Manual de Preparo de Meios de Cultura e Soluções para Microbiologia

2013
Manual de Preparo de Meios de

Cultura, Reagentes e Soluções
Utilizados em Microbiologia
Mariana Torres de Castro

Técnica em Alimentos e laticínios
INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E
TECNOLOGIA DO TRIANGULO MINEIRO – CAMPUS ITUIUTABA
Sumário
MEIOS DE CULTURA .................................................................................................................. 7

Ágar azul de toluidina - DNA.................................................................................................. 9
Ágar Bacillus larvae (ABL) ...................................................................................................... 9
Ágar Baird-Parker .................................................................................................................. 9
Ágar batata glicose 2% ........................................................................................................ 10
Ágar cérebro-coração (ABHI) ............................................................................................... 11
Ágar cereus (PEMBA) .......................................................................................................... 11
Ágar Columbia-base ............................................................................................................ 12
Ágar Columbia-CNA com sangue desfibrinado de carneiro ou de cobaio ............................. 12
Ágar com extrato de levedura ............................................................................................. 13
Ágar cristal violeta vermelho neutro bile (VRBA) ................................................................. 13
Ágar cristal violeta vermelho neutro bile glicose (VRBG)...................................................... 14
Ágar eosina azul de metileno (EMB) .................................................................................... 14
Ágar esculina....................................................................................................................... 15
Ágar estoque....................................................................................................................... 15
Ágar fenilalanina ................................................................................................................. 16
Ágar ferro dois açúcares (Ágar Kligler) ................................................................................. 16
Ágar ferro dois açúcares (Ágar Kligler) sal 3% ...................................................................... 17
Ágar ferro três açúcares (TSI) .............................................................................................. 17
Ágar ferro três açúcares (TSI) sal 3% .................................................................................... 17
Ágar glicose triptona ........................................................................................................... 18
Ágar leite com tiamina (ALT) ............................................................................................... 18
Ágar lisina ferro (LIA)........................................................................................................... 18
Ágar MacConkey-sorbitol (MCS) .......................................................................................... 19
Ágar manitol-gema de ovo-polimixina segundo Mossel (MYP) ............................................. 20
Ágar manitol lisina cristal violeta verde brilhante (MLCB) .................................................... 20
Ágar motilidade .................................................................................................................. 21
Ágar motilidade-nitrato....................................................................................................... 21
Ágar motilidade-nitrato tamponado .................................................................................... 22
Ágar motilidade sal 3% ........................................................................................................ 22
Ágar Müeller-Hinton sal 3% ................................................................................................. 23
1
Ágar nutriente..................................................................................................................... 23
Ágar nutriente com sulfato de manganês ............................................................................ 23
Ágar nutriente isento de extrato de levedura ...................................................................... 24
Ágar nutriente sal 3% .......................................................................................................... 24
Ágar Oxford (AO)................................................................................................................. 24
Ágar padrão para contagem (PCA)....................................................................................... 25
Ágar PALCAM (AP)............................................................................................................... 26
Ágar para ensaio de DNAse com verde de metila ................................................................ 26
Ágar para esporulação ........................................................................................................ 27
Ágar para fermentação de carboidratos – base com púrpura de bromocresol ..................... 27
Ágar Rambach ..................................................................................................................... 28
Ágar Sahid Ferguson perfringens (SFP) ................................................................................ 28
Ágar sal triptona (T1N1) ...................................................................................................... 29
Ágar soja triptona (TSA) ...................................................................................................... 29
Ágar soja triptona (TSA) com CaCl2 e eritrócitos lavados de carneiro ................................... 30
Ágar soja triptona (TSA) sal 3% ............................................................................................ 30
Ágar tiossulfato-citrato-sacarose-sais biliares (TCBS) ........................................................... 30
Ágar tirosina ....................................................................................................................... 31
Ágar triptose (AT) ................................................................................................................ 31
Ágar Triptose com ácido nalidíxico (ATN) ............................................................................ 32
Ágar triptose sulfito cicloserina (TSC) .................................................................................. 32
Ágar ureia ........................................................................................................................... 33
Ágar verde brilhante vermelho de fenol lactose sacarose (BPLS) ......................................... 33
Ágar xilose-lisina-desoxicolato (XLD) ................................................................................... 34
Ágar XLT4 ............................................................................................................................ 35
Água peptonada alcalina para Vibrio cholerae (APHA 3a ed ) ............................................... 35
Caldo para fermentação de carboidratos – base com púrpura de bromocresol.................... 36
Caldo cérebro-coração (BHI) ............................................................................................... 36
Caldo cérebro-coração concentração dupla-sal 0,65%-extrato de levedura 0,6%(BHI-SE) .... 37
Caldo cérebro-coração nitrato (BHI-NO3)............................................................................. 37
Caldo cérebro-coração-sal 0,65%- extrato de levedura 0,6%(BHI-SE) ................................... 37
Caldo Cérebro-coração tiamina (BHI-T) ............................................................................... 37
2
Caldo de carne cozida (CCC) ................................................................................................ 37

Caldo de Enriquecimento para Listeria (LEB) ....................................................................... 38
Caldo de enriquecimento para Listeria (UVM) ..................................................................... 38
Caldo EC .............................................................................................................................. 39
Caldo EC com novobiocina (EC + n)...................................................................................... 40
Caldo experimental para anaeróbios segundo R F Corseuil (caldo Rogert) ........................... 40
Caldo Fraser ........................................................................................................................ 40
Caldo gelatina fosfato sal (GPS) ........................................................................................... 41
Caldo Glicose-sal 3%-teepol (GSTB) ..................................................................................... 42
Caldo glicose triptona (caldo dextrose triptona) .................................................................. 42
Caldo Horie arabinose violeta de etila (HAEB) ..................................................................... 43
Caldo lauril sulfato de sódio simples.................................................................................... 43
Caldo lauril sulfato de sódio concentração dupla ................................................................. 44
Caldo lisina descarboxilase .................................................................................................. 44
Caldo ONPG ........................................................................................................................ 44
Caldo ONPG sal 3%.............................................................................................................. 45
Caldo peptonado sem sal .................................................................................................... 45
Caldo peptonado sal (3%, 6%, 8% ou 10%) .......................................................................... 45
Caldo Rappaport Vassiliadis................................................................................................. 46
Caldo selenito cistina .......................................................................................................... 46
Caldo soja triptona (TSB) ..................................................................................................... 47
Caldo soja triptona (TSB)- NaCl 10% - piruvato de sódio 1% ................................................. 47
Caldo telurito manitol glicina segundo Giolitti-Cantoni ........................................................ 47
Caldo tetrationato ............................................................................................................... 48
Caldo Triptose Fosfato (TPB) ............................................................................................... 48
Caldo ureia.......................................................................................................................... 49
Caldo Verde brilhante bile lactose 2% ................................................................................. 49
Caldo Verde brilhante-bile-lactose 2% – MUG (BRILA-MUG)................................................. 50
Caldo vermelho de fenol - base (para fermentação de carboidratos) ................................... 50
Caldo Vermelho de fenol sal 3% .......................................................................................... 51
Caldo vermelho de fenol sal 3%-lisina ................................................................................. 51
Caldo VM-VP ....................................................................................................................... 51
3
Meio gelatina ...................................................................................................................... 51

Meio gelatina sal 3% ........................................................................................................... 52
Meio leite com ferro ........................................................................................................... 52
Meio lactose-gelatina. ......................................................................................................... 52
Meio O/F (Hugh-Leifson) sal 3% .......................................................................................... 53
Meio SIM ............................................................................................................................ 53
Meio tioglicolato ................................................................................................................. 54
Solução salina 0,85% ........................................................................................................... 54
Solução salina 2% ................................................................................................................ 54
Solução salina fosfatada tamponada pH 7,2 (PBS) ............................................................... 55
Solução salina peptonada 0,1% ........................................................................................... 55
Solução salina peptonada 0,1%-sal 3% ................................................................................ 56
Solução salina peptonada 1% tamponada (ISO 6579, 1993) ................................................. 56
Solução salina peptonada 1% tamponada, adicionada de 0,02% de tween 20 ..................... 56
Solução salina peptonada 1% tamponada adicionada de 1% de tween 80 ........................... 56
Solução salina peptonada 1% tamponada, adicionada de vancomicina, cefsulodin e cefixime
........................................................................................................................................... 57
REAGENTES E SOLUÇÕES......................................................................................................... 58
GRUPOS DE RISCO DAS SUBSTÂNCIAS ................................................................................. 58
CONVENÇÕES ..................................................................................................................... 58
PREPARO DE REAGENTES E SOLUÇÕES ................................................................................ 59
Acido Acético ...................................................................................................................... 59
Ácido clorídrico 0,01N ......................................................................................................... 59
Ácido clorídrico 0,1N ........................................................................................................... 59
Ácido clorídrico 1N .............................................................................................................. 59
Ácido nalidíxico solução 0,1% em PBS pH 7,2 ...................................................................... 59
Ácido nalidíxico solução 1% em NaOH 0,1N ......................................................................... 60
Ácido nalidíxico solução 2% em NaOH 0,1 N ........................................................................ 60
Ácido peracético solução aquosa 0,02% .............................................................................. 60
Ácido pipemídico solução 0,2% em PBS pH 7,2 .................................................................... 60
Ácido pipemídico solução 2% em NaOH 0,1N ...................................................................... 60
Ácido sulfanílico solução 0,8% em ácido acético 5N ............................................................. 60
4
Ácido tartárico solução aquosa 10% .................................................................................... 61

Acriflavina solução aquosa 0,25% ........................................................................................ 61
Acriflavina solução aquosa 1% ............................................................................................. 61
Acriflavina solução aquosa 2% ............................................................................................. 61
Alfa-naftilamina solução 0,5% em ácido acético 5N ............................................................. 61
Alfa-naftol solução alcoólica 5% .......................................................................................... 61
Azul de toluidina solução aquosa 1% ................................................................................... 62
Carboidratos-soluções......................................................................................................... 62
Cefixime solução aquosa 1% ............................................................................................... 62
Cefsulodin solução aquosa 1%............................................................................................. 62
Cicloserina solução aquosa 5% ............................................................................................ 62
Cloreto de cálcio 1 M .......................................................................................................... 63
Cloreto férrico solução aquosa 10% (prova de TDA) ............................................................ 63
Cloreto de Magnésio 40% ................................................................................................... 63
Cloreto de Potássio 0,1N ..................................................................................................... 63
Cloreto de Potássio 3 M ...................................................................................................... 63
Desoxicolato de sódio solução 0,5% .................................................................................... 63
Emulsão de gema de ovo 50% ............................................................................................. 64
Eritrócitos lavados de carneiro ............................................................................................ 64
Hidróxido de potássio solução aquosa 40% ......................................................................... 64
Hidróxido de sódio solução aquosa 40% .............................................................................. 65
Novobiocina solução aquosa 1,25% ..................................................................................... 65
Novobiocina solução aquosa 4% ......................................................................................... 65
Oxitetraciclina solução 1% (para ágar OGY) ......................................................................... 65
Peróxido de hidrogênio solução aquosa 3% (10V) ............................................................... 65
Púrpura de bromocresol solução alcoólica 1,6 % ................................................................. 65
Reagentes para a coloração de esporos............................................................................... 66
Reagentes para coloração de Gram ..................................................................................... 66
Reativo de Kovacs ............................................................................................................... 67
Reativo de Ehrlich ............................................................................................................... 67
Reativo para Oxidase I - N,N,N,N-tetrametil-parafenilenodiamina ....................................... 67
Sangue desfibrinado de carneiro, coelho, cobaio ou cavalo ................................................. 68
5
Sangue de cavalo desfibrinado lisado .................................................................................. 68

Solução aquosa de iodo-iodeto ........................................................................................... 68
Telurito de potássio 3,5% .................................................................................................... 68
Tiamina cloridrato solução 0,01% ........................................................................................ 69
Tiossulfato de sódio 2% ....................................................................................................... 69
Tirosina suspensão aquosa 5% ............................................................................................ 69
Tween 80 ............................................................................................................................ 69
Vancomicina solução aquosa 0,8% ...................................................................................... 69
Vaselina .............................................................................................................................. 69
Vaspar................................................................................................................................. 69
Verde brilhante solução aquosa 0,1% .................................................................................. 70
Verde malaquita solução aquosa 5% ................................................................................... 70
Vermelho de fenol solução aquosa 1% ................................................................................ 70
Vermelho de metila solução alcoólica 0,06% ....................................................................... 70
6
MEIOS DE CULTURA
INTRODUÇÂO
Os meios de cultura destinam-se ao cultivo artificial dos microrganismos e fornecem os

princípios indispensáveis ao seu crescimento. Materiais nutrientes preparados no laboratório
para crescimento de microrganismos. São compostos de substratos naturais ou artificiais e
devem conter as substâncias exigidas para o crescimento e multiplicação dos microrganismos
estudados, atendendo as exigências de fontes de carbono, nitrogênio, sais minerais, etc. As
principais funções de um meio de cultura são o isolamento, cultivo, preservação, estudos
morfológicos de microrganismos. Os diversos meios de cultura existentes podem ser
classificados de diversas formas:
Naturais Encontrados na natureza, de origem vegetal (p ex: pedaço de batata, de

abóbora) ou animal (p ex: gema de ovo, pedaço de carne).
Artificiais Fabricados em laboratório, constituído de substâncias químicas,
Quanto à composição
podendo ser definidos ou indefinidos (complexos).

