Estudo Fitoquímico e Ação Antimicrobiana de Calycophyllum

Brazilian Journal of Development 53676
ISSN: 2525-8761
Estudo fitoquímico e ação antimicrobiana de Calycophyllum

spruceanum (Mulateiro)
Phytochemical study and antimicrobial action of Calycophyllum

spruceanum (Mulateiro)
DOI:10.34117/bjdv7n5-666
Recebimento dos originais: 07/04/2021

Aceitação para publicação: 31/05/2021
Renata Dookie
Bacharel no curso de Farmácia. Universidade Fametro
Amanda Garcia
Evellyn Silva
Cecilia Nunez
Pesquisador do Instituto Nacional de pesquisas da Amazônia (INPA)
Weison Silva
Pesquisador do Instituto Nacional de pesquisas da Amazônia (INPA)
Maria Fachin Espinar

Farmacêutica. Dra. em Biotecnologia. Professora no curso de farmácia. Universidade
Fametro
RESUMO
INTRODUÇÃO: A espécie Calycophyllum spruceanum, pertencente à família
Rubiaceae, conhecida popularmente como mulateiro, tem sido amplamente utilizada na
região amazônica devido aos vários benefícios no uso cosmetológico, antiinflamatório e
antimicrobiano. Nesse sentido, considerando a ampla utilização de C. spruceanum,
muitas vezes de forma empírica, evidencia-se a necessidade de realizar estudos mais
aprofundados com a espécie.OBJETIVO: Realizar a caracterização fitoquímica e
avaliação da atividade antimicrobiana dos extratos brutos de C. spruceanum.
MÉTODOS: As cascas de C. spruceanum, foram extraídas com hexâno e metanol,
posteriormente o extrato metanólico foi fracionado por partição líquido-líquido com
diclorometano (DCM) e acetato de etila (AcOEt). Todos os extratos e fases foram
analisados por cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC), utilizando-se
reveladores físicos e químicos. A avaliação da atividade antibacteriana foi realizada pela
metodologia de microdiluição em poço (CLSI, 2013).RESULTADOS: A avaliação
cromatográfica permitiu observar indícios da presença de iridoides, terpenos, alcaloides,
substâncias fenólicas entre os extratos hexânico e metanólico. No ensaio antimicrobiano
o extrato metanólico apresentou uma concentração mínima inibitória (CIM) de 500 μg
Brazilian Journal of Development, Curitiba, v.7, n.5, p. 53676-53688 may. 2021

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frente às 6 cepas testadas. Por outro lado, o extrato hexânico apresentou a menor taxa
inibitória somente frente às bactérias Aeromonas hydrophila e Pseudômonas aeruginosa,
as fases DCM, AcOEt e hidrometanólico obtidas do extrato metanólico mostraram
atividade antibacteriana frente às cepas Acinetobacter baumannii, Aeromonas
hydrophilae, Salmonella enteritidis.CONCLUSÕES: Evidenciou-se o potencial
farmacológico da espécie C. spruceanum. Amparados pela confirmação da sua
caracterização fitoquímica, os extratos vegetais foram analisados e comparando sua ação
antibacteriana, sendo essas porcentagens influenciadas pelos solventes utilizados na
extração, possibilitam estudos posteriores especificando sua sensibilidade e
especificidade, visto que seus valores foram satisfatórios.
Palavras-Chaves:Caracterização química, Extração vegetal, Comparação inibitória.
ABSTRACT
INTRODUCTION: The species Calycophyllum spruceanum, belonging to the
Rubiaceae family, popularly known as mulateiro, has been widely used in the Amazon
region due to the various benefits in the cosmetological, anti-inflammatory and
antimicrobial use. In this sense, considering the wide spread use of C. spruceanum, often
in an empirical way, the need to conduct more in-depth studies with the species is evident.
OBJECTIVE: To perform phytochemical characterization and evaluation of the
antimicrobial activity of crude extracts of C. spruceanum.METHODS: Bioprospecting
was carried out from the bark of the species C. spruceanum. Initially the material was
extracted with hexane and methanol solvents, then ethanol extract was subsequently
fractionated through a liquid-liquid partition with dichloromethane (DCM) and ethyl
acetate (AcOEt) solvents and analyzed by comparative thin layer chromatography
(CCDC), Using physical and chemical revealers. The evaluation of antibacterial activity
was performed by the well micro dilution methodology (CLSI, 2013).RESULTS: Was
evaluated by cromatograpy observation the presence of iridoids, terpenes, alkaloids,
phenoids compounds between the methanol and hexane extracts. In
the anti-microl assay, the methanol extract showed a minimum inhibition concentration
(MIC) of 500 μg facing the 6 bacterial strains tested. On the other hand, the hexane extract
showed low inhibitory activity only against Aeromonas hydrophila and Pseudomonas
aeruginosa. The DCM, AcOEt and hydromethanolic fazes obtained by the methanol
partition showed inhibition values to Acinetobacter baumannii, Aeromonas hydrophilae,
Salmonella enteritidis bacterial stains.CONCLUSION: potential pharmacological
efficacy of the native species C. spruceanum was evidences in the herbal course.
Supported by confirmation of physical chemical characterization, the plant extracts were
analyzed and comparing their anti-microbial action, this percentage is influenced by the
solvents used during the extraction. they allow consecutive studies specifying there
sensitivity and specificity since their results were satisfactory.
keywords:Chemical characterization, Plant extraction, Inhibitory comparison.
1 INTRODUÇÃO
As plantas sempre fizeram parte da história medicinal da humanidade frente o
combate de diversas patologias. Tendo estruturas que inspiram a síntese de

