05 Regulacao Eucariotos

Regulação da Expressão
Gênica em Eucariotos
 Regulação da Expressão Gênica
 Trajetória da expressão de um gene
Núcleo Citoplasma
Principal ponto mRNA
de regulação inativo
RNA
DNA mRNA mRNA
transcrito
PROTEÍNA
PROTEÍNA
INATIVA
REGULAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA
 Regulação espacial: diferentes tipos celulares

em um mesmo organismo.
 Temporal: genes diferentes expressos em

tempos diferentes em resposta a sinais
biológicos ou estímulos ambientais.
Regulação da Expressão Gênica em Eucariotos
 Transcrição e tradução separadas temporal e

espacialmente;
 Eucariotos possuem proteínas regulatórias maiores e

mais complexas;
 O acesso aos promotores é restrito pela estrutura da

cromatina;
 Promotores de eucariotos são intrinsecamente inativos:

Não ocorre início de transcrição na ausência de proteínas
acessórias.
 Eventos que levam a iniciação da transcrição
PROTEÍNA ATIVADORA DO
GENE LIGA-SE A CROMATINA
Complexo de remodelagem da cromatina
REMODELAGEM DA CROMATINA
Enzimas modificadoras de histonas
MODIFICAÇÃO COVALENTE DE HISTONAS

Outras proteínas ativadoras
PROTEÍNAS ATIVADORAS ADICIONAIS LIGAM-SE

A REGIÃO REGULATÓRIA DO GENE
Fatores gerais de transcrição da RNA polimerase
MONTAGEM DO COMPLEXO DE
PRÉ-INICIAÇÃO NO PROMOTOR
Outras proteínas ativadoras
Rearranjo das proteínas no complexo de pré-iniciação
INICIAÇÃO DA TRANSCRIÇÃO
 Transcrição em Eucariotos e a Cromatina
O “Problema” do Nucleossomo
 A transcrição é fortemente reprimida na

cromatina condensada
 Regiões ativamente transcritas possuem

nucleossomos mais espaçados
 Cromatina transcricionalmente ativa possui

menos histona H1
Estrutura do Nucleossomo
Octâmero de histonas
Modificações da Cromatina
 Heterocromatina: inativa na transcrição
 Eucromatina: cromatina menos condensada
PODE ESTAR ATIVA
 Padrões de modificação covalente
 Acetilação
 Metilação
 Fosforilação
Código de Histonas
Remodelagem da Cromatina
Histonas acetiladas: Histonas desacetiladas:

Cromatina ativa Cromatina inativa
 Complexos SWI/SNF, RSC e NURF  deslocamento

e reposição do octâmero de histonas
ATIVAÇÃO DA TRANSCRIÇÃO:
 metilação da histona H3 (Lys4 e Lys36)

 facilita a ligação de histona-acetiltransferases (HATs)
 acetilação de histonas H3 e H4 (resíduos Lys)

 em múltiplos resíduos – diminui a interação
DNA-nucleossomo
 em resíduos específicos – afeta a interação
nucleossomo-proteínas regulatórias
INATIVAÇÃO DA TRANSCRIÇÃO:
 metilação da histona H3 (Lys9)

 geralmente metilada na heterocromatina
 desacetilação de histonas H3 e H4
 histona-desacetilases (HDACs)
Efeito final: tornar um segmento de DNA mais acessível

e marcá-lo para facilitar a ligação e atividade dos
fatores de transcrição
 Exposição da região promotora para
transcrição
Complexo
Ativador de
remodelador da
Transcrição
cromatina ou HATs
Classes de genes transcritos por RNA
polimerases em eucariotos
TIPO DE RNA SINTETIZADO RNA POLIMERASE

Genes nucleares
mRNA II
tRNA III
rRNA
5,8S, 18S, 28S I
5S III
snRNA e scRNA II e III
Genes mitocondriais mitocôndria
Genes do cloroplasto Cloroplasto

