Micropipetador Automático Monocanal

Procedimento Operacional POP nº49
Padrão (POP)
Micropipetador Automático Laboratórios de:
Elaborado em
Monocanal – HTL Microbiologia (B-101)
Junho/2017
Volumes 5000, 1000, 200 e 20µL Análise Instrumental (C-106/2)
Elaborado por: Última Revisão: 28/06/2017
Versão 01
Larissa Becker Aprovado por: COSUTA-SMO
1. Dados do Fabricante:
1.1. Fabricante: Ciencor Scientific

1.2. Endereço: Rua Boracéia
1.3. Município: São Paulo
1.4. Estado: São Paulo
1.5. País: Brasil
1.6. Telefone: 11-3865-8866
1.8. E-mail: [email protected]
1.9. Site: www.ciencor.commercesuite.com.br e www.htl.com.pl
1.10. CNPJ: 58.752.130/0001-010
2. Aplicação do Equipamento:
2.1. As pipetas automáticas são amplamente utilizadas, são capazes de transferir

pequenos volumes com alta reprodutibilidade e exatidão. Cada pipeta apresenta
uma faixa de volume ajustável, e é conhecida pelo volume máximo que pode
dispensar.
3. Componentes do Equipamento:
3.1. Botão de pipetagem

3.2. Botão ejetor
3.3. Botão de ajuste de volume
3.4. Visor indicador de volume
3.5. Câmara de isolamento
3.6. Ejetor
POP Micropipetador Automático HTL Versão 01 Página 1 de 6

3.7. Ponteira
4. Procedimento para Utilização do Equipamento
4.1. A pipeta automática é um aparato composto de uma parte fixa, contendo

todos os dispositivos para seu funcionamento, à qual se adapta uma ponteira
removível (tip), normalmente de plástico. A parte fixa apresenta um pistão de aço
inoxidável capaz de mover-se dentro de um cilindro. O movimento apropriado cria
vácuo, fazendo com que o líquido em contato com a ponteira seja aspirado para
dentro do cilindro, ocupando o volume antes ocupado pelo ar.
Para a obtenção de resultados corretos é necessário selecionar a pipeta certa. O
volume a ser transferido deve estar dentro da faixa de volume recomendada para
a pipeta.
4.2. Selecionada a pipeta adequada, é necessário ajustar o volume de interesse.

Para isso, pegue a pipeta com uma das mãos e gire o botão de ajuste com a
outra mão até chegar ao volume desejado. Existe um anel no meio do botão que
bloqueia o volume. Para o ajuste fino do volume é necessário girar o botão 1/3
acima do volume desejado e voltar lentamente para a configuração exata. Isso
aumenta a precisão da medida.
4.3. O visor indicador de volume geralmente tem três dígitos e é lido na direção do
botão de pipetagem para a base (onde se encaixa a ponteira). Os três dígitos

indicam o volume em microlitros. Os algarismos significativos variam de pipeta
para pipeta e são, via de regra, 0,05% do volume máximo da pipeta.
4.4. Depois de ajustado o volume, coloque a ponteira na pipeta de forma que

fique bem presa. Aperte o botão de pipetagem até sentir o primeiro ponto de
resistência. Leve a pipeta com o botão apertado até o recipiente contendo o
líquido a ser transferido. Com a pipeta na posição vertical, faça a ponteira imergir
de 1 a 6 mm abaixo da superfície do líquido. Para fazer o líquido subir na
ponteira, volte lentamente o botão para a posição inicial. Espere alguns segundo
até que o líquido ocupe todo o volume. Retire a ponteira do líquido. Se ficarem
algumas gotas do lado de fora da ponteira, passe cuidadosamente um papel no
entorno sem encostar na abertura da ponteira.
4.5. Para dispensar o líquido, aperte novamente o botão até sentir a primeira
resistência. Espere alguns segundo e depois aperte até sentir a segunda
resistência. Isso permite dispensar o restante do líquido.
4.6. Para retirar a pipeta do recipiente, mantenha o botão apertado no segundo

ajuste e deslize cuidadosamente a ponta da ponteira pela parede do recipiente.
Volte o botão para a posição inicial lentamente. Para descartar a ponteira, aperte
o botão ao lado do botão de pipetagem.
4.7. A manipulação de líquidos viscosos utilizando pipetas automáticas pode ser

difícil, uma vez que a viscosidade limita a velocidade com que o liquido é
aspirado. Para estas aplicações, são recomendadas pipetas
específicasparalíquidos viscosos.

