Ecologia Química de Abelhas Brasileiras

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I

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS


INSTITUTO DE QUÍMICA

ECOLOGIA QUÍMICA DE ABELHAS BRASILEIRAS:


Melipona rufiventris, Melipona scutellaris, Plebeia
droryana, Nannotrigona testaceicornis, Tetragonisca
angustula e Centris trigonoides.

ADRIANA PIANARO

Dissertação de Mestrado

Orientadora:
Profa. Dra. Anita Jocelyne Marsaioli

Campinas - São Paulo


Fevereiro/2007
II
V

DEDICATÓRIA:

Aos meus pais, Alceu e Malta;


As minhas irmãs, Valéria e Priscila;
Ao meu namorado, Armando Mateus;
E ao casal Armando e Shirley e sua filha Juliana.
VII

AGRADECIMENTOS

Primeiramente, eu gostaria de agradecer a Deus, por ter dado forças e iluminado


meu caminho durante todos estes anos de vida.
Aos meus queridos pais Alceu e Malta, pelo carinho, amor e compreensão
dedicados a mim. As minhas irmãs Valéria e Priscila, pelo amor e pela amizade.
Ao meu namorado Armando Mateus, por ser esta pessoa maravilhosa e
companheira. Aos seus pais Shirley e Armando e sua irmã Juliana, pelo carinho e pela
amizade.
A Profa. Dra. Anita Jocelyne Marsaioli, minha orientadora, pela amizade, confiança
e orientação durante o desenvolvimento deste trabalho.
Aos meus colaboradores, Prof. Dr. Paulo Nogueira Neto, Profa. Dra. Eda Flávia L.
R. A. Patricio, Profa. Dra. Adriana Flach, Profa. Dra. Mariza G. Reis, Prof. Dr. Rodrigo B.
Singer, Prof. Dr. Gabriel A. R. Melo, Prof. Dr. Warwick E. Kerr e ao aluno Cristiano
Menezes, pela amizade e pela importante contribuição oferecida para este trabalho resultar
em uma dissertação de mestrado.
Aos meus colegas de grupo de pesquisa: Simone, Georgiana, Cabeça, Isis, Luciana,
Lu Chen, Lucimar, Eduardo, Carla, Marcela, Diego e Suzan, pela amizade e o
companheirismo durante estes anos. Agradeço aos meus colegas que já são professores em
universidades: Dr. Sérgio Fernandes, Dr. Luiz Antônio, Dr. Fernando e os demais já citados
como colaboradores, pela amizade e apoio.
Aos colegas de outros grupos de pesquisa: Marinaldo, Alessandra, Adriano, Cíntia,
Umberto, Renan, Sérgio, Inês, Mary Ângela, Liliane, Mayra e Regina, pela amizade e ajuda
nestes anos de mestrado, muito obrigada por tudo.
A Dona Maria, técnica do laboratório, pela amizade e pela ajuda com os reagentes e
solventes destilados e bidestilados.
Ao Instituto de Química, principalmente os professores e os funcionários que
contribuíram em minha aprendizagem no mestrado. Agradeço especialmente aos
funcionários: Sônia (RMN), Soninha (RMN), Paula (RMN); Pimpim (setor de gases), Rute
VIII

(técnica de laboratório), Everaldo (impressão de painéis), Bel (CPG), Seu Fontana e


Cláudio (vidraria). E principalmente aos professores: Dra. Eva Magalhães, Dr. Aderbal
Magalhães, Dr. Sebastião F. Fonseca, Dr. Paulo M. Imamura, Dr. Roberto Rittner Neto,
Dra. Lúcia Helena B. Baptistella, Dr. José A. Fracassi da Silva, Dra. Isabel C. S. F. Jardim,
Dra. Carla B. G. Bottoli e Dra. Carol H. Collins (pelas revisões de artigos). Agradeço a
Profa. Dra. Maria do Carmo E. do Amaral (IB-UNICAMP) por aceitar o convite de
participação da minha banca de defesa de mestrado e aos demais membros já citados.
Aos meus professores do departamento de química da Universidade Estadual de
Londrina (UEL). Agradeço principalmente aos professores: Dra. Dalva T. Ferreira, Dr.
Milton Faccione, Dr. César C. Andrei, Dra. Terezinha J. Faria e Dr. Dílson N. Ishikawa,
pela amizade e apoio.
Agradeço à FAPESP (processo n° 03/09358-3) por ter concedido a bolsa de
mestrado e pelo auxílio financeiro ao projeto.
E a todos que de uma forma ou de outra contribuíram para minha formação
profissional e pessoal nestes anos de minha vida. MUITO OBRIGADA!!!!
IX

Curriculum Vitae
1. Dados pessoais

Nome: Adriana Pianaro; Data de Nascimento: 26/07/1981; Cidade: Campina da Lagoa – Estado do
Paraná; Nacionalidade: Brasileira; Filiação: Alceu Pianaro e Malta Amália de Oliveira Pianaro;
Estado Civil: Solteira; RG: 7674617-6 – SESPPR; Endereço: Rua Darci Miranda, 314. Centro. CEP
87345-000, Campina da Lagoa - Paraná; E-mail: [email protected]

2. Formação Acadêmica

2.1. Graduação em Química (bacharelado). Universidade Estadual de Londrina - UEL, Londrina /PR –
Brasil (2000-2004). Título da monografia: Constituintes Químicos das Cascas das Raízes de
Spathodea campanulata P. Beauv. (Bignoniaceae). Orientadora: Profa. Dra. Dalva Trevisan Ferreira.
Bolsista do: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico.
2.2. Mestrado em Química Orgânica. Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP, Campinas/SP –
Brasil (2004-2007). Título da dissertação: Ecologia Química de Abelhas Brasileiras: Melipona
rufiventris, Melipona scutellaris, Plebeia droryana, Nannotrigona testaceicornis, Tetragonisca
angustula e Centris trigonoides. Orientadora: Profa. Dra. Anita Jocelyne Marsaioli. Bolsista da:
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (N° Processo: 03/09358-3).

3. Trabalhos apresentados em eventos

3.1. PIANARO, A.; Reis, M. G.; MARSAIOLI, A. J. Caracterização química do óleo floral de
Lophanthera lactescens Ducke (Malpighiaceae) e sua importância na atração de polinizadores. Livro
de resumos e on-line: https://sec.sbq.org.br/servicos/buscatrabalho.asp Período: 19 a 22 de maio de
2006. In: 29a. Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química. Local: Águas de Lindóia - SP.
Trabalho apresentado na forma de painel (PN-060).
3.2. PIANARO, A.; SINGER, R. B.; MENEZES, C.; MARSAIOLI, A. J. Estudo químico de operárias e
machos de Nannotrigona testaceicornis e Plebeia droryana (Apidae: Meliponinae). Livro de
resumos e on-line: https://sec.sbq.org.br/servicos/buscatrabalho.asp Período: 19 a 22 de maio de
2006. In: 29a. Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química. Local: Águas de Lindóia – SP.
Trabalho apresentado na forma de painel (PN-303).
3.3. GIESE, S. O. K.; LORDELLO, A. L. L.; SCEZCZBOWSKI, D.; MELO, G. A. R.; PIANARO, A.
Estudo da composição química dos óleos florais de Byrsonima brachybotria (Malpighiaceae). Livro
de resumos e on-line: https://sec.sbq.org.br/servicos/buscatrabalho.asp Período: 19 a 22 de maio de
2006. In: 29a. Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química. Local: Águas de Lindóia – SP.
Trabalho apresentado na forma de painel (PN-229).
3.4. PIANARO, A.; FLACH, A.; PATRICIO, E. F. L. R. A.; NOGUEIRA-NETO, P.; MARSAIOLI, A.
J. Uma estratégia química dentro da associação temporária de Melipona rufiventris Lepeletier e
Melipona scutellaris Latreille (Apidae: Meliponinae). Livro de resumos. Período: 12 a 15 de julho de
2006. In: VII Encontro sobre Abelhas. Local: Hotel JP em Ribeirão Preto – SP. Trabalho
apresentado na forma de painel.
3.5. PIANARO, A.; MENEZES, C.; SINGER, R. B.; MARSAIOLI, A. J. Diferenciação química de
operárias e machos de Nannotrigona testaceicornis Lepeletier e Plebeia droryana Friese (Apidae:
Meliponinae). Livro de resumos. Período: 12 a 15 de julho de 2006. In: VII Encontro sobre Abelhas.
Local: Hotel JP em Ribeirão Preto – SP. Trabalho apresentado na forma de painel.
3.6. PIANARO, A.; FLACH, A.; MARSAIOLI, A. J.; PATRICIO, E. F. L. R. A. Estudo químico dos
batumes puro e misto de Melipona scutellaris Latreille (Apidae: Meliponinae). Livro de resumos.
Período: 29 de novembro a 02 de dezembro de 2005. In: IV Encontro Brasileiro de Ecologia
Química – EBEQ. Local: Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz – ESALQ, em Piracicaba
– SP. O trabalho foi apresentado oralmente em uma palestra por Adriana Pianaro.
X

3.7. SINGER, R. B.; MENEZES, C.; FLACH, A.; PIANARO, A.; MARSAIOLI, A. J. Pollination by
sexual mimicry in Maxillariinae orchids. Livro de resumos. Período: 24 a 28 de julho de 2005. In:
The Association for Tropical Biology and Conservation Meeting. Local: Universidade Federal de
Uberlândia - UFU, Uberlândia – MG. O trabalho foi apresentado oralmente em uma palestra por
Cristiano Menezes.
3.8. FERREIRA, D. T.; PINTO, J. P.; PIANARO, A.; BRAZ-FILHO, R. Substâncias antioxidantes e
atividade antifúngica de constituintes isolados das raízes de Spathodea campanulata. Livro de
resumos e on-line: https://sec.sbq.org.br/servicos/buscatrabalho.asp Período: 30 de maio a 02 de
junho de 2004.In: XXVI Congresso Latinoamericano de Química e 27a. Reunião Anual da
Sociedade Brasileira de Química. Local: Salvador – BA. Trabalho apresentado na forma de painel
(PN-079).
3.9. FERREIRA, D. T.; PIANARO, A.; SILVA, C. A. da; PINTO, J. P.; BRAZ-FILHO, R.; FARIA, T.
de J.; CECCHINI, R. O ajugol e o ácido 19-α-hidróxi ursólico isolados das raízes de Spathodea
campanulata. Livro de Resumos e on-line: https://sec.sbq.org.br/servicos/buscatrabalho.asp Período:
26 a 29 de maio de 2003. In: 26a. Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química. Local: Poços
de Caldas – MG. Trabalho apresentado na forma de painel (PN-138).
3.10. PIANARO, A.; FERREIRA, D. T.; BRAZ-FILHO, R.; CECCHINI, R. Ácido p-hidroxibenzóico
isolado das raízes (parte externa) de Spathodea campanulata. Livro de resumos. Período: 02 a 05 de
setembro de 2003. In: XII EAIC – Encontro Anual de Iniciação Científica. Local: Universidade
Estadual do Oeste do Paraná - UNIOESTE, Foz do Iguaçu – PR. Trabalho apresentado oralmente
por Adriana Pianaro.
3.11. PIANARO, A.; FERREIRA, D. T.; PINTO, J. P.; BRAZ-FILHO, R. Iridóide isolado das raízes
(parte externa) de Spathodea campanulata. Livro de resumos.
Período: 06 a 08 de novembro de 2002. In: X Encontro de Química da Região Sul. Local:
Universidade da Região de Joinville, em Joinville – SC. Trabalho apresentado na forma de painel.
3.12. PIANARO, A.; FERREIRA, D. T. Iridóide isolado das raízes (parte externa) de Spathodea
campanulata. Livro de resumos. Período: 01 a 04 de outubro de 2002. In: XI EAIC – Encontro
Anual de Iniciação Científica. Local: Universidade Estadual de Maringá – UEM, Maringá – PR.
Trabalho apresentado oralmente por Adriana Pianaro.

4. Artigos submetidos

4.1. PIANARO, A.; PINTO, J. P.; ISHIKAWA, N. K.; BRAZ-FILHO, R.; FERREIRA, D. T. An iridoid
glucoside and fungitoxic phenolic compounds from Spathodea campanulata root peels. Idioma:
Inglês. Semina: Ciências Agrárias, registro número 448/06.
4.2. PIANARO, A.; FLACH, A.; PATRICIO, E. F. L. R. A.; NOGUEIRA-NETO, P.; MARSAIOLI, A.
J. Chemical changes associated with the invasion of a Melipona scutellaris colony by Melipona
rufiventris workers (Apidae: Meliponinae). Idioma: Inglês. Journal of Chemical Ecology, registro
número JOEC892.

5. Monitoria

5.1. Extensão universitária, Instituto de Química, Universidade Estadual de Campinas – UNICAMP


(01/2006 a 02/2006). Participação na 4a. Edição do Programa "Ciência & Arte nas Férias",
promovida pela Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP, realizando atividades de
monitoria junto ao Projeto: "USO DE PARABENOS COMO CONTROLE POSITIVO EM
BIOENSAIOS ANTIFÚNGICOS". Orientação: Profa. Dra. Anita Jocelyne Marsaioli. Local: Bloco
A5, laboratório 103. Instituição Financiadora: Fundo de Apoio ao Ensino, à Pesquisa e à Extensão –
FAEPEX (Convênio N° 519.292, solicitação: 842/2005).

6. Estágios

6.1. Projeto: Constituintes antioxidantes das raízes de Spathodea campanulata (08/2002 a 07/2003).
Estágio remunerado (bolsa de iniciação científica PIBIC/CNPq/UEL), conforme Edital CPG –
XI

058/2002, realizado sob orientação da Profa. Dra. Dalva T. Ferreira. Área de atuação: Química
Orgânica - Produtos Naturais. Carga horária: 20 hrs/semana, totalizando 960 hrs. Local: Centro de
Ciências Exatas, Departamento de Química, Universidade Estadual de Londrina – UEL, Londrina –
PR.
6.2. Projeto: Constituintes antioxidantes das raízes de Spathodea campanulata (08/2001 a 07/2002).
Estágio remunerado (bolsa de iniciação científica CPG/UEL), conforme Edital CPG - 059/2001,
realizado sob orientação da Profa. Dra. Dalva T. Ferreira. Área de atuação: Química Orgânica -
Produtos Naturais. Carga horária: 20 hrs/semana, totalizando 880 hrs. Local: Centro de Ciências
Exatas, Departamento de Química, Universidade Estadual de Londrina – UEL, Londrina – PR.
6.3. Estágio voluntário junto ao Laboratório de Pesquisas em Moléculas Bioativas - CCE/UEL (02/2001
a 07/2001). Local: Centro de Ciências Exatas, Departamento de Química, Universidade Estadual de
Londrina – UEL, Londrina – PR. Área de atuação: Química Orgânica – Produtos Naturais. Carga
horária: 209 horas. Orientadora: Profa. Dra. Dalva T. Ferreira.
XIII

RESUMO

Ecologia Química de Abelhas Brasileiras: Melipona rufiventris, Melipona


scutellaris, Plebeia droryana, Nannotrigona testaceicornis, Tetragonisca
angustula e Centris trigonoides.

Adriana Pianaro
Profa. Dra. Anita Jocelyne Marsaioli

A vida social das abelhas é marcada pela presença de várias substâncias produzidas
por suas glândulas exócrinas e endócrinas ou coletadas na natureza. Estes compostos são
empregados principalmente por operárias, machos e rainha no reconhecimento de seus
companheiros de colônia, acasalamento, defesa do ninho e marcadores de percurso. Entre
as abelhas sociais brasileiras, as pertencentes à subfamília Meliponinae (Apoidea: Apidae)
são extremamente importantes para a flora nativa, pois contribuem com 40-90% da
polinização. Estas abelhas são denominadas meliponíneos ou abelhas indígenas sem ferrão,
distribuídas em mais de 300 espécies que vivem exclusivamente nas regiões tropicais e
subtropicais. Os meliponíneos vivem em colônias permanentes com divisões de castas
(operárias, machos e rainha) e, por isso, produzem uma gama de substâncias responsáveis
pelas divisões de tarefas e para manter a ordem dentro da colônia. Com a finalidade de
contribuir na descoberta dos compostos utilizados na comunicação das abelhas brasileiras,
este trabalho abordou três tópicos, revelando: 1) a “guerra” química desencadeada pela
Melipona scutellaris Latreille, 1811 (Apidae: Meliponinae) contra as operárias invasoras de
Melipona rufiventris Lepeletier, 1836 (Apidae: Meliponinae), sendo que as principais
armas químicas foram a alteração da composição da cera de M. scutellaris, com grande
produção de acetato de triacontanila, e a adição de terpenos e compostos fenólicos no
batume, o que provavelmente acabou tornando o ninho pouco confortável e expulsando as
operárias invasoras; 2) a diferenciação química das operárias e dos machos de
Nannotrigona testaceicornis Lepeletier, 1836 (Apidae: Meliponinae) é principalmente
relacionada a presença de acetato de geranil-geranila (operárias) e Z-9-nonacoseno
(machos) em seus abdomes, e em Plebeia droryana Friese, 1900 (Apidae: Meliponinae), o
XIV
tetradecanal (operárias) e um éster desconhecido (machos). As composições químicas das
cabeças também diferenciam machos e operárias de ambas espécies: os constituintes
principais nas operárias de P. doryana são α-copaeno, Ar-curcumeno, δ-cadineno, 1-cis-
calameneno e Z-9-octacoseno e nos machos de P. doryana são o 2-nonanol, dois ácidos
alifáticos lineares (C14 e C16) e o acetato de octadecanila. Os constituintes das cabeças dos
machos e das operárias de N. testaceicornis podem ser distinguidos pela presença de
nonanal, α-copaeno, pentadecano, dois Z-9-alcenos (C23 e C25) e octadecenoato de
hexadecenila (operárias). As ceras cuticulares das operárias de N. testaceicornis possuem
dois Z-9-alcenos (C25 e C28), enquanto que as dos machos possuíam o 2-fenil-tridecano. Em
P. droryana, as ceras cuticulares das operárias possuíam α-copaeno, Ar-curcumeno, 1-cis-
calameneno, geranil-linalol, esqualeno e acetato de nerolidol, enquanto o hentriacontano
está presente somente nos machos; e 3) a importância do óleo floral de Lophanthera
lactescens Ducke (Malpighiaceae) para as operárias de Tetragonisca angustula Latreille,
1811 (Apidae: Meliponinae) e fêmeas de Centris trigonoides Lepeletier, 1841
(Anthophoridae: Centridini), as quais utilizam o mesmo no ninho. A coleta do óleo floral
por estas abelhas foi confirmada analisando a parte externa dos abdomens das mesmas. O
óleo floral tem como componente principal o ácido 3-acetoxi-octadecanóico. Trata-se do
primeiro relato de coleta de óleos florais por operárias de Tetragonisca angustula. Estes
estudos revelaram alguns compostos que são responsáveis pelas relações entre castas,
espécies e planta/polinizador, mas muitas espécies de abelhas brasileiras ainda precisam ser
estudadas para uma melhor compreensão de suas relações complexas e suas comunicações
químicas.
XV

ABSTRACT

Chemical Ecology of Brazilian Bees: Melipona rufiventris, Melipona


scutellaris, Plebeia droryana, Nannotrigona testaceicornis, Tetragonisca
angustula e Centris trigonoides.

Adriana Pianaro
Profa. Dra. Anita Jocelyne Marsaioli

The social life of bees is marked for the presence of many substances produced by
their exocrine and endocrine glands or collected in the environment. These compounds are
employed mainly for queen, male, and worker bees in the recognition systems of colony
individuals, copulation, nest defense, and odor trail markers. Among the Brazilian social
bees, the subfamily Meliponinae (Apoidea: Apidae) is extremely important for native flora,
because the Meliponinae bees contribute with 40-90% of the pollinization. These bees are
known as meliponine bees or stingless native bees. There are more than 300 species
distributed exclusively in tropical and subtropical regions. The meliponine bees exist in
permanent colonies with divisions of castes (workers, males and queen) and, therefore, they
produce a great diversity of substances responsible for divisions of jobs to maintain the
colony organization. The aim of this work was to contribute in the discovery of the
compounds employed in chemical communication of Brazilian bees. Three main topics
were investigated and revealed: 1) the chemical "war" unchained by Melipona scutellaris
Latreille, 1811 (Apidae: Meliponinae) against the invader workers of Melipona rufiventris
Lepeletier, 1836 (Apidae: Meliponinae), then the main weapons are related with wax
composition alteration with large production of triacontanyl acetate by M. scutellaris. The
batumen composition was also altered with the addition of terpenes and phenolic
compounds that probably change the odor of M. scutellaris nest producing an
uncomfortable atmosphere which induces the invader workers departure; 2) the chemical
differentiation of workers and males Nannotrigona testaceicornis Lepeletier, 1836 (Apidae:
Meliponinae) is mainly related for geranyl-geranyl acetate (workers) and Z-9-nonacosene
(males) present in their abdomens, and in Plebeia droryana Friese, 1900 (Apidae:
Meliponinae), there is tetradecanal in workers’ abdomens and an unknown ester in the
XVI
males’ abdomens. The heads chemical compositions can also differentiate males and
workers in both species: the main constituents in P. droryana workers are α-copaene, Ar-
curcumene, δ-cadinene, 1-cis-calamenene, and Z-9-octacosene and in males are 2-nonanol,
two linear aliphatic acids (C14 and C16), and octadecanyl acetate. The heads of males and
workers N. testaceicornis can be distinguished by the presence of nonanal, α-copaene,
pentadecane, two Z-9-alkenes (C23 and C25), and hexadecenyl octadecenoate (workers). The
cuticular waxes of N. testaceicornis workers have two Z-9-alkenes (C25 and C28), and the
males have 2-phenyl-tridecane. In P. droryana, the cuticular waxes of workers have α-
copaene, Ar-curcumene, 1-cis-calamenene, geranyl-linalool, squalene, and nerolidol
acetate, while hentriacontane is present in the males waxes; and 3) the importance of
Lophanthera lactescens Ducke (Malpighiaceae) floral oil to Tetragonisca angustula
Latreille, 1811 (Apidae: Meliponinae) workers and Centris trigonoides Lepeletier, 1841
(Anthophoridae: Centridini) females, which is used in their nest construction. Confirmation
that these bees gather the floral oil was obtained by analyzing their abdomens (external
part), which revealed the presence of 3-acetoxy-octadecanoic acid, the main constituent of
floral oil. Floral oil gathering by Tetragonisca angustula workers was not previously
reported. We have thus revealed some compounds that are responsible for the relationships
among castes, species and plant/pollinator, but many other Brazilian bees should be studied
for a better understanding of their complex relationships and their chemical
communications.
XVII

ABREVIATURAS, SIGLAS E SÍMBOLOS


CC Cromatografia em Coluna
CCD Cromatografia em Camada Delgada
CDCl3 Clorofórmio Deuterado
CG Cromatografia Gasosa
CG-EM Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas
COSY Correlation Spectroscopy (correlação homonuclear de 1H, 1H a
múltiplas ligações)
d Dubleto
dinterno Diâmetro interno
dd Duplo Dubleto
DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer (incremento sem
distorção por transferência de polarização)
DMDS Dissulfeto de Dimetila
EM Espectrometria de Massas
EMAR Espectro de Massas de Alta Resolução
eV Elétron Volt
g Grama
h Altura
HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation (correlação heteronuclear de
1
H, 13C a múltiplas ligações)
HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence (correlação heteronuclear de
1
H, 13C a uma ligação)
Hz Hertz
IE Impacto Eletrônico
IR Índice de Retenção
IV Infravermelho
J Constante de Acoplamento
KBr Brometo de Potássio
m Multipleto
M+. Íon Molecular
MHz Mega Hertz
ml Mililitro (10-3 litro)
min Minuto
m/z Relação massa/carga
ppm Parte por milhão
quint Quinteto
RMN Ressonância Magnética Nuclear
s Singleto
t Tripleto
TMS Tetrametilsilano
tR Tempo de Retenção
XVIII

UEC Herbário da Universidade Estadual de Campinas


µl Microlitro (10-6 litro)
δ Deslocamento Químico (em partes por milhão, ppm)
XIX

ÍNDICE GERAL
1. INTRODUÇÃO GERAL 01
1.1. Comunicação química 03
1.2. As abelhas brasileiras 04
1.3. Meliponíneos 13
2. OBJETIVOS 33

CAPÍTULO 1 – Mudanças Químicas Associadas com a Invasão de uma Colônia de 39


Melipona scutellaris Latreille, 1811, por operárias de Melipona rufiventris Lepeletier,
1836 (Apidae: Meliponinae)
3. Introdução 41
3.1. Resultados e discussão 44
3.2. Conclusões parciais 51

CAPÍTULO 2 – Diferenciação Química de Operárias e Machos de Nannotrigona 53


testaceicornis Lepeletier, 1836, e Plebeia droryana Friese, 1900 (Apidae: Meliponinae)
4. Introdução 55
4.1. Resultados e discussão 56
4.2. Conclusões parciais 65

CAPÍTULO 3 – Determinação do Componente Principal do Óleo Floral de Lophanthera 67


lactescens Ducke (Malpighiaceae) e Verificação Química da Coleta de seu Óleo Floral
por Tetragonisca angustula Latreille, 1811 (Apidae: Meliponinae) e Centris trigonoides
Lepeletier, 1841 (Anthophoridae: Centridini)
5. Introdução 69
5.1. Resultados e discussão 70
5.2. Conclusões parciais 79

6. CONCLUSÕES FINAIS 81
7. PARTE EXPERIMENTAL 85
7.1. Equipamentos e métodos 87
7.2. Solventes, reagentes e materiais 90
7.3. Solução de p-anisaldeído 5% 92
7.4. Padrão de n-alcanos 92
7.5. Índices de retenção 92
7.6. Derivatização com DMDS/I2 93
7.7. Preparação de diazometano 93
7.8. Metodologia de análise de batumes 95
7.9. Obtenção de extratos de operárias e machos de Nannotrigona testaceicornis e 96
Plebeia droryana
7.10. Obtenção do óleo floral de Lophanthera lactescens 98
7.11. Extratos das abelhas de Lophanthera lactescens 99
8. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 101
9. ANEXOS 113
XXI

ÍNDICE DE TABELAS
Tabela 1. Classes de compostos identificados nas glândulas de Dufour de abelhas. 12

Tabela 2. Abundâncias relativas dos constituintes das ceras abdominais das 43


operárias de Melipona scutellaris e Melipona rufiventris das colônias puras e da
colônia invadida.

