MARIAANDREIAINKELMANN

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA
CENTRO DE CIÊNCIAS RURAIS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA
EPIDEMIOLOGIA, SINAIS CLÍNICOS, LESÕES

MACRO E MICROSCÓPICAS, E
IMUNOISTOQUÍMICA DA HEPATITE INFECCIOSA
CANINA
DISSERTAÇÃO DE MESTRADO
Maria Andréia Inkelmann
Santa Maria, RS, Brasil

2008
EPIDEMIOLOGIA, SINAIS CLÍNICOS, LESÕES MACRO E
MICROSCÓPICAS, E IMUNOISTOQUÍMICA DA HEPATITE
INFECCIOSA CANINA
por
Dissertação apresentada ao curso de Mestrado do Programa de Pós-Graduação

em Medicina Veterinária, Área de Concentração em Patologia Veterinária, da
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM, RS), como requisito parcial para a
obtenção do grau de Mestre em Medicina Veterinária.
Orientador: Claudio Severo Lombardo de Barros
Santa Maria, RS, Brasil

2008
Inkelmann, Maria Andréia, 1972-
I56e
Epidemiologia, sinais clínicos, lesões macro e microscópicas, e
imunoistoquímica da hepatite infecciosa canina / por Maria Andréia
Inkelmann ; orientador Cláudio Severo Lombardo de Barros. –
Santa Maria, 2008
40 f. ; il.
Dissertação (mestrado) – Universidade Federal de Santa Maria,

Centro de Ciências Rurais, Programa de Pós-Graduação em
Medicina Veterinária, RS, 2008.
1. Medicina veterinária 2. Doenças do fígado 3. Doenças virais

4. Doenças infecciosas 5. Patologia veterinária 6. Doenças de cães
7. Hepatite infecciosa canina 8. Imunoistoquímica I. Barros, Cláudio
Severo Lombardo de, orient. II. Título
CDU: 619:636.7
Ficha catalográfica elaborada por

Luiz Marchiotti Fernandes – CRB 10/1160
Biblioteca Setorial do Centro de Ciências Rurais/UFSM
Universidade Federal de Santa Maria
Centro de Ciências Rurais
Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária
A Comissão Examinadora, abaixo assinada,

aprova a Dissertação de Mestrado

INFECCIOSA CANINA
elaborada por
como requisito parcial para obtenção do grau de

Mestre em Medicina Veterinária
COMISSÃO EXAMINADORA
Claudio Severo Lombardo de Barros, PhD

(Presidente/Orientador)
David Driemeier, Dr. (URGS)
Glaucia Denise Kommers, PhD (UFSM)
Santa Maria, 12 de fevereiro de 2008.

AGRADECIMENTOS
Obrigado ao meu Deus por ter me encaminhado para um futuro de sucesso e por sempre
guiar meus caminhos.
Obrigado aos meus familiares pela força diária e o amor, e ao meu esposo Alcindo pelo
companheirismo, imenso amor e admiração.
Agradeço imensamente aos professores Dominguita, Luis Francisco e Claudio, por
todos os ensinamentos e amizade.
Muitas vezes obrigada à professora Glaucia que além de um exemplo para mim, é
também como irmã.
Agradeço aos colegas e amigos, Tessie, Marciane, Deise, Aline, Juliana, Eduardo,
Adriano, Bruno, Fabiano, Felipe, Daniel e Márcia, pela amizade sincera.
Em especial eu agradeço com muito carinho às amigas, colegas, irmãs, Elisa e Drica,
por estar sempre me dando força e incentivo todos os dias.
Um agradecimento também especial à Tati e o Fighera, por estarem sempre disponíveis
e me ajudarem desde a minha entrada no laboratório.
Agradeço também à CAPES pela concessão da bolsa.
RESUMO
Dissertação de Mestrado
Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária

INFECCIOSA CANINA
AUTOR: Maria Andréia Inkelmann

ORIENTADOR: Claudio Severo Lombardo de Barros
Local e Data da Defesa: Santa Maria, 12 de fevereiro de 2008.
A presente dissertação consta de uma investigação sobre hepatite infecciosa canina e

resultou na produção de dois trabalhos científicos que estão colocados ao final da dissertação.
Os protocolos de necropsias realizadas em 5.361 cães durante um período de 43 anos (1964-
2006) foram revisados em busca de casos de hepatite infecciosa canina (HIC) e sessenta e
dois (1,2%) casos foram encontrados. Dados epidemiológicos, clínicos e anatomopatológicos
desses 62 casos são apresentados e discutidos no primeiro trabalho. O segundo trabalho
apresenta os resultados de um estudo imunoistoquímico (IHQ) realizado nos tecidos de 27 dos
62 cães pesquisados no primeiro trabalho. Os tecidos examinados incluíram fígado, rim, baço,
linfonodos, tonsilas, pulmão, intestino delgado, encéfalo e medula óssea. Para cada órgão
foram atribuídos graus crescentes (de leve a acentuada) de intensidade de imunomarcação. O
antígeno de adenovírus canino tipo 1 foi marcado na maioria dos órgãos examinados,
principalmente em células endoteliais.
Palavras chave: doenças do fígado, doenças virais, doenças infecciosas, patologia, doenças
de cães, hepatite infecciosa canina, imunoistoquímica.
ABSTRACT
MS Dissertation
Graduate Program in Veterinary Medicine
EPIDEMIOLOGY, CLINICAL SIGNS, MACROSCOPIC AND

MICROSCOPIC LESIONS, AND IMMUNOHISTOCHEMISTRY OF
INFECTIOUS CANINE HEPATITIS
AUTHOR: Maria Andréia Inkelmann

ADVISER: Claudio Severo Lombardo de Barros
Santa Maria, February 12, 2008.
This dissertation consists of an investigation on infectious canine hepatitis (IHC) and

resulted in two scientific papers which are placed in the final part of this dissertation. The
necropsy reports of 5,361 dogs necropsied over a 43-year period (1964-2006) were reviewed
in search for cases of infectious canine hepatitis (ICH). Sixty two (1.2%) cases of the disease
were found. Epidemiological, clinical and anatomopathogical data of these 62 cases are
presented in the first paper. The second paper presents an immunoistochemistry (IHC) assay
performed in the tissues of 27 dogs from the 62 cases surveyed in the first paper. Evaluated
tissues by IHC included liver, kidney, spleen, lymph nodes, tonsils, lungs, small intestine,
brain, and spinal cord. For each organ increasing degrees (from mild to marked) of intensity
of immune staining were ascribed. The antigen of canine adenovirus type 1 was detected in
most of evaluated organs, mainly in endothelial cells.
Key-words: Liver diseases, viral diseases, infectious diseases, pathology, diseases of dogs,
infectious canine hepatitis, immunohistochemistry
SUMÁRIO
AGRADECIMENTOS..............................................................................................................4
RESUMO...................................................................................................................................5
ABSTRACT...............................................................................................................................6
SUMÁRIO.................................................................................................................................7
1. INTRODUÇÃO.....................................................................................................................8
2. REVISÃO DE LITERATURA............................................................................................9
3. TRABALHO 1.....................................................................................................................16
4. TRABALHO 2.....................................................................................................................25
5. DISCUSSÃO........................................................................................................................35
6. CONCLUSÕES...................................................................................................................36
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS..............................................................................37
1. INTRODUÇÃO
O presente trabalho abrange um estudo realizado no Laboratório de Patologia

Veterinária (LPV) do Departamento de Patologia da Universidade Federal de Santa
Maria (UFSM). Consiste de um estudo retrospectivo sobre hepatite infecciosa canina
(HIC). A HIC é uma doença viral de cães e de outras espécies das famílias Canidae e
Ursidae causada por adenovírus canino 1 (CAV-l). Cães afetados apresentam febre,
anorexia, latidos freqüentes, dor abdominal, tonsilite, membranas mucosas pálidas e
sinais clínicos de distúrbios neurológicos. A morte pode ocorrer de forma superaguda
ou aguda. Na forma aguda a evolução pode ser de apenas algumas horas e os sinais
clínicos podem não ser percebidos. Formas subagudas, leves e inaparentes são também
descritas. A taxa de letalidade varia entre 12% e 25%.
O diagnóstico clínico de HIC é difícil devido ao curso superagudo ou agudo da
enfermidade e a pouca especificidade dos sinais clínicos. Em razão disso, o presente
estudo foi desenvolvido para investigar aspectos da HIC que possam facilitar seu
diagnóstico tanto por clínicos como patologistas. Numa primeira parte do estudo, foram
colhidos dados sobre a epidemiologia, os sinais clínicos, as lesões de necropsia e a
histopatologia de 62 casos de HIC em cães necropsiados no LPV/UFSM. Numa
segunda parte do estudo, os tecidos de 27 desses 62 cães foram processados para
imunoistoquímica (IHC) usando um anticorpo monoclonal. O objetivo dessa segunda
parte do estudo foi determinar a distribuição e intensidade do antígeno de CAV-1 pelos
vários tecidos de cães afetados por HIC. Os resultados são apresentados em dois
trabalhos científicos que estão colocados após uma revisão da literatura sobre o assunto.
2. REVISÃO DE LITERATURA
A hepatite infecciosa canina (HIC) é uma doença viral de cães e de outras

espécies das famílias Canidae e Ursidae (INNES & SAUNDERS, 1962) causada por
adenovírus canino 1 (CAV-l). A HIC foi originalmente descrita por Rubarth em 1947
como uma doença aguda, muitas vezes fatal, que causava lesões no fígado, tecido
linfóide e endotélio vascular. Foi por ele chamada de hepatite contagiosa dos cães
(PAY, 1950; PARRY 1950). Rubarth chamou atenção para o fato que o vírus da
encefalite das raposas era idêntico ao vírus da hepatite canina (JONES et al., 2000).
O CAV-1 é um vírus DNA de fita dupla, não envelopado, com
aproximadamente 70-90 nm de diâmetro, pertencente a família Adenoviridae (QUINN
et al., 2002). Como outros adenovírus, CAV-1 é resistente à inativação pelo ambiente e
também à maioria dos desinfetantes comuns, é sensível ao calor, podendo ser inativado
após 5 minutos entre 56°C a 60°C. CAV-1 sobrevive por dias em fômites contaminados
em temperatura ambiente e permanece viável por meses a temperaturas abaixo de 4°C
(GREENE, 2006). CAV-1 tem demonstrado ser cultivável não somente em cultura de
células com origem de cão, mas também em cultura de células de outras espécies como
furão e suínos (KOPTOPOULOS & CORNWELL, 1981).
CAV-1 tem especial tropismo por endotélio vascular, mesotélio e parênquima
hepático, e é a injúria a esses locais que é responsável pelo edema, hemorragia e necrose
hepática. As células do tufo glomerular e as células de Kupffer no fígado são também
alvos do vírus (PAY, 1950; GIVAN & JÉZÉQUEL, 1969; HERVÁS et al., 1997;
CORDÓN et al., 2002; STALKER & HAYES, 2007).
O CAV-1 replica no núcleo das células alvo e vírions recém-montados formam
agregados cristalinos, demonstráveis como inclusões basofílicas intranucleares em
cortes histológicos (QUINN et al., 2005). Através de estudo ultraestrutural é possível
observar alguns pontos de ruptura da membrana nuclear por onde são liberadas as
partículas virais (GIVAN & JÉZÉQUEL, 1969). CAV-1 causa doença aguda, mas seus
antígenos foram demonstrados também em casos de lesões inflamatórias e de doença
hepática crônica (GOCKE et al., 1967; RAKICH et al., 1986). Há descrições do CAV-1
afetando várias espécies de carnívoros (WHETSTONE et al., 1988; ZARNKE &
EVANS, 1989; PARK et al., 2007). Essas espécies, assim como os seus representantes,
estão listados na Tabela 1.
10
Após localização oronasal, CAV-1 replica inicialmente nas tonsilas de onde se

dissemina para os linfonodos regionais e vasos linfáticos, antes de atingir o sangue pelo
ducto torácico (GREENE, 2006). Na tonsila, a inflamação induzida pelo vírus, pode ser
grave e causar a morte se o edema de laringe for muito extenso (STALKER & HAYES,
2007). A viremia dura de quatro a oito dias, mas o vírus é liberado na urina por longos
períodos (CULLEN, 2007).
Tabela 1 - Hospedeiros carnívoros não domésticos de adenovírus canino tipo 1 (CAV-1)