5. Procedimento para Limpeza do Equipamento
5.1. As superfícies externas da pipeta podem ser limpas com algodão umedecido
em álcool isopropílico. As demais peças desmontáveis podem ser lavadas com
água destilada e álcool isopropílico.
5.2. Esterilização da pipeta

Deve-se afrouxar as conexões da pipeta antes da autoclavagem. Pode-se colocar
a pipeta inteira na autoclave a uma temperatura de 121ºC por 20 minutos. Após
deve ser seca e deixar para que esfrie até a temperatura ambiente. Com os
procedimentos corretos não há mudança na repetibilidade da pipeta. Porém, pode
haver pequena mudança na precisão, por isso, deve-se revisar a calibração após
1, 3 e 5 esterilizações.
6. Cuidados na Utilização do Equipamento
6.1. Não exceda o volume máximo recomendado de cada pipeta, pois o

mecanismo de ajuste de volume pode ser danificado. Também não utilize menos
do que o mínimo recomendado, pois isso diminui a exatidão das medidas.
6.2. Geralmente as pipetas são calibradas utilizando água. Para líquidos com
densidades muito diferentes da água, os volumes transferidos são incorretos.
Para contornar este problema é possível ajustar o volume para mais (densidades
muito maiores) ou para menos (densidades muito menores). No entanto, este
ajuste deve ser determinado empiricamente, utilizando-se valores de densidade e
massa (lembre que volume = massa/densidade).
6.3. Nunca coloque a pipeta na posição horizontal se a ponteira estiver cheia de
líquido. Isso pode causar a entrada de líquido no sistema de pistões, o que irá
danificar a pipeta.
6.4. Evite a formação de bolhas quando aspirar o líquido. Isso reduz a precisão
das medidas. Caso ocorra a formação de bolhas, dispense o líquido no frasco
original, e faça subir o líquido novamente de forma lenta. Caso volte a formar
bolhas, dispense o líquido no frasco original e troque a ponteira. O uso de
ponteiras siliconizadas também pode evitar a formação de bolhas em casos em

que estas sejam recorrentes, como na pipetagem de soluções de ácidos
nucleicos.
7. Manutenção Preventiva do Equipamento:
7.1. Caso soluções corrosivas sejam transferidas é recomendado que, após o

uso, a pipeta seja desmontada para avaliação das peças e para limpeza, se
necessário. O desmonte e descontaminação também são recomendados após o
uso com substâncias tóxicas e/ou carcinogênicas.
8. Informações Importantes:
8.1. CALIBRAÇÃO
8.1.1. Para esse processo é necessário água destilada a 20ºC ± 1ºC e uma
balança de precisão. Além disso, é necessário que a pipeta, as ponteiras e
ambiente estejam estabilizados a temperatura entre 20 e 25ºC ± 0,5ºC. A chave
de calibração pode girar apenas uma volta inteira tanto para a esquerda quanto
para a direita. Para a calibração seguir as informações da tabela abaixo.
Quadro 1 – Referência para calibração
Diferença de
volume a uma
volta inteira da
Capacidade da Categoria de chave de
Modelo Valor admitido
pipeta ajuste calibração
ΔV[µL](24
unidades
elementol)
LMP20 2 - 20 2 1,94 – 2,06 0,63
LMP200 20 - 200 20 19,76 – 20,24 6,30
LMP1000 100 - 1000 100 98,4 – 101,6 25,00
LMP5000 500 - 5000 500 494 - 506 125,00
8.1.2. Realizar cinco pesagens e fazer a média dessas pesagens. Calcular o valor
médio em (µL) multiplicando a média das pesagens realizadas (mg) pelo índice da
densidade da água destilada ( µL/ mg) considerando sua temperatura e pressão
(Quadro 2).
Quadro 2 – Relação temperatura/pressão

Pressão [kPa]
Temperatura ºC
95,0 101,3 105,0
20 1,0028 1,0029 1,0029
21 1,0030 1,0031 1,0031
22 1,0032 1,0033 1,0033
23 1,0034 1,0035 1,0036
24 1,0037 1,0038 1,0038
25 1,0039 1,0040 1,0040
8.1.3. Caso o valor médio das medidas tomadas diferir do admissível (Quadro 1)
deve-se proceder da seguinte maneira:
Desmontar o botão de pipetagem formado por duas partes, botão e parafuso.
Introduzir a chave de calibração no entalhe do parafuso de calibração mantendo
ao mesmo tempo o botão de graduação do volume para evitar que mude de
posição. Girar a chave – para a direita para reduzir o volume ou para a esquerda
para aumentar o volume. Uma volta inteira da chave se aumenta a porção da
quantidade indicada no quadro. Retirar a chave e remontar a pipeta.
Calcular novamente a média que deverá ajustar-se aos valores admitidos no
quadro 1.
9. Referências:
9.1. Guia do usuário

9.2. Site da empresa www.ciencor.commercesuite.com.br e www.htl.com.pl
10. Revisões do POP:
Item Resumo das alterações Responsável

pela revisão

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4.2. Selecionada a pipeta adequada, é necessário ajustar o volume de interesse.

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4.4. Depois de ajustado o volume, coloque a ponteira na pipeta de forma que

4.6. Para retirar a pipeta do recipiente, mantenha o botão apertado no segundo

4.7. A manipulação de líquidos viscosos utilizando pipetas automáticas pode ser

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5.2. Esterilização da pipeta

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6.1. Não exceda o volume máximo recomendado de cada pipeta, pois o

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7.1. Caso soluções corrosivas sejam transferidas é recomendado que, após o

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