Livro 2010

Comissão Organizadora
Amanda de Moraes Narcizo

Camila Helena de Souza Queiroz
Camila Lopes Petrilli
Cláudia Emanuele Carvalho de Sousa
Diego Jose Belato y Orts
Felipe Viegas Rodrigues
Kelly Dhayane Abrantes Lima
Leopoldo Francisco Barletta Marchelli
Marco Antônio Pires Camilo Lapa
Maria Nathália de Carvalho Magalhães Moraes
Marina Marçola Pereira de Freitas
Tatiana Hideko Kawamoto
Coordenador: Prof. Dr. Márcio Reis Custódio
VII Curso de Inverno:

“Tópicos em Fisiologia Comparativa”
http://www.ib.usp.br/cursodeinverno
Realização
Patrocínio
Apresentação
APRESENTAÇÃO
A idéia da criação do Curso de Inverno: Tópicos em Fisiologia Comparativa surgiu

em 2002, quando alunos da pós-graduação do Departamento de Fisiologia Geral do Instituto
de Biociências da Universidade de São Paulo – USP, ansiavam a criação de um espaço que
possibilitasse alternativas de aprendizado complementar. Naquele momento de inquietude e
vontade discente, a decisão foi de empenho em realizar um curso no período de férias e
oferecê-lo a graduandos e recém-graduados que almejassem ingressar na pós-graduação
em Fisiologia, ou mesmo para aqueles que se interessassem pelo tema de uma forma geral.
Além disso, na última década, percebemos uma preocupação crescente em
descentralizar o desenvolvimento concentrado na região Sudeste do país e atingir áreas
mais carentes tanto em pesquisa quanto em desenvolvimento humano. Em defesa deste
conjunto de idéias e ações que a Comissão Organizadora do Curso de Inverno busca
sempre ampliar o alcance do curso, colaborando cada vez mais efetivamente na construção
de um país com menos desigualdades.
Sendo assim, o curso é voltado para alunos originários das diversas áreas do
conhecimento que tenham interesse em Ciências Fisiológicas, mais especificamente em
Fisiologia Comparativa. Seu principal objetivo é promover discussões de conhecimentos
fundamentais para uma boa formação em Fisiologia, assim como proporcionar uma vivência
no dia-a-dia da pesquisa do Departamento de Fisiologia do Instituto de Biociências - USP.
Este livro visa complementar os conteúdos discutidos em sala de aula,
proporcionando uma fonte adicional de consulta para os participantes. O livro é composto de
nove unidades que abrangem os mais variados temas dentro da Fisiologia Comparativa, os
quais apresentam desde teorias básicas até as mais novas discussões da atualidade.
Desejamos uma boa leitura a todos!
Comissão Organizadora
VII Curso de Inverno: Tópicos em Fisiologia Comparativa
Universidade de São Paulo
5 a 23 de Julho de 2010
VII Curso de Inverno - IB/USP Pág. i

Mapa Conceitual
MAPA CONCEITUAL
Na tentativa de sempre melhorar a qualidade das aulas e a comunicação dos pós-

graduandos, a edição 2010 do “Curso de Inverno: Tópicos em Fisiologia Comparativa” foi
organizado em módulos conforme delineamento sugerido por um mapa conceitual, o qual
mostra a interligação entre os diversos assuntos da Fisiologia e aponta as relações
existentes entre os temas que serão abordados no decorrer do curso. Assim sendo, a partir
dele, os módulos deste ano foram criados de acordo com as proximidades de cada
tema. Desta maneira, podemos oferecer aos alunos participantes uma base mais sólida e
coesa a cerca da Fisiologia Comparativa, e ao mesmo tempo transmitiremos uma boa noção
da diversidade de temas abordados no Departamento de Fisiologia.
Mapa Conceitual mostrando as interligações existentes nos mais diversos temas abordados no
Departamento de Fisiologia Geral do Instituto de Biociências da USP, os quais serão
apresentados durante as aulas no Curso de Inverno: Tópicos em Fisiologia Comparativa 2010.
Pág. ii VII Curso de Inverno - IB/USP

Sumário
SUMÁRIO
Unidade 1
Método Científico Aplicado a Estudos em Fisiologia Comparativa
Capítulo 1 O que é ciência e como praticá-la pág. 03

Capítulo 2 Formulando perguntas em fisiologia comparativa pág. 09
Capítulo 3 Evitando confundir-nos: aspectos fundamentais do desenho
experimental e a estatística inferencial pág. 13
Capítulo 4 O Fim da Picada: Comunicando Ciência pág. 17
Glossário pág. 21
Bibliografia pág. 22
Unidade 2
Sinalização Celular
Capítulo 5 Comunicação celular: entendendo a ritmicidade endógena pág. 23

Capítulo 6 Fisiologia celular do plasmodium durante a fase assexuada pág. 41
Capítulo 7 RNAi: ouvindo a voz do silêncio pág. 49
Unidade 3
Neurociências
Capítulo 8 História da neurociência pág. 79

Capítulo 9 Princípios básicos em fisiologia neural pág. 89
Capítulo 10 Fisiologia sensorial pág. 103
Capítulo 11 Neurofisiologia da visão pág. 115
Capítulo 12 Causa e função pág. 121
Capítulo 13 Percepção pág. 127
Capítulo 14 Memória e seus aspectos evolutivos pág. 139
Capítulo 15 Navegação espacial pág. 153
Capítulo 16 Neurobiologia das emoções pág. 163
Capítulo 17 Neurofisiologia da linguagem pág. 179
VII Curso de Inverno - IB/USP Pág. iii

Sumário
Capítulo 18 Neurofisiologia da música pág. 187

Unidade 4
Metabolismo
Capítulo 19 Metabolismo e Temperatura: Conceitos e Implicações pág. 205

Capítulo 20 Medindo a chama da vida pág. 217
Capítulo 21 Ectotermia: um acesso de baixo custo à vida pág. 235
Capítulo 22 Termorregulação em endotérmicos: febre e anapirexia. “Ana” o quê?
pág. 247
Capítulo 23 Metabolismo energético em câmera lenta: mecanismos de depressão
metabólica sazonal pág. 257
Capítulo 24 Custos e benefícios da reprodução: papel dos lipídios pág. 269
Capítulo 25 A ecofisiologia no cenário das mudanças climáticas globais pág. 279
Unidade 5
Neuroendocrinologia Comparada
Lista de abreviações pág. 301

Capítulo 26 Neuroendocrinologia comparada: análise comparativa entre o encéfalo
e a hipófise de peixes e mamíferos pág.305
Capítulo 27 Neuroendocrinologia comparada: o encéfalo e a hipófise de anfíbios,
répteis e aves pág. 323
Capítulo 28 Sistema neuroimunoendócrino pág. 337
Unidade 6
Ecotoxicologia Aquática
Capítulo 29 Metal não essencial: o cádmio e seus efeitos pág. 361

Capítulo 30 Transporte de Metais Essenciais em Organismos Aquáticos: o cobre e
o zinco pág. 371
Pág. iv VII Curso de Inverno - IB/USP

Sumário
Capítulo 31 Efeitos da toxicidade de metais no metabolismo de organismos

aquáticos pág. 381
Capítulo 32 Alterações neuroendócrinas resultantes da exposição a metais
pág. 395
Unidade 7
Fisiologia Comparada de Invertebrados Marinhos: Trocas Gasosas,
Digestão e Sistema Imune
Capítulo 33 Trocas gasosas em invertebrados marinhos pág. 427

Capítulo 34 Adquirindo energia: formas de alimentação e digestão em inverte-
brados marinhos pág. 435
Capítulo 35 Sistema Imune de Invertebrados marinhos: mecanismos, funções e
similaridades pág. 455
Unidade 8
Fundamentos de Toxinologia
Capítulo 36 Co-evolução entre peçonhas e seus alvos pág. 473

Capítulo 37 Produtos naturais e sua função como defesa química pág. 483
Capítulo 38 Invertebrados marinhos: toxinas e seus mecanismos de ação pág. 493
Capítulo 39 Lepidópteros: aspectos biológicos e toxinológicos pág. 501
Capítulo 40 Raias – biologia e envenenamento pág. 511
Capítulo 41 Serpentes peçonhentas do Brasil: biologia, fisiologia e epidemiologia
pág. 519
VII Curso de Inverno - IB/USP Pág. v

Sumário
Unidade 9
Quantificação e Análise de Dados
Capítulo 42 Quantificação de Fenômenos Fisiológicos pág. 547

Pág. vi VII Curso de Inverno - IB/USP

Unidade 1
Método Científico Aplicado a Estudos

em Fisiologia Comparativa
Coordenador: Agustín Camacho Guerrero
Laboratório de Herpetologia
[email protected]
Este capítulo tem três objetivos. A) Apresentar aos leitores os principais métodos usados
para gerar conhecimento científico, B) Mostrar como a fisiologia comparativa pode valer-se
de dois destes métodos: o método indutivo e o hipotético-dedutivo, C) Revisar o processo de
geração de conhecimento, desde o levantamento de perguntas científicas até a
comunicação dos resultados de um projeto de pesquisa, passando por apresentar as bases
do desenho experimental e a análise estatística. O fim último deste texto e as aulas
associadas é que os alunos tenham uma visão básica e estruturada do método científico.
Com esta visão, espero que lhes seja mais fácil aprender no futuro sobre temas mais
específicos (desenho experimental, estatística, comunicação da ciência, etc). No final do
capítulo, existe um glossário que define termos importantes em negrito. Os termos estão na
ordem em que são encontrados durante a leitura, para facilitar uma consulta inmediata.
Por que ler este texto?

Infelizmente, muitos cursos em biologia colocam as disciplinas de método científico como
optativas, em lugar de inserir este tipo de preparo, ao menos nas disciplinas obrigatórias da
grade curricular. Deste modo, muitos alunos não têm um preparo mínimo para planejar,
executar projetos científicos, nem comunicar os resultados obtidos. Como conseqüência, os
primeiros trabalhos de um aluno perdem em qualidade, diminuindo também suas
possibilidades de obter bolsas no futuro. Este capítulo pretende mostrar alguns conceitos
básicos e dicas para auxiliar aos alunos nos seus primeiros encontros com o trabalho de
pesquisador. Durante as aulas relacionadas a este módulo veremos estes conceitos da
forma mais didática possível, mas neste capítulo tem informações e dicas úteis que não
serão explicadas na aula.
VII Curso de Inverno: “Tópicos em Fisiologia Comparativa”
Todos os capítulos revisados pelos profs

Dr. Pedro Ribeiro e Dr. Pedro Luis Bernardo da Rocha
Capítulo 1 O que é ciência e como praticá-la pág. 03

Agustín Camacho Guerrero
Capítulo 2 Formulando perguntas em fisiologia comparativa pág. 09

Capítulo 3 Evitando confundir-nos: aspectos fundamentais do desenho

experimental e a estatística inferencial pág. 13
Capítulo 4 O Fim da Picada: Comunicando Ciência pág. 17

Glossário pág. 21
Pág. 2 Julho/2010
O que é ciência e como praticá-la.

[email protected]
O que é ciência?
Uma bonita forma de começar a preparar-nos é conhecer a etimologia da palavra
que definirá nosso trabalho, talvez pelo resto das nossas vidas. A palavra ciência provém do
latim “scientia” proveniente do verbo “scire = saber”, este está relacionado com o verbo,
também latim, “scindo = dividir”. Existem várias definições de ciência, mais ou menos
completas, seja com ênfase nos seus objetivos ou nos métodos que usam. Uma definição
bastante completa é:
“1. The systematic observation of natural events and conditions in order to discover
facts about them and to formulate laws and principles based on these facts. 2. The
organized body of knowledge that is derived from such observations and that can be verified
or tested by further investigation. 3. Any specific branch of this general body of knowledge,
such as biology, physics, geology or astronomy.” Academic Press Dictionary of Science &
Technology.
Neste módulo, seguiremos uma visão de ciência como busca e comunicação de
conhecimento, o mais confiável possível, sobre a natureza.
Métodos conceituais de obtenção do conhecimento.

Desde séculos antes de Cristo, filósofos, empiristas e estatísticos, tais como
Aristóteles, Bacon, Bayes, Fisher, Popper, Underwood e Jaynes, vêm aprimorando os
métodos conceituais de obter conhecimento do mundo natural, de forma a obter mais
conhecimento e com maior confiabilidade. Assumo que um passo necessário para sermos
bons cientistas passa por conhecer os diferentes modos de obtenção de conhecimento. A
continuação, lhe introduzirei aos métodos mais conhecidos e utilizados. Deste modo, espero
justificar um esquema unificado de obtenção de conhecimento que lhe facilite a assimilação
de conceitos apresentados em futuros cursos de estatística e delineamento experimental.
Vamos lá:
No século IV a. c., Aristóteles definiu o raciocínio demonstrativo, ou lógica
aristotélica, em seis obras conhecidas coletivamente como Organon. De acordo com
Aristóteles, existem termos gerais (Ex. os homens) e termos particulares (Ex. Socrates) que
se referem a subconjuntos dos termos gerais. Segundo este método, estes elementos
podem ser identificados e, relacionando estes através de construções lógicas (silogismos),
é possível derivar conhecimento novo e necessariamente certo (inferências). Nestas
construções, a combinação de dois ou mais enunciados verdadeiros (Ex. todos os homens
Julho/2010 Pág. 3
são primatas; Sócrates é um homem) permitem inferir um novo conhecimento, também

verdadeiro (então Sócrates é um primata). O sistema lógico inventado por Aristóteles, nos
permite até hoje combinar observações consideradas certas para fazer crescer nosso
conhecimento. Porém, Aristóteles não criou um sistema formal para a determinação da
veracidade ou generalidade dos termos, fazendo com que esta determinação fosse, durante
muito tempo, feita com base no conhecimento prévio e subjetivo dos naturalistas.
Em 1620, Francis Bacon rompeu com a tradição da lógica aristotélica propondo
evitar que prévias doutrinas intercedam nas nossas observações. Para Bacon, só era
possível aumentar nosso conhecimento através da experimentação e das observações. O
conhecimento gerado permitiria, segundo ele, explicar de forma cautelosa, situações
relativamente similares. Produzir explicações sobre grupos de casos gerais com base no
que sabemos de casos particulares é definido por ele como indução. Para Bacon, este
conhecimento deveria gerar novos experimentos e ser testado em diversas situações. Ele
defendia que os cientistas deveriam ser céticos acima de tudo, e não aceitar explicações
que não possam ser verificadas pela observação e experiência. Bacon, entretanto, não
clarificou quantas nem como deviam ser feitas as observações para assumir um
conhecimento como certo.
Em 1670, Bayes elaborou um método lógico de atribuir uma probabilidade a
afirmações geradas por indução. Este método é conhecido como lógica probabilística
indutiva. Assume que a probabilidade de uma hipótese ser verdadeira pode ser calculada
multiplicando: A) nossa expectativa de que a hipótese seja certa, expressada em forma de
probabilidade prévia, vezes B) um valor de verossimilhança (likelihood) obtido a partir de
novas observações (Bayes 1763). Desta forma, a probabilidade bayesiana fornece uma
medida de quanto é razoável acreditar em uma hipótese usando toda a informação de que
dispomos (Jaynes 2003). Um problema com este método é que as probabilidades prévias
podem mudar subjetivamente com o pesquisador, e isto afeta ao resultado final. Outro
problema é exposto na continuação.
Karl Popper (1934) enunciou o Método hipotético-dedutivo, chamado também
probabilismo ou falsificacionismo. Segundo este método, não é possível derivar
probabilidades para asserções geradas por indução (Popper 1959) (ex. o simples fato de
que todos os corvos que vi até agora são pretos, não permite calcular a probabilidade de
que o próximo corvo que eu veja será preto, pois não conheço quantos corvos existem no
mundo). Para Popper, o conhecimento deve estar justificado de forma lógica. Deste modo,
ele defende que só podemos justificar de forma lógica a crença em uma teoria, em quanto
previsões derivadas logicamente desta estejam sobrevivendo a testes com base em
observações. Segundo este autor, a validade de uma teoria pode ser testada de quatro
formas diferentes: 1) Determinando se as conclusões de uma teoria contradizem-se entre
Pág. 4 Julho/2010
elas (Para este autor, você pode considerar “conclusões de uma teoria” sinônimo de
previsões, predições ou hipóteses). 2) Verificando a estrutura lógica da teoria, para
determinar se esta é empírica ou é uma tautologia; 3) Comparando com outras teorias
para saber se o fato de superar nossos testes suporia um avanço científico; 4) Testar
empiricamente as conclusões. Para testar as conclusões, Popper propõe testar aquelas que
vão mais de contra com a teoria e que possam ser mais severamente testadas. Um dos
problemas principais apontados a este método é que não gera crescimento da certeza
relativa nas diferentes teorias, por considerar-se que sempre existirão infinitas possíveis
teorias competindo para explicar cada fenômeno.
Outros autores tem defendido o uso da verificação para aumentar nossa certeza
sobre teorias (Ex. Sober 1999 e Lloyd 1987, citados por Lewin-koh et al. 2004). Apesar do
problema lógico apontado por Popper, vários autores baseiam-se no procedimento de
“verossemelhança máxima” popularizado por Fischer (Aldrich 1997) para defender que a
verificação de certas hipóteses em várias instâncias (ex. uma relação entre taxa de
ventilação e percentagem de O2 no fluxo sanguíneo dos pulmões foi observada em vários
vertebrados) permite obter confiança objetivamente mensurável sobre predições feitas para
novas observações (Ex. relação entre a taxa de ventilação e percentagem de O2 no torrente
sanguíneo de um novo vertebrado que ventila). A representação matemática destas
relações é comumente chamada de modelagem. Onde os modelos podem ser
considerados representações matemáticas que descrevem ou relacionam variáveis.
Em geral, podemos observar que os métodos de obtenção de conhecimento desde
Bacon valem se de concepções que representam o que pensamos do mundo real (Ex.
teorias, modelos, hipóteses) e seu contraste com observações do mesmo (também
representadas em forma de variáveis, amostras, etc). Na literatura, podemos encontrar uma
diversidade de significados para estes conceitos em função do autor e a área da ciência
(Suppes 1960). Pessoalmente, opino que para que grupos de conceitos sejam úteis e mais
facilmente ensináveis estes devem ter significados específicos e estar relacionados entre
eles de forma lógica. Por isto, neste capítulo combinei a relação entre modelo e teoria
proposta por Suppes (1960) e a relação entre modelo e hipótese proposta por Underwood
(1997). Desta forma estes conceitos ficam hierárquica e logicamente relacionados, e seus
significados são aceitáveis desde os diferentes modos de obtenção de conhecimento
(compare com Jaynes 2003, durante sua apresentação de raciocínio plausível, uma
abordagem verificacionista da obtenção de evidência). Assim, é possível inserir-los num
processo unificado de obtenção de conhecimento científico que combina teoria e
observação. O mapa de conceitos na figura 1 representa tais relações.
Julho/2010 Pág. 5
explicam Sistemas
Teorias
biológicos
compostas
por representados por
relacionam ou
Modelos descrevem Variáveis
dos que se
derivam
predizem valores
sob determinadas
Hipóteses
circunstancias
(=predições)
Figura 1 - Relações lógicas entre conceitos centrais ao processo de obtenção de
conhecimento. Mapa de conceitos baseado nas propostas de Suppes (1960) e Underwood
(1997).
O que é Fisiologia Comparativa?
Em 1950, Prosser listou alguns objetivos da fisiologia comparativa como disciplina.

Estes foram:
1) Descrever como os organismos obtêm seus requerimentos no ambiente onde moram.
2) Prover bases fisiológicas para entender a ecologia.
3) Chamar a atenção sobre animais particularmente bons para estudar processos
fisiológicos.
4) Encontrar generalizações derivadas do uso de distintas espécies animais em estudos
fisiológicos.
Um campo com grande desenvolvimento da fisiologia comparativa é a fisiologia
evolutiva, que busca entender a evolução dos parâmetros fisiológicos (Garland & Carter
1994). Uma vez que as técnicas moleculares têm acelerado nosso conhecimento das
relações filogenéticas entre as espécies, muitos cientistas tentam desvendar processos
evolutivos através da comparação de características em linhagens de espécies com
filogenias conhecidas (Wiens, 2008).
Este campo da fisiologia comparativa nos proporciona um exemplo de como dois ou
mais métodos de obtenção do conhecimento podem ser combinados (Fig. 2). Imagine que
queremos saber se, em lagartos, morar em hábitats abertos provoca um aumento da taxa
Pág. 6 Julho/2010
metabólica com relação a morar em florestas. Para isto, poderíamos comparar espécies de
área aberta com espécies de floresta. Assim, poderíamos obter que espécies de áreas
abertas têm uma maior taxa metabólica (Fig. 2, esquerda). Entretanto, as espécies são
elementos que apresentam relações filogenéticas. Imagine que estas fossem representadas
pelo gráfico A, veríamos que as espécies de área florestada pertencem à linhagem da
esquerda e as de área aberta à linhagem da direita. Poderíamos ter certeza que é o tipo de
hábitat quem faz aumentar a taxa metabólica? Teríamos mais certeza se nossa hipótese
fosse representada por B?
sp1 sp2 sp3 sp4 sp5 sp6 sp7 sp8
sp5
taxa metabólica
sp6
sp7 A
sp1
sp8
sp2 sp6 sp2 sp8 sp4 sp5 sp1 sp7 sp2
sp3
sp4
floresta área B
aberta
Figura 2. Comparação hipotética da taxa metabólica entre espécies de lagartos de áreas de floresta e
de área aberta. Os cladogramas A e B mostram diferentes relações filogenéticas entre as espécies
comparadas. Sob a hipótese de parentesco A, as espécies de cada tratamento são aparentadas,
implicando em que a taxa metabólica mais baixa pode ser devida a viver em floresta ou a ser
simplesmente uma característica compartilhada do grupo. Sob a hipótese de parentesco B, a menor
taxa metabólica não pode mais ser explicada pelo parentesco, pois em todos os pares de espécies
mais aparentadas a que mora na mata tem a taxa metabólica mais baixa que a que mora em um
hábitat aberto.
Hoje em dia, métodos indutivos (análise bayesiana) e verificacionistas (análise da

verossimilhança máxima) estão entre os mais usados para escolher dentre hipóteses de
relações filogenéticas (Amorim 2002). Por outro lado, tanto métodos falsificacionistas
(Ex.Teste de Fisher) quanto verificacionistas nos permitiriam testar de maneira objetiva se a
taxa metabólica aumenta em função do tipo de habitat, com base em amostras da taxa
metabólica das espécies referidas. Deste modo, os produtos dos diferentes métodos de
obter conhecimento podem ser combinados dentro de uma disciplina científica. Por
exemplo, na fisiologia comparativa. Você concorda com esta forma de proceder, ou opina
que só podemos confiar em um modo de obtenção de conhecimento? Aqui não é possível
Julho/2010 Pág. 7
estender-se mais sobre este assunto, mas lhe recomendo que consulte Sober (2008) antes
de decidir-se.
Pág. 8 Julho/2010
Formulando perguntas em fisiologia comparativa

[email protected]
Buscando trabalho: como levantar uma pergunta a responder.

Centremo-nos agora sobre o seu trabalho: fazer ciência. Você sempre deverá
começar com uma pergunta que, para ter certeza de que vale a pena respondê-la, deverá
ter surgido do conhecimento do estado da arte da disciplina de interesse. Quando
realizamos perguntas baseadas sobre conhecimento levantando por outros pesquisadores,
as chances de gerar um maior avanço científico se multiplicam. “Levante-se sobre os
ombros dos gigantes” diria Issac Newton. É necessário pensar duas vezes antes descrever
um aspecto da fisiologia de uma espécie ou grupo de espécies sob o pretexto único de que
“nunca foi estudado”. Isto pode estar escondendo o problema de que não sabemos o que é
mais relevante saber sobre nosso objeto de estudo (Peters, 1987).
Existem várias ferramentas em internet e nas bibliotecas para encontrar este
conhecimento (Web of Science, Biological Abstracts, Zoological Records, Google
Acadêmico etc.). Através destas ferramentes podemos procurar artigos ou livros que falem
sobre nosso tema de interesse. É importante uma cuidadosa seleção de palavras chave,
para encontrar o grupo de artigos que tratam o tema de nosso interesse (uma opção: use os
conceitos relacionados na sua hipótese de estudo). Uma vez conseguidas algumas
referências devemos procurar o material. Nas universidades públicas brasileiras o portal de
periódicos da CAPES garante acesso a vários jornais científicos on-line. Em são Paulo, a
Fapesp ainda fornece acesso ao site Jstor, com artigos mais antigos. “O sistema COMUT de
bibliotecas brasileiras permite, mediante prévio pagamento, a solicitação de xérox ou
arquivos ”.PDF” de quaisquer artigos ou separatas que se encontrem numa biblioteca
brasileira. Por último, você pode pedir diretamente ao autor ou conseguir na internet do seu
site pessoal, ou site do laboratório onde trabalha. Exija da sua universidade maior acesso a
revistas científicas e participe da solicitação de livros na biblioteca da sua unidade! Em
seguida, leia organizadamente o material bibliográfico e busque mais entre as referências
bibliográficas destes trabalhos. As perguntas podem surgir como hipóteses que refutam as
previsões centrais da teoria comumente aceita sobre um determinado tema, ou bem como a
necessidade de dados sobre aspectos fisiológicos de determinadas espécies ou grupos que
a complementam.
Julho/2010 Pág. 9
Como ser objetivo: Transformação da

1.Leitura e observações
pergunta em um gráfico
prévias
Uma vez que tenhamos uma pergunta e
2. Identificação da lacuna de confiamos em que esta tem relevância suficiente
conhecimento
para investir o esforço necessário, deveremos
3. Emissão da pergunta cuja formulá-la da maneira mais clara possível. Isto é
resposta preenche a lacuna fundamental para: A) determinar o que queremos
medir exatamente, desenhar nossas observações
4. Desenho das observações
de modo a evitar que estas nos confundam; B)
que respondem à pergunta
fazer testes estatísticos que nos permitam
5. Execução e análise das calcular, de maneira objetiva, confiança sobre a
observações resposta indicada pelas nossas observações e C)
determinar se os custos para responder esta
7. Interpretação
pergunta são altos demais como para tentar
8. Comunicação de resultados responde-la. Uma pergunta clara é aquela que
e conclusões. pode ser expressa como uma previsão, ou
Quadro 1. Esquema básico do hipótese, Ex. “a testosterona estimula o
processo de trabalho científico. comportamento agressivo na piranha?” ou “a taxa
de crescimento dos girinos é mais alta em presença de Iodo na água?” Um indício de que a
pergunta está bastante clara é que você pode ver nos dois exemplos, é que podemos
transformar a pergunta em hipótese só tirando o ponto de interrogação.
Levantar uma pergunta clara sobre o mundo implica necessariamente que possamos
representá-la em um gráfico cartesiano (Magnusson e Mourão, 2004) (ou tal vez em uns
poucos, caso responder sua pergunta precise de algumas sub-perguntas). Fazer uma
representação gráfica dos nossos objetivos ajuda a esclarecer quais os tipos de variáveis
devemos e podemos medir. Ainda, ao facilitar a exposição dos nossos objetivos e resultados
esperados a outras pessoas (Cleveland, 1984), permite que as outras pessoas realizem
sugestões ou críticas mais importantes antes de começar todo o trabalho (Magnusson e
Mourão, 2004).
Os eixos do gráfico devem representar as partes de nossa pergunta. Os fatores ou
variáveis independentes serão representados sempre no eixo horizontal e as variáveis
dependentes ou de interesse são representadas sempre no eixo vertical (Cleveland,
1984).
Agora estamos em condições de decidir se usaremos variáveis contínuas ou
categóricas para representar nossos fatores e variáveis de interesse. Variáveis contínuas
representam características da natureza atribuindo-lhes números reais, enquanto que
variáveis categóricas dividem estas variáveis sob critérios subjetivos para representá-las
Pág. 10 Julho/2010
(etiquetas, categorias). Entre os exemplos mais comuns de variáveis contínuas estão:

comprimento de onda, peso, comprimento, concentração, etc. como variáveis categóricas
podemos citar cores, sexo, tratamento. As variáveis contínuas proporcionam mais
informação, enquanto as categóricas são mais simples de entender e manejar. O melhor
tipo de variável vai depender essencialmente da sua pergunta e dos recursos disponíveis.
Os tipos de variáveis escolhidas determinarão o tipo de gráfico utilizado. Entre os
gráficos mais informativos e fáceis de entender estão os gráficos de nuvens de pontos,
gráficos de dispersão, ou scatter plots (Magnusson e Mourão, 2004). Podemos encontrar
dois tipos básicos, o primeiro tem variáveis categóricas no eixo horizontal, o segundo usa
variáveis contínuas no eixo horizontal (Fig. 3).
O CHUMBO NA ÁGUA INFLUENCIA A TAXA METABÓLICA DOS GIRINOS?

taxa metabólica
taxa metabólica
pouco muito concentração de

A B
chumbo chumbo chumbo na água
Figura 3. Exemplos de gráficos de dispersão. A) gráfico com fator categórico. B) Gráfico com
fator contínuo (modificado de Magnusson e Mourão, 2004).
Como mostra a Fig. 3, quando categorizamos variáveis podemos perder informação

(Magnusson e Mourão, 2004). Se na pergunta anterior o pesquisador tivesse escolhido
comparar duas concentrações de chumbo, não teria detectado o efeito do chumbo sobre o
crescimento dos girinos, mesmo quando realmente existe uma relação entre as variáveis.
Por outro lado, as categorias podem ser mais didáticas e fáceis de manejar. Por isto é
necessário estar seguro sobre qual informação se quer obter para decidir sobre que tipo de
variável usar.
Julho/2010 Pág. 11
Pág. 12 Julho/2010
Evitando confundir-nos: aspectos fundamentais do desenho

experimental e a estatística inferencial.

[email protected]
Agora que já sabemos qual é nossa pergunta e como representá-la, deveremos

realizar observações que a respondam. Entretanto, um dos maiores problemas para
responder perguntas sobre sistemas naturais é que estes são afetados por múltiplos fatores.
Estes são fatores cujo efeito se mistura com o do nosso fator de estudo, de maneira que
pode ser impossível saber se a variação observada na variável dependente é derivada de
nosso fator ou destes fatores (Hurlbert, 1984). Por exemplo, um experimentador poderia
determinar que a secreção de saliva é controlada pela presença de alimentos na boca, uma
vez depositados alimentos na boca de um animal e medindo variações no volume de saliva.
Entretanto, se ele não tiver o cuidado de administrar alimentos sem que o animal os veja ou
os cheire, a secreção de saliva poderia ser provocada pela visão ou cheiro destes antes que
pela sua presença na boca do animal. Para um cientista, é crucial aprender a enxergar e
evitar fatores que confundam suas conclusões de maneira não desejada ou oculta. O
desenho experimental representa nossa decisão de quantas observações necessitamos e
como as distribuímos para evitar que fatores de confusão, influenciem em nossa resposta
(Quinn e Keogh, 2002).
Erros cometidos durante o desenho amostral podem fazer com que o efeito de
fatores inadvertidos seja indistinguível do efeito dos teus fatores de estudo. Para evitar
confusões ao comunicar-se com colaboradores durante a fase de planejamento é
conveniente aprender claramente os seguintes conceitos: Unidade amostral, repetição ou
réplica: elas são cada uma das observações que gera uma resposta a sua pergunta (são os
pontos nos gráficos); Universo amostral: é aquela parte da natureza sobre a qual se quer
obter informações por meio de observações e a qual se aplicam nossas conclusões.
O que significa testar uma hipótese?

Como vimos antes, para avançar em ciência derivamos hipóteses a partir de modelos
considerados válidos cuja rejeição/aceitação com base em observações implicaria no
refinamento ou rejeição das teorias que possuímos sobre o mundo. Testar uma hipótese é
mesmo isto: contrastar os valores das nossas observações com os valores que
esperaríamos para ela (No falsificacionismo, compararíamos com os valores esperados
caso nossa hipótese não fosse correta. No verificacionismo, compararíamos as observações
com diferentes possibilidades teoricamente justificadas).
Julho/2010 Pág. 13
Frequentemente, queremos realizar algum de dois tipos de testes: A) se os valores

de nossa variável de interesse estão relacionados com uma ou mais variáveis
independentes (fatores), ou B) Se os valores de nossa variável de interesse feitas em duas
ou mais situações diferentes (tratamentos) são iguais ou diferentes (Fig.4).
ruído
variável variável
dependente dependente variação
ruído
provocada
pelo fator
variação
provocada
pelo fator
f ator tratamento tratamento

A B 1 2
Figura 4. “Scatter-plots” mostrando a distribuição da variação em dois tipos básicos de análise: A)

análise da relação entre duas variáveis e B) comparação do efeito de dois tratamentos sobre uma
variável.
Você pode estar-se perguntando: “para que toda esta complicação?” A resposta é a
seguinte: como normalmente só conseguimos observar uma parte da variação de nosso
sistema de estudo, é possível que o resultado de nosso experimento seja esperado pelo
acaso. Os testes estatísticos nos permitem estimar o quanto é seguro aceitar a resposta a
nossa pergunta (= houve/não houve relação; houve /não houve diferença, que hipótese
suporta melhor os dados), em função de como a variabilidade está partilhada nos dados que
representam nossas observações.
Uma forma comum de fazer isto é distribuir-se a variação encontrada em tal conjunto
de dados em variação provocada por um fator (efeito) e a variação não devida a este fator
(ruído) (Fig. 4). Neste caso, a finalidade de um experimento é avaliar se a variação
provocada pelo fator é, uma vez isolados possíveis fatores de confusão, maior do que o
ruído. Associado a este tipo de experimento, um teste falsificacionista compararia a
distribuição de freqüências observadas com a distribuição de freqüência teórica (=hipótese):
esperada no caso de que o ruído seja maior que o efeito. Um teste verificacionista
compararia a distribuição de freqüências observadas com as distribuições de freqüências
teóricas para os dois casos possíveis: que o efeito seja maior ou vice-versa.
Pág. 14 Julho/2010
Repetição, pseudorepetição e confiança.

Lembra do problema no final do capítulo 1? Quando um fator altera os valores de
nossas repetições, de modo que faz com que seu valor esteja relacionado, as repetições
são chamadas de pseudorepetições. Aumentar o número de repetições nos permite
aumentar nossa confiança no resultado, mas isso não acontece com as pseudorepetições,
apesar de que aumentar o número de pseudorepetições pode nos dar uma falsa sensação
de confiança.
Para entender a relação entre fatores de confusão, confiança e pseudorepetição, leia
o seguinte exemplo: Imagine que você quer ir “bonito(a)” a uma festa. Em que caso você se
sentiria com maior confiança sobre as opiniões: depois de perguntar a sua mãe? Depois de
perguntar a sua mãe, avós e tias? Depois de perguntar a um(a) colega, ou depois de
perguntar a várias meninas não muito próximas? Como pode ter deduzido, perguntar a suas
avós e tias depois de perguntar a sua mãe não vai trazer tanta confiança, pois é provável
que vão dizer que você está muito bonito(a). Na opinião de cada uma delas está embutido o
fator de confusão “parentesco” (que, vamos lá, é importante neste caso!). Agora, se você
pergunta a um(a) colega, e sua resposta é que você está “muito bonito(a)”, você poderia
ainda pensar que “ele(a) quer te agradar”. Finalmente, se a resposta deste(a) colega)
concordar com a de outros(as) colegas não relacionados(as) com ele(a), sua confiança em
que você está bonito(a) aumentará muito! Cair na pseudorepetição é acreditar que
repetições aumentaram nossa confiança sobre a resposta a nossa pergunta quando estas,
na realidade, estão relacionadas por um fator de confusão. Busque sempre respostas
independentes para suas perguntas!
Provocam pseudorepetição aqueles fatores que não fazem parte do estudo e que
fazem com que os valores de nossas observações não sejam independentes entre eles.
Tipos gerais de pseudo-repetição incluem: espacial= as observações tem valores
relacionados por causa da sua posição no espaço, temporal= quando o fator que relaciona
os valores das observações é o tempo, filogenética= provocada por relações de origem
comum entre as observações e técnica= quando é um elemento do equipamento ou
procedimento experimental que está relacionando os valores obtidos nas observações.
Obtenha informações mais detalhadas e mais exemplos em Hulbert (1984) e Magnusson e
Mourão (2004).
Existem outros aspectos do desenho de um experimento. Por exemplo, decidir
quantas observações serão necessárias, se estas serão dispostas aleatória ou
sistematicamente, e como serão feitos os controles. Explicar isto está fora do tempo
disponível para este módulo, mas todos estes passos são críticos para o sucesso do seu
trabalho. Lhe recomendo que leia a maior quantidade de literatura possível sobre desenho
experimental e estatística antes de começar a coletar seus dados. Comece pela tabela de
Julho/2010 Pág. 15
Magnusson e Mourão (2004), pag. 4. Parafraseando a Peters (1987): Não fazer isto “porque
você não teve tempo” facilmente acabará em que todo o esforço e dinheiro público investido
não sirvam para nada.
Pág. 16 Julho/2010
O Fim da Picada: Comunicando Ciência.

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Pense por um segundo no momento no qual você terminará seu experimento. Foi um
caminho árduo: você teve que ler vários artigos que não entendia bem ou com os quais nem
concordava para levantar uma pergunta não respondida até agora. Passou tempo lendo,
pensando e discutindo o projeto com outras pessoas que, às vezes, não lhe entendiam bem.
Suas idéias sofreram críticas, você teve que esperar longas burocracias (licenças,
solicitação de fundos) e repetir seu experimento várias vezes, resolvendo inúmeros
problemas (animais que morrem antes de obter os dados, infra-estrutura falha, falta dinheiro,
segurança, etc.). Conseguiu imaginar? Com certeza você vai lembrar-se deste parágrafo
depois do seu mestrado...
Bom, se você não tem cuidado no que vem agora, tudo isso pode não ter servido de
nada. A valia dos cientistas se mede grandemente a través da qualidade e quantidade de
artigos científicos que publicam. Para isto, uma grande dose de experiência é necessária.
Recomendo que você a procure em seu orientador e lendo artigos nas revistas onde
pretendam publicar. Assim mesmo, busque textos (Ex. referências neste capítulo, manuais
de redação de jornais científicos) e faça cursos especializados no tema. A continuação,
veremos algumas dicas básicas para estruturar textos científicos. Estas dicas estão
baseadas no livro de Peters (1984), e você deve dominá-las desde o começo.
Repassaremos aqui as partes de um relatório de pesquisa, as relações lógicas entre elas e
alguns elementos básicos que devem conter.
Partes e estrutura de um relatório de pesquisa.

Um relatório de pesquisa deve ser tão claro, preciso e curto quanto seja possível.
Basicamente, consta de 7 partes: título, resumo, introdução, material e métodos, resultados,
discussão, agradecimentos e referências. Veja dicas úteis sobre o título, agradecimentos e
referências na tabela 1. Iremos nos estender mais nas seções de resumo, introdução,
material e métodos, resultados e discussão.
O resumo se compõe normalmente de um parágrafo que demonstra a relevância e
os objetivos do estudo, e explica de forma sucinta os métodos empregados e os principais
resultados e conclusões.
Dentro da introdução devem ficar claros: A) o problema que vamos abordar e sua
relevância B) o estado da arte sobre o problema, mostrando a lacuna de conhecimento que
pretendemos preencher e porque precisa ser preenchida e C) as decorrências dos possíveis
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resultados de nosso trabalho. Por último, os objetivos devem aparecer da forma mais clara
possível. Concretamente, em forma de hipótese a ser testada.
O “material e métodos” deve conter uma explicação clara dos métodos empregados
para alcançar o objetivo declarado no fim da introdução. Desta forma, as técnicas, o
desenho experimental e as análises devem aparecer explicados e justificados de forma que
os leitores sejam capazes de: A) entender como alcançam o objetivo escolhido B) Repeti-lo
C) perceber possíveis fraquezas no delineamento. Se evitarmos mostrar claramente nosso
desenho experimental pode ser que rejeitem nosso relatório na revista que o queremos
publicar. Pior ainda, podemos enganar aos nossos leitores.
A seção de “resultados” deve dar toda a informação necessária para responder
nossa pergunta inicial e que outros possam avaliar se a respondemos mesmo ou não. Isto
implica em descrever as observações feitas, estabelecendo as relações que foram
estatisticamente significativas e as que não foram. Os dados, quando numerosos, devem
ser apresentados em forma de tabelas. Os gráficos devem expor a parte mais importante
dos nossos resultados (nossa pergunta e as observações que a respondem) e informar
sempre o número de repetições. Se nos nossos resultados, os gráficos não representam as
partes de nossa pergunta, a evidência gerada para respondê-la parecerá fraca a vista dos
outros (Magnusson, 1966). Tanto tabelas quanto gráficos devem ter uma legenda curta e
auto-explicativa, e serem numerados, de forma que possam ser referidos no texto. Dados
apresentados em tabelas e gráficos devem ser explicados também no texto, mas evitando
redundância.
Na discussão, devemos expor como nossos resultados se relacionam com a
hipótese que pretendíamos testar, reconhecendo as fraquezas que puderem comprometer
os resultados. Em seguida, mostrar a consistência (ou inconsistência) dos nossos resultados
com os resultados de outros trabalhos levantados na introdução, mostrando quais as
implicações dos nossos resultados sobre a lacuna de conhecimento levantada. Por último,
este é o lugar onde se deve apontar, curtamente, futuros experimentos ou hipóteses
testáveis que permitam avançar no entendimento do problema abordado.
Se o relatório tem vários objetivos, estes devem seguir a mesma ordem na
introdução, material e métodos, resultados e discussão. A fim de facilitar a interpretação do
leitor. Veja uma lista de verificação básica para identificar problemas em seu relatório de
pesquisa (Tab.1).
Busque críticas, seja crítico e ajude à ciência progredir.

Einstein dizia que se você não consegue explicar seu trabalho a seu avô, é porque
você não entende bem o que está fazendo. Agora, eu digo a você que, explicando
corretamente para ele, até seu avô poderia fazer críticas imprevistas e acertadas sobre o
Pág. 18 Julho/2010
seu trabalho. A comunidade científica deve ajudar-se a través de visão crítica e sentido
construtivo.
Lembre-se que em ciência, tratamos com assuntos que, via de regra, são
complicados. Isto faz com que todos nós cometamos erros. Para evitar erros em seu
experimento, a melhor saída é apresentar seu projeto a pessoas com visão crítica. Se estas
pessoas conseguem entendê-lo perfeitamente, poderão julgar se foram convencidas ou não
pelos seus argumentos. Encontrar falhas nos aspectos do desenvolvimento lógico do
trabalho de um colega pode ser de grande ajuda para ele, antes que invista grande esforço
e dinheiro em um projeto mal planejado. Assim mesmo, podemos evitar que um trabalho
confunda a comunidade científica através da geração de evidências ou argumentos que
permita mostrar que este está errado.
Considerações finais.
Terminou este capítulo que pretendia mostrar-lhe um pouquinho do que vem pela
frente. A melhor forma de enfrentar os próximos anos de preparação é você que deve
planejar. A lista de referências que segue é uma seleção da literatura que fez muita
diferença na minha própria formação (alguma delas chegou um pouco tarde). Espero que
lhe ajude.
Julho/2010 Pág. 19
Tabela 1: Lista de verificação na redação de um relatório de pesquisa.