Família Espécie afetada
Canidae Raposa-vermelha (Vulpes vulpes)
Raposa-cinzenta (Urocyon
cinereoargenteus)
Coiote (Canis latrans)
Lobo (Canis lupus)
Ursidae Urso-negro (Ursus americanus)
Urso-polar (Ursus maritimus)
Procyonidae Guaxinim (Procyon lotor)
Mustelidae Jeritataca-malhada (Mephitis mephitis)
Lontra-do-rio (Lutra lutra)
Fonte: PARK et al. Canine adenovirus type 1 infection of an eurasian river otter (Lutra
lutra), Veterinary Pathology 44:536–539. 2007.
A doença pode ser subclínica em animais com boa imunidade (isso significa ter
um título de anticorpos neutralizantes igual ou maior que 1/500). Cães que demonstram
um título parcial de anticorpos (>1/16 e <1/500) nos dias 4-5 pós-infecção (PI),
desenvolvem hepatite crônica e fibrose hepática. Necrose hepática centrolobular ou
panlobular disseminada é freqüentemente fatal em cães infectados que tenham títulos
persistentemente baixos (menor que 1/4) (GOCKE et al., 1967; GREENE, 2006).
Em alguns casos, vasos do encéfalo são afetados e os animais têm hemorragia e
necrose vascular que pode culminar em morte precedida por sinais nervosos. Os relatos
de encefalite por CAV-1 são geralmente em filhotes com poucas semanas a poucos
meses de vida (CAUDELL et al., 2005; DECARO et al., 2006).
O dano endotelial induzido pelo vírus pode levar à coagulação intravascular
disseminada (CID) e a diátese hemorrágica manifesta-se por petéquias e equimoses
11
disseminadas, epistaxe e sangramento contínuo de locais de punção venosa (GREENE,

2006; CULLEN, 2007). Em um modelo experimental animal de CID, cinco cães foram
inoculados com CAV-1, desenvolveram CID e apresentaram alterações como
trombocitopenia, função plaquetária anormal, tempo de protrombina prolongado,
depressão da atividade do fator VIII da coagulação e aumento dos produtos de
degradação da fibrina (WIGTON et al., 1976).
Alguns cães recuperados de infecção leve ou inaparente desenvolvem uveíte por
complexo imune (hipersensibilidade tipo III ou reação de Arthus), o que produz
degeneração e necrose endotelial, resultando em edema corneal conhecido clinicamente
como “olho azul” (DECARO et al., 2006; CULLEN, 2007). Foi experimentalmente
demonstrado que os vasos sangüíneos nos olhos de cães com opacidade corneal
apresentaram aumento da permeabilidade, o que leva ao edema e ao acúmulo de
anticorpos no humor aquoso. Anticorpos presentes no humor aquoso, íris e estroma
corneal iniciam a reação de Arthus nas áreas onde o antígeno viral está presente. O
infiltrado inflamatório observado em muitos casos contribui para o aumento da pressão
intraocular e também do edema corneal (CARMICHAEL, 1964). A uveíte e edema são
geralmente auto-limitantes a menos que complicações adicionais ou destruição
endotelial massiva ocorra (GREENE, 2006).
A vacinação tem tornado a HIC rara em muitos países, mas ainda se tem relatos
de surtos esporádicos (PRATELLI et al., 2001; CAUDELL et al., 2005; DECARO et
al., 2006). Além disso, em locais onde a doença não é controlada com vacinação, é
provável que muitos cães adquiram o agente até os dois anos de vida e sofram infecção
inaparente ou doença febril leve com faringite e tonsilite (STALKER & HAYES, 2007).
O CAV-1 afeta mais freqüentemente cães jovens com idade entre um mês e dois anos
de vida (STALKER & HAYES, 2007). Em um levantamento que analisou o soro de
cães (ABLET & BAKER, 1960), foi observado um maior nível de anticorpos para
CAV-1 no soro de cães acima de 6 meses de idade. Aparentemente não há predileção
por sexo ou raça, pois estudos de casos naturais ou experimentais descrevem a doença
em ambos os sexos e variadas raças (LARIN, 1958).
Pesquisas de anticorpos neutralizantes para o CAV-1 têm demonstrado a presença
do vírus na população de canídeos domésticos e selvagens, e também em ursídeos,
comprovando que a infecção subclínica está presente com o passar dos anos (JAMISON
et al., 1973; AMUNDSON & YUILL, 1981; STEPHENSON et al., 1982; ZARNKE &
BALLARD, 1987; ZARNKE & EVANS, 1989; GREENE, 2006; DEZENGRINI et al,
12
2007).
Observações em surtos de infecção por CAV-1 concomitante com outros agentes
também demonstram que a vacinação correta e o cuidado com a desinfecção e higiene,
são fatores determinantes na ocorrência dessa doença. Um grave surto ocorreu em um
canil que abrigava duzentos cães adultos e trinta filhotes com menos de quatro meses de
idade. Havia problemas de higiene e desinfecção, superlotação e um programa de
vacinação não estava implantado. Vinte desses filhotes morreram uma semana após o
início dos sinais clínicos. Neste caso foram isolados CAV-1 e coronavírus canino
(CCV). Muitos cães desse canil foram testados por sorologia pareada e apresentavam
aumento nos níveis de anticorpos para CAV-1 (PRATELLI et al., 2001). Outros vírus já
foram descritos em infecções concomitantes com CAV-1, como por exemplo, o vírus da
cinomose (KOBSYASHI & ITAKURA, 1993)
Quando a doença clínica fica evidenciada, seu curso é bastante variável, mas
freqüentemente é hiperagudo, e os primeiros sinais se manifestam apenas algumas horas
antes da morte do aninal (JONES et al., 2000). Os sinais clínicos dos cães que
sobrevivem ao período virêmico agudo incluem principalmente apatia, anorexia, vômito
e diarréia com ou sem evidência de sangue. Avermelhamento e aumento de volume das
tonsilas, associado com faringite e laringite, é comum. Dor abdominal e hepatomegalia
são freqüentemente aparentes na doença aguda (GREENE, 2006; JONES et al., 2000).
Inicialmente a temperatura está elevada, mas pode cair rapidamente até níveis
subnormais (JONES et al., 2000). A icterícia é incomum na HIC aguda (PARRY, 1950;
HODGMAN & LARIN, 1953; SWANGO, 1997), mas é encontrada em alguns cães que
sobrevivem a fase fulminante da doença (JONES et al., 2000; GREENE, 2006). Icterícia
leve foi observada 96 horas pós-inoculação (PI) em filhotes infectados
experimentalmente com CAV-1 (WIGTON et al., 1976). Edema subcutâneo grave da
cabeça, pescoço e aspectos ventrais do tronco é um sinal que pode ocorrer, mas é
considerado raro (WIGTON et al., 1976; JONES et al., 2000). Muitas vezes os cães não
apresentam sinais clínicos e morrem subitamente, o que faz com que os proprietários
confundam a doença com intoxicação (SMITH, 1951; SWANGO, 1997; QUINN et al.,
2005; GREENE, 2006).
Sinais clínicos de doença aguda do sistema nervoso central podem ser observados
em filhotes e incluem ataxia, letargia, vocalização, pressão da cabeça, andar em círculos
e cegueira (CAUDELL et al., 2005). Hemorragias multifocais na pele e membranas
mucosas, e sangramento constante em locais de punção venosa, são sinais observados
13
em casos naturais e experimentais (WIGTON et al., 1976).

Na necropsia as principais lesões observadas incluem petéquias e equimoses
disseminadas, líquido serossanguinolento na cavidade abdominal com fibrina, fígado
aumentado de volume, com aspecto moteado e recoberto por película de fibrina, tonsilas
aumentadas e avermelhadas, e linfonodos edematosos, congestos e, muitas vezes,
hemorrágicos. Em alguns casos a quantidade de fibrina pode ser extensa e provocar
aderência de vísceras a parede abdominal. Freqüentemente a parede da vesícula biliar
está espessada por edema (CORNWELL & WRIGHT, 1969; JONES et al., 2000;
GREENE, 2006; STALKER & HAYES, 2007; CULLEN, 2007). Hemorragias podem
ocorrer no pulmão, timo, e em uma pequena percentagem de casos no encéfalo ao nível
do tálamo, mesencéfalo, tronco encefálico e cerebelo (CORNWELL & WRIGHT, 1969;
GREENE, 2006; STALKER & HAYES, 2007). Em infecções experimentais
hemorragias multifocais foram observadas mais freqüentemente no aspecto ventral do
encéfalo (PARRY, 1950). No estômago observa-se conteúdo líquido sanguinolento e a
mucosa está congesta e com pétequias. No intestino há hemorragia subserosa e
petéquias na mucosa (WIGTON et al., 1976).
As alterações histológicas incluem necrose hepática centrolobular a panlobular.
Pode-se observar múltiplos focos de necrose em geral com distribuição
predominantemente centrolobular ao segundo dia pós-infecção (CORNWELL &
WRIGHT, 1969). Inclusões intranucleares basofílicas aparecem inicialmente em células
de Kupffer e posteriormente em hepatócitos viáveis ou parcialmente degenerados
adjacentes a áreas de necrose (JONES et al., 2000; GREENE, 2006). As inclusões
intranucleares freqüentemente são redondas, ocupando grande parte do diâmetro nuclear
e causando a marginação da cromatina (PARRY, 1950). Esse tipo de inclusão
intranuclear é chamado de Cowdry tipo A (WARD et al., 1971).
As inclusões intranucleares são também descritas no endotélio vascular da maioria
dos órgãos (CORNWELL & WRIGHT, 1969) e o tipo de célula que desenvolve a
inclusão parece estar relacionado à via de inoculação (STALKER & HAYES, 2007).
Foi demonstrado experimentalmente que há inclusões intranucleares no endotélio
corneal, trabécula e íris no olho, após a inoculação do antígeno de CAV-1
(CARMICHAEL, 1964).
Alterações histológicas disseminadas ocorrem em vários órgãos como resultado
da lesão endotelial causada pelo vírus (GREENE, 2006). Nos rins, o principal local de
ocorrência de inclusões intranucleares nas células endoteliais é o glomérulo. Essas
14
inclusões raramente estão associadas a qualquer lesão demonstrável no néfron (JONES

et al., 2000; STALKER & HAYES, 2007). Porém há descrição de nefrite intersticial
com predomínio de linfócitos e plasmócitos em cães infectados que sobreviveram. Nos
linfonodos há necrose e depleção linfóide, degeneração vascular, edema e hemorragia
(WIGTON et al., 1976). O baço muitas vezes tem aparência macroscópica normal, mas
na histopatologia observa-se degeneração fibrinóide na muscular de artérias com
grandes inclusões intranucleares basofílicas em células endoteliais (WIGTON et al.,
1976). No encéfalo as alterações são essencialmente secundárias à injúria vascular e
podem estar ausentes (STALKER & HAYES, 2007). Essas alterações incluem células
endoteliais tumefeitas, descamadas em vasos meníngeos e contendo inclusões
intranucleares. Vasculite necrosante de pequenas arteríolas e capilares do tálamo ou
hemorragia perivascular são descritas ao terceiro dia PI em casos de infecção
experimental (CORNWELL & WRIGHT, 1969). Nas meninges são descritos congestão
vascular, hemorragia perivascular e inclusões intranucleares basofílicas em células
endoteliais (CORNWELL & WRIGHT, 1969; PURSELL et al., 1983). Nos olhos
geralmente há poucas inclusões intranucleares no endotélio corneal, porém alguns casos
podem apresentar numerosas inclusões intranucleares, como observado em dois cães no
6° e 7° dias PI (CARMICHAEL, 1964).
Na rotina o diagnóstico da HIC é baseado na associação de sinais clínicos,
achados de necropsia e histopatologia. Outros métodos de diagnóstico utilizados
incluem a técnica de reação de polimerase em cadeia (PCR), isolamento viral,
imunofluorescência, microscopia eletrônica e imunoistoquímica.
A técnica de PCR é altamente sensível e específica e pode detectar baixo número
de cópias de DNA (CHOUINARD et al., 1998). Em surtos de infecção pelo CAV-1 essa
técnica foi utilizada para identificar o agente (KISS et al., 1996; PRATELLI et al.,
2001; CAUDELL et al., 2005; DECARO et al., 2006; PARK et al., 2007).
O isolamento viral pode ser feito do sangue, secreção da orofaringe, urina e fezes,
no período febril. Além disso, na urina há prolongada liberação do vírus por longos
períodos após o início da infecção permitindo o isolamento viral (SWANGO, 1992). A
imunofluorescência pode ser usada para demonstrar antígenos de CAV-1 em cortes
histológicos ou em lâminas que contenham impressão de tecidos colhidos na necropsia,
sendo o rim e fígado os órgãos escolhidos para a realização desta técnica (SWANGO,
1992).
Pela microscopia eletrônica (ME) observam-se partículas virais intranucleares
15
características de adenovírus, que ocorrem em grupos ou dispersas. Alguns grupos de

