APROVEITAMENTO DE RESÍDUOS AGROINDUSTRIAIS: PRODUÇÃO

DE ENZIMAS A PARTIR DA CASCA DE COCO VERDE

MARIA ALICE ZARUR COELHO *

SELMA GOMES FERREIRA LEITE *
MORSYLEIDE DE FREITAS ROSA **
ANGELA APARECIDA LEMOS FURTADO ***

Investigou-se o aproveitamento da casca do coco

verde, mediante fermentação semi-sólida, para
produção de enzimas. A casca de coco foi
previamente desidratada, moída e classificada em
três diferentes granulometrias, ou seja, 14, 28 e 32
mesh Tyler. Todas as enzimas obtidas tiveram sua
produção máxima na faixa de 24 e 96 horas, o que
corresponde ao tempo de produção industrial
corrente. Cada granulometria produziu complexos
enzimáticos ricos em diferentes atividades. O
estudo realizado validou a hipótese do
aproveitamento do resíduo da casca do coco verde
na produção de enzimas por Aspergillus niger.

1 INTRODUÇÃO

Nos últimos anos, especial atenção vem sendo dada para minimização ou
reaproveitamento de resíduos sólidos gerados nos diferentes processos
industriais. Os resíduos provenientes da indústria de alimentos envolvem
quantidades apreciáveis de casca, caroço e outros. Esses materiais, além
de fonte de matéria orgânica, servem como fonte de proteínas, enzimas e
óleos essenciais, passíveis de recuperação e aproveitamento.

O aumento crescente no consumo do coco verde e a vocação natural para

a industrialização de sua água vêm aumentando a geração de rejeito
(casca de coco), que corresponde a cerca de 85% do peso do fruto.
Segundo dados fornecidos pela Companhia de Limpeza Urbana do Rio,
COMLURB, o coco corresponde a cerca de 80% de todo o lixo coletado na

* Professora da Escola de Química da Universidade Federal do Rio de Janeiro, RJ.

** Pesquisadora da Embrapa Agroindústria Tropical, Fortaleza – CE.
(e-mail: [email protected]).
*** Pesquisadora da Embrapa Agroindústria de Alimentos, Rio de Janeiro, RJ.
(e-mail: [email protected]).

B.CEPPA, Curitiba, v. 19, n. 1, p. 33-42, jan./jun. 2001

orla marítima. Paralelamente, as indústrias que processam água-de-coco
geram volumes significativos e crescentes do mesmo material, que
atualmente, é enterrado em lixões e aterros, causando problemas,
especialmente em grandes centros urbanos (ROSA, 1998).

O rejeito da indústria convencional do coco maduro pode ser usado como

combustível para caldeiras, ou na manufatura de cordoalha, tapetes,
estofamentos e capachos. Estudos mais recentes sugerem ainda a
utilização do resíduo da casca na agricultura intensiva, principalmente no
cultivo de plantas ornamentais e hortaliças (MURRAY, 2001; OHLER,
1986). No entanto, a alta umidade (cerca de 85%) e as características da
fibra do coco imaturo reduzem seu aproveitamento em relação a casca do
coco maduro.

Tornar viável o aproveitamento da casca do coco verde, gerado tanto como

resíduo industrial quanto como lixo urbano, significaria mais uma
alternativa de lucro para os sítios de produção.