No título
O titulo representa os elementos da sua pergunta? E o universo de estudo?
Na introdução:
A lacuna de conhecimento está clara?
Esta se deriva logicamente do estado da arte da disciplina?
Os objetivos buscam preencher esta lacuna?
Os conceitos mantêm o significado ao longo do texto?
Os objetivos buscam testar ou verificar uma hipótese?
Nos métodos:
Há pontos importantes para julgar a validade do trabalho que não foram explicados?
Está claro para que serve cada seção dos métodos?
As medidas realizadas e os procedimentos adotados estão claramente justificados?
No caso de várias hipóteses, as análises estão redigidas na mesma ordem que os
objetivos?
Nos resultados:
Um gráfico de dispersão representa a resposta a nossa pergunta principal?
O número de observações está claro no gráfico?
Existe redundância entre a informação mostrada no texto e os dados apresentados nos
gráficos e/ou tabelas?
No caso de vários objetivos, os resultados foram apresentados na mesma ordem que as
análises dos métodos?
Os dados mostrados permitem julgar se as análises foram feitas corretamente?
Na discussão
Foram discutidos problemas que possam ter interferido na resposta?
Os resultados de estudos comparados com o nosso são mesmo comparáveis?
As conclusões e sugestões derivam logicamente dos resultados?
Mostraram-se novas hipóteses para avançar no entendimento do tema abordado?
Nos reconhecimentos
As pessoas/organizações que prestaram a ajuda ou licenças mais fundamentais estão
presentes?
Nas referências
Todas as citações, e só as que estão no texto, aparecem na seção referencias?
Pág. 20 Julho/2010
Glossário
Etimologia: parte da gramática que estuda da história ou origem das palavras.
Lei científica: relação tão demonstrada empiricamente que é assumido que sempre vai ser
observada em determinadas condições.
Princípio científico: pode ser considerado sinônimo de lei científica
Epistemológico: relativo ao estudo do funcionamento da ciência.
Silogismos: arranjos de três proposições lógicas onde a última se deduz necessariamente
das duas anteriores
Inferência: conclusão, seja esta tomada sobre uma população, a partir de uma amostra da
mesma, ou bem tomada a partir da combinação lógica de duas premissas verdadeiras (Ex:
Se as premissas de que todos os homens tem coração e que Sócrates é um homem são
verdadeiras, então podemos inferir que Sócrates tem coração)
Casos gerais e particulares: Para Aristóteles e Bacon, são duas categorias que mostram
generalidade de aplicação de um conceito.
Indução: Raciocínio ou forma de conhecimento pelo qual passamos do particular ao
universal, do especial ao geral, do conhecimento dos fatos ao conhecimento das leis.
Probabilidade prévia: estimação subjetiva da probabilidade de um evento, prévia a um
experimento.
Verossimilhança: Dado um conjunto de dados observados, a verossimilhança valoriza a
plausibilidade de um descritor hipotético deste conjunto, sobre outro possível descritor.
verossimilhança é proporcional à probabilidade de observar os dados sendo um
determinado descritor verdadeiro.
Teoria: explicação sobre um fenômeno. Para Popper, deve ser um conjunto de enunciados.
Diferencia-se de lei porque a teoria não precisa ter sido demonstrada amplamente com
dados empíricos.
Conclusões, previsões, predições ou hipóteses: uma proposição aceitável do ponto de
vista de uma teoria ou um modelo, mas ainda não conferida.
Modelo: tem variados significados dependendo do contexto, porém a maioria pode ser
considerada como “representação simplificada”. Dentro do processo de geração de
conhecimento um modelo pode ser considerado como uma representação de relações entre
variáveis acorde com a teoria da que forma parte tal modelo.
Teoria empírica: Segundo Popper, aquela teoria que pode ser testada.
Tautologia: uma afirmação lógica onde as premissas são iguais à conclusão.
(ex. estes animais não são aquáticos, logo eles não moram na água)
Filogenia: representação de relações de parentesco entre espécies ou grupos de espécies.
Caráter ancestral: característica considerada original para um grupo de espécies.
Teste: prova, ensaio, exame.
Julho/2010 Pág. 21
Tratamento: aqui tratado como manipulação.

Fatores ou variáveis independentes: elemento ou circunstância que contribui a produzir
um estado em uma variável influenciada por ele.
Variáveis dependentes ou de interesse: variável cuja variação estamos interessados em
explicar, sendo influenciada pelos fatores.
Efeito: influencia de um elemento sobre outro.
Ruído: variação não devida ao fator.
Pseudorepetições: observações cujos valores estão afetados por um fator de confusão.
Bibliografia
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Julho/2010 Pág. 23
Pág. 24 Julho/2010
Unidade 2

Laboratório de Fisiologia Comparativa da Pigmentação
[email protected]
A sobrevivência dos organismos multicelulares depende de uma rede

elaborada de comunicação inter e intracelular, que coordena o crescimento, a
diferenciação e o metabolismo das células em diversos tecidos e órgãos. Neste
módulo, serão abordados os aspectos da evolução da multicelularidade e os
mecanismos básicos da transdução de sinais, bem como a contextualização desses
mecanismos dentro de patologias, como é o caso da malária. Além disso, será
apresentada a técnica do RNAi (RNA de interferência) como ferramenta de estudo
para a fisiologia, com destaque para as vias de transdução do sinal em diversos
modelos.
Capítulo 5 Comunicação celular: entendendo a ritmicidade endógena pág. 27

Maria Nathália C. Magalhães Moraes
Revisado por Dra Ana Maria de Lauro Castrucci
Capítulo 6 Fisiologia Celular do Plasmodium durante a fase assexuada

pág. 41
Laura Nogueira da Cruz
Revisado por Dra. Célia R. S. Garcia
Capítulo 7 RNAi: ouvindo a voz do silêncio pág. 49

Maísa Costa
Revisado por Dr. Daniel Carneiro Carrettiero
Pág. 26 Julho/2010
Comunicação Celular: Entendendo a Ritmicidade Endógena

Laboratório de Fisiologia Comparativa da Pigmentação
[email protected]
Evolução da Multicelularidade
O grande passo obtido através da evolução da unicelularidade para a
pluricelularidade certamente foi a capacidade de comunicação entre as células, por meio da
evolução a partir de uma única célula, a qual desempenhava todas as funções necessárias
para o organismo, para um conjunto de células especializadas proporcionando interações
entre elas (Ben-Shlomo e col., 2003). Os ancestrais dos organismos multicelulares seriam
simples agregados de seres unicelulares, que formavam estruturas designadas colônias.
Inicialmente todas as células da colônia desempenhavam a mesma função. Contudo, ao
longo do tempo algumas das células da colônia especializaram-se em determinadas
funções. A diferenciação celular, relacionada com a função especifica acentuou-se no
decorrer da evolução, originando os verdadeiros seres multicelulares. Neste processo foram
surgindo diferentes tipos de células, que mais tarde originaram tecidos, os quais levaram ao
aparecimento de órgãos. A especialização celular permitiu uma melhor utilização da energia,
levando a uma diminuição da taxa metabólica, além de uma maior independência em
relação ao ambiente.
Para que as células pudessem sincronizar as tarefas e perceber informações do
ambiente, foi necessária a especialização de células para percepção do ambiente
(receptores sensoriais), centros integradores dessas informações (sistema nervoso) e
efetuadores de ajustes homeostáticos (sistema muscular, endócrino e exócrino) (Isoldi e
Castrucci, 2007).
Para garantir o sucesso e a diversificação da vida, foi necessário o aparecimento de
estruturas de ligação e principalmente de comunicação entre as diferentes células. Nos
organismos multicelulares, a manutenção da homeostase é dependente de um
processamento continuo de informações através de uma complexa rede de células. Além
disso, para que o organismo responda a constantes mudanças do ambiente, sinais
intracelulares devem ser transduzidos, ampliados e finalmente convertidos para uma
resposta fisiológica adequada (Pires-da-Silva e Sommer, 2003). Muitos hormônios,
neurotransmissores, quimiocinas, mediadores locais e estímulos sensoriais exercem seus
efeitos sobre as células através de ligação a diferentes classes de receptores. Esses
transdutores altamente especializados são capazes de modular a sinalização de várias vias
que levam a diversas respostas biológicas (Cabrera-Vera e col., 2003). A maioria das
Julho/2010 Pág. 27
famílias de receptores evoluiu com o advento da multicelularidade e com a necessidade de

um comportamento coordenado do organismo (Ben-Shlomo e col., 2003).
Alvos para ação dos mensageiros químicos

Os mensageiros químicos intercelulares devem atingir células alvo, que possam
interpretar os sinais. Para que as células interpretem esses sinais devem apresentar
elementos que reconheçam esses mensageiros, os chamados receptores, que mudam sua
conformação quando os mensageiros se ligam a eles. A ligação mensageiro-receptor inicia
uma cascata de sinalização que irá evocar a participação de diversos segundos
mensageiros, ativando múltiplas vias de sinalização. Cada classe de receptor ativa
segundos mensageiros específicos, os quais amplificam o sinal e desencadeiam respostas
intracelulares específicas para o sinal inicial. Os princípios moleculares nos quais a
transdução do sinal se baseia são representados por associações específicas de proteínas
e sua fosforilação ou desfosforilação, onde a fosforilação de alvos protéicos leva geralmente
a mudanças imediatas em sua configuração e atividade. Deste modo, o balanço entre
fosforilação e desfosforilação é determinante para a transdução do sinal intracelular. Ainda,
os receptores podem evocar tipos diferentes de efeitos celulares. Alguns deles são muito
rápidos em escala de milissegundos, enquanto os efeitos produzidos por hormônios
esteróides, por exemplo, ocorrem dentro de algumas horas ou dias (Fig. 1) (Rang e Dale,
2007).
Os mensageiros químicos extracelulares podem ser classificados de acordo com a
distância que percorrerão do local de sua síntese até a célula alvo, bem como o tipo de
inter-relação entre a célula produtora e a célula alvo. Os sinalizadores secretados pela
própria célula produtora e que atuam em células adjacentes próximas são chamados de
parácrinos, enquanto os sinalizadores que atuam na própria célula produtora são
conhecidos como autócrinos, além dos sinalizadores que são lançados na corrente
sanguínea, cuja célula alvo encontra-se distante, os quais são chamados de hormônios. Os
sinalizadores parácrinos produzidos por células nervosas são denominados
neurotransmissores, os quais são lançados na região entre neurônios, entre neurônios e
fibra muscular ou entre neurônios e glândula exócrina ou endócrina; essa região é
conhecida como fenda sináptica. Os ligantes podem ainda ser classificados quanto à sua
solubilidade, em hidrossolúveis e lipossolúveis. Os hidrossolúveis são incapazes de
atravessar a membrana celular, e dessa forma, devem ser reconhecidos por receptores
localizados na membrana. Já os compostos lipossolúveis apresentam alta afinidade química
pela membrana podendo, portanto, atravessar a membrana e atuar dentro das células,
chegando muitas vezes ao núcleo, dessa forma sendo reconhecidos por receptores
intracelulares (Isoldi e Castrucci, 2007).
Pág. 28 Julho/2010
Figura 1 – Relação receptor e tempo de ação. Adaptado de Rang e Dale, 2007
Interação molécula-receptor
Existe uma diferença importante entre agonistas e antagonistas. Agonistas e
antagonistas são poderosas ferramentas que permitem a caracterização de estruturas e
funções de subtipos de receptores (Squire e col, 2003). Os agonistas ativam os receptores,
enquanto os antagonistas podem se combinar com os mesmos sítios, porém sem causar
ativação desse receptor, e dessa forma bloqueando o efeito dos agonistas. A ocupação de
um receptor por uma molécula de um ligante pode ou não resultar na ativação desse
receptor. A ativação do receptor ocorre através da ligação da molécula de tal modo que
desencadeie uma resposta tecidual. A ligação e ativação representam duas etapas distintas
da geração de uma resposta mediada por um receptor, que é iniciada por um agonista. A
tendência de um ligante se ligar aos receptores é dada através de sua afinidade. Os ligantes
com alta potência geralmente apresentam alta afinidade pelos receptores e,
consequentemente, ocupam uma porcentagem significativa dos receptores, mesmo em
baixas concentrações (Rang e Dale, 2007).
Tipos de receptores
Segundo a estrutura molecular e a natureza do mecanismo de transmissão, os
receptores são agrupados em quatro superfamílias, a saber: (1) superfamília tipo 1 -
receptores-canal (ou ionotrópicos), receptores de membrana que formam o próprio canal
Julho/2010 Pág. 29
iônico; (2) superfamília tipo 2 - receptores acoplados à proteína G (GPCRs ou 7-TM ou

metabotrópicos), receptores de membrana acoplados a sistemas efetores intracelulares por
meio de proteína G; (3) superfamília tipo 3 – receptores enzimáticos, receptores de
membrana com domínio intracelular de proteína quinase (em geral, tirosina quinase,
fosfatase e outras) e (4) superfamília tipo 4 - receptores reguladores da transcrição de genes
(ou receptores nucleares ou receptores intracelulares), receptores solúveis no citosol (Fig.
2).
Figura 2 - Tipos de famílias de receptores
Superfamília tipo 1: receptores-canal

Os íons são incapazes de penetrar na bicamada lipídica da membrana celular, e só
podem atravessá-la com a ajuda de proteínas transmembrânicas na forma de canais ou
transportadoras. Os receptores do tipo canal são compostos por 4 ou 5 subunidades (α, β, γ,
δ) combinadas para formar um canal iônico através da membrana (Fig. 3). Cada subunidade
consiste de 4 segmentos transmembrana (TM) referidos como TM1-TM4. Na ausência de
um neurotransmissor, esses canais iônicos permanecem em estado fechado e são
impermeáveis aos íons. A ligação do neurotransmissor induz uma rápida mudança
conformacional que abre o canal, permitindo o fluxo dos íons (Fig. 4). As mudanças na
corrente da membrana resultante da ligação do ligante ao canal ionotrópico são geralmente
mensuradas numa escala de milissegundos. O fluxo iônico cessa quando o transmissor se
dissocia do receptor ou quando o receptor se torna dessensibilizado (Squire e col., 2003). O
primeiro receptor dessa família a ser clonado, foi o receptor nicotínico da acetilcolina
(nAchR), o qual é usado como modelo para o estudo da estrutura dos receptores
ionotrópicos. Sua estrutura pentamérica (2α, β, γ, δ) possui dois sítios de ligação à
acetilcolina, cada um na interface das duas subunidades α. Para que o receptor seja
Pág. 30 Julho/2010
ativado, duas moléculas de acetilcolina devem se ligar a esses sítios e, dessa forma, o canal
se abre quase que instantaneamente, permitindo a passagem de íons (Rang e Dale, 2007).
Os canais controlados por voltagem abrem-se quando a membrana celular é
despolarizada. Essa abertura (ativação) induzida pela despolarização da membrana é de
curta duração, mesmo quando a despolarização é mantida. Os canais mais importantes
nesse grupo são os canais seletivos para sódio, potássio e cálcio.

Figura 3 – Estrutura do receptor canal. Figura 4 - Esquema de abertura do canal.

Retirado de Squire e col., 2003. Retirado de Squire e col., 2003.
Os canais controlados por ligantes são ativados através da ligação de um

mensageiro químico extracelular a um sítio na molécula do canal. Os receptores desse tipo
controlam os eventos sinápticos mais rápidos do sistema nervoso. A maior parte dos
neurotransmissores excitatórios, como acetilcolina, glutamato, ácido gama-amino butírico
(GABA) e ATP agem dessa maneira e causam aumento na permeabilidade ao Na+ e K+.
Alguns canais controlados por ligantes respondem a sinais intracelulares e não
extracelulares, tais como: (i) canais de potássio ativados por cálcio, se abrem,
hiperpolarizando a célula, quando ocorre um aumento da [Ca2+]i; (ii) canais de potássio
sensíveis a ATP, se abrem quando a concentração intracelular de ATP cai. Esses canais
são distintos daqueles que medeiam os efeitos excitatórios de ATP extracelular; (iii) existem
ainda outros canais que respondem a ligantes intracelulares, como canais de potássio
sensíveis a diacilglicerol, cujas funções ainda não estão bem esclarecidas. Dependendo do
íon para o qual o canal é seletivo a alteração no potencial de repouso da célula poderá atuar
de forma diferente, podendo levar à despolarização celular, como é o caso de alguns
subtipos de receptores de acetilcolina e glutamato, que são canais de sódio ou cálcio; ou
dificultando uma eventual resposta de despolarização a um estimulo excitatório, como é o
caso de GABA e glicina, que são canais de cloro (Squire e col., 2003).
Os receptores canais de glutamato são responsáveis pelo fenômeno de potenciação
de longo termo (LTP), plasticidade sináptica e neurodegeneração. O influxo de íons através
Julho/2010 Pág. 31
do canal aberto é conseqüência da liberação de glutamato do neurônio pré-sináptico e da

despolarização da membrana do neurônio pós-sináptico, essa mudança de voltagem da
membrana expele íons Mg2+ que estavam bloqueando o canal, fazendo com que este
permita o influxo de cálcio e a geração de oxido nítrico e/ou espécies reativas de oxigênio
(Kloda e col., 2007).
Superfamília tipo 2: receptores acoplados a proteínas G

Os receptores da família tipo 2 são de origem antiga, sendo os primeiros receptores
a emergirem entre os organismos unicelulares. O papel central desses receptores em
organismos multicelulares é refletido por suas divergentes estruturas e funções. A ligação do
mensageiro ao receptor acoplado a proteína G (GPCRs) induz uma mudança
conformacional no receptor, o qual recruta e ativa diferentes proteínas G, as quais
estimulam a geração de adenosina 3’,5’ monofosfato (AMPc), fosfoinositídeos, diacilglicerol e
outros segundos mensageiros. Em termo, esses segundos mensageiros disparam eventos
como ativação de cascatas cinéticas e fosforilação de fatores citosólicos e transcrição de
fatores nucleares (Brivanlou e Darnell, 2002). Os estímulos extracelulares que ativam os
GPCRs incluem luz, íons, nucleotídeos, lipídeos, esteróides, aminoácidos modificados,
peptídeos e hormônios glicoprotéicos (Ben-Shlomo e col., 2003)
Estrutura da proteína G
A interação de hormônios, neurotransmissores ou glicoproteínas com os receptores
7TM na superfície da célula induz uma mudança conformacional do receptor que ativa a
proteína G – composta das subunidades α, β, γ – no interior da célula. No estágio inativo
GDP liga-se à subunidade Gα. (Fig. 5). Quando a proteína G é ativada, o GDP é liberado, e
o GTP liga-se à subunidade Gα e assim ocorre a dissociação do complexo Gα-GTP do
complexo Gβγ. Dessa forma tanto Gα-GTP quanto Gβγ encontram-se livres para ativar seus
efetores, como por exemplo canais iônicos ou enzimas (Pierce e col., 2002). A duração do
sinal é determinada pela taxa de hidrólise do GTP da subunidade Gα e subseqüente
reassociação de Gα-GDP com Gβγ (Hamm, 1998). A cinética da ativação da proteína G
através dos GPCRs tem sido descrita recentemente. Baseado em observações de que a
atividade GTPásica de proteínas G isoladas é mais baixa do que sob condições fisiológicas,
postulou-se a existência de mecanismos que aceleram a atividade GTPásica. Vários
efetores tem sido apontados como promotores da atividade GTPásica da subunidade α da
proteína G. Recentemente, uma família de proteínas chamadas “reguladoras da sinalização
da proteína G” (proteína RGS), capaz de aumentar a atividade GTPásica da subunidade α
da proteína G foi identificada (Wettschureck e Offermanns, 2005).
Pág. 32 Julho/2010
Classicamente, as proteínas G são divididas em quatro famílias baseadas na

similaridade de suas subunidades α: Gαi/0, Gαs, Gαq e Gα12/13 (fig. 7) (Cabrera-Vera e col.,
2003; Pierce e col., 2002). Cada família consiste de vários membros que frequentemente
mostram padrões de expressão específicos. Membros de uma família são estruturalmente
similares e frequentemente compartilham algumas de suas propriedades funcionais.
Figura 5 - Mecanismo de ação do receptor acoplado a proteína G. A interação do ligante exógeno

com o receptor de membrana promove a ativação do receptor e sua interação com a proteína G
intracelular. O acoplamento do receptor a proteína G faz com que ocorra uma mudança de GDP para
GTP na subunidade Gα. Gα-GTP então se dissocia do complexo Gβγ e do receptor. Ambas
subunidades estão livres para modular a atividade de uma grande variedade de efetores
intracelulares. O sinal é finalizado quando a γ-fosfatase do GTP é removida pela intrínseca atividade
GTPásica da subunidade Gα, levando a ligação do GDP a Gα. A reassociação de GDP com Gα
completa o ciclo.
Após ativação do receptor acoplado a proteína Gs, adenililciclase (AC) é ativada pela
subunidade α da proteína Gs passando a sintetizar AMPc, como representado na figura 6
(Isoldi e Castrucci, 2008). Existem 9 tipos de adenililciclases conhecidas em mamíferos, as
quais podem ser ativadas pelo complexo cálcio/calmodulina, outras inibidas por baixas
concentrações de cálcio ou por calcineurina (uma proteína fosfatase dependente de ca2+) ou
pela fosforilação de proteínas quinases II dependentes de Ca2+/calmodulina (CAMK II). Em
alguns casos, a subunidade α da proteína G inibe a adenililciclase (Gi), promovendo assim
uma diminuição dos níveis de AMPc, ou pode ainda ligar-se a canais modulando-os e dessa
forma não exercendo função reguladora sobre adenililciclase (Schwartz, 2001). Para estudar
as funções das proteínas Gi tem sido muito utilizada uma toxina extraída do Clostridium
botulinum (toxina de pertússis ou PTX) a qual é capaz de ribosilar ADP dessas proteínas
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tornando-as incapaz de interagir com o receptor. Dessa forma o tratamento com PTX resulta
em um desacoplamento do receptor com a proteína Gi (Wettschureck e Offermanns, 2005).
Figura 6 – Representação esquemática da via de sinalização intracelular envolvendo

adenililciclase.
Depois de formado, o AMPc liga-se a proteínas quinases dependentes de AMPc
(PKAs). Na sua forma inativa, a PKA é formada por duas subunidades reguladoras (R), e
duas subunidades catalíticas (C). Ativação da PKA ocorre através da ligação do AMPc nas
subunidades (R), e subsequente liberação da subunidade (C). Após ativação, PKA pode
atuar em diferentes substratos e desencadear uma variedade de respostas. Na ausência de
AMPc, a subunidade (C) volta a inibir a PKA pela reassociação com a subunidade (R). As
subunidades C livres são capazes de fosforilar o fator de transcrição CREB, levando a célula
a um aumento da transcrição de genes específicos. CREB liga-se a regiões do gene que
contêm um elemento de resposta ao AMPc (CRE) e sob fosforilação inicia a cascata de
expressão de genes (Schwartz, 2001).
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Figura 7 - Representação esquemática da cascata de sinalização evocada por proteínas G. As

setas em vermelho representam inibição de um componente da via, e as setas em verde a ativação.
A subunidade Giα inibe adenililciclase, promovendo a diminuição de AMPc. A subunidade Gsα ao
contrario de Giα promove aumento do concentração de AMPc. A subunidade Gqα ativa a produção de
DAG e IP3, e dessa forma IP3 atua em receptores do reticulo promovendo liberação do cálcio.
A família da proteína Gq é uma das mais bem caracterizadas entre as proteínas G

(ver fig. 8). Quando a proteína Gq é estimulada, promove a ativação da enzima fosfolipase
Cβ (PLCβ). Uma vez ativada, a PLCβ promove a catálise do fosfolipídio de membrana 4,5-
bisfosfato de fosfatidilinositol, gerando 1,4,5-trisfosfato de inositol (IP3) e diacilglicerol
(DAG). IP3 difunde-se da membrana para o interior da célula, onde se ligará aos receptores
de IP3 (IP3R), que são canais de cálcio existentes na membrana do reticulo endoplasmático
ou sarcoplasmático. Essa ligação promove a abertura desses canais de cálcio e a
conseqüente liberação dos estoques desse íon para o citoplasma. Em muitos tipos
celulares, a liberação de cálcio dos estoques intracelulares induz a abertura de canais de
cálcio da membrana celular, promovendo assim um influxo de cálcio do meio extracelular
para o interior da célula. O DAG permanece na membrana podendo promover ativação da
proteína quinase C (PKC) desencadeando assim uma cascata de fosforilação, ou ainda,
podendo ser clivado, gerando ácido araquidônico, o qual dá inicio à via de síntese de
eicosanóides como as prostaglandinas (Isoldi e Castrucci, 2007).
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Figura 8 – Representação esquemática da via de sinalização intracelular envolvendo a

participação da fosfolipase C.
Existe ainda uma superfamília de proteínas G, referidas como proteínas G

monoméricas (são formadas somente pela subunidade α), ou Ras. Essas proteínas Ras
estão envolvidas em uma variedade de processos celulares, incluindo proliferação,
diferenciação, migração, maturação e apoptose. A ativação de Ras sob estimulação de
GPCRs e receptores de fatores de crescimento é regulada pela mudança do fator
nucleotídeo de guanina, o qual estimula uma mudança na atividade de GDP/GTP resultando
na ligação do GTP em seu estado ativo à proteína (Schaafsma e col., 2008). As proteínas
Ras processam sinais vindos de receptores tirosina quinase e GPCRs, para o interior das
células, afetando a transcrição gênica (Schenk e Snaar-Jakelska, 1999).
Superfamília do tipo 3: receptores enzimáticos

São encontrados quatro receptores com diferentes domínios enzimáticos: tirosina
quinase, serina/treonina quinase, tirosina fosfatase, guanililciclase. Os receptores do tipo
serina/treonina apresentam como ligante o fator de crescimento transformante beta (TGFβ).
Esses receptores se apresentam em dois sub-tipos, os receptores do tipo I e II, os quais são
classificados de acordo com suas propriedades estruturais e funcionais. O domínio
citoplasmático do receptor tipo II é constitutivamente ativo e este fosforila o receptor tipo I
em resíduos serina e treonina em resposta à ligação do mensageiro extracelular. O receptor
tipo I ativado tradicionalmente fosforila proteínas SMAD citoplasmáticas, dessa forma
ativando a transdução do sinal para o núcleo. As proteínas SMAD ligam-se ao DNA
reprimindo ou estimulando a transcrição de genes e, desse modo, essa cascata de
Pág. 36 Julho/2010
sinalização de TGF-β pode representar um papel chave na patogênese de várias doenças

incluindo o câncer (Wright e col., 2009).
As proteínas tirosina quinase foram identificadas em 1980 como as maiores
representantes no câncer resultando na investigação desses receptores como alvos
terapêuticos. (Levitzki, 2003). Receptores tirosina quinase (RTK) são glicoproteínas
transmembrânicas que são ativados pela ligação de ligantes cognatos e transduzem o sinal
extracelular para o citoplasma através da fosforilação do resíduo de tirosina no próprio
receptor (autofosforilação) (Hubbard e Till, 2000). Os RTKs ativam numerosas vias de
sinalização dentro da célula, levando a proliferação, diferenciação, migração, ou mudanças
metabólicas. A família dos RTKs inclui os receptores de insulina e muitos fatores de
crescimento, tais como fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento de
fibroblasto (FGF), fator de crescimento derivado de plaqueta (PDGF), fator de crescimento
endotelial vascular (VEGF). Os RTKs consistem de uma porção extracelular que se liga aos
ligantes polipeptídicos, uma hélice transmembrânica e uma porção citoplasmática que
possui tirosina quinase com atividade catalítica (Fig. 9). A grande maioria de RTKs é
monomérica e dimeriza-se na presença do ligante. A ativação do receptor pelo ligante leva à
ativação da porção quinásica do receptor, resultando em autofosforilação e fosforilação de
substratos SHC, o que culmina com a ativação da proteína G monomérica Ras. Nas vias de
sinalização de receptores monoméricos, a cascata de MAP quinases (MAPK) é recrutada,
resultando na ativação de fatores de transcrição como CREB, c-Fos e Elk-1, envolvidos na
transcrição de genes relacionados à proliferação celular. Em adição aos RTKs, existe uma
ampla família de tirosina quinases citosólicas não receptoras (NRTKs), as quais incluem Src,
Janus Kinases (Jaks), Ab1 (Fig 10). Os NRTKs são componentes das cascatas de
sinalização disparadas por RTKs e por outros receptores de superfície como receptores
acoplados a proteína G e receptores do sistema imunológico (Hubbard e Till, 2000).
Em contrapartida, os receptores tirosina fosfatase, quando ativados por ligantes,
desfosforilam proteínas celulares. Esses receptores têm sido implicados na angiogênese e
na adesão celular (Isoldi e Castrucci, 2007).
Os receptores guanililciclases (GC) são ativados por um hormônio peptídico
denominado peptídeo atrial natriurético (ANP), o qual possui um importante papel na
regulação da homeostase cardiovascular, através da manutenção da pressão arterial. As
ações dos peptídeos natriuréticos são mediadas por sua ligação a três tipos de receptores.
Os receptores NPR A e B (receptor peptídico natriurético A e B) são guanililciclases que
aumentam a concentração intracelular de GMPc e ativam proteínas quinases dependentes
de GMPc. A ativação dos receptores NPRC resulta na inibição da atividade da adenililciclase
(Woodard e Rosado, 2008)
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Figura 9 – Receptores tirosina quinase. Via de sinalização envolvendo a participação das MAP
quinase.
Figura 10 – Via de sinalização dos receptores tirosina quinase, envolvendo a participação das
tirosinas quinases citosólicas.
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Superfamília do tipo 4: receptores reguladores da transcrição de genes
A família de receptores reguladores da transcrição de genes ou receptores nucleares

(NR) compreende fatores de transcrição de uma grande família de genes, incluindo
receptores de hormônio da tireóide (TH), esteróides, retinóides, vitamina D, colesterol entre
outros. Os receptores nucleares são bem difundidos e representam importante papel no
desenvolvimento, metabolismo, homeostase e doenças (Togash e col., 2005). A ativação
dos receptores nucleares ocorre através de ligantes lipofílicos, fosforilação e interação com
outras proteínas. Estes podem ativar ou reprimir genes alvos pela ligação direta ao elemento
responsivo ao DNA como homo- ou hetero-dímeros ou pela ligação de outras classes de
fatores de transcrição ligados ao DNA. Essa atividade tem sido relacionada à formação de
complexos com moléculas que parecem servir como co-ativadoras ou co-repressoras,
causando modificação local da estrutura da cromatina para regular a expressão desses
genes alvo (Hart, 2002).
Os receptores nucleares representam uma classe evolutiva altamente conservada de
fatores de transcrição em mamíferos, e podem ser classificados de acordo com o tipo de
hormônio que se liga a eles. Desse modo os receptores são divididos em: esteróides
(glicocorticóides, mineralocorticóides, andrógenos e estrógeno), derivados de esteróides
(vitamina D3), não esteróides (hormônios da tireóide, retinóides, prostaglandinas) e
receptores para os quais não foi encontrado ainda um ligante específico (receptores órfãos).
A diferente classificação é baseada no modo de ligação ao elemento responsivo ao DNA, e
assim são classificados dentro de quatro grupos, dependendo de sua habilidade para se
ligar à sequência de DNA e dimerizar: (1) os receptores esteróides são associados com a
proteína de choque térmico (“shock heat” hsps). A ligação do hormônio leva a mudança
conformacional, dissociação da proteína hsps e ligação a sequências do DNA como homo-
dímeros. Deste modo o papel do hormônio é induzir a ligação ao DNA; (2) a segunda classe
representa os receptores tais como hormônios da tireóide, retinóides, prostaglandinas e
vitamina D3. Membros dessa classe são ligados ao DNA na ausência do hormônio. A
ligação do ligante ao receptor leva a mudança conformacional do domínio de ligação ao
hormônio e conseqüente ativação transcricional. Os receptores dessa classe são
predominantemente ligados ao DNA como hetero-dímeros; (3) os receptores órfãos que
podem se ligar ao DNA como formas monoméricas; (4) ou como dímeros (Tenbaum e
Baniahmad, 1997).
Em geral, os receptores nucleares possuem em comum três domínios: um variável
domínio amino-terminal de ligação ao promotor, um domínio de ligação ao DNA altamente
conservado (DBD), e um domínio c-terminal menos conservado, de ligação ao ligante (LBD),
como apresentado na figura 11 (Ribeiro e col., 1995). O motivo de ligação ao DNA é
Julho/2010 Pág. 39
essencial para o reconhecimento do elemento responsivo pelo receptor. O motivo de ligação

consiste de 66 aminoácidos contendo dois motivos em dedos de zinco. Quatro resíduos de
cisteína altamente conservados são requeridos para coordenar a ligação dos íons Zn2+
(Ribeiro e col., 1995; Tenbaum e Baniahmad, 1997). O LBD confere especificidade na
ligação ao ligante e possui um número de funções reguladas por essa ligação. Essas
funções incluem a liberação do receptor do complexo hsps, translocação para o núcleo,
homodimerização, heterodimerizção e ativação transcricional (Ribeiro e col., 1995).
Figura 11 – Estrutura dos receptores nucleares. O esquema apresenta os diferentes domínios dos
receptores nucleares. Modificado de Rang e Dale, 2007.
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Fisiologia Celular do Plasmodium durante a fase assexuada
Laura Nogueira da Cruz

Laboratório de Fisiologia Celular e Molecular do Plasmodium
[email protected]
Malária
Malária é uma das mais importantes infecções por protozoários no mundo causando
morte de mais de 2 milhões de pessoas anualmente (Who, 2005). A Africa subsaariana
concentra 90% dos casos, no entanto mais de 40% da população mundial está sob risco da
doença, principalmente os habitantes das regiões tropicais e subtropicais do globo (Fig. 1)
onde ocorre a distribuição geográfica do mosquito do gênero Anopheles (A. darling, no Brasil
e A. gambiae, na África), que transmite as espécies infectantes humanas P. falciparum, P.
malariae, P. vivax e P. ovale, sendo as três primeiras espécies encontradas no Brasil.
P. falciparum é o parasita que mais causa morte por malária no mundo ocorrendo em
maior incidência na África. No Brasil, a maioria dos casos é de P. vivax (Who, 2005).
É importante lembrar que a malária pode ser muito mais antiga que a humanidade e
existem quase 100 espécies de plasmódios, 22 dos quais infectam macacos e 50 parasitam
aves ou répteis (que tiveram seu apogeu nos períodos Permiano e Triássico, quando os
insetos hematófagos já existiam).
Plasmódios de roedores e aves são freqüentemente utilizados, no laboratório, como
modelos experimentais. Entender a complexa biologia do parasita é fundamental para o
desenho de novas e mais eficientes drogas e desenvolver novas estratégias para combater
a epidemia.
Figura 1: Potencial mundial de transmissão de malária.

(Fonte : http://en.wikipedia.org/wiki/File:Malaria_geographic_distribution_2003.png)
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Combate à malária
Nos últimos cinqüenta anos muitas pesquisas foram realizadas fomentando o
desenvolvimento de drogas sintéticas antimalaricas. A mais importante dessas foi a
cloroquina que possui baixa toxicidade, baixo custo e necessidade de ser aplicada apenas
uma vez por semana. Atualmente, no entanto, um grande problema no combate à malária
deve-se ao aumento da resistência dos parasitas a cloroquina, derivados de cloroquina e a
grande maioria de antimaláricos introduzidos (Olliaro e col., 1996). Para inibir o
aparecimento de resistência a WHO recomenda que o tratamento utilize pelo menos o
combinado de 2 anti-maláricos.
A incidência da malária, no Brasil, por exemplo, aumentou cerca de 10 vezes nos
últimos 30 anos, sendo que hoje 99% desses casos ocorrem na Amazônia Legal (FNS,
2002), área endêmica do país, composta pelos estados do Acre, Amapá, Amazonas,
Maranhão, Mato Grosso, Pará, Rondônia, Roraima e Tocantins. Nos Estados fora da
Amazônia Legal, o risco de transmissão local é pequeno ou inexistente e a quase totalidade
dos casos de malária registrada é importada da Amazônia Legal ou de outros países,
principalmente da África
Limitações da quimioterapia no controle da malária demonstram a necessidade de
novas drogas, preferencialmente contra novos alvos (McKerrow e col., 1993; Rosenthal,
1998), pois apesar de todas as pesquisas e informações adicionais o número de casos de
malária vem aumentando e uma vacina eficiente provavelmente não estará disponível no
futuro próximo (Hoffman, 1996). Além disso, os esforços para controlar o mosquito
Anopheles tiveram pouco sucesso (Alonso, 1991).
Atualmente o que pode ser feito são medidas de profilaxias para pessoas que se
dirigem a áreas de maior transmissão. O regime profilático consiste em prescrição médica
dos medicamentos antimaláricos de acordo com as espécies de Plasmodium predominantes,
grau de risco da infecção da área de destino, perfil de resistência ás drogas e avaliação dos
efeitos colaterais associados ao uso das mesmas (Farias, 2005)
A quimioprofilaxia deve ser iniciada uma semana antes da viagem, para avaliação
dos efeitos colaterais, e prolongada por quatro semanas após a saída da área endêmica, a
fim de sustentar a ausência dos parasitas na corrente sangüínea, mesmo após a sua
transição pelo estágio hepático, período de incubação que pode levar á formação de formas
latentes do parasita, responsáveis por recaídas. Contudo, apesar das medidas preventivas,
febre no período de dois meses após o curso da quimioprofilaxia ainda pode ser originada
pela infecção. Outro propósito da profilaxia se estender por um tempo depois da visita a área
de risco é para evitar que se importe doença para a origem do viajante.
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Trabalhos recentes mostram que o controle com telas mosquiteiras impregnadas com
inseticida ajuda no combate da malaria. (Chouaibou e col., 2006). A malaria caiu na década
de 50 pelo esforço combinado da cloroquina e do DTT, que combatia o mosquito!
Ciclo de vida
O Plasmodium é um parasita eucarioto unicelular, de vida intracelular obrigatória, que
mede 1,6 X 1,0 uM e pertence ao filo Apicomplexa. Possui um ciclo de vida caracterizado
pela sucessão de várias formas especializadas de desenvolvimento
Em vertebrados, a infecção se inicia pela picada do mosquito Anopheles, fêmea, que
retira 3 a 4 microlitros de sangue, enquanto injeta saliva contendo alguns esporozoitos. Uma
vez na corrente sanguínea, os esporozoitos invadem os hepatócitos e se desenvolvem para
o estágio assexuado de merozoito. Durante este período a infecção é assintomática e cada
esporozoito forma 30,000 merozoitos. Estes são liberados diretamente na corrente
sangüínea e invadem os eritrócitos (Sturn e col., 2006). Na corrente sangüínea amadurecem
passando pelos estágios de anel, trofozoito e esquizonte. Por um processo ainda
desconhecido, alguns merozoitos não invadem os eritrócitos e se diferenciam em
gametócitos, a forma infectante do mosquito (Garcia, 2001).
Para o fechamento do ciclo, o mosquito – onde ocorre o ciclo sexual do parasita -
terá que picar o vertebrado que tem gametocitos presentes na circulação. Estes, após o
ciclo no mosquito formarão os esporozoitos que migrarão até a glândula salivar e serão
transmitidos ao hospedeiro vertebrado (Fig. 2).
Figura 2: Ciclo de vida da malária (Fonte: http://en.wikipedia.org/wiki/Malaria).
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O ciclo intraeritrocítico é, portanto, o responsável por toda manifestação clínica na

malária, sendo na ruptura do eritrócito infectado e conseqüente liberação do parasita para
infecção de novas células que ocorrem febre e tremedeira, típicas da doença (Hawking,
1970). Dependendo da espécie de parasita, estes sintomas ocorrem em intervalos distintos –
3 ou 4 dias para P. falciparum e P. vivax, respectivamente (Garcia, e col., 2001) (Tab. 1).
Função da melatonina
A transição do estágio intraeritrocítico, bem como o processo de invasão in vivo e a
produção de gametócitos são processos altamente sincronizados (Garcia, 2001) e na
maioria mamíferos estudados seguem ciclos múltiplos de 24h (Tab. 1)
Tabela 1- Período do ciclo intraeritrocítio de diversas

espécies de Plasmodium (Modificado de Garcia, e col., 2001).
Parasita Hospedeiro vertebrado Período do ciclo

intraeritrocítico
P. knowlesi primata 24h
P. cathemerium pássaro 24h
P. vinckei roedor 24h
P. chabaudi roedor 24h
P. berghei roedor 24h
P. yoelii roedor 18h
P. gallinaceum galinha 36h
P. falciparm homem 48h
P. vivax Homem 48h
P. cynomolgi Primata 48h
P. coatneyi Primata 48h
P. malariae Homem 72h
P. inui Pássaro 72h
P. brasilianum Primata 72h
No caso do desenvolvimento intraeritrocítico do Plasmodium, os processos de divisão

celular e expressão gênica específicas de cada estágio são de extrema importância. Foi
demonstrado por Hotta e col., (2000) que o hormônio melatonina é capaz de sincronizar o
desenvolvimento do Plasmodium in vivo e in vitro. Quando se mantém parasitas em cultura,
Pág. 44 Julho/2010
a sincronia é perdida, um dos fenômenos que sugeriram que o hospedeiro tem papel
fundamental no estabelecimento do ritmo. (Hotta e col., 2000).
A melatonina tem um largo espectro de atuação (vertebrados, plantas e protozoários)
podendo ser sintetizada em vários tecidos, porém sua síntese rítmica é confinada
primariamente à glândula pineal. Este hormônio é sintetizado a partir de serotonina, que está
presente em grande quantidade na glândula pineal.
É interessante observar ainda que os precursores da melatonina, que são devirados
do triptofano, têm o mesmo efeito da melatonina tanto no ciclo celular do Plasmodium quanto
na mobilização de Ca2+ de estoques intracelulares (Beraldo e col., 2005).
Hotta e col., (2000) consideram que a melatonina é capaz de ativar a cascata da
fosfolipase C que, por sua vez, ativa a via de inositol 1,4,5-triposfato (IP3) e libera Ca2+ do
retículo endoplasmático (RE), nos estágios trofozoitos do Plasmodium.
Homeostasia e sinalização por cálcio

Variações na concentração de cálcio intracelular exercem papel fundamental em
muitos processos biológicos de células eucarióticas, como organização do citoesqueleto,
divisão e diferenciação celular (Berridge, 2003).
As células eucarióticas possuem mecanismos para manter a homeostasia de Ca2+
estes incluem uma bomba de cálcio na membrana plasmática, no retículo endoplasmático
além de trocadores em organelas intracelulares e na membrana plasmática (Passos e
Garcia, 1997; Garcia e col., 1998).
Especificamente, para o parasita da malária foi demonstrado a existência de 2
compartimentos de Ca2+: um é o clássico retículo endoplasmatico (Passos and Garcia, 1997,
Varoti e col., 2003) e o outro é um compartimento ácido (Garcia e col., 1998, Varotti e col.,
2003).
Sabe-se que para Plasmodium falciparum o Ca2+ extracelular é indispensável no
processo de invasão do eritrócito pelo parasita e estudos fisiológicos mostram envolvimento
da sinalização de Ca2+ no processo de maturação do parasita. (Garcia, 1999, Gazarini e col.,
2003).
Como qualquer célula eucariótica, o citoplasma do eritrócito possui baixa
concentração de cálcio (menor que 100 nM ), sendo que o ambiente extracelular encontrado
pela maior parte das células eucarióticas situa-se ao redor de 1 mM. A ausência de Ca2+
extracelular é normalmente incompatível com as funções normais da célula e sua
sobrevivência.
Dentro deste contexto, nosso laboratório demonstrou que o parasita resolve o
problema de pouco Ca2+ no meio em que sobrevive, através da invaginação da membrana
citoplasmática do eritrócito, pois no momento da infecção forma o vacúolo parasitóforo (VP)
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e inverte a polaridade da Ca2+ ATPase da membrana (bombeando ativamente Ca2+ para o

interior do VP). Desta forma pode manter o ambiente de alta concentração de Ca2+
necessário ao desenvolvimento do parasita (Gazarini e col., 2003).
Enzimas proteolíticas
Enzimas proteolíticas possuem um importante papel no ciclo de vida de todos os
protozoários medicamente importantes como leshmania, toxoplasma, giardia e plasmodium
(Rosenthal,1999).
Várias proteases de protozoários foram identificadas e caracterizadas sendo
utilizadas pelos protozoários em diferentes funções tais como: invasão de células e tecidos
do hospedeiro, degradação de mediadores da resposta imune e hidrólise de proteínas para
suprir necessidades nutricionais do parasita (Rosenthal,1999).
As proteases podem ser classificadas em quatro classes (Neurath 1989; Barrett,
1994), sendo três delas (serine, cisteina e aspartil proteases), assim denominadas pela
existência de sítio de aminoácido chave e a metaloprotease , pela necessidade do íon
metálico para catálise.
Sabe-se ainda que para a invasão dos eritrócitos por merozoitos e ruptura pelos
esquizontes maduros, são necessárias proteases do parasita, pois durante estes eventos
proteínas do citoesqueleto do eritrócito precisam ser hidrolizadas e algumas proteínas do
parasita são proteolicamente processadas (Klemba, 2002).
Outra importante função das proteases inclui a degradação da hemoglobina que é
utilizada como uma fonte de amino ácido livre pelo parasita (Scheibel e Sherman, 1988).
O conteúdo da hemoglobina em eritrócitos infectados diminui 25-75% durante o ciclo
de vida do parasita eritrocítico (Ball e col., 1948; Groman, 1951; Roth e col., 1986), a
concentração de aminoácido livre é maior nos eritrócitos infectados do que nos não
infectados e a composição dos aminoácidos de eritrócitos infectados é semelhante à
composição de aminoácidos da hemoglobina.
Peptídeos fluorescente para determinar atividade de proteases

Recentemente foram desenvolvidos peptídeos sintéticos, com seqüências específicas
de aminoácido capazes de penetrar na célula e emitir fluorescência quando clivado pela
protease (Fig. 3). Dependendo da especificidade da seqüência peptídica e das proteases
pode-se então determinar atividades e funções proteolíticas.
Em estudos realizados com P. chabaudi utilizou-se este quelante interno
fluorescente de peptídeos (IQF) e microscopia confocal para demonstrar-se que
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melatonina induz atividade das thiol protease em uma forma cálcio-dependente