Tabela 3. Compostos identificados nas frações dos batumes da colônia pura de 45


Melipona scutellaris 1, da colônia pura de Melipona rufiventris 2 e da colônia
invadida de Melipona scutellaris 3.

Tabela 4. Frações químicas das amostras de batumes obtidas da colônia pura de 49


Melipona scutellaris 1, da colônia pura de Melipona rufiventris 2 e da colônia
invadida de Melipona scutellaris 3.

Tabela 5. Composição química dos extratos de operárias e machos de 57


Nannotrigona testaceicornis.

Tabela 6. Composição química dos extratos de operárias e machos de Plebeia 58


droryana.

Tabela 7. Dados espectrais de RMN de 1H e de 13C para o acetato de geranil- 64


geranila (499,88 e 125,69 MHz, respectivamente), em comparação com a literatura.

Tabela 8. Dados espectrais de RMN de 1H e de 13C para o 3-acetoxi-octadecanoato 74


de metila (1) (499,88 e 125,69 MHz, respectivamente), com auxílio de técnicas
bidimensionais (gHSQC H1,C13 (1J); gHMBC H1,C13 (nJ); gCOSY H1,H1 e DEPT
135° e 90°).

Tabela 9. Pesos dos extratos de machos e operárias de Plebeia droryana e 98


Nannotrigona testaceicornis.
XXIII

ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Uma pequena amostra da diversidade de abelhas nativas do Brasil (2x). 05

Figura 2. a) Entradas de ninhos de Tetrapedia sp. em um tronco, em destaque; b) 06


entradas de ninhos de Tetrapedia sp. em buracos feitos em uma caixa de madeira; e
c) interior de uma trapa de Tetrapedia sp., três larvas em destaque.

Figura 3. a) Entradas de ninhos de Monoeca xanthopyga Harter-Marques, Cunha 07


and Moure, 2001, formando uma aglomeração; e b) corte em célula de cria de
Monoeca xanthopyga, em destaque, larva alimentando-se de pólen.

Figura 4. Foto de uma operária de Apis mellifera ssp. em uma folha. 08

Figura 5. Anatomia interna de uma abelha operária de Apis mellifera ssp. (Apidae: 08
Apinae).

Figura 6. As principais partes do corpo de uma operária de meliponíneo (Melipona 14


compressipes Schwarz, 1932), em destaque, a corbícula.

Figura 7. Morfologia das espécies de abelhas da tribo Meliponini. 15

Figura 8. Morfologia das espécies de abelhas da tribo Trigonini. 15

Figura 9. Localização de algumas espécies de meliponíneos no Brasil. 16

Figura 10. Rainhas de meliponíneos nos favos de cria de suas colônias: a) rainha 17
fisogástrica de Melipona quadrifasciata Lepeletier, 1836; b) oviposição de rainha
fisogástrica de Melipona rufiventris Lepeletier, 1836; c) rainha fisogástrica de
Plebeia remota Holmberg, 1903; d) rainha fisogástrica de Tetragonisca angustula
Latreille, 1811; e) rainha fisogástrica de Schwarziana quadripunctata Lepeletier,
1836; e f) duas rainhas fisogástricas de Melipona bicolor Lepeletier, 1836,
depositando ovos nas células de cria.

Figura 11. Entrada de um ninho de Melipona fuliginosa Lepeletier, 1836 (Apidae: 24


Meliponinae), onde podemos verificar, segundo Garcia et al. (1992), a presença de
sementes e resinas vermelhas dos frutos de Coussapoa asperifolia magnifolia
(Cecropiaceae).

Figura 12. a) Esquema de um ninho de meliponíneo; e b) favos de cria em forma 24


horizontal de Melipona bicolor Lepeletier, 1836 (Apidae: Meliponinae).

Figura 13. Favos de cria de meliponíneos: a) favos de cria em forma de cachos de 25


Frieseomellita silvestrii Friese, 1902; b) favos de cria irregulares de Friesella
XXIV

schrottkyi Friese, 1900; e c) favos de cria em forma de espiral de Plebeia remota


Holmberg, 1903.

Figura 14. Entradas de ninhos de algumas espécies de meliponíneos. Obs.: a 26


palavra em negrito é o nome popular e a palavra em itálico entre parênteses é o
nome científico.

Figura 15. a) Androceu de uma flor com grãos de pólen, em destaque. Obs.: 27
androceu: conjunto de órgãos reprodutores masculinos de uma flor, com a função
de produzir grãos de pólen; e b) abelha campeira de meliponíneo transportando a
massa de pólen, em forma de bolinha, em uma tíbia traseira.

Figura 16. Os dois tipos de elaióforos: a) elaióforos epiteliais na parte de baixo da 29


base de uma flor de Callaeum macropterum (Malpighiaceae); b) elaióforos em
tricomas nas pétalas (parte interna) e no androceu de uma flor de Lysimachia
quadrifolia (Primulaceae); e c) foto ampliada dos elaióforos em tricomas.

Figura 17. a) Uma operária de Rediviva emdeorum Vogel and Michener, 1985 30
(Melittidae: Melittinae) que tem as pernas dianteiras modificadas para coletar óleo
floral; e b) representação da coleta de óleo floral de uma operária de Rediviva
longimanus Michener, 1981 (Melittidae: Melittinae) em uma flor de Diascia
longicornis (Scrophulariaceae).

Figura 18. Espectro de massas do derivado DMDS do 9,21-hentriacontadieno. 59

Figura 19. a) Cromatograma de íons do extrato dos abdomes das operárias de N. 63


testaceicornis (colônia 1 + colônia 2); e b) espectro de massas do acetato de
geranil-geranila.

Figura 20. Espectros de massas: a) éster desconhecido do extrato dos abdomes de 65


machos de P. droryana; e b) (7Z, 10Z, 13Z)-hexadecatrienoato de metila, obtido da
base de dados Wiley 275 do Espectrômetro de Massas.

Figura 21. a) Árvores de Lophanthera lactescens no estacionamento do 69


Almoxarifado Central da UNICAMP; b) Folhas e flores de L. lactescens, em
destaque. Fotos: Adriana Pianaro.

Figura 22. Espectro de absorção no infravermelho do óleo floral bruto de L. 71


lactescens (filme sobre placas de NaCl).
13
Figura 23. Espectro de RMN de C do óleo floral bruto de L. lactescens (75,45 71
MHz, CDCl3, TMS).

Figura 24. Cromatograma de íons do óleo floral metilado de L. lactescens. Em 72


destaque, a substância (1) - componente principal.
XXV

Figura 25. a) Cromatograma de íons da fração LL 7-8, série de 3-acetoxi ésteres 73


metílicos, em destaque a substância (1); b) a e) espectros de massas dos
componentes da fração LL 7-8, em ordem crescente.

Figura 26. a) Operária de T. angustula coletando óleo floral de L. lactescens; b) 76


fêmea de C. trigonoides coletando óleo floral e polinizando uma flor de L.
lactescens; c) muro do Almoxarifado Central da UNICAMP com ninho de T.
angustula; d) entrada do ninho de T. angustula, em destaque; e) operária de T.
angustula (vista lateral); e f) fêmea de C. trigonoides, vista lateral. Fotos: Adriana
Pianaro.

Figura 27. Cromatogramas de íons: a) extrato metilado das operárias de T. 78


angustula, b) co-injeção do extrato metilado das operárias de T. angustula com o
3-acetoxi-octadecanoato de metila (1), c) extrato metilado das fêmeas de C.
trigonoides e d) co-injeção do extrato metilado das fêmeas de C. trigonoides com o
3-acetoxi-octadecanoato de metila (1).

Figura 28. Reação de p-tolilsulfonilmetilnitrosamida com hidróxido de potássio 95


para obtenção de diazometano.

Figura 29. Metilação de um ácido carboxílico com diazometano. 95

Figura 30. Elaióforos epiteliais de uma flor de L. lactescens. Foto: Adriana 98


Pianaro.
XXVII

ÍNDICE DE ESQUEMAS

Esquema 1. a) Mecanismo geral da reação do DMDS/I2 com um alceno; b) 48


representação da clivagem da ligação carbono-carbono entre os CH3S do derivado
DMDS de um alceno fornecendo fragmentos majoritários [A]+ e [B]+.

Esquema 2. a) Estruturas dos derivados DMDS de moléculas contendo um sistema 59


dieno, as quais dependem do número de grupos metilenos localizados entre as
duplas ligações; e b) fragmentações do derivado cíclico de DMDS do 9,21-
hentriacontadieno, o qual não é formado na reação.

Esquema 3. Algumas das principais fragmentações do acetato de geranil-geranila. 64


INTRODUÇÃO GERAL

INTRODUÇÃO GERAL

1
INTRODUÇÃO GERAL

1. Introdução Geral.

1.1. Comunicação química.

Além dos sinais sonoros, visuais e do estímulo do tato, os organismos


vivos utilizam substâncias químicas para transmitir informações. Estas
substâncias sinalizadoras são denominadas de semioquímicos e, dependendo
do seu modo de ação, podem ser classificadas em feromônios
(intraespecíficos) e aleloquímicos (interespecíficos). Os feromônios são
biomoléculas empregadas na comunicação entre indivíduos dentro da mesma
espécie, enquanto os aleloquímicos são biomoléculas que mediam a
comunicação entre indivíduos de espécies diferentes. Os aleloquímicos estão
subdivididos em três subgrupos: “cairomônios” (beneficiam o receptor),
“alomônios” (beneficiam o emissor) e “sinomônios” (beneficiam ambos,
receptor e emissor).1, 2
Todos os estudos que envolvem semioquímicos fazem parte da área de
Ecologia Química, a qual tem sido definida como a promoção de um
entendimento ecológico da origem, da função e do significado das substâncias
químicas naturais que mediam as interações entre os organismos vivos. Um
dos maiores acontecimentos no desenvolvimento da ecologia química foi a
descoberta de feromônios de insetos que exercem efeitos comportamentais
profundos em quantidades traços (aproximadamente 1 µg ou menos). 3
O emprego da comunicação química por insetos sociais tem alcançado
uma forma avançada e sofisticada, pois eles são favorecidos com glândulas

1
FRANCKE, W.; SCHULZ, S. 1999. In: BARTON, D.; NAKANISHI, K. Comprehensive Natural Products Chemistry -
Pheromones. Vol. 8. Oxford: Ed. Pergmon, p. 197-261.
2
MORI, K. 1998. Semiochemicals - synthesis, stereochemistry, and bioactivity. European Journal of Organic Chemistry, 1479-1489.
3
HARBORNE, J. B. 2001. Twenty-five years of chemical ecology. Natural Product Reports, 18, 361-379.

3
INTRODUÇÃO GERAL

exócrinas# que produzem uma grande quantidade de compostos, de uma tal


forma que muitos aspectos de seu comportamento social são mediados por
substâncias químicas (feromônios). 4
Entre os vários insetos sociais, as abelhas se destacam devido a grande
quantidade de espécies e por sua importância na polinização entomófila*, pois
de um terço da produção mundial de sementes que depende da visita de
animais, as abelhas são responsáveis por 38% da polinização.5

1.2. As abelhas brasileiras.

As abelhas fazem parte da ordem Hymenoptera e estão reunidas na


superfamília Apoidea, a qual é constituída por onze famílias (Colletidae,
Stenotritidae, Oxaeidae, Halictidae, Andrenidae, Melittidae, Ctenoplectridae,
Fideliidae, Megachilidae, Anthophoridae, Apidae). Não se sabe exatamente
quantas espécies de abelhas existem hoje, estima-se que 20.000 espécies de
abelhas estão guardadas em museus, entretanto este número parece ser muito
maior se for levada em consideração a quantidade de novas espécies
identificadas nos últimos anos. 6, 7
O Brasil é considerado privilegiado devido a suas proporções
continentais e riquezas de ecossistemas, pois abriga cerca de ¼ das espécies de
abelhas existentes (aproximadamente 5.000 espécies). Só no estado de São

#
Glândulas exócrinas: glândulas onde estão presentes porções não secretoras, destinadas a conduzir a secreção produzida até um ponto
específico, por onde será liberada (exo = fora, crino = secreção). São providas de vários tipos de canais, através dos quais a secreção
chega ao local de uso ou ao local de liberação, cujas estruturas estão ausentes nas glândulas endócrinas (as secreções são liberadas
diretamente no meio circulante).
4
HEFETZ, A. 1987. The role of Dufour’s gland secretions in bees. Physiological Entomology, 12, 243-253.
*
Polinização entomófila: polinização realizada por insetos em plantas que possuem flores com características especiais, tais como
nectários.
5
KERR, W. E.; CARVALHO, G. A.; SILVA, A. C.; ASSIS, M. G. P. 2005. Biodiversidade: Aspectos Pouco Mencionados da
Biodiversidade Amazônica. Disponível em: <http://www.apacame.org.br/mensagemdoce/80/biodiversidade.htm>. Acesso em: 08 de
agosto de 2006.
6
ROUBIK, D. W. 1989. Ecology and Natural History of Tropical Bees. Cambridge: Cambridge University Press, 514 p.
7
SANTOS, I. A. 2002. A Vida de uma Abelha Solitária. Disponível em: <http://eco.ib.usp.br/beelab/solitarias.htm>. Acesso em: 08 de
agosto de 2006.

4
INTRODUÇÃO GERAL

Paulo foram listadas 729 espécies e no Rio Grande do Sul mais de 500
espécies.7
Uma ampla diversidade de abelhas existe em nossa fauna com diversas
formas, tamanhos e cores. Algumas são confundidas com moscas varejeiras
por possuírem tons verdes, azuis e roxos metálicos. Existem abelhas que
chegam a medir mais de cinco centímetros e outras são muito pequenas com
pouco mais de dois milímetros (Figura 1).7

Figura 1. Uma pequena amostra da diversidade de abelhas nativas do Brasil (2x).7

De acordo com seus hábitos, as abelhas podem ser classificadas em três


categorias: solitárias, parasitas e sociais.8, 9
A maioria das abelhas é solitária (aproximadamente 80% das espécies),
isto é, vivem sozinhas. Cada fêmea, individualmente, constrói e cuida do seu
próprio ninho, o qual é formado por células de cria. O alimento larval é
depositado totalmente de uma vez, o qual é formado pela mistura de pólen
com o néctar (ambos obtidos das flores) originando uma massa denominada de
“pão” da abelha. Sobre esta massa, a abelha coloca o seu ovo e fecha a célula,
repetindo este procedimento geralmente de quatro a seis vezes, colocando
vários ovos em seu ninho em um determinado período de tempo (Figuras 2a,
8
PERUQUETTI, R. C. 2006. A Origem das Abelhas. Disponível em: <ftp://ftp.ufv.br/dbg/apiario/origemdasabelhas.pdf>. Acesso em:
08 de agosto de 2006.
9
DE-CICCO, L. H. S. 2005. As Abelhas e a História. Disponível em: <http://www.saudeanimal.com.br/abelha0.htm>. Acesso em: 08
de agosto de 2006.

5
INTRODUÇÃO GERAL

2b e 2c). Assim, após fechar a última célula de cria e terminar o ninho, a


fêmea da abelha solitária fica sem abrigo e acaba morrendo antes de suas crias
nascerem, não havendo contato entre as gerações. Resumidamente, as fêmeas
das abelhas solitárias preparam ninhos, alimentam a cria, põem ovos e,
durante a construção do ninho, acabam defendendo o mesmo dos predadores.
Tendo uma vida curta durante a primavera e/ou verão.7, 8, 9, 10

a) b) c)
Figura 2. a) Entradas de ninhos de Tetrapedia sp. em um tronco, em destaque; b) entradas
de ninhos de Tetrapedia sp. em buracos feitos em uma caixa de madeira; e c)
interior de uma trapa* de Tetrapedia sp., três larvas em destaque.10

Existe uma grande diversificação nos hábitos de nidificação das várias


espécies de abelhas solitárias, algumas nidificam em ramos ocos de plantas ou
orifícios preexistentes em madeira. Outras nidificam em cavidades no chão,
barrancos ou em lugares protegidos, poucas constroem ninhos expostos. Na
maioria das espécies, as fêmeas procuram um lugar próximo ao local de seu
nascimento, o que é chamado de reutilização do ninho parental, formando
aglomerações (Figuras 3a e 3b).7, 8, 9

10
IMPERATRIZ-FONSECA, V. L. 2006. Tópicos em Biologia de Abelhas. Disponível em: <http://www.ib.usp.br/beelife/biolo.htm>.
Acesso em: 08 de agosto de 2006.
*
Trapa – é um ninho-armadilha. Neste caso, a trapa foi construída em um buraco feito em uma caixa de madeira, no qual foi colocado
um rolinho de cartolina marrom onde a abelha acaba fazendo seu ninho (mostrado na Figura 3b). Existem trapas de gomos de bambu.

6
INTRODUÇÃO GERAL

Figura 3. a) Entradas de ninhos de Monoeca xanthopyga Harter-Marques, Cunha and


Moure, 2001, formando uma aglomeração; e b) corte em célula de cria de
Monoeca xanthopyga, em destaque, larva alimentando-se de pólen.11

As abelhas parasitas (aproximadamente 15% das espécies) possuem


hábito solitário, mas utilizam ninhos, especificadamente células de cria, de
outras abelhas para a ovoposição de seus próprios ovos. Portanto, suas larvas
desenvolvem-se às custas do alimento do hospedeiro e, normalmente, acabam
matando as larvas do hospedeiro existentes nas células de cria invadidas. As
espécies parasitas não transportam pólen e, muitas vezes, assemelham-se as
vespas.8, 9
Finalmente, as abelhas sociais são aquelas que vivem em colônias com
divisões de castas: zangões (ou machos), operárias e, na maioria das vezes,
uma rainha. Embora sejam estas a minoria dentre as várias espécies de abelhas
(aproximadamente 5%), representam para nós o que caracteriza a essência do
reino das abelhas. Seus ninhos são encontrados, de acordo com a espécie, em
locais bastante diversos, algumas fazem seus ninhos em raízes ou troncos de
árvores, outras constroem ninhos subterrâneos, dentro de cavidades
preexistentes, e outras fazem seus ninhos presos a galhos ou paredes. As
abelhas sociais mais conhecidas popularmente são as abelhas européias (Apis
mellifera mellifera Linnaeus, 1758) e as abelhas africanas (Apis mellifera

11
CUNHA, R.; BLOCHTEIN, B. 2003. Bionomia de Monoeca xanthopyga Harter-Marques, Cunha & Moure (Hymenoptera, Apidae,
Tapinotaspidini) no Planalto das Araucárias, Rio Grande do Sul, Brasil. Revista Brasileira de Zoologia, 20, 107-113.

7
INTRODUÇÃO GERAL

scutellata Lepeletier, 1836) (Apidae: Apinae), pois são ótimas produtoras de


mel e vivem em colônias numerosas (Figura 4).8, 9, 10, 12

Figura 4. Foto de uma operária de Apis mellifera ssp. em uma folha.13

Praticamente todos os aspectos da vida social das abelhas (defesa do


ninho, cuidado com a cria, reconhecimento de parentesco, acasalamento,
hierarquia reprodutiva, orientação, etc) são sinalizados por semioquímicos. A
comunicação química exerce uma função muito importante, sobretudo nas
abelhas sociais, nas quais a complexidade comportamental corresponde uma
multiplicidade de sinais químicos.14
As abelhas utilizam secreções de várias glândulas exócrinas, como as
glândulas de cera, as glândulas mandibulares e a glândula de Dufour (Figura
5), em suas comunicações, defesas e na construção de seus ninhos.6

Glândula Glândula
Glândulas
mandibular de Dufour
de cera

6
Figura 5. Anatomia interna de uma abelha operária de Apis mellifera ssp. (Apidae: Apinae).

12
CAMPOS, L. A. O. 1999. Criação de Abelhas Indígenas Sem Ferrão. Disponível em:
<http://rgm.fmrp.usp.br/beescience/criacao.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.
13
Apis mellifera. 2006. Disponível em: <http://www.evasion.it/Apis_mellifera.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.
14
CRUZ-LANDIM, C.; ABDALLA, F. C. 2002. Glândulas Exócrinas das Abelhas. Ribeirão Preto: FUNPEC Editora, 181 p.

8
INTRODUÇÃO GERAL

As abelhas da família Apidae são divididas em quatro subfamílias:


Apinae, Meliponinae, Bombinae e Euglossinae. As abelhas destas subfamílias
possuem glândulas de cera localizadas em certas regiões do abdome. As
fêmeas dos euglossíneos possuem somente uma glândula de cera localizada na
extremidade dorsal do abdome, logo glândulas de cera dorsais e ventrais são
achadas nas fêmeas dos bombíneos. Nas operárias dos meliponíneos, as
glândulas de cera são dorsais e nas operárias dos apíneos são ventrais. Suas
ceras são empregadas principalmente para a construção do ninho.6, 15
A cera secretada por abelhas operárias de Apis mellifera ssp. (Apidae:
Apinae) tem sido extremamente estudada, a qual consiste de misturas
complexas de hidrocarbonetos, monoésteres, diésteres, triésteres, hidroxi-
ésteres, ésteres de ácidos carboxílicos, ácidos graxos livres, álcoois livres e
pequenas quantidades de material não identificado. No entanto, as ceras das
abelhas sem ferrão Trigona (Trigonisca) buyssoni Friese, 1902 e Trigona
(Trigonisca) atomaria Cockerell, 1917 (Apidae: Meliponinae) possuem uma
composição mais simples do que a de Apis mellifera sendo compostas
principalmente por hidrocarbonetos, monoésteres, ácidos graxos livres, álcoois
primários e material polar não identificado.16
As glândulas mandibulares das abelhas produzem substâncias que
servem como feromônios de alarme, marcadores de território para machos,
marcadores de percurso e para desorientar possíveis predadores. As gotas
odoríferas de secreções da glândula mandibular são depositadas sobre a
vegetação, as quais são utilizadas como marcadores de caminho por grupos de
meliponíneos como os pertencentes aos gêneros Trigona, Oxytrigona,
Scaptotrigona, Meliponula, Cephalotrigona, Lestrimelitta e Nannotrigona;

15
NOGUEIRA-NETO, P. 1997. Vida e Criação de Abelhas Indígenas Sem Ferrão. São Paulo: Ed. Nogueirapis, 446 p.
16
BLOMQUIST, G. J.; ROUBIK, D. W.; BUCHMANN, S. L. 1985. Wax chemistry of two stingless bees of the Trigonisca group
(Apidae: Meliponinae). Comparative Biochemistry and Physiology, 82B, 137-142.

9
INTRODUÇÃO GERAL

acredita-se que as espécies do gênero Partamona (Apidae: Meliponinae)


guiam suas congêneres através de odores deixados no ar. A composição
química da secreção mandibular em abelhas sem ferrão é conhecida em um
pequeno número de espécies, e as mesmas substâncias, em maior
concentração, funcionam em algum grau na ativação de um comportamento de
alarme e defesa do ninho. Os compostos voláteis produzidos pelas glândulas
mandibulares de algumas espécies de abelhas sem ferrão são lipídeos voláteis
que podem atuar como potentes repelentes olfatórios contra formigas
cortadeiras (gêneros Formica e Cremotagaster). Foi verificado também que
diversas espécies de abelhas secretam terpenóides acíclicos voláteis e
derivados de ácidos graxos, os quais são efetivos no controle de
desenvolvimento de alguns fungos e bactérias associados com o
deterioramento de alimentos nos reservados do ninho e larvas doentes in
vitro.6, 17, 18, 19
As secreções mandibulares de três espécies de abelhas do gênero
Colletes (Colletidae: Colletinae) foram analisadas por CG-EM, as quais
possuíam como constituintes majoritários: linalol, neral e geranial na
proporção 3:1:1, respectivamente. Em testes de campo, os três compostos em
mistura, na mesma proporção encontrada nas glândulas, foram altamente
atrativos a indivíduos machos e fêmeas.17
A análise da secreção mandibular da abelha indiana Pithitis smaragdula
Fabricius, 1787 (Anthophoridae: Xylocopinae) revelou a presença de uma
mistura de aldeído salicílico, acetato de citronelila, acetato de geranila,
pentadecano, heptadecano, tetradecanoato de etila e hexadecanoato de etila. A
17
HEFETZ, A.; BATRA, S. W. T.; BLUM, M. S. 1979a. Linalool, neral and geranial in the mandibular glands of Colletes bees - na
aggregation pheromone. Experientia, 35, 319-320.
18
CANE, J. H.; GERDIN, S.; WIFE, G. 1983. Mandibular gland secretions of solitary bees (Hymenoptera: Apoidea): potential for nest
cell disinfection. Journal of the Kansas Entomological Society, 56, 199-204.
19
CANE, J. H. 1986. Predator deterrence by mandibular gland secretions of bees (Hymenoptera: Apoidea). Journal of Chemical
Ecology, 12, 1295-1309.