O desenvolvimento tecnológico mundial avança cada vez mais no caminho

dos processos biotecnológicos, devido à irreversível tendência de
prevalência das políticas ambientais. Nesse sentido, a substituição de
processos químicos convencionais por processos enzimáticos torna o
desenvolvimento e o aprimoramento desta tecnologia de suma
importância. Enzimas são catalisadores orgânicos, responsáveis pelas
milhares de reações bioquímicas envolvidas nos processos biológicos dos
sistemas vivos. As enzimas apresentam ampla utilização na indústria
alimentícia, principalmente em processos de maceração de vegetais e
frutas para a produção de néctares e purês, no processamento de produtos
cárneos (tenderização), na produção de queijos, na extração e clarificação
de sucos de frutas e vinho, na desengomagem de fibras naturais e na
recuperação de óleos vegetais. São utilizadas também nas indústrias de
papel e celulose, têxtil (biopolimento do jeans) e na produção de rações
animais (COELHO, 1993; CUNHA, 1999). As enzimas, tais como
poligalacturonase e pectinase, entre outras, são utilizadas nas indústrias
de suco de frutas para diminuir a viscosidade do mesmo, contribuindo para
o aumento do seu fluxo nos processos que empregam membrana (MUTLU
et al., 1999; VAILANT et al., 1999). No campo da comercialização de
enzimas, o Brasil é ainda, basicamente consumidor de produtos
importados, apesar de todo o seu potencial.

O mercado mundial da tecnologia enzimática movimenta, anualmente,

cerca de 2 bilhões de dólares (NORDISK, 1996). Tal montante justifica-se
pelo interesse gerado por processos que envolvem tecnologia de baixo
custo energético, com menor impacto ambiental e que utiliza matérias-
primas renováveis, adequando-se ao reaproveitamento de sub-produtos da
agroindústria.

34 B.CEPPA, Curitiba, v. 19, n. 1, jan./jun. 2001

Uma das alternativas para a casca de coco verde poderia ser o seu
aproveitamento em processos fermentativos, como a produção de
enzimas. Como a maioria dos rejeitos agroindustriais, este material contém
grande quantidade de compostos como celulose, hemicelulose, pectina e
outros, não havendo necessidade de grandes complementações
nutricionais para o adequado desenvolvimento microbiano. Estes
compostos funcionam como indutores para a produção de enzimas
extracelulares, tais como celulases, xilanases, pectinases e outras.

No presente trabalho verificou-se a viabilidade técnica da produção de

enzimas, mediante fermentação semi-sólida, utilizando a casca do coco
verde como matéria-prima.

2 MATERIAL E MÉTODOS

A casca de coco verde, oriunda de produtores de Santa Cruz (RJ), foi

desidratada em secador de bandeja, a 35 °C por 48 horas. A seguir foi
triturada em moinho de facas e classificada em peneiras, conforme
granulometria especificada na Tabela 1.

TABELA 1 - FAIXAS DE GRANULOMETRIA DE CASCA DE COCO

VERDE UTILIZADAS

Granulometria Tyler (Mesh) Abertura (mm) Umidade (%)

1 14 1.19 8.4
2 28 0.59 7.0
3 <32 <0.50 5.2

As três granulometrias foram utilizadas em diferentes experimentos. Optou-

se pela fermentação semi-sólida, principalmente devido a possibilidade de
aproveitamento do resíduo e da relação entre o reator de volume
reduzido/unidade de substrato convertido.

A linhagem de Aspergillus niger utilizada neste estudo foi isolada do solo,

sendo proveniente da coleção de culturas do Departamento de Engenharia
Bioquímica da Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ). Procedeu-
se a ativação da linhagem por repiques sucessivos em gelose Czapeck-
Dox inclinada.

Solução de nutrientes, contendo 0.9% de sulfato de amônio e 0.1% de

fosfato de potássio, foi elaborada com a finalidade de fornecer fonte de
nitrogênio (N), enxofre (S) e fósforo (P) necessários para o crescimento
dos microrganismos.

B.CEPPA, Curitiba, v. 19, n. 1, jan./jun. 2001 35

A fermentação foi conduzida utilizando-se a razão 1:1 de casca de
coco/solução de nutrientes, de modo a identificar qual granulometria
permitiria o melhor crescimento do microrganismo e produção de enzimas.

Para as fermentações foram preparados 15 frascos erlenmeyer (250 mL),

sendo 5 para cada granulometria. Em cada erlenmeyer foram colocados
15 g da casca do coco e 15 mL da solução nutriente. Os meios foram
autoclavados por 5 minutos a 1 atm e o inóculo empregado consistiu de
106 esporos de Aspergillus niger por grama de meio sólido utilizado. A
duração total destas fermentações foi de sete dias, com amostragem
diária.