 Promotores
 Promotores da RNA Pol II: elementos conservados curtos
 Exemplo: gene da timidina quinase de camundongo
 Controle combinatório
 RNA polimerase II de eucariotos requer fatores
gerais de transcrição (TFII)
• Necessários para início de transcrição em

todos os promotores
• Posicionam a RNA polimerase II corretamente

sobre os promotores
• Separação da fitas de DNA para início da

transcrição
• Liberação da RNA polimerase II do promotor e

passagem para a etapa de alongamento
 Fatores de Transcrição
 Fatores de transcrição gerais ou basais: TFII
Fator de Funções
Transcrição
RNA Pol II Síntese de RNA
TBP (proteína de Reconhece TATA box
ligação ao TATA)
TFII B Liga a TBP; recruta o complexo TFII F e RNA Pol II
TFII A Estabiliza a ligação de TFII B e TBP ao promotor (não
essencial)
TFII F Liga a RNA Pol II e a TFII B
TFII E Recruta TFII H
TFII H Desenovela o DNA na região promotora;
Fosforila RNA Pol II (na cauda CTD)
TFII D Interage com proteínas regulatórias
Complexo pré-transcricional
Inr
Complexo de
pré-iniciação ou
Complexo Fechado
Complexo pré-transcricional
Complexo de
iniciação da transcrição
ou Complexo Aberto
Fatores gerais de RNA

transcrição nascente
liberados, exceto TBP
Ativação do Início de Transcrição em Eucariotos
Participação de Sequências específicas localizadas
distantes dos promotores
 UAS – sequências ativadoras a montante (levedura)

 A montante do promotor
 Intensificadores ou Acentuadores (eucariotos

superiores)
 A montante ou a jusante do promotor
São reconhecidas e ligadas por proteínas regulatórias da

transcrição
Ativação da Transcrição
 Ativadores de transcrição: ligam-se a sequências UAS
ou intensificadoras
 Proteínas de modificação e remodelagem da

cromatina
 Co-ativadores: intermediários entre os ativadores de

transcrição e o complexo da RNA polimerase II
Mediador: ligação ao CTD da RNA polimerase II
 Fatores de transcrição basais: TBP (proteína de

ligação a TATA), TFIIB, TFIIE, TFIIF, TFIIH, RNApol II, TFIIA
 Repressores da Transcrição em Eucariotos
 Interferem com a ligação da RNA polimerase II ao

promotor
 Interferem com a ligação de ativadores aos seus

sítios específicos de ligação no DNA (UAS ou
intensificadores)
 Interferem com o complexo de transcrição envolvido

no início da transcrição
 Interagem e inibem ativadores de transcrição

Repressores de Transcrição
Ativador Superfície de ativação
LIGAÇÃO COMPETITIVA Repressor
AO DNA TATA
Sítio de ligação do repressor

Sítio de ligação do ativador
SUPERFÍCIE DE
TATA
ATIVAÇÃO OCLUÍDA
Sítio de ligação do ativador Sítio de ligação do repressor
Sítio de ligação do ativador

Sítio de ligação do repressor
INTERAÇÃO DIRETA
COM FATORES
TRANSCRICIONAIS
TFIID
TATA
Repressão da Transcrição
Regulação dos genes do metabolismo da
galactose na levedura
 Genes GAL: espalhados em vários cromossomos

 Promotores similares permitem uma regulação
coordenada pelo mesmo conjunto de proteínas
Ausência de Galactose  promotor inativo

Complexo da
RNApol II
Regulação dos genes do metabolismo da
galactose na levedura
Presença de Galactose  promotor ativo
Regulação dos genes heat-shock em Drosophila
Elementos de resposta
heat-shock (HSE)
XTranscrição
Fator de transcrição
heat-shock (HSTF)
Livre (inativo)
Ligado (ativo)
Transcrição
Hormônios
Regulação da expressão esteróides
gênica por hormônios
ESTERÓIDES
Ex.: estrogênio,
progesterona,
testosterona,
glicocorticóides
Elementos de
resposta a
hormônios (HREs)
Cada receptor reconhece

uma sequência HRE
específica
Hormônio peptídico
Regulação da expressão Complexo
gênica por hormônios hormônio-receptor
PEPTÍDICOS
Molécula
sinal
Elementos de
resposta a
hormônios (HREs)
Ex.: insulina,
prolactina,
somatotrofina
Repressão de Tradução
 Forma mais comum: ligação de repressores de
tradução ao mRNA
Subunidade ribossômica 40S
Repressores de Tradução
Região não traduzida 3’ (3’UTR)
 Ex.: Síntese de hemoglobina nos eritrócitos