(Farias et al, 2005).
Estas proteases estão localizadas predominantemente no citoplasma do
parasita e sua atividade pode também ser induzida por agentes que aumentam o
cálcio citosolico como tapsigardina (inibidor específico da Ca2+ ATPase do retículo
endoplasmático), nigericina (ionóforo K+/H+) e ionomicina (ionóforo Ca2+/H+) (Farias
et al, 2005).
Figura 3: Representação esquemática do mecanismo de funcionamento dos

substratos quelante interno fluorescente de peptídeos (IQF).(Modificado de Carmona
et al, 2009).
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RNAi: ouvindo a voz do silêncio
Maísa Costa
Laboratório de Neurotransmissão e Regulação da Pressão Arterial
[email protected]
Introdução
O termo “silenciamento gênico” refere-se a uma série de mecanismos por meio dos
quais a expressão de um ou mais genes é regulada negativamente. O silenciamento é
considerado uma modificação epigenética. Modificações epigenéticas na expressão gênica
são características herdáveis que não podem ser explicadas por alterações na seqüência de
DNA, e que podem resultar na repressão (silenciamento gênico) ou ativação (ativação
gênica) da expressão do gene (Vaucheret e col., 2001). Até o final da década de 1980,
somente modificações na estrutura da cromatina ou de proteínas eram classificadas como
epigenéticas (Lewin, 1998). Entretanto, durante a década de 1990, um grande número de
fenômenos de silenciamento gênico que ocorriam em nível transcricional e pós-
transcricional foram descritos em plantas, fungos, animais e protozoários, introduzindo o
conceito de silenciamento de RNA (RNA silencing) (Baulcombe, 2000; Matzke e col., 2001).
Logo após os primeiros estudos com plantas transgênicas resistentes a vírus (Lindbo
& Dougherty, 1992), percebeu-se que o silenciamento de RNA representava um sistema
ancestral de defesa contra vírus e retrotransposons (Lindbo e col., 1993b). Atualmente,
sabe-se que este constitui também um mecanismo eficiente de regulação gênica, que atua
principalmente no controle de genes envolvidos no desenvolvimento do organismo e na
manutenção da integridade do genoma (Denli & Hannon, 2003). O componente unificador
dos diferentes processos de silenciamento de RNA já estudados em diversos organismos é
o RNA de fita dupla (dsRNA). A presença desse tipo de molécula pode induzir a degradação
de RNAs mensageiros (mRNA) homólogos, um processo conhecido como silenciamento
gênico pós-transcricional (posttranscriptional gene silencing, PTGS) em plantas e RNA-
interferência (RNA interference, RNAi) em animais. Componentes da maquinaria de PTGS e
RNAi também estão envolvidos no processamento e funcionamento de microRNAs, uma
classe de pequenos RNAs com função regulatória, que foram originalmente identificados
como responsáveis pela repressão da tradução em Chaenorhabditis elegans (Hutvagner e
col., 2000). Descobertas recentes sugerem que o silenciamento de RNA está envolvido
em vários tipos de modificações genômicas e de cromatina, incluindo metilação do DNA
genômico (Wassenegger e col., 1994), formação de heterocromatina (Kennerdell e col.,
2002) e eliminação de DNA (Mochizuki e Gorovsky, 2004a). Estas descobertas indicam que
os mecanismos de silenciamento de RNA controlam a expressão a nível transcricional e
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pós-transcricional, e que a maquinaria de silenciamento pode operar nos compartimentos

nuclear e citoplasmático.
Apesar de algumas diferenças nos mecanismos, similaridades evidentes sugerem
que o silenciamento de RNA constitui um sistema conservado entre diferentes organismos.
A clonagem e caracterização de diversos genes que codificam componentes do sistema em
Arabidopsis thaliana, C. elegans, Drosophila melanogaster, Neurospora crassa,
Schizosaccharomyces pombe, Tetrahymena thermophila, camundongos e humanos,
apóiam essa hipótese (Denli & Hannon, 2003). Entretanto, o mecanismo apresenta
particularidades em cada um desses organismos, conforme verificado pela identificação de
componentes específicos ou que não estão presentes em todos eles.
Histórico
O fenômeno, atualmente denominado silenciamento de RNA, foi observado pela
primeira vez em plantas transgênicas por dois grupos independentes de pesquisadores
(Napoli e col., 1990; Van Der Krol e col., 1990). Estes pesquisadores tinham como objetivo
criar petúnias transgênicas, cujas flores apresentassem uma coloração mais intensa. A
estratégia escolhida consistia em superexpressar o gene que codifica a chalcone sintase
(CHS), uma enzima chave na biossíntese de antocianinas. Para isso foi introduzida uma
cópia extra do gene Chs sob controle do promotor 35S do Cauliflower mosaic virus (CaMV).
Entretanto, ao contrário do esperado, as diferentes linhagens transgênicas obtidas possuíam
padrões distintos de variegação floral, incluindo linhagens que apresentavam flores
totalmente brancas, ou seja, sem pigmento. A análise molecular das linhagens transgênicas
comprovou que a introdução da cópia extra havia efetivamente bloqueado a biossíntese de
antocianinas, inibindo, simultaneamente, a expressão do gene endógeno pré-existente e da
cópia introduzida. A inibição da pigmentação das flores foi diretamente correlacionada com
uma redução específica no acúmulo de mRNA do gene Chs. O fenômeno foi denominado
co-supressão, pois a introdução de um transgene levou ao silenciamento simultâneo do
próprio transgene e do gene endógeno homólogo (Napoli e col., 1990; Van Der Krol e col.,
1990). Fenômeno semelhante foi relatado no fungo N. crassa, no qual foi denominado
quelling (Cogoni e col., 1996; Romano & Macino, 1992), e em animais (Drosophila e C.
elegans), nos quais foi denominado RNAi (Fire e col., 1998).
Alguns anos após a descrição da co-supressão, um fenômeno semelhante foi
observado por pesquisadores que tentavam engenheirar plantas transgênicas resistentes a
vírus. Plantas de tabaco foram transformadas com o gene que codifica a proteína capsidial
do potyvírus Tobacco etch virus (TEV) (Goodwin e col., 1996; Lindbo e Dougherty, 1992;
Lindbo e col., 1993b) ou a replicase do potexvírus Potato X virus (PVX) (Mueller e col.,
1995). Em ambos os casos, esperava-se que o excesso de proteína viral afetaria a
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replicação do vírus, interrompendo o seu ciclo de infecção. A princípio, observou-se que

algumas linhagens transgênicas apresentavam-se resistentes e outras não. Curiosamente,
as linhagens resistentes eram aquelas cujas plantas não produziam, ou produziam em
pequena quantidade, os RNA mensageiros (mRNAs) e as proteínas virais, enquanto nas
linhagens suscetíveis as plantas expressavam grande quantidade de mRNA e proteína
transgênicos (Goodwin e col., 1996; Mueller e col., 1995). A análise da taxa de transcrição
dos transgenes em plantas resistentes e suscetíveis comprovou que a introdução dos
transgenes virais conferia resistência por meio do silenciamento gênico postranscricional de
seqüências homólogas (Mueller e col., 1995).
A replicação de vírus com genoma de RNA também pode disparar eficientemente o
mecanismo de silenciamento. A indução de PTGS por vírus foi confirmada com a
observação de que genes endógenos ou transgenes eram silenciados após a infecção com
vírus recombinantes contendo parte da seqüência do gene ou transgene. O mecanismo de
indução de silenciamento por meio da replicação de vírus foi denominado virus-induced
gene silencing (VIGS) (Kjemtrup e col., 1998; Kumagai e col., 1995; Ratcliff e col., 2001;
Ruiz e col., 1998).
A primeira evidência direta de que dsRNA pode levar ao silenciamento foi obtida em
C. elegans. Utilizando a técnica de expressão de moléculas anti-senso para inibir a
expressão gênica, foi demonstrado que moléculas com polaridade senso eram tão eficientes
para a inibição quanto moléculas com polaridade anti-senso (Guo & Kemphues, 1995). O
paradoxo foi resolvido quando se demonstrou que o dsRNA é o indutor de silenciamento, e
que o silenciamento nos experimentos com moléculas senso fita simples era devido à
presença de uma pequena quantidade de dsRNA contaminante nas preparações in vitro de
RNA fita simples (Fire e col., 1998; Montgomery e Fire, 1998).
A especificidade do mecanismo de silenciamento de RNA foi explicada com a
identificação de pequenos RNAs de 21-25 nucleotídeos (nt), de orientação senso e anti-
senso, que apresentavam homologia com o RNA silenciado e que estão associados ao
processo (Hamilton e Baulcombe, 1999).
Esses pequenos RNAs, atualmente denominados small interfering RNAs (siRNAs),
foram primeiramente observados em plantas, sob diferentes sistemas de indução de
silenciamento (introdução de um transgene com homologia a um gene endógeno, introdução
de um transgene sem homologia com gene endógeno, e VIGS) (Hamilton e Baulcombe,
1999). Além de explicar a especificidade do sistema, o acúmulo de siRNAs em ambas as
orientações sugeriu que a formação de dsRNA ocorre antes da degradação do mRNA.
Estudos adicionais em Drosophila demonstraram que os siRNAs são resultado da clivagem
de dsRNA injetado na célula, e que servem como “guia” para direcionar a degradação de
mRNAs homólogos (Bernstein e col., 2001; Zamore e col., 2000). Oligonucleotídeos
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sintéticos de 21 a 25 nt foram suficientes para induzir RNAi in vitro (Elbashir e col., 2001a) e
in vivo (Elbashir e col., 2001b), na ausência de dsRNA.
A geração dos siRNAs a partir de dsRNA foi elucidada em trabalhos com
Drosophila, onde uma ribonuclease do tipo RNAse III (endonuclease com afinidade por
dsRNA) foi parcialmente purificada em associação a fragmentos de RNA de
aproximadamente 25 nt, cuja seqüência correspondia à de dsRNA de indivíduos nos quais
RNAi encontrava-se ativo (Hammond e col., 2000). Essa RNAse III, denominada “Dicer”,
produz siRNAs a partir de moléculas relativamente curtas de dsRNA (aprox. 250 nt) em um
processo dependente de ATP, e os siRNAs servem como guia para a degradação de
mRNAs homólogos em um complexo ribonucleoprotéico denominado RISC (RNA induced
silencing complex) (Bernstein e col., 2001; Hammond e col., 2000). A enzima Dicer é
conservada evolutivamente, com homólogos presentes em fungos, plantas e animais
superiores. A conservação funcional desta família de proteínas e seu requerimento para
RNAi veio com a demonstração de que Dicer de humanos também cliva dsRNAs em siRNAs
(Bernstein e col., 2001) e que mutantes de C. elegans em ortólogos a Dicer (DCR-1) não
ativam o sistema de RNAi induzido por dsRNA (Grishok e col., 2001; Ketting e col., 2001;
Knight e Bass, 2001).
A caracterização do complexo RISC foi iniciada em Drosophila com a identificação
da proteína AGO2, pertencente à família de proteínas Argonauta (Hammond e col., 2001).
AGO2 foi co-purificada com o RISC e co-imunoprecipitada com Dicer. Estudos
subseqüentes demonstraram que proteínas Argonauta também são componentes do RISC
em mamíferos, fungos, nematóides, protozoários e plantas (Carmell e Hannon, 2004;
Martinez e col., 2002). Recentemente, foi demonstrado que AGO2 de humanos possui
atividade de RNase III, consistindo provavelmente na proteína Slicer, que media a clivagem
do mRNA alvo após sua associação ao siRNA no complexo RISC (Liu e col., 2004; Meister
e col., 2004; Okamura e col., 2004). A existência de um fator difusível dominante envolvido
na sinalização sistêmica do silenciamento foi demonstrada inicialmente em N. crassa
(Cogoni e col., 1996). Heterocárions contendo núcleos apresentando genes silenciados e
não silenciados exibiam o fenótipo silenciado. Analogamente, em C. elegans, RNAi pode
ser disparado em todo o organismo injetando-se dsRNA na cavidade bucal ou por meio da
ingestão de bactérias expressando dsRNA (Timmons e col., 2001). Este fator é dominante,
pois em cruzamentos entre indivíduos silenciados ou não, toda a progênie é silenciada
(Grishok e col., 2001). Em plantas, PTGS foi transmitido com 100 % de eficiência a partir de
porta-enxertos silenciados a enxertos não silenciados contendo o transgene homólogo, mas
não a enxertos que não possuíam o transgene homólogo, indicando que o sinal é específico
em termos de seqüência (Palauqui e col., 1997). A natureza deste sinal sistêmico ainda não
está totalmente esclarecida. Inicialmente foi proposto que, devido à especificidade de
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seqüência, este fator seria pelo menos em parte, um RNA (Vaucheret e Fagard, 2001).
Recentemente, a análise bioquímica de extrato de floema de abóbora levou à caracterização
de uma proteína que se liga seletivamente a pequenos RNAs de fita simples (Cucurbita
maxima phloem small RNA binding protein 1 - CmPSRP1). Estudos de microinjeção
forneceram evidências de que CmPRSP1 pode mediar o movimento de pequenos RNAs de
25 nt fita simples, mas não de moléculas de RNA fita dupla, apoiando a hipótese de que o
sinal sistêmico contém uma proteína de ligação a pequenos RNAs (mas não
necessariamente siRNAs) (Yoo e col., 2004).
Evidências sobre o envolvimento da maquinaria de RNAi/PTGS no desenvolvimento
de diferentes organismos vieram com a descoberta de uma nova classe de pequenos RNAs,
os micro RNAs (miRNAs). Inicialmente, foi demonstrado que o gene Lin-4, conhecido por
controlar o tempo de desenvolvimento do estágio larval de C. elegans, não codificava
nenhuma proteína, e sim um par de pequenos RNAs, um com aproximadamente 22 nt e o
outro com 16 nt (Lee e col., 1993). Estes pequenos RNAs eram complementares a várias
regiões da região 3’ não-traduzida (3’NTR) do gene Lin-14, propondo-se que eles mediam a
repressão de Lin-14 por pareamento na região 3’NTR, inibindo o processo de tradução. Sete
anos depois da descoberta de Lin-4, foi descoberto um segundo gene, Let-7, que também
codifica um pequeno RNA de 22 nt envolvido no desenvolvimento de C. elegans (Reinhart e
col., 2000; Slack e col., 2000). Devido ao papel de ambos no controle do desenvolvimento,
foram denominados de small temporal RNAs (stRNAs) (Pasquinelli e col., 2000). Pouco
tempo depois foram clonados diversos genes que codificam pequenos RNAs em
Drosophila, C. elegans, Arabidopsis e humanos (Lagos- Quintana e col., 2001; Lau e col.,
2001; Lee e Ambros, 2001; Llave e col., 2002b). Os produtos destes genes eram
estruturalmente semelhantes aos stRNAs lin-4 e let-7: possuíam aproximadamente 22 nt e
eram potencialmente processados por Dicer a partir de um precursor com capacidade de
adquirir estrutura secundária em forma de grampo. Entretanto, em plantas, diferente dos
stRNAs lin-4 e let-7, eles não interferem com o processo de tradução. Nos casos em que o
alvo desses pequenos RNAs já foi identificado, comprovou-se que ocorre pareamento entre
o pequeno RNA e a região codificadora do mRNA alvo, e que esse pareamento gera uma
região de dsRNA que é clivada pelo complexo RISC (Grishok e col., 2001). O termo
“microRNA” (miRNA) foi introduzido para se referir a todos os pequenos RNAs originados a
partir de um transcrito endógeno processados por uma RNase III tipo Dicer (Hutvagner e
col., 2001). Atualmente, acredita-se que os miRNAs possuem papel fundamental na
regulação gênica pós-transcricional, com papel em processos como a proliferação celular,
apoptose, sinalização e diferenciação. A primeira evidência de que dsRNA pode induzir
alterações na cromatina foi a observação de que a infecção de plantas por viróides levava à
metilação de seqüências endógenas que possuíam homologia com o genoma do viróide
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(Wassenegger e col., 1994). A esta observação seguiu-se a descoberta de que dsRNA

apresentando seqüências homólogas a regiões promotoras era capaz de induzir
silenciamento gênico, neste caso em nível transcricional, por meio da metilação desta
seqüência (Mette e col., 2000). A ligação entre RNAi e remodelamento da cromatina veio
com a descoberta das proteínas polycomb, cromoproteínas relacionadas com a repressão
transcricional por favorecer a formação de heterocromatina, e com a formação de estruturas
fechadas de cromatina que criam padrões estáveis e herdáveis de expressão gênica
envolvidas em RNAi em C. elegans e Drosophila (Akhtar e col., 2000; Tabara e col., 1999).
Uma relação mais direta entre RNAi e silenciamento transcricional veio com trabalhos em S.
pombe, onde foi demonstrado que as proteínas homólogas a Dicer e Argonauta são
requeridas para o silenciamento de regiões centroméricas (Volpe e col., 2002). No início de
2004, foi purificado um complexo induzido por RNA requerido para o início da formação de
heterocromatina em S. pombe, denominado RITS (RNA-induced initiation of transcriptional
gene silencing). O complexo RITS inclui a proteína Argonauta AGO1 e pequenos RNAs
homólogos a regiões centroméricas processados pela Dicer. Sua existência sugere que
RNAi é um mecanismo que atua tanto em nível transcricional como pós-transcricional
(Verdel e col., 2004).
O mecanismo do silenciamento de RNA

Estudos genéticos demonstraram a existência de três vias de silenciamento de RNA
(Xie e col., 2004) (Fig. 1). Estudos com proteínas supressoras de silenciamento codificadas
por vírus demonstraram que estas vias podem se sobrepor em alguns pontos (Dunoyer e
col., 2002). A primeira via é a de silenciamento citoplasmático via siRNAs, que está
envolvida na degradação de RNA viral interferindo, ou mesmo bloqueando, o ciclo de
infecção. O dsRNA pode originar-se da transcrição de um gene endógeno, de um transgene,
ou de um intermediário da replicação de vírus com genoma de RNA. Em vírus com genoma
de DNA, dsRNA pode ser formado por meio do anelamento de transcritos sobrepostos
complementares (Baulcombe, 2004). A segunda via é a de silenciamento de mRNAs
endógenos via miRNAs. Os miRNAs regulam a expressão gênica negativamente por meio
do pareamento de bases específicos a mRNAs alvo, resultando na clivagem do mRNA ou
na repressão de sua tradução (Baulcombe, 2004). A terceira via é nuclear e está associada
à metilação de DNA e à formação de heterocromatina. Uma importante função para esta via
é provavelmente proteger o indivíduo de desorganizações genômicas causadas por
transposons (Baulcombe, 2004).
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Figura 1- Modelo para o silenciamento de RNA, indicando as três vias atualmente conhecidas.
A. Silenciamento pós-transcricional de genes endógenos ou transgenes via siRNas. Uma molécula de
dsRNA pode ser gerada a partir da transcrição de um transgene senso, de um transgene anti-senso
ou de um transgene em repetição invertida. O dsRNA é provavelmente transportado para o
citoplasma, onde é degradado pela enzima DCL-2 (em plantas), gerando os siRNAs. Os siRNAs são
incorporados ao complexo RISC, que irá degradar os mRNAs citoplasmáticos que possuam
identidade com a seqüência do siRNA. Os vírus ativam essa via produzindo dsRNA durante sua
replicação. B. Silenciamento pós-transcricional de genes endógenos via miRNAs. Os miRNAs são
transcritos a partir de genes que produzem um RNA precursor com estrutura secundária em forma de
grampo. A enzima DCL-1 (em plantas) processa o precursor no núcleo, gerando o miRNA. O miRNA
é transportado para o citoplasma e incorporado ao complexo RISC. C. Silenciamento transcricional
via siRNAs. Essa via é ativada por meio de dsRNA produzido após a transcrição de transposons ou
de seqüências endógenas arranjadas na forma de repetições diretas. O dsRNA é processado pela
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enzima DCL-3 (em plantas), e os siRNAs resultantes são incorporados ao complexo RITS. Esse
complexo atua no DNA genômico, resultando na metilação de seqüências homólogas ao siRNA ou na
formação de heterocromatina. (Modificado de Zerbini e col., 2005).
As três vias do silenciamento de RNA requerem grupos de proteínas relacionas em

plantas, fungos, animais e protozoários, sugerindo a existência de um mecanismo ancestral
comum a estes organismos e às três vias, embora com diferenças significativas (Zamore,
2002). Estudos genéticos e bioquímicos demonstraram que o silenciamento de RNA é um
processo gradual com pelo menos quatro etapas: iniciação, amplificação, sinalização
sistêmica e manutenção. Na etapa de iniciação, o dsRNA é processado em siRNAs com
aproximadamente 21-24 nt. Esta clivagem requer ATP e é mediada por Dicer em
Drosophila, DCR1 em C. elegans e DICER-LIKE 1 (DCL1) em Arabidopsis (Bernstein e
col., 2001; Knight e Bass, 2001; Schauer e col., 2002). Dicer possui um domínio de RNA
helicase na região amino-terminal, um domínio central PAZ (Piwi, Argonaute e Zwilli) de
ligação a RNA, dois domínios catalíticos, um ou dois domínios de ligação a dsRNA e um
domínio de função desconhecida (Carmell e Hannon, 2004).
O modelo para a clivagem de dsRNA mediada por Dicer propõe que a enzima atua
como um dímero antiparalelo, formando dois centros catalíticos que geram os siRNAs de 22
nt (Blaszczyk e col., 2001). S. pombe, C. elegans e vertebrados possuem somente uma
Dicer, envolvida nas vias de silenciamento mediadas por siRNAs e miRNAs (Bernstein e
col., 2001; Grishok e col., 2001; Hutvagner e col., 2001; Ketting e col., 2001; Knight e Bass,
2001; Volpe e col., 2002). Em Drosophila, foram identificados dois parálogos de Dicer que
atuam em pontos diferentes do mecanismo: Dicer1 é requerida para o processamento dos
precursores de miRNAs, enquanto Dicer2 está envolvida no processamento de dsRNAs
longos (Lee e col., 2004c).
Em Arabidopsis, a família gênica que codifica proteínas homólogas a Dicer possui
quatro membros. DCL1 processa os precursores de miRNAs (Park e col., 2002; Xie e col.,
2004). DCL2 é provavelmente requerida para a produção de siRNAs derivados de vírus,
embora o mutante dcl2 tenha apresentado somente uma redução transiente nos níveis de
siRNAs em plantas infectadas com o Turnip crinkle virus, dentre vários vírus testados (Xie e
col., 2004). Experimentos adicionais serão necessários para comprovar o papel de DCL2.
DCL3 produz siRNAs derivados de retroelementos e de transposons e é requerida para o
silenciamento de cromatina. Os siRNAs resultantes do processamento via DCL3 estão
associados a transposons e são um pouco mais longos (24 nt) do que os siRNAs resultantes
do processamento mediado por DCL1 (21 nt) (Hamilton e col., 2002; Xie e col., 2004). Até o
presente, ainda não foi estabelecida a função de DCL4.
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O siRNA de fita dupla derivado do processamento de dsRNA por Dicer se associa à

proteína R2D2, que contém domínios de ligação a dsRNA (Liu e col., 2003). A função de
R2D2 é discriminar qual das duas fitas do siRNA será incorporada ao RISC (Tomari e col.,
2004). A fita incorporada será aquela cujo terminal 5’ se anela com menor energia específica
ao terminal 3’ da fita complementar. O RISC direciona a clivagem seqüênciaespecífica de
mRNAs complementares (Hutvagner e Zamore, 2002). Todos os complexos RISC já
caracterizados possuem pelo menos uma proteína da família Argonauta (Hammond e col.,
2001; Hutvagner e Zamore, 2002; Martinez e col., 2002; Mourelatos e col., 2002; Verdel e
col., 2004). A família de proteínas Argonauta consiste no maior grupo de proteínas
especificamente envolvidas no silenciamento de RNA. O número de parálogos identificados
em diferentes organismos varia de um em S. pombe (Verdel e col., 2004) a mais de vinte
em C. elegans (Carmell e col., 2002; Grishok e col., 2001). Em Arabidopsis foram
identificados dez membros (Morel e col., 2002), em Drosophila foram identificados cinco
(Williams e Rubin, 2002) e em humanos oito membros (Sasaki e col., 2003). Em humanos
foi demonstrado que o domínio Piwi presente em Dicer media interações proteína-proteína
entre proteínas Argonauta e Dicer, o que poderia facilitar a incorporação dos siRNAs ao
RISC (Doi e col., 2003; Pham e col., 2004). Diversas evidências sugerem que as diferentes
proteínas Argonauta não são funcionalmente redundantes em um determinado organismo.
Análises genéticas em Arabidopsis demonstraram que AGO1 está envolvida nas vias de
silenciamento mediadas por siRNAs e miRNAs (Fagard e col., 2000; Kidner e Martienssen,
2003), enquanto AGO4 está envolvida em direcionar modificações na cromatina (Zilberman
e col., 2003).
O complexo RISC possui atividade catalítica que cliva especificamente o mRNA alvo
sem afetar o siRNA guia. A subunidade catalítica é denominada Slicer, e foi demonstrado
que mutações em AGO2 de mamíferos inibem a capacidade de clivagem do RISC,
indicando que AGO2 é a própria proteína Slicer (Liu e col., 2004).
Funções biológicas associadas ao silenciamento de RNA

A primeira função biológica proposta para o silenciamento de RNA foi estabelecida
em plantas durante estudos sobre a resistência derivada do patógeno. A observação de que
plantas recuperadas de uma primeira infecção viral tornavam-se resistentes à reinfecção
pelo mesmo vírus, devido à ativação e manutenção do silenciamento, levou à hipótese de
que o silenciamento de RNA seria uma resposta adaptativa de defesa contra vírus (Al-Kaff e
col., 1998; Covey e col., 1997). Evidências adicionais foram obtidas com a observação de
que plantas mutantes defectivas para o silenciamento são hipersensíveis à infecção por
alguns vírus (Morel e col., 2002), e pela descoberta de proteínas virais com capacidade de
suprimir o silenciamento em plantas (Anandalakshmi e col., 1998; Brigneti e col., 1998;
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Kasschau e Carrington, 1998) e animais (Li e col., 2002). Além da defesa contra infecção
por vírus, o silenciamento de RNA também está envolvido na proteção contra a transposição
de DNA. Em C. elegans e Chlamydomonas reinhardtii, indivíduos com mutações em
componentes da via de RNAi apresentam uma taxa mais elevada de transposição (Ketting e
col., 1999). Outro indicativo dessa função foi a detecção de siRNAs derivados de
retrotransposons em Trypanossoma brunei, indicando que o intermediário de dsRNA
produzido durante o ciclo de transposição pode ser processado pela enzima Dicer (Djikeng e
col., 2001). A função do silenciamento de RNA na defesa contra vírus e transposons levou à
sugestão de que o mecanismo funcionaria como um “sistema imune” do genoma. De forma
análoga ao sistema imunológico presente em aves e mamíferos, o silenciamento de RNA é
específico contra elementos exógenos, a resposta pode ser amplificada e desencadeia uma
resposta massiva contra um invasor (nesse caso, uma molécula de ácido nucléico)
(Plasterk, 2002).
Apesar da falta de evidências diretas, outra função proposta para o mecanismo é a
de remoção de RNAs aberrantes não funcionais do núcleo ou do conjunto de mRNAs
celulares (Tijsterman e col., 2002).
O papel do silenciamento de RNA foi consideravelmente ampliado com a descoberta
dos miRNAs, estabelecendo-se o envolvimento do mecanismo na regulação pós-
transcricional de genes endógenos. Atuando de forma análoga aos siRNAs, os miRNAs são
processados pela Dicer (Lee e col., 2003b) e estão associados ao RISC (Martinez e col.,
2002), anelando-se ao mRNA alvo e formando uma região de dsRNA, o que leva à
degradação do mRNA e conseqüente regulação negativa da expressão gênica. A maioria
dos miRNAs já identificados em plantas possui como alvo mRNAs que codificam fatores de
transcrição, particularmente aqueles envolvidos na regulação de genes que controlam o
desenvolvimento (Kasschau e col., 2003; Rhoades e col., 2002). Em animais, os mRNAs
controlados por miRNAs estão envolvidos em uma ampla gama de processos biológicos,
incluindo o controle da apoptose (Brennecke e col., 2003), o metabolismo de lipídeos (Xu e
col., 2003), a supressão de tumores e a resistência a estresses oxidativos (Lewis e col.,
2003).
Descobertas recentes sugerem que o silenciamento de RNA está envolvido na
formação da cromatina e/ou reorganização genômica, incluindo a formação de
heterocromatina em S. pombe e a eliminação de grandes fragmentos de DNA do genoma
de Tetrahymena thermophila (Hall e col., 2002; Taverna e col., 2002; Volpe e col., 2002).
Caráter sistêmico do silenciamento de RNA

Uma característica marcante do silenciamento de RNA é seu caráter sistêmico. As
primeiras suspeitas sobre a existência de um “fator difusível” vieram da observação de que
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heterocárions de N. crassa contendo núcleos silenciados e não silenciados apresentavam o

fenótipo silenciado (Cogoni e col., 1996). Estudos adicionais em plantas (Palauqui e col.,
1997), C. elegans (Fire e col., 1998) e Drosophila (Dzitoyeva e col., 2001) demonstraram
que o silenciamento não é restrito às células iniciais, sugerindo a existência de um sinal
sistêmico que é propagado a partir da célula onde o mecanismo foi inicialmente ativado e
que ativa o mecanismo em tecidos distantes.
A existência do sinal sistêmico foi claramente demonstrada em experimentos de
enxertia entre plantas transgênicas silenciadas e não silenciadas (Palauqui e col., 1997).
Nesses ensaios foram utilizados três transgenes distintos: os genes endógenos Nia e Nii,
que codificam respectivamente as enzimas nitrato redutase e nitrito redutase, e o gene
exógeno uidA, que codifica a enzima β-glucuronidase (GUS). O silenciamento foi sempre
transmitido de porta-enxertos silenciados para enxertos não silenciados que expressavam o
mesmo transgene, mas não para enxertos expressando transgenes distintos. Os mesmos
resultados foram obtidos nos três sistemas, indicando que o sinal sistêmico não é uma
característica específica de um gene em particular. Em todos os casos o silenciamento do
enxerto foi específico, ou seja, as seqüências silenciadas foram as mesmas que
encontravam-se silenciadas no porta-enxerto. Esta especificidade de seqüência sugere que
o sinal sistêmico possui um ácido nucléico em sua composição. A transmissão do
silenciamento também ocorreu quando porta-enxertos silenciados foram fisicamente
separados do enxerto por um segmento de caule de 30 cm de planta não-transformada,
indicando a propagação a longa distância do sinal.
A propagação sistêmica do silenciamento também foi demonstrada em ensaios onde
plantas transgênicas de Nicotiana benthamiana não silenciadas para GFP foram
silenciadas pela introdução de uma segunda cópia do transgene. Nestes experimentos,
folhas de N. benthamiana não silenciadas foram agroinoculadas (Voinnet e Baulcombe,
1997) ou bombardeadas com uma cópia extra de GFP (Voinnet e col., 1998). O
silenciamento foi inicialmente detectado nos tecidos inoculados/bombardeados, e
subseqüentemente nas folhas superiores (não inoculadas) da planta.
Observações semelhantes foram realizadas em C. elegans. A expressão de GFP foi
silenciada em células da linhagem germinativa e em células somáticas alimentando-se
indivíduos com dsRNA homólogo a GFP ou cultivando-se indivíduos em solução contendo
bactérias expressando dsRNA (Timmons e Fire, 1998; Timmons e col., 2001).
O mecanismo pelo qual o silenciamento é propagado a partir da célula inicialmente
silenciada ainda não é totalmente compreendido. Estudos em C. elegans identificaram um
gene requerido para o transporte do sinal sistêmico entre tecidos, porém totalmente
dispensável para iniciar ou manter o silenciamento. Este gene, denominado Sid1 (systemic
RNA interference deficient), codifica uma proteína transmembrana que se localiza na
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periferia celular (Winston e col., 2002). Para determinar a função da proteína SID1, os
autores utilizaram células S2 de Drosophila, capazes de ativar normalmente o mecanismo
de silenciamento, porém incapazes de propagar o silenciamento sistemicamente. Estas
células foram transformadas com dois plasmídeos, o primeiro codificando luciferase e o
segundo codificando formas funcionais ou não funcionais de SID1. As células foram imersas
em uma solução contendo diferentes concentrações de dsRNA homólogo a luciferase por 48
horas e a atividade de luciferase foi medida. As células que expressavam SID1 funcional
apresentaram uma taxa de silenciamento 105 vezes maior de as células transfectadas com
plasmídeos expressando SID1 não funcional, mesmo na presença de altas concentrações
de dsRNA. Esse resultado indica que SID1 facilita o transporte de dsRNA para o interior da
célula. Além disso, foi demonstrado que o transporte de dsRNA mediado por SID1 não é
sensível a baixas concentrações de ATP e baixas temperaturas, sugerindo que ocorre de
forma passiva (Feinberg e Hunter, 2003). O transporte passivo poderia ocorrer nos dois
sentidos, ou seja, SID1 pode ser responsável pela saída do sinal sistêmico da célula
inicialmente silenciada.
Em plantas, acredita-se que o sinal sistêmico seja capaz de se mover célula-a-célula
via plasmodesmas (Himber e col., 2003; Lucas e col., 2001) e a longa distância via floema
(Klahre e col., 2002; Mallory e col., 2003). Entretanto, não se sabe de que forma (ativa ou
passiva) o transporte ocorre.
Uma hipótese atrativa é a de que os siRNAs fazem parte do sinal sistêmico, pois eles
possuem comprimento longo o suficiente para garantir a especificidade, estão
consistentemente associados ao silenciamento e são pequenos o suficiente para
movimentar-se célula-a-célula via plasmodesmas, além de serem suficientes para induzir o
silenciamento de RNA em Drosophila, C. elegans, e em células de mamíferos (Mlotshwa e
col., 2002). Entretanto, existem duas evidências contrárias à hipótese de que os siRNAs
estejam associados ao sinal sistêmico. Estudos com HC-Pro, uma proteína viral supressora
de silenciamento, demonstraram que em plantas onde o silenciamento foi suprimido por HC-
Pro não ocorre acúmulo de siRNAs, entretanto a capacidade de produzir ou enviar o sinal
sistêmico não é afetada (Mallory e col., 2001). Além disso, em C. elegans, indivíduos
mutantes no gene Rde-4, essencial para que o silenciamento ocorra, produzem siRNAs de
forma deficiente, porém o silenciamento sistêmico não é afetado (Parrish e col., 2000).
Trabalhos de caracterização de siRNAs produzidos durante o silenciamento de RNA
demonstraram a existência de duas classes de siRNAs em plantas transgênicas silenciadas
para GFP: uma classe de siRNAs “longos” (24-26 nt) e outra de siRNAs “curtos” (21-22 nt).
Curiosamente, os siRNAs derivados de retroelementos endógenos são exclusivamente da
classe dos siRNAs longos. Os siRNAs longos são dispensáveis para a clivagem seqüência-
específica do mRNA alvo, entretanto estão correlacionados com o silenciamento sistêmico e
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com a metilação de DNA. Essas observações sugerem que os siRNAs curtos estão
envolvidos no processo de incorporação ao RISC e clivagem dos mRNAs alvos, enquanto
os siRNAs longos estariam envolvidos na sinalização sistêmica e na etapa nuclear de
metilação do DNA (Hamilton e col., 2002). Entretanto, essa hipótese ainda não foi
comprovada, e, dessa forma, a natureza precisa do sinal sistêmico permanece
desconhecida.
Um estudo detalhado do extrato de floema de plantas de abóbora (Cucurbita
maxima) demonstrou a presença de uma população de pequenos RNAs provavelmente
envolvidos no processo de sinalização sistêmica, pois uma análise comparativa de
seqüência identificou possíveis alvos destes pequenos RNAs. Experimentos realizados com
plantas transgênicas silenciadas e infectadas por vírus confirmaram a presença de siRNAs
derivados do transgene ou do vírus no extrato do floema. Uma análise bioquímica desse
extrato levou à identificação de uma proteína que se liga seletivamente a pequenos RNAs
de fita simples, denominada CmPSRP1 (C. maxima Phloem Small RNA Binding Protein 1),
sugerindo que esta proteína é parte da maquinaria envolvida no silenciamento sistêmico
(Yoo e col., 2004).
MicroRNAs
MicroRNAs (miRNAs) constituem uma classe de pequenos RNAs de 21-24 nt
envolvidos na regulação da expressão gênica em eucariotos. A presença de miRNAs já foi
detectada em S. pombe, Drosophila, camundongos, humanos e plantas (Lagos- Quintana
e col., 2003; Lee e Ambros, 2001; Llave e col., 2002b).
Os miRNAs atuam de forma análoga aos siRNAs regulando negativamente mRNAs
alvos, porém diferenciam-se destes pela origem e pela natureza do mRNA alvo. Os siRNAs
são derivados do próprio mRNA alvo transcrito a partir de um transgene, vírus, transposon
ou gene endógeno. Os miRNAs são processados a partir de transcritos endógenos que não
codificam proteínas e possuem como alvo mRNAs endógenos.
O número de genes que codificam miRNAs está estimado em 0,5-1% do número
total de genes do genoma em questão. C. elegans e Drosophila possuem
aproximadamente 100 a 140 genes que codificam miRNAs, enquanto seres humanos
possuem de 200 a 255. Pelo menos 0,2 % do genoma de Arabidopsis codifica miRNAs.
Esta representatividade relativa é comparável à de outras famílias gênicas envolvidas na
regulação gênica como, por exemplo, a de fatores de transcrição que se ligam a DNA
(Nakahara e Carthew, 2004). A maioria dos genes que codificam miRNAs são conservados
entre espécies relacionadas e aproximadamente 30 % são altamente conservados, com
ortólogos em vertebrados e invertebrados, sugerindo uma conservação evolutiva com base
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em sua função biológica. Embora miRNAs estejam presentes em plantas e animais, ainda
não foram descritos miRNAs ortólogos nos dois reinos (Bartel, 2004).
A maioria dos genes que codifica miRNAs se localiza em regiões intergênicas,
sugerindo que são transcritos a partir de unidades transcricionais independentes (Lau e col.,
2001; Lee e Ambros, 2001). Inicialmente acreditava-se que os miRNAs eram transcritos pela
RNA polimerase III, pois ela transcreve a maioria dos pequenos RNAs como os tRNAs e o
snRNA U6. Entretanto, diversas evidências indicam que os miRNAs não são transcritos pela
RNApol III. Os transcritos que geram miRNAs são um pouco mais longos do que os demais
RNAs transcritos pela enzima, e possuem seqüência internas com mais de quatro uracilas
seguidas, o que seria o sinal de término da transcrição para a RNApol III (Lee e col., 2002).
Além disso, um grande número de transcritos quiméricos contendo miRNAs e transcritos
adjacentes têm sido encontrado em bibliotecas de EST, e muitos destes ESTs possuem
cauda poli A e são ocasionalmente processados, sugerindo que são transcritos pela RNA
polimerase II (Smalheiser, 2003). Por fim, a inserção de elementos enhancer que
respondem à RNApol II em Drosophila induz a expressão do miRNA Bantam (Brennecke e
col., 2003). De fato, foi demonstrado que os transcritos primários (nucleares) que geram os
miRNAs (denominados pri-miRNAs) possuem estrutura de capa na extremidade 5’ e cauda
poli-A na extremidade 3’, características de transcritos de genes da classe II. Além disso, o
tratamento de células humanas com α-amanitina a concentrações que inibem a RNApol II
suprime o acúmulo de pri-miRNAs, e ensaios de imunoprecipitação de cromatina
demonstraram que a RNApol II está fisicamente associada ao promotor de alguns miRNAs
(Lee e col., 2004b).
Aproximadamente um quarto dos genes que codificam miRNAs em Drosophila
estão localizados em introns, preferencialmente na mesma orientação do mRNA, sugerindo
que são transcritos a partir do promotor do gene e processados a partir dos introns, de
forma análoga a diversos snRNAs (Aravin e col., 2003). O alvo desses miRNAs é o próprio
mRNA processado, o que sugere um cenário regulatório onde a expressão coordenada do
miRNA e de seu mRNA alvo é desejada (Lim e col., 2003a). Outros miRNAs estão
agrupados no genoma em um arranjo e padrão de expressão que produz um pri-miRNA
“policistrônico”, capaz de gerar vários miRNAs distintos após a finalização do
processamento (Fig. 2) (Lau e col., 2001). Apesar da maioria dos genes que codificam
miRNAs em plantas, C. elegans e humanos estar organizada de forma isolada (Lim e col.,
2003a; Lim e col., 2003b), mais da metade desses genes em Drosophila está organizada
em agrupamentos (Aravin e col., 2003).
Embora a presença de miRNAs em plantas e animais sugira que esta classe de
RNAs não codificantes está envolvida na regulação da expressão gênica desde pelo menos
o último ancestral comum destas linhagens (Reinhart e col., 2002), existem algumas
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diferenças importantes na biogênese e no modo de ação entre os miRNAs de plantas e

animais. A estrutura em forma de grampo predita para o pri-miRNA em plantas é muito mais
variável em comprimento e tipicamente mais longa do que em animais (Reinhart e col.,
2002). Além disso, plantas requerem uma complementaridade perfeita entre o miRNA e o
mRNA alvo, em contraste com miRNAs em animais que são imprecisamente
complementares ao alvo (Hutvagner e Zamore, 2002). A comparação entre alvos de
miRNAs em plantas e animais indica três diferenças adicionais. Os sítios de
complementaridade dos miRNAs de plantas estão localizados sempre na região codificadora
do mRNA alvo, enquanto que em animais podem se localizar na região codificadora ou,
preferencialmente, na região 3’ não traduzida. Além disso, em plantas existe apenas um
sítio de complementaridade entre determinado miRNA e seu mRNA alvo, enquanto que em
animais podem existir sítios múltiplos de complementaridade (Reinhart e col., 2000;
Rhoades e col., 2002; Slack e col., 2000). Por fim, os miRNAs de plantas atuam
predominantemente degradando o mRNA alvo (Carrington e Ambros, 2003), com uma única
exceção conhecida até o presente, o miRNA172, que regula a expressão do gene
APETALA2 em Arabidopsis reprimindo a tradução sem afetar a estabilidade do mRNA
(Aukerman e Sakai, 2003; Chen, 2004). O oposto é observado com os miRNAs de animais,
que predominantemente reprimem a tradução de seus mRNAs alvos sem afetar sua
estabilidade (Olsen e Ambros, 1999). Somado à ausência de conservação entre os genes
que codificam miRNAs em plantas e animais, estas diferenças sugerem que esses genes
evoluíram independentemente após a divergência dos dois reinos (Bartel, 2004).
O modelo atual para a biogênese de miRNAs em animais (Fig. 2) propõe que a
maturação dos miRNAs ocorre em duas etapas. A primeira etapa consiste na clivagem
nuclear do pri-miRNA, que libera um intermediário com estrutura secundária em forma de
grampo com aproximadamente 60-70 nt, denominado pre-miRNA (precursor miRNA) (Lee e
col., 2002). Esta clivagem é realizada pela RNase III Drosha, que cliva ambas as fitas do pri-
miRNA em sítios próximos à base da estrutura em forma de grampo, gerando um premiRNA
com um fosfato em sua extremidade 5’ e 2 nucleotídeos protundentes na extremidade 3’
(Lee e col., 2003b). O pre-miRNA é transportado de forma ativa do núcleo para o citoplasma
pelo complexo Ran-GTP/Exportina-5 (Lund e col., 2004; Yi e col., 2003). A clivagem nuclear
define a extremidade 5’ do miRNA, que é a mesma do pre-miRNA. A extremidade 3’ é
processada no citoplasma pela enzima Dicer (Hutvagner e Zamore, 2002; Ketting e col.,
2001). Nesta etapa, a Dicer atua de forma idêntica à clivagem de dsRNA no processo de
silenciamento de RNA. Inicialmente ocorre o reconhecimento da região de fita dupla do pre-
miRNA, provavelmente por afinidade da enzima com o fosfato 5’ e os 2 nt protundentes na
extremidade 3’. Em seguida ocorre a clivagem, liberando um miRNA de fita dupla com
aproximadamente 21-25 pares de bases, contendo fosfatos nas extremidades 5’ e dois
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nucleotídeos protundentes nas extremidades 3’ (Hutvagner e Zamore, 2002). De acordo

com este modelo, a especificidade da primeira clivagem determina a posição correta da
segunda clivagem do pre-miRNA, definindo assim ambas as extremidades do miRNA (Lee e
col., 2003b).
Figura 2. Processos nucleares e citoplasmáticos envolvidos na biogênese de microRNAs