partículas virais aparecem associadas com formações cristalinas que são formadas de
proteínas. A membrana nuclear apresenta ruptura em alguns pontos e nessas áreas são
liberadas partículas virais para o citoplasma (GIVAN & JÉZÉQUEL, 1969). A ME
demonstrou a presença de locais de replicação viral nas células glomerulares de um
filhote com HIC aguda (HERVÁS et al., 1997).
A imunoistoquímica (IHQ) é uma técnica utilizada em muitos laboratórios
veterinários para o propósito de diagnóstico e também pesquisa. O conceito
fundamental na IHQ é a demonstração de antígenos dentro de seções de tecidos com a
utilização de anticorpos específicos (RAMOS-VARA, 2005). Em casos de ocorrência
natural de HIC, e também em infecção experimental, a confirmação da presença de
CAV-1 foi feita por imunoistoquímica (RAKICH et al., 1986; CAUDELL et al., 2005).
Um estudo experimental avaliando a distribuição do antígeno de um adenovírus através
da técnica de IHQ, foi realizado em cervos, e o resultado foi a imunomarcação em
células do endotélio vascular de diversos órgãos como língua, mucosa oral, tonsilas,
pulmão, rim, rúmen, íleo e cólon (WOODS et al., 1999).
O objetivo dessa dissertação foi relatar a epidemiologia, os sinais clínicos, as
lesões de necropsia e a histopatologia de 62 casos de HIC com a finalidade de orientar
clínicos e patologistas no diagnóstico dessa doença. Adicionalmente, a técnica de
imunoistoquímica usando-se anticorpo monoclonal foi aplicada nos tecidos de 27 desses
62 casos para demonstrar a distribuição do antígeno viral. Em dois trabalhos colocados
a seguir estão os resultados obtidos neste estudo, o qual faz parte de uma série que vem
sendo desenvolvida em nosso laboratório com a finalidade de documentar as principais
doenças que causam morte em cães.
3. TRABALHO 1
HEPATITE INFECCIOSA CANINA: 62 CASOS
Maria A. Inkelmann, Daniela B. Rozza, Rafael A. Fighera, Glaucia D. Kommers,

Dominguita L. Graça, Luiz F. Irigoyen e Claudio S. L. Barros
PUBLICADO EM V.27 (8), P.325-332.
PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Pesq. Vet. Bras. 27(8):325-332, agosto 2007
Hepatite infecciosa canina: 62 casos1

Maria A. Inkelmann2, Daniela B. Rozza2, Rafael A. Fighera2, Glaucia D. Kommers3,
Dominguita L. Graça3, Luiz F. Irigoyen3 e Claudio S.L. Barros3*
ABSTRACT
ABSTRACT.. - Inkelmann M.A., Rozza D.B., Fighera R.A., Kommers G.D., Graça D.L., Irigoyen L.F.
Infectious canine hepatitis: 62 cases.
& Barros C.S.L. 2007. [Infectious cases.] Hepatite infecciosa canina: 62
casos. Pesquisa Veterinária Brasileira 27(8):325-332. Departamento de Patologia, Universidade
Federal de Santa Maria, 97105-900 Santa Maria, RS, Brazil. E-mail: [email protected]
Necropsy reports from 5,361 dogs necropsied over a 43-year period (1964-2006) were
reviewed in search for cases of infectious canine hepatitis (ICH). Sixty two (1.2%) cases of the
disease were found. Most of the 62 affected dogs (91.9%,) were 2-year-old or less. Clinical signs
were recorded in the necropsy files of 45 ICH affected dogs and included anorexia (55.6%),
apathy (35.6%), diarrhea (35.6%) (often with blood [43,8%]), neurological signs (33.3%), vomiting
(26.7%), petechiae and echymosis in the mucous membranes and/or skin (24.4%), hypothermia
(20.0%), abdominal pain (15.6%), icterus (13.3%), enlargement and congestion of the tonsils
(11.1%), fever (11.1%) and ascites (6.7%). The clinical courses lasted from few hours to 15 days.
The most frequent necropsy findings included hepatic changes (87.1%), edematous, congested
and hemorrhagic lymph nodes (51.6%), bloodstained fluid, clear fluid or whole blood in the
abdominal cavity (35.5%), and petechial or paint-brush hemorrhages over the pleural (27.4%)
and gastrointestinal (24.2%) serosal surfaces. In 12.9% of the cases there was a granularity to
the intestinal serosa. Hemorrhages in the leptomeninges and in the substance of the brain
were observed in 9.7% of the cases. Hepatic gross changes included moderately enlarged and
more friable livers with marked lobular pattern, congestion and multifocal pale or hemorrhagic
foci of necrosis. Films and strands of fibrin covered the hepatic surface in 20.4% of the cases
and in 27.8% of the cases the gall bladder was thickened by edema. Zonal or randomly distributed
multifocal hepatic necrosis (93.5%) associated with intranuclear inclusion bodies were the
most consistent microscopic findings. Intranuclear inclusion bodies were found in the liver in
every case and their detection was the criterium for confirmation of the diagnosis. The most
significant microscopic extra-hepatic lesions included hemorrhages and intranuclear inclusion
bodies in endothelial and reticuloendothelial cells of the renal glomeruli (50.0%) lymph nodes
(47.8%), brain (27.8%), tonsils (25.0%) and spleen (10.0%).
INDEX TERMS: Liver diseases, viral diseases, infectious diseases, pathology, diseases of dogs, infectious
canine hepatitis.
RESUMO
RESUMO.- .- Os protocolos de necropsias realizadas em 5.361 62 cães afetados tinha dois anos de idade ou menos (91,9%).
cães durante um período de 43 anos (1964-2006) foram revi- Os sinais clínicos foram anotados nos protocolos de necropsia
sados em busca de casos de hepatite infecciosa canina (HIC) e de 45 cães afetados por HIC e incluíam anorexia (55,6%), apa-
sessenta e dois (1,2%) casos foram encontrados. A maioria dos tia (35,6%), diarréia (35,6%), freqüentemente com sangue (43,8%
dos casos de diarréia), distúrbios neurológicos (33,3%), vômi-
to (26,7%), petéquias e equimoses nas membranas mucosas e/
1 Recebido em 8 de junho de 2007. ou pele (24,4%), hipotermia (20,0%), dor abdominal (15,6%),
Aceito para publicação em 25 de junho de 2007. icterícia (13,3%), aumento de volume e congestão das tonsilas
Parte da tese de Mestrado do primeiro autor.
2 Programa de Pós-graduação em Medicina Veterinária (PPGMV), área de
(11,1%), febre (11,1%) e ascite (6,7%). A duração do curso clíni-
Concentração em Patologia Veterinária, Centro de Ciências Rurais, Universi-
co variou de poucas horas a 15 dias. Os principais achados de
dade Federal de Santa Maria (UFSM), 97105-900 Santa Maria, RS, Brasil. necropsia incluíram alterações hepáticas (87,1%), linfonodos
3 Depto Patologia, UFSM, 97105-900 Santa Maria, RS, Brasil. *Autor para edematosos, congestos e hemorrágicos (51,6%), líquido san-
correspondência: [email protected] guinolento, líquido claro ou sangue na cavidade abdominal
325
326 Maria A. Inkelmann et al.
(35,5%), víbices, sufusões e petéquias sobre a pleura visceral Hoskins 1999): filhotes (até 1 ano de idade), adultos (de um a nove
(27,4%) e superfície serosa das vísceras gastrintestinais (24,2%). anos de idade) e idosos (dez anos de idade ou mais). Foram
Em 12,9% dos casos a serosa do intestino tinha aspecto gra- selecionados os protocolos de necropsia de todos os casos com o
nular. Hemorragias cerebrais nas leptomeninges e na subs- diagnóstico de hepatite infecciosa canina (HIC). Desses protocolos
anotaram-se os seguintes dados: idade, sexo, evolução clínica, sinais
tância do encéfalo foram observadas em 9,7% dos casos. As
clínicos, achados de necropsia e histopatologia. As preparações
alterações hepáticas macroscópicas incluíam fígados mode- histológicas de fígado dos casos de HIC foram revisadas para
radamente aumentados de volume, mais friáveis, com acen- confirmação do diagnóstico. O método definitivo para a inclusão de
tuação do padrão lobular, congestos e com múltiplos focos um caso como HIC foi a presença das inclusões intranucleares
de necrose pálidos ou hemorrágicos. Películas e filamentos características em hepatócitos.
de fibrina cobriam a superfície hepática em 20,4% dos casos e
em 27,8% dos casos a parede da vesícula biliar estava espessa- RESULTADOS
RESULT
da por edema. Necrose hepática zonal ou aleatória (93,5% dos Epidemiologia
casos) associada a corpúsculos de inclusão intranucleares foi Nos arquivos do Laboratório de Patologia Veterinária (LPV)
a lesão histológica mais regularmente encontrada. Os corpús- da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), correspon-
culos de inclusão intranucleares ocorreram no fígado em to- dentes ao período entre janeiro de 1964 e dezembro de 2006
dos os casos e esse foi o critério para confirmação do diag- (43 anos), foram encontrados 5.361 protocolos de necropsia
nóstico. As lesões histológicas extra-hepáticas mais impor- de cães. Desses, em 177 (3,3%) o sexo não foi informado. Dos
tantes incluíram hemorragias e corpúsculos de inclusão em 5.184 cães com sexo especificado nos protocolos, 2.928 (56,5%)
células endoteliais do tufo glomerular renal (50,0%) dos eram machos e 2.256 (43,5%) eram fêmeas. Do total de 5.361
linfonodos (47,8%) , do encéfalo (27,8%), das tonsilas (25,0%) e cães, 354 (6,6%) não tiveram suas idades anotadas nos proto-
do baço (10,0%). colos. Dos 5.007 cães em que a idade foi informada, 1.893
TERMOS DE INDEXAÇÃO: Doenças do fígado, doenças virais, doen- (37,8%) foram incluídos como filhotes, 2.163 (43,2%) como
ças infecciosas, patologia, doenças de cães, hepatite infecciosa cani- adultos e 951 (19,0%) como idosos.
na. Dos 5.361 protocolos de necropsia de cães encontrados
nesse período, 62 (1,2%) tinham o diagnóstico de hepatite in-
INTRODUÇÃO fecciosa canina. Desses 62 cães, 38 (61,3%) eram machos e 24
A hepatite infecciosa canina (HIC) é uma doença viral de cães (38,7%) eram fêmeas. Quarenta e cinco (72,6%) cães foram in-
e de outras espécies das famílias Canidae e Ursidae (Innes & cluídos como filhotes e 17 (27,4%) como adultos. Dos 45 cães
com HIC classificados como filhotes, 43 tinham idades que
Saunders 1962) causada por adenovírus canino 1 (CAV-l). Cães
variavam entre um mês e um ano e dois tinham menos de um
afetados apresentam febre (39,4-41,1°C), anorexia, latidos fre-
mês (ambos com nove dias de idade). Dos 17 cães incluídos
qüentes, dor abdominal, tonsilite, membranas mucosas páli-
como adultos, 12 tinham 1 ou 2 anos de idade; isso significa
das e sinais clínicos de distúrbios neurológicos (Swango 1997,
que 57 dos 62 (91,9%) cães que morreram em conseqüência
Kelly 1993, Greene 2006). A morte pode ocorrer de forma
de HIC tinham dois anos de idade ou menos. Dos cinco cães
superaguda ou aguda (Pay 1950, Parry & Larin 1951, Larin
com mais de dois anos de idade, dois tinham quatro anos e
1958). Na forma aguda a evolução pode ser de apenas algu-
outros três tinham seis, sete e oito anos de idade.
mas horas e os sinais clínicos podem não ser percebidos. For-
mas subagudas, leves e inaparentes são também descritas Sinais clínicos
(Parry & Larin 1951, Hodgman & Larin 1953). A taxa de letali- Os sinais clínicos não constavam dos protocolos de
dade varia entre 12% (Parry 1950) e 25% (Kelly 1993). necropsia de 17 dos 62 cães com HIC. Os sinais clínicos des-
O diagnóstico clínico de HIC é difícil devido ao curso critos nos restantes 45 cães com HIC incluíam, em ordem de-
superagudo ou agudo da enfermidade e à pouca especificidade crescente de freqüência (Fig.1), anorexia (25/45 [55,6%]), apa-
dos sinais clínicos. O objetivo deste trabalho é relatar a tia (16/45 [35,6]), diarréia (16/45 [35,6%]) (Fig.2), freqüentemente
epidemiologia, os sinais clínicos, as lesões de necropsia e a com sangue (43,8% dos casos de diarréia), sinais neurológicos
histopatologia de 62 casos de HIC com a finalidade de orien- (15/45 [33,3%]), vômito (12/45 [26,7%]), petéquias e equimoses
tar clínicos e patologistas no diagnóstico dessa doença. Este nas membranas mucosas e/ou pele (11/45 [24,4%]), hipotermia
estudo faz parte de uma série que vem sendo desenvolvida (9/45 [20,0%]), dor abdominal (7/45 [15,6%]), icterícia (6/45
em nosso laboratório com a finalidade de documentar as prin- [13,3%), aumento de volume e congestão das tonsilas (5/45
cipais doenças que causam morte em cães. [11,1%]), febre (5/45 [11,1%]) e ascite (3/45 [6,7%]). Em apenas
um caso havia dados do painel bioquímico no protocolo de
MATERIAL E MÉTODOS
MATERIAL necropsia, indicando uma elevação na atividade sérica de
Os protocolos de necropsia realizadas em cães de janeiro de 1964 a
alanina aminotransferase. Os sinais neurológicos que afeta-
dezembro de 2006, no Laboratório de Patologia Veterinária (LPV) da vam 15 dos 45 cães foram anotados e estão especificados no
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), foram revisados e dados Quadro 1.
referentes à idade e sexo foram anotados. Os cães foram distribuídos O curso clínico da doença variou de algumas horas a 15
em três faixas etárias de acordo com esquemas de classificação de dias, nos 45 casos em que essa informação estava disponível
idade de cães publicados anteriormente (Hoskins 1993, Goldston & (Fig.3). Dos 13 cães com evolução clínica menor que um dia