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medicamentos, suas moléculas possuem atividades biológicas que beneficiam á saúde

humana (ALMEIDA, 2013).
Populações da américa latina são conhecidas mundialmente por utilizar plantas
com propósito medicinal (FENALTI, J. M. et, al.,2016). No Brasil devido à diversidade
florística e a ocorrência de espécies vegetais que possuem substâncias biologicamente
ativas, tornam o país estratégico para estudos químicos e farmacêuticos (CORADIN, et
al,.2011; MOURA, F. D., et al,.2020). Nesse contexto, encontramos espécies vegetais
conhecidas pelos seus diferentes usos medicinais como é o caso da espécie
Calycophyllum spruceanum (Rubiaceae).
No Brasil é popularmente conhecida como mulateiro, pau-mulato, escorrega-
macaco e pau-marfim. O seu tronco possui a casca fina esverdeada quando nova, e torna-
se castanho-escuro ou marrom, que se descasca anualmente em longas tiras, expondo a
camada interna avermelhada e de textura lisa (GUITTON, T. L.1991).
Sua renovação natural e anual possibilita uma coleta totalmente sustentável, essa coleta é
aconselhável fora do período chuvoso. O mulateiro foi incorporado na medicinal herbal
e uso cosmetológico, podendo ser facilmente comprado nos feirantes locais na cidade de
Manaus (ZULETA, et al.2003).
Várias ações biológicas são citadas no uso popular, principalmente a aplicação
sobre a pele com função antiinflamatória e antimicrobiana (DUKE, 2009; BRIOSO,
2012; SANTOS, 2016). Inclui também uso contraceptivo, chá para prevenção de
envelhecimento, controle de doenças gástricas e uterinas, distúrbios do aparelho
geniturinário, colesterol alto, problemas de tireóide e para tratar diabetes (ALMEIDA,
2013; CAETANO et al.,2014). Sendo também amplamente apreciado por suas funções
cosmetológicas, dentre elas, rejuvenescimento, hidratante curativo de rugas, cicatrizante
(bastante usados em cortes, feridas e queimaduras), como protetor solar, no tratamento de
manchas na pele, e como fortalecedor no controle de queda para os fios do couro cabeludo
(REVILLA, 2001; ARAÚJO et al., LINO et al., 2009; MORAES et al., 2009).
Alguns estudos foram realizados para comprovar os benefícios do mulateiro. Os
estudos da ação antifúngicos e antiparasitários do C. spruceanum obtiveram efetividade.
Zuleta et al. (2003) através de testes in vitro exibiram alta atividades contra formas de
tripomastigota (cepa Y) de T. cruzi. Santos et al. (2016) obtiveram resultados de
eficiência na eliminação contra ovos e larvas de S. frugiperdado e Wen, L. et al. (2011),
a ação sobre as espécies da Cândida parapsilosis, Criptococcus, Fusariumoxusporum,
Candidaalbicans, Microsporumgypseum, Trichophytonmentagrophytese Trypanosoma

