UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
BIOTECNOLOGIA
Estudo Dirigido 1 (Atividade Individual)
Discente: Pâmela Mamede 201974440012
01. Faça uma busca nos sites e Exemplifique três processos industrial de
biotransformação feito catalisado por (a) enzima, (b) microorganismo e (c) trangênico.
Enzimas: O uso de penicilina G acilase para clivar a cadeia lateral de antibióticos β-lactâmicos
possibilitando a introdução de novas cadeias laterais; o uso de lipases na síntese do Taxol e de
nucleosídeo fosforilases na síntese do agente antiviral Ribavirina.
Microorganismos: Fungo Aspergillus, utilizado para a produção de proteínas recombinantes; a
levedura Saccharomyces cerevisiae, pelo processo de fermentação na panificação, na produção de
cerveja, vinho e outras bebidas alcoólicas ou ainda na produção de um combustível alternativo e
renovável (bioetanol); Taxomyces andreanae no qual é utilizado como agente quimioterapêutico para o
tratamento de vários cânceres
Transgênicos: DNA Recombinate Bacillus thuringiensis Klebsiella pneumonize para produção de
algodão resistente à broca do milho europeia e ao herbicida; genes combinados Oncorhynchus
tshawytscha ou peixe Chinook, e da enguia Zoarces americanus para o crescimento mais rápido dos
salmões e gene Vibrio cholerae para produção de vacina contra cólera.
02. Defina downstream, midstream e upstream em um bioprocesso.
Upstream são as etapas do fluxo de trabalho que tem o objetivo de amadurecer e validar ideias
antes de aplicá-las no mundo real. Já o downstream se refere à todas as etapas seguintes do
fluxo de trabalho a partir do backlog de itens gerados no upstream, a etapa de purificação.
Midstream é a fase em que as matérias-primas são transformadas em produtos prontos para uso
específico.
03. Exemplifique um bioprocesso utilizando o esquema a baixo baseado no caso
específico de poluentes ambientais.
Enzimas são proteínas que catalisam reações químicas dentro de organismos, enquanto
bioprocessos são processos/reações efetuadas por seres vivos ou por substâncias produzidas por
eles, um exemplo de uma reação enzimática em um bioprocesso está na produção de queijo por
biotransformação na indústria, temos como molécula precursora o conjunto de leveduras que
originalmente efetuaria a fermentação do leite para transformá-lo em queijo, no entanto, o processo
original é lento e envolve várias etapas catalíticas até o produto de interesse. Usando a
biotransformação, que consiste em isolar a enzima ou a parte de interesse do microorganismo e
inseri-la diretamente na reação, temos então a última etapa do esquema, que demonstra um produto
de interesse mais puro e com menos etapas, por tanto, mais lucrativo.
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
BIOTECNOLOGIA
04. A partir da Consulta do RELATÓRIO FINAL PRODUÇÃO DE ENZIMAS A
PARTIR DO SORO DE LEITE, dos autores Fabiana Jung Noel e Waldemir Santiago
Júnior reescreva o esquema abaixo com os dados do bioprocesso presente no relatório
citado.
O soro de queijo, obtido em grandes quantidades como resíduo da indústria de
laticínios, consiste na parte líquida conseqüente à precipitação da caseína e é
composto basicamente de 5% de lactose, 1% de proteínas, 0.8 % de sais, 0.5% de ácido
lático, com pH 4.0. O microrganismo utilizado no cultivo foi Kluyveromyces marxianus,
cuja cultura foi feita em batelada alimentada com alta densidade celular (“High Cell
Density Cultivation”). O mecanismo de absorção e hidrólise da lactose ocorre após seu
transporte através da parede celular, mediado pelo sistema lactose permease. Dentro da
célula, o dissacarídeo é desdobrado em glicose e galactose pela lactase. Estes
açúcares são, então, metabolizados através da via glicolítica normal. Ocorre a
Determinação dos teores de Lactose no produto do Biorreator. A alimentação
exponencial baseia-se na alimentação contínua com um perfil exponencial fixo,
permitindo, teoricamente, crescimento celular exponencial por alimentação de
substrato de acordo com a demanda de crescimento. A alimentação exponencial com
controle automático de retroalimentação procura compensar as variações de μ devido
a perturbações do processo.A taxa de produção mais alta foi obtida com a
estratégia de alimentação batelada exponencial. A estratégia de controle
otimizante para cultivo aeróbio em batelada alimentada maximizou o crescimento da
biomassa e a produtividade volumétrica de
lactase. Outra vantagem refere-se ao fato de que o controle só requer o
monitoramento do nível de etanol no gás de saída do bio-reator.