Hepatite infecciosa canina: 62 casos 327
Fig.1. Sinais clínicos encontrados em 45 cães afetados por hepatite

infecciosa canina. SNSN, sinais neurológicos; Hem
Hem., hemorragias
nas membranas mucosas e/ou pele; Diar Diar., diarréia; Hip
Hip.,
hipotermia; ↑tons
tons.; aumento de volume e hiperemia das tonsilas.
havia casos de evolução de seis horas (n=2), 12 horas (n=3) e

em oito casos havia a anotação de “morte súbita”. Nesses oito
casos, o proprietário não havia observado sinais clínicos e
Fig.2. Cão afetado por hepatite infecciosa canina com diarréia. Esse
embora estivesse claro no histórico que os cães tiveram um sinal clínico foi observado em cerca de um terço dos casos.
curso clínico inferior a 24 horas, não era possível inferir a
Quadro 1. Tipo do envolvimento do encéfalo em 25 cães com hepatite infecciosa canina

Protocolo Sinal clínico neurológico Alteração macroscópica Alteração histológica no encéfalo
no encéfalo
Vn-064-68 Dificuldade para caminhar, Não observada Encéfalo não coletado
paralisia
Vn-076-68 Convulsões Não observada Encéfalo não coletado
Vn-067-72 Letargia, ataxia, convulsões Não observada Hemorragias perivasculares
Vn-089-73 Paralisia Não observada Hemorragias perivasculares
Vn-028-74 Convulsões Não observada Meningoencefalite não-purulenta
Vn-160-77 Sem sinais neurológicos Não observada INsa em células endoteliais, hemorragias
perivasculares
Vn-103-78 Gritos, incoordenação, fra- Não observada Sem alterações histológicas
queza nos membros pélvicos
Vn-180-82 Distúrbios da visão, difi- Não observada Necrose de células endoteliais, INs em células endoteliais,
culdade em beber água hemorragias perivasculares associadas a células inflamatórias
Vn-021-83 Incapacidade para andar, Não observada Necrose de células endoteliais, INs em células endoteliais,
agressividade, reflexos hemorragias perivasculares
podais diminuídos, miose
Vn-021-87 Fortes convulsões Não observada Marginação leucocitária em vênulas, necrose de células endoteliais
Vn-095-87 Sem sinais neurológicos Petéquias no cerebelo Encéfalo não coletado
Vn-209-89 Sem sinais neurológicos Não observada INs em células endoteliais, hemorragias perivasculares
Vn-228-92 Sem sinais neurológicos Não observada Necrose de células endoteliais, INs em células endoteliais,
hemorragias perivasculares associadas a células inflamatórias
Vn-238-92 Convulsões Não observada Discretas hemorragias perivasculares, necrose de células endoteliais
Vn-101-94 Convulsões Não observada Sem alterações histológicas
Vn-252-96 Convulsões, sialorréia Não observada Encéfalo não coletado
Vn-067-97 Sem sinais neurológicos Meninges com petéquias Encéfalo não coletado
e sufusões. Hematoma no
lobo occipital esquerdo
Vn-090-97 Hiperestesia Não observada Encéfalo não coletado
Vn-180-97 “Sinais neurológicos” Não observada Sem alterações histológicas
Vn-241-02 Sem sinais neurológicos Hemorragias no cerebelo Meningite com fibrina, neutrófilos, macrófagos e hemorragias
perivasculares no neurópilo e substância branca subcortical.
INs em células endoteliais
Vn-305-05 Convulsões Não observada Necrose de células endoteliais, INs em célula endoteliais,
hemorragias perivasculares
Vn-097-06 Sem sinais neurológicos Não observada Necrose de células endoteliais, INs em célula endoteliais,
Vn-098-06 Sem sinais neurológicos Áreas multifocais de hemorragia Necrose de células endoteliais, INs em célula endoteliais,
Vn-171-06 Sem sinais neurológicos Áreas multifocais de hemorragia Necrose de células endoteliais, INs em célula endoteliais,
Vn-173-06 Sem sinais neurológicos Áreas multifocais de hemorragia Hemorragias perivasculares
aINs = inclusões intranucleares.

Fig.3. Distribuição da duração do curso clínico em 45 cães afetados

por hepatite infecciosa canina.
evolução precisa da doença. Os 13 (28,9%) casos com evolu-

ção clínica até 24 horas foram considerados como super-
agudos, os 26 (57,8%) casos com evolução de 1-5 dias foram
considerados como agudos e os restantes seis (13,3%) casos
com evolução de 7-15 dias foram considerados como
subagudos.
Fig.5. Edema da parede vesícula biliar como o observado aqui, ocor-

reu em 15 dos 62 cães afetados por hepatite infecciosa canina.
Achados de necropsia
Dos 62 protocolos de necropsia de cães com HIC, em oito
casos (12,9%) não havia descrição do aspecto macroscópico do
fígado. Em 39 dos 54 (72,2%) casos em que havia descrição de
lesões hepáticas, o fígado foi descrito com o escuro, modera-
damente aumentado de volume com áreas irregulares de he-
morragia e pontilhado claro vistos na superfície natural e de
corte (Fig.4). Em 13 desses 39 (33,3%) casos era mencionada
acentuação do padrão lobular. Em 15 dos 54 casos (27,8%) ca-
sos o fígado foi descrito como mais claro, mais pálido ou ama-
relado e com pontilhado hemorrágico distribuído aleatoriamen-
te pelo parênquima. Em cinco desses 15 (33,3%) casos havia
infestação concomitante por Ancylostoma caninum e em seis
(40,0%) havia icterícia. Na necropsia de 11 dos 54 (20,4%) cães
havia uma película de fibrina depositada sobre a cápsula hepá-
tica, principalmente entre os lobos, causando aderências
interlobares, mas também sobre a serosa de outras vísceras.
Havia edema da parede da vesícula biliar (Fig.5) em 15 dos 54
(27,8%) casos em que foram descritas lesões hepáticas.
As lesões extra-hepáticas encontradas na necropsia dos 62
cães com HIC estão relacionadas no Quadro 2. Em 22 dos 62
(35,5%) casos, quantidades variáveis de líquido (10-700ml) fo-
ram observadas na cavidade abdominal. Em 10 desses casos o
líquido era serossangüinolento e em 8 foi descrito como inco-
Fig.4. Aspecto macroscópico do fígado de cão afetado por hepatite
lor ou amarelo-citrino. Esses 18 casos foram considerados como
infecciosa canina. A . O órgão está aumentado de volume e apre- ascite. Em quatro casos, o líquido consistia de sangue total
senta hemorragias irregulares na superfície capsular. B . Ponti- (hemoperitônio). Numa grande proporção dos casos (32/62 ou
lhado claro na superfície de corte. 51,6%) os linfonodos eram descritos como aumentados de vo-

lume e avermelhados. Ao corte eram macios e deixavam fluir

abundante quantidade de líquido tingido de sangue; nesses
casos, todos os linfonodos do cadáver estavam afetados, mas a
lesão era mais proeminente nos linfonodos da cavidade abdo-
Quadro 2. Alterações extra-hepáticas encontradas na

necropsia de 62 cães com hepatite infecciosa canina
Sistema Alteração observada Número
de vezes
observada
(%)
Integumento e te-
cido subcutâneo Mucosas anêmicas 13 (21,0)
Mucosas ictéricas 6 (9,7)
Hemorragias na pele 5 (8,1)
Edema subcutâneo 5 (8,1)
Petéquias na mucosa oral 4 (6,4) Fig.7. A serosa tinha o aspecto granular como observado nesta figu-
Cardiovascular ra em 8 das 62 necropsias de cães afetados por hepatite infecci-
Equimoses e petéquias subepicárdicas 12 (19,4) osa canina.
e subendocárdicas
Hemolinfopoético
Linfonodos aumentados de volume, 32 (51,6) Quadro 3. Órgãos coletados nas 62 necropsias de cães com
congestos e edematosos hepatite infecciosa canina
Hemorragias/edema do timo 7 (11,3)
Tonsilas aumentadas de volume e hiperêmicas 5 (8,1) Órgão Número de necropsias % de vezes que foi coletado
Respiratório Hemorragias na pleura visceral 17 (27,4) em que foi coletado (sobre as 62 necropsias)
Pulmões avermelhados, pesados e úmidos 7 (11,3)
Hidrotórax 1 (1,6) Fígado 62 100
Digestivo Rim 46 74,2
Intestino com mucosa avermelhada e sangue na luz 25 (40,3) Encéfalo 36 58,1
Ascite 18 (29,0) Pulmão 30 48,4
Hemorragias na serosa do estômago, do intestino 15 (24,2) Intestino 23 37,1
e de outras vísceras da cavidade abdominal Linfonodos 23 37,1
Sangue no conteúdo gástrico 9 (14,5) Coração 13 21,0
Serosa intestinal de aspecto granular 8 (12,9) Baço 10 16,1
Avermelhamento da mucosa gástrica 4 (6,4) Estômago 9 14,5
Edema intersticial de aspecto gelatinoso no pâncreas 4 (6,4) Tonsila 8 12,9
Hemoperitônio 4 (6,4) Bexiga 7 11,3
Invaginação do intestino delgado 1 (1,6) Vesícula biliar 5 8,1
Urinário Timo 3 4,8
Sangue na urina 2 (3,2) Pâncreas 3 4,8
Pontilhado vermelho multifocal no rim 1 (1,6) Gânglio trigêmeo 2 3,2
Nervoso Epidídimo 1 1,6
Hemorragias no encéfalo 6 (9,7) Próstata 1 1,6
Testículo 1 1,6
minal. Víbices, sufusões e petéquias ocorriam na serosa de vá-

