Relatório de Aminoácidos (Bioquimica) Caracterização Da Enzima Urease

1 INTRODUÇÃO
As proteinas são polímeras macromoléculas cujas unidades básicas
são os aminoácidos. As suas moléculas contem carbono, hidrogênio, oxigênio,
nitrogênio, e geralmente também enxofre. As proteínas, em sua maioria, tem uma
posição elmentar muito semelhante.
A unidade estrutural básica das proteínas é o aminoácido,como se
pode demostrar facilmente pela hidrólise química ou enzimática de protínas
purificadas.
O indicador universal de pH é o papel tornasol, esse método é feito
através do papel tornasol vermelho ou azul, esse tipo de papel ao entrar em contato
com uma determinada soluçao muda de cor. O papel tornassol azul em presença de
uma solução ácida muda da cor azul para a vermelha. Isso ocorre porque os íons
reagem mudando o arranjo dos átomos. O papel tornassol vermelho em contato com
uma base muda da cor vermelha para a azul.
5.METODOLOGIA
5.1 MATERIAIS
Foram utilizadas vidrarias e reagentes disponíveis no laboratório
para a execução das experiências segundo o que segue.
5.1.1 Reação de Biureto
Foram utilizados dois tubos de ensaio, cada um com uma solução

diferente, contendo urease em 1,e apenas água destilada no “branco”. Foram
adicionadas, também, 5 gotas de solução 2,5 N de Hidróxido de Sódio em cada e,
também, mais 5 gotas de Sulfato de Cobre 1% para cada tubo.
5.1.2 Atividade da enzima urease
Nesta experiência foram utilizados, também, dois tubos de ensaio,

contendo cada um 3 gotas de uréase e 1 gota de vermelho de fenol, em 1ml de uréia
1% em 1, 1ml de água destilada no tubo de “controle”.
5.1.3 Reação de Heller
Para esta técnica foi utilizado somente um tubo de ensaio. No tubo

foi adicionado10 gotas de solução de urease, 1ml de água destilada, e na capela
acrecentou-se 1ml de ácido nitrico
5.1.4 Desnaturação pelo calor
Utilizou-se apenas um tubo de ensaio contendo 1 ml de água

destilada, 5 gotas de solução urease após ferver por 2 minutos, foi adicionado 1ml
de uréia e 1 gota de vermelho de fenol.
5.1.6 Inibição por metais pesados
Em um tubo com 1 ml água destilada, 5 gotas de solução de uréase,

3 gotas de Cloreto de Mercúrio, foi adicionado 1ml de solução de uréia 1% mais uma
gota de vermelho de fenol.
5.1.7 especificidade da uréase
Foi utilizado dois tubos de ensaios, com 5 gotas de uréase e 1 gota de

vermelho de fenol em cada, com 1ml de uréia1% em 1 e 1ml de tiouréia 1%
em 2.
3.2 MÉTODOS
Acompanhando as instruções da apostila prática os procedimentos

foram os seguintes.
5.2.1 Reação de Biureto
Conforme o item 5.1.1 os reagentes foram adicionados e os tubos

agitados até a observação da dissolução da mistura.
5.2.2 Atividade da enzima uréase
Os reagentes do item 5.1.2 foram adicionados e misturados

5.2.3 Reação de Heller
Nesta experiência todos os reagentes citados em 5.1.3 foram

adiconados aos respectivos tubos de ensaio, sendo que o Ácido Nitrico foi
adicionado na capela, até a formação de duas fases.
5.2.4 Desnaturação pelo calor
Foi adicionado a água destilada e a solução de uréase, somente depois

da mistura ser fervida por dois minutos foi adicionado a uréia e o
vermelho de fenol.
5.2.5 Inibição por metais pesados
Os reagentes foram adicionados e agitados.
5.2.6 Especificidade da uréase
Os reagentes foram adicionados e agitados.
6 RESULTADOS E DISCUSSÕES
6.1 REAÇÃO DE BIURETO

Este método é especifico para peptídeos e proteínas que possuam
duas ou mais ligações peptídicas. O íon cúprico, da solução CuSO 4, se junta com os
grupos -NH formando em meio alcalino, um complexo de cor violeta.
Observou-se a cor violeta esperada, somente no tubo 1 , enquanto

que, no tubo “branco” houve a formação da cor azul. Isto permite concluir que a
uréase é um peptídeo com duas ou mais ligações peptidicas.
6.2 Atividade da enzima uréase
Esse método há formação do Carbonato de amônio com o vermelho
de fenol. No tubo 1 verificou-se uma coloração rosa enquanto o tubo 2 apresentou
uma coloraçao amarela, concluindo que a uréia é uma enzima.
6.3 Reação de Heller
Esta reação baseia-se na precipitação de proteínas desnaturadas

por ácido forte.
Ao adicionar Ácido Nítrico observou-se a formação de 2 fases,
branco e incolor, indicando a desnaturação e precipitação da proteína uréase.
6.4 Desnaturação pelo calor
Identificação da perda de atividade de uma proteína.