Definidos Possui composição definida, ou
seja, se conhece qualitativa e
quantitativa sua composição.
Indefinidos A composição real não é
conhecida, apenas é feita uma
estimativa qualitativa. Por
exemplo: meios suplementados
com sangue, gema de ovo,
alimentos.
Quanto Líquido São desprovidos de Agar a caldo
ao Semisólido Apresentam em sua composição até 1% de Agar
estado Sólido Apresentam em sua composição de 1,5 a 2,5% de Agar
físico
Simples Só possui os nutrientes básicos para o crescimento das bactérias
Enriquecido Além dos nutrientes básicos possui elementos nutritivos a mais, como
fatores promotores de crescimento (sangue.), mas não é específico.
De É suplementado com nutrientes específicos para o microrganismo que
enriquecimento se deseja pesquisar. Além disso, possui nutrientes agentes inibidores
de determinados microrganismos, mas não permite o isolamento da
bactéria, pois é um meio líquido. Por exemplo: aminoácidos (lisina à
Quanto à finalidade e
Salmonella)
Características
Seletivo Possui agentes inibidores de determinados microrganismos. Permite a

identificação e isolamento da bactéria, pois é um meio sólido (permite
a visualização de UFCs). Por exemplo: Agar EMB à inibe Gram+
Diferencial Permite a diferenciação de diferentes microrganismos. Por exemplo: a
diferenciação de bactérias fermentadoras e não fermentadoras da
lactose no Agar EMB
Indicadores Possuem agentes que indicam determinadas reações no meio, para a
determinação do metabolismo das bactérias. Por exemplo: ferro no
meio a pode indicar a produção de H2S pelo enegrecimento do meio
(sulfeto ferroso) *** geralmente o agente é um indicador de pH
De estoque Meios onde são estocadas culturas puras para posterior utilização.
Geralmente são meios semissólidos
7
IMPORTANTE: os meios de cultura desidratados fornecidos por diferentes fabricantes podem

apresentar pequenas diferenças em suas composições. Obs.: ervar atentamente a quantidade
necessária de meio desidratado, em gramas por litro de meio a ser preparado, o modo de
preparo, o tempo e a temperatura de esterilização em cada caso.
Ao adquirir meios de cultura, Obs.: ervar atentamente a formulação, pois às vezes, as diferentes
marcas utilizam diferentes termos para uma mesma substância. Por exemplo, os termos triptona
e tripticase referem-se à peptona de caseína obtida por digestão triptica ou pancreática. Assim, os
produtos Ágar tripticase soja, Ágar soja triptona, Caso Ágar (antigo Casoy) referem-se a um
produto que contém peptona de caseína (obtida por digestão triptica ou pancreática) e peptona
de farinha de soja.
SEGURANÇA!
Como medida de segurança, as substâncias componentes dos meios de cultura, das soluções e
dos reagentes deste manual estão sinalizadas com uma letra, indicando o grupo de risco ao qual
pertencem, sendo:
 N = nocivo (podendo ser por ingestão, por contato com os olhos e pele);
 I = irritante;
 T = tóxico;
 H = hidropoluente;
 P = perigoso para o meio ambiente;
 C = corrosivo;
 O = oxidante;
 F = inflamável;
 E = explosivo;
 M = mutagênico;
 Co = comburente
8
Ágar azul de toluidina - DNA
1. Pesar separadamente os seguintes ingredientes:

 Ágar DNAse 4,2 g
 Cloreto de sódio 1,0 g
 Tris (Hidroximetil) aminometano 0,61 g (H)
 Solução de Azul de Toluidina 1 %. 0,92 ml (I)
 pH 9,0±0,2
2. Adicionar 100 ml de água destilada-deionizada aos componentes da formulação, com

exceção do azul de toluidina.
3. Agitar com auxílio de bastão de vidro até completa dissolução
4. Deixar repousar por 15 minutos
5. Aquecer até completa dissolução
6. Verificar a necessidade de ajuste de pH, conforme norma específica do laboratório.
7. Adicionar a solução de azul de orto-toluidina
8. Não é necessário esterilizar.
9. Distribuir em placas aproximadamente 25 ml e deixar solidificar em superfície plana
Ágar Bacillus larvae (ABL)
1. Preparar, separadamente, alíquotas de 100 ml de ágar cereus (PEMBA) base, ágar soja
triptona e ágar estoque de acordo com o descrito abaixo para cada um dos meios
específicos.
2. Fundir os meios e resfriar até 47 ±1ºC, mantendo em banho-maria.
3. Em um erlenmeyer estéril, com capacidade mínima de 500 ml, misturar:
 Ágar cereus (PEMBA) base 100,0 ml
 Ágar soja triptona (TSA) 100,0 ml
 Ágar estoque 100,0 ml
 Emulsão de gema de ovo a 50% estéril (*)30,0 ml
 Solução de ácido pipemídico(H) 0,2% (**)3,0 ml (H)
 Solução de ácido nalidíxico(H) 0,1% (**)3,0 ml (H)
(*) - último ingrediente a ser misturado para evitar a formação excessiva de espuma
(**) - esterilizadas por filtração
4. Homogeneizar bem e Distribuir aproximadamente 20 ml em placas estéreis

5. Deixar solidificar em superfície plana.
6. Identificar, datar e armazenar adequadamente.
7. Antes do uso, secar as placas invertidas, semiabertas, em estufa a 45-50ºC por
aproximadamente 15 minutos.
Ágar Baird-Parker
1. Pesar o ágar Baird-Parker de acordo com o volume de meio a ser preparado,

respeitando a proporção indicada pelo fabricante.
9
2. Transferir para recipiente adequado e adicionar o volume de água destilada-

deionizada correspondente
3. Deixar repousar por 15 minutos.
4. Aquecer até completa dissolução.
6. Distribuir em frascos apropriados, datar e identificar o volume.
7. Autoclavar a 121  1ºC por 15 minutos
8. A composição básica do ágar Baird Parker deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Extrato de carne 5,0 g
 Triptona. 10,0 g
 Extrato de levedura 1,0 g
 Piruvato de sódio. 10,0 g
 Glicina 12,0 g
 Cloreto de lítio (N/I) 5,0 g
 Ágar 20,0 g
 pH 6,8  0,2
9. Antes do plaqueamento, fundir e resfriar até aproximadamente 50ºC.
10. A cada litro de meio base, adicionar 50 ml de emulsão de gema de ovo 50% e 3 ml de
solução de telurito de potássio 3,5% esterilizada por filtração.
11. Homogeneizar bem e distribuir em placas, tomando o cuidado de evitar a formação de
espuma.
12. Antes do uso, secar as placas a 45-50ºC por aproximadamente 15 minutos, abertas e
invertidas, apoiando a base com a superfície do ágar invertido sobre a borda da tampa
da placa.
13. Pode-se ainda utilizar o fluxo laminar para secar as placas de Baird Parker, mantendo-
as semiabertas, sem invertê-las, pelo tempo necessário para a secagem completa de
sua superfície.
Ágar batata glicose 2%
1. Pesar o ágar batata glicose 2% de acordo com o volume de meio a ser preparado,
2. Transferir para recipiente adequado
3. Adicionar o volume de água destilada-deionizada correspondente
4. Deixar em repouso por aproximadamente 15 minutos.
7. Distribuir volumes de acordo com a necessidade.
8. Identificar e datar.
9. Esterilizar a 121  1ºC por 15 minutos.
10. Armazenar adequadamente
11. A composição básica do ágar batata glicose 2% deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
 Infusão de 200g de batata 4,0 g
 Glicose 20,0 g
 Ágar 15,0 g
 pH 5,6  0,1
10
12. Fundir o ágar batata e resfriar até a 46-48ºC

13. Adicionar aproximadamente 1,5 ml de solução aquosa de ácido tartárico 10% para
cada 100 ml, de forma a baixar o pH até 3,5.
14. Homogeneizar, verter nas placas aproximadamente 15 a 20 ml.
da placa ou em fluxo laminar expondo a superfície pelo tempo necessário para a
completa secagem.
Ágar cérebro-coração (ABHI)
1. Pesar o ágar cérebro-coração (ABHI) de acordo com o volume de meio a ser

preparado, respeitando a proporção indicada pelo fabricante.
5. Distribuir volumes de acordo com a necessidade e tampar
7. Autoclavar a 121  1ºC por 15 minutos Armazenar adequadamente
8. A composição básica do ágar cérebro-coração deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Infusão de cérebro de carneiro 12,5 g
 Infusão de coração 5,0 g
 Proteose-peptona 10,0 g
 D (+) glicose 2,0 g
 Ágar. 15,0 g
 pH 7,4  0,2
Ágar cereus (PEMBA)
1. Pesar o meio desidratado de acordo com o volume de meio a ser preparado,

3. Deixar em repouso por 15 minutos
6. Distribuir volumes de 90 ml em frascos.
7. Autoclavar a 121  1ºC por 15 minutos.
8. A composição básica do ágar cereus (PEMBA) base deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
 Peptona 1,0 g
 Manitol 10,0 g
11
 Sulfato de magnésio 0,1 g

 Fosfato de sódio bibásico 2,5 g
 Fosfato de potássio monobásico 0,25 g
 Azul de bromotimol 0,12 g
 Piruvato de sódio 10,0 g
 Ágar 14,0 g
 pH 7,2 ± 0,2
9. No momento da utilização, adicionar a 90 ml de ágar base fundido e resfriado a 49-
50ºC:
 10 ml de emulsão de gema de ovo a 50%;
 1 ml de sulfato de polimixina B a 0,1% esterilizada por filtração (H)
10. Homogeneizar, tomando o cuidado para não formar espuma, e Distribuir
aproximadamente 15 ml em placas estéreis.
12. Identificar e datar
13. Manter as placas sob refrigeração, protegidas de modo a evitar desidratação.
da placa ou em fluxo laminar expondo a superfície pelo tempo necessário para a
completa secagem.
Ágar Columbia-base
1. Preparar o ágar Columbia-base de acordo com o volume de meio a ser preparado,

4. Deixar em repouso por aproximadamente 15 minutos
7. Distribuir volumes de acordo com a necessidade
9. Autoclavar a 121 ± 1ºC por 15 minutos.
11. A composição básica do ágar Columbia-base deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona especial 23,0 g
 Amido solúvel 1,0 g
 Ágar 15,0 g
 pH 7,3  0,2
Ágar Columbia-CNA com sangue desfibrinado de carneiro ou de cobaio
1. Preparar o ágar Columbia-base de acordo com o indicado no item anterior, e adicionar

2 ml de solução 1% de ácido nalidíxico por litro de meio.
2. Antes da utilização, fundir o meio e deixar resfriar em banho-maria até 49-50ºC.
3. Distribuir aproximadamente 12 ml do ágar base em placas de Petri estéreis.
12

5. Com pipeta, distribuir sobre a superfície do ágar previamente distribuído e solidificado
5 ml de ágar Columbia-CNA adicionado de 5% de sangue desfibrinado de carneiro ou
de cobaio, tomando o cuidado para que se distribua homogeneamente sobre toda a
superfície.
6. Deixar solidificar e manter sob refrigeração, protegidas de modo a evitar e
desidratação, por até duas semanas.
Ágar com extrato de levedura
1. Pesar, separadamente, os componentes do ágar com extrato de levedura conforme a

formulação abaixo de acordo com o volume de meio a ser preparado.
6. Verificar necessidade de ajuste de pH, conforme norma específica do laboratório.
7. Distribuir volumes de acordo com a necessidade, tampar e identificar adequadamente.
9. A composição básica do ágar com extrato de levedura deverá ser a seguinte, por litro
de meio:
 Ágar 20,0 g
 pH 7,4  0,
Ágar cristal violeta vermelho neutro bile (VRBA)
1. Pesar o ágar cristal violeta vermelho neutro bile de acordo com o volume de meio a
ser preparado, respeitando a proporção indicada pelo fabricante.
deionizada correspondente.
5. Normalmente, não é necessário esterilizar este meio, porém, se for preciso, este meio
pode ser autoclavado a 121°C  1°C por 5 minutos.
6. A composição básica de ágar cristal violeta vermelho neutro bile deverá ser a seguinte,
por litro de meio:
 Peptona de carne 7,0 g
 Lactose 10,0 g
 Sais biliares n° 3.1,5 g
 Vermelho neutro 0,03 g (N)
 Cristal violeta (N/I/H/P) 0,002 g (N/I/H/P)
 Ágar 15,0 g
 pH 7,4  0,2
13
Ágar cristal violeta vermelho neutro bile glicose (VRBG)
1. Pesar o ágar cristal violeta vermelho neutro bile glicose de acordo com o volume de
meio a ser preparado, respeitando a proporção indicada pelo fabricante.
7. Normalmente, não é necessário esterilizar este meio, porém, se for preciso, este meio
pode ser autoclavado a 121°C  1°C por 5 minutos.
8. A composição básica de ágar cristal violeta vermelho neutro bile glicose deverá ser a
seguinte, por litro de meio:
 Glicose 10,0 g
 Sais biliares n° 3 1,5 g
 Cristal violeta 0,002 g (N/I/H/P)
 Ágar 13,0 g
 pH: 7,4  0,2
Ágar eosina azul de metileno (EMB)
1. Pesar o ágar EMB de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
proporção indicada pelo fabricante.
2. Transferir para recipiente adequado.
11. A composição básica do ágar EMB deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Lactose 10,0 g
 Fosfato de potássio bibásico 2,0 g
 Eosina amarela 0,4 g
 Azul de metileno 0,065 g (N/H)
 Ágar 15,0 g
 pH 7,0 ± 0,2
14
Ágar esculina
1. Pesar o ágar esculina de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
5. Aquecer até completa dissolução do ágar.
7. Distribuir volumes de 3 a 5 ml em tubos
11. A composição básica do ágar bile esculina deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Esculina 0,1 g
 Citrato férrico 0,5 g
 Ágar 14,5 g
 pH 6,6 ± 0,2
Ágar estoque
1. Pesar, separadamente, os ingredientes de acordo com o volume de meio a ser

preparado, respeitando a proporção indicada em sua formulação.
7. Distribuir em tubos volumes que permitam a formação de um bisel longo.
10. Após autoclavação, deixar os tubos solidificarem em posição inclinada.
11. Quando o meio for destinado à estocagem de culturas referenciais, distribuir em tubos
pequenos com tampa de rosca ou em frascos tipo penicilina, deixando solidificar em
posição vertical.
13. A composição básica do ágar estoque deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona bacteriológica 13,8 g

