Scribd Logo
Carregar

Bem-vindo(a) ao Scribd!

  • 14 visualizações

    Relatório Bioq 2

    Enviado por

    Juliana Pazeto Neres

    Direitos autorais:

    © All Rights Reserved
    Baixe no formato PDF, TXT ou leia online no Scribd

    Relatório Bioq 2

    Enviado por

    Juliana Pazeto Neres
    14 visualizações4 páginas

    Título original

    Relatório bioq 2

    Direitos autorais

    © © All Rights Reserved

    Formatos disponíveis

    PDF, TXT ou leia online no Scribd

    Você considera este documento útil?

    Este conteúdo é inapropriado?

    Direitos autorais:

    © All Rights Reserved
    Baixe no formato PDF, TXT ou leia online no Scribd
    Fazer download em pdf ou txt
    14 visualizações4 páginas

    Relatório Bioq 2

    Enviado por

    Juliana Pazeto Neres

    Direitos autorais:

    © All Rights Reserved
    Baixe no formato PDF, TXT ou leia online no Scribd
    Fazer download em pdf ou txt
    de 4

    UNIVERSIDADE ESTADUAL DE LONDRINA

    CURSO DE FARMÁCIA

    JULIA NISHI SONODA RIBAS LOPES


    JULIANA PAZETO NERES
    TURMA: T-2021

    REAÇÕES QUALITATIVAS PARA CARACTERIZAÇÃO DE


    AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS

    Atividade A2 apresentada como requisito parcial à


    disciplina Módulo: Bioquímica (6BIQ017) do curso
    de Farmácia da Universidade Estadual de Londrina

    Professora: Franciely Grose Colodi

    LONDRINA
    2022
    1

    REAÇÕES QUALITATIVAS PARA CARACTERIZAÇÃO DE AMINOÁCIDOS E PROTEÍNAS


    Prática A2: Caracterização da Enzima Urease

    2.2.1- Reação com Biureto


    Técnica: Foram preparados dois tubos de ensaio, de acordo com a tabela abaixo, com os
    reagentes de Urease, água destilada, CuSO4 a 1% e NaOH; foi inserido então a enzima Urease 10
    gotas no tubo teste, em seguida 10 gotas de água destilada no tubo branco, por fim foi inserido 5 gotas
    de (CuSO4 1%) sulfato de cobre e 5 gotas de (NaOH - 2,5 N) hidróxido de sódio em ambos os tubos.
    Conforme a tabela:

    REAGENTES TUBO TESTE TUBO BRANCO

    Urease 10 gotas ------

    Água destilada -------- 10 gotas

    CuSO41% 5 gotas 5 gotas

    NaOH – 2,5 N 5 gotas 5 gotas

    Discussão/Fundamentos: A técnica de biureto consiste na adição de CuSO4 1% para


    verificação de presença ou ausência de ligações peptídicas. O experimento foi feito em dois tubos, se
    diferenciando pela presença de enzima urease no tubo teste, nesse tubo a coloração deu-se na cor
    violeta, enquanto no tubo branco, onde apenas havia água destilada com reagentes, apresentou apenas
    a coloração normal do CuSO4 1%; as reações ocorreram em meio alcalino.
    Conclusão: No tubo teste o qual estava presente a enzima, podemos ver a formação da
    coloração esperada sinalizando então positivo para a proteína Urease.

    2.2.2- Reação de Heller


    Técnica: Em um tubo de ensaio, foram adicionadas, 10 gotas de solução de urease e 10 gotas
    de água destilada e misturado.
    Discussão/Fundamento: A reação de Heller, consiste na identificação da presença de
    proteínas na presença de ácido forte. Em um tubo de ensaio, foi adicionado urease e água destilada,
    a agitação é feita e após isso, 1ml de HNO3 é adicionado, formando então, duas fases, não podendo
    mais ser agitada.
    Conclusão: Essa formação bifásica ocorreu devido ao contato do ácido com a enzima,
    desnaturando-a, formando então o precipitado como se fosse um ´´anel esbranquiçado´´.
    2