10
INTRODUÇÃO GERAL

secreção é emitida quando a abelha é perturbada; a abelha esfrega a secreção


com as patas sobre seu próprio corpo e sobre a superfície do agressor. A
reatividade de alguns dos componentes da mistura e, principalmente, o
comportamento da abelha durante a emissão, sugeriu que o exsudado
mandibular era uma secreção de defesa.20
Um exemplo de marcação e defesa territorial utilizando secreções
mandibulares ocorre na espécie de abelha carpinteira Xylocopa sulcatipes
Maa, 1970 (Anthophoridae: Xylocopinae). A análise química das secreções
mostrou a presença de guaiacol, p-cresol e vanilina. Aparentemente, o
guaiacol serve como um instigador de agressividade, a vanilina é utilizada
para marcação territorial e ainda para a atração de fêmeas, constituindo assim
um feromônio sexual.21
Outra glândula muito útil para as abelhas é a glândula abdominal de
Dufour, a qual pode apresentar formas e tamanhos variados. A variedade de
classes de compostos produzidas por esta glândula nas diferentes subfamílias
de abelhas está relacionada a uma versatilidade das rotas biossintéticas
(Tabela 1).4
Várias espécies de abelhas utilizam a secreção da glândula de Dufour
para marcar a entrada do ninho e para a construção das células. Em uma rainha
virgem, a secreção funciona como um feromônio sexual, enquanto em rainhas
poedeiras e operárias, as substâncias presentes na secreção atuam como chaves
de reconhecimento dos demais companheiros do ninho.4
Na espécie Nannotrigona testaceicornis Lepeletier, 1836 (Apidae:
Meliponinae), a glândula de Dufour é ampla e se apresenta na forma de pêra.
A secreção glandular é composta principalmente por um éster diterpênico, o
20
HEFETZ, A.; BATRA, S. W. T.; BLUM, M. S. 1979b. Chemistry of the mandibular gland secretion of the indian bee Pithitis
smaragdula. Journal of Chemical Ecology, 5, 753-758.
21
HEFETZ, A. 1983. Function of secretion of mandibular gland of male in territorial behaviour of Xylocopa sulcatipes (Hymenoptera:
Anthophoridae). Journal of Chemical Ecology, 9, 923-931.

11
INTRODUÇÃO GERAL

acetato de trans-geranilgeranila (abundância relativa: 64%), junto com uma


mistura complexa de componentes minoritários como cetais cíclicos, terpenos,
acetatos e outros compostos oxigenados. Amostras de N. testaceicornis
coletadas no Brasil e no México mostraram composições semelhantes,
sugerindo que a secreção da espécie é uniforme, apesar da grande distância
geográfica.22

Tabela 1. Classes de compostos identificados nas glândulas de Dufour de abelhas.4

Subfamília Hidrocarbonetos Lactonas Ésteres Ésteres Álcoois Álcoois Aldeídos Triglicerídeos


macrocíclicas alifáticos terpenoídicos terpénicos alifáticos
Família: Colletidae
Colletinae X X X
Hylaeinae X X X
Diphaglossinae X X X X
Família: Halictidae
Halictinae X X
Nomiinae X X
Dufoureinae X
Família: Andrenidae
Andreninae X X X X
Panurginae X X X X
Família: Melittidae
Melittinae X X X
Família: Megachilidae
Megachilinae X
Família: Anthophoridae
Xylocopinae X X
Anthophorinae X X X X

A comparação das várias famílias de abelhas pertencentes à


superfamília Apoidea revelou que a família Apidae é a que possui hábitos
sociais mais avançados. Entretanto, as abelhas sociais brasileiras mais
importantes, por serem responsáveis por 40 a 90% da polinização da flora
nativa do Brasil, são as abelhas pertencentes à subfamília Meliponinae
(Apidae), as quais são conhecidas como meliponíneos ou abelhas indígenas
sem ferrão.6, 15, 23, 24

22
CRUZ-LÓPEZ, L.; PATRICIO, E. F. L. R. A.; MORGAN, E. D. 2001. Secretions of stingless bees: the Dufour gland of Nannotrigona
testaceicornis. Journal of Chemical Ecology, 27, 69-80.
23
KERR, W. E.; CARVALHO, G. A.; NASCIMENTO, V. A. 1996. Abelha Uruçu - Biologia, Manejo e Conservação. Belo
Horizonte: Fundação Acangaú, Coleção Manejo da Vida Silvestre, n°. 2, 144 p.

12
INTRODUÇÃO GERAL

1.3. Meliponíneos.

Os meliponíneos ou abelhas indígenas sem ferrão são abelhas


pantropicais (ocorrem somente nas regiões tropicais e subtropicais) e eusociais
(vivem em colônias permanentes com divisões de castas). Estima-se que
existam mais de 300 espécies de meliponíneos.15, 23, 25
Estas abelhas são denominadas abelhas indígenas porque foram criadas
racionalmente pela primeira vez pelos índios, cuja atividade é chamada de
meliponicultura, e são conhecidas como abelhas sem ferrão, pois possuem este
instrumento de defesa atrofiado. Já a denominação ‘meliponíneos’ foi gerada a
partir do nome de sua subfamília, Meliponinae.15, 24
A classificação zoológica completa dos meliponíneos é a seguinte:9, 23

Reino – Animal
Filo – Arthropoda
Classe – Insecta
Ordem – Hymenoptera
Subordem – Apocrita
Superfamília – Apoidea
Família – Apidae
Subfamília – Meliponinae

Uma característica comum nas abelhas indígenas sem ferrão, como


também nas outras abelhas pertencentes à família Apidae, com algumas
exceções, é possuir nas tíbias (patas) traseiras das fêmeas uma concavidade
onde elas carregam o pólen ou outros materiais para os seus ninhos. Essa
concavidade chama-se corbícula (Figura 6), na qual existem vários pêlos. No

24
NOGUEIRA-NETO, P. 1970. A Criação de Abelhas Indígenas Sem Ferrão (Meliponinae). 2a. ed. São Paulo: Ed. Chácaras e
Quintais, 365 p.
25
MICHENER, C. D. 1974. The Social Behavior of the Bees - A Comparative Study. Cambridge: Harvard University Press, 404 p.

13
INTRODUÇÃO GERAL

entanto, as rainhas dos meliponíneos e dos apíneos, como também todos os


machos da família Apidae, não possuem corbícula.15

Figura 6. As principais partes do corpo de uma operária de meliponíneo (Melipona


compressipes Schwarz, 1932), em destaque, a corbícula.15

Segundo Moure (1961), a subfamília Meliponinae pode ser dividida,


tanto por aspectos morfológicos como também pela origem das rainhas, em
duas tribos: Meliponini e Trigonini.15, 26, 27
A tribo Meliponini inclui aproximadamente 26 espécies e numerosas
subespécies, todas pertencentes ao gênero Melipona. Elas são exclusivamente
neotropicais e 20 espécies estão presentes no Brasil. São abelhas grandes a
médias (7-15 mm) (Figura 7). Os Meliponini caracterizam-se por não
construírem células reais (onde emergem as futuras rainhas). Todas as rainhas,
operárias e machos, nascem e se desenvolvem, até o estágio adulto, dentro de
células de cria de igual tamanho. Além disso, a entrada dos ninhos é formada
por uma estrutura crateriforme e raiada feita de geoprópolis (barro finamente
misturado à própolis).15, 26

26
MOURE, J. S. 1961. A preliminary supra-specific classification of the old world Meliponine bees (Hymenoptera, Apoidea). Studia
Entomologica, 4, 181-242.
27
IMPERATRIZ-FONSECA, V. L.; SANTOS, I. A. 2006. As Abelhas do Brasil. Disponível em:
<http://www.webbee.org.br/beetaxon/>. Acesso: 08 de agosto de 2006.

14
INTRODUÇÃO GERAL

Figura 7. Morfologia das espécies de abelhas da tribo Meliponini.27

Os Trigonini constituem uma tribo muito diversificada com vários


gêneros, entre eles: Lestrimelitta, Hypotrigona, Cephalotrigona, Oxytrigona,
Schwarziana, Scaura, Plebeia, Partamona, Paratrigona, Scaptotrigona,
Nannotrigona, Tetragonisca, Trigona, Geotrigona, Frieseomelitta, Tetragona.
São abelhas geralmente pequenas (2-11 mm) (Figura 8) e que constroem
células reais maiores que as células de operárias e machos.15, 26, 27

Figura 8. Morfologia das espécies de abelhas da tribo Trigonini.27

A distribuição das várias espécies de abelhas sem ferrão no Brasil


depende das características climáticas e florísticas de cada região. Portanto, no

15
INTRODUÇÃO GERAL

mapa do Brasil abaixo (Figura 9) são indicadas algumas espécies de acordo


com sua região de ocorrência.23, 28

Figura 9. Localização de algumas espécies de meliponíneos no Brasil.28

Como os meliponíneos são abelhas sociais, em suas colônias ocorrem


divisões de castas em operárias, machos e, geralmente, uma rainha.
Cabe às rainhas a postura de ovos que darão origem a todas as outras
castas de seu ninho, inclusive a rainha que irá substituí-la futuramente. Após o
acasalamento, as rainhas têm o abdome grandemente desenvolvido, pois em
geral a postura dos seus ovos é muito intensa. Nessa fase da sua existência,
elas são denominadas de rainhas poedeiras ou fisogástricas (Figuras 10a-
10f). Foi verificado que a rainha pode ser fecundada por um ou mais zangões,
dependendo da espécie. A postura dos ovos das rainhas fisogástricas é
realizada durante um tipo de “ritual”, em que a rainha e as operárias da sua
28
CAMPOS, L. A. O.; PERUQUETTI, R. C. 1997. Distribuição das Abelhas Sem Ferrão no Brasil. Disponível em:
<http://www.ufv.br/dbg/bee/distrib.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.

16
INTRODUÇÃO GERAL

corte avançam, recuam, tremem e fixam com a cabeça e suas antenas, as


células ainda abertas.15

a) b) c)

d) e) f)
Figura 10. Rainhas de meliponíneos nos favos de cria de suas colônias: a) rainha
fisogástrica de Melipona quadrifasciata Lepeletier, 1836; b) oviposição de
rainha fisogástrica de Melipona rufiventris Lepeletier, 1836; c) rainha
fisogástrica de Plebeia remota Holmberg, 1903; d) rainha fisogástrica de
Tetragonisca angustula Latreille, 1811; e) rainha fisogástrica de Schwarziana
quadripunctata Lepeletier, 1836; e f) duas rainhas fisogástricas de Melipona
bicolor Lepeletier, 1836, depositando ovos nas células de cria.29

As rainhas de quase todas as espécies da tribo Trigonini são criadas em


células reais, as quais são bem maiores que as células de cria de operárias e
machos, geralmente, na periferia dos favos de cria. Contudo, em
Frieseomelitta sp. (Apidae: Meliponinae) não há células reais, mas apenas
casulos reais que são formados depois que uma larva fêmea invade uma célula
de cria vizinha, consome o conteúdo alimentar da mesma e tece depois um
casulo bem maior. Nos Trigonini podem ocorrer rainhas de tamanho pequeno,
as quais se desenvolvem em células de cria comum de operárias. Algumas
observações comprovaram que uma alimentação um pouco maior era

29
Rainhas nos Favos de Cria. 2006. Disponível em: <http://eco.ib.usp.br/beelab/raindex.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.

17
INTRODUÇÃO GERAL

suficiente para transformar uma operária em rainha pequena. Outros estudos


determinaram que a casta de rainhas de abelhas sociais depende da quantidade
de hormônio juvenil na alimentação larval. Numa colônia de Melipona bicolor
Lepeletier, 1836 (Apidae: Meliponinae) pode ser verificado a presença de
várias rainhas, o que geralmente ocorre em colônias fortes desta espécie
(Figura 10f).15
Como foi comentado, a grande diferença entre as tribos Meliponini e
Trigonini são as células reais. Contudo, há uma controvérsia sobre a existência
ou não de uma determinação genética de rainhas nos Meliponini.15
Segundo Imperatriz-Fonseca & Zucchi (1995), as rainhas virgens
(aquelas que ainda não copularam) podem andar livremente pelo seu ninho
enquanto não são atrativas. Ao se tornarem atrativas, passam a enfrentar
reações de outras abelhas na colônia que as obrigam a se refugiarem ou a
serem contidas em câmaras reais, potes vazios ou num círculo de abelhas. A
duração do tempo de refúgio ou do aprisionamento varia de dias a meses. A
atratividade resulta da liberação de feromônios produzidos pela glândula de
Dufour. Em algumas espécies de meliponíneos, as rainhas virgens nascem não
pigmentadas (sem coloração), somente mais tarde com pigmentação formada
se tornam atrativas. Por outro lado, em outros meliponíneos, as rainhas virgens
já nascem atrativas.14, 15, 30
As rainhas de meliponíneos, além da postura de ovos, podem executar
pequenos trabalhos com cerume em celas ou câmaras reais ajudando as
operárias nos serviços realizados dentro da colônia.15
As operárias constituem a casta que realiza quase todos os trabalhos
que devem ser feitos na colônia. São a grande “mão-de-obra”. Para
desenvolver-se e manter-se viva, uma colônia precisa de várias operárias. As
30
IMPERATRIZ-FONSECA, V. L.; ZUCCHI, R. 1995. Virgin queens in stingless bee colonies: a review. Apidologie, 26, 231-244.

18
INTRODUÇÃO GERAL

operárias dos meliponíneos são diferenciadas dos machos e rainhas pela


presença de uma concavidade nas tíbias traseiras, a corbícula (Figura 6),
somente as operárias de espécies parasitas de meliponíneos não possuem esta
concavidade. Contudo, as operárias não são apenas trabalhadoras, elas
também podem exercer funções de postura como operária poedeira. De acordo
com Beig (1968), se há na célula de cria um ovo posto pela rainha e outro por
uma operária poedeira, a larva produzida pelo ovo da operária originará um
macho, o qual acaba matando a larva do ovo da rainha. Foi verificado que as
operárias poedeiras de Scaptotrigona postica Latreille, 1807 (Apidae:
Meliponinae) somente põem um único ovo durante toda a sua vida. Todos os
ovos postos por operárias poedeiras darão origem a machos, pois não são
resultados de uma fecundação; entretanto, machos também podem ser
produzidos pela rainha.15, 31
Algumas vezes, a produção de machos ou zangões é relativamente
contínua, outras vezes, pode ocorrer em grandes surtos, ou seja, emerge dos
favos de cria um grande número de zangões.15
Ao contrário do que ocorre com os zangões de Apis mellifera ssp.
(Apidae: Apinae), os machos das abelhas sem ferrão além de se alimentarem
de recursos fornecidos pela colônia, também se alimentam de recursos florais.
Além disso, em algumas espécies, os machos trabalham com cerume,
desidratam néctar, incubam células de cria, defendem o ninho e seguem pistas
de odor.15
As abelhas indígenas sem ferrão, como também todos os insetos
pertencentes à ordem Hymenoptera, têm algumas peculiaridades genéticas
que os distinguem de outros animais. No núcleo das células existe o material

31
BEIG, D. 1968. Produção de machos e desenvolvimento embrionário em Trigona (Scaptotrigona) postica Latreille
(Hymenoptera, Apoidea). Tese de doutorado, Faculdade de Filosofia, Ciência e Letras de Rio Claro, São Paulo, 119 p.

19
INTRODUÇÃO GERAL

hereditário básico, um conjunto de pares de cromossomos, ou seja, um


conjunto diplóide de cromossomos, que são providos dos progenitores (pai e
mãe). As fêmeas das abelhas possuem geralmente um par de cromossomos em
suas células, então são diplóides. Contudo, os machos são haplóides, pois
possuem normalmente apenas uma série de cromossomos, vindo da mãe, pois
são gerados de ovos não fecundados. Também pode haver machos diplóides,
mas estes são estéreis ou semi-estéreis.15
A partir dos trabalhos de Kerr e colaboradores (1966a, 1966b)
verificaram-se que, em condições ótimas, os indivíduos diplóides que nascem
numa colônia normal são 25% rainhas e 75% operárias.15, 32, 33
Os ninhos dos meliponíneos possuem uma organização distinta, sendo
construídos com diversos materiais que são encontrados na natureza e também
com um material secretado, ou seja, produzido por eles (a cera), os quais são
abordados a seguir.
A cera é secretada por glândulas existentes no dorso dos abdomes, entre
os segmentos abdominais (tergitos) dos meliponíneos jovens da colônia
(Figuras 5 e 6). O produto dessa secreção é uma pequena placa de cera branca.
Edouard Drory (1873) foi o primeiro a verificar que os meliponíneos
produzem a cera no dorso do abdome. Além disso, constatou que os zangões
também secretam cera.15, 34
A cera pura de coloração branca pode ser encontrada em pequenos
depósitos no ninho de alguns meliponíneos, como verificado em Tetragonisca
angustula Latreille, 1811 (Apidae: Meliponinae). Algumas abelhas, como a

32
KERR, W. E.; NIELSEN, R. A. 1966a. Evidences that genetically determined Melipona queens can become workers. Genetics, 54,
859-866.
33
KERR, W. E.; STORT, A. C.; MONTENEGRO, M. J. 1966b. Importância de alguns fatores ambientais na determinação das castas do
gênero Melipona. Anais da Academia Brasileira de Ciências, 38, 149-168.
34
DRORY, E. 1873. Nouvelles observations sur les melipones. Le Rucher du Sud-Oest, 1, 59-61.

20
INTRODUÇÃO GERAL

Friesella schrottkyi Friese, 1900 (Apidae: Meliponinae), freqüentemente usam


cera branca na entrada do seu ninho.15
Algumas vezes, a cera tem sido designada como cerume, o que não está
certo, pois são materiais diferentes. O cerume é uma mistura da cera branca,
produzida pelas abelhas, com resinas vegetais (a própolis). Aparentemente, o
primeiro autor a relatar que o cerume contém resinas, foi um cientista
brasileiro pioneiro, Vicente Coelho de Seabra (1799). No entanto, a palavra
cerume foi cunhada por Hermann von Ihering (1903) para denominar a
mistura de cera branca com própolis preparada por abelhas melíferas do
Brasil. 15, 35, 36
Os meliponíneos utilizam o cerume em diversas partes de seus ninhos,
como na construção dos potes, dos invólucros e dos favos de cria. O cerume
pode apresentar tonalidades que vão do amarelo claro até o preto, dependendo
da quantidade ou qualidade das resinas vegetais misturadas à cera branca, o
que está relacionado à flora regional e sazonal visitada pela espécie de
meliponíneo.15
Segundo Nogueira-Neto (1997), a própolis é constituída basicamente
por resinas vegetais coletadas pelas abelhas nas plantas lenhosas feridas e nas
flores. Essas resinas são trabalhadas pelas abelhas nos seus ninhos, seja numa
forma pura (própolis puro) ou misturada com um pouco de cera (própolis
mista ou cerume).15
A própolis mais conhecida popularmente e comercialmente é a retirada
de ninhos de abelhas Apis mellifera ssp. (Apidae: Apinae), as quais utilizam-
na para fechar frestas em seu ninho. Vários estudos têm demonstrado que a

35
COELHO DE SEABRA, V. 1799. Memória em que se dá notícia de diversas espécies de abelhas que dão mel, próprias do Brasil e
desconhecidas na Europa. Memories of Mathematical and Physical Academy Royal Sciences of Lisboa, 2, 99-104.
36
VON IHERING, R.; SAMPAIO, B. C. 1930. Biologia das abelhas melíferas do Brasil. Boletim de Agricultura da Secretaria da
Agricultura do Estado de São Paulo, 31, 649-714.

21
INTRODUÇÃO GERAL

própolis possui propriedades medicinais, no entanto existem poucos estudos


sobre o potencial medicinal da própolis de meliponíneos.15
Em muitas espécies, como por exemplo, nas abelhas da tribo
Meliponini, a própolis guardada no ninho não é mole, pois endurece
rapidamente e não pode ser reutilizada em outros lugares do ninho. Contudo,
em espécies como Tetragonisca angustula Latreille, 1811 e Plebeia sp.
(Apidae: Meliponinae), a própolis é guardada em depósitos e possui uma
forma grudenta e pegajosa. Esses meliponíneos empregam esta própolis
pegajosa geralmente para fechar as frestas dos seus ninhos e também como
arma de defesa mais direta sobre inimigos, pois quando estão em perigo, suas
operárias freqüentemente retiram pelotinhas de própolis viscosa de seus
depósitos e as colocam-nas sobre a cabeça e outras partes do corpo de seus
inimigos, assim elas derrubam-os no chão, garantindo a tranqüilidade da
colônia.15, 24
Um outro material que é preparado pelos meliponíneos é o batume,
uma mistura de barro ou argila com própolis e/ou cerume, o qual é utilizado
para vedar as frestas e, principalmente, para formar as paredes do ninho.15, 24, 36
Segundo Michener (1974), batume é uma denominação geral para o
material empregado na limitação do ninho dos meliponíneos, pois pode ser
feito da mistura de cerume (comumente quebradiço) com resinas (própolis) e
material vegetal (folhas, flores, sementes, gravetos) ou barro misturado com
resinas ou cerume. Nos ninhos de algumas espécies de meliponíneos que são
feitos em troncos de árvores, o batume é empregado principalmente na forma
de placas grossas, acima e abaixo da cavidade, para segurar o ninho.25
Na tribo Trigonini, os batumes são feitos de cerume, freqüentemente
muito ricos em própolis, às vezes, podem ter a adição de outros materiais.
Esses batumes são menos espessos que os batumes das espécies de abelhas da

22
INTRODUÇÃO GERAL

tribo Meliponini, nas quais ocorre grande formação de barro finamente


misturada à própolis que são denominadas por Nogueira-Neto (1997, 1970) de
geoprópolis. Outras abelhas dessa tribo também apresentam barro acumulado
juntamente com a própolis, mas é algo grosseiramente misturado, este material
foi denominado por Nogueira-Neto (1997, 1970) de parageoprópolis.15, 24
Outros materiais utilizados pelos meliponíneos em seus ninhos são
pedaços de madeira, folhas, pétalas de flores e sementes. No Amazonas, Absy
e Kerr (1977) verificaram que a abelha Melipona seminigra merrilae
Cockerell, 1919 (Apidae: Meliponinae) prepara o batume de seu ninho com
barro e resinas, misturados com sementes e látex dos frutos de Vismia sp.
(Clusiaceae). No Panamá e na Amazônia, Roubik (1989) verificou que
Melipona fuliginosa Lepeletier, 1836 (Apidae: Meliponinae) também constrói
grande parte do seu ninho com sementes e com as resinas alaranjadas dos
frutos de Vismia sp.. Porém, segundo Garcia e colaboradores (1992), as
sementes e as resinas encontradas no ninho de Melipona fuliginosa e de outros
meliponíneos da floresta Amazônica Central não são dos frutos de Vismia sp.
(Figura 11), mas sim dos frutos de Coussapoa asperifolia magnifolia
(Cecropiaceae), devido a forma das sementes e a ausência da massa pegajosa
dos frutos de Vismia sp. 6, 15, 37

37
GARCIA, M. V. B.; OLIVEIRA, M. L.; CAMPOS, L. A. O. 1992. Use of seeds of Coussapoa asperifolia magnifolia (Cecropiaceae)
by stingless bees in the Central Amazonian Forest (Hymenoptera: Apidae: Meliponinae). Entomologia Generalis, 17, 255-258.

23
INTRODUÇÃO GERAL

Figura 11. Entrada de um ninho de Melipona fuliginosa Lepeletier, 1836 (Apidae:


Meliponinae), onde podemos verificar, segundo Garcia et al. (1992), a
presença de sementes e resinas vermelhas dos frutos de Coussapoa asperifolia
magnifolia (Cecropiaceae).37, 38

Os ninhos dos meliponíneos, de um modo geral, possuem uma


arquitetura básica formada por: placas de parede que envolve todo o ninho
(os batumes), potes ovalados de cerume que servem principalmente para
guardar os alimentos da colônia (o mel e o pólen), o invólucro, os favos de
cria e uma entrada com um túnel de ingresso (Figura 12a).15

a) b)
Figura 12. a) Esquema de um ninho de meliponíneo;15 e b) favos de cria em forma
horizontal de Melipona bicolor Lepeletier, 1836 (Apidae: Meliponinae).39

Os favos de cria são construídos com cerume e na maioria das abelhas


sem ferrão são dispostos em forma horizontal formando vários discos
empilhados, os quais são envolvidos, em quase todas as espécies, por camadas

38
CORTOPASSI-LAURINO, M. 2004. Relato: A Uruçu Boi da Amazônia, Melipona fuliginosa Lepeletier, 1836. Disponível em:
<http://www.apacame.org.br/mensagemdoce/77/relato.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.
39
Favos de Cria. Disponível em:<http://www.ufv.br/dbg/bee/favos.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.

