2019 Brazilian Technology Symposium

Plataforma Modular para Sensores Químicos

Guilherme Matsuo André Okihara Renata Kelly Mendes Frank Herman Behrens
Faculdade de Eng. Elétrica Faculdade de Eng. Elétrica Mestrado em Sistemas de Mestrado em Eng. Elétrica
PUC Campinas PUC Campinas Infraestrutura Urbana PUC Campinas
Campinas - Brasil Campinas – Brasil PUC Campinas Campinas – Brasil
[email protected] [email protected] Campinas – Brasil [email protected]
renatavalente@puc-
campinas.edu.br

Abstract— The cyclic voltammetry procedure requires the use II. FUNDAMENTAÇÃO
of expensive professional apparatus. The objective of this work is
to develop low cost electronic modules capable of composing an Estudos recentes relatam o uso de componentes eletrônicos
electrochemical measuring equipment, called potentiostat, that miniaturizados e tecnologias de microfabricação para a
serves as an interface for analog-digital preprocessing for signals construção de biossensores compactos e totalmente integrados.
captured from chemical sensors. This equipment, coupled with a
Baraket et al. desenvolveram uma plataforma para um
suitable microcontroller module and software, is a platform that
allows performing precision cyclic voltammetry procedures,
biossensor eletroquímico totalmente integrada, para a detecção
serving as an interface to chemical sensors in applications that de citoquinas em pequenas concentrações. O trabalho descreve
require simple, portable and low cost equipment. um arranjo com eletrodo de referência duplo (RE), um contra-
eletrodo central (CE) entre os dois REs e dois grupos de
quatro microeletrodos de trabalho de ouro (WEs) de cada lado
dos REs. Usando oito WEs de ouro, este projeto maximiza a
Keywords— potentiostat; cyclic voltammetry; electronic sensibilidade da detecção, diminui o tempo de medição e
modules; chemical sensors. permite a detecção simultânea de biomarcadores de citoquinas
variáveis. A plataforma biossensora foi fabricada utilizando a
tecnologia de microfabricação, apresentando uma estrutura
multi-eletrodo conectável a um potenciostato comercial para
realizar experimentos, validar a funcionalidade do sensor e
executar medidas de aplicação [2].
O trabalho de Derkus revisa três tipos diferentes de
I. INTRODUÇÃO dispositivos de detecção microfabricados que são
desenvolvidos usando técnicas de micro e nano litografia,
Atualmente, existem oportunidades bastante interessantes e tecnologia microfluídica e tecnologia baseada em sistemas de
promissoras no desenvolvimento de sensores químicos, que microelectromecânica (MEMS). Ele discute a adaptação
necessitam de um circuito eletrônico específico de interface necessária da tecnologia de sensores atual às técnicas clínicas
para o pré-processamento analógico-digital e que, muitas humanas. Os sistemas propostos devem lidar com amostras
vezes, precisa ser projetado ou adaptado ao sensor em uso. biológicas reais, como urina, sangue, líquido cefalorraquidiano
Sensores eletroquímicos podem ter uma molécula biológica ou tecido canceroso. A telemedicina baseada na tecnologia dos
como elemento de reconhecimento e, nestes casos, são smartphones também pode ser utilizada junto com
denominados de biossensores, que permitem a determinação da biossensores portáteis para transmitir medições clínicas
concentração de uma determinada substância em meio líquido através da rede de telecomunicações para qualquer local [3]
através da técnica de voltametria utilizando-se um instrumento De acordo com Pruna et al., a disponibilidade de
conhecido como potenciostato [1]. potenciostatos miniaturizados de baixo custo, com boas
O problema que é apresentado neste trabalho visa o características de medição (por exemplo, largura de banda,
desenvolvimento de um módulo eletrônico para o pré- determinação de contribuição capacitiva ou indutiva para a
processamento analógico-digital de sinais captados de impedância do sensor e rastreio paralelo) ainda é um desafio
biossensores. não resolvido em bioeletrônica. No seu trabalho, a
combinação de circuitos analógicos simples juntamente com
Com base nesse módulo eletrônico, operando sob o microcontroladores para a implementação de filtros digitais é
controle de um microcontrolador, torna-se possível a obtenção apresentada como uma alternativa às arquiteturas complexas e
de um potenciostato miniaturizado que seja portátil, de baixo incompletas relatadas na literatura. Foi desenvolvido e
consumo de energia, peso reduzido, baixo custo e que tenha validado um sistema eletrônico de aquisição de baixo custo
uma arquitetura modular quanto à conexão de diferentes totalmente integrado a uma plataforma de biossensores,
submódulos para adaptá-la a diferentes técnicas de medidas. contendo oito microeletrodos de trabalho (WEs) em ouro,
eletrodo de referência (RE) e contra-eletrodo (CE).