 Ágar 15,0 g
15
 pH 7,4 ± 0,2
Ágar fenilalanina
1. Pesar o ágar fenilalanina de acordo com o volume de meio a ser preparado,

5. Aquecer até completa dissolução do ágar
7. Distribuir em tubos volumes de 3 a 5 ml
11. A composição básica do ágar fenilalanina deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 DL-Fenilalanina 2,0 g
 Fosfato de sódio monobásico 1,0 g
 Ágar 15,0 g
 pH 7,3 ± 0,2
Ágar ferro dois açúcares (Ágar Kligler)
1. Pesar o ágar ferro dois açúcares de acordo com o volume de meio a ser preparado,
3. Adicionar o volume de água destilada-deionizada correspondente.
4. Deixar repousar por aproximadamente 15 minutos
5. Aquecer, sob agitação, até completa dissolução do meio.
7. Distribuir volume compatível com o tubo disponível, capaz de, quando inclinado,
formar uma base de  3,0 cm de altura e, sobre ela, um bisel de 2 a 3 cm.
9. A composição básica de ágar ferro dois açúcares deverá ser a seguinte, por litro de
meio:

 Peptona de caseína 15,0 g
 Lactose 10,0 g
 D (+) Glicose 1,0 g
16

 Tiossulfato de sódio 0,3 g
 Vermelho de fenol 0,05 g
 Ágar 12,0 g
 pH 7,4  0,2
Ágar ferro dois açúcares (Ágar Kligler) sal 3%
Proceder conforme o indicado pelo fabricante para o preparo do Ágar Kligler, acrescentando
25 g de cloreto de sódio a cada litro de meio preparado.
Ágar ferro três açúcares (TSI)
1. Pesar o ágar TSI de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
7. Distribuir volume compatível com o tubo disponível, capaz de formar uma base de 
3,0 cm de altura e, sobre ela, um bisel de 2 a 3 cm quando inclinado.
11. A composição básica do ágar TSI deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Lactose 10,0 g
 Sacarose 10,0 g
 D (+) Glicose 1,0 g
 Citrato de amônio e ferro 0,5 g
 Cloreto de sódio. 5,0 g
 Ágar 12,0 g
 pH 7,4 ± 0,1
Ágar ferro três açúcares (TSI) sal 3%
1. Proceder conforme o indicado pelo fabricante para o preparo do Ágar TSI,

acrescentando 25 g de cloreto de sódio a cada litro de meio preparado.
2. A composição básica do ágar gelatina deverá ser a seguinte, por litro de meio:
17

 Gelatina 120,0 g
 pH 6,9 ± 0,1
Ágar glicose triptona
1. Pesar o ágar glicose triptona de acordo com o volume de meio a ser preparado,
2. Transferir para recipiente adequado e adicionar o volume de água destilado-
10. A composição básica do ágar glicose triptona deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Triptona 10,0 g
 Glicose 5,0 g
 Púrpura de bromocresol 0,04 g
 Ágar 12,0 g
 pH 6,8  0,2
Ágar leite com tiamina (ALT)
1. Dissolver o ágar com extrato de levedura, e deixar em banho-maria até atingir 45 a

50ºC Em um erlenmeyer estéril, com capacidade mínima de 500 ml, misturar a cada
300 ml de ágar com extrato de levedura, 100 ml de leite UHT desnatado e 6 ml de
solução de tiamina 0,1% esterilizada por filtração.
2. Após homogeneização, distribuir aproximadamente 20 ml assepticamente em placas
estéreis deixando solidificar em superfície plana.
3. A composição básica do ágar leite com tiamina deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
 Ágar com extrato de levedura 300 ml

 Leite UHT desnatado 100 ml
 Tiamina cloridrato sol a 0,1% 6 ml
Ágar lisina ferro (LIA)
1. Pesar o ágar lisina ferro (LIA) de acordo com o volume de meio a ser preparado,
18
6. Distribuir em tubos, em volumes compatíveis com a formação de uma base de
aproximadamente 3 cm e bisel de aproximadamente 2 cm quando inclinados.
7. Datar e identificar.
8. Autoclavar a 121  1ºC por 15 minutos Armazenar adequadamente
9. A composição básica do ágar LIA deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Extrato de Levedura 3,0 g
 L-lisina 10,0 g
 Glicose 1,0 g
 Citrato Férrico Amoniacal 0,5 g
 Tiossulfato de Sódio 0,04 g
 Púrpura de Bromocresol 0,02 g
 Ágar 12,5 g
 pH 6,7  0,1
Ágar MacConkey-sorbitol (MCS)
1. Pesar o ágar MacConkey-sorbitol (MCS) de acordo com o volume de meio a ser

6. Distribuir volumes de 100 ml em frascos adequados.
10. A composição básica do ágar MacConkey-sorbitol deverá ser a seguinte, por litro de
meio:

 Sorbitol 10,0 g
 Sais biliares 1,5 g
 Cristal violeta 0,001 g (N/I/H/P)
 Ágar 13,5 g
 pH 7,1  0,1
19
Ágar manitol-gema de ovo-polimixina segundo Mossel (MYP)

6. Distribuir volumes de 90 ml em frascos adequados.
10. A composição básica do ágar manitol-gema de ovo-polimixina segundo Mossel deverá
ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona de carne e peptona de caseína (1:1) 10,0 g
 D-manitol 10,0 g
 Ágar 15,0 g
 pH 7,1  0,1
11. Fundir o meio e resfriar em banho-maria até 49-50ºC
12. Adicionar a cada 90 ml de ágar fundido e resfriado:
a. 10 ml de emulsão de gema de ovo a 50%;
b. 1 ml de solução de sulfato de polimixina B 0,1% esterilizada por filtração
Ágar manitol lisina cristal violeta verde brilhante (MLCB)
1. Pesar o ágar MLCB de acordo com volume de meio a ser preparado, respeitando a
2. Transferir para recipiente adequado e adicionar o volume de água destilado-deionizada
correspondente
5. Evitar superaquecimento
7. Não autoclavar.
8. Deixar resfriar até 49-50ºC, em banho-maria.
9. Distribuir em placas estéreis
10. Deixar solidificar em superfície plana
12. Manter as placas sob-refrigeração, invertidas e protegidas contra desidratação.
13. Antes do uso, secar a superfície do meio, colocando as placas semiabertas e invertidas em
estufa a 45-50ºC por aproximadamente 15 minutos.
14. A composição básica do ágar MLCB deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Extrato de Levedura 5,0 g
20
 Peptona 10,0 g
 Manitol 3,0 g
 L-Lisina cloridrato 5,0 g
 Citrato de ferro e amônio 1,0 g
 Verde brilhante 0,0125 g (N)
 Cristal violeta 0,01 g(N/I/H/P)
 Ágar 15,0 g
 pH 6,8 ± 0,1
Ágar motilidade

2. Adicionar o volume de água destilado-deionizada correspondente
5. Distribuir em tubos.
7. Autoclavar a 121°C por 15 minutos.
8. Solidificar em posição vertical
10. A composição básica de ágar motilidade deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Triptose 10 g
 Ágar 5,0 g
 pH 7,2 ± 0,2
Ágar motilidade-nitrato

3. Deixar em repouso por 15 minutos.
9. Deixar solidificar o meio em posição vertical
10. A composição básica de ágar motilidade-nitrato deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
21

 Nitrato de potássio1, 5 g (Co).
 Ágar 3,0 g
 pH 7,0  0,2
Ágar motilidade-nitrato tamponado

10. Deixar o meio solidificar em posição vertical
11. A composição básica do ágar motilidade-nitrato tamponado deverá ser a seguinte, por
litro de meio:
 Nitrato de potássio 1, 0 g(Co).
 Ágar 3,0 g
 Galactose 5,0 g
 Glicerina 5,0 ml
 pH 7,0  0,2
Ágar motilidade sal 3%

6. Distribuir em tubos Identificar e datar
8. Deixar solidificar o meio em posição vertical
9. A composição básica de ágar motilidade sal 3% deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
 Ágar 3,0 g
 pH 7,0  0,2
22
Ágar Müeller-Hinton sal 3%
1. Pesar o ágar Müeller-Hinton de acordo com o volume de meio a ser preparado,

5. Aquecer, sob agitação, até completa dissolução.
7. Distribuir volumes de 100 ml em frascos apropriados.
9. A composição básica do ágar Müeller-Hinton sal 3% deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
 Infusão de carne bovina 300,0 g

 Peptona de caseína ácida 17,5 g
 Amido 1,5 g
 Ágar 17,0 g
 pH 7,3  0,2
Ágar nutriente
1. Pesar o ágar nutriente de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando
a proporção indicada pelo fabricante.
3. Adicionar o volume de água destilado-deionizada correspondente.
7. Distribuir alíquotas de 10 ml em tubos apropriados.
9. Após autoclavação, deixar solidificar em posição inclinada, de forma a obter um bisel
longo.
11. A composição básica do ágar nutriente deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona 5,0 g
 Ágar 15,0 g
 pH 7,4 0,2
Ágar nutriente com sulfato de manganês
1. Preparar o ágar nutriente conforme descrito no item anterior e adicionar 300 mg de
23
sulfato de manganês a cada litro de meio

2. Fundir o meio e deixar resfriar em banho-maria até 45-50ºC.
3. Distribuir aproximadamente 10 ml em tubos
4. Deixar solidificar de forma inclinada, de maneira a obter um bisel maior ou igual a 4
cm.
Ágar nutriente isento de extrato de levedura
1. Pesar o ágar nutriente de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando
7. Distribuir alíquotas de 10 ml em tubos apropriados.
9. Após autoclavação, deixar solidificar em posição inclinada, de forma a obter um bisel
longo.
11. A composição básica do ágar nutriente isento de extrato de levedura deverá ser a
 Ágar 15,0 g
 pH 7,4 0,2
Ágar nutriente sal 3%
1. Preparar conforme descrito para o ágar nutriente e adicionar 25 g de cloreto de sódio,

por litro de meio.
2. Fundir o meio e deixar resfriar em banho-maria até 45-50ºC
3. Distribuir em placas ou tubos, conforme a necessidade.
Ágar Oxford (AO)
1. Pesar o meio ágar Oxford base de acordo com o volume de meio a ser preparado,
7. Distribuir volumes de acordo com a necessidade Identificar e datar
24

10. A composição básica do ágar Oxford deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Ágar Columbia base 39,0 g

 Esculina 1,0 g
 Citrato de amônio e ferro III 0,5 g
 Cloreto de lítio 15,0 g pH 7,0 ± 0,2(N/I)
11. Fundir o ágar Oxford e resfriar em banho-maria até 45-48ºC.
12. Dissolver o suplemento seletivo (vial) em 5 ml de etanol/água (1:1)
13. Agitar cuidadosamente.
14. Adicionar, a cada 500 ml de meio, 1 vial de suplemento.
15. Distribuir em placas de Petri estéreis.
16. Identificar, datar e armazenar sob refrigeração, protegidas da luz e envoltas em sacos
plásticos, por até 4 semanas.
Obs.: O suplemento para o ágar Oxford contido em cada vial, comercialmente disponível, tem em
sua composição as seguintes substâncias:
 Cicloheximide200 mg
 Sulfato de Colistina10 mg
 Acriflavina 2,5 mg (T)
 Cefotetan 1,0 mg
 Fosfomicina 5,0 mg
Ágar padrão para contagem (PCA)
1. Pesar o ágar padrão para contagem de acordo com o volume de meio a ser preparado,
8. Esterilizar a 121 ± 1ºC por 15 minutos
9. Identificar e armazenar adequadamente
10. A composição básica do ágar padrão para contagem deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
 Triptona 5,0 g
 Glicose 1,0 g
 Ágar 15,0 g
 pH 7,0 ± 0,2
25
Ágar PALCAM (AP)
1. Pesar o ágar PALCAM base de acordo com o volume de meio a ser preparado,
7. Distribuir volumes de acordo com a necessidade. Identificar e datar.
10. A composição básica do ágar PALCAM deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Ágar Columbia base 39,0 g