(miRNAs) em plantas e animais. Os miRNAs são transcritos, em ambos tipos de organismos, a
partir de genes que produzem um RNA precursor com estrutura secundária em forma de grampo,
denominado pri-miRNA. Em plantas, o pri-miRNA é processado pela enzima DCL-1 no núcleo,
gerando um intermediário com aproximadamente 60-70 nt denominado pre-miRNA. O pre-miRNA é
subseqüentemente processado, provavelmente pela mesma enzima, gerando o miRNA. Em animais,
o pri-miRNA é processado no núcleo pela enzima Drosha, gerando o premiRNA. O pre-miRNA é
transportado de forma ativa do núcleo para o citoplasma pelo complexo Ran-GTP/Exportina-5. No
citoplasma, o pre-miRNA é processado pela enzima Dicer, gerando o miRNA. Em plantas e animais,
o miRNA citoplasmático é incorporado ao complexo RISC, que irá degradas os mRNAs endógenos
que apresentam homologia com a seqüência do miRNA. Em plantas, os miRNA também atuam no
núcleo, via incorporação a um complexo RISC nuclear. (Modificado de Zerbini e col., 2005).
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Em plantas o processamento parece ser um pouco diferente. Não são detectados

pre-miRNAs, mesmo em plantas mutantes para DCL1, a proteína homóloga à Dicer
envolvida na biogênese de miRNAs (Reinhart e col., 2002). A localização nuclear de DCL1
sugere esta realiza o papel funcional de Drosha (Papp e col., 2003). DCL1 (ou outra enzima
ainda não identificada) realiza também a segunda clivagem, correspondente à clivagem
citoplasmática em animais, antes da exportação para o citoplasma. O acoplamento da
primeira e segunda clivagens no núcleo pode explicar a ausência de pre-miRNAs em níveis
detectáveis em plantas (Bartel, 2004). Não existem dados conclusivos sobre o transporte do
miRNA de fita dupla do núcleo para o citoplasma em plantas. Um ortólogo à exportina-5
denominado HST1 (Hasty 1) foi identificado em Arabidopsis, sugerindo que esta proteína
está envolvida no transporte núcleo/citoplasma. Embora o processamento de miRNAs não
tenha sido testado em mutantes hst1, estas plantas apresentam alterações morfogenéticas
e redução no acúmulo de alguns miRNAs, sugerindo que a via biossintética dos miRNAs é
afetada (Bollman e col., 2003).
Após o transporte núcleo/citoplasma, o modo de ação dos miRNAs é bastante
semelhante às etapas do silenciamento de RNA mediado por siRNAs. Os miRNAs foram
inicialmente encontrados em associação com um complexo ribonucleoprotéico denominado
miRNP (miRNA ribonuclein complex), que em humanos inclui a proteína Argonauta eIF2C2,
a helicase GEMIN3 e GEMIN4 (Martinez e col., 2002; Mourelatos e col., 2002). O miRNA let-
7 de humanos se associa a eIF2C2 e é capaz de guiar a clivagem sítio-específica de um
RNA alvo artificial 100 % complementar ao Mirna (Hutvagner e Zamore, 2002). Desta forma,
sugeriu-se que o complexo miRNP corresponde ao RISC, que direciona a clivagem de
mRNAs no mecanismo de silenciamento de RNA (Hutvagner e Zamore, 2002).
Somente uma das fitas do miRNA de fita dupla é incorporada ao RISC. Quando isso
ocorre, a outra fita é degradada. Estudos para determinar qual das fitas é incorporada no
RISC mostraram que a fita incorporada é aquela que possui o terminal 5’ com pareamento
de bases mais instável (Schwarz e col., 2002).
Em plantas, o acúmulo de miRNAs é dependente dos genes Hen1 e de Hyl1, além
de Dcl1. A proteínas HEN1 e HYL1 possuem sinal de localização nuclear, sugerindo que
elas atuam em uma etapa nuclear da biogênese de miRNAs (Park e col., 2002). HEN1 é
uma dsRNA metilase (Anantharaman e col., 2002) e HYL1 se liga especificamente a dsRNA
(Lu e Fedoroff, 2000), portanto podem estar envolvidas em marcar e direcionar os miRNAs
de fita dupla que devem ser incorporados ao RISC.
Uma vez incorporado ao RISC, o miRNA vai direcionar a clivagem específica de
mRNAs complementares ou reprimir sua tradução (Zeng e Cullen, 2002). Em plantas, a
grande maioria dos miRNAs cujos alvos já foram identificados atuam via clivagem específica
(Rhoades e col., 2002). Em animais, a maioria dos miRNAs possui complementaridade a
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vários sítios na região 3’ não traduzida de mRNAs alvos e acredita-se que atuam inibindo a
tradução. Entretanto, foi demonstrado que o miRNA mir-196 direciona a clivagem do seu
mRNA alvo, Hoxb8, em camundongos (Yekta e col., 2004).
Quando o miRNA direciona a clivagem, esta ocorre precisamente da mesma forma
que a clivagem direcionada por siRNAs, ou seja, entre o décimo e o décimo primeiro
nucleotídeo pareado do miRNA (Hutvagner e Zamore, 2002). Após a clivagem do mRNA
alvo, o miRNA permanece intacto e pode direcionar o reconhecimento e a clivagem de outro
mRNA alvo (Hutvagner e Zamore, 2002).
Existe atualmente um grande número de miRNAs identificados em plantas e animais
(Rhoades e Bartel, 2004; Llave e col., 2002b; Rhoades e col., 2002). Em vários casos, os
alvos desses miRNAs foram identificados e comprovados por meio de análises
computacionais (Rhoades e col., 2002). Entretanto, a validação definitiva de um mRNA alvo
requer estudos nos quais sua suposta seqüência de reconhecimento seja alterada de modo
a impedir o anelamento do miRNA, verificando-se um subseqüente aumento na
concentração do mRNA alvo (Baulcombe, 2004). A identificação dos mRNAs alvos dessa
forma demonstrou que os miRNAs estão predominantemente envolvidos na regulação de
genes relacionados ao desenvolvimento de órgãos e tecidos, incluindo diversos fatores de
transcrição (Bartel, 2004). Alguns exemplos incluem o miRNA-JAW, que regula a expressão
do fator de transcrição TCP envolvido na morfogênese de folhas (Palatnik e col., 2003), o
miRNA159, que regula a expressão do fator de transcrição MYB33 envolvido no balanço de
reguladores de crescimento (Palatnik e col., 2003), o miRNA 165/166 que regula a
expressão de três fatores de transcrição da classe envolvidos na diferenciação das faces
adaxial e abaxial de folhas (Emery e col., 2003), o miRNA172, que regula a expressão do
fator de transcrição APETALA2 envolvido na morfogênese floral (Aukerman e Sakai, 2003;
Chen, 2004), e o miRNA164, que regula a expressão de vários fatores de transcrição da
classe NAC, envolvidos em diversos aspectos da diferenciação de órgãos vegetativos e
reprodutivos (Mallory e col., 2004). Além disso, a expressão de genes relacionados com a
própria maquinaria do silenciamento de RNA, como AGO1 (Vaucheret e col., 2004) e DCL-1
(Xie e col., 2003) é regulada por miRNAs.
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Unidade 3
Neurociências
¹Leopoldo Barletta Marchelli

[email protected]
²Breno Teixeira Santos
[email protected]
¹Felipe Viegas Rodrigues
[email protected]
¹Laboratório de Neurociência e Comportamento
²Laboratório de Fisiologia Teórica
O entendimento atual sobre origem, funcionamento e capacidade do sistema

nervoso é resultado do esforço de múltiplas áreas do conhecimento, denominadas
genericamente por neurociências. Esta ampla área inclui disciplinas como
neuroanatomia (estudo da estrutura do sistema nervoso), neurofisiologia (estudo do
funcionamento de células nervosas e conjuntos de células nervosas),
neuropsicologia (estudo dos processos cognitivos e suas relações com anatomia e
fisiologia) e até mesmo a engenharia (modelagem analítica e computacional de
versões simplificadas de células neurais, chegando a simulação de redes de
milhares de neurônios).
Baseado no conhecimento de todas essas disciplinas, apresentaremos as
neurociências desde seus primórdios até o conhecimento atual. Abordaremos as
principais funções cognitivas no estudo das neurociências como atenção,
percepção, ação, memória e emoção, empregando o conceito de modularidade do
funcionamento do sistema nervoso. Também abordaremos modelos de processos
biofísicos e métodos de análise quanti/qualitativa da dinâmica neural, mas utilizando
os conhecimentos da engenharia, que busca obter estruturas teóricas básicas que
delineiam o funcionamento global desses sistemas.
Capítulo 8 História da neurociência pág. 79

Camile Maria Costa Corrêa
Revisado por Dr. Gilberto Fernando Xavier
Capítulo 9 Princípios básicos em fisiologia neural pág. 89
Renata Pereira Lima
Capítulo 10 Fisiologia sensorial pág. 103
Revisado por Andreas Betz e Daiane Gil Franco
Capítulo 11 Neurofisiologia da visão pág. 115
Antônio Carlos da Silva
Revisado por Dr. Carlos Arturo Navas
Capítulo 12 Causa e função pág. 121
Dr. Pedro Leite Ribeiro
Capítulo 13 Percepção pág. 127
Revisado por Arnaldo Cheixas-Dias
Capítulo 14 Memória e seus aspectos evolutivos pág. 139
Leopoldo Barletta Marchelli
Capítulo 15 Navegação espacial pág. 153
Cyrus Villas-Boas
Capítulo 16 Neurobiologia das emoções pág. 163
Bárbara Onishi
Capítulo 17 Neurofisiologia da linguagem pág. 179
Rodrigo Collino
Capítulo 18 Neurofisiologia da música pág. 187
Revisado por: Dr. Pedro Leite Ribeiro
Dr.Leonardo Henrique R. G.de Lima
Pág. 78 Julho/2010
Neurociências
História da Neurociência
Camile Maria Costa Corrêa

Laboratório de Neurociência e Comportamento
[email protected]
Introdução
Como pensamos? Como interpretamos a nossa realidade? De que forma situamo-
nos no mundo e desenvolvemos nossa identidade, nossas relações, crenças e loucuras?
Como nos emocionamos, sonhamos e experienciamos consciência? Como foi possível
desenvolvermos filosofia, ciência e artes? Haveria uma chave para entender os mistérios da
vida mental?
Atualmente, nosso conhecimento entende o cérebro como órgão responsável pelo
comportamento e pelas faculdades mentais. Também aprendemos que fenômenos
eletroquímicos são os responsáveis pelo funcionamento do sistema nervoso. No entanto,
esses conhecimentos são relativamente recentes e durante muitos séculos as crenças sobre
a maneira de funcionar do cérebro foram radicalmente diferentes das professadas hoje.
Investigar o tratamento histórico dessas questões permite vislumbrar de que
maneiras a humanidade vem formulando perguntas fundamentais sobre os aspectos daquilo
que tradicionalmente identificamos como mente: sua existência, essência, localização,
estrutura e função. Todos os passos, dos mais intuitivos aos mais rigorosos do ponto de
vista experimental, constituem juntos os alicerces do conhecimento que hoje relacionamos à
neurociência.
A mente nas antigas civilizações

Sabe-se que as civilizações antigas exerciam uma produção cultural muito rica. Há
registros de povos primitivos que praticavam religiões e acreditavam em entidades tais como
alma e espírito. Interessantemente, além de estarem presentes no domínio do corpo, elas
permeavam a própria natureza.
Entretanto, essas culturas não contavam com o que hoje se conhece sobre fisiologia,
fazendo com que as tentativas de localização da mente soassem simplesmente ilógicas,
uma vez que as pistas das sedes para os fenômenos mentais eram intuídas a partir de
observações cotidianas. Havia evidências de que a mente poderia estar dentro da cabeça
ao perceber, por exemplo, que um trauma nessa região poderia causar alterações
substanciais da percepção e do comportamento.
Uma evidência da aposta nessa localização são os achados dos rituais de
trepanação. A trepanação é uma técnica cirúrgica de abertura de uma ou mais fendas no
crânio, com o provável intuito de afastar maus espíritos. Povos antigos, como os maias,
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(2000 a.C. – 900 d.C.) realizavam esse tipo de procedimento em pessoas acordadas,
provavelmente acreditando que espíritos maus existentes no interior da cabeça seriam os
responsáveis por patologias tais como epilepsia e o estado de coma e, uma vez feitas essas
aberturas, os espíritos poderiam escapar, o que promoveria a recuperação e cura. Crânios
com perfurações feitas em vida foram encontrados em sítios que datam de até 10.000 anos.
Pela cicatrização, há indícios de que as pessoas sobreviviam a esse procedimento.
Ora, alguns casos de coma eram devidos a um aumento da pressão intracraniana e essa
cirurgia realmente promove alívio da hipertensão intracraniana podendo, em alguns casos,
ter até valor terapêutico. Cadáveres dessa forma foram encontrados em quase todas as
civilizações do mundo e, mesmo povos modernos, como os da Oceania, ainda praticam
essa laboriosa e arriscada cirurgia.
Uma segunda questão tão intrigante quanto a localização diz respeito à forma como
mente e corpo viriam a se influenciar. Se uma mente existe e se ela está no corpo, qual o
mecanismo de interação dessa mente com esse corpo?
Um outro indício, documental, de que há muito se associava o cérebro à mente é o
Papiro Cirúrgico de Edwin Smith, americano que adquiriu a relíquia em 1862. Considerada o
tratado científico mais antigo conhecido, foi escrito no Egito e data, embora não haja
consenso, de 1600 a.C. Lá estão descritos 30 casos de referências diretas ao cérebro.
Descrições anatômicas, traumatológicas e clínicas, com detalhes sobre o que acontecia com
um trauma de guerra, provocando epilepsia, convulsões, paralisia, problemas sensoriais e
até alteração do sistema nervoso autônomo nas pessoas que haviam sido vítimas dessas
lesões.
Abordagens Filosóficas Pioneiras

Foi na Antigüidade Grega, com o florescimento intelectual em Atenas, por volta de
400-300 anos a.C., que começou a surgir o pensamento sistematizado sobre algumas
perguntas relativas à mente. (Consenza, 2002).
Na cultura ocidental, Alcmaeon de Crotona (século V a.C.) foi possivelmente o
primeiro a localizar no cérebro a sede das sensações. Para ele, os nervos ópticos, que
seriam ocos, levariam a informação ao cérebro, onde cada modalidade sensorial teria seu
próprio território de localização.
Ainda no século V a.C., Demócrito, Diógenes, Platão e Teófrasto punham no cérebro
o comando das atividades corporais. Também entre os gregos, Herófilo (335-280 a.C.), que
dissecou e escreveu sobre o cérebro, foi o primeiro a descrever suas cavidades, os
ventrículos cerebrais, associando-os às funções mentais. Essa idéia, como veremos, teve
enorme importância na “neurofisiologia” dos séculos que se seguiram.
Os filósofos gregos Alcaemeon e Demócrito acreditavam que a sede da mente era o
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Neurociências
cérebro. Para eles, a constituição interna dos nervos era oca e seriam estas as estruturas
responsáveis por transmitir uma espécie de fluido vital, chamado espírito animal, base da
mente, da alma e até da alma imortal.
Na filosofia ocidental dois nomes entraram em intenso debate. Hipócrates - o pai da
medicina - e Aristóteles, pai das ciências do conhecimento natural, cujas idéias foram
propagadas até a idade moderna.
Hipócrates (460-379 a.C.) acreditava que o cérebro era a sede da mente, dos
sentimentos e das emoções; ele seria a estrutura responsável pelos sonhos, terrores
noturnos e problemas mentais. "Deveria ser sabido que ele é a fonte do nosso prazer,
alegria, riso e diversão, assim como nosso pesar, dor, ansiedade e lágrimas, e nenhum
outro que não o cérebro. Na época não havia conhecimento sistematizado sobre a anatomia
cerebral, pois não se praticavam dissecações. As declarações hipocráticas eram, portanto,
fruto de intuições filosóficas baseadas na observação clínica de que o cérebro seria a sede
de tudo o que hoje se acredita que seja (juízo, emoções, sentimentos etc.)
Porém, esse conhecimento dos hipocráticos sofreu uma regressão com Aristóteles,
(384 a.C. - 322 a.C)., para quem a sede dos referidos fenômenos estava no coração. Seus
argumentos eram simples: o coração hospeda a razão por ser quente e ativo, enquanto o
cérebro serve para resfriar o sangue, por ser frio e inerte. Ora, quando se experiencia uma
emoção forte, ela é sentida no coração, pela ativação simpática. Diz-se que o coração está
pesado, que se gosta de alguém “de coração” ou até mesmo que se sabe algo de cor; do
latim, decorado. Acreditava-se, inclusive, que até a memória estaria no coração.
Na época, associou-se erradamente o efeito à causa, quer dizer, a emoção está no
cérebro, a sua expressão está no coração. Porém, Aristóteles não era experimentador, era
um filósofo, pensava essencialmente de acordo com a lógica.
O médico romano Galeno (130-200) foi importante na história da neurociência
porque foi o primeiro a refutar o que disse Aristóteles. Para aquele, não haveria sentido em
afirmar que o cérebro tivesse a função de esfriar as paixões do coração. Pela dissecação de
animais ele destinou muita atenção às meninges e às cavidades encefálicas (contrastantes
com a massa, amorfa, cerebral) fazendo com que se buscasse relacionar os ventrículos com
a mente.
Os ventrículos pareciam ser estruturas-chave na procura pela sede da mente por
serem espaços destacados, cheios de líquidos, e, uma vez que ainda era forte a idéia vinda
dos gregos de que a mente seria intermediada pelo espírito animal, várias pistas indicavam
que aqueles ventrículos cheios de fluido fossem a sua sede.
Esse conceito de Galeno foi apropriado durante toda a Idade Média pela ciência
médica. Acreditava-se, por especulação puramente teórica, que havia três células dos
ventrículos no cérebro. A primeira célula (anterior) seria responsável pela sensação e
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percepção (nervos ligando os órgãos dos sentidos ao ventrículo 1). A segunda célula seria a
responsável pelo juízo, pensamento e razão (ventrículos laterais; faculdades nobres, fluido
resfriado e o refugo seria filtrado pelo sangue). Já a terceira seria a responsável pela
memória, e utilizada pelos outros dois ventrículos para o funcionamento cerebral. Leonardo
da Vinci, grande anatomista, também fez desenhos dos ventrículos cerebrais.
Até aqui, tem-se uma teoria da mente que, embora não se baseasse na fisiologia,
não deixava de apresentar uma certa consistência interna. A idéia dos fluidos vigeu durante
muitos séculos.
Foi apenas a partir da Renascença que houve mudanças mais pronunciadas, pelo
conhecimento mais detalhado sobre a anatomia do cérebro. (Consenza, 2002). O
anatomista Vesalius, (1514-1564) escreveu o livro “Da Estrutura do Corpo Humano” em que
ele, através das dissecções que realizava em seres humanos e em outros animais, notou
que estes (inclusive asnos e jumentos) também tinham ventrículos. Observou-se que o
espaço ventricular nos homens e em outros primatas era praticamente do mesmo tamanho,
ao contrário do restante do cérebro que, no homem, mostrava diferenças. Dessa forma,
seria lógico pensar que os aspectos intelectuais superiores, tão peculiares a nós, estariam
não nos ventrículos, mas em outras partes do cérebro.
Contudo, continuou-se a acreditar que os ventrículos cerebrais eram um local de
armazenamento dos espíritos animais, de onde eles partiriam para, através dos nervos,
atingir os órgãos sensoriais ou de movimento. Assim, a teoria da localização ventricular
perdurou por muito tempo.
Descartes e o mecanicismo
No século XVII, o filósofo, matemático e naturalista René Descartes (1596-1650)
especulava sobre a natureza do sistema nervoso, sobre de que maneira ele funcionaria
como a base da mente. Ele propôs o mecanismo da ação reflexa, fenômeno que ocorre
quando, ao encostar-se num estímulo nocivo, como o fogo, retira-se o membro de forma
rápida e involuntária.
Descartes propôs que o estímulo, ao atingir o pé, seria transmitido pelos nervos até o
cérebro, sendo que essa transmissão seria conduzida de forma hidráulica. Assim, o
aquecimento provocaria um aumento do fluxo do fluido (espírito animal) para o cérebro, que
iria aos ventrículos, até a glândula pineal, (reguladora desse fluxo), voltando até o nervo
motor, de forma a inchar o músculo tal qual um fole que promoveria, finalmente, o
movimento do membro. (Consenza, 2002).
Note-se que o modelo físico do cérebro na época era hidráulico, seguindo a
tecnologia disponível na época. Descartes comparou as fontes do jardim de Versailles, da
realeza francesa, cujos mecanismos eram hidráulicos, com a própria complexidade do
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Neurociências
sistema nervoso.
Descartes fez uma série de desenhos, puramente especulativos, mostrando a
estrutura fibrosa do cérebro humano; e ele especulava que a glândula pineal regulava o
fluxo do espírito animal dentro do cérebro como se fosse uma válvula. Há desenhos do
encéfalo inflado e desinflado; correspondendo ao estado de vigília e de sono. Ele
argumentava que os fluxos iriam se acumulando durante o dia e inchando o cérebro e, à
noite, a pineal (válvula) entrava em funcionamento e isso promovia o sono.
Nessa época almejava-se chegar ao conhecimento pela via da razão pura, da
dialética, do exame da lógica das palavras e do conhecimento, em detrimento da
experimentação.
O início dos experimentos

Em fins do século XVIII (1780, 1790) inaugurou-se realmente a era científica. Na
física, com Galileu Galilei, e na ciência biológica com outros dois italianos: Luigi Galvani e
Alessandro Volta. Esses dois cientistas foram pioneiros no estudo experimental do sistema
nervoso.
A seguir são elencados quatro conceitos que, nos séculos XVIII e XIX, permearam o
início da era científica em neurociência (Consenza, 2002).
1. A eletricidade animal: a idéia de que “espíritos animais” percorriam os nervos, cuja

origem remonta ao pensamento grego, permaneceu corrente até o Século XVIII,
quando ficou demonstrada a natureza elétrica na condução nervosa, destacando-se
para isso o trabalho de Luigi Galvani;
2. A localização de áreas cerebrais: o conhecimento de que determinadas partes do
cérebro apresentam diferentes funções. Têm início as tentativas de aliar forma e
função para mapear faculdades cerebrais: ações motoras, percepções sensoriais
etc.;
3. A doutrina neuronal: uma especialização da doutrina celular. Cientistas descobriram
através do microscópio que as células não eram somente elementos estruturais, mas
os elementos funcionais de todos os organismos.
4. A teoria da Evolução: a partir da segunda metade do século XIX até hoje se firma
como o conceito mais revolucionário nas ciências biológicas; foi proposto por Charles
Darwin, cientista e naturalista inglês.
No final do século XVIII, Luigi Galvani (1737-1798) notou que, ao amarrar as pernas
de um sapo a uma grade metálica, submetendo-as a uma descarga, as pernas se
contraíam. Na época, os modelos físicos também estavam em transformação. Uma hipótese
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seria a de que a eletricidade pudesse ser o fluido animal, a base do espírito vital. Aliado a
essa descoberta, o magnetismo fez com que o paradigma hidráulico fosse banido da
neurociência, que gradativamente passou a adotar o modelo elétrico. Galvani fez uma série
de experimentos elegantes, demonstrando que a origem da eletricidade não era externa,
mas interna, do próprio tecido animal. A partir daí foram conduzidos os estudos sobre as
propriedades de comunicação no sistema nervoso.
Os conceitos fundamentais sobre o papel do tecido cerebral para as funções
nervosas também se desenvolveram no século XIX. Theodor Schwann (1810-1882), que
descreveu a bainha de mielina, foi quem primeiro propôs que todo o corpo seria formado por
células. Sua teoria teve ampla aceitação para todos os tecidos, com exceção do sistema
nervoso, em relação ao qual se acreditava que as células eram contínuas, formando um
grande sincício. Somente com a descoberta das técnicas de impregnação das estruturas
nervosas pela prata (método de Golgi) foi possível uma observação mais acurada,
resultando nos trabalhos de Santiago Ramón y Cajal (1852-1934) que, já em 1889,
argumentava que as células nervosas eram elementos isolados. Em 1891 Wilhelm von
Waldeyer (1836-1921) cunhou o termo “neurônio” para designar a unidade anatômica e
funcional do sistema nervoso.(Consenza, 2002).
Finalmente veio a descoberta, por Charles Scott Sherrington (1857-1952), dos
espaços existentes nas junções entre células nervosas ou entre estas e as células
musculares. Sherrington chamou essas estruturas de “sinapses”.
Frenologia e a localização cerebral

O médico alemão Franz Gall (1758-1828) propôs que o cérebro seria composto de
muitos sub-órgãos particulares, cada um deles relacionado ou responsável por uma
determinada faculdade mental. Ele propôs que o desenvolvimento relativo das faculdades
mentais em um indivíduo levaria a um crescimento ou desenvolvimento de sub-órgãos
responsáveis por eles. Assim, a forma externa do crânio refletiria a forma interna do cérebro,
cuja observação poderia ser usada para diagnosticar faculdades mentais. (Sabbatini, 1997).
Embora não fosse experimentador, Gall propôs esse modelo em boa fé, por
observações feitas em centenas de crânios de pessoas normais, sentenciados, doentes
mentais etc. Apesar de ter proposto uma teoria sem fundamentação científica, teve o mérito
de chamar a atenção da ciência para o localizacionismo, para o fato de que haveria um
mapeamento das funções cerebrais em relação à sua estrutura.
Esse movimento levou a uma série de estudos baseados em informações clínicas,
principalmente pela incidência de tumores ou de lesões em seres humanos, que tornava
possível correlacionar alterações estruturais a disfunções comportamentais.
O médico francês Pierre Broca mostrou que havia no cérebro uma área responsável
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Neurociências
pela linguagem falada. Ele estudou um paciente afásico (capaz de emitir somente o som de
uma palavra) e, quando da morte desse paciente, pela realização de necrópsia, foi
descoberta uma lesão, originada pela sífilis, numa área muito pequena, restrita ao
hemisfério esquerdo. Chegou-se à conclusão de que aquela área era a responsável
exclusiva da elaboração da linguagem. Essa idéia foi a primeira comprovação científica de
que tal mapeamento pudesse realmente existir.
Novos Paradigmas
Na esteira de transformações, toda a ciência sofreu o impacto da revolução
paradigmática proposta por Darwin, pesquisador que violou conceitos profundos na época;
até então Deus teria criado o ser humano de maneira exclusiva, à parte do Reino Animal,
sendo que não fazíamos parte dessa cadeia por sermos nobres, superiores. Darwin mostrou
que éramos parte desse ambiente em evolução e, mais ainda, que à medida que os
organismos têm necessidade de se adaptar às mudanças no ambiente, eles desenvolvem
tecidos (cerebrais e não cerebrais) para se adaptar àquela circunstância. A existência de
vários fenômenos naturais, inclusive o papel do sistema nervoso, passa a ser considerada
resultado da evolução pela seleção natural.
Ainda um conceito fundamental na época é o de homeostase. Claude Bernard, um
fisiologista francês da segunda metade do século, propôs um conceito do meio interno: a
estabilidade, a temperatura corporal, a quantidade de determinados elementos sangüíneos,
fluidos corporais ou intracelulares, tudo deve se manter constante para que seja possível a
vida. Assim, os organismos desenvolveram formas extremamente sofisticadas (hormonais e
neurais) de manter esse equilíbrio interno a despeito de mudanças no ambiente. O cérebro,
o sistema endócrino, o sistema imune, funcionavam como isoladores do organismo em
relação ao ambiente, a exemplo do processo regulatório da homeotermia.
De forma análoga os próprios fenômenos mentais fariam igualmente parte dos
mecanismos de homeostasia, indicando que até os comportamentos sofisticados como os
das faculdades da mente humana fossem vistos como resultados da evolução, como táticas
selecionadas para manter o equilíbrio. Por exemplo, no frio, os mecanismos bioquímicos
promotores da homeotermia podem não ser suficientes, o que nos leva a desenvolver
roupas, casas, ou migrar para clima mais quente (utilização de faculdades mentais).
Finalmente a doutrina neuronal foi proposta/adaptada por dois cientistas: Ramón y
Cajal (espanhol) e Camilo Golgi (italiano), que estudaram com grande detalhe a estrutura
microscópica interna do sistema nervoso e descobriram que essas células pareciam se
comunicar entre si através de processos fibrosos (axônios e dendritos) e que não havia
continuidade entre elas. O conceito de sinapse foi desenvolvido posteriormente, como visto,
por Sherrington.
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O começo da psicologia experimental

A partir dessa época assistiu-se ao surgimento dos primeiros estudos de
aprendizagem e memória; o conceito de reflexo condicionado, que foi elaborado por Ivan
Pavlov, seria produto do funcionamento neuronal. Ele e Eric Kandel receberam o prêmio
Nobel, este último por sua contribuição para desvendar os mecanismos e as bases celulares
e moleculares do aprendizado. A partir daí vivemos uma revolução das técnicas advindas do
conhecimento acumulado. Esse saber teve repercussões práticas, como o surgimento da
psiquiatria científica e a mudança conceitual que passou a considerar as doenças como
disfunções do cérebro e o conseqüente uso de conhecimentos psicológicos e fisiológicos na
terapia. Os sintomas não eram mais devidos à possessão ou falta de caráter, mas
atribuíveis a desordens biológicas.
Jean Marie Charcot, psiquiatra francês, juntamente com Pinel, foram responsáveis
pelas mudanças de atitude com relação à doença mental. Charcot é conhecido pelo estudo
dos fenômenos histéricos, vistos não mais como falhas de caráter de mulheres que
apresentavam essa neurose, mas como fruto de fenômenos biológicos subjacentes.
O estudo da histeria influenciou o médico vienense Sigmund Freud, criador da
psicanálise, que também procurou dar um embasamento neurológico à teoria.
O desenvolvimento de medicamentos e de cirurgias foram marcantes na história da
neurociência, como a lobotomia pré-frontal, uma técnica cirúrgica utilizada por décadas,
muitas vezes sem motivo, desenvolvida pelo médico português Egaz Moniz (prêmio Nobel
da década de 40) para tratamento de pacientes psicóticos. Já na década de 50 investiu-se
na terapia medicamentosa, a intervenção química como alternativa de tratamento seguro e
efetivo das psicoses, fazendo com que o conhecimento gerado pelas pesquisas se
traduzisse também em intervenções sociais.
O Futuro da pesquisa do cérebro.

Entender o que nos faz humanos recruta, há milênios, desde idéias místicas,
passando pelo conhecimento filosófico, e modernamente contando também com as
metodologias científicas. O avanço dessas pesquisas alimenta a visão que a humanidade
faz sobre a sua própria vida mental.
Ao propormos uma divisão didática das idéias no tempo, percebemos que é possível
agrupar a evolução do conceito sobre estrutura e funcionamento do sistema nervoso. A
história é sempre um recurso precioso para o estudo do movimento das idéias. Olhando
retroativamente, assistimos ao surgimento de uma determinada proposição, medimos seu
impacto imediato ou tardio, seu declínio, seu retorno em outro tempo sob condições
diferentes ou sua rejeição definitiva pela falta de evidências. (Kristensen et al. 2001)
Pág. 86 Julho/2010
Neurociências
A mente é uma definição que tenta resgatar a essência do ser humano. A essência
de uma pessoa emerge da existência de funções mentais que nos permitem pensar e
perceber, amar e odiar, aprender e lembrar, resolver problemas, comunicar, criar e destruir
civilizações. Essas expressões são intrinsecamente relacionadas ao funcionamento
cerebral. Além disso, sem o cérebro, a mente não pode existir; sem a manifestação do
comportamento, a mente não pode ser expressa.
A evolução humana é notável na medida em que foi marcada por vários pontos de
viragem cultural. Exemplos disso foram as peculiares descobertas do fogo, do abrigo, das
ferramentas, da linguagem, que exigia uma combinação de fatores genéticos e mudanças
culturais. Com o surgimento da consciência, incluindo um sentido de si mesmo e uma
sensação de continuidade com o passado e futuro, o homem começou a olhar sobre seus
próprios ombros e a questionar acerca das suas próprias origens. Quem sou? De onde vim?
Para onde vou?
As revoluções científicas transformam nossa visão de mundo. Ironicamente, apesar
do conhecimento detalhado de quase tudo no universo, em todas as escalas imagináveis (o
sistema solar, galáxias distantes, os buracos negros, os átomos, moléculas, a teoria das
cordas, DNA, hereditariedade, os mecanismos da vida etc.), ainda não sabemos quase nada
sobre o órgão que fez todas essas descobertas. O conhecimento das funções do cérebro
permanece tão primitivo como o nosso conhecimento do resto do corpo humano um ou dois
séculos atrás. Como podemos propor a consciência ambiental, a higiene do meio, o
equilíbrio do ambiente; se não cultivamos a nossa própria vida interior"?
Apesar do acúmulo de grandes quantidades de conhecimento sobre o cérebro (cerca
de 10.000 documentos são apresentados a cada ano na Sociedade para reuniões de
Neurociência), mesmo as perguntas mais básicas sobre nossas mentes permanecem sem
resposta. O que é a vontade? Quem é o “eu”? Como explicar o sentimento de uma única
pessoa que perdura no tempo e no espaço? O que é a consciência? (Ramachandram,
2003).
Apesar de vislumbrarmos as correntes de pensamentos, percebemos que, ao longo
do tempo, a integração entre as idéias pode ser árida. A ciência da mente depende da
conversa integrada entre experimentos controlados e o esforço teórico, articulados
criticamente. O entendimento atual sobre origem, funcionamento e capacidade do sistema
nervoso é resultado do esforço de múltiplas áreas do conhecimento, denominadas
genericamente por neurociências.
A neurociência cognitiva assume o conceito de modularidade do funcionamento do
sistema nervoso, investigando funções como percepção, atenção, memória, emoção, ação
etc, por essa ser considerada uma estratégia de abordagem coerente, além de didática.
“Não mais estamos restritos a inferir sobre as funções mentais simplesmente a partir da
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observação comportamental. Como resultado, a neurociência durante as próximas décadas

pode desenvolver os instrumentos necessários para testar o mais profundo de todos os
mistérios biológicos – as bases biológicas da mente e da consciência”. (Kandel, 2003).
Portanto, ao elaborar as perguntas devidas, realizando os experimentos devidos,
pode-se começar a responder a estas perguntas que, até agora, continuam a ser a
preocupação dos filósofos. Ao entendermos a natureza humana baseada no entendimento
de nós mesmos, não sobram limites a serem alcançados. Sabemos muito pouco sobre o
cérebro, por isso temos de manter uma mente aberta e estar preparados para surpresas.
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Neurociências
Princípios básicos em fisiologia neural

Renata Pereira Lima
[email protected]
No sistema nervoso, neurônios nunca funcionam isolados; eles estão organizados

em circuitos que processam tipos específicos de informações. O sistema nervoso parece
organizado em grupos de circuitos, i.e., módulos, cujas funções servem a um propósito
comportamental específico. Desta maneira, sistemas sensoriais como a visão ou audição
adquirem e processam informações a partir do ambiente, o sistema motor permite que o
organismo responda a tais informações através da geração de ações. Há, entretanto, um
grande número de células e circuitos que estão entre estas mais ou menos bem definidas
aferências e eferências. Eles são coletivamente referidos como sistemas de associação e
são responsáveis pelas mais complexas funções.
Além destas amplas distinções, os neurocientistas têm convencionalmente dividido o
sistema nervoso dos vertebrados, sob o ponto de vista anatômico, em componentes centrais
e periféricos (Fig. 1). O sistema nervoso central (SNC) compreende o encéfalo e a medula
espinal. O sistema nervoso periférico (SNP) inclui fibras de neurônios que conectam os
receptores sensoriais na superfície do corpo ao SNC e a porção motora, que consiste em
axônios de nervos motores que conectam o encéfalo e a medula espinal aos músculos
esquelético, viscerais, cardíaco e glândulas.
Figura 1. Arranjo anatômico do sistema nervoso em

humanos. Em azul o sistema nervoso central (SNC)
e em amarelo, o sistema nervoso periférico (SNP)
(retirado de Bear, 1996).
Embora o arranjo dos circuitos que compõem

estes sistemas varie grandemente de acordo com
suas funções, algumas características são comuns
entre eles. As conexões sinápticas que definem um
circuito são tipicamente realizadas numa densa malha
de dendritos e terminais axonais. A direção do fluxo
de informação em um circuito particular é essencial
para se entender sua função. Células nervosas que
transmitem informações em direção ao sistema
nervoso central são chamadas de neurônios
aferentes; já as que transmitem informações para fora do encéfalo e da medula espinal (ou
Julho/2010 Pág. 89
para fora do circuito em questão), são chamadas de neurônios eferentes. Células nervosas
que participam somente no aspecto local do circuito são chamadas de interneurônios. Estas
três classes – neurônios aferentes, neurônios eferentes e os interneurônios – são os
constituintes básicos de todos os circuitos neurais.
De modo geral, podemos classificar os circuitos como:
 Convergentes: aqueles nos quais um grupo de neurônios recebe uma aferência
(entrada) de um neurônio pré-sináptico e o circuito tende a se tornar concentrado.
Para demonstrar este tipo de circuito, imagine que tenhamos os neurônios A, B e C e
que cada um deles possua uma entrada diferente. Estes neurônios se projetam para
um neurônio D e este se projeta para outro neurônio E, realizando uma eferência
(saída). Circuitos convergentes são responsáveis, por exemplo, pela interpretação
dos estímulos sensoriais (Fig. 2, à esquerda).
 Divergentes: são os circuitos que funcionam de maneira oposta aos circuitos
convergentes. Em vez de concentrar as aferências, estas se projetam
separadamente para diferentes neurônios. No caso do circuito divergente, o neurônio
A possui uma aferência e se projeta para os neurônios B, C e D. A característica
básica de um circuito divergente é o fato de que um único neurônio iniciará respostas
de maneira crescente em outros neurônios. Tais circuitos são encontrados nos
sistema motores e sensoriais (Fig. 2, centro).
 Reverberantes: o sinal de aferência é transmitido ao longo de uma série de
neurônios e cada um destes fará sinapses com neurônios de uma porção da via
previamente percorrida. O impulso reverbera sendo enviado ao longo do circuito
continuamente até que um neurônio seja inibido. Então, uma aferência no neurônio A
se projeta para o neurônio B, que se projeta para o neurônio C e então para o D e
este se projeta de volta para o neurônio A (ou para o B) e o ciclo se repete até que
um neurônio (que pode ser tanto A, quanto B, C ou D) seja inibido. Circuitos
reverberantes estão envolvidos no ciclo de sono-vigília, atividades motoras,
memórias de longa duração, etc (Fig. 2, à direita).
Figura 2. Esquema representativo dos modelos de circuitos. À esquerda, o modelo de circuitos

convergentes, no centro o modelo divergente e o reverberante à direita.
Além disto, circuitos podem funcionar paralela ou serialmente. No funcionamento

paralelo, sinais aferentes são processados em vias distintas e as informações são
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Neurociências
analisadas de maneira analítica concomitantemente no tempo. Por exemplo, o sistema

visual funciona em vias paralelas que processam a informação neural de forma simultânea e
integrada. Sinais representando cores, movimento, forma e localização, por exemplo, são
processados simultaneamente em diferentes regiões do encéfalo. Atividades concomitantes
(e sincronizadas) nas vias visuais dorsal e ventral (que são anatomicamente distintas) são
responsáveis pela percepção unitária da imagem. No funcionamento serial, os resultados
dos processamentos de um circuito são necessários para que o próximo circuito possa
contribuir para o processamento total. Isto é, um neurônio estimula outro neurônio, que por
sua vez estimula outro neurônio e assim por diante. Um exemplo clássico de processamento
serial é o arco reflexo, em que há produz uma reação involuntária rápida, na maioria das
vezes inconsciente, que protege o organismo. Tal reação é originada a partir de um estímulo
externo que gera uma resposta antes mesmo do indivíduo tomar conhecimento da
existência do estímulo periférico e, conseqüentemente, antes deste poder comandá-la
voluntariamente. Muitos reflexos motores são controlados por neurônios localizados na
substância cinzenta da medula espinhal e do tronco encefálico (bulbo, ponte e
mesencéfalo), independentemente da vontade, como por exemplo:
• a retirada imediata da mão de uma panela muito quente;
• extensão da perna após a percussão e estiramento do tendão patelar;
• fechamento da pupila com o aumento da intensidade luminosa;
• aumento da secreção gástrica com a chegada do alimento no estômago.
Desta maneira, o ato reflexo é um mecanismo que gera uma reposta involuntária do
organismo a um determinado estímulo (dor, estiramento, aumento da intensidade luminosa,
variações da pressão arterial etc). Ocorrendo um estímulo, a fibra sensitiva de um nervo
aferente (ou sensitivo) transmite-o até a medula espinhal passando pela raiz posterior, ou ao
tronco encefálico, por meio de um nervo craniano. Na medula ou no tronco encefálico o
neurônio aferente comunica-se com o eferente diretamente ou por meio de interneurônios
associativos, gerando, no neurônio motor, a atividade que leva à ação. Os axônios eferentes
que levam essa ordem da medula (pela raiz anterior) ou do tronco encefálico (por um nervo
craniano) constituem as fibras eferentes motoras ou vegetativas que levam a informação ao
órgão efetor (músculo estriado esquelético, glândula, músculo liso ou músculo cardíaco)
que, por sua vez, executará a resposta ao estímulo inicial.
É importante ressaltar que o processamento serial é a maneira mais simples por
meio da qual um circuito pode funcionar. Este tipo de processamento está envolvido nas
respostas mais simples e estereotipadas. Durante o processamento de funções mais
complexas, de modo geral, os circuitos envolvidos, além de processar informações de modo
serial, funcionam concomitantemente em paralelo com outros circuitos de maneira
sincronizada.
Julho/2010 Pág. 91
Construção de Circuitos e sua Modificação pela Experiência

A construção da circuitaria do sistema nervoso envolve processos ontogenéticos
associados à interação do sistema com o ambiente. Assim, fatores químicos liberados por
determinados neurônios em diferentes estágios do desenvolvimento ontogenético atraem
projeções de outros neurônios intrinsecamente; paralelamente, essas projeções e conexões
entre neurônios podem originar-se também em associação com a estimulação
proporcionada pelo ambiente e/ou pela atividade de certos conjuntos de neurônios. Assim,
os padrões macroscópicos básicos das conexões no sistema nervoso estabelecidas
filogeneticamente podem ser microscopicamente alterados por padrões de atividade
neuronal (isto é, experiência), modificando a circuitaria sináptica do encéfalo. A atividade
neuronal gerada em decorrência de interações com o ambiente pré e pós-natal influencia a
estrutura e a função do sistema nervoso, além da construção de sua circuitaria.
A história de interação de um indivíduo com o ambiente, i.e., sua experiência
acumulada, molda os circuitos neurais, determinando seu comportamento. Em alguns
casos, as experiências funcionam primariamente como gatilhos que ativam alguns
comportamentos inatos. Mais freqüentemente, entretanto, experiências desenvolvidas em
períodos específicos no início da vida (referidos como períodos críticos) determinam um
repertório comportamental no indivíduo adulto. Estes períodos críticos influenciam
comportamentos diversos incluindo laços maternais, preferências sexuais e aquisição de
linguagem, entre outros.
Embora seja possível identificar conseqüências comportamentais de determinados
estímulos que foram apresentados em períodos críticos para determinadas funções, suas
bases biológicas ainda não estão completamente esclarecidas. Talvez o exemplo mais bem
investigado relacione-se ao período crítico no estabelecimento da visão. Alguns estudos
mostraram que a experiência é traduzida em padrões distintos de atividade neuronal que
influenciam a função e a conectividade dos neurônios relevantes. No sistema visual (e em
outros sistemas também) a competição entre aferências com diferentes padrões de
atividade é um determinante importante na consolidação dos padrões de conectividade. Em
um axônio aferente, padrões de atividade correlatos tendem a estabilizar as conexões.
Quando padrões normais de atividade são rompidos (experimentalmente, em animais, ou
patologicamente, em humanos) durante um período critico na infância, a conectividade no
córtex visual é alterada, assim como a função visual. Se não é feita a manutenção destes
padrões até o final do período critico, estas alterações estruturais da circuitaria nervosa
dificilmente se restabelecem posteriormente.
A conectividade nervosa estabelecida ao longo do desenvolvimento normal
possibilita ao encéfalo armazenar vasta quantidade de informações que refletem a
experiência específica daquele individuo. Como esperado, a construção dessa
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Neurociências
conectividade que tanto influencia o desenvolvimento do sistema nervoso gera alterações

maiores nos estágios iniciais de desenvolvimento. Assim, em um animal adulto, o sistema
nervoso se torna gradativamente mais refratário a lições da experiência e os mecanismos
celulares que medeiam as alterações da conectividade neuronal se tornam menos plásticos.
Integração entre Circuitos I: o Modelo de Redes