rias vísceras da cavidade torácica e abdominal, principalmente
na pleura visceral (17/62 ou 27,4%) (Fig.6) e na serosa do estô-
mago e intestino (15/62 ou 24,2%). As hemorragias pleurais por
vezes se estendiam para o interior do parênquima e as hemor-
ragias na serosa gástrica ocorriam principalmente na porção
cranial da curvatura maior do estômago. A serosa do intestino
tinha um aspecto caracteristicamente granular (Fig.7) em oito
(12,9%) casos e hemorragias foram observadas no encéfalo (Fig.8)
de seis cães (9,7%).
Achados histopatológicos
O número de órgãos avaliados histologicamente em cada
caso variou consideravelmente, mas incluía o fígado em todos
os casos (Quadro 3). A interpretação dos achados histo-patoló-
Fig.6. Extensas áreas de hemorragia na pleura visceral de um cão gicos deve levar em conta a freqüência com que determinado
afetado por hepatite infecciosa canina. órgão foi avaliado. As principais alterações histológicas locali-

8 9
Fig.8. Corte transversal, rostral ao quiasma óptico, no encéfalo de Fig.9. Aspecto histológico do fígado de cão com hepatite infecciosa
cão com hepatite infecciosa canina. Os núcleos caudato, septal, canina mostrando hepatócitos com inclusões intranucleares
putame, globo pálido e a cápsula interna mostram hemorragias anfofílicas sólidas cercadas por halo claro e com marginação da
multifocais. cromatina nuclear contra a carioteca. As inclusões são cercadas
por hepatócitos necróticos. HE, obj.40.
zavam-se no fígado. Em todos os casos havia inclusões

intranucleares (INs) em hepatócitos, células de Kuppfer ou cé-
lulas endoteliais do revestimento dos sinusóides. Essas INs eram
basofílicas ou anfofílicas; algumas delas preenchiam todo o
núcleo, mas a maioria apresentava um halo claro entre a inclu-
são e o limite da carioteca (Fig.9). Em 58 (93,5%) casos havia
necrose hepática (Fig. 10), associada a hemorragia em 27 (46,6%)
casos e a infiltrado inflamatório misto nos espaços porta em
oito (13,8%) casos. A necrose tinha distribuição centrolobular
em 41 (70,7%) casos e aleatória em 17 (29,3%) casos. As INs eram
geralmente observadas em células da periferia dos focos de
necrose. Em quatro (6,4%) casos não se observou necrose hepá-
tica; nesses, a principal alteração, além das INs, era congestão,
mais acentuada no centro do lóbulo. Não foram observadas
diferenças quando se compararam as alterações histológicas
hepáticas de cães com evolução clínica superaguda, aguda e
subaguda. As alterações histológicas encontradas no encéfalo
estão relacionadas no Quadro 1 e consistiam de hemorragia
(14/36 ou 38,9%), em geral perivasculares, e/ou necrose das cé-
lulas endoteliais (9/36 ou 25,0%) associadas a INs anfofílicas no
núcleo de células endoteliais (10/36 ou 27,8%). Nos linfonodos
havia dilatação dos seios subcapsulares e medulares, com hiper-
plasia de células reticuloendoteliais, intensa eritrofagocitose,
presença de grande quantidade de eritrócitos e infiltrado infla-
matório misto. Em 11 (47,8%) desses casos foram observadas
INs em células endoteliais. Em dois casos havia glomerulo-
nefrite aguda, mas INs desacompanhadas de outras alterações
histológicas foram observadas no tufo glomerular de 50% dos
rins examinados. No baço e nas tonsilas as inclusões ocorriam
também em células endoteliais em 10,0% e 25,0% dos casos em
que esses órgãos foram avaliados.
Fig.10. Distribuição da necrose hepática zonal na hepatite infecciosa
canina. A. Necrose centrolobular. HE, obj.20. B . Maior aumento
da lesão em A, mostrando edema e infiltrado inflamatório ao re-
DISCUS SÃO
DISCUSSÃO
dor da veia centrolobular. Várias inclusões intranucleares anfofílicas A forma fatal da hepatite infecciosa canina (HIC) é uma condi-
características da infecção por adenovírus canino 1 podem ser ção pouco comum, pois ocorreu em apenas 1,2% dos 5.361
vistas em hepatócitos ao redor da veia centrolobular. HE, obj.40. cães necropsiados num período de 43 anos (1964-2006). Num

estudo que utilizou 817 amostras de soro de cães não-vacina- O critério de diagnóstico para HIC neste estudo foi a pre-
dos de Santa Maria, RS, 43% foram positivas para adenovírus sença de inclusões intranucleares (INs) nos hepatócitos. A
canino (CAV) (Dezengrini et al. 2007). Embora o estudo não conclusão de que esse deve ser o critério definitivo para diag-
diferencie claramente entre as infecções por CAV-1 (Hepatite nóstico de HIC é reforçada pelo fato de que em um estudo
infecciosa canina) e CAV-2 (doença respiratória), é provável retrospectivo com marcação imunoistoquímica no fígado de
que a infecção por CAV-1, em nosso meio, seja muito mais cães com diagnóstico de HIC, o único caso negativo foi o que
freqüente que a doença clínica. Em geral, estima-se que ape- havia sido diagnosticado na hematoxilina e eosina pela “pre-
nas entre 12% (Parry 1950) e 25% (Kelly 1993) dos cães afeta- sença de lesões típicas de HIC”, mas, sem as INs característi-
dos morram, e que os restantes desenvolvam doença subclí- cas (Rakich et al. 1986). Essas inclusões têm sido descritas em
nica ou leve e se recuperem, mantendo níveis séricos de anti- um grande número de células além de hepatócitos e o tipo
corpos. de célula que desenvolve a inclusão parece estar relacionado
A HIC demonstrou ser uma doença principalmente de ani- à via de inoculação (Kelly 1993). Elas ocorrem em células
mais jovens (até 2 anos) - o que é, em geral, reconhecido pela endoteliais e reticuloendoteliais (Kelly 1993, Cullen 2007).
maioria dos autores (Larin 1953, Hodgman & Larin 1953, Neste estudo, os órgãos que apresentaram INs características
Swango 1997, Kelly 1993, Greene 2006) - embora em 5 dos 62 da infecção por CAV-1 foram, em ordem decrescente de fre-
casos deste estudo, as idades fossem 3-8 anos. A doença tem qüência, fígado, rim, encéfalo, tonsilas, linfonodos e baço. É
um curso clínico em geral agudo ou superagudo e, menos interessante lembrar que nos hepatócitos de cães ocorrem
freqüentemente, subagudo (até 15 dias), mas não foram ob- INs inespecíficas (Innes 1949) que têm sido confundidas com
servadas diferenças histológicas no fígado de cães que suas inclusões de HIC (Smith 1951). As INs inespecíficas são for-
cumbiram à HIC com evolução clínica superaguda, aguda ou temente acidofílicas, poliédricas e ocorrem em cães de meia-
subaguda. Na fase superaguda, alguns animais foram descri- idade ou idosos e sem as outras alterações associadas à HIC
tos como tendo “morte súbita”, o que torna impossível a in- (Innes 1949, Kelly 1993, Cullen 2007).
tervenção terapêutica e difícil o diagnóstico clínico nesses A ocorrência das hemorragias, inclusive no encéfalo, que
casos. Embora os sinais clínicos de HIC sejam pouco específi- é uma característica da doença, deve-se provavelmente a mais
cos e muitas vezes difíceis de serem observados devido ao de um fator, mas tem como base patogenética o tropismo do
curso superagudo, os achados de necropsia são suficiente- vírus pelos endotélios, parênquima hepático (hepatócitos) e
mente específicos para permitir um diagnóstico presuntivo mesotélios (Kelly 1993, Greene 2006). Originalmente era acei-
razoavelmente acurado, quando associados à epidemiologia to que a tendência disseminada à hemorragia devia-se à le-
e aos sinais clínicos (Smith 1951, Swango 1997). O clínico deve são direta ao endotélio (Kelly 1993) associada à incapacidade
suspeitar de HIC quando um cão com dois anos ou menos do fígado (lesão hepatocelular) em sintetizar os fatores da
apresentar morte superaguda ou aguda (curso clínico com coagulação. Embora provavelmente isso tenha alguma parti-
duração de algumas horas a sete dias) com sinais como dor cipação, acredita-se que a coagulação intravascular dissemi-
abdominal, distúrbios neurológicos e hemorragias na pele e nada (CID) seja o evento central na patogênese das lesões
mucosas. Achados de necropsia como líquido sanguinolento hemorrágicas (Cheville 2006). A maioria dos casos de CID nas
com fibrina e coágulos de sangue na cavidade abdominal; doenças virais resulta da liberação de fatores procoagulantes
linfonodos aumentados de volume, edematosos e hemor- do tecido necrótico. A perda do endotélio induzida pelo ví-
rágicos; edema da vesícula biliar e hemorragias disseminadas rus expõe a matriz subendotelial ao ataque das plaquetas e
são evidências adicionais para o fortalecimento de um diag- as células endoteliais degeneradas são fonte de tromboplas-
nóstico presuntivo. tina tecidual e de outros fatores procoagulantes. Defeitos da
Icterícia não é um achado freqüente na HIC (ocorreu em hemostasia que ocorrem na hepatite infecciosa canina inclu-
apenas 6 [13,3%] dos cães com HIC neste estudo) e era de in- em trombocitopenia, trombocitopatia, tempo de protrombina
tensidade leve. Achados semelhantes têm sido descritos (Parry prolongado, atividade diminuída do fator VIII e aumento dos
1950, Parry & Larin 1951, Hodgman & Larin 1953, Swango produtos de degradação de fibrina. O número reduzido de
1997, Kelly 1993). Assim, HIC não deve ser considerada como plaquetas reflete tanto o aumento no consumo (para reparar
um diagnóstico provável em um cão com icterícia acentuada. a lesão endotelial induzida pelo vírus) quanto dano direto
A correlação errônea entre icterícia e hepatite infecciosa ca- causado pelo vírus nas plaquetas. Em conseqüência da lesão
nina originou-se, provavelmente, do fato desse sinal clínico endotelial disseminada produzida pelo vírus, ocorre consu-
ser freqüente na hepatite infecciosa de pessoas, uma doença mo excessivo de fatores da coagulação, o que favorece as
não relacionada à HIC. hemorragias (Kelly 1993, Cheville 2006).
O aspecto granular da serosa como o descrito em três cães Embora seja geralmente aceito que os casos não-fatais de
com HIC neste estudo é geralmente interpretado como acha- HIC apresentem recuperação total, estudos experimentais
do de necropsia característico de parvovirose. No entanto, (Gocke et al. 1967, 1970) sugerem que cães recuperados po-
essa alteração tem sido muitas vezes descrita associada à HIC dem apresentar lesão crônica de HIC. Em alguns estudos de
por outros autores (Kelly 1993) e não deve ser interpretada lesões crônicas (fibrose hepática) espontâneas do fígado em
como lesão exclusiva de parvovirose. Essa lesão tem sido cães, observou-se, por imunoistoquímica, a presença de
explicada como resultante de reação de linfáticos superfici- antígenos de CAV-1 (Rakich et al. 1986). Alguns autores (Gocke
ais da serosa (King & Lee 1983). et al. 1970, Rakich et al. 1986) sugerem, em razão disso, uma