 Esculina 0,8 g
 D(-) manitol 10,0 g
 Glicose 0,5 g
 Ágar 13,0 g
 pH 7,0 ± 0,1
11. Fundir o meio e deixar esfriar até 45-48ºC.
12. Dissolver o suplemento seletivo de cada vial em 2 ml de água destilada estéril e
misturar até completa dissolução.
13. Adicionar um vial para cada 500 ml de meio
14. Distribuir em placas estéreis, deixando solidificar em superfície plana.
15. Identificar, datar e armazenar sob refrigeração, protegidas da luz, por até 4 semanas.
16. O suplemento para o ágar PALCAM contido em cada vial, comercialmente disponível, tem
em sua composição as seguintes substâncias:
 Sulfato de Polimixina B 5,0 mg
 Ceftazidina10 mg
 Acriflavina(T)2,5 mg
Ágar para ensaio de DNAse com verde de metila

 Ágar DNAse 4,2 g
 Verde de metila(H)0,05g
 pH 7,3±0,2
2. Adicionar 100 ml de água destilada-deionizada ao ágar DNAse

3. Agitar com auxílio de bastão de vidro até completa dissolução
26
6. Adicionar o verde de metila

7. Não é necessário esterilizar.
8. Distribuir em placas aproximadamente 25 ml e deixar solidificar em superfície plana
Ágar para esporulação
1. Pesar o ágar para esporulação de acordo com o volume de meio a ser preparado,
7. Distribuir volumes de acordo com a necessidade. Identificar e datar
8. Esterilizar a 121 ± 1ºC por 20 minutos
10. A composição básica do ágar para esporulação deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
 Polipeptona 15,0 g
 Amido solúvel 3,0 g
 Sulfato de manganês 0,1 g
 Tioglicolato de sódio 1,0 g
 Ágar 15,0 g
 pH 7,8  0,1
Ágar para fermentação de carboidratos – base com púrpura de bromocresol
1. Pesar os componentes da formulação de acordo com o volume de meio a ser

preparado
6. Distribuir em frascos, identificar o volume.
8. A composição básica do ágar para fermentação de carboidratos deverá ser a seguinte
por litro de meio:
 Triptona 10,0 g
 Púrpura de bromocresol(H) (solução 1,6%)2,5 ml
 Ágar 15,0 g
 pH 6,7 ± 0,2
27
9. Antes do uso, adicionar ao meio, dissolvido e resfriado a 46-48ºC, o carboidrato

desejado (previamente esterilizado por filtração), na concentração e proporção
indicadas na técnica.
10. Verter aproximadamente 20 ml nas placas.
Ágar Rambach
1. Hidratar a quantidade de meio Rambach, de acordo com o volume de meio necessário

(o meio é fornecido em frações suficientes para preparar 250 ml).
5. Evitar aquecimento excessivo
6. Adicionar 1 vial de suplemento para cada 250 ml de meio preparado.
7. Homogeneizar bem.
8. Não autoclavar
9. Resfriar a 49-50ºC em banho-maria
10. Distribuir em placas de Petri estéreis
13. Armazenar invertidas, protegidas em sacos plásticos, sob refrigeração.
14. O meio se mantém estável em temperatura ambiente por 12 horas e em refrigeração
por 3 semanas
15. Antes do uso, secar a superfície do meio, colocando as placas semiabertas e invertidas
em estufa a 45-50ºC por aproximadamente 15 minutos.
16. A composição básica do ágar Rambach deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona 8,0 g
 Desoxicolato de sódio (N)1,0 g
 Mistura cromógena 1,5 g
 Propilenoglicol 10,5 g
 Ágar 15,0 g
 pH final: 7,3 ± 0,2
Ágar Sahid Ferguson perfringens (SFP)
1. Pesar o ágar SFP de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
3. Adicionar volume de água destilada-deionizada correspondente
7. Distribuir em frascos apropriados.
28
9. Esterilizar em autoclave a 121  1ºC por 15 minutos

11. A composição básica do ágar SFP deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona de soja 5,0 g
 Bissulfito de sódio 1,0 g
 Ágar 20,0 g
 pH 7,4  0,2
12. Para a preparação das placas de ágar SFP, incorporar 3 mg de polimixina B e 12 mg de
kanamicina, a cada 1000 ml do meio fundido e resfriado a 45-50ºC.
Ágar sal triptona (T1N1)
1. Pesar separadamente os seguintes componentes:
 Triptona 10,0 g
 Ágar 20,0 g
 pH 7,2  0,2
2. Transferir para recipiente apropriado

3. Adicionar 1000 ml de água destilada-deionizada
7. Distribuir volumes de 10 ml em tubos de ensaio
9. Deixar solidificar em posição inclinada, de forma a obter um bisel de
aproximadamente 4 cm.
Ágar soja triptona (TSA)

6. Distribuir volumes de 100 ml em frascos adequados
8. A composição básica do ágar soja triptona deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Triptona (Peptona de caseína-digestão tríptica ou pancreática) 15,0 g
29
 Peptona de farinha de soja 5,0 g

 Ágar 15,0 g
 pH 7,3 ± 0,2
Ágar soja triptona (TSA) com CaCl2 e eritrócitos lavados de carneiro
1. Manter frascos com 200 e 100 ml de TSA base, preparado conforme o item anterior,
em banho-maria a 45ºC.
2. Usar 200 ml dos frascos para preparar placas com uma camada base de
aproximadamente 10 ml
4. A 100 ml de TSA base, adicionar 5 ml de eritrócitos lavados de carneiro e 1 ml de uma
solução de cloreto de cálcio 1M, mantendo o meio em banho-maria a 45ºC no máximo
por 15 minutos.
5. Pipetar uma segunda camada de 5 ml de ágar TSA com eritrócitos de carneiro e cloreto
de cálcio sobre a camada base solidificado
Ágar soja triptona (TSA) sal 3%
Preparar o ágar soja triptona de acordo com as recomendações contidas neste capítulo e
adicionar 25 g de cloreto de sódio para cada litro de meio
Ágar tiossulfato-citrato-sacarose-sais biliares (TCBS)
1. Pesar o ágar tiossulfato-citrato-sais biliares-sacarose (TCBS) de acordo com o volume

de meio a ser preparado, respeitando a proporção indicada pelo fabricante.
7. Não autoclavar
8. Distribuir, assepticamente, volumes de 15 ml em placas de Petri previamente
esterilizadas.
10. A composição básica de ágar tiossulfato-citrato-sais biliares-sacarose deverá ser a

 Citrato de sódio 10,0 g
 Bile 5,0 g
30
 Sacarose 20,0 g
 Colato de sódio 3,0 g
 Azul de bromotimol l 0,04 g
 Azul de timol 0,04 g
 Ágar 15,0 g
 pH 8,6  0,2
Ágar tirosina

7. Distribuir volumes de 100 ou 50 ml em frascos adequados
9. A composição do ágar tirosina base deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Peptona 1,0 g
 Ágar 15,0 g
 pH 7,0  0,2
10. A 100 ml do meio base, fundido e resfriado a 45-50ºC, adicionar 10 ml de solução

aquosa estéril de tirosina a 5% e misturar bem.
11. Distribuir aproximadamente 10 ml em tubos de ensaio estéreis, agitando para evitar a
separação da tirosina.
12. Este meio também pode ser distribuído em placas.
Ágar triptose (AT)
1. Pesar o meio ágar triptose de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando
3. Adicionar a cada litro de meio 2 ml de solução de ácido nalidíxico a 1%
4. Homogeneizar
8. Distribuir porções de 100 e 50 ml em frascos apropriados.
11. Autoclavar a 121  1ºC, por 15 minutos.
31

13. A composição básica do ágar AT deverá ser a seguinte por litro de meio:
 Bacto triptose 20,0 g

 Dextrose 1,0 g
 Ágar 15,0 g
 pH 7,4 ± 0,2
Ágar Triptose com ácido nalidíxico (ATN)
1. Preparar o AT de acordo com o item anterior

2. Adicionar a cada litro de meio 2 ml de solução de ácido nalidíxico a 1%
3. Homogeneizar
Ágar triptose sulfito cicloserina (TSC)
1. Pesar o ágar TSC de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
7. Distribuir em frascos
11. A composição básica de ágar TSC deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Bissulfito de sódio 1,0 g
 Ágar 20,0 g
 pH 7,4  0,2
12. No momento do uso, fundir o Ágar e resfriar até 46-48ºC em banho-maria.

13. Incorporar ao meio fundido e resfriado 10 ml de uma solução a 5% de cicloserina
esterilizada por filtração, por cada litro de meio.
32
Ágar ureia
1. Pesar o ágar ureia base de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando
4. Homogeneizar até completa dissolução
6. Distribuir em frascos Identificar e datar
9. A composição básica do ágar ureia deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona de Carne 1,0 g

 D+Glicose 1,0 g
 Ágar 12,0 g
 pH 6,8 ± 0,2
10. Antes do uso, fundir o ágar ureia e resfriar até 50ºC em banho-maria.
11. Assepticamente, adicionar 50 ml de solução de ureia 40% esterilizada por filtração, por
litro de meio.
12. Distribuir de acordo com o uso
Ágar verde brilhante vermelho de fenol lactose sacarose (BPLS)
1. Pesar o ágar BPLS, de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
6. Verificar a necessidade de ajuste de PH, conforme norma específica do laboratório.
10. Armazenar adequadamente.
11. A composição básica do ágar BPLS deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Lactose 10,0 g
 Sacarose 10,0 g
33

 Verde brilhante (N)0,0125 g
 Ágar 12,0 g
 pH 6,9 ± 0,1
12. Antes do uso, após dissolução do meio e resfriamento até aproximadamente 50ºC,
adicionar a cada 100 ml de meio 0,1 ml de solução de novobiocina a 4%.
13. Distribuir em placas estéreis.
15. Manter as placas sob refrigeração, invertidas e protegidas contra desidratação.
Ágar xilose-lisina-desoxicolato (XLD)
1. Pesar o ágar XLD de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
6. Evitar superaquecimento
8. Não autoclavar
12. A composição básica do ágar XLD deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 L(+) Lisina 5,0 g
 Lactose 7,5 g
 D(+) Xilose 3,5 g
 Sacarose 7,5 g
 Desoxicolato de sódio 2,5 g
 Ágar 13,5 g
 pH 7,4 ± 0,2
34
Ágar XLT4
1. Pesar o ágar XLT4 de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
5. Adicionar 4,6 ml do suplemento (solução a 26-28% de Tergitol-4/Tetradecylsulfato de
Sódio) a cada litro de meio preparado
6. Aquecer até completa dissolução, evitando superaquecimento.
7. Obs.: O meio não deve ser mantido mais do que 45 minutos a 50°C para evitar
formação de precipitados
9. Não autoclavar
13. A composição básica do ágar XLT4 deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Proteose peptona 1,6 g
 L-Lisina 5,0 g
 Lactose 7,5 g
 D + Xilose 3,75 g
 Sacarose 7,5 g
 Tiossulfato de Sódio 6,8 g
 Citrato de Amônio e Ferro III 0,8 g
 Ágar 18,0 g
 pH 7,4 ± 0,2
Água peptonada alcalina para Vibrio cholerae (APHA 3a ed.)
1. Pesar o meio água peptonada alcalina de acordo com o volume de meio a ser
preparado, respeitando a proporção indicada pelo fabricante ou compondo a
formulação no laboratório.
5. Alcalinizar até pH 8,6 ± 0,2
6. Distribuir volume de 10 ml em tubos.
10. A composição básica da água peptonada deverá ser a seguinte por litro de meio:
35
 Peptona 10,0 g
 pH 8,6 ± 0,2
Caldo para fermentação de carboidratos – base com púrpura de bromocresol
1. Pesar o caldo base de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
5. Verificar a necessidade de ajuste de pH, conforme norma específica do laboratório
6. Distribuir volumes de 90 ml em frascos apropriados
7. Este meio base pode ser autoclavado a 121  1ºC por 15 minutos, nesse caso, a solução
de carboidrato a ser adicionada deverá ser previamente esterilizada por filtração.
8. Após a adição dos carboidratos, distribuir 3 a 10 ml em tubos estéreis apropriados.
9. Identificar os tubos com informação sobre o carboidrato que foi adicionado ao meio
10. Manter sob refrigeração até o momento do uso.
11. Obs.: Quando o meio base não for autoclavado, prepará-lo conforme instruções acima e
adicionar, a cada fração de 90 ml, 10 ml da solução a 5 ou 10% do carboidrato desejado
(ver instruções específicas sobre o preparo das soluções de carboidratos no capítulo de
“soluções e reagentes” deste manual).
12. Esterilizar por filtração, dispensando de 3 a 10 ml diretamente em tubos estéreis.
13. A composição básica do caldo para fermentação - base com púrpura de bromocresol
deverá ser a seguinte por litro de meio:

 Peptona 10,0 g
 pH 7,0 ± 0,2
Caldo cérebro-coração (BHI)
1. Pesar o meio caldo cérebro-coração (BHI) de acordo com o volume de meio a ser
6. Distribuir 10 ml em tubos com tampa de rosca.
10. A composição básica do caldo cérebro-coração (BHI) deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
 Infusão de cérebro de carneiro 12,5 g
36
 Infusão de coração de boi 5,0 g

 Proteose-peptona 10,0 g
 D (+) glicose 2,0 g
 Fosfato dissódico 2,5 g
 pH 6,6  0,2
Caldo cérebro-coração concentração dupla-sal 0,65%-extrato de levedura 0,6%

(BHI-SE)
Pesar 2 vezes a quantidade de meio caldo cérebro-coração (BHI) indicada pelo fabricante,
adicionando 1,5 g de Cloreto de sódio e 6,0 g por litro de meio a ser preparado.
Caldo cérebro-coração nitrato (BHI-NO3)
1. Pesar o meio caldo cérebro-coração, de acordo com o volume de meio a ser

2. Adicionar 1,5 g de nitrato de potássio (CO) para cada litro de meio
Caldo cérebro-coração-sal 0,65%- extrato de levedura 0,6% (BHI-SE)
1. Pesar o meio caldo cérebro-coração (BHI), de acordo com o volume de meio a ser
2. Adicionar 1,5 g de Cloreto de sódio e 6,0 g de extrato de levedura, por litro de meio a
ser preparado.
Caldo Cérebro-coração tiamina (BHI-T)
1. Pesar o meio caldo cérebro-coração (BHI), de acordo com o volume de meio a ser
2. Antes do uso, adicionar, em cada tubo com 10 ml, 0,2 ml de solução aquosa de tiamina
a 0,01%, esterilizada por filtração.
Caldo de carne cozida (CCC)
1. Em cada tubo selecionado para uso, distribuir 10 ml de água destilada-deionizada e 1 g

do granulado (ou conforme a indicação do fabricante).
5. A composição básica do caldo de carne cozida deverá ser a seguinte por litro de meio:
 Músculo cardíaco de boi 454,0 g

 D () Glicose 2,0 g
37

 pH 7,4  0,1
Caldo de Enriquecimento para Listeria (LEB)
1. Pesar os componentes da formulação do meio LEB de acordo com o volume de meio a

ser preparado.
2. Transferir para recipiente adequado Adicionar o volume de água destilada-deionizada
correspondente
3. Agitar até completa dissolução.
5. Distribuir volumes de 225 ml.
7. Autoclavar a 121  1ºC por 15 minutos Esfriar logo após a esterilização e manter sob
refrigeração.
8. A composição básica do caldo LEB deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Triptona 5,0 g
 Extrato de carne purificado 5,0 g
 Ácido Nalidíxico sol. a 1% 2,0 ml
 pH 7,4 ± 0,2
Imediatamente antes de o uso adicionar 0,25 ml de solução aquosa a 1,0% de acriflavina

cloridrato (T) por frasco de 225 ml
Caldo de enriquecimento para Listeria (UVM)
1. Pesar o meio UVM de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
6. Distribuir em frascos, volumes de 225 ml, identificar e datar.
7. Autoclavar a 121  1ºC por 15 minutos Esfriar logo após a esterilização e manter sob
refrigeração.
8. A composição básica do caldo UVM deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Triptona 5,0 g
 Extrato de carne purificado 5,0 g
38

 Esculina 1,0 g
 pH 7,4 ± 0,2
9. Imediatamente antes do uso, assepticamente adicionar 1 vial de suplemento

específico para cada 500 ml de caldo.
10. Na ausência do suplemento vial, adicionar 1,2 ml de solução aquosa a 1,0% de acriflavina
cloridrato (T) e 2 ml de ácido nalidíxico solução 1% em NaOH 0,1N (esterilizadas por
filtração) por litro de caldo.
Obs.: Algumas marcas já contêm os suplementos. Outras contêm o ácido nalidíxico, necessitando
apenas a complementação com acriflavina.
O conteúdo do suplemento vial para o caldo UVM, comercialmente disponível, é o seguinte:
 Acriflavina (T/H)6,0 mg
 Ácido nalidíxico (N/H)10,0 mg
 Água destilada ou deionizada 5,0 ml
Caldo EC
1. Pesar o caldo EC de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a

4. Agitar até completa dissolução
6. Distribuir volumes de 10 ml em tubos de ensaio previamente preparados com tubos
de Durham invertidos
9. A composição básica de caldo EC deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona 20,0 g
 Lactose 5,0 g
 Bile bovina 1,5 g
 pH 6,9  0,2
39
Caldo EC com novobiocina (EC + n)
1. Pesar o caldo EC de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a

2. Após preparo e autoclavação, adicionar, a cada tubo com 10 ml de meio, 0,5 ml de uma
solução de novobiocina a 4 mg/ml.
Caldo experimental para anaeróbios segundo R F Corseuil (caldo Rogert)

 Peptona 20,0 g
 Glicose 12,5 g
 L-cisteína 0,5 g
 Caldo de fígado 500 ml
 pH 7,6  0,2
2. Transferir para recipiente adequado, adicionar 500 ml de água destilada-deionizada.
Obs.: Para preparar o caldo de fígado, ferver durante uma hora o fígado bovino moído na
proporção de 500g para cada litro de água. Filtrar em papel filtro, fracionar em alíquotas de
500 ml e congelar até a sua utilização.
Pode-se substituir o extrato de carne e a água destilada por caldo de carne, previamente
preparado da mesma forma que o caldo de fígado, utilizando-se músculo bovino.
Caldo Fraser
1. Pesar o caldo fraser base, de acordo com o volume de meio a ser preparado,
4. Misturar até completa dissolução
6. Distribuir volumes de 10 ml em tubos.
9. Resfriar imediatamente após a autoclavação. Armazenar sob refrigeração
10. A composição básica do caldo Fraser deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Triptona 5,0 g
40

 Esculina 1,0 g
 pH 7,2 ± 0,1
Imediatamente antes do uso, adicionar assepticamente a cada tubo 0,1 ml do suplemento

(vial) dissolvido em 5 ml de água/etanol 1:1.
* O vial comercialmente disponível contém suplemento suficiente para 500 ml de meio. A

composição do vial é a seguinte:
 Citrato de Amônio e Ferro III 250 mg

 Acriflavina 12,5 mg
 Ácido Nalidíxico10 mg
Obs.: Algumas marcas deste meio já incluem em sua formulação uma ou mais das substâncias
do suplemento. Nesse caso, os componentes ausentes na formulação deverão ser adicionados
individualmente na seguinte proporção: para cada tubo de 10 ml do caldo:
 0,1 ml da solução de citrato de amônio e ferro III a 5%;

 0,25 ml de solução de acriflavina cloridrato a 0,1%;
 0,2 ml da solução de ácido nalidíxico a 0,2%
Manter o meio protegido da luz.
Caldo gelatina fosfato sal (GPS)
 Gelatina 10,0 g
 pH: 7,2  0,2
2. Transferir para recipiente apropriado

5. Distribuir de acordo com a utilização
41
Caldo Glicose-sal 3%-teepol (GSTB)
1. Pesar o meio caldo glicose sal 3% teepol, de acordo com o volume de meio a ser
6. Distribuir 10 ml em tubos com tampa de rosca
10. A composição básica do caldo glicose-sal 3%-teepol deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
 Peptona 10,0 g
 Glicose 5,0 g
 Violeta de Metila 0,002 g
 Teepol 4,0 ml
 pH 8,8 ± 0,2
Caldo glicose triptona (caldo dextrose triptona)
1. Pesar o meio glicose triptona, de acordo com o volume de meio a ser preparado,
6. Distribuir volumes de 10 ml em tubos com tampa de rosca
10. A composição básica do caldo dextrose triptona deverá ser a seguinte, por litro de
meio:
 Triptona 10,0 g
 Glicose 5,0 g
 pH 6,7  0,2
42
Caldo Horie arabinose violeta de etila (HAEB)
 Peptona 5,0 g
 Violeta de Etila 0,001 g
 Azul de Bromotimol 0,03 g

7. Preparar separadamente 100 ml de uma solução aquosa a 5% de arabinose, esterilizar
por filtração e adicioná-la assepticamente aos 900 ml do caldo.
8. Distribuir assepticamente 10 ml em tubos estéreis de 15 x 180 mm
Caldo lauril sulfato de sódio simples
1. Pesar o caldo lauril sulfato de sódio de acordo com o volume de meio a ser preparado,
6. Distribuir volumes de 10 ml em tubos de ensaio contendo tubos de Durham invertidos.
8. A composição básica de caldo lauril sulfato de sódio deverá ser a seguinte por litro de
meio:
 Triptona 20,0 g
 Lactose 5,0 g
 Lauril sulfato de sódio 0,1 g
 pH 6,8  0,2
43
Caldo lauril sulfato de sódio concentração dupla
Seguir o procedimento do caldo simples (item anterior), dobrando a quantidade dos

ingredientes para o mesmo volume de água.
Caldo lisina descarboxilase
1. Pesar o caldo lisina descarboxilase de acordo com o volume de meio a ser preparado
6. Distribuir 5 ml em tubos de ensaio.
10. A composição básica do caldo lisina deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona 5,0 g
 Glicose 1,0 g
 L-Lisina 5,0 g
 pH 6,1 ± 0,2
Caldo ONPG
1. Preparar a solução de água peptonada 1% de acordo com o volume de meio a ser

formulação de acordo com as orientações contidas neste manual. Ajustar o pH, se
necessário. Distribuir em frascos
3. Esfriar e reservar
4. Preparar a solução de ONPG dissolvendo 0,6 g de O-nitrofenil-Beta-D-
Galactopiranosídeo em 100 ml de solução 0,01 M de Fosfato de Sódio Bibásico.
Esterilizar por filtração. Manter sob refrigeração, envolvido em papel alumínio.
5. Preparo do Caldo ONPG: Misturar assepticamente 25 ml da solução ONPG em 75 ml da
água peptonada
6. Distribuir 0,5 ml do caldo em tubos esterilizados Obs.: não usar se ficar amarelo
7. Validade: 30 dias sob congelamento
44
Caldo ONPG sal 3%
1. Preparar a solução de água peptonada 1% de acordo com o volume de meio a ser

formulação de acordo com as orientações contidas neste capítulo. Adicionar 25,0 g de
cloreto de sódio por litro de meio
3. Esfriar e reservar
4. Preparo do Caldo ONPG sal 3%:
5. Misturar assepticamente 25 ml da solução ONPG em 75 ml da água peptonada-sal 3%
6. Obs.: Ver preparo da solução de ONPG item anterior
Caldo peptonado sem sal
1. Pesar, em recipiente apropriado, o seguinte componente:
 Peptona (ou triptona)10,0 g

 Água destilada/deionizada1000 ml
 pH 7,4  0,2
2. Agitar até a completa dissolução

Caldo peptonado sal (3%, 6%, 8% ou 10%).
1. Pesar, em recipiente apropriado, os seguintes componentes:
 Peptona (ou triptona)10,0 g

 Cloreto de sódio para atingir a concentração desejada qsp
 Água destilada/deionizada1000 ml
 pH 7,4  0,2

45
Caldo Rappaport Vassiliadis
1. Pesar o caldo Rappaport Vassiliadis, de acordo com o volume de meio a ser preparado,
6. Distribuir 10 ml em tubos de ensaio
10. A composição básica do caldo Rappaport Vassiliadis deverá ser a seguinte, por litro de
meio:

 Cloreto de magnésio* 40,0 g
 Verde malaquita* (N)0,04 g
 pH 5,2 ± 0,2
* - algumas marcas de meio Rappaport Vassiliadis não incluem cloreto de magnésio e verde malaquita em sua formulação. Ao
utilizar este meio, verificar a necessidade de suplementação.
Obs.: O meio preparado pode ser estocado em refrigeração por até 7 meses (Vassiliadis et
al.1985)
Caldo selenito cistina
1. Pesar o caldo selenito cistina, de acordo com o volume de meio a ser preparado,
4. Aquecer se necessário, até no máximo 60ºC, para completa dissolução.
6. Distribuir 10 ml em tubos de ensaio
7. Não autoclavar
8. Usar imediatamente após o preparo.
9. Descartar o meio que não for utilizado
10. A composição básica do caldo selenito cistina deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 L (-) cistina 0,01 g
 Lactose 4,0 g
 Bi-selenito de sódio (T) 4,0 g
 pH 7,0 ± 0,2
46
Caldo soja triptona (TSB)
1. Pesar o caldo TSB, de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
4. Agitar, com auxílio de bastão de vidro ou agitador magnético, até completa dissolução.
10. A composição básica do caldo TSB deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Triptona (peptona de caseína-digestão pancreática) 17,0 g