24
INTRODUÇÃO GERAL

finas de cerume, denominadas de invólucro (Figura 12b). O invólucro tem a


função de proteger as larvas e as abelhas mais jovens das variações de
temperatura. Algumas espécies apresentam favos de cria em forma de cachos
(Figura 13a), não tendo parede em comum entre a maioria das células de cria.
No entanto, existe ainda espécies que constroem favos de cria irregulares,
como Friesella schrottkyi Friese, 1900 (Figura 13b), e outras que constroem
favos de cria em forma de espiral (Figura 13c).15, 40

a) b) c)
Figura 13. Favos de cria de meliponíneos: a) favos de cria em forma de cachos de
Frieseomellita silvestrii Friese, 1902;41 b) favos de cria irregulares de
Friesella schrottkyi Friese, 1900;42 e c) favos de cria em forma de espiral de
Plebeia remota Holmberg, 1903.43

As entradas dos ninhos dos meliponíneos possuem arquiteturas


relacionadas com o tipo de defesa utilizado pelo gênero ou espécie (Figuras
12a e 14) e, dependendo da espécie, são construídas com cerume, resina
vegetal ou barro. As entradas de algumas espécies da tribo Trigonini possuem
a forma de um simples túnel onde as “guardiãs” (abelhas que não permitem a
entrada de estranhos) ficam postadas, enquanto em outras espécies, este tubo
se alarga formando uma ampla plataforma onde ficam diversas “guardiãs”, as
quais permitem a passagem simultânea de vários indivíduos ao mesmo tempo

40
CAMPOS, L. A. O.; PERUQUETTI, R. C. 1997. O Ninho dos Meliponíneos - Estrutura do Ninho. Disponível em:
<http://www.ufv.br/dbg/bee/ninhomelipon.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.
41
IMPERATRIZ-FONSECA, V. L.; NOGUEIRA-NETO, P.; LAURINO, M. C.; SILVA, P. N.; GIANNINI, T. C. 2005. Frieseomellita
silvestrii (Friese, 1902). Disponível em: <http://www.ib.usp.br/beesp/frieseomelitta_silvestrii.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.
42
IMPERATRIZ-FONSECA, V. L.; NOGUEIRA-NETO, P.; LAURINO, M. C.; SILVA, P. N.; GIANNINI, T. C. 2005. Friesella
schrottkyi (Friese, 1900). Disponível em: <http://www.ib.usp.br/beesp/friesella_schrottkyi.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.
43
Vista Interna da Colméia. 2006. Disponível em: <http://eco.ib.usp.br/beelab/ninindex.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.

25
INTRODUÇÃO GERAL

na colônia. Nas espécies que constroem uma entrada estreita, guardada por
uma abelha que fecha a entrada com sua cabeça, passa uma única abelha por
vez. Especialistas em meliponíneos conseguem relacionar o gênero da abelha
pela forma da entrada do seu ninho.15, 40

Mirim preguiça Uruçu verdadeira Uruçu boca-de-renda


(Friesella schrottkyi Friese, 1900) (Melipona scutellaris Latreille, 1811) (Melipona seminigra Friese, 1903)

Manduri Boca-de-sapo Mandaguari amarela


(Melipona marginata Lepeletier, 1836) (Partamona helleri Friese, 1900) (Scaptotrigona xanthotricha Moure, 1950)

Canudo Tubuna Iraí


(Scaptotrigona depilis Moure, 1942) (Scaptotrigona bipunctata Lepeletier, 1836) (Nannotrigona testaceicornis Lepeletier, 1836)

Figura 14. Entradas de ninhos de algumas espécies de meliponíneos. Obs.: a palavra em


negrito é o nome popular e a palavra em itálico entre parênteses é o nome
científico.44

44
Entradas de Colônias. 2006. Disponível em: <http://eco.ib.usp.br/beelab/entindex.htm>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.

26
INTRODUÇÃO GERAL

As abelhas sem ferrão, como também as demais abelhas, coletam e


utilizam três principais recursos florais: o pólen, o néctar e as resinas.
Os grãos de pólen encontram-se nas anteras (localizadas nos estames
florais) e, em geral, são amarelos (Figura 15a). Cada grão de pólen, além de
conter os cromossomos que constituíram a herança masculina da futura planta,
contém uma pequena quantidade de substâncias de reserva, principalmente
lipídeos ou água com proteínas e carboidratos. Por isso, o pólen é a principal
fonte de proteínas das abelhas. Ao coletar o pólen de várias flores, as abelhas
acabam transportando-o e transferindo-o de uma flor para outra, realizando a
polinização entomófila.15
Os grãos de pólen manipulados pelos meliponíneos recebem o nome de
samora nos estados do Centro-Sul e Sudeste, e de saburá ou samburá na
Amazônia e no Nordeste. Os meliponíneos empregam suas mandíbulas para
trabalhar o pólen, assim utilizam neste processo secreções provenientes das
glândulas mandibulares e hipofaringeanas, transformando o pólen em uma
massa pastosa que é transportada na forma de pelotinhas em suas corbículas
(nas duas tíbias traseiras) (Figura 15b).15

Anteras com
grãos de pólen

a) b)
Figura 15. a) Androceu de uma flor com grãos de pólen, em destaque.45 Obs.: androceu:
conjunto de órgãos reprodutores masculinos de uma flor, com a função de
produzir grãos de pólen; e b) abelha campeira de meliponíneo transportando a
massa de pólen, em forma de bolinha, em uma tíbia traseira.27

45
Androceu. 2006. Disponível em: <http://pt.wikipedia.org/wiki/Androceu>. Acesso em: 08 de agosto de 2006.

27
INTRODUÇÃO GERAL

O outro recurso floral coletado pelas abelhas é o néctar, o qual é um


líquido açucarado constituído principalmente pela mistura, em diferentes
concentrações, de água com frutose, glicose e sacarose (açúcar produzido
durante a fotossíntese realizada pelas plantas verdes), mas contém também
sais minerais e outras substâncias.15
Quando as abelhas campeiras chegam à colméia trazendo o néctar, elas
freqüentemente o entregam a outras abelhas que o desidratam. Durante certo
período de tempo, estas abelhas expõem e retraem uma gotícula de néctar na
ponta da língua. Com a evaporação crescente da água existente no néctar, o
líquido vai se tornando mais denso. Além disso, a maior parte da sacarose
presente no néctar, sob a ação de certas enzimas, transforma-se em frutose e
glucose. Ocorre também produção de peróxido de oxigênio e outros
compostos. Assim, aos poucos, o néctar transforma-se em mel. No fim do
processo, as operárias guardam o mel no papo e depois o regurgitam nos
potes. Então, o néctar nada mais é que a matéria-prima com a qual as abelhas
fazem o mel.15, 46
Sem dúvida, o pólen e o néctar são os principais recursos florais
oferecidos pelas plantas como recompensas para os seus agentes
polinizadores, sendo os recursos mais estudados até o momento. No entanto,
em 1969 um novo aspecto da ecologia de polinização foi relatado por Stefan
Vogel quando descreveu uma “síndrome floral” em cinco famílias de plantas
(Iridaceae, Krameriaceae, Malpighiaceae, Orchidaceae e Scrophulariaceae)
relacionada à secreção de óleos florais por órgãos denominados de
elaióforos.47, 48

46
PEREIRA, F. M.; LOPES, M. T. R.; CAMARGO, R. C. R.; VILELA, S. L. O. 2003. Morfologia e Biologia das Abelhas Apis
mellifera. Disponível em: <http://sistemasdeproducao.cnptia.embrapa.br/FontesHTML/Mel/SPMel/morfologia.htm>. Acesso em: 08
de agosto de 2006.
47
SIMPSON, B. B.; NEFF, J. L. 1981. Floral rewards: alternatives to pollen and nectar. Annals of the Missouri Botanical Garden, 68,
301-322.

28
INTRODUÇÃO GERAL

Vogel reconheceu dois tipos principais de elaióforos morfologicamente:


os elaióforos epiteliais e os elaióforos em tricomas. Os elaióforos epiteliais
são pequenas células epidermais secretoras, sendo que os lipídeos florais se
acumulam em grande quantidade embaixo de finas cutículas protetoras (Figura
16a). Os elaióforos epiteliais são considerados o tipo dominante em plantas
das famílias: Krameriaceae, Malpighiaceae, Melastomataceae e Orchidaceae.
Entretanto, os elaióforos em tricomas estão localizados na base interna da
flor e são centenas a milhares de pêlos com glândulas secretoras de lipídeos
(Figuras 16b e 16c); eles produzem uma quantidade de óleo muito menor do
que um elaióforo epitelial.48

a) b) c)
Figura 16. Os dois tipos de elaióforos: a) elaióforos epiteliais na parte de baixo da base de
uma flor de Callaeum macropterum (Malpighiaceae);48 b) elaióforos em
tricomas nas pétalas (parte interna) e no androceu de uma flor de Lysimachia
quadrifolia (Primulaceae);48 e c) foto ampliada dos elaióforos em tricomas.49

Segundo um levantamento realizado por Buchmann (1987), plantas que


possuem flores que produz óleos florais e/ou néctar e pólen, pertencem a 8
ordens, 10 famílias, 79 gêneros e aproximadamente 2.402 espécies. Ele
observou que três espécies do gênero Trigona (Apidae: Meliponinae) e uma
espécie do gênero Melipona (Apidae: Meliponinae) coletam óleos florais em
Malpighiaceae, Gesneriaceae e Melastomataceae. De acordo com Roubik
(1989), Tetragona dorsalis (Smith, 1854), Trigona spinipes (Fabricius, 1793),

48
BUCHMANN, S. L. 1987. The ecology of oil flowers and their bees. Annual Review of Ecology and Systematics, 18, 343-369.
49
RASMUSSEN, C.; OLESEN, J. M. 2000. Oil flowers and oil-collecting bees. Scandinavian Association for Pollination Ecology
Honours Knut Fαgri, 39, 23-31.

29
INTRODUÇÃO GERAL

Trigona pallens (Fabricius, 1798) e Trigona cilipes (Fabricius, 1804) (Apidae:


Meliponinae) coletam óleos florais, os quais não são provavelmente ingeridos
por estes meliponíneos, mas utilizados na construção de seus ninhos.6, 15, 48
As principais famílias de abelhas que são observadas coletando lipídeos
florais são três: Melittidae, Ctenoplectridae e Anthophoridae; e numa pequena
extensão espécies pertencentes à família Apidae (incluindo a subfamília
Meliponinae). Os óleos florais são utilizados por estas três primeiras famílias
de abelhas como alimento larval e para construção de parte de seus ninhos. A
grande família Anthophoridae contém sem dúvida a maioria das espécies
atualmente conhecidas ou suspeitas de coletarem lipídeos florais. Existem
espécies de abelhas da família Melittidae que através da co-evolução
desenvolveram estruturas especiais em suas patas dianteiras para coletar os
óleos florais de determinadas espécies de plantas (Figuras 17a e 17b), sendo
posteriormente os óleos florais deslocados para a região com pêlos das tíbias
traseiras.6, 15, 48

Tíbias traseiras

a) b)
Figura 17. a) Uma operária de Rediviva emdeorum Vogel and Michener, 1985 (Melittidae:
Melittinae) que tem as pernas dianteiras modificadas para coletar óleo floral;6
e b) representação da coleta de óleo floral de uma operária de Rediviva
longimanus Michener, 1981 (Melittidae: Melittinae) em uma flor de Diascia
longicornis (Scrophulariaceae).48

Os óleos florais sofrem modificações em suas composições devido as


variações nas condições climáticas e sazonais. No entanto, já foram
observadas variações nas composições dos óleos florais de uma espécie para
outra em uma determinada família de planta, como também de uma família

30
INTRODUÇÃO GERAL

para outra. Estes fatos fazem com que as plantas produtoras de óleos florais
sejam visitadas e polinizadas por diferentes espécies de abelhas, como
exemplo, podemos citar dois gêneros de abelhas da família Anthophoridae:
Monoeca e Tapinotaspis, uma vez que as abelhas do gênero Monoeca são
geralmente vistas coletando óleos florais de plantas da família Malpighiaceae,
enquanto as abelhas do gênero Tapinotaspis são com freqüência vistas
coletando óleos florais de plantas das famílias Scrophulariaceae e Solanaceae,
o que demonstra que as abelhas coletoras de óleos florais, dependendo do
gênero e espécie, preferem determinadas composições de óleos florais.48, 50, 51,
52

Os óleos florais são principalmente constituídos de ácidos graxos


saturados, parafinas, óleos, e ésteres; sendo geralmente representados por
diglicerídeos. Eles também podem conter aminoácidos, carotenóides,
compostos fenólicos, isoprenóides não voláteis, glicosídeos e saponinas. Seus
valores energéticos acabam sendo maiores do que os do néctar e do pólen.6
Entre as primeiras reportagens de composição de óleos florais encontra-
se o estudo realizado por Vogel (1974) com o óleo floral de Calceolaria
pavonii (Scrophulariaceae), no qual verificou que este óleo floral era
composto principalmente pelo ácido β-acetoxi-hexadecanóico. Quatro anos
mais tarde, Seigler e colaboradores (1978) reportaram que os óleos florais de
três espécies do gênero Krameria (Krameriaceae) continham principalmente

50
COCUCCI, A. A.; SÉRSIC, A.; ROIG-ALSINA, A. 2000. Oil-collecting structures in Tapinotaspidini: their diversity, function and
probable origin (Hymenoptera: Apidae). Mitteilungen der Münchner Entomologischen Gesellschaft, 90, 51-74.
51
VINSON, S. B.; WILLIAMS, H. J.; FRANKIE, G. W.; SHRUM, G. 1997. Floral lipid chemistry of Byrsonima crassifolia
(Malpighiaceae) and a use of floral lipids by Centris bees (Hymenoptera: Apidae). Biotropica, 29, 76-83.
52
SEIPOLD, L.; GERLACH, G.; WESSJOHANN, L. 2004. A new type of floral oil from Malpighia coccigera (Malpighiaceae) and
chemical considerations on the evolution of oil flowers. Chemistry & Biodiversity, 1, 1519-1528.

31
INTRODUÇÃO GERAL

três componentes: o ácido 3-acetoxi-hexadecanóico, o ácido 3-acetoxi-


octadecanóico e o ácido 3-acetoxi-eicosanóico.48, 53
A composição de lipídeos florais em espécies da família Orchidaceae
foi realizada por Reis (2000a), onde verificou que os óleos florais das espécies
Oncidium pubes, Oncidium trucatum, Oncidium hookeri, Oncidium
praetextum e Oncidium varicosum (Orchidaceae) são compostos
principalmente por ácidos graxos livres, ésteres de glicerila, esteróides e o α-
tocoferol. Também observou que o óleo floral da espécie Oncidium pumilum
(Orchidaceae) possuía uma grande abundância de sesquiterpenos, ésteres,
hidrocarbonetos e cetonas, além da presença de di e triacilgliceróis. Em seus
estudos com espécies do gênero Gomesa (Orchidaceae) demonstrou que seus
óleos florais eram constituídos por sesquiterpenóides, ácidos graxos e
hidrocarbonetos de cadeia longa. Segundo Reis e colaboradores (2003), o óleo
floral de Ornithophora radicans (Orchidaceae) é composto majoritariamente
por um novo diacilglicerol, (2S,3’R,7’R)-1-acetil-2-[3’,7’-diacetoxieicosanil]-
glicerol, o oncidinol. 54, 55, 56

53
SEIGLER, D.; SIMPSON, B. B.; MARTIN, C.; NEFF, J. L. 1978. Free 3-acetoxyfatty acids in floral glands of Krameria species.
Phytochemistry, 17, 995-996.
54
REIS, M. G. 2000a. A Contribuição da Química para o Estudo de Orchidaceae e seus Polinizadores. Dissertação de Mestrado,
Instituto de Química, UNICAMP, Campinas-SP, 197 p.
55
REIS, M. G.; FARIA, A. D.; BITTRICH, V.; AMARAL, M. C. E.; MARSAIOLI, A. J. 2000b. The chemistry of flower rewards -
Oncidium (Orchidaceae). Journal of the Brazilian Chemical Society, 11, 600-608.
56
REIS, M. G.; FARIA, A. D.; AMARAL, M. C. E.; MARSAIOLI, A. J. 2003. Oncidinol - a novel diacylglycerol from Ornithophora
radicans Barb. Rodr. (Orchidaceae) floral oil. Tetrahedron Letters, 44, 8519-8523.

32
OBJETIVOS

OBJETIVOS

33
OBJETIVOS

2. Objetivos.

Como foi exposto, existe uma teia complexa de informações formadas


pelas substâncias químicas que circundam a vida dos meliponíneos, portanto o
estudo químico das abelhas brasileiras e das plantas polinizadas por elas é uma
das maneiras de desvendar as biomoléculas envolvidas nas interações entre
estes organismos. Assim, visando contribuir para o conhecimento da
comunicação química das abelhas brasileiras, os objetivos deste trabalho
foram:

1. Desvendar o mecanismo químico de defesa utilizado por Melipona


scutellaris Latreille, 1811 (Apidae: Meliponinae) contra a invasão de
operárias de Melipona rufiventris Lepeletier, 1836 (Apidae:
Meliponinae).

2. Diferenciar quimicamente operárias e machos de Nannotrigona


testaceicornis Lepeletier, 1836 e Plebeia droryana Friese, 1900
(Apidae: Meliponinae).

3. Determinar o componente majoritário do óleo floral de Lophanthera


lactescens Ducke (Malpighiaceae) e atestar quimicamente que
Tetragonisca angustula Latreille, 1811 (Apidae: Meliponinae) e
Centris trigonoides Lepeletier, 1841 (Anthophoridae: Centridini)
coletam seu óleo floral.

Para uma melhor compreensão do trabalho desenvolvido, estes tópicos


foram descritos em três diferentes capítulos a seguir.

35
RESULTADOS E DISCUSSÃO

RESULTADOS E DISCUSSÃO

37
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

CAPÍTULO 1

39
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

CAPÍTULO 1 – Mudanças químicas associadas com a invasão de uma colônia de


Melipona scutellaris Latreille, 1811, por operárias de Melipona rufiventris Lepeletier,
1836 (Apidae: Meliponinae).

3. Introdução.

Os meliponíneos podem sofrer invasões ocasionadas por outras espécies


de meliponíneos (por exemplo, Lestrimelitta limão Smith, 1863, e Trigona
spinipes Fabricius, 1793) e de apíneos (por exemplo, Apis mellifera ssp.).
Estes ataques são efetuados para roubos de mel, cerume, própolis e alimento
larval. Na maioria das vezes, ocorrem lutas violentas e destrutivas entre as
abelhas como exemplo podemos citar o ataque das operárias de Melipona
fuliginosa Lepeletier, 1836 (Apidae: Meliponinae) às colônias de Melipona
seminigra merrillae Cockerell, 1919 (Apidae: Meliponinae) o que causa
grande prejuízo, pois as operárias de M. fuliginosa utilizam suas mandíbulas
para cortar as cabeças das operárias defensoras de M. seminigra merrillae,
acabando com grande parte da colônia invadida. No entanto, existem invasões
de colônias que ocorrem de forma pacífica, sem violência, o que geralmente
ocorre entre colônias diferentes da mesma espécie como uma forma de
cooperação ou interrelação.15, 24
A invasão temporária de uma colônia de Melipona scutellaris Latreille,
1811, por operárias de Melipona rufiventris Lepeletier, 1836, no meliponário
da Fazenda Aretuzina, São Simão-SP (em março de 2004), ocorreu de forma
aparentemente pacífica,15 apesar de serem espécies diferentes, pois não foram
observadas lutas entre as duas espécies. Entretanto, como a invasão das
operárias de M. rufiventris foi temporária, isto indica que sua situação na
colônia invadida foi desconfortável. Esta invasão pode ter resultado em

41
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

alterações químicas nas substâncias que fazem parte dos corpos das abelhas de
ambas espécies e nos compostos que são utilizados na construção do ninho.
Com base nestes fatos, as estratégias para evidenciar estas possíveis
alterações químicas foram:
1) Investigar as alterações das ceras produzidas pelas operárias de M.
scutellaris e M. rufiventris vivendo em colônias puras* e na colônia invadida.
Este trabalho já foi concluído em nosso grupo de pesquisa,57 no qual
observou-se uma grande alteração na composição das ceras das operárias da
colônia invadida em comparação com as ceras das operárias das colônias
puras (Tabela 2). Foi também verificado que as ceras das operárias das
colônias puras e da colônia invadida possuem os mesmos constituintes
principais, sendo o acetato de triacontanila, o composto principal das ceras de
M. scutellaris, e o Z-9-hentriaconteno, o composto principal das ceras de M.
rufiventris, os quais caracterizam e diferenciam as ceras destas espécies.
2) Investigar as alterações que ocorrem nos materiais de construção do
ninho invadido através da análise química dos constituintes presentes nos
batumes das colônias puras de M. scutellaris e M. rufiventris e no batume da
colônia invadida de M. scutellaris, objetivo do presente trabalho. Como os
batumes são formados por misturas de barro com própolis e/ou cerume e são
empregados na construção das paredes do ninho das espécies do gênero
Melipona,15 esta parte foi selecionada para o presente estudo por possuir os
principais materiais de construção utilizados por estes meliponíneos.15, 24, 25

Não existem relatos sobre uma metodologia para a análise da composição


química de batumes, portanto esta foi desenvolvida no presente trabalho (Parte
Experimental, págs. 87, 95 e 96) e os resultados estão expostos a seguir.

57
FLACH, A. 2005. Ecologia química de Maxillariinae, Spathodea campanulata e Meliponiinae. Tese de doutorado, Instituto de
Química, UNICAMP, Campinas-SP, 178 p.
*
Colônia pura: colônia que não sofreu invasão.

42
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

Tabela 2. Abundâncias relativas dos constituintes das ceras abdominais das operárias de
Melipona scutellaris e Melipona rufiventris das colônias puras e da colônia
invadida. 57, *
a a a
tR IR IR M. scutellaris M. scutellaris M. M.
COMPOSTOS (min) (calc.) (lit.) colônia pura colônia invadida
(%)
b
(%)
b rufiventris rufiventris
colônia pura colônia invadida
b b
(%) (%)
9-tricoseno (isômero 1) 32,70 2250 - - - 0,04 -
9-tricoseno (isômero 2) 32,80 2275 - - - 0,01 -
tricosano 32,90 2300 2300 0,12 - 2,25 3,49
tetracosano 33,28 2400 2400 - - 0,29 2,31
E-9-pentacoseno 34,17 2467 - 0,67 - 0,12 0,01
Z-9-pentacoseno 34,28 2476 - 0,01 - 0,01 -
pentacosano 34,60 2500 2500 1,64 0,67 16,65 10,92
Z-9-hexacoseno 35,60 2577 - 0,01 - - -
hexacosano 35,90 2600 - 0,14 - 0,96 2,45
E-9-heptacoseno 36,82 2671 - 9,78 1,30 0,97 2,67
Z-9-heptacoseno 36,90 2677 - 0,01 - 0,14 0,01
heptacosano 37,20 2700 - 8,39 1,57 19,21 10,61
Z-9-octacoseno 38,14 2777 - - - 0,16 0,01
octacosano 38,42 2800 - 0,29 - 0,60 2,33
c
nonacosadieno 38,99 2848 - 0,01 - 0,42 0,01
E-9-nonacoseno 39,20 2865 - 3,63 0,01 0,56 7,87
Z-9-nonacoseno 39,35 2878 - 0,19 - 9,21 2,37
nonacosano 39,62 2900 - 8,28 0,99 7,08 4,19
9-triaconteno (isômero 1) 40,31 2966 - 0,29 - 0,04 2,30
9-triaconteno (isômero 2) 40,42 2977 - - - 0,35 -
triacontano 40,66 3000 - 0,01 - 0,13 -
c
hentriacontadieno (isômero 1) 41,20 3049 - - - 1,50 2,40
c
hentriacontadieno (isômero 2) 41,26 3054 - - - 0,89 2,44
c
hentriacontadieno (isômero 3) 41,32 3059 - - - 0,41 0,01
E-9-hentriaconteno 41,36 3063 - 19,89 2,34 3,19 2,77
Z-9-hentriaconteno 41,55 3080 - - - 14,20 11,36
hentriacontano 41,77 3100 - 3,81 0,01 2,27 2,57
9-dotriaconteno (isômero 1) 42,36 3167 - 0,27 - 0,09 2,31
9-dotriaconteno (isômero 2) 42,50 3183 - - - 0,29 -
dotriacontano 42,65 3200 - 0,01 - - -
c
tritriacontadieno (isômero 1) 43,29 3255 - - - 2,81 3,13
c
tritriacontadieno (isômero 2) 43,36 3261 - - - 0,83 -
9-tritriaconteno (isômero 1) 43,49 3272 - 6,43 0,55 1,88 2,92
9-tritriaconteno (isômero 2) 43,64 3285 - - - 3,99 3,81
tritriacontano 43,81 3300 - 2,05 - 0,28 2,31
acetato de triacontanila 45,06 3413 - 21,54 82,27 - -
9-pentatriaconteno (isômero 1) 45,65 3466 - 0,76 - 0,11 -
9-pentatriaconteno (isômero 2) 45,85 3484 - - - 0,09 -
pentatriacontano 46,03 3500 - 0,25 - - -
hexadecanoato de octadecila 46,62 3553 - 0,17 - - -
octadecenoato de octadecenila 48,40 3714 - 0,31 - - -
octadecenoato de octadecila 48,60 3732 - 0,78 - - -
não identificados - - - 10,26 10,29 7,97 12,42
TOTAL 100,00 100,00 100,00 100,00
*
N= 4 operárias de cada amostra. Os compostos são listados em ordem de seus tempos de retenção.
58
a
tR = tempos de retenção; IR (calc.) = índices de retenção calculados pela equação de Van den Dool e Kratz ; IR (lit.) = índices de
59
retenção retirados da literatura (Adams, 1995) ; (-): não achados.
b
Abundâncias relativas, em porcentagem, obtidas por Espectrometria de Massas.
c
As posições das duplas ligações em alcadienos não foram determinadas.