participação do CAV-1 na gênese de lesões hepáticas crônicas mental viral hepatitis in the dog. Production of persistent disease in
em cães, como fibrose hepática e hepatite crônico-ativa, mas partially immune animals. J. Clin. Invest. 46:1506-1517.
isso, em geral, não é aceito pela maioria dos pesquisadores. Goldston R.T. & Hoskins J.D. 1999. Geriatria e Gerontologia em Cães e Gatos.
Roca, São Paulo. 551p.
O edema da córnea tem desenvolvimento tardio em casos
Greene C.E. 2006. Infectious canine hepatitis and canine acidophil cell
de cães afetados por HIC e ocorre em animais convalescen- hepatitis, p.41-47. In: Idem (ed.), Infectious Disease of the Dog and Cat.
tes, usualmente entre 14-21 dias após a infecção. Resulta de 3rd ed. Saunders Elsevier, Philadelphia. 1387p.
edema inflamatório na íris, no aparelho ciliar, na própria da Hodgman S.F.J. & Larin N.M. 1953. Diagnosis of canine virus hepatitis
córnea e de abundante infiltrado inflamatório no ângulo de (Rubarth’s disease). Vet. Rec. 65:447-450.
filtração (Carmichael 1964, 1965). Há evidências que a lesão Hoskins J.D. 1993. Pediatria Veterinária. Manole, São Paulo. 605p.
ocular seja uma reação de hipersensibilidade tipo III (Kelly Innes J.R.M. & Saunders L.Z. 1962. Comparative Neuropathology. Academic
1993). Em nenhum dos 42 cães com HIC deste estudo obser- Press, New York. 839p.
vou-se essa lesão, talvez pela evolução superaguda ou aguda Innes J.R.M. 1949. Inclusions and crytaline bodies. Brit. Vet. J. 105:99-107.
da maioria dos casos. Kelly W.R. 1993. The liver and biliary system, p.319-406. In: Jubb K.F.V.,
Kennedy P.C. & Palmer N. (ed.), Pathology of Domestic Animals. Vol.2. 4th
ed. Academic Press, San Diego. 747p.
REFERÊNCIAS
King J.M. & Lee R.C.T. 1983. An Atlas of General Ppathology. Pig Research
Carmichael L.E. 1964. The pathogenesis of ocular lesions of infectious canine Institute, Taiwan. 376p.
hepatitis I. Pathology and virological observations. Pathol. Vet. 1:73-95.
Larin N.M. 1958. Epidemio1ogica1 studies of canine virus hepatitis (Rubarth’s
Carmichael L.E. 1965. The pathogenesis of ocular lesions of infectious canine disease). Vet. Rec. 70:295-297.
hepatitis II. Experimental ocular hypersensitivity produced by the virus. Parry H.B. & Larin N.M. 1951. The natural history of virus hepatitis of dogs
Pathol. Vet. 2:344-359. (Rubarth’s disease). Vet. Rec. 63:833-847.
Cheville N.F. 2006. Introduction to Veterinary Pathology. 3rd ed. Blackwell, Parry H.B. 1950. Viral hepatitis of dogs (Rubarth’s disease). 1. Clinical and
Ames. 370p. pathological observations on a spontaneous epidemic. Vet. Rec. 62:559-565.
Cullen J.M. 2007. Liver, biliary system and exocrine pancreas, p.393-461. In: Pay T.W.F. 1950. Infectious canine hepatitis (Hepatitis contagiosa canis
McGavin M.D. & Zachary J.F. (ed.), Pathologic Basis of Veterinary Disease. [Rubarth]). Vet. Rec. 62:551-558.
4th ed. Mosby Elsevier, St Louis. 1476p.
Rakich P.M., Prasse K.W., Lukert P.D. & Cornelius L.M. 1986 Immuno-
Dezengrini R., Weiblen R. & Flores E.R. 2007. Soroprevalência das infecções histochemical detection of canine adenovirus in paraffin sections of liver.
por parvovírus, adenovírus, coronavírus canino e pelo vírus da cinomose Vet. Pathol. 23:478-484.
em cães de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil. Ciência Rural, Santa Smith D.L.T. 1951. Observations on infectious canine hepatitis. Am. J. Vet.
Maria, 37:183-189 Res. 12:38-43.
Gocke D.J., Morris T.Q. & Bradley S.R. 1970. Chronic hepatitis in the dog: the Swango L.J. 1997. Moléstias virais caninas, p.573-588. In: Ettinger S.J &
role of immune factors. J. Am. Vet. Med. Assoc. 156:1700-1705. Feldman E.C. (ed.), Tratado de Medicina Interna Veterinária. Manole, São
Gocke D.J., Preisig R., Morris T.Q., McKay D.G. & Bradley S.E. 1967. Experi- Paulo. 3020p.

4. TRABALHO 2
ASPECTOS IMUNOISTOQUÍMICOS DA HEPATITE

INFECCIOSA CANINA
Maria A Inkelmann, Bruno L. Anjos, Glaucia D. Kommers, Rafael A. Fighera e

Claudio S. L. Barros
SUBMETIDO PARA PUBLICAÇÃO EM CIÊNCIA RURAL

Aspectos imunoistoquímicos da hepatite infecciosa canina
Aspectos imunoistoquímicos da hepatite infecciosa canina
Maria Andréia Inkelmann 1 Bruno Leite dos Anjos1 Glaucia Denise Kommers2
Rafael Almeida Fighera2 Claudio Severo Lombardo de Barros2*
- NOTA -
RESUMO
Tecidos de 27 cães que morreram de hepatite infecciosa canina (HIC) foram
avaliados por imunoistoquímica (IHQ) para detecção de antígeno de adenovírus canino
tipo 1 (CAV-1) por meio de um anticorpo monoclonal. Os tecidos examinados incluíram
fígado, rim, baço, linfonodos, tonsilas, pulmão, intestino delgado, encéfalo e medula óssea.
Para cada órgão foram atribuídos graus crescentes (de leve a acentuada) de intensidade
de imunomarcação. O antígeno de CAV-1 foi marcado na maioria dos órgãos examinados,
principalmente em células endoteliais. Relacionando o tempo de evolução clínica da HIC
com a intensidade da imunomarcação, o maior número de casos com evolução clínica
hiperaguda ou aguda, coincidiu com a maior intensidade de marcação do antígeno viral..
A IHQ demonstrou ser um teste adequado para a detecção do antígeno de CAV-1 e pode
ser usado para o estudo da patogênese da doença.

1
Programa de Pós-graduação em Medicina Veterinária, área de concentração em Patologia Veterinária,
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), 97105-900, Santa Maria, RS, Brasil.
2
Laboratório de Patologia Veterinária, Departamento de Patologia, UFSM, Santa Maria, RS, Brasil. *Autor
para correspondência, e-mail: [email protected]
2
Palavras-chave: adenovírus canino tipo I, hepatite infecciosa canina, imunoistoquímica,
doenças de cães.
ABSTRACT
Tissues from 27 dogs dead from infectious canine hepatitis (ICH) were evaluated by
immunohistochemestry (IHC) for detection of canine adenovirus type 1 (CAV-1) antigen
using a monoclonal antibody. Evaluated tissues included liver, kidney, spleen, lymph
nodes, tonsils, lungs, small intestine, brain, and spinal cord. For each organ increasing
degrees (from mild to marked) of intensity of immune staining were ascribed. CAV-1 was
detected in most of evaluated organ, mainly in endothelial cells. Considering the clinical
course of ICH and the intensity of IHC staining, cases with acute and hyperacute courses
had more marked staining. IHC proved to be a reliable test for CAV-1 antigen detection
and can be used for pathogenesis studies on ICH.
Palavras chave: Canine adenovirus 1, infectious canine hepatitis, immunohistochemistry,
diseases of dogs.
A hepatite infecciosa canina (HIC) é uma doença viral de cães e de outras espécies
das famílias Canidae e Ursidae, causada por adenovírus canino 1 (CAV-l) pertencente à
família Adenoviridae (GREENE, 2006). CAV-1 tem afinidade por células endoteliais e
células hepáticas, está presente em tecidos e em fluídos corporais e é excretado pela urina
(HODGMAN & LARIN, 1953). A HIC freqüentemente tem curso clínico superagudo ou
agudo e afeta principalmente cães jovens não-vacinados. Após localização oronasal, CAV-
1 replica inicialmente nas tonsilas, passa aos linfonodos regionais e atinge o sangue pelo
ducto torácico. A viremia dura 4-8 dias, mas o vírus é liberado na urina por períodos mais
3
longos. Os sinais clínicos incluem anorexia, apatia, vômito, dor abdominal, diarréia com ou
sem sangue (GREENE, 2006). Em alguns casos há sinais neurológicos como
incoordenação, convulsões, vocalização e letargia (CAUDELL et al., 2005). A icterícia é
incomum ou rara na HIC aguda (INKELMANN et al., 2007), mas pode ser encontrada em
alguns cães que sobrevivem a fase fulminante da doença (GREENE, 2006). As lesões
macroscópicas incluem petéquias e equimoses disseminadas, líquido serossanguinolento na
cavidade abdominal com fibrina, fígado aumentado, com aspecto moteado e recoberto por
película de fibrina. As tonsilas estão aumentadas e avermelhadas, e os linfonodos
edematosos e hemorrágicos. Freqüentemente há edema da parede da vesícula biliar e
hemorragias podem ser observadas no encéfalo ao nível do tálamo, mesencéfalo, tronco
encefálico e cerebelo (INKELMANN et al., 2007). As alterações histológicas incluem
necrose hepática centrolobular a panlobular associadas a inclusões intranucleares
basofílicas características que aparecem inicialmente em células de Kupffer e após em
hepatócitos viáveis ou degenerados adjacentes a áreas de necrose (GREENE, 2006).
Rotineiramente o diagnóstico de HIC é feito pela associação entre sinais clínicos,
lesões macro e microscópicas, porém outros métodos são utilizados para confirmar a
presença do CAV-1 nos tecidos, como por exemplo, a imunoistoquímica (IHQ), a técnica
reação em cadeia da polimerase (PCR) e o isolamento viral (CHOUINARD et al., 1998;
CAUDELL et al., 2005). A imunoistoquímica utiliza anticorpos específicos para detecção
da quantidade, distribuição tecidual e localização celular dos epítopos imunogênicos em
secções histológicas (HAINES & WEST, 2005).
O objetivo deste estudo foi demonstrar antígeno de CAV-1 em tecidos de cães
acometidos por HIC. Em estudo retrospectivo anterior (INKELMANN et al., 2007) a
doença foi detectada em 62 cães necropsiados em nosso laboratório. Em apenas 27 desses

4
casos havia tecidos armazenados em blocos de parafina. Esses 27 casos compuseram os
animais deste estudo.
A marcação IHQ foi realizada em secções histológicas de 3 µm. Para bloqueio da
peroxidase endógena as lâminas foram incubadas com peróxido de hidrogênio a 3% em
metanol. Na recuperação antigênica utilizou-se a enzima Proteinase K (Dako – cód.
S3020)a por cinco minutos. O anticorpo monoclonal para CAV-1 (VRMD, cód. 2E10-H2)b
a uma diluição de 1:100 foi incubado por uma hora, a 37°C em câmara úmida. O anticorpo
secundário biotinilado e o complexo estreptavidina-peroxidase (LSAB - DakoCytomation,
cód. K0690)a, foram incubados consecutivamente por 30 minutos à temperatura ambiente.
Tetracloreto de 3-3' diaminobenzidina (DAB, Sigma, cód. D-5637)c foi usado como
cromógeno. A contracoloração foi realizada pela hematoxilina de Harris e a montagem
entre lâmina e lamínula, com meio sintético. Quanto à intensidade, a imunomarcação, nos
órgãos examinados foi classificada como leve, quando algumas poucas células foram
marcadas; como moderada, quando uma quantidade média (entre 30 e 60%) das células foi
marcada e acentuada, quando grande quantidade de células foi marcada (Tabela 1). A
imunomarcação ocorria em intensidades variáveis no núcleo e citoplasma de células
endoteliais, hepatócitos e células de Kupffer. A marcação podia preencher todo o núcleo ou
ocorrer ao redor de inclusões com centros não-marcados (Figura 1A). No citoplasma a
marcação tinha aspecto finamente granular em hepatócitos e de forma difusa em células
endoteliais e de Kupffer (Figura 1B). Interessantemente, algumas inclusões virais não
foram marcadas. Algo semelhante foi observado no fígado de cães com HIC em outros
estudos imunoistoquímicos (RAKICH et al. 1986, CHOUINARD et al. 1998) e isso
explicado pela inclusão ser formada por partículas virais, mas também por proteínas que
formam uma matriz amorfa presente em quantidades variáveis antigenicamente distintas do