05. (a) Defina Bioprocesso, Biologia molecular aplicada e Engenharia metabólica,
cofatores, percussores e repressão catabólica. (b) Defina Biocatálise e enumere as
principais desvantagens e vantagem dos biocatalizadores enzimáticos e microbiológicos;
enumere as principais desvantagens e vantagem dos biocatalizadores enzimáticos
comparados aos catalizadores químicos; diferencie estabilidade, seletividade e atividade
biocatalítica.
a) O Bioprocesso compreende as diversas etapas envolvidas na obtenção de um
produto gerado por um micro-organismo, uma célula ou uma enzima, partindo da
extração ou biossíntese até a obtenção de um bioproduto com pureza adequada ao seu
emprego. A biologia molecular é a área da biologia que estuda os organismos
do ponto de vista molecular, focando principalmente na base de todos
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
BIOTECNOLOGIA
organismos, os ácidos nucleicos, RNAs e DNAs. Algumas enzimas normalmente
não necessitam de outros grupos químicos além de seus aminoácidos para a sua
atividade catalítica, entretanto, outras precisam de um componente químico adicional,
e esse componente pode ser tanto o co-fator, que é um íon inorgânico, ou a coenzima,
que é um complexo orgânico. Há enzimas que precisam dos dois. Uma enzima ativa
completa junto de sua coenzima ligada ou seu co-fator é chamada de holoenzima.
Enquanto a parte proteica dessa enzima é chamada de apoenzima.
b) Pode definir-se biocatálise aplicada de um modo razoavelmente claro e aceitável como
sendo a aplicação de um biocatalizador de modo a atingir uma dada conversão sob
condições controladas num biorreactor. Como vantagens apresentam-se: elevado poder
catalítico (Turnover elevado), elevada especificidade, actividade óptima em condições
suaves de T, pH, P, poucos ou nenhuns sub-produtos, ambientalmente convenientes,
possibilidade de catálise em solventes orgânicos, possibilidade de imobilização. E como
desvantagens apresentam: insuficiente estabilidade para aplicações comerciais, custos
de preparação elevados, frequentemente problemas de inibição, reutilização nem sempre
fácil, concentração baixa de substratos e produtos, alergenicidade. Neste balanço de
vantagens e desvantagens da biocatálise face à catálise química, a pergunta lógica que
poderá pôr-se é a de saber quando deveremos optar por um processo de catálise
química ou por um processo de biocatálise. A resposta não existe porque cada caso é
um caso e os factores determinantes são muitos e complexos. Analisando os casos de
sucesso comercial não é possível deduzir regras geralmente aplicáveis na decisão por
qualquer das vias química ou biocatalítica, a qual terá de ser tomada sempre numa base
de competição multifactorial.
Primeiro que tudo tem de haver um biocatalisador da reacção pretendida para que possa
haver biocatálise como alternativa; além disso os custos de preparação dos
biocatalisadores são elevados; por outro lado, factores de natureza técnico-económica e
comercial podem limitar severamente o desenvolvimento de bioprocessos; também
factores externos.
06. Sobre a diversidade metabólita dos seres vivos, segundo o critério de fonte de energia,
como podemos classificar os microrganismo como bactérias, fungos e plantas. Justifique.