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cruzi. Outros estudos comprovaram a segurança toxicológica, e Lino et al., (2009)

comprovaram a ação antioxidante e fotoprotetora.
As pesquisas supracitadas evidenciam a eficácia da espécie para uso fitoterápico.
Entretanto para validação científica como iniciativa prévia, tornam-se necessário a
adoção por métodos padronizados, podendo ser exploradas atividades biológicas de
interesse ou perfis químicos. Dessa a forma a execução deste trabalho será enfatizada na
verificação da atividade antimicrobiana como também conhecer os aspectos fitoquímicos
dos extratos e fases obtidas de casca do C. spruceanum.
2 MÉTODOS
Obtenção e moagem do material vegetal
Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Bioprospecção e
Biotecnologia, do Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia – INPA, Manaus,
Amazonas, Brasil. A matéria-prima utilizada nos experimentos foram cascas do
Calycophyllum spruceanum. As amostras foram adquiridas, já secas, na cidade de
Manaus/AM, no Armazém Adolpho Lisboa. Foi realizada a redução do tamanho da casca,
usando Moinho de Facas SL-31.
Preparação dos extratos brutos

Os extratos foram preparados utilizando 500 g de casca do C. spruceanum e 100
ml de hexano, usando Banho de Ultrassom, após isso o material vegetal foi filtrado e
novamente extraído com hexano. Este procedimento foi repetido mais duas vezes
(totalizando 3 extrações com hexano). Após a extração com hexano, o material vegetal
foi seco e extraído com metanol através do mesmo procedimento.
Partição líquido-líquido do extrato metanólico

Para a cromatografia líquido-líquido utilizou-se a proporção de 1 g de amostra
para 50 mL de solução hidrometanólica (1:1 v/v). A amostra, 10 g de extrato metanólico
foi solubilizado numa solução de 250 ml de metanol (MeOH) com 250 ml de água
destilada para formação de 1ª fase (MeOH/H2O), em seguida, adicionado 500 ml de
DCM. Após separação das fases, o DCM foi retirado e submetido à rotaevaparação, então,
reservado em capela de exaustão para total secagem e evaporação do solvente. Sendo
repetido até completar um total de 3 L de DCM, obtendo-se assim a fase diclorometânica.
O mesmo procedimento foi realizado com o AcOEt, obtendo-se, assim, a partir do extrato
bruto metanólico, as fases DCM, AcOEt e hidrometanólica.

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Análise em Cromatografia em Camada Delgada Comparativa (CCDC) dos extratos

As análises químicas dos extratos e fases foram realizadas por CCDC,
empregando cromatofolhas de alumínio com sílica gel impregnado com indicador de
fluorescência UV254 (Alugram SIL G/UV254). As amostras foram aplicadas nas
cromatoplacas e eluídas com solventes orgânicos em diferentes proporções de acordo
com a polaridade das amostras. Foram utilizados reveladores físicos: luz ultravioleta (λ
254 e 365 nm), e reveladores químicos: iodo ressublimado, sulfato cérico, cloreto férrico,
cloreto de alumínio, anisaldeído sulfúrico e reagente de Dragendorff. Alguns dos
reveladores utilizados estão listados na tabela 1.
Tabela 1: Reativos para a cromatografia em camada delgada

Reveladores Detecção
anisaldeído
esteróides, terpenos, etc.
sulfúrico*
esteróides, terpenos,
vanilina sulfúrica*
flavonóides
sulfato de cério* revelador universal
cloreto férrico substâncias fenólicas

reagente de
alcaloides
Dragendorf
*Reveladores universais.
Avaliação da atividade antimicrobiana pelo método de microdiluição em caldo