5
vírus (GIVAN & JÉZÉQUEL, 1969; RAKICH et al., 1986). Nos casos com necrose
hepática acentuada, a marcação ocorreu em hepatócitos e células de Kupffer viáveis e
também nas áreas de necrose (Figura 1C). No rim (Figura 1D) e linfonodos, baço e medula
óssea numerosas células reticuloendoteliais apresentavam grande quantidade de antígeno
viral. Baço (Figura 1E) e medula óssea apresentaram imunomarcação acentuada em alguns
casos. O antígeno foi detectado no endotélio de vasos do encéfalo (Figura 1F),
principalmente em filhotes de até um ano de idade, não-vacinados e que morreram de
forma hiperaguda ou aguda. A marcação imunoistoquímica em células endoteliais de vários
órgãos confirma a predileção de CAV-1 por células endoteliais e explica as lesões
hemorrágicas encontradas na doença espontânea (INKELMANN et al., 2007). Neste
estudo, os casos com curso clínico superagudo ou agudo apresentaram maior intensidade de
imunomarcação (moderada ou acentuada). Achado semelhante foi relatado em outro estudo
imunoistoquímico no encéfalo de filhotes de cães com HIC (CAUDELL et al., 2005). Já os
casos estudados que apresentaram imunomarcação leve tiveram curso clínico mais longo.
A imunoistoquímica é eficaz na demonstração da distribuição do antígeno viral em
tecidos de cães com HIC. A imunomarcação do CAV-1 nos diversos tecidos demonstra a
disseminação do vírus pelo organismo, principalmente afetando às células endoteliais. A
correlação entre a intensidade de imunomarcação e o tempo de evolução clínica
demonstrou grande quantidade de antígeno viral nos casos hiperagudos e agudos.
FONTES DE AQUISIÇÃO
a
DakoCytomation, Carpinteria, Califórnia, Estados Unidos.
b
VRMD, Inc., Pullman, Estados Unidos.
c
Sigma, Saint Louis, Missouri, Estados Unidos.
6
AGRADECIMENTOS
Este trabalho é parte da dissertação de mestrado do primeiro autor.
REFERÊNCIAS
CAUDELL, D. et al. Diagnosis of infectious canine hepatitis virus (CAV-1) infection in

puppies with encephalopathy. Journal Veterinary Diagnostic Investigation, n.17, p.58-
61, 2005.
CHOUINARD, L. et al. Use of polymerase chain reaction and immunohistochemistry for

detection of canine adenovirus type 1 in formalin-fixed, paraffin-embedded liver of dogs
with chronic hepatitis or cirrhosis. Journal Veterinary Diagnostic Investigation, n.10,
p320-325, 1998.
GIVAN, K.F. & JÉZÉQUEL, A. Infectious canine hepatitis: a virologic and ultrastructural
study. Laboratory Investigation, v.20, n.1, p.36-45. 1969.
GREENE, C.E. Infectious canine hepatitis and canine acidophil cell hepatitis. In:
__________. Infectious disease of the dog and cat. 3.ed. Philadelphia : Saunders-
Elsevier, 2006. cap.8, p.41-47.
HAINES D.M., WEST K.H. Immunohistochemistry: forging the links between

immunology and pathology. Veterinary Immunology and Immunopathology, n.108,
p.151-156, 2005.
INKELMANN M.A. et. al. Hepatite infecciosa canina: 62 casos. Pesquisa Veterinária
Brasileira, v.27, n.8, p. 325-332, 2007.
RAKICH, P.M. et al. Immunohistochemical detection of canine adenovirus in paraffin

sections of liver. Veterinary Pathology, n.23, p.478-484, 1986.
Tabela 1. Intensidade de marcação imunoistoquímica para antígeno de CAV-1 por órgão/sistema em 27 cães com hepatite infecciosa canina.
Cão Órgão
Baço Bexiga SNC Coração Estômago Fígado Int.delgado Linfonodo Med.óssea Pulmão Rim Tonsila
1 (19d) nr nr nr nr nr + nr nr nr nr - nr
2 (7d) + nr + ++ nr ++ nr + nr nr + nr
3 (3d) nr nr + nr nr ++ +++ + nr nr + ++
4 (10d) + nr nr nr + + ++ + nr + + +
5 (ND) nr nr + nr nr nr nr nr nr + nr nr
6 (3d) nr nr nr nr nr + nr nr nr nr - nr
7 (4d) nr ++ + nr nr ++ ++ nr nr ++ + nr
8 (10d) nr nr + nr ++ + ++ ++ nr ++ + nr
9 (ND) - nr - nr nr + nr nr nr + + nr
10 (MS) - nr + ++ + - nr nr nr + + nr
11 (ND) nr nr nr + nr ++ nr nr nr + + nr
12 (2d) nr nr nr nr nr - + nr nr + nr
13 (3d) nr nr ++ nr ++ ++ nr nr nr ++ ++ nr
14 (18h) nr nr ++ nr nr ++ ++ nr nr + + +
15 (ND) nr nr nr nr nr + nr nr nr nr nr nr
16 (4d) nr nr + nr nr + +++ nr nr nr + nr
17 (2d) + nr +++ ++ ++ ++ nr +++ nr + + nr
18 (3d) nr nr nr ++ ++ nr ++ nr nr + + ++
19 (MS) nr nr ++ +++ nr +++ nr nr + nr nr nr
20 (6h) + ++ ++ ++ ++ ++ ++ + ++ ++ + ++
21 (6h) + nr nr ++ + nr nr nr nr + + ++
22 (MS) nr + ++ nr nr + nr ++ nr nr + nr
23 (ND) +++ nr nr + nr ++ nr nr nr nr ++ nr
24 (12h) nr ++ ++ nr nr ++ + ++ nr + ++ nr
25 (12h) ++ nr ++ ++ nr ++ nr nr nr nr nr nr
26 (12h) nr nr ++ nr nr ++ ++ ++ nr nr ++ nr
27 (5d) nr nr ++ +++ nr +++ + +++ nr nr +++ nr
O dado entre parênteses depois do número do cão indica a evolução em dias (d), horas (h) ou morte súbita (MS). ND = não determinado. Os graus
de intensidade de marcação incluem – (negativo), + (leve), ++ (moderado) e +++ (acentuado); nr = não realizado; SNC = sistema nervoso central.
LEGENDA PARA A FIGURA 1.
Figura 1. Aspectos imunoistoquímicos da hepatite infecciosa canina. Método da
estreptoavidina-biotina-peroxidase (contra-coloração com Hematoxilina de Harris). A.
Fígado. Marcação antigênica preenchendo todo o núcleo de hepatócitos. Obj. 40. B. Fígado.
A marcação antigênica aparece ao redor de inclusões com centros não marcados. Obj. 40.
C. Fígado. Marcação imunoistoquímica de aspecto finamente granular no citoplasma de
hepatócitos (parte superior direita da foto) e de forma difusa em células de Kupffer. Obj.
40. D. Marcação imunoistoquímica nas células endoteliais dos tufos glomerulares. Obj. 40.
E. Marcação imunoistoquímica nas células reticuloendoteliais do baço. Obj. 20. E. Vaso do
encéfalo mostrando marcação antigênica exclusivamente nas células endoteliais. Obj. 20.
5. DISCUSSÃO
A forma fatal da hepatite infecciosa canina (HIC) é uma condição pouco comum,
pois ocorreu em apenas 1,2% dos 5.361 cães necropsiados num período de 43 anos
(1964-2006). A HIC demonstrou ser uma doença principalmente de animais jovens (até
dois anos), o que é, em geral, reconhecido pela maioria dos autores (LARIN, 1953;
HODGMAN & LARIN, 1953; SWANGO 1997; GREENE 2006), embora em cinco dos
62 casos deste estudo, as idades fossem 3-8 anos.
Os sinais de HIC incluíram anorexia, apatia, diarréia, freqüentemente com sangue,
sinais neurológicos, vômito, petéquias e equimoses nas membranas mucosas e/ou pele,
hipotermia, dor abdominal, icterícia, aumento de volume e congestão das tonsilas, febre
e ascite. Apesar de inespecíficos, quando considerados junto com epidemiologia e as
lesões de necropsia, os sinais são bastante sugestivos de HIC.
A doença tem um curso clínico em geral agudo ou superagudo e, menos
freqüentemente, subagudo (até 15 dias), mas não foram observadas diferenças
morfológicas no fígado de cães que sucumbiram à HIC com evolução clínica
superaguda, aguda ou subaguda. Em relação aos aspectos imunoistoquímicos (IHQ), no
entanto, observou-se diferença na intensidade da imunomarcação, pois cães que
sucumbiram à doença com a evolução clínica superaguda e aguda apresentaram graus
moderado e acentuado de marcação antigênica e aqueles que tiveram curso clínico
subagudo apresentaram grau leve ou moderado. Achados semelhantes foram observados
em outro estudo de IHQ no encéfalo de filhotes com HIC (CAUDELL et al 2005).
A imunomarcação do antígeno viral observada nos diversos tecidos demonstra a
disseminação do vírus pelo organismo, principalmente afetando às células endoteliais, o
que se correlaciona com a lesão vascular causada pelo vírus e as conseqüentes
hemorragias observadas clinicamente ou na histopatologia. Cães que morreram de HIC
com sinais clínicos neurológicos e apresentaram lesões hemorrágicas no encéfalo
demonstraram acentuada marcação do antígeno de CAV-1 nos vasos do sistema nervoso
central, neste e em outros estudos que usaram IHQ (CAUDELL et al 2005).
6. CONCLUSÕES
• A hepatite infecciosa canina (HIC) tem baixa prevalência e afeta principalmente cães
jovens de até dois anos de idade.
• A HIC tem curso clínico freqüentemente agudo ou superagudo.
• Necrose hepatocelular aleatória ou centrolobular e hemorragias associadas às lesões
endoteliais são os principais achados anatomopatológicos.
• Adenovírus canino tipo-1 tem tropismo por hepatócitos, células endoteliais e reticulo
endoteliais.
• A distribuição do antígeno viral na HIC é principalmente no núcleo e citoplasma de
células endoteliais, hepatócitos e células de Kupffer.
• A concentração antigênica na HIC é mais acentuada nos casos com curso clínico
superagudo e agudo.
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
ABLET, R.E.; BAKER, L.A. The development in the dog of naturally acquired
antibody to canine hepatitis in relation to age. Veterinary Record, London, v.72, n.51,
p.1202, December, 1960.
AMUNDSON, T.E.; YUILL, T.M. Prevalence of selected pathogenic microbial agents

in the red fox (Vulpes fulva) and gray fox (Urocyon cinereoargenteus) of southwestern
Wisconsin. Jounal of Wildlife Diseases, Laurence, v.17, n.1, p.17-22, January, 1981.
CARMICHAEL, L.E. The pathogenesis of ocular lesions of infectious canine hepatitis.