 Peptona de farinha de soja 3,0g
 D(+) glicose 2,5 g
 pH 7,3  0,1
Caldo soja triptona (TSB)- NaCl 10% - piruvato de sódio 1%
1. Pesar o caldo TSB de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
2. Adicionar 95,0 g de cloreto de sódio e 10,0 g de piruvato de sódio, por litro de meio a
ser preparado.
Caldo telurito manitol glicina segundo Giolitti-Cantoni
1. Pesar o meio caldo telurito-manitol-glicina de acordo com o volume de meio a ser

6. Distribuir 19 ml em tubos com tampa de rosca
10. A composição básica do caldo telurito manitol glicina deverá ser a seguinte, por litro
de meio:
 Triptona 10,0 g
47

 D – manitol 20,0 g
 Glicina 1,2 g
 Piruvato de sódio 3,0 g
 pH 6,9  0,2
11. No momento da utilização, adicionar 0,1 ml de uma solução de telurito de potássio a

1% a cada tubo de meio.
Obs.: O meio base (sem a adição de telurito de potássio) pode ser armazenado por duas
semanas sob refrigeração
Caldo tetrationato
1. Pesar o caldo tetrationato base de acordo com o volume de meio a ser preparado,
4. Aquecer brevemente, até 60ºC no máximo, e resfriar rapidamente.
5. Distribuir assepticamente em tubos estéreis
7. Não autoclavar
8. A composição do caldo tetrationato base deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Mistura de sais biliares 1,0 g
 Carbonato de cálcio 10,0 g
 pH 8,4 0,2
9. No momento do uso, adicionar 20 ml de solução iodo-iodeto e 10 ml de solução verde

brilhante a 0,1%, por litro de meio.
Obs.: Ao dispensar o meio, certifique-se de que qualquer precipitado formado esteja

suspendido. Este meio apresenta-se turvo e verde, com sedimento branco de carbonato de
cálcio.
Caldo Triptose Fosfato (TPB)
1. Pesar o caldo TPB de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
4. Aquecer se necessário, até no máximo 60ºC, para completa dissolução.
48
6. Distribuir volumes conforme a necessidade

10. A composição básica do Caldo Triptose Fosfato deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Triptose 20,0 g
 Glicose 2,0 g
 pH 7,3  0,2
Caldo ureia
1. Pesar o caldo ureia de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
6. Esterilizar por filtração, distribuindo volumes de aproximadamente 3 ml diretamente
em tubos estéreis.
8. A composição básica do caldo ureia deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Fosfato de sódio bibásico. 9,5 g
 Ureia 20,0 g
 pH 6,8 ± 0,1
Caldo Verde brilhante bile lactose 2%
1. Pesar o caldo Verde brilhante bile lactose 2%, de acordo com o volume de meio a ser
deionizada correspondente. Agitar até completa dissolução
4. Distribuir volumes de 10 ml em tubos de ensaio com tubos de Durham invertidos
6. A composição básica de caldo Verde brilhante-bile 2%-lactose deverá ser a seguinte,
por litro de meio:
 Peptona 10,0 g
 Lactose 10,0 g
 Bile Bovina 20,0 g
 Verde brilhante (N) 0,0133 g
49
 pH 7,4  0,2
Caldo Verde brilhante-bile-lactose 2% – MUG (BRILA-MUG)
1. Pesar o caldo Brila-MUG de acordo com o volume de meio a ser preparado,

4. Misturar até completa dissolução
6. Distribuir volumes de 10 ml em tubos de ensaio com tubos de Durham invertidos
10. A composição básica do caldo Brila-MUG deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona. 10,0 g
 Lactose 10,0 g
 L-triptofano 1,0 g
 Bile concentrado 20,0 g
 Verde brilhante (N)0,0133 g
 4 - Metilumbeliferil - - D- glicuronídeo 0,1 g
 pH 7,2 ± 0,1
Caldo vermelho de fenol - base (para fermentação de carboidratos)
1. Pesar o caldo vermelho de fenol - base de acordo com o volume de meio a ser
6. Distribuir volumes de 90 ml em frascos
7. Autoclavar a 121  1ºC por 15 minutos ou esterilizar por filtração após a adição da
solução de carboidrato.
8. A composição básica de caldo vermelho de fenol base deverá ser a seguinte, por litro
de meio:

 pH 7,4  0,2
1. Adicionar aos frascos com 90 ml de meio autoclavado e resfriado a 45-50°C 10 ml de

solução de carboidrato esterilizada por filtração; caso se opte por não autoclavar o
meio base, adicionar a solução de carboidrato e esterilizar a mistura por filtração. As
50
soluções de carboidratos deverão estar em concentração final de 5,0 a 10,0 g por litro
de meio.
2. O preparo das soluções de carboidratos poderá ser verificada no capítulo “Reagentes e
Soluções”, deste Manual.
3. Distribuir em tubos, de acordo com a necessidade.
4. Tampar e identificar os tubos
5. Manter sob refrigeração até o momento do uso
Caldo Vermelho de fenol sal 3%
Preparar o caldo vermelho de fenol base de acordo com o indicado, adicionando 30 g de

cloreto de sódio por litro de meio.
Caldo vermelho de fenol sal 3%-lisina
1. Preparar o caldo vermelho de fenol-sal de acordo com o indicado

2. Adicionar 1 ml de solução de lisina a 10% esterilizada por filtração a cada tubo com 10
ml de meio básico.
Caldo VM-VP
1. Pesar o caldo VM-VP de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
8. A composição básica de caldo VM-VP deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Glicose 5,0 g
 pH 6,9  0,2
Meio gelatina
1. Pesar o ágar gelatina, de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
proporção indicada pelo fabricante ou compondo a formulação.
51
 A composição básica do ágar gelatina deverá ser a seguinte, por litro

de meio:
 pH 6,9 ± 0,1
Meio gelatina sal 3%
Preparar o ágar gelatina de acordo com o item anterior, adicionando 30 g de cloreto de sódio
por litro de meio.
Meio leite com ferro
1. Preparar uma solução 2% de sulfato ferroso heptahidratado e adicionar, lentamente,

50 ml desta solução a um litro de leite integral.
2. Autoclavar a 118  1ºC durante 12 minutos
Obs.: este meio deve ser preparado imediatamente antes do uso
3. A composição básica do meio leite com ferro deverá ser a seguinte:

 Leite integral1000 ml
 Sulfato ferroso heptahidratado 1,0 g
 Água destilada50 ml
Meio lactose-gelatina.
1. Pesar os componentes de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando

a proporção estabelecida na formulação abaixo descrita.
2. Suspender os componentes no volume de água destilada-deionizada
3. Deixar em repouso por 15 minutos. Aquecer até completa dissolução
4. Distribuir em tubos
6. Antes de o uso colocar o meio em banho-maria a 50-70ºC por 2 horas para eliminar o
oxigênio
7. A composição básica do meio lactose gelatina deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Triptose 15,0 g
 Lactose 10,0 g
 Vermelho fenol 0,05 g
 pH 7,5  0,2
52
Meio O/F (Hugh-Leifson) sal 3%
1. Pesar o meio OF glicose de acordo com o volume de meio a ser preparado,

respeitando a proporção indicada pelo fabricante, adicionando 30 g de cloreto de
sódio por litro de meio a ser preparado.
9. A composição básica de meio OF glicose deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Triptona 2,0 g
 Azul de bromotimol 0,08 g
 Glicose 10,0 g
 Ágar 2,0 g
 pH 6,8  0,2
Meio SIM
1. Pesar o meio SIM de acordo com o volume de meio a ser preparado, respeitando a
6. Verificar a necessidade de ajuste de PH, conforme norma específica do laboratório.
7. Distribuir volumes de 10 ml em tubos
11. A composição básica do meio SIM deverá ser a seguinte, por litro de meio:

 Ágar 3,0 g
 pH: 7,3 ± 0,1
53
Meio tioglicolato
1. Pesar o meio tioglicolato de acordo com o volume de meio a ser preparado,

4. Homogeneizar
8. Distribuir volumes de 10 ml em tubos.
Obs.: Algumas marcas deste meio, vendidas na forma desidratada, não incluem o ágar em sua
formulação. Nesses casos, deverá ser adicionada quantidade de ágar que, no meio pronto,
corresponda a 0,75 g/L.
12. A composição básica do meio tioglicolato deverá ser a seguinte, por litro de meio:
 Peptona caseína 15,0 g

 D(+) glicose 5,5 g
 L(+) cisteína 0,5 g
 Tioglicolato de sódio 0,5 g
 Resazurina sódica 0,001 g
 Ágar 0,75 g
 pH 7,2  0,2
Solução salina 0,85%
1. Pesar 8,5 g de cloreto de sódio

2. Transferir para um recipiente adequado
3. Adicionar 1L de água destilada/deionizada.
4. Agitar com auxílio de bastão de vidro até dissolução
6. Distribuir de forma a garantir o volume desejado após a autoclavação
Solução salina 2%
1. Pesar 20,0 g de Cloreto de sódio

2. Transferir para um recipiente adequado
54
3. Adicionar 1L de água destilada-deionizada

6. Distribuir de acordo com a utilização, de forma a garantir o volume desejado após a
autoclavação.
Solução salina fosfatada tamponada pH 7,2 (PBS)

1. Preparo das soluções estoque:
1. Solução fosfato de potássio monobásico (KH2PO4) 0,15M
2. Dessecar o KH2PO4 a 110ºC por 1 (uma) hora
3. Pesar 20,41g do sal e dissolver em água deionizada
4. Completar o volume para 1000 ml em balão volumétrico
5. Solução fosfato de sódio bibásico (Na2HPO4) 0,15M
6. Dessecar o Na2HPO4 a 130ºC por 2 (duas) horas
7. Pesar 21,29g do sal e dissolver em água deionizada
8. Completar o volume para 1000 ml em balão volumétrico
9. A composição básica da solução salina fosfatada tamponada deverá ser a seguinte, por
litro:
 Solução fosfato de potássio monobásico 0,15M 24 ml
 Solução de fosfato de sódio bibásico 0,15 M 76 ml
 Água destilada-deionizada qsp 1000 ml
 pH 7,2  0,2
10. Distribuir volumes conforme a necessidade
Solução salina peptonada 0,1%

 Peptona 1,0 g
 Água destilada/deionizada 1000 ml
 pH 7,0  0,2
3. Agitar com auxílio de bastão de vidro até dissolução.
5. Distribuir de forma a garantir o volume desejado após a autoclavação.
55
Solução salina peptonada 0,1%-sal 3%
Seguir o procedimento do item anterior, adicionando 30 g de Cloreto de sódio por litro de

solução.
Solução salina peptonada 1% tamponada (ISO 6579, 1993).
1. Pesar, separadamente, os ingredientes de acordo com a formulação, respeitando a

proporção adequada para o volume de meio a ser preparado.
2. Transferir para um recipiente adequado e adicionar o volume de água destilada-
3. Agitar com auxílio de bastão de vidro até completa dissolução.
5. Distribuir 225 ml em frascos erlenmeyer com capacidade para 500 ml.
7. A composição básica da solução Salina peptonada 1% tamponada deverá ser a seguinte,
por litro:
 Fosfato de sódio bibásico anidro (Na2HPO4) 3,5 g
 Fosfato de potássio monobásico anidro (KH2PO4) 1,5 g
 pH 7,0  0,2
Solução salina peptonada 1% tamponada, adicionada de 0,02% de tween 20.
1. Preparar o meio de acordo com o descrito para solução salina peptonada 1%

tamponada.
2. A cada litro da solução, adicionar 0,2 ml de Tween 20 (concentração final 0,02%).
3. Distribuir alíquotas de 100 ml em frascos
5. Autoclavar a 121  1°C por 15 minutos
Solução salina peptonada 1% tamponada adicionada de 1% de tween 80
1. Preparar o meio de acordo com o descrito para solução Salina peptonada 1%

tamponada.
2. A cada litro da solução, adicionar 10,0 ml de Tween 80 (concentração final 1%).
3. Distribuir alíquotas de 225 ml em frascos e tampar.
5. Autoclavar a 121  1°C por 15 minutos
56
Solução salina peptonada 1% tamponada, adicionada de vancomicina,

cefsulodin e cefixime.
1. Preparar a solução salina peptonada 1% tamponada (ISO 6579, 1993) conforme

descrito no item anterior.
2. Transferir para um recipiente adequado e adicionar o volume de água destilada-
3. Imediatamente antes do uso, adicionar, a cada litro de meio, as soluções abaixo
relacionadas, esterilizadas por filtração:
 1 ml de solução de vancomicina a 0,8%;
 1 ml de solução de cefixime a 1%;
 1 ml da solução de cefsulodin a 1%
57
REAGENTES E SOLUÇÕES
GRUPOS DE RISCO DAS SUBSTÂNCIAS
Como medida de segurança, as substâncias componentes das soluções e reagentes constantes do

Manual IX estão sinalizadas com uma letra, indicando o grupo de risco ao qual pertencem, sendo:
N = nocivo;
I = irritante;
T = tóxico;
H = hidropoluente;
P = perigoso para o meio ambiente;
C = corrosivo;
O = oxidante;
F = inflamável;
E = explosivo;
M = mutagênico
Recomenda-se que, antes da manipulação e descarte das referidas substâncias, sejam

consultadas as fichas próprias de cada substância ou os manuais de segurança, visando ao
reconhecimento dos principais riscos inerentes e das medidas indispensáveis para prevenir ou
evitar a ocorrência de acidentes e minimizar os danos à saúde do usuário e ao meio ambiente.
Quando houver manipulação de materiais corrosivos, usar sempre luvas adequadas e máscaras;
sendo material tóxico, utilizar sempre a cabine química.
CONVENÇÕES
As soluções preparadas por meio da dissolução do reativo em álcool, seguida ou não da adição
de água destilada/deionizada, neste manual serão denominadas como “solução alcoólica”.
Ex: Alfa-naftol solução alcoólica 5%
As soluções preparadas por meio da dissolução do reativo em água destilada/deionizada,

neste manual serão denominadas como “solução aquosa”.
Ex: Novobiocina solução aquosa 4%
58
As soluções preparadas por meio da dissolução do reativo em meio alcalino ou ácido, neste
manual serão acompanhadas da indicação do diluente usado para sua preparação.
Ex: Ácido nalidíxico solução 2% em NaOH 0,1 N
Alfa-naftilamina solução 0,5% em ácido acético 5N
Onde houver a indicação “Esterilizar por Filtração” utilizar filtro com membrana de 0,22
micrômetros previamente preparado e esterilizado
PREPARO DE REAGENTES E SOLUÇÕES
Acido Acético
Adicionar 28,75 ml de ácido acético glacial (C/F) a 71,25 ml de água destilada/deionizada.