A produção de matéria orgânica acontece por meio de dois processos, a fotossíntese e a
quimiossíntese, sendo o primeiro o mais conhecido. Na fotossíntese, os organismos autotróficos
utilizam energia luminosa para produzir energia química e fixar o carbono em compostos orgânicos.
Já na quimiossíntese, a energia é conseguida graças à oxidação de substâncias químicas. Os
organismos autotróficos, ou autótrofos, podem ser definidos como seres que são capazes de
sintetizar seu próprio alimento, ou seja, são capazes de utilizar material inorgânico para sintetizar
material orgânico, sendo estes bactérias e plantas. Os organismos heterotróficos, ou heterótrofos,
por sua vez, não são capazes de produzir seu próprio alimento, dependendo do consumo de material
orgânico previamente formado. Entre os exemplos de organismos heterotróficos, podemos citar os
animais, fungos e algumas espécies de bactérias e protistas.
07. Faça um resumo explicando a visão simplificada do metabolismo celular, e
exemplifique os tipos envolvidos no metabolismo energético do elemento carbono na
célula microbiana.
O metabolismo celular é um conjunto de reações químicas de um organismo que
objetivam a produção de energia para o funcionamento das células. Além da produção de
energia, durante o metabolismo celular também existe a síntese de intermediários que
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
participam de reações químicas, comoBIOTECNOLOGIA
lipídios, aminoácidos,
nucleotídeos e hormônios.
Por isso, o metabolismo celular é fundamental para a sobrevivência dos organismos. O
metabolismo celular é dividido em anabolismo e catabolismo, o anabolismo compreende
as reações de armazenamento de energia, ocorrendo a síntese de compostos. É a fase
sintetizante do metabolismo, o catabolismo compreende as reações de liberação de
energia, a partir da decomposição de moléculas, é a fase degradativa do metabolismo.
Requerimentos nutricionais: Estes incluem fontes de carbono orgânico, nitrogênio,
fósforo, enxofre e íons metálicos incluindo ferro. As bactérias secretam pequenas
moléculas que se ligam ao ferro (sideróforos, por exemplo, enterobactina e micobactina).
Os sideróforos (com ferro ligado) são internalizados pela célula bacteriana após ligarem-
se a receptores específicos. O hospedeiro humano também tem proteínas
transportadoras de ferro (por exemplo, a transferrina). Desta forma, bactérias que não
competem eficazmente com o hospedeiro pelo ferro disponível são pouco patogênicos.
08. O que são exoenzimas e qual a importância dela para sobrevivência do
microorganismo?
Enzimas extracelulares que degradam moléculas orgânicas complexas em
moléculas simples assimiláveis pelo microrganismo. A sua importância se dá com
relação a alimentação desses microrganismos, pois a alimentação ocorre através
da liberação de enzimas digestivas pelos microrganismos no. Essas enzimas,
chamadas exoenzimas, agem digerindo as substâncias orgânicas presentes no
meio para que o microrganismo possa absorver apenas os produtos dessa
digestão.
09. Defina enzima. Defina numericamente Km; Kcat e eficiência enzimática.
Enzimas são proteínas que catalisam reações químicas dentro de organismos.
No primeiro significado de Km: é um importante parâmetro da reação enzimática e da função
biológica, fornece uma medida da [S] para que ocorra uma catálise significativa, enzimas diferem
muito no KM, pois depende do substrato e das condições experimentais: Temperatura, sais, pH, etc.