Para os ensaios antibacterianos foram utilizadas cepas bacterianas sensíveis
(ATCC) gram-positivas e gram-negativas, cedidas pela Fundação Oswaldo Cruz-Rio de
Janeiro (FIOCRUZ-RJ): Staphylococcus aureus (ATCC 12600), Salmonella enteritidis
(ATCC 13076), Aeromonas hydrophila (ATCC 7966), Edwardsiella tarda (ATCC
15947), Acinetobacter baumannii (ATCC 19606), Pseudomonas aeruginosa (ATCC
10145). As cepas foram escolhidas de acordo com sua importância clínica. O ensaio foi
realizado segundo metodologia descrita por CLSI (2013).
Os micro-organismos utilizados no ensaio foram cultivados em meio líquido
Mueller-Hinton e posteriormente diluídos até a concentração de 0,5 na escala de
McFarland. Foram utilizadas 10 mg dos extratos e fases sendo solubilizadas em
dimetilssulfóxido (DMSO) a 2,5%.
Utilizaram-se concentrações de 1000 e 500 μg/mL. Os micro-organismos foram
inoculados em microplacas de 96 poços, em triplicata, juntamente com as diferentes
diluições dos extratos/fases, posteriormente foi feita a leitura inicial em

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espectrofotômetro (625 nm) tipo ELISA e depois as microplacas foram mantidas em

estufa de crescimento microbiano a 30 ou 37 ºC.
Passado as 24 horas foi realizada a leitura final em espectrofotômetro tipo ELISA
e adicionado junto aos poços, 40 μL de revelador (cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazóleo).
Onde houve crescimento bacteriano os poços foram revelados em vermelho, e onde não
houve crescimento, os poços permanecerão incolores.
Foi feito o controle negativo (DMSO + micro-organismo), controle positivo
(antibiótico Oxitetraciclina + micro-organismo) e um controle de esterilidade do caldo (3
poços contendo apenas o caldo).
3 RESULTADOS
Teor de rendimento
Os rendimentos dos extratos hexânicos e metanólicos e fases DCM e AcOEt estão
apresentados na tabela 2.
A porcentagem de rendimento foi calculada com base na equação a seguir:
𝑀𝐹
𝑅= 𝑥100
𝑀𝑂
Onde:
R = Rendimento do extrato em porcentagem (g/100g de amostra)
MF = Massa do extrato medida ao final da extração (g)
MO = Massa da amostra inicial (g)
100 = Fator de conversão para porcentagem
É possível observar que os rendimentos dos extratos obedecem a ordem de

polaridade dos solventes utilizados. Devido o MeOH ter polaridade superior ao DCM o
extrato metanólico maior rendimento.
Para as fases DCM e AcOEt os rendimentos foram maiores, obedecendo também
a regra de polaridade de solvente. É perceptível que a fase acetato teve destacado
rendimento (tabela 2).

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Tabela 2: Rendimentos dos extratos e fases de cascas de

Rendimento em
Extrato Peso (mg) porcentagem
(%)
Hexânico 4,35 0,87
metanólico 38,08 7,61
Fase DCM 0,34 3,4
Fase AcOEt 4,34 43,4
Fase MeOH/H2O 5,32 5,32
Análise por cromatografia em camada delgada comparativa

As análises fitoquímicas dos extratos hexânicos, metanólicos e fase DCM,
apresentaram indícios da presença de terpenos quando revelados com anisaldeído e
sulfato cérico sendo perceptível spots na cor lilás. Tal informação está de acordo com a
literatura, publicações relatam a ocorrência da classe químicas dos terpenos na espécie
Calycophyllum spruceanum (De VARGAS et al., 2016). Ainda com anisaldeído também
foi observado spots com coloração vermelha denunciando possivelmente a presença de
flavonoides, no extrato metanólico. Resultados quanto à presença de flavonoides em C.
spruceanum foram encontrados no trabalho realizado por Peixoto e colaboradores (2018)
onde foram isolados a 5-hidroximorina e taxifolina.
Ainda nos extratos DCM e metanólico foram observados spots azulados quando
revelados com anisaldeído, denunciando indício da presença de terpenos com unidades
de açucares ligados sendo denominados iridoides. Este resultado observado é condizente
com as pesquisas realizadas por Zuleta et al. (2003) que isolaram e elucidaram estruturas
de secoiridoides, iridoides (loganetina, loganina) e os secoiridoides kingiside,
secoxiloganina e diderrosídeo.
A revelação com vanilina indiciou a possível presença de terpenos e fenólicos
através da coloração roxa. As presenças de substâncias fenólicas também foram
observadas nos extratos metanólico, fases DCM, AcOEt e MeOH/H2O, pelos spots
escuros como resultado da reação com o cloreto férrico. Substâncias fenólicas ou
polifenólicas com frequência são citadas em trabalhos com a espécie nesse estudo. Essas
moléculas certamente justificam a atividade antioxidante conferida a C. spruceanum (Da
SILVA et al, 2018; PERIN et al, 2020).
Na aplicação do reagente de Dragendorff, houve reação nos extratos metanólico e
DCM, indicando a presença de alcaloides. (WAGNER et al,.1984). Muitas espécies da