Visando verificar a influência da flora microbiana, natural da casca do coco

verde, na produção de enzimas foram conduzidos, também, experimentos
com o substrato não autoclavado e sem inoculação.

Em intervalos de 24 horas, as enzimas foram extraídas pela adição de

100 mL de tampão acetato (pH 5,0), agitação em shaker a 160 rpm e
temperatura de 30 ºC por 30 minutos. A seguir, procedeu-se filtração a
vácuo, em funil de Büchner, usando papel de filtro ADVANTEC TOYO 5C
(185 mm) para separar o resíduo da fermentação do sobrenadante (extrato
enzimático). O sobrenadante foi filtrado a vácuo em filtro Milipore, usando-
se membrana de 0,5 m para retirada dos esporos. Estocou-se o extrato
enzimático a -20 ºC para análises posteriores.

Para a determinação das atividades enzimáticas, todas as soluções de

substratos foram previamente mantidas por 10 minutos nas temperaturas
de reação. A atividade de cada enzima foi expressa em unidade/mL de
extrato enzimático, a saber

 Xilanase - uma unidade de xilanase corresponde a 1 mol de xilose

liberada por minuto a 60 °C e pH 4,2 (PINTO, 1998);

 Carboximetilcelulase - uma unidade de CMCase corresponde a 1mol

de glicose liberada por minuto em pH 4,8 e 50 °C (PINTO, 1998);

 Protease - uma unidade de atividade foi definida como o aumento de

0,01 de absorbância, que a amostra apresente em relação ao branco
por minuto a 32 °C e pH 5 (PINTO, 1998);

 Poligalacturonase - uma unidade de pligalacturonase foi definida

como a quantidade de enzima que libera 1 mol de ácido
galacturônico, a partir de solução 0,25% (p/v) de ácido
poligalacturônico, por minuto, a 45 °C e pH 4,4 (COELHO, 1993).

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3 RESULTADOS E DISCUSSÃO

3.1 INFLUÊNCIA DA GRANULOMETRIA

As Figuras 1 a 4 apresentam os perfis de produção enzimática, obtidos ao

longo do tempo, para as granulometrias estudadas.

FIGURA 1 - PRODUÇÃO DE PROTEASES PARA AS GRANULOMETRIAS

ESTUDADAS

30

25 granulometria 1
Atividade específica

granulometria 2
20
(U/mg.min)

granulometria 3

15

10

0
0 2 4 6 8
Tempo (dias)

FIGURA 2 - PRODUÇÃO DE PECTINASES PARA AS GRANULOMETRIAS

ESTUDADAS

7
6 granulometria 1
granulometria 2
Atividade específica

5
granulometria 3
(U/mg.min)

4
3
2
1
0
-1 0 2 4 6 8

Tempo (dias)

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FIGURA 3 - PRODUÇÃO DE CELULASES PARA AS GRANULOMETRIAS
ESTUDADAS

250
granulometria 1
Atividade específica

200 granulometria 2
(U/mg.min)

granulometria 3
150

100

50

0
0 2 4 6 8
Tempo (dias)

FIGURA 4 - PRODUÇÃO DE XILANASES PARA AS GRANULOMETRIAS

ESTUDADAS

250
granulometria 1
200
Atividade específica

granulometria 2
granulometria 3
(U/mg.min)

150

100

50

0
0 2 4 6 8
Tempo (dias)

De acordo com os resultados obtidos, a produção enzimática está

relacionada com a granulometria, da seguinte forma:

 Granulometria 1 (Tyler 14)

Observou-se a formação de complexo enzimático rico em pectinase, com

pico de produção verificado no 3º dia (Figura 2), e celulase, com pico de
produção detectado no 4º dia (Figura 3). A produção de pectinase ocorreu

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de forma tardia quando comparada com a granulometria 3, cujo máximo de
produção foi atingido no 1º dia. Este retardamento da produção de
pectinase deve-se, provavelmente, a menor área interfacial específica da
granulometria 1. Adicionalmente, foi formada pequena quantidade de
xilanase, conseguindo-se produção intermediária de protease (Figuras 4 e
1, respectivamente).