Vmax [s] Vmax [s ]
Se Km= [ s ] →V = =
2[s ] 2
No segundo significado do KM está relacionado às constantes de velocidade de cada etapa da
reação
( K 2+ k 3)
Km=
K1
O Kcat mede o número de moléculas de substrato convertidas em produto por uma molécula de
enzima por unidade de tempo, considerando que a enzima está totalmente saturada com substrato. É
calculado pela relação entre a velocidade máxima de reação e a quantidade total de sítios catalíticos de
enzima do ensaio (Et), em mols. Se a enzima tem múltiplas subunidades, Et pode ser maior que a
concentração de enzima, caso não tenha, Et corresponderá à concentração da enzima.
vm
Kcat =
Et
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
Acredita-se que a eficiência catalíticaBIOTECNOLOGIA
das enzimas se deve
à formação de um complexo
entre a enzima e o estado de transição do substrato, o que permite a estabilização do
estado de transição e a conseqüente aceleração da reação. Logo, a especificidade
enzimática é função das interações não-covalentes entre a enzima e o substrato no
estado de transição
10. Defina pH e temperatura ótima. Qual a diferença entre a desnaturação de uma enzima
de uma proteína?
Ph ótimo: pode ser compreendido como um valor relacionado ao potencial
hidrogeniônico, segundo o qual cada enzima tem o seu valor característico, haja vista que
assim será desenvolvida a sua atividade será a máxima. Temperatura ótima: Sabe-se que
enzimas são extremamente termo sensíveis e que para cada tipo de enzima existe
uma temperatura ótima, quando ocorre a velocidade máxima da reação, permitindo
assim, o maior número possível de colisões moleculares sem desnaturar a enzima.
A desnaturação refere-se ao processo de distorção da estrutura secundária ou terciária
da proteína, que pode ser classificada como desnaturação irreversível ou reversível, com
relação as enzimas a desnaturação é definida como um processo no qual uma estrutura
molecular se desvia de seu estado original quando exposta a um agente desnaturante, já
a desnaturação das proteínas significa uma proteína cuja estrutura tridimensional (3D) é
interrompida devido à exposição a certos fatores químicos ou físicos (chamados
desnaturantes).
11. Explique como se determina a energia de ativação de uma reação enzimática pela
equação de Arrhenius?
Sabe-se que a velocidade de uma reação depende da energia e da frequência de
colisões entre as moléculas que reagem, da temperatura e da orientação apropriada das
moléculas ao colidirem. Estas condições resumem-se na equação de Arrhenius. Verifica-
se, por meio da Equação de Arrhenius se a energia de ativação (Ea) é elevada, a
constante de velocidade é pequena, isto é, a reação é lenta; para uma mesma reação, a
constante de velocidade (k) aumenta com a temperatura.
k = Constante de velocidade da reação;
Ea = Energia de ativação da reação;
R = Constante dos gases (R = 8,314 J/K.mol);
T = É a temperatura em K (Graus Kelvin);
e = Base dos logaritmos neperianos ou naturais (e = 2,718…);
A = Frequência de colisões que acontecem com geometria correta.
12. Defina atividade enzimática, e escreva a fórmula que define atividade volumetria e
atividade específica.
A atividade enzimática, ocorre por meio das enzimas que são moléculas de natureza
proteica e estrutural que catalisam reações químicas sempre que sejam
termodinamicamente possíveis: uma enzima faz com que uma reação química
energeticamente possível (ver Energia Livre de Gibbs), mas que transcorre a uma
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
velocidade muito baixa, seja BIOTECNOLOGIA
cineticamente favorável, ou
seja, transcorra a uma maior
velocidade em relação à ausência da enzima. Nestas reações, as enzimas atuam sobre
moléculas denominadas substratos, que se convertem em moléculas diferentes
denominadas produtos. Quase todos os processos nas células precisam de enzimas para
que ocorram a taxas significativas.
13. A enzima urease aumenta por um fator de 108/minuto, nas condições de pH 8,0 e 20º
C, a velocidade da hidrólise de uma quantidade da substância uréia. Quanto tempo em anos
levaria para que essa mesma quantidade de uréia fosse hidrolisada sob as mesmas
condições na ausência da urease?
