos, possibilitou diferenciação entre
bactérias com diferentes formas, tamanhos e arranjos celulares. Isso é crucial para a identificação precisa de patógenos em amostras clínicas.
Observar os principais arranjos das células bacterianas permite o reconhecimento de
padrões comuns, como cocos, bacilos e espirilos, o que é essencial para a identificação preliminar de bactérias.
Ao distinguir bactérias Gram positivas e Gram negativas ao microscópio, desenvolve-se a
capacidade de identificar características específicas das paredes celulares bacterianas, um aspecto crucial na diferenciação de diferentes tipos de bactérias.
A compreensão da importância da coloração de Gram para a microbiologia clínica reside
no fato de que essa técnica permite uma rápida identificação preliminar de bactérias, o que é crucial para orientar o tratamento adequado de infecções bacterianas. Além disso, a coloração de Gram fornece informações relevantes sobre a resistência a antibióticos e a virulência bacteriana, auxiliando na tomada de decisões clínicas informadas. Sendo necessária a compreensão de cada etapa do processo de coloração de Gram, bem como a função de cada substância utilizada, é fundamental para garantir resultados precisos e confiáveis. O sucesso na realização dessa técnica demonstra proficiência técnica e compreensão dos princípios fundamentais da microbiologia clínica.
Em conclusão, a correta execução e compreensão dos objetivos relacionados à coloração de
Gram são essenciais para a prática eficaz da microbiologia clínica, contribuindo para diagnósticos precisos e tratamentos adequados de infecções bacterianas..
7 Referências Bibliográficas
HOGG, S. Essential Microbiology. Glamorgan, UK: Viruses, 2005. p. 260.
TEIXEIRA, P. R. Técnica de Coloração de Gram. Ministerio da Saúde, 2001. p. 67. American Society for Microbiology. Protocols: Gram Stain Protocols. SANTIAGO, Axel Rodolfo. (2003). Hans Christian Joachim Gram. Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología, 23(2), 200-201.