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O custo de fabricação do protótipo foi mantido abaixo de O primeiro problema encontrado na utilização do DAC
300 dólares. O desempenho do dispositivo proposto foi presente no Arduino Due foi sua tensão de referência de 3,3V,
comparado com um analisador de impedância comercial pois o projeto base foi definido para uma tensão de referência
através da análise eletroquímica considerando um caso de de 5V. Outro problema refere-se à faixa de atuação do DAC,
aplicação de biossensor altamente sensível. Os resultados que apenas trabalha entre 1/6 e 5/6 da tensão de referência
mostraram-se muito promissores para o desenvolvimento de 3,3V, consequentemente iniciando em 0,55 V e atingindo um
sistemas eletroquímicos de baixo custo, portáteis e máximo em 2,75 V.
miniaturizados, para diagnóstico e meio ambiente [4].
Surgiu, também, a oportunidade de se desenvolver um
No trabalho de Ramfos et al., são apresentados a conector mais confiável para conexão aos eletrodos utilizados,
arquitetura e o projeto de um potenciostato multiplexado e acopla-lo a uma caixa para comportar toda a interface
híbrido compacto, multicanal para realizar medições eletrônica. Para a confecção do conjunto, foi utilizado como
eletroquímicas em matrizes de eletrodos continuamente padrão um eletrodo comercial já utilizado com um
polarizados. A arquitetura proposta utiliza uma combinação de equipamento comercial, e através do software de modelagem
medidas sequenciais e paralelas, para permitir um alto 3D Autodesk Inventor 2018, um modelo da caixa foi criado.
desempenho, mantendo o sistema compacto e de baixo custo. Através de uma impressora 3D, a caixa do protótipo foi
A precisão da leitura do sinal é mantida seguindo uma impressa e realizada a montagem do módulo Arduino Due e
abordagem de multiplexação especial, que assegura a do respectivo módulo de interface (Fig. 1 e 2).
polarização contínua de todos os eletrodos de trabalho da
matriz. Após a amostragem dos resultados, uma técnica de
calibração digital cancela erros de imprecisões dos
componentes. Um protótipo de placa de circuito impresso
(PCB) foi projetado e construído usando componentes
disponíveis comercialmente para a medição em tempo real do
sinal de 48 eletrodos. A operação e o desempenho da PCB
foram avaliados e caracterizados dentro de uma ampla gama
de condições de teste, que apresentou alta linearidade
(R2 > 0.999) e uma resolução de 400 pA [5].
III. METODOLOGIA
O presente trabalho propõe o projeto e construção de uma
plataforma para biossensores, que seja capaz de fazer a
interface adequada com o conjunto de eletrodos da
microcélula eletroquímica e os circuitos eletrônicos
necessários para estímulo e medidas de tensão e corrente de
acordo com as técnicas de voltametria e amperometria. O
módulo de interface com o sensor é construído de forma
similar aos citados na literatura por Dobbelaere et al. [6] e
Dryden [7], sendo diretamente conectado ao módulo Fig. 1. Montagem do potenciostato
processador, composto por um conjunto de circuitos
eletrônicos que realiza a função de um potenciostato ou
galvanostato. O módulo processador contém ainda um
microcontrolador que realiza o controle dos vários
submódulos internos e o sequenciamento das medidas, de
acordo com os parâmetros previamente definidos, sendo
também responsável pela comunicação com o meio externo
via USB. Os dados capturados são processados num
computador através de um aplicativo que permite a definição
dos parâmetros de controle do módulo processador e a
visualização dos resultados das medidas de forma gráfica ou
numérica dependendo da análise realizada.
Iniciou-se por replicar o projeto de potenciostato e
galvanostato controlado por USB descrito por Dobbelaere et
al. [6]. Este projeto apresentou dificuldades de reprodução
pela indisponibilidade de componentes no Brasil, então optou-
se pela utilização de um módulo microcontrolado Arduino
Due [8], pois este possui dois conversores digital-analógicos
(DAC) e dois conversores analógico-digitais (ADC), ambos
com 12-bits, com resolução de 4096 pontos para a geração da
Fig. 2. Interface completa do potenciostato
tensão aplicada e para a medida da corrente.

