Melhoramento de Citrus - Sérgio Alves de Carvalho

Mesa Redonda: O melhoramento gentico na agroindstria
Melhoramento de Citros
Srgio Alves de Carvalho
Centro Avanado de Pesquisas do Agronegcio de Citros Sylvio Moreira
(Centro de Citricultura)
Instituto Agronmico IAC
Mesa Redonda O melhoramento gentico na agroindstria
Origem e rotas de disperso das espcies ctricas

Famlia Rutaceae, subfamlia Aurantioideae
Gneros: Citrus, Poncirus, Fortunella e afins
Sudoeste do continente asitico, com ramos filogenticos que se estendem do
Centro da China ao Japo e do Leste da ndia Nova Guin, Austrlia e
frica Tropical
Brasil: colonizadores portugueses a partir de 1530

Agroindstria de Citros no Brasil

Estimativa rea colhida - 2006 (1000 ha)
Citros x Grandes Culturas
20922
Soja
12540 Milho
6172 Cana
2213 Caf
803
Laranja
Citros x Outras Frutferas
803
Laranja
505 banana
Uva
74 maracuj
37 34
mamo
FONTE: AGRIANUAL 2007


Laranja fruta fresca: produo x exportao
Fruta fresca - Produo 2005/06*
21% 260 milhes de plantas

Brasil
440 milhes de cxs 40,8 kh
39% EUA
(18 millhes de ton)
China
5%
65% Industria
Mxico
8% 30% Mercado Intertno
Itlia
5,0% Exportao
Outros
9%
18%
Laranjas frescas- Exportao 2005/06*
23%
31% Espanha
frica do Sul
Egito
EUA
2% 17% Brasil* (11)
Outros
13%
FONTE: AGRIANUAL 2007 14%

Suco concentrado: produo x exportao
Suco concentrado - Produo 2005/06*
2% 5%
2%
2%
Brasil
EUA
Itlia
30% Espanha
59% Mxico
Outros
Suco concentrado- Exportao 2005/06*

2% 2% 2%
5%
6%
Brasil
Espanha
EUA
Mxico
Israel
Outros
FONTE: AGRIANUAL 2007
83%
Citricultura Brasileira:
Cadeia de produo x base gentica
R$ ~ 10 bilhes
Copas Pra Valncia Natal Hamlin Outras
Porta-enxertos Limo Cravo Outros

Estresses biticos e abiticos

Bicho Furo
Cancro ctrico Tristeza
CVC Pinta preta
Leprose
Copas HLB
MSC
QPF
Orthezia
Porta-enxertos
Tristeza Gomose MSC Declnio
Estresse hdrico Nutricional

Melhoramento de citros: desafios

Bancos de Germoplasma
Ampliao e caracterizao de germoplasma (agronmicas,
genticas, sanitrias...)
Melhoramento de variedades copa
Tolerncia/ Resistncia a doenas
Qualidade dos frutos (apirenos, teores de antocianina, vitamina C)
Aumento da produtividade
Ampliao do perodo de safra
Melhoramento de porta-enxertos
Tolerncia/ Resistncia a doenas fatores biticos/abiticos
Induzir maior produtividade
Melhor qualidade aos frutos
Compatibilidade com variedades copa
Plantas nanicas
Dificuldades no Melhoramento de Citros
- Longo ciclo de seleo

- Juvenilidade
- Poliembrionia nucelar
- Esterilidade e incompatibilidade
- Heterozigosidade
- Ocorrncia de poliploidia
- Caractersticas polignicas
- Desconhecimento de herana
- Sistemtica ainda confusa
- Hibridao inter, intra-genrica e especfica
Melhoramento
de Citros
Famlia Rutaceae
Subfamilia
Aurantioideae Swingle, 1943
Swingle & Reece, 1957
Tribos
Sub Tribos A = citros primitivos
14 espcies
Gneros
B = citros prximos
Espcies 2 espcies
Compatibilidade
- Sexual C = citros verdadeiros
29 espcies
- Enxertia
Machado et al, 2005 Livro Citros

Estratgias no melhoramento de citros

Seleo massal e introdues
Ensaios de selees
Hibridao sexual
Variao somaclonal / hibridao somtica
Induo de mutaes / alterao na ploidia
Mapeamento gentico
Estudos de expresso do genoma
Transformao gentica Copas