Armazenar em frasco de vidro. Identificar e datar
Ácido clorídrico 0,01N
Adicionar a 10 ml de ácido clorídrico 0,1N quantidade de água destilada-deionizada suficiente

para completar 100 ml. Usar vidraria volumétrica para a preparação. Armazenar em frasco de
vidro. Identificar e datar
Ácido clorídrico 0,1N
Adicionar a 10 ml de ácido clorídrico 1N quantidade de água destilada-deionizada suficiente

para completar 100 ml. Usar vidraria volumétrica para a preparação. Armazenar em frasco de
vidro. Identificar e datar
Ácido clorídrico 1N
Dissolver 82,3 ml de ácido clorídrico fumegante (C/I) (concentração 37%) em volume de água
destilada-deionizada suficiente para completar 1000 ml. Armazenar em frasco de vidro.
Identificar e datar
Ácido nalidíxico solução 0,1% em PBS pH 7,2
1. Transferir 10 ml da solução de ácido nalidíxico 1% para balão volumétrico de

capacidade para 100 ml e completar o volume com tampão fosfato pH 7,2.
2. Esterilizar por filtração.
3. Distribuir em alíquotas de 20 ml, em frascos de vidro estéreis identificados e datados.
4. Manter a -20ºC por até 6 meses.
5. Manter uma das alíquotas sob-refrigeração, para uso diário.
6. Usar 1 ml desta solução para cada 100 ml de ágar ABL
59
Ácido nalidíxico solução 1% em NaOH 0,1N
Pesar 1,0 g de ácido nalidíxico(N), colocar em balão volumétrico de 100 ml e adicionar NaOH
0,1 N, agitando para dissolução, até completar o volume. Distribuir em frasco plástico
identificado e datado, e manter protegido da luz.
Ácido nalidíxico solução 2% em NaOH 0,1 N
1. Pesar 2,0 g de ácido nalidíxico(N), colocar em balão volumétrico de 100 ml e adicionar

NaOH 0,1 N, agitando para dissolução, até completar o volume.
2. Distribuir em alíquotas de 10 ml, em frascos plásticos identificados e datados,
protegidos da luz.
3. Manter a –20ºC por até 12 meses.
4. Manter uma das alíquotas sob refrigeração para utilização diária
Ácido peracético solução aquosa 0,02%
1. Diluir 6,5 ml de ácido peracético (C/I/E) (produto comercial a 15%) em 5 litros de água
destilada-deionizada
2. Manter em frasco de plástico identificado e datado.
3. Utilizar a solução preparada, no máximo, em 48 horas.
Ácido pipemídico solução 0,2% em PBS pH 7,2
1. Transferir 10 ml da solução de ácido pipemídico 2% para balão volumétrico de

capacidade 100 ml e completar o volume com tampão fosfato pH 7,2.
3. Distribuir em alíquotas de 20 ml, em frasco de vidro estéril identificado e datado.
5. Manter uma das alíquotas sob refrigeração, para uso diário.
6. Usar 1 ml desta solução para cada 100 ml de ágar ABL
Ácido pipemídico solução 2% em NaOH 0,1N
1. Pesar 2,0 g de ácido pipemídico e adicionar NaOH 0,1N até que se dissolva
completamente
2. Transferir para balão volumétrico de capacidade para 100 ml e completar o volume
com NaOH 0,1N.
3. Distribuir em frasco plástico identificado e datado, e manter protegido da luz, sob-
refrigeração.
Ácido sulfanílico solução 0,8% em ácido acético 5N
Dissolver 0,8 g de ácido sulfanílico(N) em 100 ml de ácido acético 5N. Manter em frasco de
vidro, protegido da luz, sob-refrigeração.
60
Ácido tartárico solução aquosa 10%
1. Pesar 10 gramas de ácido tartárico (I) Transferir para um recipiente adequado,

adicionar 90 ml de água destilada/deionizada. Agitar com auxílio de bastão de vidro
até dissolução
2. Esterilizar por filtração
3. Distribuir em frasco de vidro estéril.
4. Identificar, datar e manter sob-refrigeração, protegido da luz.
Acriflavina solução aquosa 0,25%
1. Pesar 0,25 g de acriflavina(T) em frascos separados com capacidade para 100 ml.
2. Completar os volumes a 100 ml com água destilada-deionizada
4. Distribuir em frasco de vidro estéril
5. Identificar, datar e manter sob-refrigeração, por até 4 semanas.
Acriflavina solução aquosa 1%
1. Pesar 1,0 g de acriflavina(T) em frasco apropriado.

2. Completar o volume para 100 ml com água destilada/deionizada.
4. Distribuir em frasco âmbar estéril
5.
Identificar, datar e manter sob refrigeração por até 4 semanas
Acriflavina solução aquosa 2%
1. Pesar 2,0 g de acriflavina (T) em frasco apropriado.

2. Completar o volume para 100 ml com água destilada/deionizada.
4. Distribuir em frasco de vidro estéril.
5. Identificar, datar e manter sob refrigeração, por até 4 semanas.
Alfa-naftilamina solução 0,5% em ácido acético 5N
Dissolver 0,5 g de alfa-naftilamina(T) em 100 ml de ácido acético 5N. Identificar, datar e

manter sob refrigeração, protegido da luz.
Alfa-naftol solução alcoólica 5%
Pesar 5,0 g de alfa-naftol(N/I) e dissolver em 100 ml de etanol. Identificar, datar e manter sob
refrigeração, protegido da luz.
61
Azul de toluidina solução aquosa 1%
1. Pesar 1,0 grama de azul de orto-toluidina.

2. Transferir para um recipiente adequado.
3. Adicionar 100 ml de água destilada/deionizada.
4. Agitar com auxílio de bastão de vidro até dissolução.
5. Identificar, datar e armazenar sob refrigeração, protegido da luz.
Carboidratos-soluções
1. Para as provas de fermentação de carboidratos, recomenda-se o uso das soluções nas

concentrações de 5,0 g ou 10 g por litro de meio.
2. Arabinose 10%; Glicose 10%; Manitol 10%; Maltose 10%; Rafinose 10%; Ramnose 5%;
Sacarose 10%; Xilose 5%I.
3. Dissolver 5 ou 10 g do carboidrato desejado em 100 ml água destilada-deionizada
5. Distribuir volumes de 10 ou 20 ml em frascos estéreis.
6. Identificar e datar adequadamente
7. Manter sob refrigeração
Cefixime solução aquosa 1%
1. Dissolver 1,0 g de cefixime em 100 ml de água destilada-deionizada

3. Distribuir em alíquotas de 10 ml, em frasco de vidro estéril identificado e datado,
protegido da luz.
5. Manter uma das alíquotas sob refrigeração, para utilização diária.
Cefsulodin solução aquosa 1%
1. Dissolver 1,0 g de cefsulodin em 100 ml de água destilada-deionizada

3. Distribuir em alíquotas de 10 ml, em frasco de vidro estéril identificado e datado,
protegido da luz.
5. Manter uma das alíquotas sob refrigeração, para utilização diária.
Cicloserina solução aquosa 5%
1. Pesar 1,0 g de cicloserina e dissolver em 20 ml de água destilada-deionizada

3. Identificar, datar e armazenar sob refrigeração, protegido da luz.
62
Cloreto de cálcio 1 M
1. Dissolver 11,09 g de CaCl2(I)p a em 100 ml de água destilada/deionizada, usando balão

volumétrico.
3. Distribuir em alíquotas de 10 ml, em frasco de vidro estéril identificado e datado.
4. Manter em temperatura ambiente
5. Usar 1 ml/100 ml de meio para obter uma concentração final de 10mmol de cloreto de
cálcio
Cloreto férrico solução aquosa 10% (prova de TDA)
Pesar 10,0 g de cloreto férrico(C) frasco adequado, adicionar quantidade de água destilada-
deionizada suficiente para completar 100 ml Identificar, datar e armazenar sob refrigeração.
Cloreto de Magnésio 40%
Cloreto de Magnésio 40,0 g Água destilada ou deionizada q s p.100 ml
Cloreto de Potássio 0,1N
1. Cloreto de Potássio 7,5 g

2. Água destilada ou deionizada q s p.1000 ml
3. Acidificar a pH 4,0 com solução de HCl 1N
Cloreto de Potássio 3 M
1. Cloreto de Potássio 24,4 g

2. Água destilada ou deionizada q s p.100 ml
3. Dessecar o KCl em estufa a 110ºC por 2 horas
4. Acrescentar a água destilada-deionizada fervida
Desoxicolato de sódio solução 0,5%
1. Pesar separadamente, em recipiente adequado, os seguintes componentes:

2. Cloreto de sódio 0,85 g
3. Desoxicolato de sódio 0,5 g
6. Esterilizar por filtração, em membrana filtrante de 0,22 m.
7. Armazenar sob refrigeração
63
Emulsão de gema de ovo 50%
1. Não havendo emulsão comercialmente disponível, escolher ovos com casca perfeita e
lavar com água morna.
2. Secar, imergir em etanol a 70ºGL durante aproximadamente 10 minutos ou em
solução de ácido peracético a 0,02% por aproximadamente 15 minutos.
3. Secar com toalha estéril
4. Quebrar a casca assepticamente e separar a gema da clara, transferindo a gema para
frasco estéril.
5. Adicionar o mesmo volume de solução salina 0,85%
6. Misturar bem, até a completa homogeneização da solução.
7. Pasteurizar a emulsão obtida durante 30 minutos a 63 ± 2ºC em banho-maria, com
agitação suave e frequente.
8. Realizar o controle de esterilidade da emulsão de gema de ovo conforme abaixo
especificado:
9. Inocular 0,1 ml da emulsão de gema de ovo em um tubo contendo caldo BHI.
10. Incubar a 36  1ºC por 48 horas
11. Após incubação, repicar com alça para a superfície seca de ágar Baird Parker e PCA
incubar a 36  1ºC por 48 horas.
12. Verificar a presença de crescimento bacteriano
13. Em caso de crescimento, descartar a emulsão.
Eritrócitos lavados de carneiro
1. A partir de sangue de carneiro desfibrinado, fazer tripla lavagem dos eritrócitos com
PBS pH 7,2 estéril, centrifugando a 14 000 rpm por 30 minutos a cada lavagem.
2. Ressuspender em volume de PBS igual ao volume original de sangue
3. Identificar, datar e armazenar sob refrigeração.
Etanol 70% (Etanol 70o GL)
Adicionar 271 ml de água destilada a 729 ml de etanol(F)96o GL. Armazenar em frasco de

plástico, identificar e datar.
Hidróxido de potássio solução aquosa 40%
Pesar 40 g de hidróxido de potássio (KOH)(C)e dissolver em 100 ml de água destilada-

deionizada. Identificar, datar e manter em frasco plástico, em temperatura ambiente.
Hidróxido de sódio solução aquosa 1N
Pesar 40g de hidróxido de sódio(C)em recipiente adequado e adicionar quantidade de água

destilada-deionizada suficiente para completar 1000 ml. Identificar, datar e manter em frasco
plástico, em temperatura ambiente.
64
Hidróxido de sódio solução aquosa 40%
Pesar 40g de hidróxido de sódio(C) em recipiente adequado e adicionar quantidade de água

destilada-deionizada suficiente para completar 100 ml Identificar, datar e manter em frasco
plástico, em temperatura ambiente.
Novobiocina solução aquosa 1,25%
Dissolver 1,25 g de novobiocina em volume de água destilada-deionizada suficiente para

completar 100 ml. Esterilizar por filtração e manter protegido da luz, sob refrigeração. Utilizar
a solução por até um mês do preparo
Novobiocina solução aquosa 4%
1. Dissolver 4,0 g de novobiocina em volume de água destilada-deionizada suficiente

para completar 100 ml.
2. Esterilizar por filtração e manter protegido da luz, sob refrigeração.
3. Utilizar a solução por até um mês do preparo
Oxitetraciclina solução 1% (para ágar OGY)
1. Pesar 500 mg de Oxitetraciclina. Transferir para balão volumétrico de 50 ml de

capacidade. Completar o volume com ácido clorídrico (HCl) 0,1 N
3. Esterilizar por filtração. Distribuir 10 ml em frascos de vidro estéril.
4. Identificar e datar. Manter a –20ºC, protegido da luz.
5. Manter uma alíquota sob refrigeração para o trabalho rotineiro, protegida da luz.
Peróxido de hidrogênio solução aquosa 3% (10V)
O peróxido de hidrogênio 3% pode ser adquirido em farmácias ou pode-se preparar a solução