O conceito de que no córtex cerebral há domínios discretos dedicados mais ou
menos exclusivamente a algumas funções cognitivas, tais como discriminação visual,
linguagem, atenção espacial, reconhecimento de face, retenção de memória, memória
operacional, etc., tem sido questionado devido à falta de evidências conclusivas que o
apóiem. Em seu lugar, modelos de redes neurais têm sido apresentados como uma
alternativa mais coerente com as evidências disponíveis sobre seu funcionamento.
Em 1949, Donald Hebb hipotetizou uma forma de plasticidade sináptica
proporcionada por uma continuidade temporal das atividades pré e pós-sinápticas. Além de
acreditar que as conexões sinápticas eram as bases das associações mentais, ele foi além
do simples conexionismo dos behavioristas. Primeiro, ele argumentou que uma associação
não poderia ser localizada numa simples sinapse. Ao contrário, os neurônios estariam
agrupados em “assembléias de células” e esta associação era distribuída nas suas
conexões sinápticas. Segundo, Hebb rejeitou a noção de que a relação estímulo-reposta
poderia ser explicada somente por um simples arco reflexo conectando neurônios sensoriais
a neurônios motores. Assim, era necessário postular “um mecanismo central que explicasse
o atraso existente entre o estímulo e a resposta que é tão característico do pensamento”
(Hebb, 1949). Seguindo as idéias do neurofisiologista Lorente de Nó, Hebb acreditava que a
estimulação sensorial poderia iniciar padrões de atividade neural que eram mantidas
centralmente pela circulação em loops de feedbacks sinápticos. Tal “atividade reverberante”
torna estes padrões possíveis para as respostas que são subseqüentes aos estímulos
posteriores ao atraso. Em resumo, Hebb hipotetizou um “mecanismo com fundamentos
duplos” da memória. A atividade neural reverberante era o fundamento da memória de curta
duração, enquanto as conexões sinápticas eram o fundamento da memória de longa
duração. Desta maneira, Hebb propôs que: “A persistência ou repetição de uma atividade
reverberante tende a induzir mudanças celulares permanentes que promovem estabilidade
no sistema” (Hebb, 1949, pág. XVII).
Esta proposição pode ser precisamente colocada da seguinte forma: quando um
axônio da célula A repetidamente ou persistentemente dispara, alguns processos de
crescimento ou mudanças metabólicas acontecem em uma ou em ambas as células (A ou
B) de tal modo que a eficiência de A, uma das células que estão agindo sob B, é
aumentada.
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Além disto, Hebb hipotetiza uma função específica para esta “sinapse hebbiana”: a
conversão da memória de curta duração em memória de longa duração pela estabilização
de padrões de atividade reverberante. Uma vez que este padrão de atividade foi
armazenado nas conexões sinápticas, ele pode ser resgatado repetidamente a partir da
excitação de neurônios sensoriais ou a partir de outros padrões de atividade reverberante.
A hipótese de Hebb foi verificada décadas depois com a descoberta da potenciação
de longa duração, LTP (do inglês, long-term potentiation) (Fig. 3). A LTP é um estreitamento
da conexão entre dois neurônios que resulta de uma estimulação simultânea de ambos e
pode ser induzida experimentalmente aplicando-se uma seqüência de pequenos estímulos
de alta freqüência na célula nervosa. Este estreitamento pode durar de minutos a horas (in
vitro) ou de horas a dias ou meses (in vivo).
Figura 3. Modelo representativo do funcionamento da Potenciação de Longa-Duração (LTP). Os

receptores NMDA (vermelho) constituem a maquinaria molecular da aprendizagem. O
neurotransmissor é libertado durante atividade basal e durante a indução de LTP (topo, à esquerda).
A expressão de LTP pode dever-se à presença de mais receptores AMPA (receptores em amarelo, à
esquerda, abaixo) ou à presença de receptores AMPA mais eficientes (à direita, abaixo) (disponível
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Neurociências
em www.braincampaign.org - 09/06/2009).
Pela eficiência aumentada da transmissão sináptica, a LTP aumenta a habilidade de

dois neurônios, um pré-sináptico e outro pós-sináptico, de comunicarem-se através da
sinapse. O mecanismo preciso para este aumento da transmissão ainda não é bem
estabelecido, em partes porque a LTP é controlada por múltiplos mecanismos que variam de
acordo com a região em que acontecem, a idade do animal em questão e espécie.
Entretanto, nas formas de LTP mais compreendidas, a melhora desta comunicação é
predominantemente feita através do aumento da sensibilidade das células pós-sinápticas
em receber sinais das células pré-sinápticas. Estes sinais, na forma de moléculas de
neurotransmissores, são recebidos por receptores presentes na superfície da célula pós-
sináptica. Este aumento de sensibilidade é devido não somente ao aumento da atividade
dos receptores já existentes na superfície, mas também por um aumento do número destes
receptores.
Interessantemente, a LTP compartilha muitas características com a memória de
longa duração, o que faz dela uma candidata muito atrativa como um mecanismo celular do
aprendizado. Por exemplo, a LTP e a memória de longa duração dependem da síntese de
novas proteínas, possuem propriedades associativas e podem durar potencialmente vários
meses. A LTP também pode responder por vários tipos de aprendizado, desde o
relativamente simples condicionamento clássico presente em todos os animais, até
respostas mais complexas, como a cognição observada em humanos.
De acordo com essa concepção, a alteração estrutural leva ao armazenamento da
informação podendo explicar o fenômeno da memória. Este modelo postula que todas as
representações cognitivas consistem em redes de neurônios cuja atividade foi associada
pela experiência (estímulos repetidos). Nesse contexto, pode-se assumir que memórias
filogenéticas correspondem a redes que se consolidaram ao longo das gerações e não
necessitam de experiência individual para serem funcionais, embora possam ser
aprimoradas pela experiência individual.
Se considerarmos que um neurônio tipicamente recebe informações de cerca de 104
neurônios e, por sua vez, projeta-se para outros 104 neurônios e, que o encéfalo humano
contém pelo menos 1011 neurônios, isto significa dizer que pelo menos 1019 conexões
sinápticas são formadas no cérebro. Entretanto, a complexidade de seu funcionamento é
evidentemente maior, em particular quando se considera os arranjos seqüenciais pelos
quais uma informação pode viajar ao longo de seqüências de neurônios. Quanto mais
freqüentes as exposições a estímulos relevantes, mais fortes tornam-se essas conexões.
Como conseqüência, a informação tende a ser arquivada de maneira relacional. Isso
permite entender porque a recordação envolve, usualmente, categorias. Por exemplo, ao
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pedirmos para uma pessoa listar todos os animais de que se recorda, não raro a lista
conterá animais agrupados por categorias de similaridade, ou seja, quadrúpedes, aves,
animais aquáticos, invertebrados etc. O mesmo ocorre em relação a alimentos; a
recordação também será categórica (frutas, verduras, legumes, carnes etc.). Isso ocorre
porque o aumento de atividade eletrofisiológica em determinados circuitos neurais (que
levam à recordação de uma dada informação) tende a estimular a atividade em circuitos
relacionados. Assim, quando aprendemos que determinado estímulo se refere a um
determinado conceito, estamos na verdade fazendo associações com conceitos que já
conhecemos (associando nós de uma rede com outros). Então, quando visualizamos a
imagem de uma maçã caindo, integramos todas as informações disponíveis (cor, forma,
contexto, movimento) com os circuitos já consolidados previamente e que em algum
momento foram associados ao conceito “maçã”. O mesmo vale para uma outra modalidade
de estímulo, ou seja, um som específico que atribuímos como característico de um
determinado animal, o cheiro de uma comida que está intimamente ligado com o seu sabor
etc.
Integração entre Circuitos II: Ação e Percepção
Todas as formas de comportamento adaptativo requerem o processamento de um
fluxo de informação sensorial e sua transdução em uma série de ações direcionadas a um
objetivo. Desde a mais primitiva espécie animal, todo o processo é regulado por feedbacks
externos (ambiente) e internos (Fig.4). Esse padrão de funcionamento torna o organismo
apto a forragear, fugir de predadores, lutar e reproduzir-se.
Figura 4. Uma das finalidades da percepção é permitir uma interação com o ambiente. Interações
podem incluir andar de um lugar para outro, pegar um objeto, conversar com uma pessoa ou dirigir
um carro. De modo circular, tais ações afetam diretamente nossa percepção do mundo. Esta
interdependência entre ação e percepção é ilustrada pelo “Ciclo Percepção-Ação” da figura acima. A
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Neurociências
visão que temos na integração sensório-motora é que em vários aspectos do comportamento, ações
motoras e processos sensoriais estão conectados inseparavelmente e, desta forma, precisam ser
estudados juntos.
O sistema nervoso evoluiu, sobretudo nos mamíferos, de tal forma que uma grande
complexidade estrutural e funcional foi alcançada não tanto pelas vias aferentes,
responsáveis por canalizar as informações sensoriais, ou pelas vias eferentes, responsáveis
por emitir as respostas motoras, mas por circuitos neurais que intermedeiam essas vias de
entrada e saída. Os complexos circuitos neurais que se localizam entre as vias sensoriais e
motoras são os principais responsáveis pela riqueza, flexibilidade e plasticidade de
comportamentos observados. Isso se manifesta na enorme diversidade de estímulos que
podem ser reconhecidos pelos sistemas sensoriais, na multiplicidade de graus de liberdade
com que ações são organizadas pelos sistemas motores e, sobretudo, pela rica e plástica
relação que se estabelece entre esses dois conjuntos.
A progressiva elaboração dos circuitos neurais pode ser entendida como uma
conseqüência da seleção de ações mais vantajosas (organizadas por circuitos “pré-
motores”) em resposta à identificação seletiva de estímulos específicos (realizada por
circuitos “perceptivos”), provavelmente pressionada por fatores ambientais. Podemos supor
então que, ao tornar-se cada vez mais complexo, o funcionamento dos circuitos neurais que
organizam a integração sensório-motora expressa aquilo que chamamos de “percepção”,
“atenção”, “aprendizado”, “memória”, “ação” e, por fim, “consciência”. Esses rótulos estão
longe, em sua maioria, de uma definição completa e consensual. Eles são, mais
provavelmente, o resultado das limitações que ainda temos em compreender a essência do
funcionamento do sistema nervoso, não se constituindo em entidades separadas e
independentes da função neural.
Desta forma, se considerarmos que a percepção do mundo, onde “perceber” algo,
derivado do latim, significa “apoderar-se” dele, logo veremos que não há percepção sem que
alguma forma de atenção esteja em jogo. E é só por meio da percepção atenta que temos
de um estímulo que sentimos, de um evento que presenciamos ou de uma resposta que
emitimos, que poderemos mais tarde nos lembrar desse objeto, desse evento ou dessa
resposta, resgatando uma memória arquivada por meio de um processo de aprendizado. E,
de forma um tanto óbvia, todo trabalho investido em se “apoderar” do mundo, “arquivá-lo” e
“resgatá-lo”, seria inútil e sem sentido se não usássemos essa informação na organização e
emissão de uma ação sobre o mundo, com ele interagindo de forma contínua e coerente,
permitindo nossa permanência nesse mesmo mundo, apesar de seus constantes desafios.
Percepção envolve Ação
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Perceber algo geralmente requer alguma ação por parte de quem esta percebendo.
Freqüentemente temos que olhar (direcionar os olhos) para ver, fazendo uma varredura
visual do ambiente até que o objeto de desejo seja encontrado. Da mesma forma, para um
som ser audível, temos que direcionar nossos ouvidos em sua direção. Quando tocamos um
objeto, ele é mais facilmente identificado se for explorado pelos nossos dedos.
Todos estes exemplos demonstram que a percepção é um processo ativo que
funciona para direcionar e otimizar o comportamento através do seu refinamento. Além
disso, uma vez que um objeto tenha sido percebido, podemos decidir se iremos nos
aproximar ou nos afastar. Ao ouvir um barulho podemos responder a ele ou ficar quieto. Ao
identificar um objeto pelo toque podemos descartá-lo ou mantê-lo conosco. Em cada um
destes casos nosso comportamento depende do que é percebido.
A orientação da percepção por meio de uma ação induz uma distinção interessante
entre os vários sentidos que tem a ver com a proximidade do observador em relação ao
objeto percebido. Tocar e saborear algo requer um contato direto entre o observador e a
fonte de estimulação. Cheirar também é um certo contato com a fonte de estímulação;
substâncias químicas voláteis são diluídas conforme a distância da fonte aumenta; desta
forma, o cheirar funciona mais eficientemente para substâncias que estão próximas. Em
contraste, ver e ouvir,não dependem tanto deste contato. Os olhos e os ouvidos podem
capturar a informação originária de fontes remotas, neste sentido eles funcionam como um
radar. Eles permitem que o indivíduo faça contato perceptual com um objeto que não está
próximo, eles estendem a percepção para um mundo além dos limites dos dedos e do nariz.
Estes dois sentidos substituem o deslocamento até a fonte de estímulo, permitindo que o
indivíduo explore a vizinhança.
Organização e Hierarquia no Ciclo Percepção-Ação

Em todo o sistema nervoso central, o processamento de seqüências de ações
guiadas sensorialmente segue um fluxo a partir de estruturas geralmente posteriores
(sensórias), em direção a estruturas anteriores (motoras), com feedbacks em todos os
níveis. Assim, no nível cortical, a informação flui de maneira circular ao longo de uma série
de áreas hierarquicamente organizadas e entre conexões que constituem o ciclo percepção-
ação (Fig. 5).
Ações automáticas e/ou muito freqüentes em resposta a estímulos sensoriais são
integradas em níveis mais inferiores do ciclo, nas áreas sensoriais da hierarquia (perceptiva)
e em áreas motoras da hierarquia (executiva). Comportamentos mais complexos, guiados
por estímulos também mais complexos e distantes no tempo, requerem uma integração em
níveis corticais mais superiores de ambas as hierarquias (perceptuais e executivas),
basicamente áreas superiores de associação sensorial e córtex frontal anterior.
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Neurociências
Figura 5. O substrato cortical do ciclo percepção-ação. Em azul está representado o lado da

percepção no ciclo e em vermelho o lado da ação. Os retângulos vazios representam áreas
intermediárias ou subáreas do córtex. As setas representam vias anatomicamente identificadas em
macacos e ressaltam a conectividade recíproca entre os córtices posterior e anterior (retirado de
Fuster, 2006).
Para garantir as interações entre as duas hierarquias corticais, longas fibras cortico-
corticais conectam recíproca e topologicamente as áreas da hierarquia perceptual com as
áreas equivalentes executivas. Assim, áreas pré-motoras se conectam com áreas sensoriais
associativas relativamente inferiores (áreas inferiores de ambas as hierarquias), enquanto
áreas frontais anteriores se conectam com áreas associativas superiores do córtex posterior
(áreas superiores). Do mesmo modo, há evidências anatômicas de conexões ordenadas
descendentes do córtex frontal anterior ao córtex pré-motor e deste para o córtex motor. Em
cada estágio deste processo em cascata na hierarquia executiva, a próxima ação de uma
seqüência é determinada por dois tipos de influências: 1) o processamento dos aspectos
globais da seqüência nas áreas frontais superiores e 2) os sinais sensoriais que estão
ocorrendo naquele momento. A ativação progressiva de áreas frontais inferiores que
processam a ação é cumulativa. Da mesma forma, as entradas sensoriais associativas do
córtex posterior são progressivamente mais concretas e mais dependentes de um contexto
espacial e temporal imediato. Sinais que necessitam ser processados em um contexto
temporal mais amplo (episódico) requerem ações que dependem de uma integração
temporal em graus mais elevados. Estes sinais são processados no córtex posterior e
concomitantemente nas áreas superiores do córtex frontal anterior (rostral). Em ambos os
córtices, os sinais são integrados simultaneamente com as informações prévias (as regras
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de uma determinada tarefa e as instruções eventualmente dadas) antes mesmo de serem

enviados para o processamento em estágios inferiores da hierarquia frontal. Sendo assim, o
córtex frontal anterior integra as mais elaboradas associações da informação sensorial que
estão armazenadas em redes dos córtices sensoriais e motores.
Se considerarmos que a execução de uma ação não se limita, em geral, a uma única
oportunidade, temos uma grande vantagem ao construirmos representações perceptivas do
mundo e guardá-las na memória, podendo usar essa informação em uma próxima
oportunidade em que ações semelhantes sejam requeridas. Esse aprendizado permite um
refinamento a longo prazo de nossas ações, fornecendo subsídios para ações mais
complexas, mais integrativas e de maior alcance adaptativo.
O Sistema de Neurônios Espelho

Quando temos que explicar uma ação humana, a neurociência tem duas abordagens
maiores: a sensório-motora e a ideomotora. Na abordagem sensório-motora, tudo começa
com uma estimulação, e as ações são consideradas uma conseqüência desta estimulação.
De modo inverso, na abordagem ideomotora, tudo começa com uma intenção, e as ações
são consideradas como o meio de realizar estas intenções, isto é, as ações são vistas como
o meio para determinados fins que seguem a intenção.
Assim como vimos acima, existe uma sobreposição e uma dependência entre as
percepções e as ações, tanto nos seus sistemas quanto nas respostas comportamentais.
Desde modo, fica difícil imaginar que nossas ações sejam meras escravas de nossas
percepções.
Em uma situação em que uma pessoa observa as ações de outra pessoa, a
abordagem ideomotora oferece uma predição muito consistente. Considerando o fato de
sermos seres sociais, nós humanos passamos boa parte do nosso tempo observando as
outras pessoas, tentando entender o que elas estão fazendo e por que. Esta “comunicação
primitiva” é essencial para estratégias de sobrevivência e sociabilidade do indivíduo.
Contudo, como reconhecemos e entendemos as intenções das outras pessoas? Quais as
bases neurofisiológicas desta habilidade? A recente descoberta de neurônios espelho tem
inspirado uma série de estudos em busca destas respostas.
O reconhecimento de uma ação foi inicialmente concebido como baseado apenas no
sistema visual (abordagem sensório-motora); isto é, numa análise dos componentes visuais
da ação específica, do agente envolvido, do objeto ao qual a ação é direcionada e do
contexto no qual ela está inserida. Assim, a interação de todos estes elementos identificados
visualmente permitiria ao observador reconhecer e entender uma ação feita por outra
pessoa. Uma hipótese alternativa admite que a observação de uma ação estimularia uma
“representação motora interna” que envolveria as mesmas estruturas neurais envolvidas na
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Neurociências
execução da ação observada; de acordo com esta concepção, embora nenhum movimento
efetivo seja executado, a representação motora evocada pela observação permitiria o
reconhecimento do significado do que é visto. Com a descoberta de que há ativação de
neurônios na região do córtex pré-motor durante a observação de ações, os assim
denominados “neurônios espelho”, e considerando que esta hipótese não exclui a
possibilidade de que outro processo cognitivo, baseado na descrição do objeto e do
movimento, possa participar desta função, esta hipótese motora vem ganhando cada vez
mais adeptos. Todavia, tem sido proposto que os neurônios espelho formam um sistema
que combina observação e execução – percepção e ação.
Neurônios espelho são um grupo particular de neurônios cuja atividade aumenta
durante a execução de uma ação motora particular ou da observação da mesma ação
desempenhada por outro indivíduo. Sua descoberta ocorreu durante experimentos com
macacos envolvendo o controle motor de ações desempenhadas com as mãos, como por
exemplo, pegar/manipular um objeto ou alimento. Os descobridores destes neurônios, entre
eles Giacomo Rizzolatti, implantaram eletrodos no córtex frontal inferior de macacos (área
F5) e registraram a atividade dos neurônios individualmente enquanto os animais
alcançavam pedaços de alimentos. Eles observaram que alguns destes neurônios (situados
no setor superior da área F5), disparavam não somente quando o macaco pegava o
alimento, como também quando ele observava outro indivíduo (macaco ou humano)
desempenhando esta ação, como se a mesma tivesse sido “refletida” no seu córtex motor
(Fig. 6). Estudos posteriores mostraram que pelo menos 10% dos neurônios envolvidos no
controle motor de ações desempenhadas com as mãos são “neurônios espelho”.
Estes estudos mostram que além do reconhecimento da ação motora por meio de
informações visuais, o sistema de neurônios espelho lida com informações mais abstratas, a
fim de reconhecer o objetivo final da ação. Esta resposta, baseada também em outras
modalidades, isto é, auditiva, sugere que a atividade espelho depende da riqueza das
experiências próprias do observador e de ações presentes em seu repertório motor
(memória de planos motores). Entretanto, aparentemente, o reconhecimento do objetivo
final de uma ação baseado em exposição prévia do observador só parece possível se
houver dicas suficientes no ambiente acerca da intenção desse outro indivíduo. Isto é, uma
ação implica em um agente e um objetivo. Conseqüentemente, o reconhecimento de uma
ação implica no reconhecimento de um objetivo e, em outra perspectiva, o entendimento da
intenção do agente: “João vê Maria pegando uma maça”. Vendo sua mão movimentando-se
em direção à maça, ele reconhece o que Maria fará (pegará algo), e também reconhece que
Maria quer pegar uma maça, isto é, o estímulo é ligado à intenção do agente.
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Figura 6. Experimento feito com macacos em

que ele executa uma ação (pegar o amendoim)
e também observa esta mesma ação sendo
feita pelo experimentador. À direita está um
esquema que exemplifica a atividade dos
neurônios espelho nas duas situações (retirado
de Rizzolatti,1996).
Desta maneira, o sistema de neurônios espelho oferece um modelo de integração

entre percepção e ação bastante interessante. Através do reconhecimento de ações e, não
apenas pelo sistema sensorial, mas também no próprio sistema motor do observador, ocorre
uma integração online das informações recebidas do ambiente - a ação observada sendo
executada por outra pessoa - e também entre informações presentes no sistema nervoso do
observador - representação motora da ação observada.

Neurociências
Fisiologia Sensorial

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Introdução
O sistema nervoso de qualquer organismo pode ser modelado em sua forma mais
simples como um sistema que possui entrada de dados (células receptoras), nenhum ou
algum processamento do sinal (interneurônios) e um sistema de saída (células efetoras)
(Fig. 1).
Figura 1 – Modelo simplificado do arranjo de um Sistema Nervoso.
O arranjo mais simples possível é chamado arcorreflexo, em que uma única célula
recebe o estímulo em um ponto do organismo e diretamente atua como uma célula efetora.
Esse arranjo já permite uma série de respostas comportamentais úteis à sobrevivência.
Eventualmente, modificou-se para um arranjo com duas células: uma receptora e outra
efetora, formando um arcorreflexo monossináptico (e.g. reflexo patelar). Ressalta-se que a
comunicação entre as duas células já poderia representar uma forma de modulação do sinal
e, portanto, flexibilizar o comportamento (Eckert, 1983).
Há ainda o arcorreflexo polissináptico, com pelo menos um interneurônio entre as
células receptora e efetora. A existência do interneurônio nessa interface deu origem aos
gânglios – acúmulos de corpos celulares no organismo. Em última instância, nosso cérebro
é um gânglio (ou um grande conjunto deles). O mais complexo que se tem conhecimento.
A rede neural mais simples em organismos vivos é aquela encontrada nos
Celenterados. O arranjo das células nervosas é difuso, com cruzamentos desordenados de
axônios, e sem preferência de direção do estímulo conduzido. Em alguns Celenterados há
um início de organização em direção a arcos-reflexo monossinápticos, que é presente em
todos os outros organismos multicelulares (com tecido verdadeiro). Apesar disso, os arcos-
reflexo polissinápticos são mais comuns.
As células receptoras, de agora em diante chamadas receptores sensoriais, são
responsáveis por transduzir (isto é, transformar uma forma de energia em outra) o estímulo

ambiental em um sinal elétrico que possa ser processado pelo encéfalo. Os receptores
tendem a ser muito específicos e, em conjunto com o arranjo no qual estão dispostos em um
órgão no animal, respondem preferencialmente a um tipo de estímulo.
A luz parece ser a melhor forma de energia para se localizar e locomover no espaço
– seu desenvolvimento se deu independentemente em diversos grupos animais. Ela tem
excelentes propriedades direcionais e a maior velocidade de deslocamento conhecida,
sendo muito fiel para retratar mudanças no ambiente; portanto, útil a presas e predadores.
Por outro lado, animais com hábitos noturnos tiveram favorecimento de outros
sistemas sensoriais, como, por exemplo, a ecolocalização de morcegos. Aqueles que
dependem do sistema visual têm mecanismos de compensação das condições mínimas de
luz. Gatos possuem um tecido refletivo na retina (chamado Tapetum lucidum), que faz com
que a luz passe duas vezes por ela. Outros mamíferos, como os Tarsius, têm globos
oculares extremamente grandes.
É importante ressaltar que não há sistemas mais ou menos evoluídos, mas apenas
aqueles mais adequados para um determinado ambiente. Nesse sentido, há animais que
tem visão e audição pobres, sendo dependentes dos sentidos químicos para encontrarem
presas (e.g.: cobras). Olfato e gustação parecem extremamente adaptativos para algumas
funções, pois persistem em diversos grupos.
Visão
A faixa de luz visível pelos animais compreende-se do infravermelho até o
ultravioleta (Fig. 2).
Figura 2 – Faixa de luz

visível (em destaque)
utilizada pelos receptores
dos organismos vivos.
Comprimento de onda em
nanômetros. Modificado de
Carlson (2004).
O fato de nos mais diversos organismos a faixa de energia eletromagnética captada

ser tão restrita deve-se aos comprimentos de onda acima (comprimento de onda maior) do
vermelho não carregarem energia suficiente para um efeito apreciável e aqueles abaixo do
violeta carregarem muita energia, a ponto de serem danosos para os tecidos (raios
ultravioleta A e B são danosos à pele).
Mecanismo de transdução
Mesmo alguns organismos unicelulares apresentam resposta à luz – uma simples
fototaxia (movimento em direção à luz). Mas mais do que gerar uma resposta intracelular

Neurociências
pela estimulação luminosa, para que possamos enxergar, precisamos formar uma imagem
representativa do ambiente que nos rodeia. Isso só é possível nos organismos
multicelulares e na presença de olhos – órgãos especializados para captação de luz – os
quais surgiram independentemente em diversos grupos animais.
Apesar das diferenças no formato e no funcionamento, o mecanismo básico envolve
a captação da luz e a estimulação de fotorreceptores específicos. A molécula fundamental
para esse processo é uma combinação entre opsina (uma proteína) e um carotenóide. Todo
fotorreceptor possui essa combinação em suas membranas. A combinação mais
encontrada, tanto em vertebrados como em invertebrados, é entre opsina e Retinal (uma
molécula derivada da Vitamina A).
Essas moléculas se encontram em abundância nas dobras de membrana do receptor
(uma a cada 5 nm em alguns receptores) e mudam sua conformação com a estimulação
luminosa, provocando uma cascata bioquímica no interior da célula. Em última instância, há
uma alteração da atividade eletrofisiológica do receptor, que é transmitida até o Sistema
Nervoso Central (SNC).
Os invertebrados mais bem estudados com respeito
ao sistema visual são os insetos. Eles possuem olhos
compostos por unidades individuais chamadas omatídeos,
cada qual com um receptor sensorial. Este é formado por
um dendrito central de uma célula chamada excêntrica,
rodeado por 6 a 12 células retinulares, as quais enviam
uma densa profusão de microvilos em direção ao dendrito
da célula excêntrica, formando o rabdômero (Fig.3).
A formação de imagem nesse tipo de olho se dá
pela composição das diversas partes do campo visual
captadas pelos diversos omatídeos, formando um
mosaico. A quantidade de pigmentos visuais é bastante
Figura 3 – Representação de um variável, com alguns crustáceos apresentando até oito
omatídeo do olho composto de
invertebrado. Modificado de diferentes pigmentos em seu sistema visual (Cronin, 2006).
Eckert (1983). Os vertebrados reúnem todos os receptores em um
mesmo local (a retina, Fig. 4A), abrigados por uma câmara com entrada de luz controlada e
intermediada por uma lente, um arranjo que permite a projeção de uma imagem invertida
sobre a retina. A maioria dos grupos possui dois tipos de receptores: cones e bastonetes
(Fig. 4B). Poucas generalizações podem ser feitas quanto ao envolvimento desses
receptores na visão de cores e outras propriedades de uma imagem (e.g. brilho), dado que
as variações entre os grupos são grandes. O comprimento de onda que será absorvido em
cada receptor é também bastante variável. A maioria dos primatas possui na retina dois

tipos de cones (cada um com um pigmento) mais bastonetes (Casagrande e col., 2006).
Alguns têm três tipos de cones, incluindo os humanos, e todos os primatas têm os cones
concentrados na porção central da retina (fóvea), uma depressão formada pelo afastamento
das camadas celulares superiores (Fig. 4B).
Figura 4 – (A) Olho em câmara de vertebrados.

(B) Detalhe da fóvea no centro da retina,
evidenciando algumas camadas celulares da
retina. Modificado de Lent (2006).
A fóvea é o ponto de maior acuidade visual, sendo processado por quase 50% do
córtex visual primário (V1) (Fig. 5), ainda que responda por menos de 1% do campo visual.
Essa discrepância de valores é resultado da extrema fidelidade com a qual as imagens
desse ponto do campo visual são tratadas. Conforme se afasta do centro da retina em
direção à periferia, menos cones e mais bastonetes são encontrados, com virtualmente
nenhum cone nas regiões mais periféricas, o inverso do centro da fóvea.
Os bastonetes são mais sensíveis à luz do que os cones (podendo responder a
apenas um fóton – o equivalente à luz de uma vela a 1 km de distância). Eles são
extremamente importantes para a detecção de bordas e movimento. Semelhantemente, é
pela maior acuidade visual dessas células que tendemos a enxergar imagens acinzentadas
(ou simplesmente sem cor) em condições de pouca luz, como em um quarto escuro. A
percepção de cores através dos cones se dá pela interação da estimulação dos três tipos de
pigmento a todo instante, constituindo todas as tonalidades de cores que enxergamos.
Neurônios com axônios longos, as células ganglionares (Fig. 4B), formam o nervo
óptico que transmite a alteração da atividade eletrofisiológica resultante da estimulação dos
fotorreceptores em direção ao V1 (Fig. 5).
Esse caminho, porém, não é direto. Há um cruzamento de parte das fibras que se
dirigem ao SNC (Fig. 6). As células ganglionares do hemicampo temporal em ambos os
lados não se cruzam e seguem ipsilateralmente. As fibras do hemicampo nasal se cruzam
no quiasma óptico e seguem para o lado contralateral. Dessa forma, toda a estimulação do
lado direito irá para o córtex esquerdo e vice-versa.

Neurociências
Figura 5 - Córtex visual primário (V1), em vermelho, no córtex occipital do homem, do gato e do rato.
Encéfalos fora de escala. Modificado de Bear e col. (1996).
Note que há uma extensa área de sobreposição dos campos esquerdo e direito (Fig.
6). É ela quem permite a visão binocular, responsável pela visão em profundidade e criada
pela proximidade entre os dois globos oculares (voltados, portanto, para um mesmo lado da
cabeça), algo constante em animais carnívoros. Herbívoros, por outro lado, tem os olhos em
lados opostos da cabeça, o que reduz sensivelmente a visão binocular, mas potencializa a
visão em todas as direções, permitindo que esses animais percebam a aproximação de
predadores independentemente do local para o qual eles estejam direcionados.
Figura 6 – Cruzamento das fibras do

nervo óptico e hemicampos
contemplados em cada hemisfério
cerebral. Modificado de Bear e col.
(1996).
Após o cruzamento no quiasma óptico, todas as fibras passarão pelo Tálamo, mais
especificamente pelo Núcleo Geniculado Lateral (NGL). Esse núcleo tem seis regiões
citoarquitetônicas muito bem definidas nos primatas. As duas camadas mais inferiores
possuem neurônios com corpos celulares grandes e trazem as informações vindas dos
bastonetes: é a camada magnocelular. As outras quatro camadas, chamadas
parvocelulares, têm neurônios com corpo celulares pequenos e trazem informações vindas
dos cones com pigmentos sensíveis à luz vermelha e verde. Entremeado nessas camadas,
há células chamadas koniocelulares que trazem informações dos cones sensíveis ao azul.
Após o estímulo passar pelo NGL, ele se dirige à V1, no córtex occipital, que tem um
mapa retinotópico, isto é, tem uma região cortical para cada região na retina atendida por
uma célula ganglionar. Lembrando que a região compreendida pela fóvea corresponde a

quase 50% de V1, fica claro que a fidelidade entre célula ganglionar e receptor sensorial
deve ser altíssima na fóvea (ou pelo menos na fóvea central – algo como 1:1) e que esse
número deve ser bem reduzido nas regiões periféricas da retina, com cada vez mais células
receptoras para cada célula ganglionar. Esse fato introduz o conceito de Campo Receptivo:
a área da retina para qual uma célula ganglionar responde é maior quanto mais nos
afastamos do centro da retina.
Audição
A cóclea é uma estrutura tubular enrolada sobre si mesmo com três câmaras
internas chamadas escalas, preenchidas por líquidos de composições específicas (Fig. 7)
(Carlson, 2005).
Figura 7 - Representação do sistema

auditivo humano. Modificado de Bear e col.
(1996).
O sistema auditivo humano está limitado a perceber freqüências entre 20 Hz e

20.000 Hz, devido a características implícitas à cóclea, mais especificamente, à membrana
basilar dentro dela (Fig. 8), que não vibra com sons fora dessa faixa de frequências.
Diferentemente da visão, o intervalo de frequências captado por outros animais não é
semelhante. Infra-sons (freqüências abaixo de 20 Hz) são utilizados por tigres e elefantes
como forma de comunicação, podendo ser feita a quilômetros de distância. No outro
extremo, morcegos têm faixa de audição começando em 10.000 Hz e indo até cerca de
120.000 Hz. Os superagudos, freqüências acima de 10.000 Hz, têm comportamento
extremamente direcional e reflexivo, características que se tornam ainda mais exacerbadas
nos ultra-sons, freqüências acima de 20.000 Hz. Emitindo sons acima de 50.000 Hz, os
morcegos podem perfeitamente voar no escuro total, conseguindo desviar dos obstáculos
presentes em seu caminho. Eles utilizam-se do que chamamos de sonar: um mecanismo de
ecolocalização baseado na percepção da posição de objetos no espaço pela geração de um
som e recaptura do mesmo após reflexão.
Mecanismo de transdução
A energia sonora no ambiente chega até ao tímpano pelo canal auditivo, parte da
Neurociências
orelha externa (Fig. 7). Essa energia, com todas as suas características de frequência e
intensidade, é transmitida pelo tímpano aos ossículos da orelha média (martelo, bigorna e
estribo), que farão a transmissão para a janela oval na cóclea, integrantes da orelha interna.
A interação existente entre os três ossículos causa uma amplificação de até 1,6x na energia
sonora que recebemos e a diferença de área entre o tímpano e a janela oval outra de 20x,
resultando em um ganho em amplitude de 32x aproximadamente.
A vibração transmitida à janela oval é então transferida para os líquidos internos da
cóclea e para a membrana basilar. Como a cóclea é um tubo inextensível, a Janela
Redonda funciona como uma válvula de escape, permitindo a movimentação dos líquidos
internos e vibração nas membranas.
Diferentes regiões da membrana basilar são mais sensíveis a freqüências distintas.
Sons agudos – altas freqüências – são melhores percebidos no início dela. Sons médios, no
meio, e sons graves – baixas freqüências – no final da cóclea. Tais constatações não
significam que um som fará com que só aquela região vibre. Pelo contrário, todo som
causará vibração por toda a membrana basilar, mas ela será muito pequena fora do ponto
de ressonância, não alterando a atividade eletrofisiológica em outros pontos da membrana.
O órgão de Corti é o responsável pela transdução da energia sonora em impulsos
nervosos. Nele se encontram os receptores sensoriais (mecanorreceptores) que iniciam a
despolarização que será conduzida ao córtex cerebral, inicialmente pelo nervo coclear (Fig.
8).
A membrana tectorial no órgão de Corti é uma estrutura rígida e fixa. A vibração da
membrana basilar acaba causando o deslocamento de todo esse órgão; os cílios dos
mecanorreceptores, no entanto, não se deslocam por estarem imersos e fixos na membrana
tectorial, movimentando-se em relação à célula e causando abertura ou fechamento de
canais pelo estiramento da membrana celular e influxo de potássio e cálcio. Isso resultará
em despolarização ou hiperpolarização dos receptores e a mensagem transmitida pelos
neurônios bipolares que integram o nervo coclear será maior ou menor freqüência de
disparos.
Figura 8 – Representação esquemática do órgão de Corti. Modificado de Bear e col. (1996).

As fibras nervosas que saem da cóclea fazem

algumas sinapses no trajeto até o Córtex Auditivo
Primário (A1), a mais importante delas no Núcleo
Geniculado Medial (NGM) onde todas fazem sinapse
(Fig. 9).
Todas as fibras que saem do NGM chegam até
A1, formando um mapa tonotópico da membrana
basilar da cóclea com frequências graves mais
anteriores e as agudas mais posteriores. Esse arranjo
permite o que é chamado “Princípio de Localização”:
uma determinada população de neurônios de A1 com
sua atividade alterada indica fielmente uma
determinada frequência de vibração na membrana
basilar (Lent, 2006).
Sistema Vestibular
Associado às estruturas que permitem a
audição, todos os vertebrados contam também com o
sistema vestibular, com o qual podem perceber
Figura 9 – Trajeto percorrido pelos fenômenos de aceleração e postura corporal.
impulsos nervosos provenientes da
cóclea até o córtex auditivo primário Raramente mencionado, esse sistema deve ser
no cérebro. Modificado de Lent (2006). considerado um sexto sentido dos organismos, tendo
íntima relação com o sistema motor, permitindo correções posturais reflexas a estimulações
bruscas e estabilização do olho durante a movimentação corporal (Graf, 2006).
O sistema é composto na maioria dos vertebrados por três canais semicirculares
para percepção de acelerações angulares (rotações) e os otólitos (sáculo e utrículo), para
acelerações lineares (Graf, 2006) (Fig. 10). A presença de três canais semicirculares surge
nos gnastomados, pela adição do canal horizontal, ausente nos agnatas.
Figura 10 – Órgãos do equilíbrio no ouvido humano. Modificado de Bear e col. (1996).

Neurociências
Os canais são completamente preenchidos por líquido e contém uma dilatação

(ampola) com células ciliadas (mecanorreceptores) associadas a uma estrutura gelatinosa
(cúpula). Os movimentos de rotação do organismo causam o deslocamento do líquido em
relação ao canal, resultando em movimentação da cúpula e despolarização ou
hiperpolarização das células ciliadas, como na cóclea.
A maioria das projeções do nervo vestibular vai para um núcleo homônimo na
medula; outras seguem diretamente para o cerebelo. Interessantemente, algumas projeções
vão para os núcleos dos nervos cranianos que controlam o movimento ocular (nervos
cranianos III, IV e VI). Essas projeções permitem o reflexo vestíbulo-ocular que corrige o
movimento dos olhos enquanto andamos ou simplesmente movimentamos a cabeça,
permitindo a formação de imagens estáveis na retina. Pessoas com lesão no nervo
vestibular têm sérias dificuldades em enxergar enquanto se deslocam (Carlson, 2005).
Somestesia
O sistema somatossensorial permite perceber estímulos na pele através de uma
diversidade de receptores sensoriais especializados: modificações nas terminações de
neurônios unipolares que alteram sua atividade eletrofisiológica pela pressão, temperatura
ou dor. Esses neurônios fazem conexões diretas com neurônios motores para permitir
reflexos e evitar eventuais danos à pele (em última instância, ao organismo) – um
arcorreflexo monossináptico como o reflexo patelar.
As vibrissas de ratos e camundongos são também um órgão tátil, utilizado para se
localizarem no ambiente e mais importantes do que os olhos, já que estes têm hábitos
noturnos. Os estímulos somestésicos também são levados ao córtex cerebral via tálamo,
formando um mapa somatotópico do organismo. Assim como na visão, algumas regiões são
mais privilegiadas do que outras, como a ponta dos dedos, lábios e língua tendo os menores
campos receptivos do sistema (e, portanto, as maiores áreas de processamento). O córtex
somatossensorial faz parte do lobo parietal do cérebro humano, no giro pós-central (Fig. 5).
Sentidos químicos
Olfação
As conexões neurais da via olfativa até o córtex sugerem que esse é um dos
sistemas sensoriais mais antigos dos animais. É o único sistema que faz conexões diretas
com o córtex cerebral (córtex olfatório), embora outras conexões neurais conduzam os
estímulos recebidos também ao tálamo, além de conexões com o lobo frontal do neocórtex
e o sistema límbico. São as conexões com o lobo frontal que provavelmente nos permitem
ter consciência dos cheiros ao nosso redor e as conexões com o sistema límbico, os
comportamentos ligados à homeostase e às emoções (Lent, 2006).
O sistema olfativo é um bom exemplo de como o sistema sensorial mais importante a

uma espécie dependerá das pressões seletivas. Cachorros não são capazes de enxergar
em cores como nós enxergamos; por outro lado, são detentores de um olfato apuradíssimo,
frequentemente sendo vistos farejando o chão atrás de algo que lhes interessa. Treinados,
são hoje largamente utilizados para encontrar drogas em bagagens e pessoas soterradas
em terremotos, sendo melhores que os humanos fazendo tais buscas visualmente.
Tubarões também são fantásticos na detecção de odores, podendo perceber uma gota de
sangue em dezenas de litros de água. O caso mais surpreendente, porém, é o das
mariposas: os machos de algumas espécies são capazes de detectar concentrações de
apenas uma molécula do feromônio de atração sexual da fêmea para até 1017 moléculas de
ar. Isso se traduz em conseguir perceber uma fêmea a milhas de distância.
Feromônios são moléculas intraespecíficas que servem à comunicação entre
gêneros – resultando, em última instância, no acasalamento – e também à demarcação de
território entre indivíduos. Fatos como a coincidência do ciclo menstrual entre mulheres que
moram juntas (Weller e Weller, 1995), o reconhecimento do próprio odor em relação ao de
outros indivíduos (Porter e col., 1986 apud Martins e col., 2005) e a preferência por odores
do sexo oposto (Martins, 2005) trazem indícios fortes de que esse mecanismo também
exista em humanos. Alguns desses exemplos nos mostram que nem sempre precisamos
estar conscientes de um estímulo para responder ao mesmo.
Gustação
A gustação está presente na maioria dos vertebrados e depende de receptores
específicos na língua, que detectam cinco qualidades: amargor, acidez, doçura, salinidade e
umami. Há claras razões adaptativas para a seleção de tais receptores. Curiosamente,
felinos não possuem receptores para doçura (Carlson, 2005).
Os animais tendem a ingerir rapidamente tudo o que é doce ou salgado; doçura
indica presença de açúcares, claramente um alimento. Já receptores para sal, indicam a
presença de cloreto de sódio, extremamente importante para o equilíbrio eletroquímico do
organismo. Por outro lado, substâncias amargas ou azedas serão evitadas. Acidez é um
indicativo de decomposição, resultado da ação bacteriana. Já o amargor é um excelente
indicativo da presença de alcalóides potencialmente venenosos produzidos por plantas.
Umami é um sabor relacionado à presença de glutamato monossódico, substância
naturalmente presente em carnes, queijos e alguns vegetais. Um sexto tipo de receptor
poderia também detectar a presença de ácidos-graxos nos alimentos; de fato, trabalhos
recentes indicam respostas celulares causadas pela presença de ácidos-graxos específicos
(Gilbertson e col., 1997 apud Carlson, 2005).
As vias neurais da gustação se dão através do núcleo posteromedial ventral do
tálamo para a base do córtex frontal e para o córtex insular. Outras projeções se dão para a

Neurociências
amígdala e hipotálamo. Sugere-se que a via hipotalâmica sirva para mediar efeitos
reforçadores de sabores doces e salgados.
Outros sentidos
O repertório de estimulações físicas que servem à orientação não se limita àquelas
que podemos perceber. Insetos conseguem se guiar pelo Sol mesmo quando há nuvens no
céu impedindo luz direta. Isso é possível pelo arranjo dos microvilos no rabdômero do
omatídeo (Fig. 3), formando um ângulo de 90° uns com os outros. A estimulação pela luz é
até seis vezes maior nos microvilos que estão paralelos à orientação do vetor de polarização
da luz.
Alguns peixes têm células eletrorreceptoras que são modificações de células ciliadas
da linha lateral. Essas células podem captar correntes elétricas produzidas por tecidos
ativos de outros peixes próximos (e.g., coração) mesmo que eles estejam enterrados sob a
areia do fundo do lago ou oceano, um mecanismo frequentemente utilizado por
elasmobrânquios. Outros peixes são capazes de produzir uma corrente elétrica fraca,
através de uma série de despolarizações sincronizadas das células de seu órgão elétrico. A
corrente gerada flui da parte posterior para a anterior do peixe e qualquer material próximo
que tenha uma condutividade diferente daquela da água causará uma alteração no campo
elétrico, sendo detectado.
A própria linha lateral de peixes e anfíbios é um órgão sensorial. Ela está ausente
nos grupos superiores de vertebrados e é extremamente adaptativa ao ambiente em que
esses organismos vivem. Por outro lado, o mecanismo receptor presente ao longo da linha
lateral é uma célula ciliada como aquela descrita para os órgãos de audição e equilíbrio,
sendo homólogo entre todos os grupos (Graf, 2006). Mais do que isso, as interrelações com
outros mecanorreceptores podem ser traçadas até o nemátoda Caenorhabiditis elegans,
passando pelas drosófilas e apontando para um desenvolvimento evolutivamente precoce
desses receptores (Graf, 2006).
Termorreceptores são extremamente importantes tanto em mamíferos, que precisam
manter sua temperatura regulada, quanto em outros animais que dependem desse tipo de
receptor para capturar presas. Cobras dos gêneros Crotalus e Sistrurus têm
termorreceptores com altíssima sensibilidade, sendo capazes de detectar aumentos de
temperatura tão pequenos quanto 0,002 °C, isto é, detectar um camundongo distante 40 cm
se ele estiver 10°C acima da temperatura ambiente.
O campo magnético terrestre também parece ser um estímulo utilizado por alguns
animais para orientação e deslocamentos de longa distância; entre eles: aves migratórias,
pombos-correio (uma variação do pombo-comum) e as tartarugas-marinhas. Há críticas à
existência da magnetorrecepção, mas os experimentos que a refutam parecem apenas

falhar em detectá-la e não invalidam a existência do mecanismo. Além disso, de fato, tais
animais possuem partículas de magnetita inervadas na região do osso etmóide (crânio)
(Freake e col., 2006). Eckert (1983) relata evidências de que ele possa existir em
salamandras, enguias e até mesmo bactérias.
Conclusões
Os mecanismos sensoriais empregados pelos organismos são os mais diversos
possíveis e produto das pressões seletivas que um ambiente pode gerar. Não há melhores
órgãos e sistemas, mas apenas aqueles mais bem adaptados. A comparação entre grupos
revela que algumas soluções são muito semelhantes, ainda que elas sejam análogas entre
espécies. Estímulos como a luz, disponível na superfície terrestre globalmente, tornaram
possível o desenvolvimento independente de órgãos receptores nos mais diversos grupos.
É provável que outras formas de percepção de estímulos existam. A forma como
percebemos o mundo também não é, necessariamente, a forma como outros animais com
órgãos análogos ou mesmo homólogos o percebem, dado que a área cortical dedicada a um
determinado sistema pode variar imensamente (Catania, 2006). Em última instância,
qualquer observação comportamental merece uma postura cautelosa na busca de quais
estímulos estão moldando um determinado comportamento.