Se a enzima aumenta a velocidade da reação de hidrólise da uréia em um fator de 10^8, o
tempo para que a reação se complete também é acelerado nesta mesma ordem de
grandeza. Se a reação não for catalisada pela enzima (ausência da enzima), o tempo
necessário para a reação se completar será 10^8 vezes maior, logo a resposta seria
t = 10^8 14
Transformando isto em horas:
t = 10^8 / 60 = 1.66x10^6 horas
Transformando em dias:
t = 1.66x10^6horas/ 24 = 6.9x10^4 dias
Transformando em anos:
t= 6.9x10^4/365 = 1.9x10^9 anos
8
14. Qual a concentração de substrato para que uma enzima com kcat de 30,0 s-1 e Km de
0,005 M opere com um quarto da velocidade máxima? (Utilize a equação de Michaelis-
Menten)
𝑉𝑜 =𝑉𝑚á𝑥. [𝑆]/𝐾𝑚 + [𝑆]
Substituindo:
𝑉𝑚á𝑥/4=𝑉𝑚á𝑥. [𝑆]/𝐾𝑚 + [𝑆]
Resolvendo a equação:
[S] = 0,00166 M ou 1,7 mM
15. Determine a relação entre V0 e Vmáx obtida nas seguintes concentrações de substrato:
1/8Km; 8Km e 50Km. (Utilize a equação de Michaelis-Menten)
[S] = 1/8 Km – é só substituir este valor na equação :
𝑉𝑜 =𝑉𝑚á𝑥.[𝑆] / 𝐾𝑚+[𝑆]
𝑉𝑜 =𝑉𝑚á𝑥.⅛ 𝐾𝑚 /𝐾𝑚+⅛ 𝐾𝑚
𝑉𝑜 =⅛ 𝑉𝑚á𝑥.𝐾𝑚 / 1,125 𝐾𝑚
Resposta: 𝑉𝑜 = 0.11.𝑉𝑚á𝑥
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
BIOTECNOLOGIA
[S] = 8 Km
Seguir o mesmo raciocínio acima
Resposta: 𝑉𝑜 = 0,8.𝑉𝑚á𝑥
S] = 50 Km
Resposta: 𝑉𝑜 = 0.9. 𝑉𝑚á𝑥
16. A anidrase carbônica de eritrócitos (PM: 30.000 g/mol) tem um dos números de
renovação mais altos conhecidos. Ela catalisa a hidratação reversível do CO2.
H2O + CO2 ↔ H2CO3
Se 10 µg de anidrase carbônica pura catalisam a hidratação de 0,3 g de CO2 em 1 min em
Vmáx, qual é o número de renovação (Kcat) da anidrase carbônica (em unidades de min-
1)? (Utilize a equação Vmax = Kcat x [E total]
Primeiro, calcular o número de mols de CO2 e da enzima (anidrase carbônica) presente
nas massas dadas no enunciado.
0,3 g de CO2:
Massa molar CO2: 46g/mol
46g – 1 mol
0,3g – x
x= 0,00652 mols de CO2
10 µg de anidrase carbônica:
Massa molar da enzima: 30.000 g/mol
30.000 g – 1 mol
10.10-6 g – x
x= 3,33 .10-10 de anidrase carbônica
A velocidade máxima atingida pela enzima é igual a 0,00652 mols/min, já que, segundo o
enunciado, é esta a quantidade de moléculas de CO2 transformadas pela enzima por
minuto, quando ela atinge a velocidade máxima.