Porta-enxertos
AMBIENTE
HOSPEDEIRO VETOR ENDOSSIMBIONTE PATGENO


Conservao e Caracterizao de Germoplasma
BAG - Citros - IAC

Laranjas doce
9%
3% 2% 10%
Tangerinas
4%
4%
Limes
Limas cidas
1
11% Pomelos
42%
Toranjas
15% Cidras
Outros
Hbridos

BAG - Citros - IAC - Caracterizao/Avaliao
MORFOLGICA: Descriptores for Citrus, 1988
MOLECULAR/BIOQUIMICA: RAPDs, Microsatlites, Isoenzimas
AGRONMICA: Ensaios de campo em diferentes locais

- Crescimento, vigor e produtividade
- Qualidade da fruta e do suco
- Compatibilidade copa / porta enxerto
- Manejo nutriconal e da irrigao
- Resistncia / Tolerncia a doenas e pragas
- Interaes com estirpes do vrus da tristeza
FITOSSANITRIAS: Deteminaes de patgenos sistmicos

- Testes biolgicos para viroses
- Testes imunolgicos/PCR para Tristeza, CVC
- Testes moleculares para Tristeza, Virides

Limpeza Clonal e Pr-imunizao
- Recuperao de clones superiores, sem induzir juvenilidade
- Proteo cruzada contra estirpes severas de CTV

Conservao e Caracterizao de Germoplasma
BAG Citros - IAC - AMPLIAO DO PERODO DE OFERTA DE TANGERINAS
JAN FEV MAR ABR MAI JUN JUL AGO SET OUT NOV DEZ
CRAVO
PONKAN
MEX. RIO
SPAN AMERICANA
ROSEHOUG NORTJEEE
DE WILDT E LOOSE JACKET
SUL DA FRICA
THOMAS
VERMELHA

Selees de tangerinas, hbridos limas cidas e limes
Szuwinkon
Sul da frica
Satsumas
Tangor Ortanique
Tangor Murcott
Clementina
Caula
Clemenules
Clones de Tahiti
Limo verdadeiro

Selees de laranja doce
Hamlin
Rubi
Westin
Pra
Valncia
Natal
Baas
Lima verde
Rede de experimentos de seleo de novos clones de laranja Pra
Municpio Fazenda / Empresa Plantio Porta-enxerto Clones
Cajobi Faz. Sto Antonio 2000 Cravo e Clepatra 19
Araraquara Faz. Sta Amlia Cutrale 1994 Cravo 20
Gavio Peixoto Faz. Niagara Catapani 1994 Cravo 12
Cordeirpolis CAPTA Citros 1997 Cravo 7
Cordeirpolis CAPTA Citros 1992 Clepatra 11
Cordeirpolis CAPTA Citros 1994 Cravo e Clepatra 5
Avar Faz. Rosana Cutrale 1997 Cravo 17
Capo Bonito Plo APTA 1997 Cravo 20
Itapetininga Citrovita 1998 Cravo 20
Esto em competio
26 clones de Pra
distribudos em 9
experimentos instalados em
municpios localizados nas
regies Norte, Centro e Sul
do Estado de So Paulo.
Interao com isolados de

CTV

Selees de porta-enxertos
Limo Cravo
Limo Volkameriano
Tangerinas Sunki e Clepatra
Poncirus trifoliata
Laranja caipira

Hibridao sexual
- Variedades copa: pouco expressiva
EUA 1893: Swingle & Webber => Trifoliata x laranjas e pomelos
(resistncia ao frio)
Poucas variedades comerciais:
- Tangor Murcott (Tang x laranja)
- Fremont (Clementina x Ponkan)
- Porta-enxertos (EUA)
1909: Hbridos de Trifoliata: Citrange Troyer (Bahia x Trifoliata)
1907: Citrumelo 4475 (Swingle) (Pomelo Duncan x Trifoliata)
- Outros Citrumelos: Srie F 80
- Citrandarins (tangerinas x Trifoliata)
- Citradias (lar Azeda x Trifoliata)
- Citremons (limo rugoso x Trifoliata)