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A. O circuito em módulos Os terminais utilizados do módulo Arduino Due foram os
Com base no circuito apresentado em [6],
], foi possível criar seguintes:
um diagrama esquemático para o circuito potenciostato  5V – Utilizado para a alimentação de todo o modulo
conforme apresentado na Fig. 3,, sendo que o mesmo foi potenciostato.
dividido em seis partes principais. O desenvolvimento da
 GND – Referência de tensão de todos os circuitos.
placa de circuito impresso (PCB) (Fig. 4) para o circuito foi
realizado utilizando-se
se a ferramenta de software Autodesk  DAC0 – Conversor digital-analógico
digit de 12-bits, para
Eagle. Quatro versões do PCB foram realizadas para se chegar aplicarr a tensão necessária à célula eletroquímica,
ao circuito mais otimizado, conforme pode ser visto na Fig. 5. com resolução de 4096 pontos resultando re em
incrementos de 537µV.
537µV
 DAC1 - Conversor digital-analógico
d de 12-bits,
utilizado para configurar uma tensão de offset,
referida como VRef.
 Pino A0 – Entrada para o conversor analógico-digital
analógico
de 12-bits, utilizado
tilizado para a medida da tensão aplicada
à célula eletroquímica.
 Pino A1 - Entrada para o conversor analógico-digital
analógico
de 12-bits, utilizado
tilizado para a medida indireta da
corrente que flui pela célula eletroquímica através de
um resistor sense de precisão.
precisão
 Pino 44 – Saída digital utilizada
u para acionamento de
um relé para ligar e desligar
desliga a célula eletroquímica de
todo o circuito.

O módulo Arduino Due foi utilizado para realizar o

procedimento de varredura da d tensão aplicada à célula
eletroquímica e medição da corrente e da tensão, armazenando
localmente os dados obtidos no processo para posteriormente
envia-los via USB a um computador externo, externo assim
protegendo o intervalo total das medidas de qualquer
interferência externa, garantindo que a velocidade de
varredura configurada seja constante durante o ciclo de
medida.
B. Fonte negativa
Sabendo-se
se da necessidade de uma tensão negativa de
Fig. 3. Diagrama completo do módulo potenciostato
potenciostato. alimentação devido a utilização de fontes simétricas para os
amplificadores operacionais, foi desenvolvido um módulo
capaz de gerar tal tensão a partir de uma fonte de tensão
positiva (alimentaçãoo de 5V obtida pela conexão USB, ou
utilização de uma bateria de 9V).
9V) Optou-se por desenvolver
uma fonte negativa com base no circuito integrado ICL7660
[9],
], cujo diagrama esquemático está mostrado na Fig. 6.

Fig. 4. Layout da PCB, desenvolvida do software Autodesk Eagle

Fig. 5. Todas as versões dos

os protótipos de circuitos eletrônicos desenvolvidos
durante a pesquisa. Fig. 6.. Diagrama esquemático do circuito fonte negativa