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família Rubiaceae, a qual pertence a espécie em estudo, são conhecidas pela produção de
uma grande diversidade de alcaloides (MARTINS e NUNEZ 2015).
Todos os resultados estão mostrados na seguinte tabela (tabela 3).
Tabela 3: Avaliação qualitativa de classes de metabolitos secundários dos extratos da casca do C.

spruceanum
Indícios da classe de
metabolitos
Amostras secundários
IR TE FE AL
Extrato hexânico + + - -
Extrato
+ + + +
metanólico
Fase DCM + + + +
Fase AcOEt + - + -
Fase MeOH/H2O + - + -
IR – iridoides, TE – terpenos, FE - Fenóis, AL - alcalóides,+ presentes, - ausentes.
Atividade antimicrobiana por microdiluição em poço

Nos estudos da atividade biológica de produtos naturais é importante a correta
escolha dos bioensaios, devendo ser simples, sensíveis e reprodutíveis (MAM et
al.,2002). A tabela 4 mostra a atividade antimicrobiana dos extratos vegetais frente a
algumas bactérias sensíveis, testados pelo método de diluição em poço.
O extrato metanólico apresentou as maiores porcentagens inibitórias, entre 71-
100% contra as 6 cepas na concentração de 1.000μg e 500μg. Em contra partida o
hexânico teve o menor índice de inibição, agindo nas concentrações de 1.000μg apenas
contra A.hidrophila (72,71%) e na concentração de 500μg contra P.aeruginosa (52,41%).
Os extratos de fases da partição obtiveram valores de inibições variáveis entre as
concentrações. O DCM nas concentrações de 1.000μg inibiu as cepas A.baumannii,
A.hydrophila, S.enteritidis e S.aureus com valores entre 73 e 88% e nas concentrações de
500μg, inibiu A.hydrophila com 84,64% e P.aeruginosa com 51,41%. O acetato inibiu
A.baumannii (65,51%), A.hydrophila (59,98%), P.aeruginosa (66,72%) e S.enteritidis
(74,59%) com concentrações de 1.000μg enquanto apenas
A.baumannii (60,27%) teve inibição na concentração de 500μg. Para a fase
MeOH/H2O, apresentou resultados de inibição contra A.hydrophila e S.aureus nas
concentrações de 1.000μg e nas concentrações de 500μg contra A.baumannii e
A.hydrophil.

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Tabela 4: Porcentagem de inibição dos extratos sobre cepas sensíveis em concentrações de 1000 e 500μg/m
Porcentagem de inibição (%)
CEPAS bacterianas Concentração
sensíveis (ATCC) (μg/ml) Extrato Extrato Fase Fase Fase
hexânico metanólico DCM AcOEt MeOH/H2O
1000 - 100 83,45 65,51 -
A. baumannii
500 - 80,75 - 60,27 57,98
1000 72,71 100 88,23 59,98 90,27
A. hydrophila
500 - 92,75 84,64 - 89,06
1000 - 100 - - -
E. tarda
500 - 79,76 - - -
1000 - - - 66,72 -
P. aeruginosa
500 - 93,65 51,41 - -
1000 - 100 73,36 74,59 -
S. enteritidis 500 - 97,02 - - -

1000 - 71,02 60,11 - -
S. aureus 500 - - - - -
De acordo com os resultados observados, o extrato bruto metanólico, se mostrou

com maior potencial antibacteriano inibindo o crescimento bacteriano em ambas as
concentrações testadas, sendo um resultado esperado e condizente com as análises
cromatográficas que revelaram principalmente a presença de compostos fenólicos nos
extratos mais polares, uma vez que é reconhecida a atividade antibacteriana associada a
este tipo de metabólitos secundários (SILVA et al, 2010; PAZ et al. 2018). Para os
extratos que apresentaram valores de inibição apenas em concentrações diluídas,
embasam-se em possíveis componentes isolados e separados durante o processo de
extração levando em consideração que essa espécie botânica possui componentes
químicos não identificados e desconhecidos (PEIXOTO et, al.2018).
Para comparar os resultados da atividade inibitória dos extratos, avaliados quanto
a sua ação antimicrobiana, sendo então representado no gráfico, observa-se que o extrato
metanólico apresenta melhor potencial de ação bacteriostático e bactericida, tendo
elevado valores inibitórios em ambas as concentrações testadas.