Hibridao sexual
- Brasil
Dcada de 80 CNPMF/Embrapa Cruz das Almas
- Cravo, Volkameriano, lar doce e Azeda, Clepatra, Sunki e
Trifoliata
IAC: hbridos de Cravo, Lar. Azeda, Sunki e Trifoliata

Bordignon et al (2003)
- 396 hbridos enxertados com Valncia foram tolerantes a
Tristeza
- (100 mais produtivos do que Sunki e 47 mais do que o
Cravo)

Hibridao somtica (dcada de 80 Japo)
- Obteno de hbridos de combinaes compatveis e
incompatveis;
- Fuso de protopastos de mesfilo com protoplasto de
tecido nucelar e regenerao;
- Grosser (EUA) Rugoso x Azeda (tolerante CTV e Declnio)
- Brasil* Combinaes com limo Cravo x Laranja Azeda,
Laranja Caipira, Poncirus trifoliata
*CNPMF/Embrapa, IAC, CENA, ESALQ


Hibridao somtica
Principais hbridos somticos entre espcies de Citros e outros gneros da subfamilia
Aurantioideae obtidos por fuso de protoplastos (Machado et al, 2005)

Mapeamento Gentico
Objetivos
- Estudo da herana de caracteres de interesse
Estratgia
- Marcadores moleculares e fenotpicos em pseudo-test
cross ou retrocruzamento
Foco dos trabalhos (CCSM-IAC)

- Resistncia a CVC, leprose, tristeza, gomose, mancha
de alternaria e cancro ctrico

Mapeamento Gentico => Hibridao sexual
- Obteno de populaes segregantes
para mapeamento gentico
Etapas
- Seleo dos parentais
- Cruzamento
- Germinao das sementes
- Seleo dos zigticos x nucelares
- Multiplicao
- Avaliao em condies de casa de
vegetao
- (Reverso de juvenilidade)
- Avaliao em condies de campo
Hibridao sexual
Seleo dos parentais
Tempo relativo
0
Cruzamentos controlados
12 meses Germinao Marcadores
18 meses
Seleo dos zigticos
30 meses Genotipagem
Multiplicao Mapeamento
Desafios s doenas Caractersticas
36 meses
Estufa
Campo
> 36 meses
Qualidade de fruta
Mapeamento Gentico => Hibridao sexual
Seleo dos parentais

_____________________________________________________________
Patossistema
_____________________________________________________________
Tristeza P. trifoliata (R) Tangerina Sunki (T)
Gomose P. trifoliata (R) Tangerina Sunki (S)
Morte sbita P. trifoliata (?) Tangerina Sunki (T)
Citrumelo Swingle (R) Limo Cravo (S)
Leprose Laranja Pra (S) Tangerina Cravo (T)
CVC Laranja Pra (S) Tangerina Cravo (T)
Laranja Pra (S) Tangor Murcott (R)
Cancro ctrico Laranja Pra (S) Tangerina Cravo (T)
Laranja Pra (S) Tangor Murcott (T)
Mancha marrom Laranja Pra (R) Tangor Murcott (S)
Laranja Pra (R) Tangerina Cravo (T)

Hibridao sexual => Novos hbridos CCSM-IAC
Tangerina Cravo (Citrus reticulata) 96 hbridos
x Laranja Pera (Citrus sinensis)
Tangor Murcott (C. reticulata x C. sinensis) 376 hbridos
x Laranja Pera (C. sinensis)
Limo Cravo ( Citrus limonia)

91 hbridos
x Citrumelo Swingle (Citrus paradisi x Poncirus trifoliata)
Tangerina Sunki (Citrus sunki) x Poncirus trifoliata 314 hbridos
Laranja Valencia (Citrus sinensis) 25 hbridos

x tangor Murcott (C. reticulata x C. sinensis)
20 hbridos
Tangerina Rio (Citrus deliciosa) x Laranja Pera (C. sinensis)
Tangelo Orlando (C. paradisi x C. reticulata)

9 hbridos
x Laranja Pera (C. sinensis)

Hibridao sexual => Novos hbridos CCSM-IAC
Morte sbita
Tristeza
CVC
Leprose
Gomose
Tristeza
Cancro ctrico
Rede experimental