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A fonte negativa é obtida por meio de uma fonte chaveada, Pode-se notar também a chave normalmente aberta do relé
que funciona invertendo a tensão positiva de entrada com um de isolamento (K1), ligada ao terminal do eletrodo de trabalho
comutador. A velocidade de comutação do circuito integrado (WE). O terminal WE é ligado diretamente a um dos eletrodos
ICL7660 é de 10 kHz. O circuito pode suprir até 100 mA com da célula eletroquímica e aplica a tensão desejada à
uma queda de tensão inferior a 0,65V. substância.
C. Relé de Isolamento E. Circuito de medição de tensão
As células eletroquímicas são sensíveis a corrente elétrica. A varredura de tensão aplicada à célula eletroquímica é
Logo, é necessário desconecta-las do circuito para que não configurada no módulo Arduino Due via porta serial por um
haja nenhuma reação química enquanto o procedimento de script em linguagem Python [10] rodando em um computador
voltametria não esteja em andamento. Isso se faz com a externo. Assim, o terminal DAC0 aplica ciclos de tensão no
utilização de um relé. A conexão do circuito com a célula terminal WE, mas para a confirmação da real tensão sobre a
eletroquímica é realizada em um tempo determinado pelo célula, é também realizada a medida da tensão no momento
procedimento (normalmente alguns segundos), a fim de que é a corrente é medida. Ambos os valores (corrente e
estabilizar a substância logo antes de se iniciar o procedimento tensão) são armazenados na memória do Arduino Due para
de voltametria. O circuito mostrado na Fig. 7 é acionado pelo serem transmitidos via serial para o script Python.
pino 44 do Arduino Due configurado como saída digital.
Os terminais dos eletrodos de sense (SE) e de referência
D. Circuito driver de tensão (RE) do circuito (Fig. 9) são conectados diretamente à célula
Os DACs do módulo Arduino Due são capazes de gerar eletroquímica, para a realização da voltametria cíclica. O
apenas tensões positivas, sendo que os procedimentos de terminal SE é também conectado a WE, que aplica a rampa de
voltametria requerem a liberdade de excursionar entre tensões tensão provida pelo DAC0 do módulo Arduino Due.
positivas e negativas. O circuito driver, mostrado na Fig. 8, é O circuito da Fig. 9 apresenta dois buffers de ganho
responsável por criar um offset de tensão, sendo utilizado para unitário e alta impedância de entrada nas conexões dos
gerar tensões negativas na célula eletroquímica. eletrodos SE e RE. Esta característica impede que o circuito
Para conseguir aplicar tensões negativas à célula drene corrente da célula eletroquímica, garantindo a passagem
eletroquímica, foi utilizado um Amp Op (IC1A) configurado de corrente apenas pelo resistor sense de medição corrente.
como subtrator de tensão, já que os DACs do módulo Arduino Devido à possibilidade das tensões na célula eletroquímica
Due conseguem gerar apenas tensões positivas. O primeiro serem negativas, é necessário um circuito somador de tensão
estágio do circuito faz a subtração de 1,65V (configurável pelo para elevar as tensões, pois os conversores analógico-digitais
firmware via DAC1), conseguindo um potencial de varredura (ADCs) do Arduino Due apenas conseguem capturar tensões
ajustável na faixa de -1,1V à +1,1V. O segundo estágio do positivas. Isso é realizado com o auxílio de um Amp Op
circuito apresenta um Amp Op (IC1B) como buffer e filtro configurado como somador (IC2D), de modo que que a tensão
analógico, também recebe um feedback da tensão sendo somada neste estágio é a mesma subtraída no circuito driver.
aplicada na célula para cancelar a queda de tensão no resistor
de medição de corrente (resistor sense). Resumindo, as tensões produzidas pelo módulo Arduino
Due recebem um offset para baixo antes de serem aplicadas na
célula eletroquímica e, para a realização das medições, as
tensões recebem o mesmo offset, só que desta vez para cima,
possibilitando os ADCs realizaren corretamente as medições
de tensão.
F. Circuito de medição de corrente
Para realizar a medição de corrente que flui através da
substancia analisada, é utilizado um resistor sense de precisão
conectado entre o contra-eletrodo (CE) e o terra do circuito, de
modo que a corrente que flui por esse resistor é a mesma que
flui através da célula eletroquímica. A tensão medida sobre o
resistor sense é proporcional ao valor de corrente, seguindo a
lei de Ohm.
Fig. 7. Diagrama esquemático do circuito relé de isolamento

Fig. 8. Diagrama esquemático do circuito driver de tensão Fig. 9. Diagrama esquemático do circuito de medição de tensão