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Gráfico 1: Comparativa da porcentagem de probabilidade inibitória dos extratos sobre microbianos.
4 CONCLUSÕES
Os resultados encontrados nesse estudo justificam o uso medicinal do C.
spruceanum entre os povos nativos e algumas das ações relatadas que partem das crenças
mitológicas da suposta árvore milagrosa. Amparados pela confirmação da caracterização
fitoquímica, os extratos vegetais testados apresentam atividade antimicrobiana para
microrganismos de cepas sensíveis, sendo a porcentagem inibitória influenciada pelo
método de extração realizado. Apesar disso, são necessários mais estudos para confirmar
estes achados. Mesmo com esses resultados obtidos, não é aconselhável o uso
indiscriminado desta planta para fins medicinais. Essa pesquisa contribui para a
valorização dos estudos fitoquímicos e pode incentivar pesquisas futuras exploratórias
em relação à espécie C. spruceanum, promovendo assim, resultados que possam garantir
o uso seguro e eficaz de produtos dela originados.
AGRADECIMENTOS
As autoras são gratas ao Programa de Graduação de Bacharel em Farmácia, pelo
Centro Universitário Fametro, ao Instituto Nacional de Pesquisa do Amazonas (INPA),
ao Laboratório de Bioprospecção e Biotecnologia, e à todos que cooperaram,
incentivaram e apoiaram a elaboração do projeto.

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Estudo Fitoquímico e Ação Antimicrobiana de Calycophyllum

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Brazilian Journal of Development 53676

Estudo fitoquímico e ação antimicrobiana de Calycophyllum

Phytochemical study and antimicrobial action of Calycophyllum

Recebimento dos originais: 07/04/2021

Maria Fachin Espinar

Brazilian Journal of Development, Curitiba, v.7, n.5, p. 53676-53688 may. 2021

Palavras-Chaves:Caracterização química, Extração vegetal, Comparação inibitória.

keywords:Chemical characterization, Plant extraction, Inhibitory comparison.

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medicamentos, suas moléculas possuem atividades biológicas que beneficiam á saúde

Brazilian Journal of Development, Curitiba, v.7, n.5, p. 53676-53688 may. 2021

cruzi. Outros estudos comprovaram a segurança toxicológica, e Lino et al., (2009)

Preparação dos extratos brutos

Partição líquido-líquido do extrato metanólico

Brazilian Journal of Development, Curitiba, v.7, n.5, p. 53676-53688 may. 2021

Análise em Cromatografia em Camada Delgada Comparativa (CCDC) dos extratos

Tabela 1: Reativos para a cromatografia em camada delgada

cloreto férrico substâncias fenólicas

Avaliação da atividade antimicrobiana pelo método de microdiluição em caldo

Brazilian Journal of Development, Curitiba, v.7, n.5, p. 53676-53688 may. 2021

espectrofotômetro (625 nm) tipo ELISA e depois as microplacas foram mantidas em

É possível observar que os rendimentos dos extratos obedecem a ordem de

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Tabela 2: Rendimentos dos extratos e fases de cascas de

metanólico 38,08 7,61

Fase DCM 0,34 3,4

Fase AcOEt 4,34 43,4

Fase MeOH/H2O 5,32 5,32

Análise por cromatografia em camada delgada comparativa

Brazilian Journal of Development, Curitiba, v.7, n.5, p. 53676-53688 may. 2021

Tabela 3: Avaliação qualitativa de classes de metabolitos secundários dos extratos da casca do C.

Atividade antimicrobiana por microdiluição em poço

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S. enteritidis 500 - 97,02 - - -

De acordo com os resultados observados, o extrato bruto metanólico, se mostrou

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Gráfico 1: Comparativa da porcentagem de probabilidade inibitória dos extratos sobre microbianos.

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17. PEIXOTO, Herbenya et al. Calycophyllum spruceanum (Benth.), the amazonian

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Brazilian Journal of Development, Curitiba, v.7, n.5, p. 53676-53688 may. 2021

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