A solução adquiriu uma coloração amarela, indicando a
desnaturação da proteína uréase em contato com o calor.
6.5 Inibição por metais pesados
Metais pesados (Pb+, Hg+, Ag+) são poderosos inibidores

enzimáticos.
Como houve a complexação da enzima com o mercúrio, a enzima
ficou inibida e não reagiu com a uréia.
A Solução adiquiriu coloração amarela, concluindo a desnaturação
da enzima uréase.
6.6 Especificidade da uréase
No tubo 1 que continha uréia a coloração foi rosea (solução
basica) o que indica que a enzima reagiu com a proteína, já no tubo 2 que continha
tiouréia a solução ficou amarela indicando ácidez o que quer dizer que a enzima é
específica pra um só substrato e que não reage com outros.
REFERÊNCIAS
CONN, Eric; STUMPF, Paul. Introdução à bioquímica. 4° Edição. São Paulo:
Edgard Bluncher Ltda. 1990

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As proteinas são polímeras macromoléculas cujas unidades básicas

são os aminoácidos. As suas moléculas contem carbono, hidrogênio, oxigênio,

nitrogênio, e geralmente também enxofre. As proteínas, em sua maioria, tem uma

posição elmentar muito semelhante.

A unidade estrutural básica das proteínas é o aminoácido,como se

pode demostrar facilmente pela hidrólise química ou enzimática de protínas

O indicador universal de pH é o papel tornasol, esse método é feito

uma base muda da cor vermelha para a azul.

5.1.1 Reação de Biureto

Foram utilizados dois tubos de ensaio, cada um com uma solução

5.1.2 Atividade da enzima urease

Nesta experiência foram utilizados, também, dois tubos de ensaio,

5.1.3 Reação de Heller

Para esta técnica foi utilizado somente um tubo de ensaio. No tubo

5.1.4 Desnaturação pelo calor

Utilizou-se apenas um tubo de ensaio contendo 1 ml de água

Em um tubo com 1 ml água destilada, 5 gotas de solução de uréase,

5.1.7 especificidade da uréase

Foi utilizado dois tubos de ensaios, com 5 gotas de uréase e 1 gota de

Acompanhando as instruções da apostila prática os procedimentos

5.2.1 Reação de Biureto

Conforme o item 5.1.1 os reagentes foram adicionados e os tubos

5.2.2 Atividade da enzima uréase

Os reagentes do item 5.1.2 foram adicionados e misturados

Nesta experiência todos os reagentes citados em 5.1.3 foram

5.2.4 Desnaturação pelo calor

Foi adicionado a água destilada e a solução de uréase, somente depois

5.2.5 Inibição por metais pesados

Os reagentes foram adicionados e agitados.

5.2.6 Especificidade da uréase

Os reagentes foram adicionados e agitados.

6.1 REAÇÃO DE BIURETO

grupos -NH formando em meio alcalino, um complexo de cor violeta.

Observou-se a cor violeta esperada, somente no tubo 1 , enquanto

6.2 Atividade da enzima uréase

Esse método há formação do Carbonato de amônio com o vermelho

de fenol. No tubo 1 verificou-se uma coloração rosa enquanto o tubo 2 apresentou

uma coloraçao amarela, concluindo que a uréia é uma enzima.

6.3 Reação de Heller

Esta reação baseia-se na precipitação de proteínas desnaturadas

6.4 Desnaturação pelo calor

Identificação da perda de atividade de uma proteína.

Metais pesados (Pb+, Hg+, Ag+) são poderosos inibidores

ficou inibida e não reagiu com a uréia.

A Solução adiquiriu coloração amarela, concluindo a desnaturação

6.6 Especificidade da uréase

No tubo 1 que continha uréia a coloração foi rosea (solução

específica pra um só substrato e que não reage com outros.

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