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O fluxograma da Fig. 11 pode ser acompanhado passo a
passo para entender como o firmware atua no
microcontrolador e realiza todo o procedimento.
Primeiramente é feita a comunicação entre o software Python
e o módulo Arduino Due via porta serial. Após aberta a
comunicação, o script em Python pede ao usuário as
informações necessárias para realizar o procedimento, ao
inserir a última variável, o script envia os dados para o
firmware presente no Arduino e espera o retorno dos dados
obtidos pela voltametria cíclica.
Fig. 10. Diagrama esquemático do circuito de medição de corrente Para realizar a leitura e interpretação dos dados, foi
escolhido utilizar a comunicação serial USB e manipular os
O valor do resistor representado na Fig. 10 por R_SENSE dados na forma de texto em um computador. Futuramente
pode ser alterado para ajustar a faixa de corrente que se pode-se escolher apresentar os dados no próprio modulo
pretende medir, a fim de compreender na leitura analógica a potenciostato com a integração de um display gráfico.
maior resolução possível, aumentando a precisão com que o
instrumento trabalha. O valor de tensão é multiplicado por um H. Firmware do Arduino Due
ganho 10 pelo Amp Op IC1C. O Arduino Due realiza a configuração das variáveis e
inicia o procedimento de medidas. Durante o período em que o
Com já dito, podem haver correntes negativas através da procedimento de voltametria cíclica é realizado, o modulo
célula eletroquímica, logo a tensão sobre o resistor R_SENSE Arduino Due fica incomunicável, não sendo possível realizar
pode também ser negativa. Para fazer a leitura de tal tensão outra tarefa no microcontrolador. Após o termino do
pelo Arduino Due, é necessário que se acrescente um offset, procedimento, os dados capturados pelo Arduino são enviados
realizado pelo Amp Op IC1D na forma de somador de tensão. para um PC via comunicação serial.
Este circuito soma o mesmo valor que foi subtraído pelo
circuito driver, fazendo com que possa se realizar a leitura de IV. RESULTADOS
tensões puramente positivas.
A substância utilizada para os testes foi o Ferrocianeto de
G. Software Potássio (K Fe(CN) ). Esta substância, quando utilizada em
Para o desenvolvimento do firmware foi utilizada a voltametria cíclica, apresenta uma reação de oxirredução
plataforma IDE Arduino [8], já que o microcontrolador reversível e pode ser reutilizado sem perder suas
escolhido se baseia nesta plataforma. Após verificar o características. Inicialmente, foi utilizado um potenciostato
procedimento de voltametria cíclica em um aparelho comercial da marca AUTOLAB, modelo PGSTAT101 [11],
comercial, foram estipuladas algumas variáveis no processo como referência para comparação dos resultados práticos
que são fundamentais para o estudo, sendo elas: tensão obtidos com a plataforma de biossensores desenvolvida neste
mínima (V), tensão máxima (V), velocidade de varredura trabalho.
(V/s), quantidade de ciclos e o tempo de estabilização pré- A solução comercial apresenta os resultados ao usuário na
procedimento, em segundos (s). Tendo como base estes forma de gráfico de tensão x corrente (Fig. 12), e para realizar
parâmetros, foi planejado fluxograma da Fig. 11. da análise dos resultados da voltametria, é preciso verificar em
que valores de tensão ocorrem os picos de corrente.
As configurações em ambas análises foram as mesmas,
com tensão mínima de -550mV, máxima de +150mV,
velocidade de varredura de 50mV/s, 2 ciclos completos, e 5
segundos de estabilização.

Fig. 12. Medida voltamétrica de Ferrocianeto de Potássio utilizando

Fig. 11. Fluxograma de Comunicação PGSTAT101.

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encontrada comercialmente. Para alcançar o objetivo de baixo-
custo, algumas renuncias foram feitas, como a precisão em
que o instrumento trabalha e funcionalidades extras, mas que
para o objetivo e o tipo de análise buscado, são mais que
suficientes e apresentam resultados compatíveis com os
observados em um aparelho profissional.
Sendo assim, o projeto teve sucesso em alcançar seu
objetivo e contribuiu para o desenvolvimento de um modulo
potenciostato baixo-custo, leve e portátil, útil portanto à
pesquisa na área da química e bioquímica com a análise de
substancias a partir da voltametria cíclica.
AGRADECIMENTOS