Neurociências
Neurofisiologia da visão
Antônio Carlos da Silva

Laboratório de Ecofisiologia Evolutiva
[email protected]
Introdução
Desde a formação da Terra há bilhões de anos atrás a luz, provavelmente, tem
exercido uma potente força de seleção sobre os organismos vivos. Os milhares de
amanheceres e pores-do-sol desde o início da vida têm levado a evolução dos olhos que
usam a luz para visão e outros fins, incluindo a navegação e noção de tempo. Um pássaro
em uma manhã de primavera ouvindo o canto de outros machos competidores em busca de
uma fêmea para acasalar, um lagarto do deserto buscando abrigo do sol escaldante, ou
uma águia em seu vôo em busca de uma presa - em todos os exemplos, estes animais
precisam de uma acurada informação sobre o que ocorre ao seu redor para decidirem o que
fazer em seguida. A sua decisão poderá ser apropriada somente se a informação oferecida
pelo meio ambiente for corretamente codificada e transformada em sinais que possam ser
processados pelo sistema nervoso central.
Origens evolutivos
No caso da “visão”, embora os olhos apresentem uma variedade de formas,
tamanhos, desenhos ópticos e localização corporal, todos eles fornecem informações
similares a respeito de ondas e intensidade de suas fontes. Logicamente, os olhos podem
ter uma origem monofilética, ou seja, de um único ancestral comum, ou podem ter uma
origem polifilética, surgido mais de uma vez durante a evolução.
Estudos filogenéticos relevaram que olhos evoluíram independentemente em
diferentes grupos sistemáticos, o que nos leva a tentar compreender quais as soluções
encontradas por cada grupo de animais durante o processo de evolução no qual resulta
essa enorme diversidade ( Halder, 1995; Salviani-Plawen e Mayr, 1977).
Estas estruturas (ex. ocelos, olhos compostos, olhos em câmara) que
asseguraram aos organismos “captarem estímulos luminosos”, nos levam a relembrar
Darwin em “como a seleção natural... pode produzir um órgão tão maravilhoso como o olho”
(Darwin, 1859). Os olhos são suscetíveis de coletar o sinal luminoso e focar com lentes em
células fotorreceptoras especializadas para converter fótons em sinais neurais. Existem
alguns olhos sem pupila ou lentes (Nautilus), mas, por definição, todos os olhos requerem
células especializadas para fototransdução.
Três filos emergem do período Cambriano com olhos funcionais: Mollusca,
Arthropoda e Chordata. Estas linhagens produziram essencialmente oito soluções ópticas

para coletar e focar a luz. (Fig.1). Duas dessas soluções aparecem em Chordata, e uma
delas é nominalmente usada como gradiente para um indíce de refração para produção de
lentes.
Figura 1 – Tipos de olhos. Modificado de Fernald, 2000.
Fotorreceptores
As unidades básicas do olho, as células fotorreceptoras, podem ser divididas em
duas grandes classes, uma ciliar (conjunto de cílios sensíveis a luz) e um tipo microvilar
(rabdomérico) o qual é constituído por um conjunto de células receptoras de luz, paralelas
umas às outras, o exemplo mais comum é em olhos compostos de insetos que são
formados por omatídeos (um pequeno sensor que distingue a claridade da escuridão) e este
é formado de uma lente e um rabdoma (Halder, 1995).
A estrutura ancestral que poderia ser chamada de precursora do olho – “foto-olho” –
não tem bem esclarecido o seu surgimento na árvore evolutiva. Alguns pesquisadores
argumentam que o foto-olho poderia ter surgido como duas pequenas estruturas compostas

Neurociências
por células fotorreceptoras e um pigmento celular, como observado em pequenas larvas

ciliadas no poliqueta trocóforo (Fig. 2) (Gehring and Ikeo, 1999; Pichaud and Desplan,
2002).
Figura 2 – Foto ilustrativa (D. Arendt), Duas

células - olho larval e protótipo pigmento-taça com
olho fotoreceptores microvilares em Platynereis
dumerilii (Polychaeta, Annelida, Lophotrochozoa).
Ultra-estrutura larval 24 h (canto superior
esquerdo), (canto superior direito) adulto (72 h) e
(estrutura maior abaixo) olhos totalmente
crescidos. Em amarelo: células fotoreceptoras
microvilar; verde: células de pigmento.
Em sua origem, o olho simples (ex. protozoário Euglena possui pequenas vesículas
sensíveis a luz “eyes spot”) poderia ter realizado alguma forma primitiva de visão a qual teria
a função de detectar a direção da luz para fototaxia e, além disso, poderia ter uma forma
primitiva de relógio circadiano, que permitisse a oscilação do animal entre ciclos de claro e
escuro (Gehring e Rosbash, 2003).
Especializado, este órgão fotorreceptor primitivo providencia uma discreta
informação à célula dermal sensível a luz. A localização de fotorreceptores em pequenas
vesículas ou bolsas com pigmentos sensíveis a luz proporciona informação adicional como
observado em Euglena, existem células sensíveis a luz no citoplasma que contém um
pigmento vermelho-alaranjado responsável por essa percepção da luz.
Alguns estudos sugerem que o olho do tipo ciliar é comum a vertebrados e o do tipo
microvilar mais predominante em invertebrados (Land,1992; Fernald, 2000). Entretanto
novas descobertas relacionando o gene “controlador principal” - homeobox, genes
estruturais responsáveis por determinar qual a posição de determinadas estruturas dentro
do organismo - têm revelado um terreno comum aos olhos de praticamente todos os animais
multicelulares (Arendt, 2003).
Durante a evolução do olho, tipos adicionais de células foram surgindo entre elas
células dermais fotossensíveis. Aquelas que compõem as estruturas sensíveis à luz
atingiram sua diversidade máxima na estrutura “olho em câmara” de vertebrados e
cefalópodes, assim como nos olhos compostos de artrópodes (Arendt e Wittbrodt.,2001).

Todos os fotorreceptores sensíveis à luz utilizam um pigmento derivado da vitamina

A e este pigmento está vinculado a uma proteína chamada Opsina. A informação luminosa
ativa a opsina e causa uma mudança na conformação do pigmento fotossensível, o qual
permite que a opsina se ligue a uma proteína G – uma molécula comum e versátil usado em
muitos sinais de transdução por cascata intracelular. Estas semelhanças sugerem que todos
os olhos têm um antepassado evolutivo comum (Arendt, 2001).
Nos vertebrados, a pax6 – importante fator de transcrição no desenvolvimento de
tecidos específicos – é exigida para a formação de praticamente todos os tipos de células da
retina (Marquardt, 2001). Em Drosophila a pax6 é necessária para a formação de todo o
disco dos olhos (Jang, 2003).
Fotorreceptores microvilares são encontrados nos olhos compostos de artrópodes.
Eles aumentam as suas superfícies apicais em numerosas dobras, nas quais a célula
parece ter um achatamento, com a composição de cerdas finas e cerdas membranosas,
apesar de a própria célula poder assumir muitas formas em espécies diferentes. A
Transdução do sinal em fotorreceptores microvilares envolve ativação de fosfolipase C
(PLC) e do inositol tri-fosfato (IP3). Um exemplo de como se dá a formação de imagem pode
ser observado na Fig. 3 (Arendt, 2003; Arendt e Wittbrodt, 2001).
olho composto
olho de vertebrados
Figura 3 – Representação da formação da imagem no (A) olho composto e no (B) olho em câmara.

Neurociências
Fotorreceptores ciliares são comuns em vertebrados. Sua característica é um

aumento da área superficial na membrana celular externa, uma modificação do cílio. A
membrana ciliar é expandida e empacotada em dobras profundas de modo que a região de
receptores da célula se parece com uma pilha de discos. Os fotorreceptores ciliares usam
uma via diferente de sinalização, ativam uma fosfodiesterase (PDE) que muda a
concentração de GMP cíclico na célula. Tanto o IP3 e o PDE existem em todos os animais,
a diferença está na via que é utilizada nos diferentes fotorreceptores (Arendt e Wittbrodt,
2001).
Conclusão
As diferenças fundamentais de morfologia, desenvolvimento e estrutura dos
fotorreceptores de diversos tipos de olhos encontrados no reino animal sugerem que os
olhos surgiram independentemente pelo menos 40 vezes, especialmente ao compararmos
as camadas da célula da retina que compõem o olho em câmara dos vertebrados
(ganglionar, plexiforme interna, nuclear interna, plexiforme externa, nuclear externa, externa,
epitélio pigmentar) (Fig. 4 do capítulo anterior). Os sistemas de transdução, por outro lado,
são muito parecidos, desempenhando operações de detecção, amplificação e transmissão
(Randall,1997).
As evidências aqui levantadas nos mostram que existem relações importantes entre
as estruturas básicas dos fotorreceptores e nos levam a refletir sobre o processo de
evolução, onde cada grupo animal enfrentando pressões seletivas nos mais variados
ambientes desenvolveu uma grande diversidade de tipos de olhos, cada um com sua
peculiaridade, atendendo a condições necessárias a sobrevivência do indivíduo e,
conseqüentemente, da espécie.


Neurociências
Causa e Função
Pedro Leite Ribeiro
Laboratório de Ecofisiologia Evolutiva
[email protected]
Apoiado numa trama de galhinhos de uma trepadeira, a uns 15 cm do solo, um ninho

de tico-tico abriga um só filhote, na primeira semana de vida. Está sossegado, talvez
dormindo, protegido do sol de verão pela folhagem acima. De repente, bem rápida, chega a
tico-tico e habilmente pousa na beirada do ninho. Ato contínuo, o filhote se ergue, pescoço
esticado para cima, o bico escancarado. A fêmea, agitada ou apressada, mete o bico goela
adentro do pidão, retira-o e, girando o corpo, voa para trás, na direção de onde chegou. Não
ficou nem um instante para descansar do sol dardejante de verão. Alguns minutos depois,
ela chega de novo: mais uma refeição. Mais alguns minutos e a cena se repete. No entanto,
ela não vai à exaustão total, e acaba descansando um pouco. O macho não apareceu por ali
(Robert et al., 1961).
A um metro dali, uns 15 cm abaixo da superfície do solo, enclausurada na câmara
que construiu, uma saúva fêmea, conhecida popularmente pelos nomes de içá e tanajura,
põe mais um ovo de alimentação. Não é um ovo normal, do qual eclode uma larva. É bem
maior e é mole, em contraste com a casca dura dos ovos de procriação. Dobrando-se
ventralmente, leva as mandíbulas até a abertura de seu ovipositor, de onde o ovo vem
saindo, pinça-o com precisão, desdobra-se e o coloca delicadamente na boca de uma das
várias larvas que estão todas juntas. Segura-o ali enquanto a larva vai sorvendo sua
refeição (Autuori, 1940).
Bem mais longe, uma outra fêmea, uma mulher, engata a primeira marcha em seu
carro e parte para o shopping center. Na lista que leva na bolsa estão anotados vários itens,
incluindo fraldas, mamadeira, chupetas, leite em pó e um carrinho de bebê. Enquanto dirige,
ela pensa na lista, e faz cálculos de dinheiro. Fica preocupada e percebe que vai ter de
pagar com o cartão de crédito. Ao pensar em cada item, aparece em sua mente a imagem
de um bebê: ela sorri.
Os esforços desmedidos que tantas fêmeas - e também alguns machos, de aves e
outras classes de animais - fazem em favor de suas crias, em evidente desfavor de sua
própria sobrevivência, recebem uma explicação simples da teoria da evolução. Elas estão
cuidando da sobrevivência de seus genes. Foram selecionadas. Se as fêmeas de tico-tico
ficassem descansando na sombra, evitando as fadigas da busca de comida para seus
filhotes, seu dispêndio de energia seria muito menor e correriam menos riscos; porém,
perderiam a prole. Seu cálculo da relação entre custos e benefícios não se completa no
balanço energético de seus próprios organismos; ele inclui a descendência como parte

decisiva da equação. Abandonando o ninho, as tico-ticos estariam melhor, precisariam de

menos alimentos para si mesmas, mas não transmitiriam esse comportamento a qualquer
descendente. O cálculo da formiga é um pouco diferente, mas essencialmente o mesmo.
Fazendo o enorme esforço da fundação de um formigueiro, jejuando durante meses,
vivendo de reservas, inclusive absorvendo seus músculos alares, ela não está trocando uma
vida mais fácil pela procriação. Ela é incapaz de sair da câmara subterrânea onde se
encerrou e buscar comida na superfície. E se não construísse a câmara, ficaria
perambulando pelo solo até ser morta ou morrer de inanição (Autuori, 1942, 1941). Sua
única chance de viver depende de conseguir que suas filhas dêem início a um novo
formigueiro. A tico-tico teria uma ou duas novas oportunidades na mesma estação e outras
mais no ano seguinte. Assim como fêmeas férteis dão origem a fêmeas férteis enquanto
fêmeas estéreis não dão origem a nada, mães extremadas dão origem a mães extremadas,
enquanto mães omissas não dão origem a ninguém; são pontos terminais de linhagens. A
função do ovário e de todo o conjunto de órgãos e processos que resultam na produção dos
ovos completa-se com o comportamento reprodutivo. A função de um órgão só se completa
com o comportamento que o usa.
O estudo funcional do comportamento é a busca de suas conseqüências para a
sobrevivência e para a reprodução. É no exame do contexto adaptativo e dos efeitos do
comportamento que podemos descobrir suas funções. Entendido o organismo como um
sistema que está configurado para manter-se e reproduzir-se, com a manutenção
subordinada à reprodução, é no entendimento do papel de cada comportamento que se dá o
estudo funcional. Pois são estas, as funções, o alvo direto das pressões seletivas ao longo
do processo de seleção natural. É comum que os estudantes de Psicologia e Biologia
sintam certo mal-estar com o conceito de função por causa de sua proximidade com as
idéias de meta, fim, finalidade, propósito e objetivo. Trata-se de um desconforto filosófico,
em face do justo receio de adotar uma visão teleológica da evolução, como se o futuro
pudesse determinar o passado. Tal inquietude, no entanto, decorre de um exame superficial
do conceito de função. É claro que é uma tolice rematada conceber a evolução como um
desígnio divino, algo como a realização de um projeto ou o desdobramento de um plano de
alguma forma presente desde sempre. Uma das muitas notáveis propriedades da mente
humana é a sua habilidade de decifrar as intenções por trás do comportamento alheio. Essa
faculdade, tão adaptativa nas relações sociais, facilmente transborda de seu uso funcional
levando-nos à ilusão de perceber intencionalidade e consciência onde elas não existem.
Programando engenhosamente a movimentação de alguns pequenos círculos numa tela de
computador, o leitor poderá demonstrar a um observador sua tendência a interpretar a
movimentação como se houvesse um enredo de fugas e perseguições. Ora, ao aprender
que o estudo científico não pode deixar-se contaminar ingenuamente pela subjetividade, o

Neurociências
estudante pode hesitar quando se depara com o conceito de função. Contudo, é preciso
entender que a Ciência pode adotar termos de uso corrente sem trazer suas conotações e
implicações. A descoberta de que o canto do tico-tico tem a função de proteger seu território
e seduzir as fêmeas não significa que ele tenha de seu comportamento a mesma
consciência que tem um ser humano em situações análogas. Assim como não há erro
conceitual em descrever as peças de um automóvel dizendo qual é o objetivo de cada uma
delas, ou dizer que um robô procura e usa a tomada para recarregar, ou com o objetivo de
recarregar sua bateria, assim também não há teleologia em reconhecer que a evolução
criou organismos dotados de recursos que dão conta de sua manutenção e reprodução
agindo como se estivessem sendo controlados pelas conseqüências de suas ações.
O controle de suas ações, no entanto, aquilo que os leva a fazer o que fazem a cada
momento, constitui um outro tipo de fenômeno, que devemos chamar de causas do
comportamento. O que leva a içá a fazer cada um de seus movimentos são os estímulos do
ambiente e de seu próprio corpo, seus hormônios e as programações de seu sistema
nervoso. Portanto, a pergunta "por que a içá alimenta as larvas?" tem duas respostas, uma
funcional e outra causal. A observação de que as larvas de formigas são inertes, incapazes
de se alimentarem sozinhas, terá valor no plano funcional. Já a indagação "será que as
larvas dão algum sinal de suas necessidades, ou a produção de ovos de alimentação
obedece a um programa que independe do estado das larvas?" cabe no plano causal.
Investigar se a quantidade de testosterona afeta a freqüência ou a intensidade do canto do
tico-tico é um estudo causal. Já o efeito do canto sobre a preservação do território é uma
questão funcional. Note-se que esse mesmo canto deve também ser entendido como
estímulo que atinge os ouvidos dos machos rivais. Examinado dessa forma, em busca de
como ele controla as ações dos rivais, por exemplo, fazendo-os mais ou menos agressivos,
o canto está dentro de um estudo causal. Essa aparência de que funções se desenvolveram
“para resolver determinados problemas” está relacionada ao fato de que o ambiente
funciona de forma relativamente regular, possibilitando a seleção de programas genéticos,
moldados ao longo de uma prolongada história adaptativa; embora presentemente gerem a
sensação de finalidade na sua construção, podem ser explicados como fruto do acaso
submetido à seleção, portanto, obra da adaptação.
Niko Tinbergen, prêmio Nobel de 1973, organizou o estudo do comportamento em
quatro tipos de resposta à pergunta por quê. A resposta causal, que tem, na maioria das
vezes, o seu entendimento feito através de estudos de fisiologia, a funcional, cujo estudo é
normalmente associado a questões relacionadas com ecologia, e mais duas que não serão
aqui examinadas. Filogênese: por que esta espécie tem esse comportamento? Como
evoluiu? Como se comportavam seus ancestrais? Quais foram as pressões seletivas que o
moldaram? Ontogênese: o repertório comportamental de uma espécie não surge todo no

recém-nascido. Como se dá seu desenvolvimento? Por que tal comportamento aparece em

tal idade? Qual é o papel do aprendizado?
O entendimento da diferença entre causa e função serve bem para evitar confusões
conceituais. O esclarecimento da função de um comportamento não resolve o problema
causal, mas é útil para gerar hipóteses sobre os fatores que atuam sobre ele. Existem
mariposas que subitamente, em pleno vôo, deixam-se cair como se tivessem sido
mortalmente feridas. Alguns segundos depois, antes de atingirem o solo, elas recobram seu
vôo normal. A descoberta de que a função desse comportamento é protegê-la do ataque de
morcegos leva-nos a buscar algum órgão receptor do ultra-som usado pelos morcegos em
seu sistema de ecolocação.
Em condições normais, no ambiente natural, os fatores causais e as funções têm um
entrosamento admirável. A receptividade sexual acontece quando o organismo está pronto
para a reprodução, apetites específicos quando ocorrem carências específicas, a sede
quando falta água, e assim por diante. Sim, esse entrosamento torna-se admirável quando
se apreende bem a noção de que uma função não produz por si só o comportamento
correspondente. Não é óbvio que a falta de água leve o animal a beber. Entre a falta de
água nos tecidos e as atividades de procurá-la e ingeri-la, é necessária a ação de fatores
causais adequados, a começar pelo reconhecimento correto do objeto, ou seja, o animal
deve engolir água e não areia ou flores. E deve tomá-la e não atacá-la com mordidas. A
compreensão da diferença entre causa e função tem a virtude de problematizar o
comportamento.
Em condições anormais, seja no ambiente natural seja no laboratório, causas e
funções podem desencontrar-se, revelando de forma dramática como é notável o
entrosamento normal. Lesões do hipotálamo lateral tornam os ratos inapetentes a ponto de
morrerem de inanição com comida abundante ao seu alcance. As vítimas humanas de
anorexia entendem bem a diferença entre precisar de comida e ter fome. Drosófilas
mutantes sem asas movem as patas traseiras como se as estivessem limpando. Alguns
cães domésticos dão uma volta em torno do lugar onde estão prestes a deitar-se para
dormir. Há pelo menos um caso bem documentado de cópula entre um chimpanzé e uma
fêmea babuína. E temos também que estar preparados para encontrar comportamentos cuja
função principal não é sua única função, como a sexualidade dos bonobos que, em
condições normais no ambiente natural, inclui rotineiramente relações entre machos, entre
fêmeas e entre adultos e jovens impúberes. Há alguns casos documentados de adoção
interespecífica (Otoni et al., no prelo). No comportamento lúdico, tão comum em mamíferos,
mas presente também em aves, os jovens fazem coisas de adultos, fora tanto do contexto
funcional como do causal.
Assim como nossa capacidade empática pode induzir-nos ao erro de antropomorfizar

Neurociências
o comportamento animal, os animais também têm seus transbordamentos motivacionais.

Tais exceções não devem ofuscar o extraordinário ajuste entre causas e funções sem o qual
não haveria manutenção nem reprodução.
Dias antes daquela ensolarada manhã em que a tico-tico cuidava de buscar comida,
ela vinha sendo furtivamente observada por uma fêmea de chupim. Se a percebesse, a tico-
tico talvez tivesse ido embora, abandonando o ninho, para fazer outro em lugar mais seguro.
Não a viu, e a chupim conseguiu botar um ovo junto aos seus. Por predação ou furados pela
chupim, os ovos perderam-se todos, menos um, o da chupim. Foi vã toda a dedicação da
tico-tico. Explorando o sistema causal da hospedeira, a chupim logrou desvirtuar a função
do comportamento da tico-tico, em seu benefício. O parasitismo comportamental é uma lição
fascinante acerca dos modos como o comportamento é controlado. A tico-tico vai continuar
a cuidar do chupim como se fosse seu filho até sua independência, mas terá novas chances
nos anos seguintes (Buzzetti, 2004).
A içá que alimentava as larvas com ordem e precisão perdera a pequena porção de
fungo que pegou do ninho onde nasceu e trouxe na bolsa infrabucal. Essa pelotinha de
fungo era essencial. Ela ia depositá-la com todo o cuidado no chão da câmara, e depois
meticulosamente alimentá-la com suas fezes e fazê-la prosperar. Sem esse jardim de fungo,
seu esforço é vão. Ela continuará a alimentar as larvas, que se tornarão pupas e depois
obreiras que vão cavar um túnel para cima e procurar alimento na superfície. Porém, sem
fungo, o alimento será inútil e mãe e filhas não vão durar muito. Mesmo tendo perdido o
fungo, a içá continuou a responder aos estímulos presentes. Não existe nenhuma
possibilidade de a seleção natural operar e cancelar essa inércia comportamental.
O bebê cuja lembrança fez sorrir a mulher que ia ao shopping center preocupada
com a despesa não é seu filho. É filho de uma amiga, mãe solteira, que está sem dinheiro.
O filho foi planejado. Ela tinha um bom emprego. Não queria casar-se e procurou um
homem com o único fim de ter o filho. Perdeu o emprego e sua vida ficou complicada. A
amiga, solidária, está feliz de poder ajudar. A complexidade do comportamento humano é
um desafio para a análise de causas e funções. O comportamento da mulher que presenteia
não parece ser um excesso de cuidados maternais. Lembra mais os comportamentos
altruístas de fortalecimento de vínculos interpessoais, comuns em animais sociais. Já o
comportamento da mãe, ao planejar o filho, parece inverter ou fundir a relação entre causa e
função. Diferentemente de qualquer outro animal, ela conhece a relação entre a cópula e a
gravidez e entre esta e o nascimento de uma criança. Mesmo que tivesse aversão ao ato
sexual, ela poderia lançar mão da inseminação artificial. O filho, neste caso imaginário
específico, não é a conseqüência desconhecida ou desconsiderada da atividade sexual.
Isso foi assim, na pré-história, antes de nossos ancestrais descobrirem a relação entre sexo
e procriação. No caso que estamos examinando, a reprodução, que normalmente reside no

plano funcional, é uma causa dos comportamentos da mãe. Pode-se fazer uma analogia
com o comportamento de busca de algo perdido, que muitos animais são capazes de fazer.
Uma fêmea que se perca de seu filhote e saia a procurá-lo também constitui um caso em
que a distinção entre causa e função fica reduzida ou anulada. A memória e a capacidade
cognitiva permitem que um animal se comporte em relação a um objeto do qual não recebe
qualquer estimulação. O comportamento nesse caso tem a função de encontrar o objeto que
é também parte de suas causas.
Em nós, humanos, a cultura trouxe alterações importantes tanto ao plano causal quanto ao
funcional. Ela não destruiu os sistemas que operavam antes de sua origem. Ela os
transformou em algo que ainda não conseguimos entender. Curiosamente, a cultura criou os
recursos que nos permitem organizar o pensamento científico e com ele progredir no
entendimento do que fazem os outros animais, mas não se revela facilmente a si mesma. As
próprias causas e funções de seu desenvolvimento constituem um desafio difícil que ainda é
objeto de debate entre os que se dedicam a elucidá-las. Com métodos de observação e
experimentação cada vez mais refinados, biólogos e psicólogos vêm progredindo de modo
acelerado no estudo do comportamento animal e humano. A pergunta "Por que esse animal
está se comportando desse modo?" recebe respostas cada vez mais amplas e
convincentes. Quando trocamos animal por ser humano nessa indagação, as respostas são
mais hesitantes, porém o progresso é indiscutível, e as próximas décadas deverão
proporcionar descobertas fascinantes (Lorenz, 1981).

Neurociências
Percepção
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Percepção é um função do sistema nervoso central que depende do entendimento

dos sistemas sensoriais, mas vai além destes. Entender percepção é entender não somente
como percebemos alguma coisa (seja vendo, ouvindo ou sentindo estímulos), mas também
por que percebemos e quais as implicações para com outros aspectos da cognição, como a
memória ou a atenção. Falar em percepção é falar sobre os córtices associativos.
Esse campo de estudo lida com dois problemas: (1) como todos os aspectos de
um estímulo sensorial são entendidos e processados (cor, forma, movimento para visão;
intensidade, timbre, altura para audição, por exemplo) e (2) qual a relação com outras
funções da cognição, especialmente atenção e memória.
Uma das principais diferenças entre a percepção e as sensações é a constância
perceptual. Tome por exemplo a Fig. 1. Não importa qual a posição do carro mostrado na
figura, sabemos que se trata do mesmo carro, apesar das quatro imagens serem distintas e
provocarem estimulações diferentes nas porções iniciais do sistema visual. O mesmo
princípio é verdadeiro para a percepção de uma mesma nota musical tocada por
instrumentos diferentes. Embora as frequências produzidas por eles sejam diferentes, com
alterações dos harmônicos que compõem o som resultante (dando a cada instrumento seu
timbre), a percepção de uma determinada nota é mantida.
A constância perceptual só é possível pela integração da informação sensorial
com a informação de outras regiões encefálicas, inclusive (ou talvez principalmente) das
memórias adquiridas ao longo da vida. Esse mecanismo depende, portanto, de aprendizado
e ele é possivelmente uma
particularidade da espécie humana.
Experimente colocar um capacete de
ciclismo (que cobre apenas a parte
superior da cabeça) e aparecer
diante do seu cachorro. Ele
seguramente o estranhará. Por outro
lado, o reconhecerá pelo cheiro e
voz, o que o fará parar de hesitar
Figura 1 – A imagem na retina é imensamente diferente
após algum tempo. Humanos são
para os quatro desenhos. Ainda assim, perceptualmente
logo nos damos conta de que se trata do mesmo carro. únicos em sua capacidade de
Retirado de Gazzaniga, Ivry e Mangun (2006).
abstração, capazes de ver um tronco

cortado em uma floresta e imediatamente pensar: “Que bom! Um banco para descansar!”.
O interesse pelos mecanismos de percepção veio a partir de casos clínicos de
lesões cerebrais, em geral por acidentes vasculares cerebrais (AVC), em que os pacientes
tiveram comprometimento da percepção. Tais pessoas se tornaram incapazes de
reconhecer objetos ou pessoas que antes lhes eram muito familiares. Uma investigação
minuciosa evidencia que tais pessoas podem descrever em detalhes o que lhes é pedido, o
que descarta problemas de memória. Mais do que isso, a estimulação por outra modalidade
sensorial resulta em imediata identificação do objeto ou pessoa em questão, levando ao
entendimento de que o problema é perceptual e, em geral, associado a apenas uma
modalidade sensorial. Ao conjunto de sintomas de incapacidade de percepção é dado o
nome agnosia.
Vias perceptuais
As lesões cerebrais que levam a problemas de percepção frequentemente são
aquelas que ocorrem em áreas dos córtices parietal posterior, temporal inferior ou face
lateral do córtex occipital. Essas regiões encontram-se na confluência das áreas sensoriais
e, como já mencionado, são parte dos chamados córtices associativos, pois recebem
aferências corticais das regiões sensoriais e integram aferências múltiplas para
desempenhar funções cognitivas supramodais e comportamentais específicas. Algumas
dessas regiões são neoformações em primatas e elas constituem a maior parte do córtex
cerebral, particularmente no caso da espécie humana (Preuss, 2006).
Visão
O sistema visual é a modalidade mais estudada de todos os sistemas sensoriais
conhecidos. No capítulo sobre fisiologia sensorial foi possível entender como se dá o
processo de transdução do estímulo luminoso em sinal elétrico e como essa informação é
levada até o córtex. Vamos elucidar agora como essa informação é manipulada e integrada
com informações de outras regiões corticais para, de fato, entender como percebemos.
A informação que chega até o córtex visual não para em V1, pelo contrário, essa
informação continua avançando por diferentes regiões, adentrando os córtices temporal
inferior e parietal posterior, passando por populações de neurônios especializadas no
processamento de características específicas de um estímulo visual. Uma particularidade
desse sistema sequencial é que a cada conjunto de sinapses que são realizadas a partir de
V1, mais fibras vão convergindo na rede neural. Com esse arranjo, quanto mais adiante na
sequência esteja uma população de neurônios, mais específica é sua função no
processamento visual: enquanto aquelas no início da cadeia de processamento disparam
para simples estímulos em forma de barra (com populações específicas para as diversas
angulações possíveis dessa barra), há neurônios mais adiante nessa cadeia que só

Neurociências
dispararão para combinações

dessas barras ou se o estímulo
em questão tiver
características de um móvel
(Fig. 2).
Apesar do arranjo sequencial,
as evidências atuais apontam
para um processamento em
paralelo dessas diversas
regiões. Casos clínicos de
pacientes que tiveram um AVC
em regiões muito específicas
do encéfalo (nos córtices
associativos) revelam a perda
de percepção de algum
componente da visão, como
movimento ou cor, mas não de
outras características, mesmo
que estas sejam processadas
Figura 2 – Estrutura sequencial na organização dos córtices mais adiante na sequência de
associativos do SNC. Quanto mais adiante na sequência, mais
processamento visual. O maior
complexo é o estímulo para qual a população de neurônios irá
responder. Modificado de Lent, 2006. tempo de reação para
detecção de um estímulo visual quando mais de uma característica precisa ser analisada
em um teste perceptual (cor e forma, por exemplo) também reforça a ideia do
processamento em paralelo. Se apenas uma das características for necessária para a
detecção do estímulo, independente de qual delas, o tempo de reação é menor.
Na Fig. 3 pode ser vista uma representação das diferentes regiões de
processamento visual e o papel de cada uma delas na construção de um percepto visual.
Vale ressaltar que o arranjo existente nos permite definir uma via dorsal e outra ventral de
processamento. Através da via dorsal, podemos entender “onde” vemos um objeto, já que
essa via nos trás informações sobre movimento e posição espacial de um objeto. Já a via
ventral nos traz informações de “o quê” vemos, permitindo identificar características como
cor e forma de um objeto.

Figura 3 – Vias paralelas de processamento do estímulo visual: via dorsal (córtex parietal posterior),
para processamento de informações sobre localização espacial e movimento, e uma via ventral
(córtex temporal inferior), para processamento de informações como cor e forma do objeto em
questão. Retirado de Kandel e col. (2000).
Evidências clínicas, mais uma vez, não deixam dúvidas de que essas vias
colaboram de forma independente para a percepção de um objeto qualquer. Um paciente
com lesão em regiões da via ventral poderá afirmar não existir uma caneta (objeto) sobre
uma mesa diante dele. Apesar disso, se ele for instruído a imaginar um objeto sobre a mesa
e demonstrar como seria o movimento para pegar esse objeto, esse indivíduo faria o
movimento correto e até mesmo poderia pegar a caneta. A ativação de todas as regiões
corticais é necessária para que possamos ter a “correta” percepção de um objeto à nossa
frente; o uso de aspas justifica-se porque, falando-se em percepção, simplesmente não há
“correto”, mas sim uma experiência pessoal que é fortemente influenciada pelas nossas
memórias, emoções e a atenção deslocada a um dado estímulo do ambiente. Falaremos
mais sobre isso nos tópicos seguintes.
Audição
O sistema auditório e seus córtices associativos adjacentes têm sido mais bem
estudados nos últimos anos. Novos experimentos têm trazido evidências de que o
processamento de diferentes características do som também ocorre em diferentes regiões
corticais. Semelhantemente ao sistema visual, existem duas vias de saída para os córtices
associativos: uma anteroventral, relacionada à percepção de características do som como
timbre e tonalidade; e outra posterodorsal para a percepção de características espaciais e
localização do estímulo.
De fato, Bendor e Wang (2005) encontraram no córtex auditivo de saguis-comuns
(na região anteroventral) neurônios capazes de perceber tons, isto é, que disparam para

Neurociências
uma determinada frequência e também para seus múltiplos. Essa relação entre frequências
é exatamente aquela encontrada entre duas oitavas musicais. Essa população de neurônios
provavelmente existe também em outras espécies de primatas, incluindo os humanos. É
possivelmente pelo disparo desses neurônios que identificamos as notas semelhantes entre
dois instrumentos musicais diferentes. Como no carro da Figura 1, é a constância perceptual
para estímulos sonoros.
Por outro lado (ou, melhor dizendo, por outra via...), morcegos são um exemplo
brilhante do funcionamento da via posterodorsal e a capacidade de localização por
estímulos sonoros. Acredita-se que eles sejam capazes de estabelecer um mapa do
ambiente por onde se locomovem tão preciso quanto aquele que estabelecemos pela
estimulação visual. Tentar imaginar algo como isso é quase impossível, mas, novamente,
isto é apenas um reflexo da forma como percebemos o mundo. Seria como tentar imaginar
como um cego (de nascença) percebe o mundo. Embora você provavelmente tenha
pensado em fechar seus olhos e prestar atenção aos sons, cheiros e pressões (táteis) ao
seu redor, isto não é o que um cego percebe do mundo. Para ele a estimulação visual nunca
existiu, logo, perceber o mundo não é “ver” uma imagem preta e atentar às outras
sensações. Para ele, são apenas as outras sensações.
Há casos bem documentados de pessoas que conseguiram desenvolver a
capacidade de se ecolocalizar (como os morcegos) para se locomover. Essas pessoas
parecem criar mapas rudimentares do ambiente, precisos o suficiente para se locomoverem
sem maiores problemas.
Memórias atentas ao contexto

Em diversos mamíferos, após um estímulo percorrer todos os circuitos
necessários à sua percepção (ainda que de forma inconsciente), invariavelmente ele
chegará à região anterior do lobo frontal (ou estruturas homólogas). Essa região está
envolvida com memória operacional e atenção, especialmente no caso de primatas (e
possivelmente em outros mamíferos), e é onde o estímulo será integrado com memórias
passadas e, se o estímulo tiver maior relevância para o organismo (ou simplesmente se for
um estímulo muito forte – como um ruído muito alto), ganhará maior processamento neural
destes circuitos, resultando em um fenômeno que chamamos comumente de atenção.
É interessante notar que a definição de qual estímulo receberá atenção em um
dado momento também dependerá do contexto em que se encontra uma pessoa. Imagine-
se na sua rotina diária no colégio alguns anos atrás. Você consegue se lembrar com que
facilidade você percebia o sinal da sua escola soar perto do horário de ir embora? Ou
mesmo quantos “alarmes-falsos” você tinha durante essa espera? Da mesma forma,
círculos vermelhos não devem significar nada para você neste exato momento, mas eles

terão muita importância quando estiver dirigindo para algum lugar. Essas diferenças sutis
naquilo que percebemos são produto de ativação de circuitos de atenção e das memórias
que acumulamos ao longo da vida.
Ilusões e hemisférios cerebrais

Ter memórias significa aprender sobre o ambiente que nos rodeia. Quando essas
memórias são integradas com nossa percepção, não é raro que tenhamos uma visão
distorcida daquilo que está diante de nós. Tome por exemplo a Fig. 4A. Qual das duas
barras horizontais é maior? À primeira vista, todos dirão que a barra superior é maior.
Apenas alguns, após uma análise mais cuidadosa, dirão que ambas tem o mesmo tamanho.
Isso não significa que falhamos em enxergar. Apenas nos deixamos levar pelo aprendizado
que tivemos em toda nossa vida: ao longo dos anos,
vemos que linhas de mesmo tamanho parecem menores
quanto mais distantes elas estão de nós. As barras
convergentes na Fig. 4 criam a ilusão de algo que se
distancia. Assim, percebemos as barras paralelas como
sendo de diferentes tamanhos. Olhe a Fig. 4B e isso
ficará ainda mais claro.
Figura 5 – Triângulo de Kanisa. Figura 4 – Ilusão de Ponzo. As

linhas paralelas em (A) parecem
ter diferentes tamanhos, apesar
de serem iguais. Em (B) uma
possível explicação biológica
para esse efeito.
(A) (B)
Nosso treino para perceber formas geométricas nos faz enxergá-las até mesmo
onde elas não existem. A Fig. 5 sugere o formato de um triângulo, mas sem todas as suas
bordas esperadas, de fato. A figura é conhecida como Triângulo de Kanisa. Algumas
pessoas chegam a dizer que ele é mais branco que as áreas em volta! A explicação direta é
que nos acostumamos a enxergar com mais luz algo que está em primeiro plano.
As ilusões de óptica não se resumem apenas a fenômenos mnemônicos (que
dizem respeito à memória). Há também efeitos causados pelos próprios receptores
sensoriais. Você provavelmente já se deparou com imagens como as que estão na Fig. 6. A
estimulação de um determinado receptor retiniano para cor por um período prolongado leva
à percepção da cor complementar correspondente, o que faz com que, ao olhar para um

Neurociências
fundo neutro (branco, preto ou qualquer tom de cinza), perceba-se cores trocadas na
imagem.
Figura 6 – Efeito de pós-imagem. Uma ilusão criada pelos receptores sensoriais quando
superestimulados por uma determinada cor. Olhe fixamente por cerca de 30 segundos
para qualquer um dos pontos pretos nas imagens e, em seguida, para uma parede
branca. O que você vê?
Essa questão torna-se extremamente importante quando pensamos em contraste.

A percepção de uma cor em um determinado momento é influenciada não somente pela cor
em si, mas pelas cores em volta da mesma. Quão diferentes são as cores dos quadrados
“A” e “B” na Fig. 7? A resposta correta é: nada diferentes! Não há modificações! Isso
acontece porque as cores ao redor da cor atentada influenciam a percepção da mesma.
Figura 7 - Os quadrados “A” e “B” da figura são diferentes na cor? Não! Os quadrados não são
diferentes!
De forma mais ampla, somos influenciados por diferenças entre nossos

hemisférios cerebrais. Apesar de estes trabalharem sempre em conjunto, com
ativações bilaterais, diferenças sutis na ativação refletem certas dominâncias inter-
hemisféricas que podem também resultar em diferenças na percepção. Testes com
pacientes que sofreram um AVC e estudos com animais lesionados sugerem que o
hemisfério esquerdo se encarrega primordialmente da percepção de detalhes de
uma imagem, enquanto que o hemisfério direito se encarrega das características
globais. Veja na Fig. 8 como estes pacientes desempenham em um teste simples de
cópia de uma figura. Essas diferenças manifestam-se também na percepção de
figuras com conteúdo ambíguo. O que você percebe à primeira vista na Fig. 9?

Figura 8 – Desempenho de pacientes com hemisférios cerebrais paralisados em um

teste de cópia de figura. Pacientes que tem apenas o hemisfério esquerdo funcionante,
percebem os detalhes das imagens originais, mas perdem a forma global. Por outro
lado, pacientes com apenas o hemisfério direito funcionante percebem a forma global,
mas não se dão conta dos detalhes. Retirado de Lent, 2006.
Sinestesia
A sinestesia é um caso muito específico de percepção em que uma
determinada modalidade sensorial gera a
percepção de outra modalidade. Um dos
eventos mais frequentes é a percepção
secundária de cores após a estimulação
primária por um grafema, seja um número ou
uma letra (ou até mesmo palavras). A
percepção induzida pelo estímulo primário é
sempre muito específica e unidirecional (a
estimulação pelo percepto induzido não gera
a percepção do estímulo indutor pareado,
isto é, se a palavra “casa” induz a percepção
da cor amarela, o contrário não acontecerá).
Um sinesteta pode repetir mais de centenas
Figura 9 – O que você vê nesse quadro?
de pares de percepções com pouco ou
nenhum erro.
Frequentemente a percepção induzida é a de cores, seja por grafemas,
como dito acima, ou por sons (palavras em geral); mas há relatos bem

Neurociências
documentados de palavras gerando percepção de gostos, gostos gerando formas,

cheiros para cores e, mais curiosamente, música (ou intervalos tonais ou
simplesmente tons) para cores ou formas. As percepções secundárias de gostos e
também cheiros são menos comuns, embora exista pelo menos um caso bem
documentado de percepção secundária de gostos induzida por intervalos tonais
(musicais). A mesma pessoa reporta possuir o caso mais comum de sinestesia entre
tonalidades musicais e cores.
A investigação sobre o fenômeno é ainda muito recente e algumas
perguntas básicas sobre o assunto só agora começaram a ser respondidas. Em
relação aos mecanismos neurais que possibilitam a sinestesia, duas proposições
foram feitas: alterações estruturais e alterações funcionais. A Fig. 10 apresenta um
resumo dos modelos de mecanismos possíveis.
Figura 10 - Modelos de Sinestesia. Os modelos diferem na rota proposta de ativação cruzada (direta
ou indireta) entre as regiões indutora e concorrente e nas diferenças subjacentes ao sinesteta
(estruturais ou funcionais). Regiões em amarelo estão ativas (começando pela região indutora) e, em
azul, inativas. Conexões excitatórias são mostradas como flechas e inibitórias como pontas em traço.
Linhas pontilhadas representam conexões presentes estruturalmente, mas funcionalmente inativas.
Modificado de Bargary e Mitchell (2008).
As evidências de casos clínicos e fenomenologia da sinestesia apontam

mais fortemente para alterações estruturais na conectividade cerebral, com ligações
anormais entre as regiões indutora e induzida no cérebro de sinestetas (Bargary e

Mitchell, 2008). Vale ressaltar que diferentes possuidores de uma mesma sinestesia
(tons para cores, por exemplo) podem reportar associações diferentes para a cor
induzida. Se um deles disser que um dó maior é azul, o outro poderá dizer: “Isto está
errado!”. Não se sabe por que a indução de cores é muito mais frequente que a
indução de outras percepções.
Diferenças na manifestação da sinestesia ainda levaram à sugestão de
uma classificação em dois tipos de sinestetas: (1) de ordem baixa e (2) de ordem
alta (Ramachandran e Hubbard, 2003). Essa divisão leva em consideração o estágio
de processamento em que ocorre o fenômeno perceptual. Sinestetas de ordem
baixa tendem a ter o efeito de indução apenas com estímulos muito específicos, por
exemplo: números escritos na língua de origem. Já os sinestetas de ordem alta têm
o efeito de indução toda vez que o conceito que um determinado indutor sugere está
presente. Tomando por base o exemplo anterior, nos sinestetas de ordem alta
mesmo algarismos escritos em números romanos (que nada mais são do que letras)
poderiam gerar a percepção induzida.
A incidência da sinestesia na população mundial é de algo entre 1% e 4%
(Simner e colaboradores, 2006), um valor bem diferente dos 0,05% anteriormente
sugeridos. Estudos em primatas dão indícios de que essas conexões “anormais”
estão naturalmente presentes no organismo durante a fase fetal e o período de
lactância, mas após esse período essa hiperconectividade de regiões sensoriais
tende a ser removida do cérebro. Isto ainda não fora comprovado em recém-
nascidos humanos, mas observações comportamentais levam à sugestão de que há
uma “confusão sinestésica” nas primeiras semanas de vida. A plena maturação
perceptual e a segregação dos sentidos viriam apenas após alguns poucos meses
de vida, portanto. De qualquer forma, não ouse afirmar que um sinesteta tem
sentidos menos maduros ou perguntar a ele “como é viver assim?”. A resposta
sempre presente após essa pergunta é: “Como você vive assim?!”.
Concluir é um problema
Uma das maiores questões ainda não respondidas com respeito à
percepção é como geramos um percepto único das estimulações constantes à
nossa frente se aspectos diferentes de um estímulo são processados em regiões
distintas do córtex cerebral (e.g. cor, forma, movimento, etc., no caso da visão). É o
chamado binding problem.