58
VAN DEN DOOL, H.; KRATZ, P. D. J. 1963. A generalization of retention index system including linear temperature programmed
gas-liquid partition chromatography. Journal of Chromatography, 11, 463-471.
59
ADAMS, R. P. 1995. Identification of Essential Oil Components by Gas Chromatography/Mass Spectroscopy. Allured
Publishing Corporation, USA, 469 p.

43
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

3.1. Resultados e discussão.

As frações dos batumes da colônia pura de M. scutellaris, da colônia


pura de M. rufiventris e da colônia invadida de M. scutellaris (batumes 1, 2 e
3, respectivamente) são constituídas, de um modo geral, de n-alcanos (C14 a
C33), n-9-alcenos (C23 a C33), n-alcanos ramificados (C14 a C19), terpenos,
ésteres alifáticos, aminas, uma amida (oleamida), ácidos alifáticos e derivados
fenólicos (Tabela 3).
A presença de uma série homóloga de n-alcenos nas frações (A) e (B)
dos batumes 1, 2 e 3 foi evidenciada pelas análises de seus espectros de
massas, nos quais apresentam uma série importante de íons m/z ímpares e íons
moleculares com duas unidades de massa atômica a menos que os
correspondentes n-alcanos. A posição da dupla ligação destes n-alcenos não
pode ser determinada por espectrometria de massas, portanto seguindo o
procedimento de Buser e colaboradores (1983),60 as frações (A) e (B) foram
derivatizadas com dissulfeto de dimetila/iodo (DMDS/I2) (Parte Experimental,
págs. 88 e 93). Nesta reação, o iodo age como um catalisador da adição anti
do DMDS na dupla ligação do alceno formando um derivado com dois grupos
metilsulfeto (CH3S), o qual origina fragmentos de intensidade relativa alta
[A]+ e [B]+ no espectro de massas originados da clivagem da ligação carbono-
carbono (ligados aos grupos CH3S), cuja soma corresponde ao íon molecular
[M]+. (Esquema 1a e 1b).61, 62 Todos os derivados DMDS dos n-alcenos das
frações (A) e (B) dos batumes que tiveram sua dupla ligação determinada

60
BUSER, H. R.; ARN, H.; GUERIN, P.; RAUSCHER, S. 1983. Determination of double bond position in mono-unsaturated acetates
by mass spectrometry of dimethyl disulfite adducts. Analytical Chemistry, 55, 818-822.
61
VINCENTI, M.; GUGLIELMETTI, G.; CASSANI, G.; TONINI, C. 1987. Determination of double bond position in diunsaturated
compounds by mass spectrometry of dimethyl disulfide derivatives. Analytical Chemistry, 59, 694-699.
62
CARLSON, D. A.; ROAN, C. S.; YOST, R. A.; HECTOR, J. 1989. Dimethyl disulfite derivatives of long chain alkenes, alkadienes,
and alkatrienos for gas chromatography/mass spectrometry. Analytical Chemistry, 61, 1564-1571.

44
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

apresentaram os fragmentos [A]+ e [B]+ (Anexos A1-A4 e A6-A8, págs. 115 a


117).

Tabela 3. Compostos identificados nas frações dos batumes da colônia pura de Melipona
scutellaris 1, da colônia pura de Melipona rufiventris 2 e da colônia invadida
de Melipona scutellaris 3.

FRAÇÃO A
BATUME 1 - BATUME 2 - BATUME 3 -
a a a
COMPOSTOS tR IR IR colônia pura de colônia pura de colônia invadida de
(min) (calc.) (lit.) M. scutellaris M. rufiventris M. scutellaris
b b b
(%) (%) (%)
3-metil-tridecano 9,56 1371 - - - 0,35
tetradecano 9,89 1400 1399 9,31 3,63 3,41
β -cariofileno 10,12 1421 1418 - - 0,51
(α - trans)-bergamoteno 10,28 1436 1436 - - 3,16
α -guaieno 10,34 1442 1439 - - 0,24
γ -gurjuneno 10,66 1472 1473 - - 1,35
(cis - β)-guaieno 10,82 1487 1490 - - 0,76
pentadecano 10,96 1500 1500 0,28 0,01 -
δ -guaieno 11,02 1506 1505 - - 2,81
γ -cadineno 11,09 1513 1513 - - 1,71
γ -bisaboleno 11,11 1515 1515 0,40 - -
1-cis-calameneno 11,17 1521 1521 - - 0,88
dodecanoato de metila 11,23 1523 1525 0,37 - -
δ -cadineno 11,26 1528 1524 0,85 2,73 2,03
4-etil-tetradecano 11,41 1544 - 0,70 2,83 0,59
3-metil-pentadecano 11,68 1571 - 2,86 5,01 2,20
c
hexadeceno 11,90 1592 - 0,60 2,97 0,46
hexadecano 11,98 1600 1600 8,69 9,26 5,98
4-metil-hexadecano 12,59 1664 - 0,71 2,88 0,45
heptadecano 12,93 1700 1700 0,50 - 0,19
3-metil-heptadecano 13,59 1772 - 2,51 - 1,68
c
octadeceno 13,79 1793 - 0,28 2,67 0,17
octadecano 13,85 1800 1800 2,52 3,87 1,57
nonadecano 14,72 1900 1900 - 2,99 -
3-metil-nonadecano 15,31 1971 - 0,70 2,78 0,43
eicosano 15,55 2000 2000 0,62 2,94 -
abietadieno 16,22 2085 2080 0,68 0,01 1,94
9-tricoseno 17,65 2276 - 0,17 - 0,17
tricosano 17,82 2300 2300 0,29 2,86 0,26
Z-9-pentacoseno 19,03 2476 - 1,41 - 1,82
pentacosano 19,19 2500 2500 1,94 4,19 1,57
Z-9-hexacoseno 19,69 2577 - - - 0,46
hexacosano 19,84 2600 - 0,22 0,01 0,18
Z-9-heptacoseno 20,34 2677 - 9,79 2,94 11,49
heptacosano 20,49 2700 - 7,17 4,22 5,38
octacosano 21,21 2800 - 0,27 - 0,24
esqualeno 21,34 2815 - 3,17 3,34 1,57
Z-9-nonacoseno 21,86 2877 - 2,99 5,37 2,85
nonacosano 22,05 2900 - 6,10 3,63 4,55
Z-9-hentriaconteno 23,96 3079 - 14,62 5,63 12,75
hentriacontano 24,21 3100 - 2,31 3,31 2,73
9-tritriaconteno 27,00 3279 - 4,76 - 5,79
tritriacontano 27,36 3300 - 1,28 - 1,81
não identificados - - - 10,93 19,92 13,51
TOTAL 100,00 100,00 100,00
FRAÇÃO B
tetradecano 9,89 1400 1399 0,63 4,15 -
(α - trans)-bergamoteno 10,28 1436 1436 - - 0,14
2,6-di-terc-butilquinona 10,65 1471 - 0,20 2,98 -
pentadecano 10,96 1500 1500 0,60 3,99 -
Continuação da Tabela 3 na próxima página.

45
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

BATUME 1 - BATUME 2 - BATUME 3 -


a a a
COMPOSTOS tR IR IR colônia pura de colônia pura de colônia invadida de
(min) (calc.) (lit.) M. scutellaris M. rufiventris M. scutellaris
b b b
(%) (%) (%)
hexadecano 11,98 1600 1600 0,25 3,22 -
óxido de cariofileno 12,00 1602 1581 - - 0,37
heptadecano 12,93 1700 1700 0,22 2,89 -
octadecano 13,85 1800 1800 0,12 3,05 -
eicosano 15,55 2000 2000 0,15 3,20 -
óxido de manoila 15,91 2046 2010 - 2,94 -
heneicosano 16,34 2100 2100 0,22 3,37 -
docosano 17,10 2200 2200 0,24 3,53 -
tetracosano 18,52 2400 2400 0,29 3,44 -
pentacosano 19,19 2500 2500 0,36 3,76 -
hexacosano 19,84 2600 - - 3,30 -
Z-9-heptacoseno 20,34 2677 - 0,30 - -
heptacosano 20,49 2700 - 0,36 3,43 -
octacosano 21,21 2800 - - 3,07 -
esqualeno 21,34 2816 - 0,20 - -
Z-9-nonacoseno 21,86 2878 - - 3,21 -
nonacosano 22,04 2900 - 0,32 3,07 -
bis(octilfenil)-amina 22,71 2968 - 2,87 8,74 -
β -amireno 28,01 3330 - 0,75 4,48 1,23
lanosterol 28,28 3343 - - - 1,63
β -amirina 28,61 3358 - 8,80 - 12,04
3-ceto-urseno 28,91 3372 - 4,45 10,82 5,77
cicloart-24-en-3β-ol 29,43 3396 - 34,28 - 41,05
α -amirina 29,61 3404 - 14,59 - 13,14
acetato de triacontanila 29,86 3413 - 12,60 - 5,69
24-metilenocicloartanol 30,68 3444 - 4,04 - 10,22
não identificados - - - 13,16 19,36 8,72
TOTAL 100,00 100,00 100,00
FRAÇÃO C
4-terc-butilfenol 8,69 1294 - - - 7,54
tridecano 8,76 1300 1299 - 1,66 -
tetradecano 9,89 1400 1399 9,07 8,44 -
pentadecano 10,96 1500 1500 8,22 6,60 -
hexadecano 11,97 1600 1600 3,71 3,00 -
heptadecano 12,93 1700 1700 3,84 2,89 -
octadecano 13,85 1800 1800 2,89 2,05 -
nonadecano 14,72 1900 1900 2,73 1,98 -
eicosano 15,54 2000 2000 3,34 2,38 -
heneicosano 16,34 2100 2100 3,32 2,63 -
docosano 17,10 2200 2200 3,78 3,35 -
triterpeno desconhecido 17,99 2324 - - - 24,87
tetracosano 18,52 2400 2400 4,16 3,32 -
junipeno 18,55 2404 - - - 8,75
pentacosano 19,19 2500 2500 4,31 3,57 -
hexacosano 19,84 2600 - 3,89 3,09 7,53
heptacosano 20,48 2700 - 3,69 3,16 -
octacosano 21,21 2800 - - 2,45 -
nonacosano 22,04 2900 - - 2,36 -
bis(octilfenil)-amina 22,71 2968 - 13,87 21,31 9,72
damaradienol 34,02 3557 - - - 12,12
não identificados - - - 29,18 25,76 29,47
TOTAL 100,00 100,00 100,00
FRAÇÃO D
2,4-diisocianato de tolueno 9,46 1362 - - - 0,38
tetradecano 9,89 1400 1399 3,96 5,43 -
N, N-diciclohexilamina 10,22 1431 1411 - 3,74 -
pentadecano 10,96 1500 1500 3,04 4,32 -
hexadecano 11,97 1600 1600 - 1,62 -
heptadecano 12,93 1700 1700 - 1,59 -
octadecano 13,85 1800 1800 - 1,23 -
metetilacloro 15,38 1980 - 2,62 1,38 0,98
eicosano 15,54 2000 2000 - 1,49 -
heneicosano 16,34 2100 2100 - 1,52 -
p-isopropilaminodifenilamina 16,56 2129 - 8,08 3,61 -
Continuação da Tabela 3 na próxima página.

46
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

BATUME 1 - BATUME 2 - BATUME 3 -


a a a
COMPOSTOS tR IR IR colônia pura de colônia pura de colônia invadida de
(min) (calc.) (lit.) M. scutellaris M. rufiventris M. scutellaris
b b b
(%) (%) (%)
docosano 17,10 2200 2200 2,14 1,78 -
tris(1,3-dicloro-2-propil) 18,03 2330 - - - 0,41
fosfato
tetracosano 18,52 2400 2400 2,44 2,09 -
pentacosano 19,19 2500 2500 - 2,25 -
hexacosano 19,84 2600 - 2,38 2,02 -
heptacosano 20,48 2700 - - 2,66 -
oleamida 21,10 2785 - 8,21 11,25 1,05
octacosano 21,21 2800 - - 2,13 -
5-pentadecano-resorcinol 21,34 2816 - - - 3,28
bis(octilfenil)-amina 22,72 2969 - 9,89 13,66 -
5-heptadecadieno-resorcinol 22,96 2993 - - - 7,72
5-heptadeceno-resorcinol 23,14 3009 - - - 29,74
5-nonadeceno-resorcinol 25,98 3220 - - - 14,08
epiendesmina 26,42 3245 - 30,55 1,44 3,84
não identificados - - - 26,69 34,79 38,52
TOTAL 100,00 100,00 100,00
FRAÇÃO E
2,3-dihidro-benzofurano 7,84 1223 - 0,70 0,93 -
N, N-diciclohexilamina 10,22 1431 1411 0,51 19,14 -
ácido dodecanóico 11,55 1558 1568 - 1,91 -
ácido hexadecanóico 15,20 1959 - 0,58 2,97 -
ácido 9-octadecenóico 16,62 2137 - - 2,11 -
ácido octadecanóico 16,80 2161 - - 0,51 -
3-pentadecano-fenol 19,22 2504 - - - 1,09
3-heptadecadieno-fenol 20,39 2685 - - - 3,75
3-heptadeceno-fenol 20,51 2704 - - - 10,15
3-heptadecano-fenol 20,59 2715 - - - 7,47
oleamida 21,10 2785 - - 7,25 -
3-nonadeceno-fenol 22,09 2905 - - - 4,53
3-nonadecano-fenol 22,27 2923 - - - 3,70
bis(octilfenil)-amina 22,72 2969 - - 1,61 -
epiendesmina 26,42 3245 - 7,57 7,14 1,02
não identificados - - - 90,64 56,43 68,29
TOTAL 100,00 100,00 100,00
58
a
tR = Tempos de retenção; IR (calc.) = índices de retenção calculados pela equação de van den Dool e Kratz ; IR (lit.) = índices de
59
retenção retirados da literatura (Adams, 1995) ; (-): não achados.
b
Abundâncias relativas, em porcentagem, obtidas por Espectrometria de Massas.
c
A posição da ligação dupla destes alcenos não foi determinada.

O fragmento de intensidade relativa alta m/z 173,


[CH3(CH2)7CH=SCH3]+, presente em todos os espectros de massas dos
derivados DMDS dos n-alcenos, indicou que a dupla ligação da série
homóloga detectada estava localizada no C-9 (Anexos A1-A4 e A6-A8, págs.
115 a 117). Os índices de retenção dos alcenos dos batumes são valores 100
vezes maiores que os seus valores de ECL* (equivalent chain length) (Tabela
3).63, 64 Por isso, comparando os valores de ECL dos n-9-alcenos (C25 - C31)

*
ECL = IR/100; ECL = Z + (tR(x) – tR(z)) / (tR(z+1) – tR(z)).
63
MIWA, T. K. 1963. Identification of peaks in gas-liquid chromatography. The Journal of the American Oil Chemists’ Society, 40,
309-313.

47
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

encontrados nos batumes e os publicados por Howard e Baker (2003)65


conclui-se que a geometria deles é Z.

(a) CH3SSCH3 + I2 2 CH3SI

SCH3
+ I CH3SSCH3
+ CH3SI
S
H3CS
CH3

SCH3
+ +
(b) R(CH2)xCH CH(CH2)y R' R(CH2)xHC SCH3 + CH3S CH(CH2)y R'
SCH3 fragmento [A] + fragmento [B] +

Esquema 1. a) Mecanismo geral da reação do DMDS/I2 com um alceno; b) representação


da clivagem da ligação carbono-carbono entre os CH3S do derivado DMDS de
um alceno fornecendo fragmentos majoritários [A]+ e [B]+.61, 62

Sendo as frações (A) e (B) apolares, seus constituintes devem ter


compostos originados das ceras das operárias ou de ceras epicuticulares de
flores, portanto, foi feita uma comparação das substâncias presentes nas
frações (A) e (B) dos batumes das colônias puras de M. scutellaris e M.
rufiventris) com os constituintes das ceras abdominais das operárias de M.
scutellaris e M. rufiventris, das mesmas colônias puras, analisadas pela Profa.
Dra. Adriana Flach em sua tese de doutorado (Tabela 2).57 Esta comparação
revelou que a série homóloga de Z-9-alcenos (C23 - C31) que está presente nos
batumes faz parte das ceras das operárias (Tabelas 2 e 3), também mostrando
que os isômeros E destes n-9-alcenos, nas ceras abdominais das operárias, são
eluídos antes que os isômeros Z por CG em uma coluna DB-5 (Tabela 2).
Adicionalmente, o acetato de triacontanila, composto principal das ceras das
64
ASHES, J. R.; HAKEN, J. K.; MILLS, S. C. 1980. Gas chromatography of esters. XIII - Interrelationship of equivalent chain length
(ECL) and retention index values of fatty esters. Journal of Chromatography, 187, 297-305.
65
HOWARD, R. W.; BAKER, J. E. 2003. Morphology and chemistry of Dufour glands in four ectoparasitoids: Cephalonomia tarsalis,
C. waterstoni (Hymenoptera: Bethylidae), Anisopteromalus calandrae, and Pteromalus cerealellae (Hymenoptera: Pteromalidae).
Comparative Biochemistry and Physiology, 135B, 153-167.

48
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

operárias de M. scutellaris,57 foi encontrado nas frações (B) dos batumes das
colônias pura e invadida de M. scutellaris, não sendo encontrado nas frações
do batume da colônia pura de M. rufiventris (Tabela 3). Estes dados
confirmam que realmente estas espécies colocam suas ceras nos batumes de
suas colônias.
Para evidenciar as alterações químicas na colônia de M. scutellaris
ocasionadas pela invasão das operárias de M. rufiventris foi feita uma
comparação dos compostos presentes nas frações do batume da colônia
invadida de M. scutellaris com as mesmas dos batumes das colônias puras de
M. scutellaris e M. rufiventris. Em primeiro lugar, foi verificado que as
frações (A-E) do batume da colônia invadida tiveram massas maiores do que
as frações dos batumes das colônias puras (Tabela 4), este fato foi
racionalizado como uma maior atividade de forageamento das operárias de M.
scutellaris após a invasão das operárias de M. rufiventris.

Tabela 4. Frações químicas das amostras de batumes obtidas da colônia pura de Melipona
scutellaris 1, da colônia pura de Melipona rufiventris 2 e da colônia invadida de
Melipona scutellaris 3.
FRAÇÕES SOLVENTES BATUME 1 BATUME 2 BATUME 3
(mg) (mg) (mg)
A hexano 2 2 3
B hexano / diclorometano (1:1) 6 5 35
C diclorometano 5 4 11
D diclorometano / acetato de etila (1:1) 6 3 28
E acetato de etila 6 2 22
- * 780 789 706
não analisados
TOTAL 805 805 805
*
Compostos polares e, principalmente, barro são a maior parte da constituição dos batumes destas espécies.

As frações do batume da colônia invadida (batume 3) apresentaram


compostos que não foram observados nas frações dos batumes das colônias
puras de M. scutellaris e M. rufiventris (batumes 1 e 2, respectivamente): na
fração (A) - β-cariofileno, α-trans-bergamoteno, α-guaieno, γ-gurjuneno, cis-
β-guaieno, δ-guaieno, γ-cadineno e 1-cis-calameneno; na fração (B) - α-trans-

49
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

bergamoteno, óxido de cariofileno e lanosterol; na fração (C) - um triterpeno


desconhecido, junipeno e damaradienol; e nas frações (D) e (E) - derivados
fenólicos, isto evidência uma mudança no hábito de coleta de resinas pelas
operárias de M. scutellaris, as quais acrescentam substâncias diferentes no
batume de seu ninho invadido.
Ácidos de cadeia longa foram encontrados somente na fração (E) do
batume da colônia pura de M. rufiventris, demonstrando que M. rufiventris
tem preferência por resinas que não são coletadas por M. scutellaris, e a
presença de alguns triterpenos (β-amirina, cicloart-24-en-3β-ol e 24-
metilenocicloartanol) somente nas frações (B) dos batumes das colônias pura e
invadida de M. scutellaris indica quimicamente que as operárias invasoras de
M. rufiventris não estão participando ativamente na colônia invadida.
Comparando a composição do batume da colônia invadida com as
composições dos batumes das colônias puras de M. scutellaris e M. rufiventris
ficou claro que o batume da colônia invadida possui maior diversidade e
abundância relativa de sesquiterpenos na fração (A), de triterpenos na fração
(B) e de compostos fenólicos nas frações (D) e (E); e menor abundância
relativa de hidrocarbonetos lineares nas frações (A), (B), (C) e (D) (Tabela 3).
Com base em todas estas diferenças químicas observadas, sugerimos que as
operárias de M. scutellaris expulsão as operárias invasoras de M. rufiventris
através da incorporação no batume do ninho invadido de compostos que não
eram coletados antes. Bioensaios com olfatômetro em Y ou análises de
cromatografia gasosa com detector eletroantenográfico devem ser realizados
em um próximo trabalho para confirmar esta hipótese.
O motivo da invasão das operárias de M. rufiventris na colônia de M.
scutellaris ainda não foi descoberto. Provavelmente, as operárias de M.
rufiventris foram roubar alimento ou materiais de construção que estão em

50
CAPÍTULO 1 – MUDANÇAS QUÍMICAS ASSOCIADAS COM A INVASÃO DE UMA COLÔNIA DE Melipona scutellaris POR OPERÁRIAS DE Melipona rufiventris

falta em sua colônia, o que é muito comum em abelhas da mesma subfamília,


como Lestrimelitta limao Smith, 1863 (Apidae: Meliponinae).15, 66, 67

3.2. Conclusões parciais.

Este é o primeiro trabalho que determinou a composição química de


batumes de meliponíneos, o qual confirmou que nos batumes de M. scutellaris
e M. rufiventris existe a cera que é produzida por suas operárias.
Foi também demonstrado quimicamente que as operárias de M.
scutellaris, após a invasão das operárias de M. rufiventris, aumentam suas
atividades de forageamento e mudam seus hábitos de coleta de resinas, pois
foi observado que M. scutellaris incorpora compostos que não coletava antes
(alguns terpenos e compostos fenólicos) no batume da colônia invadida,
possivelmente estas substâncias são as responsáveis pela expulsão das
operárias invasoras de M. rufiventris.

66
POMPEU, M. S.; SILVEIRA, F. A. 2005. Reaction of Melipona rufiventris Lepeletier to citral and against an attack by the
cleptobiotic bee Lestrimelitta limao (Smith) (Hymenoptera: Apidae: Meliponina). Brazilian Journal of Biology, 65, 189-191.
67
BLUM, M. S.; CREWE, R. M.; KERR, W. E.; KEITH, L. H.; GARRISON, A. W.; WALKER, M. M. 1970. Citral in stingless bees:
isolation and functions in trail-laying and robbing. Journal of Insect Physiology, 16, 1637-1648.

51
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

CAPÍTULO 2

53
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

CAPÍTULO 2 – Diferenciação química de operárias e machos de Nannotrigona


testaceicornis Lepeletier, 1836, e Plebeia droryana Friese, 1900 (Apidae: Meliponinae).

4. Introdução.

As plantas, em particular as pertencentes à família Orchidaceae,


utilizam recursos sofisticados para assegurar a polinização e, por
conseqüência, a reprodução da espécie. Um destes recursos é a presença de
compostos voláteis nas flores destas plantas que mimetizam os feromônios
sexuais das fêmeas de seus polinizadores. Estas semelhanças atraem, por
exemplo, machos de Nannotrigona testaceicornis e Scaptotrigona sp. nas
flores de Mormolyca ringens (Orchidaceae)68 e machos de Plebeia droryana
nas flores de Trigonidium obtusum (Orchidaceae),69 os quais, ao visitarem as
flores, retiram os seus polinários e transferem-nos para outras, em um
processo de polinização conhecido como pseudocópula.57 A comparação da
composição química do aroma e das ceras epicuticulares das flores de
Mormolyca ringens com os compostos voláteis cefálicos e os das glândulas de
ceras das rainhas virgens de Scaptotrigona sp. demonstraram similaridades
que podem ser responsáveis pela indução química da atividade copulatória em
machos de Scaptotrigona sp.57, 70
Na literatura existem trabalhos que relatam diferenças genéticas e
morfológicas entre as castas de meliponíneos,71, 72, 73
porém há poucos

68
SINGER, R. B.; FLACH, A.; KOEHLER, S.; MARSAIOLI, A. J.; AMARAL, M. C. E. 2004. Sexual mimicry in Mormolyca ringens
(Lindl.) Schltr. (Orchidaceae: Maxillariinae). Annals of Botany, 93, 755-762.
69
SINGER, R. B. 2002. The pollination mechanism in Trigonidium obtusum Lindl. (Orchidaceae: Maxillariinae): sexual mimicry and
trap-flowers. Annals of Botany, 89, 157-163.
70
FLACH, A.; MARSAIOLI, A. J.; SINGER, R. B.; AMARAL, M. C. E.; MENEZES, C.; KERR, W. E.; BATISTA-PEREIRA, L. G.;
CORRÊA, A. G. 2006. Pollination by sexual mimicry in Mormolyca ringens: a floral chemistry that remarkably matches the
pheromones of virgin queens of Scaptotrigona sp. Journal of Chemical Ecology, 32, 59-70.
71
ALMEIDA, M. G. 1985. Sex differentiation in bees. XXII. Generalized Mahalanobis distances between males and females of the
stingless bee Melipona scutellaris, Latreille 1811. Revista Brasileira de Genética, VIII, 603-608.
72
CRUZ-LANDIM, C.; MOTA, M. H. V. B. 1993. Differences between the female castes and males of Scaptotrigona postica depilis
(Hymenoptera, Apidae, Meliponinae) in the occurrence and ultrastructure of tegumentary exocrine glands. Naturalia, 18, 173-187.
73
CARVALHO, G. A.; KERR, W. E.; NASCIMENTO, V. A. 1995. Sex determination in bees. XXXIII. Decrease of xo heteroalleles in
a finite population of Melipona scutellaris (Apidae, Meliponini). Revista Brasileira de Genética, 18, 13-16.