Agora, é só substituir os valores de Vmáx e concentração total da enzima (em mols, [Et])
na equação da Kcat:
𝐾𝑐𝑎𝑡 = 𝑉𝑚á𝑥/[𝐸𝑡]
𝐾𝑐𝑎𝑡 = 0,00652 𝑚𝑜𝑙/𝑚𝑖𝑛/3,3. 10−10𝑚𝑜𝑙
Kcat ≈ 2x107 min-1
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
17. Embora haja disponibilidade BIOTECNOLOGIA
de métodos gráficos precisos para
determinação de Vmáx
e Km de uma reação catalisada por enzimas, algumas vezes estes parâmetros podem ser
rapidamente estimados pelo exame dos valores de Vo aumentando a [S]. Faça no excel o
gráfico para determinar os valores de Vmáx e Km da reação catalisada por uma enzima na
qual foram obtidos os seguintes dados:
[S] (M) Vo
(µM/mi
n)
2,5 x 10-6 2,8
4 x 10-6 4,0
1 X 10-5 7,0
2 x 10-5 9,5
4 x 10-5 11,2
1 x 10-4 12,8
2 x 10-3 13,9
1 x 10-2 14,0
2 x 10 -1 14,0
Pela análise do gráfico, é possível estimar que o Vmáx é aproximadamente 14
µM/min; Calculando o Km através da fómula, utilizando-se de S e Vo iniciais, temos
que:
Vmáx = 14 µM.min-1
Km = 1x10-5 M
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
BIOTECNOLOGIA
18. Um grupo de pesquisadores descobriu uma nova enzima, que catalisa a reação abaixo,
e que eles nomearam de invertase X:
Os pesquisadores iniciaram a caracterização da enzima.
(a) No primeiro experimento, com [Et] de 4 nM, eles observaram que a Vmáx é 1,6 µM.s-
1. Com base nesse experimento, qual é o kcat da invertase X? (coloque as unidades
apropriadas).
k𝑐𝑎𝑡 = 𝑉𝑚a𝑥/[𝐸0] k𝑐𝑎𝑡 = 1,6 / 4.10-³ Portanto: 𝐾𝑐𝑎𝑡 = 400𝑠-¹
(b) Em outro experimento, com [Et] de 1 nM e concentração do substrato FELICIDADE
de 30µM, os pesquisadores observaram que Vo= 300 nM.s-1 . Qual é o valor de Km
medido para a Invertase X para o substrato sacarose?
𝐾𝑐𝑎𝑡 = Vmax.[𝐸0] 400 = Vmax. 1nM Vmax = 400 nM.s-1 = 0,4 μM.s-1 Para
calcular Km utilizamos Michaelis-Menten:
V𝑜 = Vmax.[𝑆] / (𝐾𝑚+[𝑆]) 0,3μ𝑀.𝑠-1 = 0,4. 30μM / (𝐾m + 30μM) Km = 10μM
19. Dê a definição e exemplos:
Apoproteína:
Cofator enzimático:
Sítio ativo
Sítio alostérico
Grupo prostético
Metaloenzima
20. O estudo de inibidores é de fundamental importância na elucidação de vias
metabólicas. Dentre as características dos diversos tipos de inibidores, qual a única
alternativa correta? A) Os inibidores alostéricos são irreversíveis. B) Os inibidores
competitivos causam redução da Vmax da enzima. C) Os inibidores não-competitivos são
análogos não metabolizáveis de substratos. D) A Km e a Vmax são diminuídas pelo
inibidor incompetitivo. E) Os inibidores irreversíveis têm seus efeitos compensados pelo
excesso de substrato.
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
BIOTECNOLOGIA
21. São vantagens das enzimas frente os catalisadores químicos, com exceção da
alternativa: A) Baixo consumo de energia. B) Baixa estabilidade do preparado enzimático.
C) Alta atividade catalítica em temperatura ambiente. D) Baixa produção de subprodutos.
E) Alta especificidade ao(s) substrato(s) da reação.
22. A respeito da velocidade máxima (Vmax) e da constante Michaeliana (Km) de
enzimas, é incorreta a afirmação: A) Km corresponde à concentração do substrato com a
qual a enzima alcança 50% da Vmax . B) Vmax é a mais elevada atividade de uma enzima
determinada em condições padronizadas. C) O valor da Km é aumentado pelo inibidor
competitivo. D) O valor da Km não se altera na presença do inibidor não-competitivo. E)
Os valores de Vmax e Km não são alterados pela presença de inibidores irreversíveis.
23. A cinética de uma enzima foi medida em função da concentração de substrato na
presença e ausência de 2 mM do inibidor “I”.
Quais são os valores de Vmax e KM na ausência e presença de inibidor?