Marcadores Moleculares
Alm do uso em construo e saturao de mapas

genticos....
Caracterizao de germoplasma
Diversidade gentica
Certificao gentica e fitossanitria
Seleo de plntulas nucelares e zigticas
Seleo assistida

Transformao Gentica
Introduo de um gene de interesse = cultura de

tecidos e biologia molecular.
Vantagem = nico gene sem alterar genoma da
planta => no envolve cruzamento de plantas
distintas
Introduo de genes entre espcies
Interessante devido s caractersticas genticas da
cultura: poliembrionia, alta heterozigose e
juvenilidade;

Transformao Gentica
Variedade Caracterstica Referncia
Pomelo Rio Red Resistncia ao CTV e ao Yang et al (2000)

vetor
Citrange Carrizo Precocidade, resistncia Pea et al (2001), Cervara
salinidade et al (2000)
Lar. Azeda e Galego Resistncia ao CTV Gutirrez-E et al (1997)
Dominguez et al (2000)
Ghorbel (2000)
Lima West Indian Frutos sem sementes Koltunow et al (2000)
Poncirus trifoliata Alterao crescimento Kobayashi et al (1996)
planta
Tang. Ponkan Frutos sem sementes Li et al (2002)
Laranja doce Resistncia fungos Pea & Navarro (1999)
Brasil: IAPAR, ESALQ, IB, CCSM-IAC


Transformao Gentica: Pesquisas no CCSM-IAC
- Protocolo = tecido juvenil e adulto de copa e porta-
enxerto (A. tumefaciens)
Transformao gentica de laranja doce com o gene cecropina

Silenciamento da protena p23 do CTV
Super-expresso de genes de resistncia a X. axonopodis pv citri
PGM com os genes atacinaA e xa21 x HLB
Transformao de porta-enxertos de citros visando tolerncia ao estresse hdrico
Isolamento de genes CiLV-C (Leprose):

capa protica do vrus e protena de movimento,
candidatos transformao por silenciamento e construo de cassetes expresso

Estudos de Expresso Genoma (ESTs)
Objetivos:
- Sequenciamento de ESTs de citros e afins
- Obteno de marcadores SSRs e SNP
- Anotao (Data mining)
MCT-CNPq => Institutos do Milnio


Estudos de Expresso de Genoma (ESTs)
Bibliotecas de ESTs de tecidos em diferentes condies:
Estresse bitico:
- X. axonopodis pv citri cancro ctrico
- CTV tristeza
- CiLV - leprose
- Phytophthora gomose
- X. fastidiosa clorose variegada dos citros
Estresse abitico:
- Estresse hdrico
Fases de desenvolvimento:
- Frutos
- Tecidos juvenil x adulto
Genmica dos citros

Plant and Animal Genome XV Conference
January 13-17, 2007
Town & Country Convention Center
San Diego, California
Participao do Brasil (Trabalhos)

Total Brasil %
Workshop 454 3 0,66
Poster 957 15 1,57
31 de Citros
Temas representados nos trabalhos brasileiros
Temas Workshop Poster Total %
Citros 1 7 8 44,4 Trabalhos Totais do Brasil / Instituio
Cana 1 1 2 11,1 CCSM-IAC 7
Administrao 1 0 1 5,55 USP 3
Mamo 0 1 1 5,55 UENF 1
Soja 0 1 1 5,55 EMBRAPA 3
Amendoim 0 1 1 5,55 UNESP 2
Eucalipto 0 1 1 5,55 UNICAMP 2
Bovinos 0 1 1 5,55 Total 18
Milho e/ou Sorgo 0 2 2 11,1
Total 3 15 18 100,0
Genmica dos citros