Fig. 13. Medida voltamétrica de Ferrocianeto de Potássio utilizando o Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e
potenciostato desenvolvido Tecnológico (CNPq) pelo financiamento da pesquisa com o
apoio de bolsa PIBIC/CNPq. À Pontifícia Universidade
Católica de Campinas pelo financiamento da pesquisa com o
Nas medidas realizadas com o protótipo do potenciostato
apoio de bolsa de Iniciação Científica FAPIC/Reitoria.
em desenvolvimento, buscou-se apresentar o mesmo tipo de
resultado do aparelho comercial. Os dados capturados foram
importados como tabela em formato texto para a ferramenta
Microsoft Excel e, assim, foi possível visualizar as medidas REFERÊNCIAS
na forma de um gráfico (Fig. 13). [1] R. K. Mendes, “Determination of Chlorophenol in Environmental
Samples Using a Voltammetric Biosensor Based on Hybrid
Observando-se a Fig. 12, os valores de tensão onde Nanocomposite”, J. Braz. Chem. Soc., Vol. 28, No. 7, pp. 1212-1219,
ocorrem os picos de corrente da substância analisada 2017.
(Ferrocianeto de Potássio) valem -0,3mV e +0,1mV com [2] A. Baraket et al., “A fully integrated electrochemical biosensor
valores de corrente de -160mA e +115mA, respectivamente. platform fabrication process for cytokines detection”, Biosensors
Comparando-se os mesmos pontos de interesse na Fig. 13, é é and Bioelectronics , 2016.
possível notar um pequeno desvio horizontal nos valores de http://dx.doi.org/10.1016/j.bios.2016.09.023
tensão, fato cuja causa ainda não foi investigada. [3] B. Derkus, “ Applying the miniaturization Technologies for biosensor
design”, Biosensors and Bioelectronics, 2016,
Comparando-se o potenciostato profissional e o https://doi.org/10.1016/j.bios.2016.01.033
equipamento desenvolvido neste projeto, pode-se notar uma [4] R. Pruna et al., “A low-cost and miniaturized potentiostat for sensing of
grande semelhança nas curvas voltamétricas, pois os valores biomolecular species such as TNF-α by electrochemical impedance
spectroscopy”, Biosensors and Bioelectronics, 2018,
de tensão onde se encontram os picos de corrente são https://doi.org/10.1016/j.bios.2017.09.049
aproximadamente equivalentes, mostrando que o projeto [5] I. Ramfos et al., “A compact hybrid-multiplexed potentiostat for real-
desenvolvido neste trabalho conseguiu alcançar seus objetivos. time electrochemical biosensing applications”, Biosensors and
Bioelectronics, 2013, https://doi.org/10.1016/j.bios.2013.03.068
V. CONCLUSÕES [6] T. Dobbelaere, P. M. Vereecken abd C. A. Detavernier, “A USB-
Neste trabalho, foi desenvolvido um potenciostato de controlled potentiostat/galvanostat for thin-film battery
baixo-custo, baseado no trabalho de Dobbelaere [6] e que foi characterization”, HardwareX, Elsevier, 2017,
https://doi.org/10.1016/j.ohx.2017.08.001
objeto de desenvolvimento por meio de módulos eletrônicos e
[7] M. D. M. Dryden and A. R. Wheeler, “DStat: a versatile, open-source
produção de um software capaz de realizar o procedimento de potentiostat for electranalysis and integration”, PLOS One,
voltametria cíclica. O custo do projeto pode chegar a ser cem http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0
vezes mais barato que as soluções comerciais, o que pode 140349 Acessado em 10 de setembro de 2019.
ajudar pesquisas de menor porte que não fazem o uso [8] Arduino. capturado on-line em 01/08/ 2019 de https://www.arduino.cc/
completo das funcionalidades de um potenciostato [9] ICL 7660, capturado on-line em 01/08/2019 de
profissional. https://datasheets.maximintegrated.com/en/ds/ICL766
[10] Python Tutorial, capturado on-line em 01/08/2019
Os módulos foram devidamente criados e adaptados para o https://www.w3schools.com/python/default.asp
proposito aplicado, dando ao aparelho produzido capacidade [11] Autolab PGSTAT101. Disponível em: https://www.metrohm.com/pt-
de realizar testes no modo potenciostato conforme a solução br/produtos-geral/eletroquimica/autolab-linha-compacta/PGSTAT101

ISSN 2447-8326. V.1 © 2019 BTSYM