Neurociências
Uma das possíveis explicações para a forma como geramos um percepto é

a de que, pelo sequenciamento de neurônios no encéfalo, com cada vez mais
neurônios se juntando em um próximo neurônio (e, consequentemente,
complexando o estímulo processado), ao final do processamento, invariavelmente
todas as informações sobre o estímulo estariam ali reunidas. A quantidade de
regiões envolvidas e a divisão do processamento em duas vias (dorsal e ventral),
porém, não favorece essa explicação.
Parece mais plausível aos pesquisadores que o encéfalo forme um
percepto único pela sincronização do disparo dos neurônios das diferentes regiões
corticais, ainda que cada uma delas esteja envolvida no processamento de distintos
aspectos de um estímulo apresentado. Essa explicação, porém, ainda carece de
comprovações.
O estudo de casos de sinestesia tem trazido algumas colaborações para
aquilo que entendemos sobre percepção. Alguns sinestetas relatam a percepção de
cores estranhas, diferentes de qualquer cor que eles já tenham visto em algum
objeto ou lugar. Um deles chegou a chamar essas percepções sinestésicas de
“cores marcianas”. Ramachandran e Hubbard (2003) atribuem essas cores
estranhas à ligação cruzada (ou direta) de um córtex sensorial para outro, o que
“desviaria” o processamento de estágios iniciais da percepção de cores. Segundo os
autores, isso sugere que a experiência subjetiva da percepção de cores depende
não só do processamento final, mas de todo o padrão de atividade neural que leva à
formação de um percepto, incluindo as fases iniciais do processo.
Estando certa ou não a sugestão dada por Ramachandran e Hubbard (2003), fica
claro que ainda precisamos entender muito sobre os mecanismos pelos quais
simplesmente percebemos o mundo que está ao nosso redor. Ou talvez um dia
tenhamos a certeza de que, desde sempre, apenas representamos internamente o
que é percebido externamente. Pelo menos é isso que os estudos sobre atenção e
memória sugerem cada vez mais fortemente.


Neurociências
Memória e seus aspectos evolutivos
Leopoldo Barletta Marchelli

[email protected]
Das propriedades que emergem da organização e funcionamento do sistema

nervoso, a memória é tida como um dos resultados mais fascinantes. O que demonstra a
presença de memória em um organismo é a capacidade que ele tem de alterar seu
comportamento em virtude de experiências anteriores. Essa propriedade manifesta-se em
humanos de diferentes maneiras, por exemplo, na execução habilidosa de uma ação
motora, no relato de uma experiência de infância, na lembrança de locais específicos e
pessoas conhecidas, aprendizagem de conceitos, ou no próprio uso da linguagem e suas
regras.
A grande capacidade de interagir com o meio e armazenar informações provenientes
dele, permite que determinados organismos eventualmente aprendam sobre informações e
regras ambientais relevantes (altamente informativas). Isso ocorre na medida em que o
sistema nervoso reage a estímulos e às suas contingências espaciais (onde) e temporais
(quando). Ainda sim, o sistema nervoso é capaz de detectar relações entre esses eventos e
suas respostas, num processo de aprendizagem que tem como conseqüência a
transformação de sua própria estrutura e funcionamento. Com o acúmulo de informações
sobre experiências anteriores, organismos portadores de sistemas de memória passam a
detectar regularidades e de certa forma prever o ambiente. Desta forma, podem relacionar
grandes quantidades de informações passadas e presentes e selecionar quais receberão
um processamento preferencial por meio do direcionamento da atenção.
O fato de um organismo portar sistemas capazes de armazenar e processar
determinadas informações confere a ele considerável vantagem adaptativa. Em função de
experiências prévias podem flexibilizar o controle de seus comportamentos e gerar
respostas mais adequadas às demandas ambientais. Isso lhes garante um repertório de
soluções para os mais diversos problemas que a sobrevivência impõe
Aspectos evolutivos e comportamentais

Aos olhos da teoria proposta por Charles Darwin em 1859, sistemas biológicos são
tidos como produtos da evolução por seleção natural, que pode favorecer o
desenvolvimento de um sistema mais adaptado. Há de se ressaltar que todo o processo
evolução das espécies, ocorre de maneira constante, lenta e gradual.
Além de a seleção atuar sobre estruturas e mecanismos, ela age também
selecionando comportamentos. Por exemplo, se um ambiente é relativamente simples e

possui certa regularidade, a seleção natural pode favorecer indivíduos que sejam capazes
de gerar “previsões” de tal ambiente e responder de maneira antecipatória. Neste caso
esses indivíduos estariam então mais aptos para tal ambiente. Se, no entanto, a
complexidade de tal ambiente aumentar, a imprevisibilidade pode tornar-se um problema.
Indivíduos que tiverem um sistema mais flexível, capaz de obter e armazenar o máximo de
informações relevantes sobre o ambiente, estarão mais aptos a reagirem prontamente a
estímulos ambientais. Assim sendo, serão capazes de solucionarem problemas de maneira
antecipatória quando um padrão regular puder ser identificado.
O comportamento antecipatório baseia-se na combinação de informações temporais
e espaciais. A habilidade de adquirir e armazenar tais conhecimentos pode favorecer a
previsão de eventos e suas conseqüências que necessariamente determinam uma ação
(resposta a esse evento). Uma vez gerada a previsão de um evento, artifícios antecipatórios
possibilitam que planos de ação sejam elaborados antes mesmo da ocorrência desse
evento. Em outras palavras, além de planejar uma ação antes de sua execução, fazendo
uso de processos antecipatórios, o individuo pode responder a um estímulo de maneira
antecipada. Do ponto de vista evolutivo, isso pode ser altamente vantajoso, pois isso
possibilita avaliar consequências futuras de ações correntes, sem comprometer de algum
modo a integridade do sistema no desempenho da ação.
A evolução do sistema nervoso, sobretudo dos processos de memória, parece estar
relacionada com a idéia do desenvolvimento de sistemas seletivos capazes de lidar com
diferentes demandas ambientais que surgem ao longo vida do individuo. Tais demandas
sugerem a existência de diferentes sistemas de memória, que podem ser caracterizados
como especializações adaptativas que lidam com problemas específicos do animal no seu
ambiente. Eventualmente adaptações que servem para a resolução de um dado problema,
podem não ser tão efetivas assim para outros problemas também presentes no ambiente.
No entanto, o surgimento de diferentes sistemas de memória, com regras de operações
essencialmente diferentes, faz com que indivíduos possam lidar com uma grande variedade
de problemas.
Indivíduos capazes de identificar estímulos, prever o ambiente e gerar as
“inferências” e respostas mais adequadas, se beneficiarão; estarão mais aptos para
determinado ambiente. Portanto, a resolução de problemas e a emissão de comportamentos
antecipatórios, ações essas baseadas em experiências anteriores, conferem ao repertório
comportamental do organismo alto valor adaptativo. Uma vez que a emissão de
determinados comportamentos diante de algumas situações traz ganhos adaptativos,
parece razoável considerar que a memória seja um dos resultados de maior sucesso ao
longo da evolução biológica.
Suporte aos sistemas de memória

Neurociências
O funcionamento dos sistemas de memória implica no armazenamento de uma

quantidade substancial de informações sobre o ambiente, sobre suas regularidades e sobre
os efeitos de ações anteriores. Essas informações ficam inteiramente armazenadas no
sistema nervoso do indivíduo. Assim, os sistemas de memória são claramente dependentes
da estrutura e do funcionamento do sistema nervoso, que por sua vez, possui bilhões de
neurônios, células nervosas capazes de conduzir impulsos elétricos e processar
informações. Além disso, as conexões entre os neurônios podem estar arranjadas de
diversas maneiras para formar circuitos definidos. Levando em consideração tais
possibilidades de combinação, é possível imaginar a complexidade dos substratos que
armazenam informações no sistema nervoso.
Basicamente o processamento neuronal recebe a informação, avalia e passar o sinal
a outros neurônios. Uma mensagem passa de um neurônio para outro através de sinapses.
Cada neurônio envia projeções para milhares de outros neurônios e, por sua vez, recebe
projeções de outros milhares de neurônios. Por essa projeções passam sinais que ativam o
sistema de diferentes maneiras. Quando muitos sinais sinápticos de entrada são
transformados em um único sinal de saída, temos um processo de computação neural.
Alguns desses sinais de saída podem provocar aumento da ativação de algumas vias e uma
diminuição em outras, deste modo, sinais de entrada combinam-se de maneira a gerar
informações muito mais elaboradas do que uma simples somação de sinais. É nesse
momento que ocorre modulação do processamento de informações.
Conectadas aos neurônios, há células especializadas para a recepção de
informações ambientais (receptores sensoriais), que transformam diferentes formas de
energia (e.g. luz, som, odores etc.) em potenciais elétricos, isto é, estímulos de diversas
naturezas que se transformam em sinais elétricos, influenciando assim tanto a atividade
elétrica quanto a química dos neurônios. Essas informações sensoriais, sob a forma de
impulsos elétricos, são transmitidas por circuitos definidos do sistema nervoso, havendo
circuitos neurais dedicados ao processamento preferencial de informações de cada uma das
modalidades sensoriais, e outros circuitos responsáveis pela integração de informações de
diferentes modalidades sensoriais.
Aspectos fisiológicos da memória

Pressupõe-se que a atividade eletrofisiológica, gerada por atividade espontânea,
estímulos ambientais e respostas a esses estímulos, desencadeie processos que levam à
alteração da conectividade entre células nervosas, alterando a transmissão de impulsos
elétricos por esses circuitos neurais. Todas essas modificações provocadas em elementos
constituintes do sistema nervoso caracterizam (representam) assim o armazenamento de
informações, as memórias. Uma decorrência lógica dessa suposição é que seja possível

detectar a ocorrência de alterações bioquímicas associadas à alteração da conectividade

nervosa relacionada ao processo de formação de memórias.
O conhecimento atual sobre memória é resultado do trabalho de inúmeros
personagens. Gold e colaboradores (1970) expuseram ratos a uma câmara clara conectada,
por uma porta tipo guilhotina, a uma câmara escura cujo assoalho é constituído de barras
metálicas eletrificáveis. Os ratos rapidamente entram na câmara escura; após entrarem
nessa câmara, levam um choque nas patas. Em uma etapa de teste, realizada 24 horas
depois, os animais inseridos na câmara clara não entram na câmara escura (ver a barra
vermelha da Fig. 1). Animais de um grupo controle, que não receberam choque nas patas
no dia anterior, entram rapidamente na câmara escura (ver barra verde da Fig. 1). Em
experimentos adicionais, depois do treinamento com choque nas patas, foram aplicadas
correntes elétricas no sistema nervoso dos animais com diferentes intervalos de tempo entre
o choque na pata e o choque eletroconvulsivo (ver Fig. 1 - esquerda). Observa-se que
quanto menor o intervalo de tempo entre o choque nas patas e o choque no sistema
nervoso, maior é o prejuízo de memória aversiva sobre o ambiente escuro. À medida que
esse intervalo de tempo aumenta, menor é o efeito, como se o choque eletroconvulsivo
perdesse sua efetividade para evitar sua consolidação. (ver Fig. 1 – direita: barras de cor
laranja).
Intervalo de tempo entre choque nas

patas e choque eletroconvulsivo (S).
Figura 1 – Experimento de Gold e colaboradores (1970). A organização temporal dos eventos

(esquerda) e os resultados (direita): o tempo que os ratos submetidos aos diferentes tratamentos
demoraram para entrar na câmara escura – quanto menor o intervalo de tempo entre o choque nas
patas e o choque eletroconvulsivo menor é a lembrança do evento aversivo. Modificado de Pavão
(2009), Xavier (2004) e Gold (1970).
Outro experimento que trata de questões fisiológicas sobre a memória foi feito por
Shashoua (síntese publicada em 1985). O experimentador prendeu um flutuador nas
nadadeiras peitorais de peixinhos dourados para fazer com que os animais ficassem em
posição desconfortável. Após longo esforço de cerca de 3 horas, alguns peixes voltaram à
posição normal, apesar do flutuador (Fig. 2, treino inicial representado pela curva verde). Se

Neurociências
o flutuador for removido e recolocado três dias depois, os animais realizam a tarefa mais
rapidamente; i.e., os peixes retornam à posição normal em apenas 15 minutos, o que indica
que eles aprenderam e retiveram a solução desse desafio (Fig. 2, curva azul) (para detalhes
sobre esses experimentos, ver Helene e Xavier, 2007). Em outro teste, Shashoua (1985)
injetou valina marcada com hidrogênio radioativo (valina-H*) no ventrículo encefálico de
animais que ficaram por 4h com o flutuador, e valina marcada com carbono radioativo
(valina-C*) no ventrículo de animais que não foram treinados. Os encéfalos dos animais dos
dois grupos foram homogeneizados conjuntamente e as proteínas foram separadas por
peso molecular. A maioria das proteínas presentes estava marcada tanto com valina-H*
quando com valina-C*; porém, algumas delas estavam mais marcadas com valina-H*,
indicando que elas foram incorporadas no cérebro dos animais que aprenderam a tarefa;
essas proteínas foram denominadas ependiminas. Num terceiro teste, as ependiminas
foram isoladas e injetadas em coelhos para produção de anticorpos específicos contra as
ependiminas. Então, os anticorpos foram injetados no ventrículo encefálico de peixes que
tinham acabado de aprender a tarefa de nadar com o flutuador; no teste de memória
realizado 3 dias depois, esses peixes demoraram cerca de 3h para voltar à posição normal
(Fig. 2, curva vermelha). Ou seja, esses animais comportaram-se como se nunca tivessem
sido submetidos ao treinamento. Atualmente, as ependiminas são denominadas “moléculas
de adesão celular” e estão diretamente relacionadas com o fortalecimento e formação de
sinapses.
Figura 2 – Experimentos de Shashoua (1985) envolvendo aprendizagem em peixes dourados.

Flutuadores foram presos aos animais, que em ficavam em posição desconfortável (esquerda,
acima). com treino de cerca de 180 minutos, ficavam em posição confortável (esquerda, abaixo) –
curva verde. Em segundo momento, 3 dias depois, os flutuadores foram recolocados, e os animais
demoraram cerca de 15 minutos para ficar na posição confortável, indicando que aprenderam essa
habilidade – curva azul. Animais treinados tratados com anticorpos para proteínas envolvidas com a
alteração de circuitos neurais apresentam desempenho similar a animais não tratados – os traços de
memória foram apagados pelo tratamento. Modificado de Pavão (2009), Xavier (2004) e Shashoua
(1985).
Em conjunto, os resultados obtidos a partir de experimentos envolvendo choques
eletroconvulsivos e síntese de proteínas sugerem que há dois processos envolvidos na

manutenção da memória. Um deles, mais instável, é prejudicado pelo choque eletro-

convulsivo, estando relacionado ao padrão de atividade eletrofisiológica dos neurônios
(frequência de disparos, por exemplo). O outro, associado com produção de proteínas,
parece envolver alterações estruturais nas sinapses, gerando circuitos alterados no sistema
nervoso.
Posteriormente ao experimento de Shashoua, muitos trabalhos com proteínas
associadas aos processos de arquivamento de informação ao nível celular vêm sendo
desenvolvidos. Muitas moléculas subjacentes à formação de memória já foram descobertas.
Isso tem trazido importantes informações acerca das diferentes etapas e modalidades do
processo de formação de memórias em nível celular, inclusive o envolvimento dessas
proteínas na alteração plástica do sistema nervoso.
Plasticidade neural
O sistema nervoso possui a capacidade de se modificar estruturalmente e
funcionalmente em decorrência de estímulos que de algum modo incidem sobre ele. Tal
fenômeno denomina-se neuroplasticidade ou, simplesmente, plasticidade. Inerente ao
funcionamento do sistema nervoso, a neuroplasticidade é uma característica marcante e
constante da função neural. Muito dos processos cognitivos depende de tal propriedade.
Parece haver dois tipos básicos de plasticidade sináptica, uma de curta duração e a
outra de longa duração. A plasticidade sináptica de curta duração pode ser induzida
rapidamente; parece não requerer síntese proteica e mantém-se por, no máximo, algumas
horas. Esse tipo de plasticidade reflete alterações na força de sinapses pré-existentes, pela
modificação de proteínas pré e pós-sinápticas. Diferentemente, a plasticidade sináptica de
longa duração (que parece ter sido a modalidade principal investigada nos estudos de
Shashoua) dura dias, meses ou anos, envolve processos de transcrição gênica e síntese de
novas proteínas; esse tipo de plasticidade sináptica parece envolver a remodelação de
sinapses existentes ou a formação de novas sinapses.
Com base nessas e em outras características do sistema nervoso apresentadas até
aqui, percebe-se que além de aumentar a capacidade de comunicação entre as diversas
populações de neurônios, sua estrutura e funcionamento possibilitam a formação de
memórias em decorrência de experiências vividas. As diferentes modalidades de
arquivamento parecem envolver alguns tipos de alterações no sistema: (1) alterações
transitórias na atividade eletrofisiológica (taxa de disparos) de populações de neurônios, que
estariam ligadas ao arquivamento por curtos períodos de tempo; (2) alteração na facilidade
com que a atividade eletrofisiológica é transmitida entre neurônios, relacionada com o
arquivamento por períodos intermediários de tempo (que pode durar de minutos até meses);
(3) alterações estruturais permanentes na conectividade neuronal que levam à formação de

Neurociências
circuitos neurais, ou redes nervosas, cuja atividade representaria informações mantidas por
um longo período de tempo, anos ou até mesmo uma vida inteira.
Aquisição e manutenção da memória

Donald Hebb (1949) baseou-se na plasticidade sináptica para afirmar que a
transmissão de informações entre dois neurônios deveria ser facilitada e tornar-se estável
quando ocorresse sincronia entre os disparos do primeiro e do segundo neurônio. Sendo
assim, a transmissão de mensagens entre os neurônios poderia ser regulada: não seria um
fenômeno rígido e imutável, mas sim algo modulável de acordo com as circunstâncias.
Um importante elemento descrito inicialmente no hipocampo que atua na alteração
de sinapses (portanto, na formação de memórias) é o fenômeno denominado potenciação
de longa duração (LTP). Aparentemente, o hipocampo (e outras estruturas do lobo temporal
medial) está envolvido em um processo de ativação repetitiva de circuitos envolvidos na
representação da informação que determina alteração estrutural desses circuitos. Em outras
palavras, estimulações breves e de alta freqüência em uma via excitatória que vai ao
hipocampo produz um aumento de longa duração na intensidade das sinapses estimuladas.
Trata-se de uma plasticidade sináptica específica que ocorre entre um neurônio pré e um
neurônio pós-sináptico, assim como Hebb havia proposto. Acredita-se que a LTP seja um
importante mecanismo envolvido no armazenamento de informações cuja natureza é
essencialmente associativa. Tal mecanismo pode envolver a interação entre diferentes
sinapses de um mesmo neurônio, permitindo que uma sinapse fraca se fortaleça pelo
disparo concomitante com uma sinapse forte, tornando-as associadas. Sendo assim, a LTP
é fundamental para o arquivamento de informações sobre eventos experienciados, pois gera
uma facilitação na comunicação sináptica. Esse processo parece essencial para a retenção
de informações sobre “o que” ocorreu, mas não sobre “como” desempenhar uma tarefa
perceptomotora.
Com o aumento na frequência de disparos das sinapses produzidas em decorrência
de estímulos ambientais, ocorrem alterações na eficiência sináptica dos neurônios
recrutados, de maneira a intensificar a comunicação dessas células. Uma vez que a
comunicação sináptica seja facilitada, qualquer referência ao estímulo inicial já causa um
disparo das células envolvidas. Com estímulos muito pequenos pode-se desencadear um
processo efetivo de ativação neural.
Estímulos ambientais e experiências geram atividade eletrofisiológica em conjuntos
de neurônios. Como vimos, essa atividade pode levar à formação de novas sinapses ou à
alteração das sinapses já existentes, o que permite estabelecer circuitos neurais envolvendo
populações de neurônios cuja atividade, correspondente àquela gerada durante a
experiência original, representa a experiência adquirida.

A recordação de informações representadas internamente se dá pela ativação

eletrofisiológica de populações de neurônios corticais. Isso decorre tanto estímulos que de
alguma forma estão relacionados à experiência original, como por um ato de vontade para
recordar aquela experiência. É curioso notar que os sistemas de memória permitem
identificar estímulos muito específicos e responder a eles, mesmo quando estes não são
apresentados em sua totalidade. Uma vez ativos, esses circuitos podem estabelecer novas
conexões com outros circuitos ativos, ou contar com a adição de novos elementos em
decorrência de novas experiências.
Quanto mais frequentes as exposições a estímulos relevantes, mais fortes tornam-se
as conexões. Como consequência, a informação tende a ser arquivada de maneira
relacional. Isso permite entender porque a recordação envolve, usualmente, categorias. Tal
fato ocorre porque o aumento de atividade eletrofisiológica em determinados circuitos
neurais (que levam à recordação de uma dada informação) tende a estimular a atividade em
circuitos relacionados.
É importante ressaltar que os mesmos circuitos neurais associados à atenção,
percepção, ação e outros processos cognitivos, são os que se alteram para a formação de
memórias de diferentes tipos. Isso significa que, quando esses circuitos forem
posteriormente mobilizados, o processamento das informações será diferente em relação às
experiências anteriores, dado que o circuito vem sendo alterado a cada uma delas. Assim
sendo, a percepção e as habilidades se alteram ao longo da história de vida. Além disso,
estão profundamente associadas com os processos de memória.
Redes neurais e memória

Praticamente todas as regiões do sistema nervoso estão envolvidas de alguma
forma no arquivamento de memórias de um tipo ou de outro. Em primatas, costuma-se
atribuir uma grande importância ao neocórtex (a porção filogeneticamente mais recente do
córtex) no arquivamento de informações. Esse tecido envolve sistemas de processamento
modalmente específicos e sistemas de integração de informações de diferentes
modalidades (denominados polimodais e supramodais).
A maioria das experiências humanas inclui diferentes modalidades sensoriais,
organizadas no tempo e espaço. Por exemplo: a partir de uma estimulação perceptual
específica, o sistema nervoso mobilizaria um grupo de neurônios para representar o evento,
por meio de sua atividade e conexões, produzindo uma espécie de "rede" de interconexões
que se mantém em contínua reconstrução ao longo da vida. A formação de uma memória
sobre esse evento envolveria o fortalecimento das conexões entre as células dedicadas a
essa percepção, resultando num grupamento celular cujas conexões seriam mais eficientes.
Depois do desaparecimento do estímulo gerador da atividade, "nós" da rede, quando

Neurociências
ativados, excitariam ou inibiriam outros nós numa rica e complexa rede de conexões, de
forma que representações seriam mantidas enquanto houvesse reverberação da atividade
nervosa correspondente ao estímulo inicial.
Nessa rede, uma dada população de nós disparando, provavelmente com níveis de
atividade diferentes em várias regiões nervosas, representa uma determinada informação,
enquanto a malha representa as ligações associativas das relações entre os nós; essas
ligações podem variar em intensidade. Nesse sentido, um mesmo nó pode estar envolvido
em representações distintas, já que a informação é representada pelo conjunto de disparos
dos nós a ela relacionados e não por um nó individual. Isso nos sugere que processos de
memória estariam baseados em um funcionamento sistêmico de determinadas populações
de neurônios.
Hebb (1949) propõe algumas previsões sobre o funcionamento da memória. Por
exemplo, parece plausível pensar que estimulações parciais correspondentes à experiência
original sejam capazes de regenerar a atividade em toda a rede, contribuindo para a
lembrança completa da experiência original. Além disso, se dois eventos forem pareados no
tempo supõe-se que haja a formação de redes tais que a estimulação da atividade do
primeiro evento gera o padrão de atividade eletrofisiológica associada ao segundo evento,
levando à sua previsão.
Figura 3 - Esquema representativo de redes neurais de Hebb. Os pontos pretos são os neurônios e
as linhas são as conexões. A rede tem uma organização inicial como representado em (A); ao
receber um estímulo, é ativada (B); esse estímulo pode ser apresentado repetidas vezes, ou pode ter
reverberado nessa rede, de modo que as conexões entre os neurônios são fortalecidas (C e D);
então, um estímulo mais fraco ou mesmo incompleto, mas que mantenha algumas das características
do inicial (D) é capaz de ativar a rede fortalecida (E). Modificado de Bear, 2002, e de Helene e Xavier,
2007.
O autor sugere que haveria apenas três aspectos centrais que determinariam o
funcionamento de um sistema neuronal: (1) a conexão entre neurônios é mais eficaz quanto
maior for o grau de relação entre as porções pré e pós-sináptica; (2) grupos de neurônios
que tendem a disparar conjuntamente irão formar agrupamentos celulares cuja atividade se
mantém expressa mesmo após o fim do estímulo que gerou a atividade e; (3) cognição
deriva da atividade sequencial destes agrupamentos celulares facilitados.

Modularidade e os diferentes processos de memória

A noção de que os sistemas de memória compõem um conjunto de habilidades
mediadas por diferentes módulos do sistema nervoso, que funcionam de forma
independente, porém cooperativa, parece atualmente bem difundida. Essa idéia parte do
pressuposto de que a organização cognitiva se dá de forma modular, representada por
sistemas paralelos de processamento de diferentes informações. Este conceito de
modularidade de funções tem embasado investigações acerca dos processos de memória.
Segundo essa ideia, o processamento de informações nesses módulos acontece de forma
paralela e distribuída, possibilitando que um grande número de unidades de processamento
influencie outras em qualquer momento no tempo, e que grande quantidade de informações
seja processada concomitantemente.
Muitas das evidências relevantes para o desenvolvimento de modelos de memória -
correlações entre funções e módulos do sistema nervoso – derivaram de correlatos
anatomofuncionais, isto é, estudos envolvendo dificuldades de memória em pacientes com
danos cerebrais identificáveis. A partir de então foi possível chegar a definições de memória
e modelos baseados na dupla dissociação entre memória de curta e longa duração.
Inclusive os conceitos de dissociações entre os sistemas particulares da memória de longa
duração foram também amplamente desenvolvidos.
Um estudo que muito contribuiu para o desenvolvimento e formalização dos modelos
de memória foi o caso do paciente H.M., descrito por Scoville e Milner (1957). Na ocasião, o
paciente sofria de epilepsia intratável. O foco epiléptico, que se situava no lobo temporal
medial (bilateralmente), foi removido cirurgicamente; isso resultou na remoção dos 2/3
anteriores do hipocampo e da amígdala, além de outras porções corticais. Após a remoção
das estruturas, H.M. apresentou um quadro de amnésia anterógrada (era incapaz de formar
novas memórias) e também retrógrada (eventos ocorridos pouco antes da cirurgia); porém,
neste último caso a amnésia era temporalmente graduada. O prejuízo cognitivo de H.M.
estava restrito à aquisição de memórias de longa duração; suas capacidades perceptuais se
mantiveram, assim como seu QI, sua personalidade e a memória de curta duração.
Mesmo apresentando alguns prejuízos de memória, H.M. ainda conseguia adquirir e
reter diversas informações. Por exemplo, aprendeu a ler palavras invertidas, como se
apresentadas por meio de um espelho e também novas habilidades motoras e cognitivas
(ver Helene e Xavier, 2007). O paciente apresentava um bom desempenho nessas tarefas.
Curiosamente, quando consultado sobre seu treinamento prévio, ele alegava nunca ter feito
isso.
Como dito anteriormente, o hipocampo atua em um processo de ativação repetitiva
de circuitos envolvidos na representação da informação, uma espécie de reverberação da

Neurociências
atividade neural que resulta no arquivamento de informação. Essa reverberação seria

essencial para o arquivamento das informações sobre “o que” ocorreu, mas não sobre
“como” desempenhar uma tarefa perceptomotora. Trazendo esse conceito para o caso do
paciente H.M, pode-se dizer que, embora o paciente seja capaz de adquirir uma habilidade
motora, ele não é capaz de se recordar “que” já a praticou. Em suma, a natureza da
informação “saber que” é diferente da natureza da informação sobre “saber como” (ver
Helene e Xavier, 2007).
Curiosamente, pacientes com doença de Parkinson (caracterizada por disfunções
em estruturas nervosas denominadas gânglios da base) possuem um quadro oposto ao dos
amnésicos (que, como visto, têm lesão no lobo temporal medial). Os pacientes com
disfunções nos gânglios da base exibem dificuldades na aquisição de habilidades motoras e
cognitivas, ao mesmo tempo em que são perfeitamente capazes de descrever verbalmente
as experiências vivenciadas nessas situações de teste. Neste contexto, pacientes
parkinsonianos exibem, por exemplo, prejuízo na aprendizagem da habilidade de leitura de
palavras invertidas.
Duplas dissociações, caracterizadas pelo prejuízo de desempenho em algumas
tarefas concomitantemente ao desempenho normal em outras tarefas, são apontadas como
evidência da existência de sistemas de memória distintos no sistema nervoso. Resultados
de estudos como do paciente H.M. e pacientes parkinsonianos sugerem a existência de
módulos de memória cujo funcionamento seria relativamente independente, embora possam
cooperar entre si.
Modelos de memória
Baseados em estudos envolvendo duplas dissociações, Cohen (1984) e Squire e
Zola-Morgan (1991) propuseram uma distinção para os sistemas de memória de longa
duração segundo a qual haveria uma memória declarativa (ou explícita), usualmente
prejudicada em pacientes amnésicos e preservada em pacientes cerebelares ou com
disfunções nos gânglios da base, e uma memória de procedimentos (ou implícita),
usualmente preservada nos pacientes amnésicos, mas prejudicada nos pacientes
cerebelares ou com danos nos gânglios da base (Fig. 4). Em outras palavras, memórias que
atualmente são denominadas memórias implícitas correspondem ao “saber como” (o que faz
bastante sentido, pois é muito difícil declarar como se anda de bicicleta) e “saber que” são
denominadas memórias explícitas.

Paciente H.M - amnésico

PREJUÍZO
SABER QUE
Paciente c/ doença de
Parkinson - PRESERVADO
MEMÓRIA DE
LONGO
PRAZO
Paciente H.M - amnésico
PRESERVADO
SABER
COMO
Paciente c/ doença de
Parkinson - PREJUÍZO
Í
Figura 4 – Esquema da dupla-dissociação entre funções e áreas envolvendo os sistemas

de memória de longa duração. (modificado de Helene e Xavier, 2007).
Memória de longa duração

A memória de longa duração se refere à retenção de informações por prolongados
períodos de tempo. Sendo assim, ela pode ser dividida em dois tipos (ou módulos): memória
explícita e memória implícita (Fig. 5). Tanto no caso das memórias explícitas como no caso
das implícitas, o arquivamento de informações envolveria alterações sinápticas, como já
descritas; porém, em cada caso, elas ocorreriam em diferentes regiões do sistema nervoso
com diferentes regras de funcionamento.
A memória explícita (ou declarativa) caracteriza a retenção de experiências sobre
fatos e eventos passados e é passível de relato verbal, ou seja, possui um acesso
consciente. Além disso, o arquivamento de informações pode se dar por associações
arbitrárias que podem formar-se mesmo após uma única experiência.
A memória implícita (ou de procedimentos) se expressa pelo desempenho habilidoso
das atividades previamente treinadas. Sua aquisição é gradual e dependente de treino,
ocorre de forma cumulativa. O conhecimento contido neste tipo de memória manifesta-se
pela ativação das estruturas nervosas envolvidas no processo de aquisição.

Neurociências
Figura 5 - Taxonomia dos sistemas de memória de longa duração.

Modificado de Helene e Xavier, 2007.
Memória operacional
Baddeley e Hitch (1974) conceberam um modelo de memória denominado "memória
operacional". Tal modelo refere-se a um arquivamento temporário e gerenciamento de
informações para o desempenho de uma diversidade de tarefas cognitivas. Segundo os
autores, memória operacional compreende um sistema de controle de atenção, a central
executiva, auxiliado por dois sistemas de suporte responsáveis pelo arquivamento
temporário e manipulação de informações, um de natureza vísuo-espacial e outro de
natureza fonológica.
Posteriormente, para lidar com a associação entre as informações mantidas nesses
sistemas de apoio e promover sua integração com informações da memória de longa
duração, Baddeley inseriu um quarto componente no modelo, denominado de retentor
episódico, que corresponderia a um sistema de capacidade limitada no qual a informação
evocada da memória declarativa tornar-se-ia consciente. A central executiva proporcionaria
a conexão entre os sistemas de suporte e a memória de longa duração e seria o
responsável pela seleção de estratégias e planos; sua atividade estaria relacionada ao
funcionamento do lobo frontal, que teria a função de supervisionar informações a serem
codificadas, armazenadas e evocadas concomitantemente ao seu ingresso no sistema (Fig.
6).

Figura 6 - Modelo de memória operacional: três componentes propostos inicialmente por Baddeley e
Hitch (1974). A área central executiva se refere ao componente de gerencia-mento atencional (a
central executiva), enquanto as áreas laterais da figura representam as alças de manutenção de
informações por curto período de tempo (adaptado de Baddeley, 1982).
Ainda sim, a memória operacional estaria ligada ao desempenho de uma grande

variedade de funções cognitivas, incluindo raciocínio lógico, resolução de problemas,
imagética (relacionado ao treinamento imaginativo) e compreensão de linguagem.
Considerações finais
Em conclusão, a evolução filogenética teria atuado na seleção de sistemas neurais
capazes de modificar-se gradualmente pelo desempenho de ações repetitivas (o exemplo
mais típico seria o caso de habilidades motoras e perceptuais) de sistemas capazes de
arquivar informações depois de uma única experiência, e de sistemas capazes de reter
informações temporariamente, enquanto úteis. É provável que a seleção desses sistemas,
com propriedades distintas, esteja relacionada ao fato de que memórias são especializações
adaptativas que proporcionam vantagens seletivas para a solução de determinados tipos de
problema; as propriedades que tornam um sistema eficiente para a solução de determinados
tipos de problema (e.g., aquisição após uma única experiência de treino) o tornam
incompatíveis com a solução de um problema de natureza diversa (e.g., aquisição de
conhecimento pela mudança cumulativa e gradual de experiências). Assim, do ponto de
vista evolutivo, a organização do sistema nervoso, inclusive dos diferentes módulos de
memória, teria derivado da interação do organismo com demandas ambientais específicas,
resultando em especializações adaptativas que permitem ao organismo lidar com problemas
específicos.

Neurociências
Navegação Espacial
Cyrus Villas-Boas
[email protected]
O debate sobre o hipocampo

O hipocampo é uma das estruturas cerebrais mais estudadas na Neurociência.
Ramón y Cajal (1968) data seus estudos como tendo começado em 1888 e cita os estudos
de Schaffer em 1892 como tendo sido um marco em sua vida científica.
Anatomicamente organizado em camadas, o hipocampo é claramente identificável
como sendo diferente do córtex (Ramón y Cajal, 1968; Witter e col., 1989) (Fig. 1).
Figura 1 – corte coronal do encéfalo de rato corado com cresil violeta, mostrando o giro denteado
(DG) e o hipocampo (CA1 e CA3). Adaptado de Paxinos e Watson (2004).
No rato, o hipocampo se localiza logo abaixo do córtex parietal, o que torna sua parte
dorsal facilmente acessível por eletrodos e cânulas de infusão de drogas. Dois aspectos
chave levaram o hipocampo a ser uma das estruturas mais estudadas da Neurociência:
1. Em ratos. Quando o animal se move livremente, as células piramidais do
hipocampo apresentam uma correlação com o local em que o animal se encontra (O’Keefe e
Dostrovsky, 1971). Essas células são chamadas de células de localização (place cells) e
apresentam atividade em uma parte específica do ambiente, como veremos a seguir em
detalhes. Centenas, se não milhares de experimentos, já analisaram a influência de
diversos tipos de manipulações nas place cells.
2. Em primatas. Lesões do hipocampo e áreas corticais adjacentes em primatas
(particularmente em humanos) causam uma profunda amnésia anterógrada, ou seja, a
perda da capacidade de formar novas memórias a partir do momento em que houve a lesão

(Scoville e Milner, 1957; Cohen e Eichenbaum, 1993). Entre os anos de 1953, quando fez
uma operação experimental no lobo temporal, e 2008, ano de sua morte, o paciente H.M.
não conseguia se lembrar (formar memórias do tipo declarativa) de nada o que havia
acontecido, nem mesmo dos nomes dos médicos que encontrava diariamente (Cohen e
Eichenbaum, 1993).
Cada um desses efeitos observados no hipocampo vieram a formar uma teoria: (1)
que o hipocampo guarda um mapa cognitivo do ambiente utilizado para navegação (O’Keefe
e Nadel, 1978) (Fig. 2), e (2) que o hipocampo guarda memórias de eventos (do tipo
episódicas) temporariamente até seu armazenamento no córtex (Cohen e Eichenbaum,
1993).
Figura 2. – Esquema de representação do mapa cognitivo no rato. Adaptado de Eichenbaum (1999).
Tipos de navegação
Vamos começar nossa discussão sobre navegação espacial com a tarefa mais
tradicional: o labirinto aquático de Morris (1981) (Fig. 3). Esse teste consiste de uma piscina
cheia de água morna misturada com leite ou outra substância que torne a água opaca. Em
algum lugar da piscina há uma plataforma na qual o rato pode subir para sair da água. Há
várias versões desse teste, que incluem a plataforma visível ou, outras vezes, com uma
pista que indica onde a plataforma está. Devido à sua simplicidade, esse teste é uma das
ferramentas mais utilizadas para estudos de navegação e memória espacial. O labirinto de
Morris é usado, entre outros, para estudos de lesões, infusões de drogas ou, em outras
vezes, versões modificadas são utilizadas para o registro unitário da atividade neuronal de
place cells, como veremos mais adiante.

Neurociências
Figura 3 – Labirinto aquático de Morris. O círculo indica a plataforma escondida ou não. O gráfico
mostra o tempo despendido no labirinto para que o animal encontre a plataforma. O teste probe-
memory não contém plataforma e o probe-sensorimotor é um teste de habilidade motora. Adaptado
de Rodriguiz e Wetsel (2006).
Há cinco possíveis estratégias que o animal pode utilizar para navegar no ambiente
e, nesse caso, encontrar a plataforma escondida (O’Keefe e Nadel, 1978; Whishaw e
Mittleman, 1986). São elas:
 Navegação randômica. Se o animal não tem informação prévia de onde a
plataforma está, ele deve explorar o ambiente de forma randômica, aleatória.
 Navegação táxica. O animal pode achar uma pista em uma direção na qual
possa sempre nadar.
 Navegação práxica. O animal pode executar um programa motor constante. Se,
por exemplo, o animal inicia cada tentativa no mesmo local e a patforma também
está no mesmo local, ele pode simplesmente utilizar-se desse tipo de navegação
para chegar à plataforma.
 Navegação por rota. O animal pode aprender a associar uma direção a uma
pista encontrada. Diz-se que a navegação por rota é uma junção das
navegações táxica e práxica.
 Navegação por local. O animal pode aprender a localização da plataforma
baseado em um conjunto de pistas. Ele pode aprender um mapa no qual a
localização da plataforma é conhecida.
Outros modelos foram propostos, porém são todos parecidos no que diz respeito às
funções dos sistemas, ou seja, alguns modelos são simplesmente a fusão de dois ou mais
tipos de navegação supracitados.
Gallistel (1990) propõe um modelo no qual dois componentes são utilizados para que
o animal se localize no ambiente: Piloting e Dead Reckoning. O piloting é um processo pelo
qual o animal determina sua posição através de pistas externas, enquanto o dead reckoning
é um mecanismo que utiliza pistas internas, como direção de movimento e velocidade, para
atualizar a representação de acordo com essas pistas. Dessa forma, esse sistema permite
que sejam usadas pistas internas e externas. Pistas externas são identificadas e usadas
para traçar um mapa de acordo com algum conhecimento do ambiente, porém sem
perceber a posição; as pistas internas permitem que o animal calcule sua posição em um
tempo t de acordo com uma posição conhecida em t-to sem precisar de conhecimento sobre
o ambiente.
Qual é o papel do hipocampo na navegação espacial?

Para navegar em um ambiente familiar, o animal deve usar uma representação
consistente da posição de tempos em tempos. Para tanto, há um mecanismo fisiológico que
é capaz de, utilizando-se das pistas externas e internas, gerar um mapa coerente do
ambiente no qual o animal se encontra. As evidências sugerem que as place cells no
hipocampo são muito bem adaptadas para lidar com esse tipo de informação.
Potenciais de ação disparados por células piramidais do CA3 e CA1 do hipocampo,
além de células do giro denteado e córtex entorrinal mostram que há atividade fisiológica
relacionada ao local em que o animal se encontra em determinado ambiente. Os locais onde
as place cells apresentam atividade são chamados de place fields (Fig. 4).
Estudos em humanos mostram que o fluxo sanguíneo aumenta no hipocampo
durante uma tarefa de localização espacial, tanto no ambiente real como em ambiente
virtual (Ghaem e col., 1997; Maguire e col. 1998) e que lesões nessa região causam déficit
severo em tarefas de navegação, possivelmente devido à perda extensiva de place cells.
Essas células foram extensivamente estudadas em ratos (Olton et. al, 1978;
McNaughton e col., 1983; Eichenbaum e col., 1990; Wiener, 1996) e foram também
encontradas em macacos (Ono e col., 1993; Nishijo e col. 1997; Matsumura e col., 1999) e
humanos (Ekstrom e col., 1994). Devido à grande correlação entre as taxas de disparo das
place cells e as variáveis espaciais, diversos trabalhos foram feitos com a finalidade de
explorar como essas mudanças podem interferir na atividade dessas células.