Plant and Animal Genome XV Conference
January 13-17, 2007
Town & Country Convention Center
San Diego, California
Principais trabalhos em genmica ps-genmica de

citros so desenvolvidos nos principais produtores de
citros (Brasil, EUA e Espanha).
O Brasil se destaca pelo maior banco de seqncias de
citros do mundo (mesmo nmero de seqncias j
produzidas por todos os demais laboratrios do mundo
juntos).
Programa CitEST
Resultados
Espcie Nmero Bases Nmero de Cobertura do
de Sequenciadas Genes Genoma n (%)
Sequncias (milhes) nicos (*)
C. sinensis 126,660 92,78 32121 8,03
C. reticulata 59,484 43,54 18873 4,51
P. trifoliata 38,976 27,17 12873 2,96
C. aurantium 9,600 7,16 5607 1,27
C. aurantifolia 9,600 6,73 4327 0,92
C. latifolia 9,600 7,56 4883 1,08
C. limonia 15,455 8,87 5945 1,23
C. limettiodes 9,600 7,58 4540 1,03
C. sunki 7,584 4,33 2652 0,54
Total 286,559 205,72
(*) tamanho do genoma (n) ~ 367 MB
O melhoramento gentico na agroindstria

Perspectivas ...
Informaes existentes ou a serem geradas
conhecimento da gentica e genmica dos citros
=>Uso conjunto para soluo aos desafios atuais,

proporcionais ao prprio tamanho da citricultura;
Doenas = > Problemas emergenciais
Objetivos menos pontuais, com maior planejamento tcnico

cientfico:
Aumento da produtividade e competitividade:
Qualidade = fruto e suco (mercado e exportao)
Agregar valor ... (nutricional, sem residuos, respeito ao
meio ambiente....)
Obrigado pela ateno

Centro Apta Citros Sylvio Moreira IAC
Caixa Postal 04 CEP 13490-970 Cordeirpolis, SP
Email: [email protected]
www.centrodecitricultura.br

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Origem e rotas de disperso das espcies ctricas

Brasil: colonizadores portugueses a partir de 1530

Agroindstria de Citros no Brasil

Citros x Outras Frutferas

FONTE: AGRIANUAL 2007

Agroindstria de Citros no Brasil

21% 260 milhes de plantas

Laranjas frescas- Exportao 2005/06*

Agroindstria de Citros no Brasil

Suco concentrado- Exportao 2005/06*

Copas Pra Valncia Natal Hamlin Outras

Porta-enxertos Limo Cravo Outros

Estresses biticos e abiticos

CVC Pinta preta

Tristeza Gomose MSC Declnio

Estresse hdrico Nutricional

Melhoramento de citros: desafios

Dificuldades no Melhoramento de Citros

- Longo ciclo de seleo

Machado et al, 2005 Livro Citros

Estratgias no melhoramento de citros

HOSPEDEIRO VETOR ENDOSSIMBIONTE PATGENO

Estratgias no melhoramento de citros

BAG - Citros - IAC

Estratgias no melhoramento de citros

MOLECULAR/BIOQUIMICA: RAPDs, Microsatlites, Isoenzimas

AGRONMICA: Ensaios de campo em diferentes locais

FITOSSANITRIAS: Deteminaes de patgenos sistmicos

Estratgias no melhoramento de citros

Estratgias no melhoramento de citros

BAG Citros - IAC - AMPLIAO DO PERODO DE OFERTA DE TANGERINAS

Estratgias no melhoramento de citros

Estratgias no melhoramento de citros

Interao com isolados de

Estratgias no melhoramento de citros

Tangerinas Sunki e Clepatra

Estratgias no melhoramento de citros

Estratgias no melhoramento de citros

IAC: hbridos de Cravo, Lar. Azeda, Sunki e Trifoliata

Estratgias no melhoramento de citros

*CNPMF/Embrapa, IAC, CENA, ESALQ

Estratgias no melhoramento de citros

Estratgias no melhoramento de citros

Foco dos trabalhos (CCSM-IAC)

Estratgias no melhoramento de citros

12 meses Germinao Marcadores

Desafios s doenas Caractersticas

Seleo dos parentais

Estratgias no melhoramento de citros

Limo Cravo ( Citrus limonia)

Tangerina Sunki (Citrus sunki) x Poncirus trifoliata 314 hbridos

Laranja Valencia (Citrus sinensis) 25 hbridos

Tangelo Orlando (C. paradisi x C. reticulata)

Estratgias no melhoramento de citros

Estratgias no melhoramento de citros

Alm do uso em construo e saturao de mapas

Estratgias no melhoramento de citros

Introduo de um gene de interesse = cultura de