55
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

trabalhos que analisam as diferenças químicas entre as castas.74, 75, 76


Estes
estudos demonstram que os membros de uma mesma colméia distinguem seus
companheiros através de detectores químicos. A partir destes resultados,
considerou-se oportuno investigar que a química das operárias e dos machos é
distinta. Para isso, extratos das operárias forrageiras e machos de N.
testaceicornis e P. droryana (machos capturados quando faziam pseudocópula
nas flores das orquídeas descritas acima) foram estudados por CG-EM (Parte
Experimental, págs. 88, 96 a 98) e os resultados são discutidos a seguir.

4.1. Resultados e discussão.

Nos extratos das ceras cuticulares, das cabeças e dos abdomes das
operárias forrageiras e dos machos de N. testaceicornis e P. droryana foram
observados n-alcenos, por isso os extratos foram derivatizados com DMDS/I2
(Parte Experimental, pág. 93), para determinar a posição das duplas ligações, e
os produtos da reação foram analisados por CG-EM (Tabelas 5 e 6).60, 61, 62 A
análise dos espectros de massas de todos derivados DMDS dos n-alcenos
indicou que a dupla ligação estava localizada no C-9, devido à presença do
fragmento majoritário m/z 173, e os valores de ECL (ECL = IR/100) dos n-
alcenos (C25 - C31) em comparação com a literatura65 revelou que eles
possuem geometria Z, como os Z-9-alcenos dos batumes de M. rufiventris e
M. scutellaris relatado no Capítulo 1 (Anexos A1-A8, págs. 115 a 117).

74
ENGELS, W.; ENGELS, E.; FRANCKE, W. 1997. Ontogeny of cephalic volatile patterns in queens and mating biology of the
neotropical stingless bee, Scaptotrigona postica. Invertebrate Reproduction and Development, 30, 251-256.
75
ABDALLA, F. C.; JONES, G. R.; MORGAN, E. D.; CRUZ-LANDIM, C. 2003. Comparative study of the cuticular hydrocarbon
composition of Melipona bicolor Lepeletier, 1836 (Hymenoptera, Meliponini) workers and queens. Genetics and Molecular
Research, 2, 191-199.
76
KERR, W. E.; JUNGNICKEL, H.; MORGAN, E. D. 2004. Workers of the stingless bee Melipona scutellaris are more similar to
males than to queens in their cuticular compounds. Apidologie, 35, 611-618.

56
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

Tabela 5. Composição química dos extratos de operárias e machos de Nannotrigona testaceicornis.


N. testaceicornis N. testaceicornis - colônia 1 N. testaceicornis - colônia 2 N. testaceicornis - colônia 3
MACHOS OPERÁRIAS OPERÁRIAS OPERÁRIAS
COMPOSTOS tR a IRa IRa Ceras Abdomes Cabeças Ceras Abdomes Cabeças Ceras Abdomes Cabeças Ceras Abdomes Cabeças
(min) (calc.) (lit.) (%)b (%)b (%)b (%)b (%)b (%)b (%)b (%)b (%)b (%)b (%)b (%)b
isocianato de ciclohexanila 5,14 1005 - - - - - - - - - 2,46 - - -
nonanal 6,39 1105 1102 - - - - - 0,44 - - 0,01 - - 0,98
2,8-dimetil-1,7-dioxaspiro[5, 5]undecano 6,85 1142 - - - 0,58 0,96 - 1,57 - - 1,23 - - 4,27
α - copaeno 9,76 1387 1376 1,09 2,19 - 1,73 - 0,17 - - 0,27 1,02 - 0,34
c
pentadeceno 10,78 1482 - - - - - - 0,90 - - - - - 0,53
Ar-curcumeno 10,83 1487 1483 1,30 1,80 - 1,11 - - - - - 1,10 - -
pentadecano 10,97 1500 1500 - - - 0,75 - 1,32 - - 0,29 - - 1,27
α - muroleno 11,07 1510 1499 0,01 - - 0,82 - - - - - 0,69 - -
δ - cadineno 11,27 1529 1524 4,41 4,26 - 4,67 - - - - - 4,25 0,02 -
1- cis- calameneno 11,32 1534 1521 1,21 1,29 - 1,39 - - - - - 1,22 - -
α - calacoreno 11,55 1557 1542 - - - - - - - - - 0,50 - -
acetato de laurila 12,05 1606 - - - - - 0,07 - - 0,08 - - 0,01 -
cadaleno 12,85 1690 1674 1,34 - - - - - - - - 0,58 - -
acetato de farnesila 14,16 1834 1818 - - - - 0,51 - - 0,55 - - 0,38 -
7,11,15-trimetil-3-metileno-hexadecatetraeno 14,86 1914 - - - - - 0,34 0,80 - 0,52 0,29 - 0,39 0,56
2-fenil-tridecano 14,87 1916 - 5,18 - - - - - - - - - - -
heneicosano 16,36 2100 2100 - - - - - - - - - - - 0,16
octadecatrien-1-ol 16,66 2139 - - - - - - - - - - - - 0,70
9-tricoseno 17,81 2295 - - - - - - 1,30 - - 0,30 - - 2,14
tricosano 17,85 2300 2300 1,46 - 1,16 1,99 - 1,12 1,89 - 0,53 1,66 - 1,22
acetato de geranil-geranila 17,91 2308 - - - - - 84,31 - - 88,40 - - 83,49 -
Z-9-pentacoseno 19,07 2476 - - - - 1,83 - 0,26 0,88 - 0,64 1,30 - 0,93
pentacosano 19,23 2500 2500 4,65 2,05 1,76 6,64 0,29 1,73 7,08 0,09 1,03 4,82 0,19 1,53
Z-9-heptacoseno 20,38 2676 - 2,50 1,83 1,99 2,50 0,26 2,18 3,23 0,08 1,39 4,67 0,26 2,83
heptacosano 20,54 2700 - 8,57 4,02 1,96 12,95 0,31 1,73 15,13 0,12 1,11 11,54 0,25 1,23
Z-9-octacoseno 21,10 2776 - - - 0,79 - 0,07 0,85 0,96 - 0,58 1,66 0,06 0,70
esqualeno 21,41 2815 - 1,64 2,06 - - - - 0,99 - - 1,13 - -
Z-9-nonacoseno 21,94 2879 - 45,26 56,17 46,80 41,73 3,25 31,20 50,80 1,30 26,11 39,57 2,69 25,84
nonacosano 22,12 2900 - 1,90 - - 2,50 - 2,40 2,90 - - 2,09 - -
9, 21-hentriacontadieno 23,75 3053 - 4,18 7,08 6,17 1,88 0,30 4,03 1,24 0,01 1,37 3,35 0,36 4,69
Z-9-hentriaconteno 24,05 3078 - 5,63 5,88 5,90 3,87 0,31 3,89 7,09 0,01 4,15 3,59 0,24 2,49
ergost-5-en-3β-ol 26,34 3233 - - - 8,32 - - 3,76 - - 4,97 - - 5,76
estigmast-5-en-3β-ol 27,84 3315 - - 3,04 2,60 - 0,24 2,24 - 0,01 3,22 - 0,29 2,90
hexadecenoato de octadecanila 28,58 3349 - - - 7,79 - - 4,11 - - 6,10 - - 7,61
hexadecanoato de hexadecanila 28,83 3360 - - - - - - 0,96 - - - - - -
octadecenoato de hexadecenila 33,59 3538 - - - - - - 1,35 - - 0,01 - - 3,59
octadecenoato de hexadecanila 33,99 3550 - - - 6,28 - - 16,91 - - 15,61 - - 12,21
não identificados - - - 9,67 8,33 7,90 12,68 9,74 14,78 7,81 8,83 28,33 15,26 11,37 15,52
TOTAL 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00
a 58 59 b
tR = Tempos de retenção; IR (calc.) = índices de retenção calculados pela equação de Van den Dool e Kratz ; IR (lit.) = índices de retenção retirados da literatura (Adams, 1995) ; (-): não achados. Abundâncias relativas, em
porcentagem, obtidas por Espectrometria de Massas. c A posição da dupla ligação não foi determinada para este alceno.

57
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

Tabela 6. Composição química dos extratos de operárias e machos de Plebeia droryana.


P. doryana - MACHOS P. doryana - OPERÁRIAS
COMPOSTOS tRa IRa IRa Ceras Abdomes Cabeças Ceras Abdomes Cabeças
(min.) (calc.) (lit.) (%)b (%)b (%)b (%)b (%)b (%)b
2 - nonanol 6,34 1100 1098 - 0,08 0,40 - - -
nonanal 6,39 1104 1102 - 0,15 - - - -
α - copaeno 9,76 1386 1376 - - - 0,33 0,04 0,22
Ar - curcumeno 10,83 1485 1483 - - - 0,17 - 0,17
δ - cadineno 11,27 1528 1524 0,37 - - 1,08 0,10 0,63
1 - cis - calameneno 11,32 1533 1521 - - - 0,23 - 0,14
ácido dodecanóico 11,57 1557 - - 0,16 - - - -
tetradecanal 12,21 1622 - - - - - 46,82 -
acetato de nerolidol 13,13 1719 1714 - - - 2,30 - -
(E, E) farnesol 13,18 1724 1722 - - - - 25,72 -
(E, Z) farnesol 13,35 1743 1742 - - - - 0,17 -
ácido tetradecanóico 13,50 1759 - - 0,48 0,33 - 0,16 -
ácido hexadecanóico 15,27 1963 - - 2,56 0,84 - 0,09 -
éster desconhecido 16,83 2161 - - 46,59 - - - -
ácido octadecanóico 16,93 2174 - - 5,61 - - - -
geranil-linalol 17,06 2191 - - - - 0,64 10,39 -
acetato de octadecanila 17,19 2208 2210 - - 0,66 - - -
Z-9-pentacoseno 19,07 2475 - 2,03 1,14 2,97 1,58 0,14 2,10
pentacosano 19,24 2500 2500 8,74 1,83 3,16 10,73 0,42 5,58
Z-9-hexacoseno 19,73 2579 - 1,00 0,48 1,04 0,71 0,34 0,89
Z-9-heptacoseno 20,39 2678 - 49,09 16,25 40,17 41,66 2,88 48,47
heptacosano 20,54 2700 - 6,00 0,89 1,23 4,98 0,21 2,36
dodecanoato de 21,03 2767 - - - - - 0,27 -
tetradecanila
Z-9-octacoseno 21,10 2777 - 0,42 0,16 - 0,31 - 0,27
esqualeno 21,41 2816 - - 0,17 - 1,43 - -
Z-9-nonacoseno 21,94 2879 - 10,33 2,92 5,92 12,58 0,78 12,30
nonacosano 22,12 2900 - 3,21 0,52 0,47 1,10 - 0,53
Z-9-hentriaconteno 24,06 3079 - 8,24 1,96 4,34 10,40 0,63 11,42
hentriacontano 24,31 3100 - 1,66 0,27 - - - -
ergostadien-3β-ol 26,22 3227 - - 1,95 9,66 - 0,38 4,40
ergost-5-en-3β-ol 26,36 3235 - - 1,68 5,53 - 0,01 1,00
9-tritriaconteno 27,13 3278 - 1,72 0,65 1,52 2,38 0,17 2,82
estigmast-5-en-3β-ol 27,86 3316 - - 2,62 2,79 - 0,71 0,61
estigmastadien-3β-ol 28,15 3329 - - 4,34 3,92 - 1,22 0,86
não identificados - - - 7,19 6,54 15,05 7,39 8,35 5,23
TOTAL 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00
58
a
tR = Tempos de retenção; IR (calc.) = índices de retenção calculados pela equação de Van den Dool e Kratz ; IR (lit.) = índices de
59
retenção retirados da literatura (Adams, 1995) ; (-): não achados.
b
Abundâncias relativas, em porcentagem, obtidas por Espectrometria de Massas.

O único alcadieno encontrado nos extratos das operárias e dos machos


de N. testaceicornis (Tabela 5), o hentriacontadieno, também foi derivatizado
com DMDS/I2 e o espectro de massas de seu derivado DMDS indicou que as
duplas ligações estão localizadas no C-9 e no C-21, pois apresentou como
fragmentos predominantes m/z: 173 [CH3(CH2)7CH=SCH3]+., 187
[CH3(CH2)8CH=SCH3]+., 339 [CH3(CH2)7CH=CH(CH2)10CH=SCH3]+. e 353
[CH3(CH2)8CH=CH(CH2)10CH=SCH3]+. (Figura 18). De acordo com Vincenti
e colaboradores (1987),61 o 9,21-hentriacontadieno formou um derivado

58
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

DMDS linear com quatro grupos CH3S, porque possuía mais de quatro grupos
metilenos entre as suas duplas ligações, pois se fosse um alcadieno com menos
de quatro grupos metilenos entre as duplas ligações formaria um derivado
cíclico (Esquemas 2a e 2b).

187
SCH3 SCH3
(CH2)5 (CH2)5 (CH2)5

SCH3 SCH3
173
(M+. - 94)

Figura 18. Espectro de massas do derivado DMDS do 9,21-hentriacontadieno.

S CH 3 S CH 3
n > 4 RC H-CH (C H 2 )n C H-CH R'

S CH3 S CH3

H 3C S (C H 2 ) n S CH3
a) RC H= C H(CH 2 )n CH = C H R' + 2CH 3 S S C H 3 + I2 1 < n < 3
R S R'

H 3C S S CH3
n = 0
R R'
S

(CH2)10 SCH3
+ H3C(CH2)7HCSCH3
+
S R
H3CS (CH2)10 SCH3
m/z 385
b)
R' S R
H3CS (CH2)10
R = -(CH2)8CH3 + H3CSCH(CH2)8CH3
+
R' = -(CH2)7CH3 R' S

m/z 371

Esquema 2. a) Estruturas dos derivados DMDS de moléculas contendo um sistema dieno,


as quais dependem do número de grupos metilenos localizados entre as duplas
ligações.61, 62 e b) fragmentações do derivado cíclico de DMDS do 9,21-
hentriacontadieno, o qual não é formado na reação.

59
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

A comparação dos compostos presentes nos extratos dos machos e das


operárias de N. testaceicornis e P. droryana demonstrou várias diferenças
químicas, tanto entre as castas de uma mesma espécie como também entre as
espécies.
Foi observado que o extrato das ceras cuticulares das operárias de N.
testaceicornis possuía dois Z-9-alcenos (C25 e C28) que não foram encontrados
no extrato das ceras dos machos de N. testaceicornis, o qual possui o 2-fenil-
tridecano, substância que não foi observada nas ceras das operárias (Tabela 5).
O extrato das ceras das operárias de P. droryana possui terpenos (α-copaeno,
Ar-curcumeno, 1-cis-calameneno, geranil-linalol e esqualeno) e o acetato de
nerolidol, os quais não estão presentes no extrato das ceras dos machos de P.
droryana (Tabela 6). Este último extrato possui o hentriacontano, substância
não detectada nas ceras das operárias.
O extrato das cabeças das operárias de N. testaceicornis possui o
nonanal, o α-copaeno, o pentadecano, dois Z-9-alcenos (C23 e C25) e o
octadecenoato de hexadecenila que não estão presentes no extrato das cabeças
dos machos de N. testaceicornis (Tabela 5). Este último extrato possui
compostos que estão presentes no extrato das cabeças das operárias. O extrato
das cabeças das operárias de P. droryana possui terpenos (α-copaeno, Ar-
curcumeno, δ-cadineno e 1-cis-calameneno) e o Z-9-octacoseno que não estão
presentes no extrato das cabeças dos machos de P. droryana (Tabela 6). Este
último possui o 2-nonanol, dois ácidos alifáticos lineares (C14 e C16) e o
acetato de octadecanila que não foram observados no extrato das cabeças das
operárias.
O extrato dos abdomes das operárias de N. testaceicornis possui
grande quantidade de ésteres (acetato de laurila, acetato de farnesila e,
principalmente, acetato de geranil-geranila) que não estão presentes no extrato

60
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

dos abdomes dos machos de N. testaceicornis (Tabela 5). Este último é


caracterizado pela presença de terpenos (α-copaeno, Ar-curcumeno, δ-
cadineno, 1-cis-calameneno e esqualeno) que não foram encontrados no
extrato dos abdomes das operárias. Enquanto, o extrato dos abdomes dos
machos de P. droryana possui o 2-nonanol (que ocorre também no extrato das
cabeças), o nonanal, dois ácidos alifáticos lineares (C12 e C18), dois n-alcanos
(C29 e C31), o esqualeno, o Z-9-octacoseno e um éster desconhecido que não
foram observados no extrato dos abdomes das operárias de P. droryana, o
qual possui terpenos (α-copaeno, δ-cadineno, E,E-farnesol, E,Z-farnesol e
geranil-linalol), o tetradecanal e o dodecanoato de tetradecanila que não foram
identificados no extrato dos abdomes dos machos de P. droryana (Tabela 6).
Nos extratos dos abdomes de operárias e machos de N. testaceicornis
foi encontrado um único esteróide, o estigmast-5-en-3β-ol, logo nos extratos
das cabeças foram encontrados dois esteróides, o estigmast-5-en-3β-ol e, em
maior abundância relativa, o ergost-5-en-3β-ol (Tabela 5). Contudo, nos
extratos dos abdomes e das cabeças de operárias e machos de P. droryana são
encontrados quatro esteróides, com maior abundância relativa nos extratos dos
abdomes o estigmastadien-3β-ol e nos extratos das cabeças o ergostadien-3β-
ol (Tabela 6). Existe, portanto, uma diferença da classe de esteróide dominante
nas cabeças (derivados do ergostanol) e nos abdomes (derivados do
estigmastanol) de operárias e machos de ambas espécies.
Os extratos das operárias das três colônias de N. testaceicornis
demonstraram uma diferença, pouco significativa, nas proporções das
abundâncias relativas de seus principais compostos e a ocorrência de alguns
compostos somente no extrato de uma das colônias (Tabela 5), o que,

61
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

provavelmente, auxilia as abelhas de cada colônia a diferenciar suas


companheiras, já que refere-se à mesma espécie.
Foram observados que os principais hidrocarbonetos que formam as
ceras cuticulares de operárias e machos de N. testaceicornis são três n-alcanos
(C25, C27 e C29), três Z-9-alcenos (C27, C29 e C31) e o 9,21-hentriacontadieno,
enquanto nas ceras cuticulares de P. droryana foram identificados três n-
alcanos (C25, C27 e C29) e uma quantidade grande de Z-9-alcenos (C25, C26, C27,
C29, C31 e C33) (Tabelas 5 e 6). De acordo com Singer (1998),77 os
hidrocarbonetos cuticulares são usados no sistema de reconhecimento de
insetos sociais e solitários, por isso estes hidrocarbonetos principais de N.
testaceicornis e P. droryana devem auxiliar estas abelhas no reconhecimento e
discriminação de seus companheiros, portanto devem ser os compostos
espécie/específicos. Verificou-se que nos extratos das ceras cuticulares e das
cabeças de operárias e machos de N. testaceicornis e P. droryana o Z-9-
nonacoseno e o Z-9-heptacoseno, respectivamente, são os componentes
majoritários (Tabelas 5 e 6).
Os componentes majoritários nos extratos dos abdomes de operárias e
machos de N. testaceicornis são o acetato de geranil-geranila e o Z-9-
nonacoseno, respectivamente (Tabela 5). O acetato de geranil-geranila foi
identificado através de suas fragmentações em seu espectro de massas (Figura
19 e Esquema 3) e por seus dados de ressonância magnética nuclear (RMN) de
13
C, DEPT 135° e 90° e RMN de 1H (Tabela 7; Anexos A9-A11, págs. 117 e
118). As análises de RMN da substância (2 mg, 68 % de pureza) foram
conseguidas a partir dos extratos dos abdomes das operárias de N.
testaceicornis das colônias 1 e 2. Segundo Cruz-López e colaboradores
(2001),22 o acetato de geranil-geranila é o componente majoritário das
77
SINGER, T. L. 1998. Roles of hydrocarbons in the recognition systems of insects. American Zoologist, 38, 394-405.

62
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

secreções da glândula de Dufour das operárias de N. testaceicornis. Portanto,


este composto deve ser o componente colônia/específico e espécie/específico
desta espécie, uma vez que as secreções da glândula de Dufour são utilizadas
para marcar a entrada do ninho e no reconhecimento de seus companheiros de
colônia.6, 78

a)

O
b)
O

(M+. -60) (M+. -15) (M+.)

Figura 19. a) Cromatograma de íons do extrato dos abdomes das operárias de N.


testaceicornis (colônia 1 + colônia 2); e b) espectro de massas do acetato de
geranil-geranila.

78
ABDALLA, F. C.; JONES, G. R.; MORGAN, D.; CRUZ-LANDIM, C. 2004. Chemical composition of the Dufour gland secretion in
queens of Melipona bicolor (Hymenoptera, Meliponini). Journal of the Brazilian Chemical Society, 15, 621-625.

63
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

O
O
+
O
HO

M 332 (C22H36O2)
m/z 272

O O
+
+
O O
m/z 69

M 332 (C22H36O2)

Esquema 3. Algumas das principais fragmentações do acetato de geranil-geranila.

Tabela 7. Dados espectrais de RMN de 1H e de 13C para o acetato de geranil-geranila


(499,88 e 125,69 MHz, respectivamente), em comparação com a literatura.79
Acetato de geranil-geranila Literatura
Carbono δC (com auxílio do DEPT δH (mult., J (Hz)) δH (mult., J (Hz))
135° e 90°)
1 61,42 (CH2) 4,60 (d, J= 6,5, 2H) 4,60 (d, J= 7,0, 2H)
2 118,24 (CH) 5,30 (t, J= 6,5, 1H) 5,35 (br. t, J= 7,0, 1H)
3, 7, 11, 15 144,50, 135,51 e 135,00 - -
16 a 20 17,70, 16,50, 16,10, 16,00 e 1,57, 1,60, 1,68 e 1,70 (4s, 15H) 1,55 e 1,65 (2s, 15H)
25,71 (CH3)
4, 5, 8, 9, 39,74, 26,22, 39,69, 26,64, 1,98 e 2,06 (2m, 12H) 1,85-2,30 (m, 12H)
12, 13 39,55 e 26,77 (CH2)
6, 10, 14 123,61, 124,19 e 124,40 5,10 (m, 3H) 4,90-5,30 (m, 3H)
(CH)
21 172,50 - -
22 21,10 (CH3) 2,04 (s, 3H) 2,00 (s, 3H)

22
O
15 13 11 9 7 5 3 1 21

20 19 18 17 O

Os compostos majoritários dos extratos dos abdomes de machos e


operárias de P. droryana são um éster desconhecido e o tetradecanal,
respectivamente (Tabela 6). De acordo com o que foi observado nos extratos
dos abdomes das operárias de N. testaceicornis, o tetradecanal dos extratos

79
ARM, C.; SCHWABE, R.; PFANDER, H. 1986. Synthese von (all-E, 14S)-14,15-epoxy-14,15-dihydrogeranylgeranial und 1,2-epoxy-
1,2-dihydrophytoen. Chimia, 40, 58-61.

64
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

dos abdomes das operárias de P. droryana provavelmente deve ser o


componente majoritário de suas glândulas de Dufour. Este éster desconhecido
presente no extrato dos abdomes dos machos de P. droryana não pode ser
separado e identificado por RMN por causa da pequena quantidade de amostra
(aproximadamente 1 mg), a qual possui o referido éster com uma abundância
relativa de 46,59 %. No entanto, a comparação do espectro de massas deste
éster desconhecido com o do (7Z, 10Z, 13Z)-hexadecatrienoato de metila
(Figuras 20a e 20b), obtido da base de dados Wiley 275 do CG-EM, revela
que este éster possui uma cadeia longa insaturada, pois possui os mesmos
fragmentos, com as mesmas intensidades.

a)

O
b)
55 95 135 163 O

(M+.)

Figura 20. Espectros de massas: a) éster desconhecido do extrato dos abdomes de machos de P.
droryana; e b) (7Z, 10Z, 13Z)-hexadecatrienoato de metila, obtido da base de dados
Wiley 275 do Espectrômetro de Massas.

4.2. Conclusões parciais.


As análises dos extratos das ceras cuticulares, dos abdomes e das
cabeças de operárias e machos de N. testaceicornis e P. droryana possibilitou
verificar compostos químicos que diferenciam estas castas e espécies.