 Granulometria 2 (Tyler 28)

A granulometria 2 apresentou resultados intermediários para a produção

de xilanase e celulase. Houve baixa produção de pectinase e elevada
produção de protease, com máximo de produção detectado no 4º dia
(Figura 1), quando comparada às demais granulometrias.

 Granulometria 3 (Tyler 32)

Verificou-se a formação de complexo enzimático rico em pectinase, com

pico de produção no 1º dia (Figura 2), e xilanase, com máximo de
produção obtido no 2º dia (Figura 4). Detectou-se também atividade
celulásica e proteásica, em níveis inferiores às demais granulometrias.

A queda na produção das enzimas, observada nos perfis de atividade

específica, normalmente é atribuída a ação proteolítica ou a instabilidade
das moléculas enzimáticas durante o processo produtivo.

Todas as enzimas obtidas apresentaram produção máxima entre 24 e 96

horas, o que corresponde ao tempo de produção industrial corrente.
Considerando que o biorreator utilizado era bastante simples, sem aeração
e sem agitação, acredita-se que a otimização do processo poderia elevar a
produtividade nos casos estudados.

Em função da aplicação desejada pode-se escolher a granulometria mais

adequada, visto que as diferentes granulometrias produziram complexos
enzimáticos ricos em diferentes atividades. A Tabela 2 apresenta os
principais complexos enzimáticos obtidos para cada faixa granulométrica
estudada.

TABELA 2 - PRODUÇÃO DE ENZIMAS EM DIFERENTES

GRANULOMETRIAS

Granulometria Principais enzimas produzidas

1 Pectinase/Celulase
2 Protease
3 Pectinase/Xilanase

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3.2 INFLUÊNCIA DA FLORA MICROBIANA NATURAL

Observou-se crescimento microbiano nos meios não esterilizados, com

aspecto macroscópio diferenciado daqueles encontrados nos meios
inoculados com Aspergillus niger. Este microrganismo, naturalmente
encontrado pode ser advindo da matéria-prima ou do ambiente.

A Figura 5, que apresenta o desempenho dos meios inoculados e não

inoculados na produção de proteína após sete dias de fermentação,
evidencia que, para as três granulometrias, a produção de proteínas foi
superior no meio não esterilizado. Pode-se dizer então que o
microrganismo presente na casca do coco é, aparentemente, produtor
potencial de proteínas e, provavelmente de enzimas.

FIGURA 5 - CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNA TOTAL APÓS SETE

DIAS DE FERMENTAÇÃO
concentração de proteína total (mg/mL)

9
8 esterilizado
7 não esterilizado
6
5
4
3
2
1
0
Granul. 1 Granul.2 Granul. 3

A Tabela 3 apresenta as principais enzimas produzidas pela flora

microbiana natural, para cada granulometria, ao final de sete dias de
fermentação.

TABELA 3 - PRINCIPAIS ENZIMAS PRODUZIDAS PELA FLORA

MICROBIANA NATURAL

Tipos de Granulometria 1 Granulometria 2 Granulometria 3

enzimas Pectinase e protease pectinase Pectinase e celulase

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Conforme os resultados obtidos verifica-se que há necessidade de
esterilizar o meio, caso a influência de microrganismos naturais na
produção de enzimas seja indesejada.

A possibilidade de se conduzir o processo utilizando o microrganismo

nativo, sem prévia inoculação ou esterilização, pode representar redução
de custos. Entretanto, o controle microbiológico do processo é prejudicado,
bem como a qualidade do produto final, uma vez que não se pode garantir
o desenvolvimento da mesma linhagem fúngica a cada batelada.