1. Pathology and virological observations. Pathologia Veterinaria, Switzerland, v.1,
n.1, p.73-95, January, 1964.
CAUDELL, D. et al. Diagnosis of infectious canine hepatitis virus (CAV-1) infection in

puppies with encephalopathy. Journal Veterinary Diagnostic Investigation, Athens,
v.17, n.1, p.58-61, January, 2005.
CHOUINARD, L. et al. Use of polymerase chain reaction and immunohistochemistry

for detection of canine adenovirus type 1 in formalin-fixed, paraffin-embedded liver of
dogs with chronic hepatitis or cirrhosis. Journal Veterinary Diagnostic Investigation,
Athens, v.10, n.4, p.320-325, October, 1998.
CORDÓN, P. J. et al. Glomerulonephritis associated with simultaneous canine

adenovirus-1 and Dirofilaria immitis infection in a dog. Journal of Veterinary
Medicine. B, Infectious diseases and veterinary public health, Berlin, v.49, n.5,
p.235-239, June, 2001.
CORNWELL, H.J.C.; WRIGHT, N.O. The pathology of experimental infectious canine

hepatitis in neonatal puppies. Research in Veterinary Science, London, v.10, n.2,
p.156-160, March, 1969.
CULLEN, J. M. Liver, biliary system and exocrine pancreas. In: McGavin, M. D.;
Zachary, J. F. Pathologic basis of veterinary disease, 4th ed. St Louis : Mosby-
Elsevier, 2007. cap. 8. p. 393-461.
DECARO, N. et al. Infectious canine hepatitis: an “old” disease reemerging in Italy.

Research in Veterinary Science, London, v.83, n2, p.269 – 273, January, 2007.
DEZENGRINI, R.; WEIBLEN, R.; FLORES, E. F. Soroprevalência das infecções por

38
parvovírus, adenovírus, coronavírus canino e pelo vírus da cinomose em cães de Santa

Maria, Rio Grande do Sul, Brasil. Ciência Rural, Santa Maria, v.37, n.1, p.183-189,
Janeiro-Fevereiro, 2007.
GOCKE D.J. et al. Experimental viral hepatitis in the dog: the production of persistent
disease in partially immune animals. Journal of Clinical Investigation, Michigan,
v.46, n.9, p.1506-1517, September, 1967.
GIVAN, K.F.; JÉZÉQUEL, A. Infectious canine hepatitis: a virologic and

ultrastructural study. Laboratory Investigation, New York, v.20, n.1, p.36-45, January,
1969.
GREENE, C.E. Infectious canine hepatitis and canine acidophil cell hepatitis. In:
______. Infectious disease of the dog and cat, 3th ed. Philadelphia: Saunders-Elsevier,
2006. cap.8, p.41-47.
HERVÁS, J. et al. Focal mesangial-sclerosing glomerulonephritis and acute-

spontaneous infectious canine hepatitis: structural, immunohistochemical and
subcellular studies. Veterinary Immunology and Immunopathology, v.57, n.1-2,
p.25-32, June, 1997.
HODGMAN, S. F. J.; LARIN, N. M. Diagnosis of canine virus hepatitis (Rubarth´s

disease). Veterinary Record, London, v.65, n.29, p.447-450, July, 1953.
INNES, J. R. M.; SAUNDERS, L. Z. Comparative Neuropathology, New York,

Academic Press, 1962. 839p.
JAMISON, R.K. et al. Survey for antibodies to canine viruses in selected wild
mammals. Journal of Wildlife Diseases, Laurence, v. 9, n.1, p.2-3, January, 1973.
JONES, T.C. et al. Moléstias causadas por agentes virais. In:______Patologia

Veterinária, 6 ed. São Paulo: Manole, 2000. cap.8, p.249-253.
KISS, I. et al. Infectious canine hepatitis: detection of canine adenovirus type 1 by

polymerase chain reaction. Acta Veterinaria Hungarica, Budapest, v.44, n.2, p.253-
258, April, 1996.
KOBAYASHI, Y.K.; ITAKURA, C. Dual infection with canine distemper virus and
infectious canine hepatitis virus (canine adenovirus type 1) in a dog. Journal of
Veterinay Medical Science, Tokyo, v.55, n.4, p.699-701, August, 1993.
39
KOPTOPOULOS, G.; CORNWELL, H.J.C. Canine adenovirus: a review. The

Veterinay Bulletin, Wallingford, v.51, n.3, p.135-141, March,1981.
LARIN, N.M. Epidemiological studies of canine virus hepatitis (Rubarth’s disease).

Veterinary Record, London, v.70, n.14, p.295-297, April, 1958.
PARK, N.Y. et al. Canine adenovirus type 1 infection of a eurasian river otter (Lutra
lutra), Veterinay Pathology, Madison, v.44, n.4, 536–539, July, 2007.
PARRY, H.B. Viral hepatitis of dogs (Rubarth´s disease) 1.Clinical and pathological
observations on a spontaneous epidemic. Veterinary Record, London, v.62, n.38,
p.559-565, September, 1950.
PAY, T.W.F. Infectious canine hepatitis (Hepatitis contagiosa canis [Rubarth]).

Veterinary Record, London, v.62, n.38, p.551-558, September, 1950.
PURSELL, A.R. et al. Isolation of an adenovirus from black bear cubs. Journal of
Wildlife Diseases, Laurence, v.3, n.19, p.269-271, July, 1983.
PRATELLI, A. et al. Severe enteric in an animal shelter associated with dual infections
by canine adenovirus type 1 and canine coronavirus. Journal Veterinay Medicine B.
Infectious diseases and veterinary public health, Berlin, v.48, n.5, p.385-392, June,
2001.
QUINN P.J. et al. Adenoviridae. In:______Microbiologia Veterinária e Doenças

Infecciosas, Porto Alegre: Artmed, 2005. cap. 56, p. 323-326.
RAKICH, P.M. et al. Immunohistochemical detection of canine adenovirus in paraffin

sections of liver. Veterinary Pathology, Madison, v.23, n.4, p.478-484, July, 1986.
RAMOS-VARA, J.A. Technical aspects of immunohistochemistry. Veterinary

Pathology, v.42, n.4, p.405-426, July, 2005.
SMITH, D.L.T. Observations on infectious canine hepatitis. American Journal of

Veterinary Research, Oakland, v.12, n.1, p.38-43, January, 1951.
STALKER, M.J.; HAYES, M.A. The liver and biliary system In: JUBB, K.F.V., et al.
40
Pathology of Domestic Animals. 5th ed., San Diego: Academic Press, 2007. v.2, cap.8,
p.348-351.
STEPHENSON, R.O. et. al. Serologic survey for canine distemper and infectiouscanine
hepatitis in wolves in Alaska. Journal of Wildlife Diseases, Laurence, v.18, n.4, p.419-
424, October, 1982.
SWANGO, L.J. Infectious canine hepatitis and Viral tracheobronchitis. In: Castro A.E.
& Heuschele W. P. Veterinary Diagnostic Virology. A practitioner’s guide. St. Louis,
Ed. Mosby Year Book, 1992. cap.47, p.143-146.
SWANGO 1997. Moléstias virais caninas in: Ettinger S. J. & Feldman E. C. Tratado
de Medicina Interna Veterinária. 4. ed., v.1, ed. Manole, São Paulo. cap.69.
WARD, F.P.; FAIRCHILD, D.G.; VUICICH, J.V. Inclusion body hepatitis in a prairie
falcon. Journal of Wildlife Diseases, Laurence, v.7, n.2, p.120-124, April, 1971.
WHETSTONE, C. A. et al. Characterization of canine adenovirus type 1 isolated from

american black bears. American Journal Veterinary Research, Oakland, v.49, n.6.
p.778 780, June, 1988.
WIGTON et al. Infectious canine hepatitis: animal model for viral-induced

disseminated intravascular coagulation. Blood, Washington, v.47, n.2, p.287-296,
February, 1976.
WOODS, L. W. et al. Lesions and transmission of experimental adenovirus

hemorrhagic disease in black-tailed deer fawns. Veterinary Pathology, Madison, v.36,
n.2, p.100-110, March, 1999.
ZARNKE, R.L.; BALLARD, W.B. Serologic survey for selected microbial pathogens
of wolves in Alaska, 1975-1982. Journal of Wildlife Diseases, Laurence, v.23, n.1,
p.77-85, January, 1987.
ZARNKE, R.L.; EVANS, M.B. Serologic survey for infectious canine hepatitis virus in
Grizzly bears (Ursus Arctos) from Alaska, 1973 to 1987. Journal of Wildlife Diseases,
Laurence, v.25, n.4, p.568-573, October, 1989.

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA

CENTRO DE CIÊNCIAS RURAIS

EPIDEMIOLOGIA, SINAIS CLÍNICOS, LESÕES

Maria Andréia Inkelmann

Santa Maria, RS, Brasil

Maria Andréia Inkelmann

Dissertação apresentada ao curso de Mestrado do Programa de Pós-Graduação

Orientador: Claudio Severo Lombardo de Barros

Santa Maria, RS, Brasil

Dissertação (mestrado) – Universidade Federal de Santa Maria,

1. Medicina veterinária 2. Doenças do fígado 3. Doenças virais

Ficha catalográfica elaborada por

A Comissão Examinadora, abaixo assinada,

EPIDEMIOLOGIA, SINAIS CLÍNICOS, LESÕES MACRO E

como requisito parcial para obtenção do grau de

Claudio Severo Lombardo de Barros, PhD

David Driemeier, Dr. (URGS)

Glaucia Denise Kommers, PhD (UFSM)

Santa Maria, 12 de fevereiro de 2008.

EPIDEMIOLOGIA, SINAIS CLÍNICOS, LESÕES MACRO E

AUTOR: Maria Andréia Inkelmann

A presente dissertação consta de uma investigação sobre hepatite infecciosa canina e

EPIDEMIOLOGY, CLINICAL SIGNS, MACROSCOPIC AND

AUTHOR: Maria Andréia Inkelmann

This dissertation consists of an investigation on infectious canine hepatitis (IHC) and

O presente trabalho abrange um estudo realizado no Laboratório de Patologia

A hepatite infecciosa canina (HIC) é uma doença viral de cães e de outras

Após localização oronasal, CAV-1 replica inicialmente nas tonsilas de onde se

Tabela 1 - Hospedeiros carnívoros não domésticos de adenovírus canino tipo 1 (CAV-1)

disseminadas, epistaxe e sangramento contínuo de locais de punção venosa (GREENE,

em casos naturais e experimentais (WIGTON et al., 1976).

inclusões raramente estão associadas a qualquer lesão demonstrável no néfron (JONES

características de adenovírus, que ocorrem em grupos ou dispersas. Alguns grupos de

HEPATITE INFECCIOSA CANINA: 62 CASOS

Maria A. Inkelmann, Daniela B. Rozza, Rafael A. Fighera, Glaucia D. Kommers,

PUBLICADO EM V.27 (8), P.325-332.

PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Hepatite infecciosa canina: 62 casos1

Pesq. Vet. Bras. 27(8):325-332, agosto 2007

Fig.1. Sinais clínicos encontrados em 45 cães afetados por hepatite

havia casos de evolução de seis horas (n=2), 12 horas (n=3) e

Quadro 1. Tipo do envolvimento do encéfalo em 25 cães com hepatite infecciosa canina

Pesq. Vet. Bras. 27(8):325-332, agosto 2007

Fig.3. Distribuição da duração do curso clínico em 45 cães afetados

evolução precisa da doença. Os 13 (28,9%) casos com evolu-

Fig.5. Edema da parede vesícula biliar como o observado aqui, ocor-

Pesq. Vet. Bras. 27(8):325-332, agosto 2007

lume e avermelhados. Ao corte eram macios e deixavam fluir

Quadro 2. Alterações extra-hepáticas encontradas na

minal. Víbices, sufusões e petéquias ocorriam na serosa de vá-

Pesq. Vet. Bras. 27(8):325-332, agosto 2007

zavam-se no fígado. Em todos os casos havia inclusões

Pesq. Vet. Bras. 27(8):325-332, agosto 2007

Pesq. Vet. Bras. 27(8):325-332, agosto 2007

Pesq. Vet. Bras. 27(8):325-332, agosto 2007

ASPECTOS IMUNOISTOQUÍMICOS DA HEPATITE

Maria A Inkelmann, Bruno L. Anjos, Glaucia D. Kommers, Rafael A. Fighera e

SUBMETIDO PARA PUBLICAÇÃO EM CIÊNCIA RURAL

Aspectos imunoistoquímicos da hepatite infecciosa canina