Vmax [ s]
V= → Vmax=V ∗2
2[s ]
Sem inibidor:
Vmax=10.4∗2=20.8
Vmax=14.5∗2=29
Vmax=22.5∗2=45
Vmax=33.8∗2=67.6
Vmax=40.5∗2=81
(Vmax−1)
Km=[ s ]
V
(28.8−1)
Km=[ 3 ] =2,82
10.4
(29−1)
Km=[ 5 ] =9.6
14.5
( 45−1)
Km=[ 10 ] =19.5
22.5
(67.6−1)
Km=[ 30 ] =59.1
33.8
( 91−1)
Km=[ 90 ] =177.7
40.5
Com inibidor:
Vmax=4.1∗2=8.2
Vmax=6.4∗2=12.8
Vmax=11.3∗2=22.6
Vmax=22.6∗2=45.2
Vmax=33.8∗2=67.6
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
BIOTECNOLOGIA
(Vmax−1)
Km=[ s ]
V
( 8,2−1 )
Km=[ 3 ] =5.26
4.1
(18.8−1)
Km=[ 5 ] =9.2
6.4
(22.6−1)
Km=[ 10 ] =19.1
11.3
( 45.2−1 ) =58.6
Km=[ 30 ]
22.6
24. Quais as equações de reta?
Resposta:
b) Qual é o tipo de inibição?
Na inibição reversível, as moléculas do inibidor e as moléculas da enzima se unem por
ligações não covalentes, que, por serem mais instáveis, podem ser rompidas, fazendo
com que a enzima retome a sua atividade posteriormente.
c) Qual é a constante de afinidade do inibidor?
Inibição competitiva – os inibidores competitivos são substâncias que concorrem
diretamente com o substrato específico da enzima
Ki=(K5+K6)/K4
d) Por que a cinética de algumas enzimas alostéricas tem aspecto sigmoidal enquanto as
enzimas michaelianas têm cinéticas hiperbólicas?
e) É possível a formação de um complexo ternário [enzima-substrato-outro composto]
com as enzimas alostéricas?
f) Qual é a constante de velocidade da transformação deste complexo em produto, quando
comparado com o complexo [enzima-substrato]?
g) Qual é a Vmáx da reação?
25. Fazer o gráfico vo x [S] para uma reação catalisada por uma enzima alostérica com
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
curva sigmoidal e que tem seu BIOTECNOLOGIA
Km afetado, na ausência de efetuadores e na presença de
efetuador positivo e negativo.
A curva em vermelho apresenta o efetuador negativo.
A curva em preto não apresenta efetuados
A curva em azul apresenta o efetuador positivo
26. Fazer o gráfico vo x [S] na ausência de inibidor, na presença de duas concentrações de
inibidor competitivo e na presença de duas concentrações de inibidor não-competitivo.
Indique o KM em cada caso.
Km não sofre mudanças
27. Defina exemplificando o Número de Turnover (TON) e Frequência de Turnover
(TOF) como parâmetros de atividade catalítica.
A produtividade do catalisador é determinada pelo termo TON (Turnover Number),
que diz o número máximo de conversões que o catalisador é capaz de realizar em
uma reação;
Em 1968, Michel Boudart propôs o uso do termo TOF chem (Turnover Frequency)
baseado no processo de quimiossorção, para comparativo de catalisadores;
TOFchem representa o número de moléculas que reagem no sítio ativo por segundo
ou minuto, dependendo da referência.
Como exemplo, tem-se: Síntese de catalisadores de Mo (Mo-BPy-PMO-TMS)
heterogêneos suportados em sílica mesoporosa (BPy-PMO-TMS), utilizados na
catálise de epoxidação de olefinas (cis-cicloocteno) em hidroperóxido de tert-butila
(tBuOOH), em que os valores de TON foram calculados com os valores de mols
de produto em relação ao valor de mols de Mo nos catalisadores ;
os valores iniciais de TOF (h-1) foram calculados baseados na quantidade de
produto reacional por unidade de Mo nos primeiros 30 minutos de reação.