4 CONCLUSÃO

O estudo realizado validou a hipótese do aproveitamento do resíduo da

casca do coco verde na produção de enzimas por Aspergillus niger.

Todas as enzimas obtidas tiveram sua produção máxima no período entre

24 e 96 horas, o que corresponde ao tempo de produção industrial
corrente.

A possibilidade de produção de enzimas por microrganismos nativos não

deve ser descartada, pois de acordo com os dados apresentados, obteve-
se bons resultados para algumas enzimas, após o sétimo dia de
fermentação, em meio não esterilizado.

Abstract

The utilization of immature coconut peel as substrate for enzyme production by solid state
fermentation was investigated. The coconut peel was previously dehydrated, milled and
classified in three distinct granulometries: 14, 28 and 32 mesh Tyler. All the enzymes
obtained had its maximum production in 24 to 96 hour interval, which correspond to the
current industrial production time. Each granulometry produced rich enzymatic complexes
with different activities. This study validates the hypothesis of benefit immature coconut
peel as raw material for enzyme production by Aspergillus niger.

REFERÊNCIAS

1 COELHO, M. A. Z. Purificação da poligalacturonase produzida por

Aspergillus niger 3T5B8. Rio de Janeiro, 1993. 124 p. Dissertação
(Mestrado), Curso de Pós-Graduação em Tecnologia de Processos
Químicos e Bioquímicos, Escola de Química, UFRJ.

2 CUNHA, R. T. Aplicação de enzimas em processos industriais

têxteis. Rio de Janeiro, 1999. p. 1-22. Monografia, Curso de Pós-
Graduação em Tecnologia de Processos Químicos e Bioquímicos,
Escola de Química, UFRJ.

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3 MURRAY, N. P. Caracterización y evaluación agronómica del
residuo de fibra de coco: un nuevo material para el cultivo en
sustrato. Valencia, 2001. 228 p. Tesis (Doctorales) en Ciencias
Químicas, Escuela Técnica Superior de Ingenieros Agrónomos,
Departamento de Química de la Universidad Politecnica de Valencia.

4 MUTLU, M.;SARIOGLU, K.;DEMIR, N.;MERAL, T.E.;ACAR, J. The

use of commercial pectinase in fruit juice industry. Part I: Viscosimetric
determination of enzyme activity. Journal of Food Engineering,
Abingdod, Oxon, v.41, p. 147-150, 1999.

5 NORDISK S/A. Biotimes. [S.l.], 1996.

6 OHLER, J. G. El cocotero: árbol de la vida. Roma: FAO, 1986. 348

p. (Estudios FAO de Producción y Protección Vegetal, n. 57).

7 PINTO, G. A. S. Produção de uma mistura enzimática hidrolítica

por Aspergillus niger 3T5B8 em fermentação submersa. Rio de
Janeiro, 1998. 100 p. Dissertação (Mestrado), Curso de Pós-
Graduação em Bioquímica, Instituto de Química, Departamento de
Bioquímica, UFRJ.

8 ROSA, M.F. Alternativas para o uso da casca de coco verde. Rio

de Janeiro: Rede local da Embrapa Agroindústria de Alimentos, 1998.
10 p. (Programa 10 – Extração, colheita, pós-colheita, transformação e
preservação de produtos agrícolas. Subprojeto 10.1999.083-03).

9 VAILANT, F.;MILLAN;P.;O´BRIEN;G.;DORNIER;M., DECLOUX,

M.;REYNES, M. Crossflow microfiltration of passion fruit juice after
partial enzymatic liquefaction. Journal of Food Engineering,
Abingdod, Oxon, v.42, p. 215-224, 1999.

Agradecimentos
Os autores agradecem a participação dos alunos Adriana Gomes Moret, Alessandra de
Andrade Lima, Daniela Sayão Vieira, Flávia Cavaleiro Costa, Natalie Jorge Gonçalves e
Vladimir Ferreira Cabral na condução deste trabalho.

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