    2.3.1- Atividade da enzima urease: na ausência de agentes desnaturantes


    Técnica: Foram utilizados dois tubos de ensaio um de teste e outro branco para controle foram
    adicionados, 10 gotas de Ureia 1% no tubo teste, 10 gotas de água destilada no tubo controle, 3 gotas
    de urease em ambos os tubos e 1 gota de vermelho de fenol nos dois tubos, por fim os tubos foram
    agitados.
    Conforme a tabela:

    REAGENTES TUBO TESTE TUBO CONTROLE

    Uréia 1% 10 gotas --------

    Água destilada -------- 10 gotas

    Urease 3 gotas 3 gotas

    Vermelho de fenol 1 gota 1 gota

    Discussão/Fundamentos: A atividade enzimática baseia-se na preparação de dois tubos de


    ensaio, em um foi adicionado 10 gotas de ureia, com 3 gotas de urease e 1 gota de vermelho de fenol,
    o resultado observado neste tubo foi a coloração vermelha, isso ocorreu pois houve atividade
    enzimática entre a ureia e a urease. No segundo tubo, foi acrescentado 10 gotas de água destilada,
    com 3 gotas de urease e 1 gota de vermelho de fenol, após agitação notamos a cor amarelada, própria
    do corante, mostrando que não houve atividade enzimática, pois não há substrato.
    Conclusão: O tubo teste positivou pra atividade enzimática mudando a coloração da solução
    para vermelho, já o tubo branco manteve sua cor, pois não teve atividade enzimática.

    2.3.2- Atividade da enzima: na presença de agentes desnaturantes


    a) Desnaturação pelo calor
    Técnica: Em um tubo de ensaio foram adicionadas 10 gotas de água destilada e 5 gotas da
    solução de urease, a solução foi agitada e aquecida em banho maria por 5 minutos, depois de aquecida
    foi adicionado 10 gotas de ureia e 1 gota de vermelho de fenol e por fim foi agitada novamente.
    Discussão/Fundamento: A desnaturação pelo calor consiste em altas temperaturas
    desfazendo a estrutura da enzima, obtivemos uma coloração amarela, indicando que não teve
    atividade enzimática por conta da urease ter sido desnaturada durante o processo de aquecimento.
    Conclusão: Não houve atividade da enzimática, pois ela é desnaturada no processo e não
    apresenta atividade com a solução de ureia adicionada.
    3

    b) Inibição ou desnaturação por metais pesados


    Técnica: Em um tubo de ensaio foram adicionadas 10 gotas de água destilada, 5 gotas da
    solução de uréase e agitado, adicionadas mais 3 gotas de HgCl2e agitado, em seguida, adicionadas 10
    gotas de solução de uréia 1% + 1 gota de vermelho de fenol e agitado, observado o resultado; e
    comparado com o TUBO TESTE do item 2.3.1
    Discussão/Fundamento: A inibição ou a desnaturação por metais pesados se deu na adição
    de 10 gotas de água destilada, com 5 gotas de urease em um tubo de ensaio, e após realizar a agitação,
    foi acrescentado 3 gotas de HgCl2, novamente foi agitado e acrescentar 10 gotas de ureia e 1 gota de
    vermelho de fenol, feito isso, foi observado a coloração amarelada devido a desnaturação da enzima,
    fazendo com que não houvesse atividade enzimática, nesse tubo a princípio.
    Conclusão: Verificamos que ocorreu a inibição da proteína isso é confirmado pela coloração
    amarela em comparação com o tubo do teste 2.3.1 que ficou vermelho pois a proteína estava presente
    em sua forma natural.

    2.4.1- Especificidade da Urease

    Técnica: Em um tubo de ensaio foram adicionadas 10 gotas de tiouréia, 5 gotas da solução


    de uréase e 1 gota de vermelho de fenol, após agitado, foi comparado com o resultado do TUBO
    TESTE do item 2.3.1

    Discussão/Fundamento: A tioureia é parecida com a ureia contudo interage com o substrato


    de forma diferente não dando o resultado esperado em comparação com o teste 2.3.1 onde a enzima
    apresentou uma interação positiva com o substrato alterando a cor da solução para vermelho como
    previsto.

    Conclusão: A tioureia como esperado pela não fez uma interação com a enzima devido a
    especificidade dessa que só interagiu de forma eficiente com a Ureia na sua configuração normal.

    Você também pode gostar