 Regulação mediada por pequenos RNAs (sRNA)
 Mecanismo de regulação pós-transcricional
 Pareamento de uma sequência curta de RNA com

uma sequência alvo de um mRNA
 RNA de interferência - RNAi

RNA de Interferência
 Mecanismo de repressão da expressão gênica
 Inibição da tradução do mRNA

 Degradação do mRNA
 miRNA: transcrito a partir do genoma próprio

sequência auto complementar  grampo
 siRNA: originados de genoma viral ou transposons

dupla fita de RNA
 RNA de Interferência
Molécula de RNA dupla-fita
Enzima Dicer / Drosha
RNA de interferência
dupla-fita
Ribonucleoproteína
com RNAi dupla fita
Complexo de
silenciamento induzido
por RNA – RISC
mRNA alvo (sequência complementar ao RNAi)

mRNA cortado e Bloqueio da tradução

degradado do mRNA
 Repressão da expressão gênica

 Fontes de RNA de Interferência
 Genes de microRNA  mir
 Possuem sequências invertidas que formam um grampo
 Transposons e retrovírus
 RNAs copiados em RNA

complementares por RNA
polimerases dependentes
de RNA
Em C. elegans:
O gene lin4 é um miRNA que controla a expressão de lin14
lin14
lin4
Não ocorre expressão de lin14

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Regulação da Expressão

 Regulação espacial: diferentes tipos celulares

 Temporal: genes diferentes expressos em

 Transcrição e tradução separadas temporal e

 Eucariotos possuem proteínas regulatórias maiores e

 O acesso aos promotores é restrito pela estrutura da

 Promotores de eucariotos são intrinsecamente inativos:

MODIFICAÇÃO COVALENTE DE HISTONAS

PROTEÍNAS ATIVADORAS ADICIONAIS LIGAM-SE

 A transcrição é fortemente reprimida na

 Regiões ativamente transcritas possuem

 Cromatina transcricionalmente ativa possui

Histonas acetiladas: Histonas desacetiladas:

 Complexos SWI/SNF, RSC e NURF  deslocamento

 metilação da histona H3 (Lys4 e Lys36)

 acetilação de histonas H3 e H4 (resíduos Lys)

 metilação da histona H3 (Lys9)

Efeito final: tornar um segmento de DNA mais acessível

TIPO DE RNA SINTETIZADO RNA POLIMERASE

5,8S, 18S, 28S I

snRNA e scRNA II e III

Genes mitocondriais mitocôndria

Genes do cloroplasto Cloroplasto

 Exemplo: gene da timidina quinase de camundongo

• Necessários para início de transcrição em

• Posicionam a RNA polimerase II corretamente

• Separação da fitas de DNA para início da

• Liberação da RNA polimerase II do promotor e

Fatores gerais de RNA

 UAS – sequências ativadoras a montante (levedura)

 Intensificadores ou Acentuadores (eucariotos

São reconhecidas e ligadas por proteínas regulatórias da

 Proteínas de modificação e remodelagem da

 Co-ativadores: intermediários entre os ativadores de

Mediador: ligação ao CTD da RNA polimerase II

 Fatores de transcrição basais: TBP (proteína de

 Interferem com a ligação da RNA polimerase II ao

 Interferem com a ligação de ativadores aos seus

 Interferem com o complexo de transcrição envolvido

 Interagem e inibem ativadores de transcrição

Sítio de ligação do repressor

Sítio de ligação do ativador Sítio de ligação do repressor

Sítio de ligação do ativador

 Genes GAL: espalhados em vários cromossomos

Ausência de Galactose  promotor inativo

Cada receptor reconhece

Região não traduzida 3’ (3’UTR)

 Ex.: Síntese de hemoglobina nos eritrócitos

 Mecanismo de regulação pós-transcricional

 Pareamento de uma sequência curta de RNA com

 RNA de interferência - RNAi

 Inibição da tradução do mRNA

 miRNA: transcrito a partir do genoma próprio

 siRNA: originados de genoma viral ou transposons

Enzima Dicer / Drosha

mRNA alvo (sequência complementar ao RNAi)

mRNA cortado e Bloqueio da tradução

 Repressão da expressão gênica