3% a partir de peróxido de hidrogênio (C/I/E)20V ou 100V conforme abaixo:
1. A partir de peróxido de hidrogênio (C/I/E) 100V (= 30%): pesar 10g do peróxido e diluir
para 100 ml com água destilada-deionizada
2. Peróxido de hidrogênio (C/I/E) 20V (= 6%): medir em proveta 50 ml do peróxido e
completar o volume a 100 ml com água destilada-deionizada
Identificar e datar. Manter sob refrigeração, protegida da luz.
Púrpura de bromocresol solução alcoólica 1,6 %
Adicionar a 1,6 g de púrpura de bromocresol quantidade de etanol suficiente para completar

100 ml Identificar e datar. Manter sob refrigeração, protegido da luz.
65
Reagentes para a coloração de esporos
Solução A:
 Verde malaquita solução aquosa 5%

 Verde malaquita(N) 2,5 g

Água destilada ou deionizada 50 ml
Misturar e deixar em repouso durante uma noite para dissolver Identificar, datar e armazenar
protegido da luz.
Solução B:
Safranina solução alcoólica 2,5%
B 1. Solução estoque
 Safranina O 50 g
 Etanol (95%) (F) 2000 ml
Identificar, datar e armazenar protegido da luz.
B 2. Solução de trabalho
 Solução estoque de safranina O 300 ml

 Água destilada ou deionizada 2700 ml
Identificar, datar e armazenar protegido da luz.
Reagentes para coloração de Gram
A. Cristal violeta fenicada solução alcoólica 4%
Solução A 1:
 Cristal violeta (N/I/H/P)0,4 g

 Álcool (F)10 ml
Solução A 2:
 Fenol fundido (T/C)1 g

 Água destilada ou deionizada100 ml
Misturar A 1 e A 2. Identificar, datar e armazenar protegido da luz. Usa-se, não diluída, na

coloração de Gram.
66
B. Solução aquosa de lugol.
B 1: Solução estoque
 Cristais de iodo (N/I) (ou iodo ressublimado (N/I))25 g

 Iodeto de potássio50 g

Água destilada ou deionizada 500 ml
Misturar e deixar em repouso até dissolução
B 2: Solução de trabalho
 Solução estoque de lugol 100 ml

 Água destilada ou deionizada 1400 ml
Identificar, datar e manter protegido da luz.
C: Fucsina fenicada
1. Fucsina básica 1,0 g

2. Álcool a 95º(F)10 ml
3. Fenol fundido (T/C)5,0 g
4. Água destilada ou deionizada100 ml
Identificar, datar e manter protegido da luz.
Reativo de Kovacs
Pesar 5,0 g de para-dimetil-amino-benzaldeído em recipiente adequado. Dissolver em 75 ml de

álcool isoamílico. Adicionar 25 ml de ácido clorídrico Identificar, datar e manter protegido da
luz, sob refrigeração.
Reativo de Ehrlich
Pesar 2,0 g de para-dimetil-amino-benzaldeído em recipiente adequado. Dissolver em 190 ml

de álcool etílico (absoluto). Adicionar 40 ml de ácido clorídrico concentrado
Reativo para Oxidase I - N, N, N, N-tetrametil-parafenilenodiamina.
1. Dissolver 0,5g de N’ N’ N’ N’ - tetrametil-parafenilenodiamina em 50 ml de água

destilada-deionizada
2. Distribuir volumes de 5 ml em frascos de cor âmbar ou envoltas em papel alumínio.
Identificar e datar. Manter a –20ºC.
3. A alíquota em utilização deve ser mantida sob refrigeração, protegida da luz
4. Não utilizar o reativo se este apresentar coloração azul
5. 45.Reativo para Oxidase II - Oxalato de para-amino-dimetilanilina
67
6. Pesar 0,5g de oxalato de paramino-dimetilanilinaeda em recipiente apropriado.

Adicionar 50 ml de água destilada-deionizada
8. Distribuir volumes de 5 ml em frascos de cor âmbar ou envoltas em papel alumínio.
9. Identificar e datar. Manter a –20ºC.
10. A alíquota em utilização deve ser mantida sob refrigeração, protegida da luz
11. Não utilizar o reativo se este apresentar coloração vermelha ou marrom
Sangue desfibrinado de carneiro, coelho, cobaio ou cavalo
1. Coletar o sangue em frasco com pérolas de vidro (estéreis), movimentando suavemente

até que a fibrina fique aderida às pérolas.
2. Deixar repousar em temperatura ambiente por 1 a 2 horas. Separar o sangue
desfibrinado e distribuir em frascos estéreis. Guardar sob refrigeração
3. Não utilizar sangue desfibrinado que apresente evidências de contaminação ou
hemólise
Sangue de cavalo desfibrinado lisado
1. Proceder como no item anterior, utilizando somente sangue recentemente colhido.

2. Congelar por 1 a 2 dias.
3. Para lisar e/ou manter, misturar e distribuir 100 ml em frascos de polipropileno estéril.
4. Congelar a –20ºC.
5. Descongelar e recongelar uma vez mais.
6. O congelamento inibe a absorção de oxigênio pela hemoglobina.
7. Manter sob congelamento, descongelando a cada vez que necessite.
8. Pode ser descongelado e recongelado várias vezes.
9. Usar o sangue por até 6 meses
Solução aquosa de iodo-iodeto
Dissolver 8,0 g de iodo (N/I) e 10 g de iodeto de potássio em 40 ml de água destilada-

deionizada. Manter em frasco escuro, em local fresco
Telurito de potássio 3,5%
1. Pesar 3,5 g de telurito de potássio(T/I)Transferir para um balão volumétrico de 100 ml.

Adicionar aproximadamente 50 ml de água destilada/deionizada. Agitar até completa
dissolução. Completar o volume com água destilada-deionizada
2. Esterilizar por filtração. Distribuir em frasco estéril. Tampar adequadamente
3. Identificar, datar e armazenar sob refrigeração
4. Usar a solução estocada entre 0 e 5ºC por 6 meses
68
Tiamina cloridrato solução 0,01%
1. Pesar 100 mg de tiamina e transferir para balão volumétrico de capacidade para 100
ml e completar o volume com água destilada/deionizada. Esta é a solução 0,1%
2. Transferir 5 ml da solução 0,1% para balão volumétrico de capacidade para 50 ml e
completar o volume com água destilada-deionizada
3. Esterilizar por filtração. Distribuir em frascos estéreis
4. Manter protegida da luz, em refrigeração, por até 3 meses
Tiossulfato de sódio 2%
Tiossulfato de sódio2,0g e Água destilada ou deionizada q s p 100 ml
Tirosina suspensão aquosa 5%
1. Pesar 5,0 g de tirosina em recipiente adequado, adicionar 100 ml de água destilada-

deionizada
2. A tirosina não deve dissolver e, na solução deixada, a tirosina deve decantar
3. Misturar bem de forma que a tirosina fique homogeneamente distribuída na
suspensão e imediatamente distribuir volumes de 10 ml em frascos apropriados.
Tampar
4. Esterilizar em autoclave a 121 ± 1ºC por 15 minutos
Tween 80
1. Tween 80 80ml
2. Água destilada-deionizada q s p 1000 ml
Adicionar o tween 80 à água morna, sob agitação. Cuidado quando acrescentar a água
Vancomicina solução aquosa 0,8%
Dissolver 200 mg de vancomicina em 25 ml de água para laboratório/deionizada , esterilizar

por filtração. Dispensar em frasco de vidro estéril . Manter sob refrigeração, protegida da luz
Vaselina
Dissolver a vaselina em copo de Becker sob fogo indireto, usando tela de amianto, e distribuir
em frascos de Erlenmeyer na quantidade pedida
Vaspar
Composição por 1 kg de vaspar:
 Vaselina sólida......................... 400 g
69
 Parafina...............................600 g
1. Pesar separadamente a parafina e a vaselina

2. Misturar as duas partes e dissolver no fogo indireto utilizando tela de amianto
3. Aquecer até completa fusão.Homogeneizar
4. Distribuir em frascos apropriados.
6. Identificar, datar e armazenar em temperatura ambiente
Verde brilhante solução aquosa 0,1%
Dissolver 0,1g de verde brilhante(N) em 100 ml de água destilada/deionizada. Esterilizar por

filtração, dispensando em frasco adequado Identificar e datar. Manter sob refrigeração
protegido da luz
Verde malaquita solução aquosa 5%
Adicionar a 5,0 g de verde malaquita(N) quantidade de água destilada-deionizada suficiente

para completar 100 ml. Identificar, datar e manter sob refrigeração, protegido da luz
Vermelho de fenol solução aquosa 1%
Dissolver 1,0 g de vermelho de fenol em 100 ml de água destilada-deionizada Identificar e datar.

Manter sob refrigeração protegido da luz
Vermelho de metila solução alcoólica 0,06%
Pesar 0,04 de vermelho de metila e dissolver em 60 ml de etanol absoluto(F) Identificar e

datar. Manter protegido da luz, em local fresco
70

Manual de Preparo de Meios de Cultura e Soluções para Microbiologia

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2013

Manual de Preparo de Meios de

Mariana Torres de Castro

MEIOS DE CULTURA .................................................................................................................. 7

Caldo de carne cozida (CCC) ................................................................................................ 37

Meio gelatina ...................................................................................................................... 51

Ácido tartárico solução aquosa 10% .................................................................................... 61

Sangue de cavalo desfibrinado lisado .................................................................................. 68

Os meios de cultura destinam-se ao cultivo artificial dos microrganismos e fornecem os

Naturais Encontrados na natureza, de origem vegetal (p ex: pedaço de batata, de

podendo ser definidos ou indefinidos (complexos).

Seletivo Possui agentes inibidores de determinados microrganismos. Permite a

IMPORTANTE: os meios de cultura desidratados fornecidos por diferentes fabricantes podem

Ágar azul de toluidina - DNA

1. Pesar separadamente os seguintes ingredientes:

2. Adicionar 100 ml de água destilada-deionizada aos componentes da formulação, com

Ágar Bacillus larvae (ABL)

4. Homogeneizar bem e Distribuir aproximadamente 20 ml em placas estéreis

1. Pesar o ágar Baird-Parker de acordo com o volume de meio a ser preparado,

2. Transferir para recipiente adequado e adicionar o volume de água destilada-

Ágar batata glicose 2%

12. Fundir o ágar batata e resfriar até a 46-48ºC

Ágar cérebro-coração (ABHI)

1. Pesar o ágar cérebro-coração (ABHI) de acordo com o volume de meio a ser

Ágar cereus (PEMBA)

1. Pesar o meio desidratado de acordo com o volume de meio a ser preparado,

 Sulfato de magnésio 0,1 g

1. Preparar o ágar Columbia-base de acordo com o volume de meio a ser preparado,

Ágar Columbia-CNA com sangue desfibrinado de carneiro ou de cobaio

1. Preparar o ágar Columbia-base de acordo com o indicado no item anterior, e adicionar

4. Deixar solidificar em superfície plana.

Ágar com extrato de levedura

1. Pesar, separadamente, os componentes do ágar com extrato de levedura conforme a

Ágar cristal violeta vermelho neutro bile (VRBA)

Ágar cristal violeta vermelho neutro bile glicose (VRBG)

Ágar eosina azul de metileno (EMB)

 Peptona de carne 10,0 g

 Extrato de carne 3,0 g

1. Pesar, separadamente, os ingredientes de acordo com o volume de meio a ser

 Peptona bacteriológica 13,8 g

1. Pesar o ágar fenilalanina de acordo com o volume de meio a ser preparado,

 Extrato de levedura 3,0 g

Ágar ferro dois açúcares (Ágar Kligler)

 Extrato de carne 3,0 g

 Citrato férrico 0,3 g

Ágar ferro dois açúcares (Ágar Kligler) sal 3%

Ágar ferro três açúcares (TSI)

Ágar ferro três açúcares (TSI) sal 3%

1. Proceder conforme o indicado pelo fabricante para o preparo do Ágar TSI,

 Peptona de carne 5,0 g

Ágar glicose triptona

Ágar leite com tiamina (ALT)

1. Dissolver o ágar com extrato de levedura, e deixar em banho-maria até atingir 45 a

 Ágar com extrato de levedura 300 ml

Ágar lisina ferro (LIA)

 Peptona de carne 5,0 g

Ágar MacConkey-sorbitol (MCS)

1. Pesar o ágar MacConkey-sorbitol (MCS) de acordo com o volume de meio a ser