65
CAPÍTULO 2 - DIFERENCIAÇÃO QUÍMICA DE OPERÁRIAS E MACHOS DE Nannotrigona testaceicornis E Plebeia droryana

Compostos majoritários diferentes foram observados nos abdomes de


operárias e machos de N. testaceicornis (acetato de geranil-geranila e Z-9-
nonacoseno, respectivamente) e de P. droryana (tetradecanal e um éster
desconhecido), os quais revelaram uma diferença química marcante entre estas
castas e estas duas espécies de meliponíneos.
Vários compostos que diferenciam as castas de ambas espécies foram
observados nas cabeças e nas ceras cuticulares. Nas cabeças das operárias de
P. doryana existia α-copaeno, Ar-curcumeno, δ-cadineno, 1-cis-calameneno e
Z-9-octacoseno, enquanto nos machos estão presentes o 2-nonanol, dois ácidos
alifáticos lineares (C14 e C16) e o acetato de octadecanila. Entretanto, nas
cabeças dos machos de N. testaceicornis não houve nenhum composto que
não existisse nas cabeças das operárias, mas as operárias possuíam o nonanal,
o α-copaeno, o pentadecano, dois Z-9-alcenos (C23 e C25) e o octadecenoato de
hexadecenila. As ceras cuticulares das operárias de N. testaceicornis possuíam
dois Z-9-alcenos (C25 e C28), enquanto os machos possuíam o 2-fenil-
tridecano. Em P. droryana, as ceras cuticulares das operárias possuíam α-
copaeno, Ar-curcumeno, 1-cis-calameneno, geranil-linalol, esqualeno e
acetato de nerolidol, enquanto somente nos machos existe o hentriacontano.
Uma variação nos hidrocarbonetos cuticulares entre as espécies, N.
testaceicornis [n-alcanos (C25, C27 e C29), Z-9-alcenos (C27, C29 e C31) e o 9,21-
hentriacontadieno] e P. doryana [n-alcanos (C25, C27 e C29) e Z-9-alcenos (C25,
C26, C27, C29, C31 e C33), revelou, segundo Singer (1998),77 além da diferença
de composição, os possíveis compostos espécie/específicos que auxiliam estas
abelhas na identificação e discriminação de seus companheiros.

66
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

CAPÍTULO 3

67
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

CAPÍTULO 3 – Determinação do componente principal do óleo floral de Lophanthera


lactescens Ducke (Malpighiaceae) e verificação química da coleta de seu óleo floral por
Tetragonisca angustula Latreille, 1811 (Apidae: Meliponinae) e Centris trigonoides
Lepeletier, 1841 (Anthophoridae: Centridini).

5. Introdução.

Lophanthera lactescens é uma árvore nativa da região amazônica


brasileira, pertencente à família Malpighiaceae (Figuras 21a e 21b). É
conhecida popularmente como “lofantera da Amazônia”, “chuva de ouro” e
“lanterneira”. Pode alcançar de 10 a 20 metros de altura. É uma árvore muito
utilizada na região sudeste do Brasil para fins decorativos. Na medicina
popular, suas folhas e cascas do tronco são usadas como febrífugo contra a
malária. De acordo com a literatura, foi identificado um novo alcalóide, a
lophanterina, em suas folhas e a presença de estigmasta-4,22-dien-3-ona,
ergost-4-en-3-ona, estigmasterol, ergost-5-en-3-ol, β-amirenona e um 27-nor-
triterpeno inédito em sua madeira.80, 81, 82

a) b)
Figura 21. a) Árvores de Lophanthera lactescens no estacionamento do Almoxarifado
Central da UNICAMP; b) Folhas e flores de L. lactescens, em destaque. Fotos:
Adriana Pianaro.

80
LORENZI, H. 1992. Árvores Brasileiras - Manual de Identificação e Cultivo de Plantas Arbóreas Nativas do Brasil. São Paulo:
Ed. Plantarum Ltda, 233 p.
81
RIBEIRO, O.; MACHADO, A. 1946. Lophanterine, a new alkaloid. Anais da Associação de Química do Brasil, 5, 39-42.
82
ABREU, H. S.; BRAZ-FILHO, R.; GOTTLIEB, H. E.; SHOOLERY, J. N. 1990. A nor-triterpenoid from Lophanthera lactescens.
Phytochemistry, 29, 2257-2261.

69
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

A maioria das plantas pertencentes à família Malpighiaceae, entre elas


L. lactescens, possuem em suas flores estruturas denominadas elaióforos
epiteliais que produzem óleos florais que são utilizados por seus polinizadores.
As abelhas da família Anthophoridae são a maioria entre os polinizadores que
coletam estes óleos florais, os quais são utilizados por elas principalmente
para o aprovisionamento das suas células de cria, podendo ser adicionados
sozinhos ou em mistura com néctar e até modificados, provavelmente,
enzimaticamente.48 Com a finalidade de identificar o componente majoritário
do óleo floral de L. lactescens, várias flores de árvores cultivadas no
estacionamento do Almoxarifado Central da UNICAMP (herbário UEC, n°
143475) foram coletadas em abril de 2004 (a obtenção do óleo floral de L.
lactescens está descrito na Parte Experimental, págs. 98 e 99) e observações
biológicas foram realizadas para descobrir suas abelhas polinizadoras que
coletam seu óleo floral.

5.1. Resultados e discussão.

O óleo floral bruto de L. lactescens foi analisado por espectrometria de


absorção na região do infravermelho (IV) e por RMN de 13C. Seu espectro de
IV revelou a presença marcante de ácidos alifáticos devido a uma faixa larga
em 3372 cm-1 de estiramento -OH, dois sinais proeminentes em 2925 e 2853
cm-1 de estiramento C-H alifático, um sinal em 1737 cm-1 de estiramento C=O,
um sinal em 1465 cm-1 de deformação angular simétrica no plano de CH2, um
sinal em 1371 cm-1 de deformação angular simétrica no plano de CH3 e um
sinal em 1234 cm-1 de estiramento C-O (Figura 22). O espectro de RMN de
13
C do óleo bruto não apresentou sinal de metila de éster metílico (região de

70
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

50 a 55 ppm) (Figura 23), assim uma parte do óleo floral bruto (2,29 g) foi
metilada com solução etérea de diazometano e analisada por CG-EM.83, 84

40

35
Transmitância

30 3372

1465
25 1371

20 2853
1234
2925
15 1737

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500


-1
Número de onda (cm )

Figura 22. Espectro de absorção no infravermelho do óleo floral bruto de L. lactescens


(filme sobre placas de NaCl).

Não há sinal de metila de éster metílico

13
Figura 23. Espectro de RMN de C do óleo floral bruto de L. lactescens (75,45 MHz,
CDCl3, TMS).

O espectro de massas do óleo floral metilado de L. lactescens revelou a


presença de um componente principal (1) (Figura 24). Com a intenção de

83
SILVERSTEIN, R. M.; WEBSTER, F. X. 2000. Identificação Espectrométrica de Compostos Orgânicos. 6a. ed. Rio de Janeiro:
LTC - Livros Técnicos e Científicos Editora, 460 p.
84
PAVIA, D. L.; LAMPMAN, G. M.; KRIZ-JR, G. S. 1979. Introduction to Spectroscopy: a Guide for Students of Organic
Chemistry. USA: Saunders College Publishing, 367 p.

71
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

separar o composto (1), o óleo floral metilado foi cromatografado em coluna


de sílica gel obtendo frações que foram analisadas por cromatografia de
camada delgada (CCD) e por CG-EM (Parte Experimental, págs. 88, 93 a 95,
99). A fração LL 7-8 (24 mg) possuía uma série de 3-acetoxi ésteres metílicos
(C16, C17, C18 e C20) (Figuras 25a-25e), entre eles o componente principal
(1) do óleo floral metilado, o 3-acetoxi-octadecanoato de metila, os quais
foram identificados devido à co-injeção da fração LL 7-8 com o padrão
sintético do 3-acetoxi-eicosanoato de metila, generosamente cedido pela
Profa. Dra. Mariza G. Reis.85 Na tentativa de separar a substância (1) desta
série, a fração LL 7-8 foi novamente cromatografada na mesma coluna de
sílica gel, obtendo assim a substância (1) (23 mg) com um bom nível de
pureza (89 %), cuja identificação foi confirmada por espectrometria de massas
13
de alta resolução (EMAR), IV, RMN de C, RMN de 1H e por técnicas
13
bidimensionais de RMN de C [DEPT 135° e 90°, gCOSY, gHMBC e
gHSQC] (Tabela 8; Anexos A12-A19, págs. 119 a 122).

(1)

Figura 24. Cromatograma de íons do óleo floral metilado de L. lactescens. Em destaque, a


substância (1) - componente principal.

85
REIS, M. G. 2005. Caracteres Químicos em Estudos de Filogenia e Biologia de Polinização de Espécies de Oncidiinae
(Orchidaceae). Tese de doutorado, Instituto de Química, UNICAMP, Campinas-SP, 306 p.

72
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

N=14

(1)

a)

N=12
N=13 N=16

O
b) O O

(CH2 )12 O

(M+. -43)
(M+. -60)

c) O
O O

(CH2)13 O

(M+. -43)
+.
(M -60)

O
d) O O

(CH 2)14 O
3-acetoxi-octadecanoato de metila (1) +.
(M+. -60) (M -43)
(M+. +1)

e) O
O O

(CH2)16 O
(M+. -60)
(M+. -43)

(M+. +1)

Figura 25. a) Cromatograma de íons da fração LL 7-8, série de 3-acetoxi ésteres metílicos,
em destaque a substância (1); b) a e) espectros de massas dos componentes da
fração LL 7-8, em ordem crescente.

73
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

Tabela 8. Dados espectrais de RMN de 1H e de 13C para o 3-acetoxi-octadecanoato de


metila (1) (499,88 e 125,69 MHz, respectivamente), com auxílio de técnicas
bidimensionais (gHSQC H1,C13 (1J); gHMBC H1,C13 (nJ); gCOSY H1,H1 e
DEPT 135° e 90°).
n
Carbono δH (mult., J (Hz)) δC (com auxílio de gHMBC H1,C13 ( J) gCOSY H1,H1
1
gHSQC H1,C13 ( J) e
DEPT 135° e 90°)
1 - 170,91 (C=O) 2,54 e 2,59 (C-2); 3,68 -
(C-21); 5,20 (C-3)
2 2,54 (dd, 1H, J = 5,5 e 15,5); 39,03 (CH2) 5,20 (C-3) 5,20 (C-3)
2,59 (dd, 1H, J = 7,3 e 15,5)
3 5,20 (m, 1H, J = 5,5) 70,54 (CH) 2,54 e 2,59 (C-2); 2,04 2,54 e 2,59 (C-2); 1,60 (C-4)
(C-20)
4 1,60 (m, 2H) 34,03 (CH2) 2,54 e 2,59 (C-2) 1,25 (C5-17); 5,20 (C-3)
5 1,25 (m) 25,10 (CH2) 5,20 (C-3) 0,88 (C-18); 1,60 (C-4)
6-15 1,25 (m) 29,52 (10 CH2) 1,25 (C-5 e C-16-17) 0,88 (C-18); 1,60 (C-4)
16 1,25 (m) 22,67 (CH2) 0,88 (C-18); 1,25 (C5-15 0,88 (C-18); 1,60 (C-4)
e C-17)
17 1,25 (m) 31,90 (CH2) 0,88 (C-18) 0,88 (C-18); 1,60 (C-4)
18 0,88 (t, 3H, J = 6,7) 14,10 (CH3) 1,25 (C-5-17) 1,25 (C-5-17)
19 - 170,41 (C=O) 2,04 (C-20); 5,20 (C-3) -
20 2,04 (s, 3H) 21,07 (CH3) - -
21 3,68 (s, 3H) 51,73 (CH3) - -

20

O 19

O O
17 15 13 11 9 7 5 3 1 21
O

O espectro de IV do 3-acetoxi-octadecanoato de metila apresentou um


sinal largo em 1746 cm-1 de estiramento de C=O (Anexo A13, pág. 119),
devido a união dos dois sinais de estiramento de C=O das duas carbonilas da
molécula.
13
De acordo com a análise de RMN de C do óleo floral bruto de L.
lactescens (Figura 23), o 3-acetoxi-octadecanoato de metila (1) como também
os outros ésteres metílicos presente no óleo floral metilado foram originados
da metilação do óleo floral com diazometano e, na realidade, estão presentes
no óleo floral bruto de L. lactescens na forma de seus ácidos. Segundo Seigler
e colaboradores (1978),53 o estudo químico de quatro espécies do gênero
Krameria (Krameriaceae) revelaram a predominância de três ácidos graxos
livres: o ácido 3-acetoxi-hexadecanóico, o ácido 3-acetoxi-octadecanóico e o
ácido 3-acetoxi-eicosanóico. Estes resultados demonstram que os

74
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

componentes principais dos óleos florais destas espécies do gênero Krameria


e de L. lactescens são ácidos com um grupo acetoxi na posição 3.
As observações biológicas realizadas nas árvores de L. lactescens
mostraram que suas flores são visitadas por operárias de Tetragonisca
angustula Latreille (Apidae: Meliponinae), conhecida popularmente como
abelha jataí, as quais foram verificadas coletando os óleos florais que
escorrem dos elaióforos epiteliais e descem pelos cabos das flores, o período
de suas visitas foi das 8 horas da manhã às 6 horas da tarde (Figuras 26a, 26c,
26d e 26e). Estas abelhas não polinizam as flores de L. lactescens, pois elas
simplesmente coletam os óleos florais de L. lactescens sem tocar os estames
florais. No entanto, também foi verificada a presença de abelhas solitárias
fêmeas de Centris trigonoides Lepeletier (Anthophoridae: Centridini) (Figuras
26b e 26f), das 11 horas da manhã às 3 horas da tarde, nas flores de L.
lactescens. Estas abelhas são polinizadoras das flores de L. lactescens, uma
vez que, ao visitarem as flores, prendem-se ou abraçam as pétalas posteriores
com auxílio das mandíbulas, ficando a porção ventral dos abdomes das fêmeas
de C. trigonoides em contato com as anteras e os estigmas das flores de L.
lactescens.86 Segundo Sigrist (2001),86 várias espécies da família
Malpighiaceae são polinizadas por abelhas solitárias dos gêneros Centris,
Epicharis e Monoeca. As abelhas visitantes de L. lactescens foram
identificadas pelo Prof. Dr. Gabriel A. R. de Melo do Centro de Estudos
Faunísticos e Ambientais - o CDZoo, da Universidade Federal do Paraná,
Curitiba-PR. Não existe na literatura nenhum trabalho relacionando estas
abelhas com as flores de L. lactescens.

86
SIGRIST, M. R. 2001. Biologia Reprodutiva de Doze Espécies Simpátricas de Malpighiaceae em Mata Semidecídua do Sudeste
Brasileiro. Tese de doutorado, Instituto de Biologia, UNICAMP, Campinas-SP, 122 p.

75
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

a) b)

c) d)

e) f)
Figura 26. a) Operária de T. angustula coletando óleo floral de L. lactescens; b) fêmea de
C. trigonoides coletando óleo floral e polinizando uma flor de L. lactescens; c)
muro do Almoxarifado Central da UNICAMP com ninho de T. angustula; d)
entrada do ninho de T. angustula, em destaque; e) operária de T. angustula
(vista lateral);87 e f) fêmea de C. trigonoides, vista lateral. Fotos: Adriana
Pianaro.

87
IMPERATRIZ-FONSECA, V. L.; NOGUEIRA-NETO, P.; LAURINO, M. C.; SILVA, P. N.; GIANNINI, T. C. 2005. Tetragonisca
angustula angustula Latreille. Disponível em: <http://www.ib.usp.br/beesp/tetragonisca_angustula_angustula.htm>. Acesso em: 08
de agosto de 2006.

76
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

Para confirmar a coleta do óleo floral de L. lactescens por estas espécies


de abelhas, foram obtidos extratos, os quais foram metilados e analisados por
CG-EM (Parte Experimental, págs. 88 e 89, 93 a 95, 99; Figuras 27a e 27c).
Ao co-injetar os extratos das duas espécies de abelhas com o componente
majoritário (1) do óleo floral metilado de L. lactescens foi confirmada a
presença dele nos extratos (Figuras 27b e 27d), comprovando que elas
estavam realmente coletando o óleo floral.

77
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

a) O
O O

(CH2)14 O
3-acetoxi-octadecanoato de metila (1)

b)

c)

d)

Figura 27. Cromatogramas de íons: a) extrato metilado das operárias de T. angustula, b)


co-injeção do extrato metilado das operárias de T. angustula com o 3-acetoxi-
octadecanoato de metila (1), c) extrato metilado das fêmeas de C. trigonoides
e d) co-injeção do extrato metilado das fêmeas de C. trigonoides com o 3-
acetoxi-octadecanoato de metila (1).

78
CAPÍTULO 3 – ÓLEO FLORAL DE Lophanthera lactescens E SUAS ABELHAS COLETORAS DE ÓLEO

5.2. Conclusões parciais.

O estudo químico do óleo floral metilado de Lophanthera lactescens


(Malpighiaceae) forneceu o isolamento de seu componente principal, o 3-
acetoxi-octadecanoato de metila, o qual está presente no óleo floral bruto na
forma de seu ácido, o ácido 3-acetoxi-octadecanóico.
Este trabalho proporcionou o descobrimento de polinizadores das flores
de L. lactescens, as fêmeas de Centris trigonoides (Anthophoridae:
Centridini), e também a confirmação química da coleta do óleo floral de L.
lactescens por elas e pelas operárias de Tetragonisca angustula (Apidae:
Meliponinae), as últimas de comportamento oportunista.

79
CONCLUSÕES FINAIS

CONCLUSÕES FINAIS

81
CONCLUSÕES FINAIS

6. Conclusões Finais.

O presente trabalho proporcionou o desenvolvimento de três tópicos


relacionados a área de Ecologia Química, fornecendo uma importante
contribuição através da descoberta de vários compostos químicos que mediam
as relações entre castas e espécies de meliponíneos como também entre
planta/polinizador. Bioensaios envolvendo estes compostos devem ser
desenvolvidos em trabalhos futuros.
O estudo químico dos batumes de Melipona scutellaris e Melipona
rufiventris foi o primeiro trabalho a determinar a composição química de
batumes de meliponíneos, o qual confirmou que, nos batumes destas espécies,
existe a cera que é produzida por suas operárias.
Através das análises químicas, foi demonstrado que são as operárias de
M. scutellaris que trazem terpenos e compostos fenólicos para o batume da
colônia invadida, sendo possivelmente estes compostos os responsáveis pela
expulsão das operárias invasoras de M. rufiventris, o que justifica o motivo
desta invasão ser temporária.
Nas análises dos extratos das ceras cuticulares, dos abdomes e das
cabeças de operárias e machos de Nannotrigona testaceicornis e Plebeia
droryana, foi verificada a presença de vários compostos que diferenciam estas
castas e espécies, entre eles, hidrocarbonetos cuticulares nos extratos das ceras
de operárias e machos de N. testaceicornis [n-alcanos (C25, C27 e C29), Z-9-
alcenos (C27, C29 e C31) e o 9,21-hentriacontadieno] e de P. doryana [os
mesmos n-alcanos (C25, C27 e C29) e uma quantidade grande de Z-9-alcenos
(C25, C26, C27, C29, C31 e C33)], os quais são, possivelmente, os compostos
espécie/específicos que auxiliam estas abelhas na identificação e
discriminação de seus companheiros.

83
CONCLUSÕES FINAIS

Vale a pena destacar que uma diferença química marcante foi observada
entre as castas e estas duas espécies de meliponíneos devido à presença de
compostos majoritários diferentes nos extratos dos abdomes de operárias e
machos de N. testaceicornis (acetato de geranil-geranila e Z-9-nonacoseno,
respectivamente) e também nos extratos dos abdomes de operárias e machos
de P. droryana (tetradecanal e um éster desconhecido).
O óleo floral metilado de Lophanthera lactescens (Malpighiaceae)
forneceu o isolamento de seu componente principal, o 3-acetoxi-
octadecanoato de metila, o qual está presente no óleo floral bruto na forma de
seu ácido. A observação biológica das árvores de L. lactescens revelou seus
polinizadores, as fêmeas de Centris trigonoides (Anthophoridae: Centridini), e
foi confirmada quimicamente a coleta do óleo floral de L. lactescens por elas e
pelas operárias de Tetragonisca angustula (Apidae: Meliponinae), estas
últimas com comportamento oportunista.
Os estudos revelaram os vários compostos responsáveis pelas interações
entre os organismos em questão, mostrando fundamental relacionar as análises
químicas com observações biológicas. Por isso, outras pesquisas devem ser
realizadas, formando profissionais com uma visão mais interdisciplinar.

84
PARTE EXPERIMENTAL

PARTE EXPERIMENTAL

85
PARTE EXPERIMENTAL

7. Parte Experimental.

7.1. Equipamentos e métodos.

CG-EM – Cromatografia Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas:


As análises de CG-EM foram feitas em cromatógrafo a gás marca
Agilent modelo 6890, acoplado a um detector seletivo de massas operando por
impacto de elétrons a 70 eV marca Hewlett Packard modelo 5973. O
cromatógrafo operava com coluna do tipo DB-5 (30 m x 0,25 mm x 0,25 µm).
Empregou-se hélio de alta pureza como gás de arraste, com fluxo de 1 ml/min.
As análises foram realizadas com injetor operando a 250 °C e interface a 280
°C. As amostras analisadas foram mantidas com uma concentração de 4
mg/ml sendo um volume de 1 µl injetado no CG-EM, sem divisão de fluxo
(modo splitless). A detecção por varredura de íons permaneceu, em todas as
análises, no intervalo m/z 40 – 550 (2,89 scans/s).

a) Os seguintes programas de temperatura do forno foram utilizados nas


análises por CG-EM das frações dos batumes:
- Frações A: Forno com temperatura inicial de 50 °C com incremento de
temperatura de 12 °C/min até 290 °C e 10 minutos isotermicamente à
290 °C.
- Frações B, C e E: Forno com temperatura inicial de 50 °C com
incremento de temperatura de 12 °C/min até 290 °C e 20 minutos
isotermicamente à 290 °C.
- Frações D: Forno com temperatura inicial de 50 °C com incremento de
temperatura de 12 °C/min até 290 °C e 22 minutos isotermicamente à
290 °C.

87
PARTE EXPERIMENTAL

b) O seguinte programa de temperatura do forno foi utilizado para as análises


das frações que foram derivatizadas com dissulfeto de dimetila (DMDS):
- Frações derivatizadas com DMDS: Forno com temperatura inicial de
50 °C com incremento de temperatura de 12 °C/min até 290 °C e 50
minutos isotermicamente à 290 °C.

c) O seguinte programa de temperatura do forno foi utilizado para as análises


por CG-EM dos extratos das ceras cuticulares, das cabeças e dos abdomes de
operárias e machos de Nannotrigona testaceicornis e Plebeia droryana:
- Extratos de N. testaceicornis e P. droryana: Forno com temperatura
inicial de 50 °C com incremento de temperatura de 12 °C/min até 290
°C e 20 minutos isotermicamente à 290 °C.

d) Os seguintes programas de temperatura do forno foram utilizados para as


análises do óleo floral metilado e das frações de Lophanthera lactescens:
- Óleo floral metilado: Forno com temperatura inicial de 50 °C com
incremento de temperatura de 5 °C/min até 290 °C e 22 minutos
isotermicamente à 290 °C.
- Frações: Forno com temperatura inicial de 50 °C com incremento de
temperatura de 12 °C/min até 290 °C e 10 minutos isotermicamente à
290 °C.

e) Os seguintes programas de temperatura do forno foram utilizados para as


análises por CG-EM dos extratos metilados das operárias de Tetragonisca
angustula e das fêmeas de Centris trigonoides:

88
PARTE EXPERIMENTAL

- Extratos metilados de T. angustula e C. trigonoides: Forno com


temperatura inicial de 50 °C com incremento de temperatura de 5
°C/min até 290 °C e 22 minutos isotermicamente à 290 °C.

EMAR – Espectrometria de Massas de Alta Resolução:


As análises foram feitas em um espectrômetro da marca Micromass
modelo VG AutoSpec (IE: 70 eV).

IV – Espectrometria no Infravermelho:
Os espectros de absorção na região do infravermelho foram obtidos no
espectrofotômetro BOMEM MICHELSON MB, com transformada de Fourier.
As amostras foram solubilizadas em diclorometano e examinadas na forma de
um filme entre placas de NaCl. As absorções foram expressas em número de
onda (cm-1).

RMN de 1H – Espectrometria de Ressonância Magnética Nuclear de


Hidrogênio:
Os espectros de ressonância magnética nuclear de hidrogênio foram
obtidos em equipamento Varian Inova, operando a 499,88 MHz, ou em
equipamento Bruker Gemini, operando a 300,06 MHz. Utilizou-se
clorofórmio deuterado (CDCl3) como solvente e tetrametilsilano (TMS) como
referência interna (δ 0,0). As análises foram realizadas à temperatura
ambiente. Os valores de deslocamentos químicos foram obtidos em ppm e as
constantes de acoplamento em Hertz (Hz). Em um caso foi utilizada a técnica
gCOSY permitindo verificar em mapas de contorno o acoplamento entre
hidrogênios a três ligações.

89
PARTE EXPERIMENTAL

13
RMN de C – Espectrometria de Ressonância Magnética Nuclear de
Carbono:
Os espectros de ressonância magnética nuclear de carbono foram
obtidos em equipamento Varian Inova, operando a 125,69 MHz, ou em
equipamento Bruker Gemini, operando a 75,45 MHz. Utilizou-se CDCl3 como
solvente e TMS como referência interna (δ 0,0). As análises foram realizadas
à temperatura ambiente. Os valores de deslocamentos químicos foram obtidos
em ppm e as constantes de acoplamento em Hertz (Hz). Como dado auxiliar
foi obtido um espectro tipo DEPT 135º, onde: CH3 e CH aparecem como
sinais positivos, CH2 como sinais negativos e carbonos quaternários com
intensidade zero; e tipo DEPT 90º, a qual mostra apenas sinais de CH.
Espectros bidimensionais de correlações (1H, 13C) a uma ligação (HSQC) e a
múltiplas ligações (gHMBC) foram utilizados nas assinalações dos dados
espectroscópicos.