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
BIOTECNOLOGIA
28. No estudo enzimático foi realizado o experimento para determinar a energia de
ativação da reação. Valores da constante cinética k em função da temperatura em Kelvin
(K)estão descrito na tabela abaixo.
calcule da Energia de ativação usou-se da equação de Arrhenius.
29. Dados da tabela a baixo mostram TON e TOF de um bioprocesso. O gráfico mostra
uma estimativa do perfil dos valores dos TOF dos catalizadores. Faça a associação correta
da linha do gráfico ao referido tipo de catalisador expresso na tabela. Analisando o valor
do TOF compare as performances e diga qual o catalisador mais eficiente, justifique sua
resposta.
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
BIOTECNOLOGIA
30. Escreva as etapas do mecanismo de catálise enzimática da serina-protease com a tríade
catalítica e o substrato p-Nitrofenilacetato. O esquema da reação química é mostrado
abaixo.
Dentre os diversos tipos de proteases, as serina proteases sao, provavelmente, as mais
cuidadosamente investigadas. Estas enzimas empregam a catálise ácido-básica geral e a
catálise covalente para a sua açao, onde o mecanismo catalítico inicia-se na tríade catalítica
característica, His57 - Asp81 - Ser139, que está localizada no sítio ativo da enzima (Esquema
1).3 A tríade é uma estrutura coordenada que consiste de três aminoácidos: histidina,
aspartato e serina, onde cada aminoácido desempenha uma tarefa específica no processo
de catálise. A cadeia lateral da Ser 139 (-CH2-OH) é ativada por uma catálise básica mediada
por Asp81 e His57 através de interaçoes por ligaçao hidrogênio (numeraçao dos resíduos
referente à serina protease do HCV). A Ser do sítio ativo (nucleófilo ativado) ataca, entao, a
ligaçao amídica do substrato polipeptídico, formando um intermediário oxiânion tetraédrico.
Este intermediário se rompe pela eficiente transferência de próton da His para formar uma
amina e um intermediário acil-enzima. A liberaçao da porçao N-terminal e a introduçao de
uma molécula de H2O levam ao ataque da carboxila do substrato, formando o fragmento C-
terminal do substrato e regenerando a enzima (Esquema 1). 36
31. figura abaixo mostra o modelo conhecido como chave-fechadura. Analise as
alternativas e marque aquela que indica corretamente uma diferença entre esse
modelo e a teoria do encaixe induzido.
UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIÊNCIAS
BIOLÓGICAS FACULDADE DE
BIOTECNOLOGIA
As enzimas são moléculas que atuam como catalisadoras nas reações químicas. Para
que isso aconteça, é necessário que se liguem aos substratos. Atualmente, a teoria
mais aceita para essa interação é a teoria do encaixe induzido, que diz que:
a) o substrato é rígido assim como as enzimas.
b) existe uma complementariedade entre o substrato e a forma do sítio ativo.
c) enzima e substrato funcionam como uma chave e uma fechadura.
d) a enzima altera-se completamente para ajustar-se a um substrato em constante
mudança.
e) o substrato induz mudanças na enzima, garantindo um melhor ajuste entre o sítio
ativo e o substrato.
Alternativa E, pois na teoria do encaixe induzido, o substrato induz uma mudança conformacional
na enzima.
32. A teoria do encaixe induzido aceita que o substrato induz uma mudança na
enzima com a qual ele interage, diferentemente da teoria anteriormente aceita que
dizia que a enzima e o subtrato complementam-se de maneira rígida. Que nome
recebe essa teoria proposta em 1894?
a) Encaixe perfeito
b) Chave-fechadura
c) Tampa-panela
d) Encaixe moderado
e) Chave perfeita
A teoria que aceita que a enzima é complementar ao substrato é chamada de modelo chave-
fechadura, ou seja , a resposta é a alternativa B