Outros Equipamentos:
Vidrarias em geral, geladeira e freezer da marca ELECTROLUX,
balança analítica SARTORIUS BL1205, estufa de secagem e evaporador
rotativo marca BÜCHI B-480.

7.2. Solventes, reagentes e materiais.

Solventes e Reagentes:
Todos os solventes utilizados são da marca Synth (Brasil), grau P.A. de
pureza, os quais foram destilados ou bidestilados antes do uso.88 O iodo

88
PERIN, D. D.; ARMAREGO, W. L. F.; PERRIN, D. R. 1980. Purification of Laboratory Chemicals. 2° ed. Oxford: Pergamon
Press, 568 p.

90
PARTE EXPERIMENTAL

(Rothyl, EUA), dissulfeto de dimetila (Aldrich, Alemanha), sulfato de


magnésio anidro (Nuclear, Brasil), tiossulfato de sódio (Merck, Brasil),
clorofórmio deuterado (Cambridge Isotope Laboratories, EUA), p-anisaldeído
(Sigma-Aldrich, EUA), ácido acético glacial (Synth, Brasil), ácido sulfúrico
(Nuclear, Brasil), Diazald (Aldrich, EUA) e hidróxido de potássio (Synth,
Brasil) foram usados no mesmo estado como recebidos.

Algodão tratado:
O algodão é colocado em um Soxlet com acetato de etila. Assim, a
maioria dos contaminantes do algodão são retirados. Após a limpeza, o
algodão é seco e guardado em um recipiente com tampa.

CC – Cromatografia em Coluna:
As colunas para cromatografia líquida clássica foram feitas empregando
sílica gel 60 de granulometria 0,035-0,070 mm (Merck).

CCD – Cromatografia em Camada Delgada:


As análises em cromatografia de camada delgada foram feitas em placas
de sílica gel 60 F254 suportadas sobre folhas de alumínio (Merck), sendo
colocadas em cuba de vidro com o solvente ou mistura de solventes adequada
para a separação das substâncias das frações. Os reveladores empregados
foram: à técnica física de exposição à luz ultravioleta (254 nm) e a revelação
química através de aspersão ou mergulho das placas em solução de p-
anisaldeído 5%, seguida de aquecimento até aparecimento de manchas
coloridas. Todas as frações que apresentavam semelhanças em CCD foram
reunidas.

91
PARTE EXPERIMENTAL

7.3. Solução de p-anisaldeído 5%.

Em um béquer de 200 ml foram dissolvidos 5 ml de p-anisaldeído em


90 ml de etanol e, em seguida, foi adicionado 1 ml de ácido acético glacial. A
mistura reacional foi colocada em banho de gelo e, cuidadosamente aos
poucos e com agitação, foram adicionados 5 ml de ácido sulfúrico
concentrado. Como a reação é exotérmica, foi preciso esperar alguns minutos
até que a solução esfria-se para ser usada na revelação das placas de CCD.

7.4. Padrão de n-alcanos.

O padrão de n-alcanos (C10 - C37), utilizado para o cálculo dos índices


de retenção, foi obtido por cromatografia em coluna de sílica gel (200 g) de
100 ml de petróleo bruto utilizando hexano bidestilado como eluente. As seis
primeiras frações de 50 ml foram analisadas por CCD e CG-EM, sendo as
quatro primeiras frações reunidas, formando o padrão de n-alcanos utilizado.

7.5. Índices de retenção.

Os índices de retenção dos compostos foram obtidos através da co-


injeção das amostras com a mistura de n-alcanos padrão (C10 - C37) por CG-
EM, sendo calculados com a equação de van den Dool e Kratz (Equação 1).58
Os valores calculados foram comparados com dados da literatura.59 Os índices
de retenção dos n-alcanos padrão (C10 - C37) foram tidos como números
inteiros de 1000 a 3700.

92
PARTE EXPERIMENTAL

 t R( X ) − tR( Z ) 
(1) IR = 100z + 100 
 t R ( Z +1) − t R ( Z ) 
Onde:
z - número de átomos de carbono do n-alcano que elui antes da substância analisada (X);
tR(X) - tempo de retenção da substância analisada;
tR(Z) - tempo de retenção do n-alcano que elui antes da substância analisada;
tR(Z+1) - tempo de retenção do n-alcano que elui depois da substância analisada.

7.6. Derivatização com DMDS/I2.

As amostras que possuíam alcenos e alcadienos foram solubilizadas em


2 mL de hexano bidestilado e tratadas com 200 µL de dissulfeto de dimetila
(DMDS) e 100 µL da solução de iodo (32 mg de I2 em 2 mL de éter
destilado). As misturas reacionais foram colocadas em agitação magnética
durante a noite com temperatura de 50 °C. As reações foram interrompidas
com 2 mL da solução aquosa de tiossulfato de sódio (1g de Na2S2O3 em 10
mL de água destilada). A fase orgânica foi extraída, seca com sulfato de
magnésio anidro e evaporada em atmosfera de nitrogênio. As amostras
derivatizadas foram solubilizadas em 1 mL de hexano bidestilado e 1 µL de
cada amostra foi analisada por CG-EM. 60

7.7. Preparação de diazometano.

O diazometano é altamente tóxico e explosivo, por isso para sua


preparação é recomendável o uso de uma capela que disponha de um poderoso
sistema de exaustão, a qual possua também um anteparo de segurança. A
solução etérea de diazometano deve ser guardada no freezer (T = -18 °C).

93
PARTE EXPERIMENTAL

O seguinte procedimento deve ser seguido para a preparação da solução


etérea de diazometano: em um balão de 200 ml de duas bocas, adicione 50 ml
de álcool etílico e 15 ml de uma solução de hidróxido de potássio (10 g de
KOH em 15 ml de água destilada). Adapte um funil de separação e um
condensador de camisa dupla neste balão. Ligue o condensador a dois
erlenmeyers, um de 500 ml e outro de 100 ml, respectivamente, para atuarem
como coletores. Adicione 50 ml de éter etílico no erlenmeyer de 500 ml e 30
ml de éter etílico no erlenmeyer de 100 ml, ambos devem estar mergulhados
em uma mistura de sal e gelo. O tubo que sai do condensador deve ficar
abaixo da superfície do éter no erlenmeyer de 500 ml e também o tubo que vai
até o erlenmeyer de 100 ml. Aqueça o balão de destilação em banho-maria a
60-65 °C. Coloque no funil de separação 43 g de Diazald (p-
tolilsulfonilmetilnitrosamida) e 250 ml de éter etílico, regule a velocidade de
adição ao balão de modo que fique na mesma velocidade da destilação.
Quando o funil de decantação esvaziar, adicione mais 30 ml de éter etílico,
gradativamente, até que o éter destilado fique incolor. Esse procedimento
fornece um rendimento de aproximadamente 15 ml de solução etérea contendo
0,16 a 0,18 g de diazometano (Figura 28).89 A reação de ácidos com
diazometano é um bom método de preparação de ésteres metílicos em
pequenas quantidades, pois ocorre em condições brandas com excelente
rendimento.90

89
VOGEL, A. I. 1989. Vogel’s Textbook of Practical Organic Chemistry. 5a ed. London: Longman Scientific & Technical, 1514 p.
90
ALLINGER, N. L.; CAVA, M. P.; DEJONGH, D. C.; LEBEL, N. A.; STEVENS, C. L. 1978. Química Orgânica. 2a ed. Rio de
Janeiro: Editora Guanabara, 961 p.

94
PARTE EXPERIMENTAL

O O
S N + KOH S OK + CH2N2 + H2O
N O
O O diazometano

p-tolilsulfonilmetilnitrosamida (Diazald)

Figura 28. Reação de p-tolilsulfonilmetilnitrosamida com hidróxido de potássio para


obtenção de diazometano.89

Procedimento de metilação de amostra:


A amostra é solubilizada em 1 ml de éter etílico e, então, é adicionado 1
ml de solução etérea de diazometano. A amostra que está sendo metilada deve
permanecer em repouso por 30 minutos em capela com exaustor.
O diazometano ao ser gotejado sobre um ácido carboxílico produz forte
efervescência correspondente ao desprendimento de nitrogênio na reação
(Figura 29).

CH2N2 (l) + RCOOH (s) N2 (g) + RCOOCH3 (s)

Figura 29. Metilação de um ácido carboxílico com diazometano.

7.8. Metodologia de análise dos batumes.

Para verificar as alterações químicas que ocorreram no batume da


colônia invadida de M. scutellaris, a seguinte metodologia foi empregada:
quantidades idênticas de batumes (805 mg) foram coletados em uma colônia
pura de M. scutellaris (1), uma colônia pura de M. rufiventris (2) e na colônia
invadida de M. scutellaris (3).
Essas amostras foram cromatografadas em colunas (h = 23 cm; dinterno =
2,5 cm) de sílica gel (20 g) eluindo com solventes destilados, em ordem
crescente de polaridade, obtendo cinco frações de 500 ml para cada batume

95
PARTE EXPERIMENTAL

que foram evaporadas sob pressão reduzida e analisadas por CCD e CG-EM,
injetando 1 µl das frações A-E (2 mg em 0,5 ml de acetato de etila) (Tabelas 3
e 4). Os compostos mais polares e o barro dos batumes ficaram retidos na
sílica gel do topo das colunas cromatográficas e não foram analisados. Como a
identificação de alguns compostos somente por espectrometria de massas não
é suficiente, calculamos os índices de retenção para todos os compostos e
comparamos com dados da literatura.58, 59

7.9. Obtenção de extratos de operárias e machos de Nannotrigona


testaceicornis e Plebeia droryana.

Foram capturados 8 indivíduos (operárias e machos) de ambas as


espécies na fazenda Aretuzina em São Simão-SP, propriedade do Prof. Paulo
Nogueira Neto. Os machos de N. testaceicornis e de P. droryana foram
capturados quando estavam fazendo pseudocópula nas flores de M. ringens e
de T. obtusum, respectivamente. As operárias de N. testaceicornis foram
capturadas em três colônias diferentes localizadas em frestas nas casas da
fazenda, sendo mantidas separadas para verificar se existem compostos
diferentes entre os indivíduos da mesma espécie, no entanto as operárias de P.
droryana foram capturadas na única colônia do meliponário. A identificação
destas espécies foi confirmada pelo Prof. Dr. Gabriel A. R. de Melo do Centro
de Estudos Faunísticos e Ambientais - o CDZoo, da Universidade Federal do
Paraná, Curitiba-PR.
As operárias e os machos de N. testaceicornis e P. droryana foram
sacrificados no freezer (T = -18 °C) e, em seguida, foram feitos extratos das
ceras cuticulares, das cabeças e dos abdomes:

96
PARTE EXPERIMENTAL

a) Extrato da cera cuticular: os indivíduos (operárias e machos) de N.


testaceicornis e P. droryana foram lavados em 2 ml de hexano bidestilado e
os extratos foram filtrados em funil de vidro com algodão tratado.

b) Extrato das cabeças: após os indivíduos de N. testaceicornis e P. droryana


serem lavados com hexano e acetato de etila bidestilado, eles tiveram suas
cabeças separadas e maceradas em 2 ml de acetato de etila bidestilado,
permanecendo no solvente durante 15 minutos, e depois os extratos foram
filtrados em funil de vidro com algodão tratado.

c) Extrato dos abdomes: após os indivíduos de N. testaceicornis e P.


droryana serem lavados com hexano e acetato de etila bidestilado, eles
também tiveram seus abdomes separados e macerados em 2 ml de acetato de
etila bidestilado, permanecendo no solvente durante 15 minutos, e depois os
extratos foram filtrados em funil de vidro com algodão tratado.

Para evitar a perda de compostos voláteis, cada extrato teve seu solvente
reduzido em atmosfera de nitrogênio até alcançar o volume de
aproximadamente 50 µl, sendo 1 µl de cada extrato analisado por CG-EM
(Tabelas 5 e 6). Como somente a análise dos extratos por espectrometria de
massas não foi suficiente para identificar alguns compostos, os índices de
retenção foram calculados e comparados com os dados da literatura.58, 59
Após as análises por CG-EM, os extratos foram evaporados em
atmosfera de N2 e pesados (Tabela 9). Podemos observar que são obtidos
extratos com muito pouco material, o que dificulta a identificação de
compostos desconhecidos.

97
PARTE EXPERIMENTAL

Tabela 9. Pesos dos extratos de machos e operárias de Plebeia droryana e Nannotrigona


testaceicornis.

Espécie Castas* Extrato Peso do Extrato (mg)


cera cuticular 0,9
Machos abdomes 0,7
Plebeia droryana cabeças 0,6
cera cuticular 0,8
Operárias abdomes 0,4
cabeças 0,2
cera cuticular 0,8
Machos abdomes 0,4
cabeças 0,4
cera cuticular 0,4
Operárias (colônia 1) abdomes 0,4
cabeças 0,2
Nannotrigona testaceicornis
cera cuticular 0,7
Operárias (colônia 2) abdomes 0,6
cabeças 0,3
cera cuticular 0,6
Operárias (colônia 3) abdomes 0,4
cabeças 0,2
* Foram capturados 8 indivíduos de cada casta.

7.10. Obtenção do óleo floral de Lophanthera lactescens.

As flores de L. lactescens (1200 flores) tiveram os óleos florais de seus


elaióforos epiteliais coletados com uma pipeta Pasteur que era mergulhada em
5 ml de acetato de etila (Figura 30). A amostra foi evaporada sob atmosfera de
nitrogênio obtendo 5,20 g de um óleo amarelo.

Figura 30. Elaióforos epiteliais de uma flor de L. lactescens. Foto: Adriana Pianaro.

98
PARTE EXPERIMENTAL

Uma quantidade do óleo floral bruto (2,29 g) foi separada e metilada


com solução etérea de diazometano para ser analisada por CG-EM.
O óleo floral metilado foi cromatografado em uma coluna (h = 62 cm;
dinterno = 2,5 cm) de sílica gel (60 g) com misturas de hexano e acetato de etila
(aumentando aos poucos a polaridade em 5%), obtendo 68 frações de 100 ml
que foram evaporadas sob pressão reduzida e analisadas por cromatografia de
camada delgada (CCD) e por CG-EM.

7.11. Extratos das abelhas de Lophanthera lactescens.

Para confirmar a coleta do óleo floral de L. lactescens por operárias de


Tetragonisca angustula e fêmeas de Centris trigonoides foram capturadas nas
flores 22 operárias de T. angustula e 2 fêmeas de C. trigonoides, as quais
foram sacrificadas no freezer (T= - 18°C) e, em seguida, seus abdomes (parte
externa) foram lavadas com 2 ml de acetato de etila bidestilado. Os extratos
foram filtrados em funil de vidro com algodão tratado e evaporados em
atmosfera de nitrogênio. O extrato das operárias de T. angustula (1,6 mg) e o
extrato das fêmeas de C. trigonoides (1,0 mg) foram metilados com solução
etérea de diazometano e analisados por CG-EM.

99
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

101
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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112
ANEXOS

ANEXOS

113
ANEXOS

9. Anexos.

243
SCH3
(CH 2)5 (CH 2)9

SCH3
173
(M+.)

A1. Espectro de massas do derivado DMDS do 9-tricoseno.

271
SCH3
(CH 2)5 (CH 2)11

SCH3
173
(M+.)

A2. Espectro de massas do derivado DMDS do 9-pentacoseno.

(M+. -173)
285
SCH3
(CH 2)5 (CH 2)12

SCH3

173

A3. Espectro de massas do derivado DMDS do 9-hexacoseno.

115
ANEXOS

299
SCH3
(CH 2)5 (CH 2)13

SCH3

173
(M+.)

A4. Espectro de massas do derivado DMDS do 9-heptacoseno.

313
SCH3
(CH 2)5 (CH 2)14

SCH3

173
(M+.)

A5. Espectro de massas do derivado DMDS do 9-octacoseno.

327
SCH3
(CH 2)5 (CH 2)15

SCH3

173
(M+.)

A6. Espectro de massas do derivado DMDS do 9-nonacoseno.

116
ANEXOS

355
SCH3
(CH 2)5 (CH 2)17

SCH3

173
(M+.)

A7. Espectro de massas do derivado DMDS do 9-hentriaconteno.

(M+. -173)
383
SCH3
(CH 2)5 (CH 2)19

SCH3

173

A8. Espectro de massas do derivado DMDS do 9-tritriaconteno.

13
A9. Espectro de RMN de C do acetato de geranil-geranila (125,69 MHz, CDCl3, TMS,
nano-sonda).

117
ANEXOS

A10. Espectro de RMN de 1H do acetato de geranil-geranila (499,88 MHz, CDCl3, TMS,


nano-sonda).

A11. Espectro de RMN de 13C (DEPT 135° e 90°) do acetato de geranil-geranila (125,69
MHz, CDCl3, TMS, nano-sonda).

118
ANEXOS

O
O O

A12. Espectro de massas de alta resolução do 3-acetoxi-octadecanoato de metila (1) (IE: 70


eV), em destaque o fragmento onde deveria sair o íon molecular (M+. 356), obtido por
um abaixamento da energia de ionização (IE: 20 eV).

55

50

45

40
Transmitância

35
1025
1172
30
O
25 O O

20 CH2 O 2853
14
1238
15
2924
10 1746

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500


-1
Número de onda ( cm )

A13. Espectro de absorção no infravermelho do 3-acetoxi-octadecanoato de metila (1) (filme sobre


placas de NaCl).

119
ANEXOS

O
O O

A14. Espectro de RMN de 1H do 3-acetoxi-octadecanoato de metila (1) (499,88 MHz,


CDCl3, TMS).

O
O O

13
A15. Espectro de RMN de C do 3-acetoxi-octadecanoato de metila (1) (125,69 MHz,
CDCl3, TMS).

120
ANEXOS

O
O O

A16. Espectro de RMN de 13C (DEPT 135° e 90°) do 3-acetoxi-octadecanoato de metila (1)
(125,69 MHz, CDCl3, TMS).

O
O O

A17. Mapa de contornos de RMN 2D de correlações 1H, 13C 1J (gHSQC) do 3-acetoxi-


octadecanoato de metila (1) (RMN de 1H a 499,88 MHz e RMN de 13C a 125,69
MHz, CDCl3, TMS).

121
ANEXOS

O
O O

A18. Mapa de contornos de RMN 2D de correlações 1H, 13C nJ (gHMBC) do 3-acetoxi-


octadecanoato de metila (1) (RMN de 1H a 499,88 MHz e RMN de 13C a 125,69
MHz, CDCl3, TMS).

O
O O

A19. Mapa de contornos de RMN 2D de correlações 1H, 1H (gCOSY) do 3-acetoxi-


octadecanoato de metila (1) (499,88 MHz, CDCl3, TMS).

122
ANEXOS

A20. Estruturas de alguns dos compostos detectados neste trabalho.

COMPOSTO (Fórmula Molecular) ESTRUTURA

Tridecano (C13H28)
(CH2)10
Tetradecano (C14H30) (CH2)11
Pentadecano (C15H32) (CH2)12
Hexadecano (C16H34) (CH2)13
Heptadecano (C17H36) (CH2)14
Octadecano (C18H38) (CH2)15
Nonadecano (C19H40) (CH2)16
Eicosano (C20H42) (CH2)17
Heneicosano (C21H44) (CH2)18
Docosano (C22H46) (CH2)19
Tricosano (C23H48) (CH2)20
Tetracosano (C24H50) (CH2)21
Pentacosano (C25H52) (CH2)22
Hexacosano (C26H54) (CH2)23
Heptacosano (C27H56) (CH2)24
Octacosano (C28H58) (CH2)25
Nonacosano (C29H60) (CH2)26
Hentriacontano (C31H64) (CH2)28
Tritriacontano (C33H68) (CH2)30
9-tricoseno (C23H46) (CH2)7 (CH2)12
9-pentacoseno (C25H50) (CH2)7 (CH2)14
9-hexacoseno (C26H52) (CH2)7 (CH2)15
9-heptacoseno (C27H54) (CH2)7 (CH2)16
9-octacoseno (C28H56) (CH2)7 (CH2)17
9-nonacoseno (C29H58) (CH2)7 (CH2)18
9-hentriaconteno (C31H62) (CH2)7 (CH2)20
9-tritriaconteno (C33H66) (CH2)7 (CH2)22
9,21-hentriacontadieno (C31H60) (CH2)7 (CH2)10 (CH2)8
(CH2)7
3-metil-tridecano (C14H30)
(CH2)9
3-metil-pentadecano (C16H34)

4-etil-tetradecano (C16H34)
(CH2)8

123
ANEXOS

(CH2)9
4-metil-hexadecano (C17H36)

(CH2)11
3-metil-heptadecano (C18H38)
(CH2)13
3-metil-nonadecano (C20H42)

2-fenil-tridecano (C19H32)

O
(CH2)6
Nonanal (C9H18O) H
O

Tetradecanal (C14H28O) (CH2)11 H


OH
2-nonanol (C9H20O)

Octadecatrien-1-ol (C18H32O) HO CH2 C17H29


O

Ácido dodecanóico (C12H24O2) (CH2)10 OH


O

Ácido tetradecanóico (C14H28O2) (CH2)12 OH


O

Ácido hexadecanóico (C16H32O2) (CH2)14 OH


O

Ácido octadecanóico (C18H36O2) (CH2)16 OH


O
Ácido 9-octadecenóico (C18H34O2)
(CH2)7 (CH2)7 OH
O
Dodecanoato de metila (C13H26O2)
(CH2)7 O
O
Dodecanoato de tetradecanila (C26H52O2) C14H29
O C11H23
O
Hexadecanoato de hexadecanila (C32H64O2) C16H33
O C15H31
O
Octadecenoato de hexadecenila (C34H64O2) C16H31
O C17H33
O
Acetato de laurila (C14H28O2) (CH2)11
O

124
ANEXOS

O
Acetato de farnesila (C17H28O2)
O

Acetato de nerolidol (C17H28O2)

O
Acetato de octadecanila (C20H40O2) C18H37
O
O
Acetato de geranil-geranila (C22H36O2)
O
O

Acetato de triacontanila (C32H64O2) (CH2)27 O


O

2,6-di-tercbutilquinona (C14H20O2)

N,N-diciclohexilamina (C12H23N) NH

NH
p-isopropilaminodifenilamina (C15H18N2)

NH

Bis(octilfenil)-amina (C28H43N) (CH2)8 NH (CH2)8

O
Oleamida (C18H35NO)
(CH2)7 (CH2)7 NH2

125
ANEXOS

OCH3
H3CO

H
Epiendesmina (C22H26O6) O O

OCH3
OCH3

NCO
Isocianato de ciclohexila (C7H11NO)

NCO

2,4-diisocianato de tolueno (C9H6N2O2)

NCO

2,3-dihidro-benzofurano (C8H8O)

2,8-dimetil-1,7-dioxaspiro[5,5]undecano (C11H20O2)
O

O
Cl O
N
Metetilacloro (C15H22ClNO2)

Cl Cl

Tris(1,3-dicloro-2-propil) fosfato (C9H15Cl6O4P) O


Cl Cl
O P O
Cl Cl
O

OH

4-terc-butilfenol (C10H14O)

126
ANEXOS

OH

3-pentadecano-fenol (C21H36O)

(CH2)14
OH

3-heptadecadieno-fenol (C23H36O)

C17H31
OH

3-heptadeceno-fenol (C23H38O)

C17H33
OH

3-heptadecano-fenol (C23H40O)

(CH2)16
OH

3-nonadeceno-fenol (C25H42O)

C19H37
OH

3-nonadecano-fenol (C25H44O)

(CH2)18

HO (CH2)14

5-pentadecano-resorcinol (C21H36O2)

OH
HO C17H31

5-heptadecadieno-resorcinol (C23H36O2)

OH
HO C17H33

5-heptadeceno-resorcinol (C23H38O2)

OH
HO C19H37

5-nonadeceno-resorcinol (C25H42O2)

OH

127
ANEXOS

Cadaleno (C15H18)

α-calacoreno (C15H20)

Ar-curcumeno (C15H22)

1-cis-calameneno (C15H22)

Junipeno (C15H24)

α-copaeno (C15H24)

H
H
H

α-muroleno (C15H24)

128
ANEXOS

H
β-cariofileno (C15H24)
H

(α-trans)-bergamoteno (C15H24)

γ-bisaboleno (C15H24)

γ-gurjuneno (C15H24)

α-guaieno (C15H24)

(cis-β)-guaieno (C15H24)

δ-guaieno (C15H24)
H

γ-cadineno (C15H24)
H

129
ANEXOS

δ-cadineno (C15H24)

H
Óxido de cariofileno (C15H24O)

Abietadieno (C20H32)
H

Óxido de manoíla (C20H34O) O


H

Esqualeno (C30H50)

β-amireno (C30H50) H

(E,E)-farnesol (C15H26O)

OH

130
ANEXOS

(E,Z)-farnesol (C15H26O)
OH

OH
Geranil linalol (C20H34O)

Ergostadien-3β-ol (C28H46O) H

H H

HO

H
Ergost-5-en-3β-ol (C28H48O)
H H

HO

Estigmastadien-3β-ol (C29H48O) H

H H

HO

Estigmast-5-en-3β-ol (C29H50O) H

H H

HO

β-amirina (C30H50O) H

H
HO
H

131
ANEXOS

α-amirina (C30H50O)
H

HO
H

Lanosterol (C30H50O)

HO
H

Damaradienol (C30H50O)
H
HO
H

H
Cicloart-24-en-3β-ol (C30H50O)

HO
H

24-metileno-cicloartan-3β-ol (C31H52O) H

HO
H

132

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