Neurociências
Spikes/s
Figura 4 – Em cima, atividade neuronal em spikes/s de uma place cell enquanto um macaco se
movimenta num espaço virtual. VR(W), VR e VR(N) são diferentes tamanhos de ambientes similares.
VR(W) e VR têm pistas distais iguais, porém em posições diferentes. VR(N) é um ambiente similar a
VR, porem com menor tamanho. mesmas posições. Embaixo, as rotas que os animais faziam para
passar pelos pontos demarcados. Adaptado de Hori e col. (2005).
As propriedades principais das place cells são:

 Quando as pistas distais são movidas, place fields também se movem
proporcionalmente (Hori e col. 2005).
 Continuam a mostrar claros place fields quando uma pista é removida (Hori e col.,
2005; Furuya e col., 2007).
 Continuam a mostrar place fields menores no escuro (Markus e col., 1994).
 Apresentam diferentes place fields em diferentes ambientes (Hori e col., 2005;
Furuya e col., 2007) (Fig. 4, Fig. 5).
 Apresentam direcionalidade quando o animal navega em espaços pequenos e
conhecidos, mas são não-direcionais quando o animal navega randomicamente.
Estudos mais recentes realizados com macacos mostram que, apesar de estruturas
homólogas não terem necessariamente as mesmas propriedades em diferentes espécies,
no caso do hipocampo parece haver alguma similaridade nas funções relacionadas à
navegação. No entanto, os estudos com place cells em macacos são geralmente realizados
quando o animal se encontra preso a uma cadeira para macacos e, dessa forma, imóveis
(Hori e col., 2005; Furuya e col., 2007). Em outros estudos, o animal é colocado em uma

cadeira móvel (Ono e col., 1991), mas muitas vezes esse paradigma é substituído por uma
forma de navegação espacial virtual similar a um water maze, no qual o animal controla um
joystick para se movimentar no ambiente (Furuya e col., 2007). Nesse paradigma, no
entanto, são as pistas que se movem em relação ao animal, e não o contrario. Porém,
mesmo nesses experimentos pode-se ver uma clara atividade diferencial das place cells de
acordo com o local em que o animal se encontra no ambiente virtual.
Maguire e col. (2000) estudaram as propriedades espaciais do hipocampo em
taxistas em Londres. Foi verificado que os taxistas, em relação ao grupo controle de não-
taxistas, apresentavam maior atividade no hipocampo, além de uma parte posterior
aumentada em relação à do grupo controle.
Figura 5 – Atividade neuronal diferencial em 3 ambientes diferentes, porém com características

similares. Em A., as pistas distais estão localizadas mais afastadas de onde o animal se movimenta.
Em B., as pistas encontram-se próximas e em C., o ambiente todo é reduzido, mantendo-se as
proporções de B. Adaptado de Hori e col. (2005).
Outros sistemas de navegação espacial

Além do hipocampo, há outros sistemas que parecem influenciar no processo de
navegação espacial, tanto em ratos, quanto em primatas. Ambos os animais utilizam-se de
múltiplos mapas simultaneamente para se localizarem. No entanto, esses sistemas não
parecem ser suficientes para que haja uma navegação eficaz.
Head direction cells
Um dos sistemas que pode auxiliar a navegação é o de direção da cabeça (head
direction system). Células com suas taxas de disparo refletindo a direção da cabeça foram
descobertas em diversas estruturas do encéfalo do rato: pós-subículo (PoS; Ranck, 1984),
núcleo anterior talâmico (ATN; Taube, 1995), núcleo mamilar lateral (LMN; Leonhard e col.,
1996), núcleo lateral dorsal do tálamo (LDN; Mizumori e Wiliams, 1993) e, em menor

Neurociências
quantidade, nos córtices parietal posterior e cingulado (PPC e PCC; McNaughton e col.,
1994).
As head direction cells apresentam uma única direção preferida de ativação, na qual
sua atividade é máxima, diminuindo à medida em que o animal move a cabeça
progressivamente para longe desse ponto. As taxas de disparo dessas células não são
correlacionadas ao ângulo entre a cabeça e o corpo, mas sim à orientação da cabeça em
relação ao ambiente. Como a direção preferida de ativação não se altera, a célula não pode
codificar informações egocêntricas em relação a uma pista, mas sim informações
alocêntricas em relação a uma direção de referência. As head direction cells geralmente são
sensíveis à rotação de pistas distais (Taube, 1995), evidenciado pela alteração simultânea
de duas ou mais células registradas simultaneamente.
Alguns autores propõem uma forma de se interpretar as head direction cells como
estando dispostas em um círculo, ou seja, em um arranjo de 360º. Cada região, ou cada
população de células, agiria de forma a integrar a informação advinda das head direction
cells vizinhas, sendo, dessa forma, esquematizadas em um anel de ativações. Esse sistema
seria auxiliado por células intermediárias que recebem informações do sistema vestibular
(Fig. 6).
Muitas das áreas que contêm as head direction cells estão anatomicamente
conectadas. O núcleo anterior dorsal do tálamo (AD) e o PoS estão diretamente conectados;
PoS envia uma projeção ao LMN, que, por sua vez, se projeta para o AD. O LDN também se
conecta com o PoS. O PPC recebe projeções do LDN e manda projeções para o PoS e para
o córtex cingulado, enquanto o PCC se conecta diretamente com o ATN e PoS.
Grid cells
Como uma interface entre o hipocampo e o neocórtex, o córtex entorrinal apresenta
também alguma atividade relacionada a memória e a localização. Estudos recentes
mostram que o córtex entorrinal medial também apresenta neurônios com atividade
relacionada a posicionamento (Fyhn e col., 2004). Essas células, denominadas grid cells,
são assim chamadas por apresentarem um padrão de ativação independente de pistas do
ambiente. Sua ativação se dá em diversos lugares do mesmo ambiente, diferentemente das
place cells, seguindo um padrão triangular, ou seja, a célula dispara quando a posição do
animal coincide com vértices de um grid triangular periódico que cobre toda a superfície do
ambiente, com células diferentes tendo coordenadas de ativação diferentes ao longo do grid
(McNaughton e col., 2006).

Figura 6 – Modelo unidimensional de integração de sinal de acordo com a direção da cabeça do rato
e a sua velocidade angular. a. Head direction cells arranjadas em círculo, para fins didáticos, de
acordo com sua posição preferencial de disparo. Cada célula se conecta com as adjacentes. A
influência de uma célua sobre a outra decresce como uma função da distância (linhas vermelhas e
cinza), cores quentes representando maior taxa de disparos. b. A rotação nos sentidos horário ou
anti-horário pode ser detectada por um grupo intermediário de células que recebe informações
tantodo sistema vestibular quanto da orientação da cabeça por células imediatamente superiores a
elas. Na ausência de movimento, as células das outras camadas estariam com ativação abaixo do
limiar. Adaptado de McNaughton e col, 2006.
Figura 7 - Modelo de integração de rotas. Adaptado de McNaughton e col. (2006).

Neurociências
O sistema de grid cells, por ser menos específico do que o sistema de place cells, é
tido como uma etapa anteiror à formação dos place fields no hipocampo propriamente dito,
como se a informação final fosse passada ao hipocampo para a representação do ambiente.
Dessa forma, acredita-se que o córtex entorrinal medial seja, junto com o sistema de head
direction, um dos componentes principais para o processo de integração de rotas (dead
reckoning), que é definida como a habilidade de retornar a um local de origem mesmo após
ter feito um caminho tortuoso ou mesmo no escuro (Redish, 1997) (Fig. 7). Esse sistema
não depende do uso de pistas externas do ambiente. No entanto, sabe-se que esse sistema
acumula erros e imprecisões durante uma trajetória feita do escuro ou sob baixas condições
de visibilidade. Os vários componentes desse sistema seriam utilizados para atualizar essas
coordenadas antes de passar a informação para o hipocampo, onde a integração e
utilização de pistas distais seria utilizada (Einevol e col., 2006) (Fig. 8).
A importância evolutiva da memória episódica e da navegação espacial

Como vimos, é muito difícil, ou quase impossível, dissociar navegação espacial de
memória episódica, sendo a primeira apenas uma parte da segunda. Os resultados desses
estudos mostram que o hipocampo deve ter uma função importante na formação de
memórias do tipo episódica. A codificação de informações a respeito de lugares, certamente
essencial para os processos evolutivos dos animais, é muito bem atribuída ao hipocampo
nos vertebrados. Outra importante função atribuída a essa estrutura é a de codificar
informação de como se chegar a lugares desejados, essencial para vários processos como
busca de alimento, encontro de parceiros sexuais, localização dos melhores abrigos, etc. Da
mesma forma, o conhecimento, ou a memória, de melhores épocas do ano para migração,
onde se proteger do frio no inverno ou onde conseguir alimento nas estações que o
precedem, em qual flor ou em qual horário conseguir mais néctar, entre outras questões
adaptativas, são relacionadas ao hipocampo através dos processos de formação de
memória episódica.

Figura 8 – Modelo para a formação de place fields. (A) conexão entre grid cells do córtex entorrinal
medial e place cells do hipocampo. Todas as place cells que contém um place field naquele ambiente
recebem informação das grid cells com ativação similar. Place cells com campos de ativação
menores (verde) recebem projeções da parte dorsal do córtex entorrinal, enquanto place cells com
campos maiores (amarelo) são inervadas por células mais ventrais do cortex entorrinal.
Interneurônios (vermelho) auxiliam na inibição e controle do sinal. As cores dentro dos place fields
simbolizam as taxas de disparo. Cores quentes indicam altas taxas. (B) Os grids são construídos de
acordo com três funções sinusóides com 120º de diferença entre eles. Adaptado de Einevoll (2006).

Neurociências
Neurobiologia das Emoções
Bárbara Onishi
[email protected]
O que é emoção?
Medo, raiva, alegria, vergonha, tristeza e frustração são todos exemplos de
emoções. De forma geral, emoção se refere a um estado mental associado a alterações
fisiológicas e comportamentais eliciado por um evento externo ou interno de significância
para o organismo.
Uma das primeiras teorias sobre as emoções foi a levantada pelo psicólogo William
James em 1884, em um artigo intitulado O que é a Emoção?. James sustentou a idéia de
que as emoções são o resultado da percepção das alterações fisiológicas disparadas por
eventos significativos. Por exemplo, ao nos defrontarmos com uma serpente numa mata
apresentamos uma resposta de fuga, que é acompanhada por diversas alterações
fisiológicas tal como aumento da pressão sanguínea e dos batimentos cardíacos, contração
de diferentes músculos, aumento da sudorese, etc. Para James, essas sensações são as
emoções. Se essas sensações pudessem ser eliminadas, as emoções não ocorreriam. Ou
seja, segundo James, sentimos medo porque fugimos e não fujimos porque sentimos medo.
A teoria de James ganhou destaque até meados de 1920, quando foi questionada
pelos estudos do fisiologista Walter Cannon. Cannon sugeriu que as reações fisiológicas
resultantes de emoções distintas podiam ser as mesmas. Por exemplo, alterações
fisiológicas como aumento dos batimentos cardíacos e da sudorese e inibição da digestão
estão presentes tanto num estado de medo quanto num estado de raiva. Portanto, se a
teoria de James estivesse correta, duas emoções diferentes não poderiam estar associadas
às mesmas reações fisiológicas. Ademais, Cannon observou que as alterações fisiológicas
ocorrem, em geral, mais lentamente que as sensações de um estado emocional, i.e., em
geral, sentimos as emoções antes mesmo de as mudanças fisiológicas a elas associadas
ocorrerem. Estudos posteriores demonstraram que Cannon estava errado ao afirmar que o
medo e a raiva compartilham as mesmas reações fisiológicas.
Com o surgimento do pensamento behaviorista, por volta de 1910, o estudo da
mente e, por conseguinte, o estudo das emoções, começou a ser considerado como não-
científico. De fato, emoção era um típico exemplo dado pelos behavioristas de um tópico
obscuro que deveria ser rejeitado pela comunidade científica.
Por volta de 1950, a revolução cognitivista retomou a concepção de mente e surgiu,
então, a ciência da cognição. Estudos sobre os mecanismos das emoções foram, então,
retomados. Pesquisadores como Magda Arnold, Caroll Izard, Jaak Panksepp, Paul Ekman,

Jeffrey Gray, Antonio Damasio, Richard Davidson, Edmund Rolls, entre outros contribuíram
e têm contribuído com formulações teóricas sobre os mecanismos das emoções, mas a
questão central levantada por James, O que é a Emoção?, ainda não tem uma resposta
consensual.
Por exemplo, Rolls e Gray propõem que emoções são estados eliciados por
recompensas e punições. Quando um organismo emite respostas para a obtenção de um
dado estímulo, nos referimos a este estímulo como recompensa. Quando, por outro lado,
um organismo emite respostas de esquiva a um dado estímulo, nos referimos a este
estímulo como punição. A codificação de um estímulo como recompensa ou punição seria
um mecanismo do sistema nervoso na interface entre a percepção do estímulo e a produção
de comportamentos e respostas autonômicas frente a ele. Esse mecanismo de atribuição de
valor a estímulos do meio ambiente teria um valor adaptativo numa perspectiva evolutiva:
respostas que garantem a obtenção de recompensas ou respostas que garantem a esquiva
e eliminação de punições tendem a aumentar a chance de sobrevivência e o sucesso
reprodutivo do indivíduo.
Paul Rozin apresenta uma visão um tanto diferente, que não privilegia as respostas
de aproximação e esquiva na definição de emoção. Para ele, emoções seriam estados
mentais positivos ou negativos associados com alterações fisiológicas e comportamentais
eliciados por estímulos com significância para o indivíduo. Segundo essa concepção, um
organismo trabalha para manter ou aumentar um estado emocional positivo, e por outro
lado, trabalha para reduzir, eliminar ou evitar um estado emocional negativo. Um bom
exemplo que ilustra a diferença entre as visões “positivo-negativo” e “aproximação-esquiva”
é a raiva, que apesar de ser um estado emocional negativo, está associada com uma
resposta de aproximação, e não de esquiva.
Apesar das fortes evidências contra a teoria de James, i.e., contra o papel das
reações fisiológicas na produção das emoções, Damasio recentemente propôs uma
hipótese bastante parecida com a teoria de James: a hipótese dos marcadores somáticos.
Esse autor defende que depois que um estímulo com significância para um organismo é
percebido, uma reação fisiológica (marcador somático) ocorre, a qual resulta numa
sensação. Essa sensação é avaliada pelo organismo, contribuindo para a tomada de uma
decisão, i.e., para a escolha de uma resposta frente ao estímulo.
Esses foram alguns exemplos de hipóteses levantadas sobre os processos
subjacentes às emoções. Apesar das diferenças entre elas, parece haver um consenso de
que as emoções operam no sistema nervoso através de um mecanismo de atribuição de
valor, seja a estímulos do meio ambiente ou às próprias sensações inerentes ao estado
emocional. As emoções, de uma forma geral, são processos que facilitam a emissão de
respostas apropriadas a eventos significativos ambientais e internos. Por exemplo, reações

Neurociências
emocionais são críticas para a emissão de respostas tais como evitar predadores e outras
fontes de perigo, encontrar alimento e parceiros sexuais, apresentar cuidado parental, e
engajar em comportamentos sociais adequados. Assim, também é consenso que as
emoções são funções do sistema nervoso com alto valor adaptativo numa perspectiva
evolutiva, atuantes para a sobrevivência do indivíduo e da espécie.
Reações emocionais inatas e aprendidas

Ao estudar comparativamente as expressões emocionais em seres humanos e em
outros animais, particularmente as expressões corporais e faciais, Darwin observou
semelhanças nas expressões emocionais entre indivíduos de uma mesma espécie e entre
diferentes espécies de animais, o que o levou a propôr que muitas das expressões
emocionais de um organismo são inatas ou herdadas, i.e., não são aprendidas pelo
indivíduo. Darwin observou, por exemplo, que a ereção dos pêlos do corpo e os
comportamentos de urinar e defecar em situações de grande perigo são muito comuns entre
animais de diferentes espécies, como mostra a Fig. 1. Darwin descreveu uma série de
outros exemplos comuns entre animais de diferentes espécies, como o comportamento de
morder quando se está com raiva; a emissão de sons e a exibição de partes do corpo (como
garras, ereção dos pêlos, batimento das asas, etc) em condições de perigo como meio de
desencorajar o adversário de atacar; a emissão de sons, cheiros, posturas e exibição de
partes do corpo como sinal de receptividade sexual, entre muitos outros.
Darwin também observou que as expressões faciais mostram-se muito similares
entre seres humanos de todo o mundo, indicando que elas independem da origem racial e
da herança cultural do indivíduo. Também mostrou que mesmo indivíduos que não tiveram
oportunidade de aprender os movimentos faciais e corporais com outras pessoas, como
cegos de nascença e bebês muito novos, exibem normalmente expressões emocionais.
Estudos mais recentes mostraram, por exemplo, que as expressões faciais de seres
humanos produzidas por suas experiências gustatórias com diferentes sabores eliciaram
padrões de expressões faciais altamente similares entre adultos e recém-nascidos com
menos 16 horas de vida e que não haviam tido ainda sua primeira experiência alimentar
(Steiner & Glaser, 1995). Além disso, um estudo com diferentes espécies de primatas não-
humanos demonstrou que as expressões faciais eliciadas por diferentes sabores são
similares entre as espécies para cada categoria de sabor, indicando homologia no que se
refere aos processos subjacentes a essas expressões faciais entre grupos de primatas
relacionados.

Figura 1. Reações emocionais de animais de diferentes espécies perante situações de perigo.

Note a ereção dos pêlos no gato e no cão, e das penas na galinha. (A) gato assustado com um
cachorro; (B) galinha afastando um cão de sua ninhada; (C) cachorro aproximando-se de outro
cachorro com intenções hostis. Modificado a partir de Darwin (1872).
Uma função importante das expressões faciais e corporais é de comunicar emoções

a outros indivíduos. Elas funcionam como um sinal preditivo da tendência de um indivíduo a
se engajar em uma série de comportamentos em função das condições ambientais,
incluindo as sociais. E nesse contexto, as expressões faciais e o seu reconhecimento pelos
outros indivíduos do grupo exercem um papel chave na interação social. Gene Sackett
(1966), ao estudar as expressões faciais de macacos que não haviam tido qualquer contato
social prévio ao experimento, observou que esses macacos produziam expressões faciais e
respostas comportamentais diante de fotografias de coespecíficos com diferentes tipos de
expressão (e.g. expressão ameaçadora, de medo ou de alegria) similares a macacos que
faziam parte de um grupo social. Este estudo demonstrou que a experiência social não era
necessária para a produção de expressões faciais e comportamentos típicos de sua espécie
produzidos diante de expressões faciais de coespecíficos. Isso indica que existe um
componente inato tanto na produção de expressões faciais quanto no reconhecimento do
conteúdo emocional das expressões. Entretanto, quando os macacos isolados foram
inseridos em um grupo social, mostraram-se incapazes de reagir prontamente e
apropriadamente a expressões faciais e comportamentos de outros macacos numa
dinâmica social. A experiência social foi fundamental para os macacos previamente isolados
aprenderem sobre mensagens emocionais num contexto social complexo e reagir
apropriadamente a tais situações.
De fato, as emoções estão sujeitas a aprendizagem e memória. Isto é, os animais
são capazes de aprender a apresentar respostas emocionais a estímulos que outrora não
eliciavam respostas emocionais reflexas, e de se recordar do conteúdo aprendido. Essa
capacidade de aprendizagem e memória de natureza emocional resulta em flexibilidade na
emissão de respostas emocionais frente às mudanças do meio ambiente, o que tem alto

Neurociências
valor adaptativo.
John Watson demonstrou experimentalmente esse tipo de aprendizagem em 1920 –
o que veio a ser conhecido como o caso do pequeno Albert e o rato. Watson observou que
um som alto e estridente induzido por uma martelada numa haste de metal eliciava choro no
bebê Albert – o bebê apresentava um medo natural àquele tipo de som. Watson, em
seguida, colocou um rato albino diante do bebê e observou que Albert tentava tocar no rato,
não apresentando medo pelo animal. Imediatamente depois que o bebê tocou o rato, o
pesquisador produziu um som estridente próximo ao bebê. Depois de alguns pareamentos
entre o rato e o som, Watson observou que Albert passou a chorar na presença do rato. O
bebê passou a sentir medo pelo rato, algo que não sentia antes. Watson demonstrou
experimentalmente que reações emocionais são passíveis de aprendizado: indivíduos
podem aprender a emitir respostas emocionais a novos estímulos.
Ferramentas de estudo: abordagens comportamentais

O procedimento experimental utilizado por Watson foi inicialmente descrito pelo
fisiologista Ivan Pavlov, e em sua homenagem é conhecido por condicionamento Pavloviano
(Fig. 2). Ao estudar a resposta de salivação reflexa de cães, Pavlov observou que os
animais não somente salivavam na presença do alimento, mas também salivavam diante do
pote onde a comida seria apresentada, e até mesmo diante dos sons produzidos na sua
chegada ao laboratório – todos esses eram eventos que prediziam a liberação da comida
aos cães. Pavlov, então, elaborou um experimento no qual pareou o som de uma
campainha, que não eliciava a resposta de salivação nos cães, à apresentação de carne,
que por sua vez naturalmente eliciava a salivação. Depois de realizar esse pareamento 60
vezes, Pavlov apresentou aos cães o som da campainha na ausência da liberação da carne,
e mediu a quantidade de saliva produzida pelos animais. Ele observou que bastava o som
da campainha para os animais salivarem.
O condicionamento Pavloviano, também denominado condicionamento clássico, é
uma ferramenta comportamental comumente utilizada no estudo de aprendizagem
emocional em animais não-humanos e humanos, tanto envolvendo estímulos aversivos
(“negativos”), como no caso do experimento idealizado por Watson, quanto envolvendo
estímulos apetitivos (“positivos”), como no caso do experimento de Pavlov.

Figura 2. Procedimento de condicionamento Pavloviano. Modificado a

partir de Moreira & Medeiros (2007).
O medo aprendido (ou medo condicionado) tem sido uma das reações emocionais
mais amplamente estudadas pela neurociência. Sua investigação se faz comumente através
do procedimento de condicionamento clássico aversivo. Nesta situação, a apresentação de
um estímulo inicialmente neutro, por exemplo um estímulo sonoro, é pareado algumas
vezes a um evento aversivo, geralmente um choque nas patas do animal. O som passa a
eliciar respostas que tipicamente ocorrem na presença de perigo, como comportamentos
defensivos (e.g., respostas de congelamento), respostas autonômicas (e.g., mudança de
pressão arterial e batimentos cardíacos), respostas neuroendócrinas (e.g., liberação de
hormônios das glândulas adrenais e da pituitária), entre outras. Em geral, toma-se a
resposta de congelamento (ou “freezing”) como medida de medo condicionado em roedores.
Os comportamentos relacionados ao condicionamento Pavloviano são chamados de
comportamentos respondentes. Um comportamento respondente é aquele que é eliciado
por um evento significativo do ambiente (e.g., o choro do bebê Albert perante ao rato albino,
e o congelamento diante do estímulo sonoro condicionado), e prepara o organismo para
enfrentar o evento em questão. Diferentemente, quando um organismo emite um
comportamento para produzir uma consequência, chamamos este comportamento de
operante. Por exemplo, o choro de um bebê para obter a atenção de seus pais é um
comportamento operante: o bebê chora para a obtenção ou manutenção de um estímulo
que lhe causa reações emocionais positivas – a atenção de seus pais. A estímulos desta
natureza nos referimos como recompensas. A resposta de fuga de um animal para escapar
de um predador também é um comportamento operante; neste caso, o animal emite uma

Neurociências
resposta de esquiva a um estímulo que lhe causa reações emocionais negativas. A

estímulos desta natureza nos referimos como punições.
Condicionamento operante é a situação de aprendizado de um comportamento
operante, e é amplamente empregado no estudo das emoções. O procedimento de esquiva
passiva (ou inibitória) é um exemplo de condicionamento operante aversivo, no qual a
apresentação de um estímulo que produz uma reação emocional negativa aumenta a
probabilidade de o animal emitir uma resposta de esquiva a este estímulo. Nesta situação
comportamental, por exemplo, um rato é introduzido sobre uma estreita plataforma
localizada acima de um assoalho de metal. O rato mostra uma tendência natural de descer
da pequena plataforma para o assoalho da caixa. No entanto, toda vez que o rato toca o
assoalho, recebe um choque nas patas. O tempo que o animal leva para descer da
plataforma aumenta com o treino, indicando aprendizagem do condicionamento operante: o
animal aprende a emitir o comportamento de permanecer sobre a plataforma para se
esquivar de um perigo – o choque nas patas.
Condicionamentos operantes apetitivos também são amplamente empregados no
estudo das emoções. Neste caso, a apresentação de um estímulo que produz uma reação
emocional positiva aumenta a probabilidade de o animal emitir uma resposta para a
obtenção ou manutenção deste estímulo. Por exemplo, é comum a utilização de um
procedimento no qual um rato é treinado a pressionar uma barra no interior de uma caixa
para receber alimento. Outro exemplo é o procedimento de auto-estimulação elétrica. Neste
caso, a estimulação elétrica em determinadas regiões do encéfalo funciona como
recompensa, i.e., o organismo produz comportamentos para obter a estimulação.
O fenômeno de auto-estimulação elétrica tem sido usado como ferramenta para o
entendimento dos mecanismos de recompensa e punição no sistema nervoso. Em algumas
regiões do encéfalo, a estimulação elétrica pode mimetizar os efeitos de recompensas
naturais para um organismo, como os efeitos de comida para um animal com fome ou de
água para um animal com sede. Até mesmo alterações de humor, como sensações de bem-
estar ou de mal-estar relatadas por seres humanos, podem ser provocadas por estimulação
elétrica em determinadas áreas do encéfalo.
Não raro a técnica de apresentação de estímulos de natureza emocional, como por
exemplo figuras e palavras com conteúdo emocional, é empregada nas pesquisas sobre
emoções em seres humanos. Peter Lang e colaboradores (1995) criaram o Sistema
Internacional de Figuras Afetivas (IAPS, do inglês, International Affective Picture System)
que consiste em um conjunto de fotos de cenas de violência, de sexo, de cenas alegres ou
neutras, entre outras, que evocam diferentes respostas emocionais. Centenas de indivíduos
foram expostos a essas fotos e classificaram-nas quanto à valência e ao grau de alerta das
reações emocionais que elas evocavam. Essas cenas e as suas respectivas classificações

têm sido utilizadas em numerosos estudos que empregam a ferramenta de produzir reações
emocionais em indíviduos. Algumas dessas cenas são mostradas na Fig. 3.
Figura 3. Algumas cenas do Sistema Internacional de Figuras Afetivas (IAPS - International

Affective Picture System). Modificado a partir de Lang et al. (1995).
Bases Neurais
Em 1878, o neurologista Paul Broca cunhou o termo “lobo límbico” para um conjunto
de estruturas nervosas localizadas ao redor do corpo caloso, incluindo o córtex cingulado, o
córtex na superfície medial do lobo temporal e o hipocampo, como mostra a Fig. 4.
Figura 4. Lobo límbico definido por Broca. Modificado a partir de Bear et al. (2002).
Mais tarde, em 1937, o neurologista James Papez propôs que as emoções seriam
processadas por uma rede de circuitos neurais no cérebro que incluia o hipotálamo, o
tálamo anterior, o córtex cingulado e o hipocampo (Fig. 5). Para Papez, a experiência
emocional seria determinada pela atividade do córtex cingulado, e a expressão emocional
pelo hipotálamo. Papez propôs que o córtex cingulado e o hipotálamo manteriam conexões
bidirecionais indiretas entre si através do hipocampo e do tálamo anterior, de modo que a
experiência emocional e a expressão emocional se relacionariam.

Neurociências
Figura 5. Circuito proposto por Papez. Modificado a partir de Bear et al. (2002).
No início da década de 1950, o fisiologista Paul MacLean referiu-se ao circuito

proposto por Papez como “circuito de Papez” e adicionou a ele a amígdala, o córtex
orbitofrontal e parte dos núcleos da base propondo um sistema mais ampliado responsável
pelas emoções no cérebro, que denominou “sistema límbico”, valendo-se do termo
inicialmente empregado por Broca. O conceito de sistema límbico como a parte emocional
do cérebro foi amplamente difundido e apesar da sua inconsistência, não é difícil nos
depararmos com esse termo até os dias atuais. Fortes evidências mostram o envolvimento
de algumas estruturas do sistema límbico em processamentos de ordem emocional, como a
amígdala e o hipotálamo. Por outro lado, as pesquisas têm mostrado que outras estruturas
do sistema límbico não desempenham papel importante neste tipo de processamento, como
por exemplo, o hipocampo. Ademais, a idéia de um sistema único responsável pelas
emoções no cérebro tem se mostrado inconsistente. Diferentemente, parece que diferentes
circuitos neurais amplamente distribuídos no sistema nervoso estão envolvidos com
diferentes situações emocionais ou aspectos do processamento emocional.
Algumas estruturas do sistema nervoso têm sido fortemente relacionadas às
emoções. Historicamente, a primeira sugestão de que a amígdala estaria envolvida na
produção de comportamentos emocionais surgiu a partir das observações de Klüver e Bucy
(1939). Esses autores mostraram que a ablação bilateral das porções anteriores do lobo
temporal de macacos produziu um conjunto de comportamentos, denominado síndrome de
Klüver-Bucy, cuja característica principal era o que os pesquisadores chamaram de cegueira
psíquica, que compreendia a aparente perda da reação emocional a estímulos sensoriais,
principalmente os visuais. Isto é, os animais podiam ver perfeitamente, mas os objetos
pareciam ter perdido o seu significado “psicológico”; por exemplo, os macacos lesados

levavam à boca objetos não comestíveis, tentavam copular com indivíduos do mesmo sexo
ou de outras espécies, e perdiam o medo por cobras e pessoas. Mais tarde, outros estudos
tentaram determinar que regiões específicas do lobo temporal tinham maior relevância na
síndrome, e nesse sentido, o trabalho de Weiskrantz (1956) foi marcante por demonstrar
que a ablação bilateral da amígdala em macacos levou a uma série de mudanças
comportamentais que incluia mansidão, perda de responsividade emocional, exame
excessivo de objetos, consumo de itens alimentares previamente rejeitados e aproximação
de objetos previamente relacionados ao medo, que em muito se assemelhavam aos
comportamentos observados por Klüver e Bucy. Weiskrantz (1956) também reportou que a
ablação bilateral da amígdala em macacos resultou em prejuízo na aprendizagem da tarefa
de esquiva ativa, em que o animal deve produzir uma resposta operante (de esquiva) na
presença de um estímulo que sinaliza a pendência de um choque. Baseado nessas e em
outras observações, Weiskrantz (1956) foi um dos primeiros a sugerir que a amígdala seria
fundamental para que as representações de estímulos preditivos fossem associadas às
propriedades afetivas de estímulos biologicamente significativos – idéia que é sustentada
até hoje por numerosas evidências. Mais tarde, Jones e Mishkin (1972) sugeriram que
muitos dos sintomas da síndrome de Klüver-Bucy seriam decorrentes do prejuízo neste tipo
de aprendizagem (ver Rolls, 1992). Consistentes com esses achados e com essa
interpretação estão os relatos do envolvimento da amígdala no medo condicionado (descrito
acima), onde um estímulo (e.g., um som) prediz a ocorrência de um estímulo aversivo (e.g.
um choque). Humanos e animais não-humanos com danos na amígdala não aprendem a
apresentar medo diante do estímulo preditivo, diferente de indivíduos normais. De fato, do
ponto de vista hodológico, a amígdala encontra-se em condições de associar
representações sensoriais de um dado estímulo com as propriedades afetivas de um
estímulo significativo. Depois de processadas e associadas na amígdala, essas informações
podem modificar respostas autonômicas, endócrinas, somáticas e comportamentais por
meio das diferentes áreas de projeção da amígdala.
Estudos com seres humanos têm demonstrado que a amígdala exerce um papel
fundamental no reconhecimento de expressões faciais de medo. Este envolvimento da
amígdala se dá especialmente em se tratando de expressões faciais de medo, e não de
outros tipos. Por exemplo, se solicitarmos a um paciente com dano amigdalar classificar
uma expressão facial de medo numa escala de 1 (sem medo) a 6 (amedrontada), ele dirá 2
ou 3, ao passo que um indivíduo normal dirá 5 ou 6. O mesmo não ocorre para uma
expressão facial alegre: ambos os sujeitos classificarão essa expressão dentro da mesma
escala. Em seres humanos, a amígdala parece ser fundamental para a avaliação de
somente poucos tipos de expressões faciais, e não parece importante para produzir
expressões faciais apropriadamente. De fato, danos amigdalares em seres humanos

Neurociências
provocam fracos prejuízos na interação social, o que não ocorre em animais não-humanos.
Macacos com danos na amígdala, por exemplo, mostram graves prejuízos em responder a
estímulos sociais e, em geral, são isolados do convívio social pelos outros indivíduos do
grupo.
Outra estrutura nervosa que tem sido sistematicamente descrita como envolvida em
processamento emocional é o córtex orbitofrontal. Uma das primeiras evidências disso
surgiu do famoso caso Phineas Gage. Phineas Gage, aos 25 anos, era o contramestre de
uma equipe que trabalhava na construção de uma estrada de ferro. O trabalho de Phineas
Gage era preparar dinamites para a explosão das rochas do terreno. Em setembro de 1848,
um trágico acidente acometeu Gage. Uma explosão inesperada produzida por um erro no
preparo de uma dinamite fez com que uma barra de ferro penetrasse pela bochecha de
Gage saindo pelo topo frontal de sua cabeça. Gage se recuperou dos ferimentos produzidos
pelo acidente, mas mostrou mudanças acentuadas em seu comportamento e personalidade.
Antes do acidente ele era uma pessoa responsável e admirada pela eficiência, paciência e
bom gerenciamento em seu trabalho e vida pessoal. Depois, tornou-se irresponsável,
impaciente e grosseiro. Também não conseguia planejar ações para o futuro e executá-las;
logo se perdia em outros planejamentos, que sempre abandonava. No entanto, ele não
apresentava sinais de prejuízos de outras naturezas, tais como perda de inteligência,
deficiências motoras ou de percepção. Gage parece ter perdido a habilidade de controlar
suas respostas emocionais. Parece ter perdido também a habilidade de avaliar o significado
dos eventos e tomar decisões apropriadas diante deles. O resultado disso foi que Gage logo
foi demitido de seu emprego e seguiu uma vida sem direcionamento até sua morte, que se
deu 13 anos mais tarde, fruto de uma forte crise epiléptica. O crânio de Phineas Gage e a
barra de ferro que produziu o acidente foram preservados, e muitos anos mais tarde,
Damasio e colaboradores (1994) reconstruíram a lesão de Gage com técnicas de
neuroimagem confirmando o dano da porção ventromedial do córtex pré-frontal, como
mostra a Fig. 6.
A região acometida em Phineas Gage corresponde a uma parte do córtex
orbitofrontal. O córtex orbitofrontal equivale à porção mais ventral do córtex pré-frontal e
recebe este nome por estar posicionado imediatamente acima das órbitas. O córtex
orbitofrontal é particularmente bem desenvolvido em primatas, incluindo seres humanos, e
pouco desenvolvido em outros animais, tais como os roedores. Em seres humanos, lesão do
córtex orbitofrontal resulta em euforia, irresponsabilidade e perda de afeto. Essas alterações
se refletem na tendência a responder a determinados estímulos quando responder é
inapropriado. Esta característica é evidente também em primatas não-humanos e em
roedores com danos na mesma região. Por exemplo, macacos e ratos com lesão do córtex
orbitofrontal exibem desempenho prejudicado em um teste comportamental denominado

tarefa de reversão. Nesta tarefa, o animal é inicialmente recompensado por escolher um

determinado objeto entre um conjunto de objetos diferentes. Em seguida, o reforçamento é
revertido, ou seja, a escolha de um outro objeto e não mais do primeiro é que passa a ser
recompensada. Animais com danos no córtex orbitofrontal continuam respondendo ao
primeiro objeto depois da reversão, diferentemente de animais normais, que alteram a sua
escolha para o objeto que passa a resultar em recompensa. De maneira similar, lesão do
córtex orbitofrontal também leva a prejuízo em tarefas de extinção, nas quais a escolha de
um objeto, que inicialmente era recompensada, passa a resultar em nenhuma recompensa.
Animais com lesão do córtex orbitofrontal continuam respondendo mesmo quando as
respostas não são mais reforçadas, diferentemente de animais normais, que param de
responder. Sugere-se que a atividade do córtex orbitofrontal facilitaria a mudança de
representações associativas antigas e a aquisição de novas associações pela amígdala
(Schoenbaum et al., 2007). De fato, essas estruturas mantêm densas conexões
bidirecionais entre si. Essas mudanças comportamentais resultantes de danos no córtex
orbitofrontal têm sido relacionadas com a incapacidade de tomar decisões apropriadas
observadas em seres humanos e outros animais com lesão nesta região.
Figura 6. O crânio de Phineas Gage e a reconstrução da imagem do seu encéfalo

trespassado pela barra de ferro. Modificado a partir de Gazzaniga et al. (2006).
O núcleo accumbens, por sua vez, está envolvido com os estados afetivos ligados a
recompensas prazerosas. Por exemplo, estudos eletrofisiológicos mostram que a ativação

Neurociências
de neurônios do núcleo accumbens se dá pela apresentação de estímulos prazerosos como

alimentos, oportunidade de contato sexual com outros indivíduos, e até mesmo drogas de
abuso como anfetamina, heroína e cocaína. A ativação dessa região também se dá por
estímulos reforçadores secundários, i.e., estímulos inicialmente neutros que passam a
predizer a ocorrência das recompensas naturais. Evidências sugerem que as projeções
dopaminérgicas para o núcleo accumbens estão envolvidas com a atribuição de valor de
incentivo a recompensas. Por valor de incentivo entende-se o quanto um organismo deseja
um determinado estímulo, ou seja, o quanto ele está disposto a trabalhar para obter aquele
estímulo. Isso é diferente de valor hedônico, que se refere a quanto um organismo gosta de
um determinado estímulo. A dopamina parece ser importante para o valor de incentivo, mas
não para o valor hedônico das recompensas. Por outro lado, os neurotransmissores
opióides parecem estar envolvidos com o valor hedônico. Por exemplo, a ativação de
receptores opióides no núcleo accumbens por injeção de morfina aumenta a habilidade de
uma solução adocicada eliciar reações afetivas positivas.
Dentre outras regiões importantes para o processamento emocional encontram-se,
por exemplo, o córtex cingulado, o hipotálamo lateral e estruturas do tronco encefálico. O
córtex cingulado está envolvido com as sensações e antecipações de dor. Um dos
tratamentos para dores intratáveis em seres humanos consiste na destruição do córtex
cingulado, que por razões ainda não claras, também auxilia no tratamento de depressão e
do transtorno obsessivo-compulsivo. Danos no hipotálamo lateral, por sua vez, eliminam
comportamentos motivados, como por exemplo o comportamento de se alimentar, de beber,
e o comportamento sexual. E consistentemente, a estimulação elétrica do hipotálamo lateral
elicia esses tipos de comportamentos, além do comportamento maternal, do ataque
predatório, do comportamento defensivo, entre outros. Finalmente, apesar de a visão
tradicional sobre as funções do tronco encefálico colocarem-no numa posição meramente
reflexiva, estudos recentes têm atribuído a ele importância para as experiências emocionais.
Por exemplo, a sensação de dor é modulada pela substância cinzenta periaquedutal,
enquanto que a sensação de prazer eliciada por um alimento é modulada pelo núcleo
parabraquial da ponte. O núcleo tegmental peduncolopontino tem se mostrado importante
para o valor reforçador de drogas de abuso como a morfina e a anfetamina. De fato, a
capacidade de reagir a estímulos significativos do ambiente, função primordial das emoções,
é tão fundamental para a sobrevivência e sucesso do indivíduo, que ela deve ter surgido
muito cedo na história evolutiva dos vertebrados, quando a organização do sistema nervoso
era dominada pelo tronco encefálico (Panksepp, 1998).
A relação das emoções com outras funções cognitivas

Conforme descrevemos acima, pacientes com lesão da amígdala se mostram

prejudicados em apresentar respostas autonômicas de medo a um estímulo que prediz a

ocorrência de um estímulo aversivo. Por exemplo, a paciente S.P., com dano bilateral na
amígdala, foi apresentada à figura de um quadrado na tela de um computador por alguns
segundos, a qual se seguia imediatamente um choque fraco no seu pulso. Pessoas normais
mostram alterações na condutância da pele imediatamente após o recebimento do choque,
indicando reação aversiva ao choque, e também mostram alterações na condutância da
pele perante à figura do quadrado após alguns pareamentos, indicando o aprendizado do
condicionamento aversivo. Entretanto, a paciente S.R. apesar de mostrar alterações na
condutância da pele em resposta ao choque, não mostrou qualquer alteração diante do
quadrado, demonstrando que não foi capaz de aprender o condicionamento aversivo.
Apesar disso, a paciente foi capaz de relatar verbalmente que sabia que receberia um
choque tão logo o quadrado fosse apresentado na tela do computador. Claramente esses
dados demonstram uma dissociação entre o aprendizado explícito sobre um evento
emocional e o aprendizado implícito sobre a mesma situação. Como foi discutido em
capítulo anterior, o aprendizado explícito depende do funcionamento do hipocampo, e
consistentemente, pacientes com lesão hipocampal, quando testados na mesma tarefa,
apresentam alterações normais na condutância da pele perante ao quadrado, mas são
incapazes de relatar sobre a associação existente entre o quadrado e o choque no pulso.
De fato, as emoções têm um forte componente não declarativo ou inconsciente. O
significado emocional de estímulos pode ser processado inconscientemente. Em um
experimento clássico, Lazarus e McCleary (1951) reportaram a existência de reações
emocionais a estímulos percebidos subliminarmente, ou seja, sem conhecimento
consciente. Lazarus apresentou algumas letras na tela de um computador em períodos de
tempo muito curtos (da ordem de milisegundos), de forma que não pudessem ser
percebidas de forma consciente. Depois de alguns pareamentos de algumas letras com
choques elétricos, Lazarus evidenciou que os sujeitos exibiam respostas autonômicas
perante às letras condicionadas, mesmo sem nenhuma percepção consciente delas.
Num teste chamado impressão emocional subliminar, idealizado por Murphy e
Zajonc (1993), uma foto de um rosto com expressão sorridente ou furiosa era apresentada
subliminarmente a um sujeito na tela de um computador, seguida de um estímulo-alvo,
como por exemplo, um ideograma chinês. Zajonc evidenciou que quando os sujeitos eram
questionados sobre suas preferências aos estímulos-alvo, relatavam preferência aos
ideogramas associados às expressões sorridentes, e não às furiosas, indicando que os
estímulos-alvo adquiriram um significado emocional em função de uma reação emocional
ativada subliminarmente pelas expressões faciais percebidas inconscientemente.
Interessantemente, a impressão emocional se mostrou mais eficaz quando as expressões
faciais eram apresentadas de forma subliminar do que quando eram percebidas

Neurociências
conscientemente pelos sujeitos.

Estes estudos mostram que as emoções são particularmente sensíveis a estímulos
inconscientes. De fato, a percepção estritamente inconsciente de um estímulo e a sua
influência nas reações emocionais não são passíveis de questionamento, ao passo que a
percepção consciente de um estímulo possibilita algum controle sobre as reações
emocionais que ela gera ou influencia.
O significado emocional de um estímulo também pode ser aprendido
declarativamente, e não só por meio de um procedimento implícito, como o condicionamento
aversivo. Um exemplo é o fenômeno do medo instruído, no qual aprendemos a ter medo de
algo por aprendizagem declarativa, mesmo sem nunca termos experienciado de fato o
estímulo aversivo, ou seja, mesmo sem nunca termos sido condicionados aversivamente ao
dado estímulo. Por exemplo, somos capazes de aprender a ter medo de tocar uma tomada
porque fomos instruídos que podemos levar um choque elétrico se o fizermos, mesmo sem
nunca termos tocado sequer uma tomada e recebido choque. A amígdala também se mostra
importante neste tipo de aprendizagem emocional.
A interação das emoções com o sistema de memória declarativa também se dá de
uma outra maneira: as emoções podem intensificar nossas memórias declarativas. Isso fica
claro pelo fato de experiências emocionais serem melhor recordadas do que experiências
sem conteúdo emocional. Se nos propusermos a recordar alguns eventos que vivenciamos,
é mais provável que nos recordemos de eventos de cunho emocional, como o falecimento
de um ente querido, o primeiro namorado, etc. O processo de armazenamento de uma
memória envolve inicialmente a codificação da representação da memória do evento em
questão, seguido pela consolidação dessa memória, que é o processo pelo qual novas
memórias tornam-se mais permanentes e resistentes à perda. O estado de alerta produzido
por um evento emocional aumenta a atenção direcionada ao evento, o que faz melhorar a
codificação da representação dessa memória. Além disso, a atividade do hipocampo é
modulada pela amígdala melhorando o processo de consolidação da memória de um evento
emocional.
Numa perspectiva evolutiva, a melhora da memória para eventos significativos do
ambiente tem um alto valor adaptativo, pois garante que a informação sobre esses eventos
seja disponibilizada em ocasiões futuras, aumentando a probabilidade de sobrevivência e
sucesso do indivíduo.


Neurociências
Neurofisiologia da Linguagem
Rodrigo Collino
[email protected]
Introdução
Dentro das ciências cognitivas, o estudo da linguagem tem ganhado grande
atenção nas últimas décadas. É uma área que envolve diversos detalhes e grande
complexidade, dado o emprego de técnicas desenvolvidas apenas recentemente (a partir da
metade do séc. XX) em estudos neurocientíficos. Anteriormente a este período, as
conclusões de médicos acerca da neurofisiologia da linguagem eram abstraídas somente
através da análise da casos clínicos, advindos de acidentes que causassem danos a áreas
específicas do cérebro, e que acabavam por desenvolver sequelas de cunho linguístico – na
compreensão da fala, ou na produção de mesma, por exemplo. Retrocedendo mais ainda no
tempo, pensava-se na Grécia Antiga que o controle da linguagem estivesse concentrado
totalmente na língua do indivíduo. Assim, ao encontrar um indivíduo que, provavelmente
devido a um acidende vascular cerebral (AVC), apresentasse dificuldades na dicção, era
comum oferecer-lhe tratamento através de massagens em sua língua, na esperança de
recobrar-lhe a fala. Atualmente, estudiosos da neurociência contam com instrumentos
aguçados de avaliação da atividade cerebral, tais como fMRI, MEG, PET e ERP, a fim de
correlacionar características da linguagem e regiões cerebrais específicas e seus
respectivos padrões de ativação neuronal.
Neste capítulo, vamos explorar algumas das maravilhas da linguagem produzidas
pelo cérebro humano: o que a torna tão particular da espécie humana, sua lateralização e
modularidade cerebral, distúrbios ocasionados pela falha em alguns de seus mecanismos, e
como é possível o cérebro aprender e utilizar mais de uma língua para nossa comunicação.
A Linguagem é exclusiva do Homem?

Vivemos imersos neste complexo comportamento chamado linguagem; ouvimos,
falamos, lemos e escrevemos quase que instintivamente e inconscientemente, sem pensar
muito na ordem das palavras que emitimos, ou no som das sílabas que ouvimos. Bebês
nascem e, em questão de 1 ou 2 anos, já entendem muito de sua língua-mãe e não levam
muito mais tempo para se comunicarem fluentemente.
Antes objeto de estudo apenas de linguistas, hoje a Linguagem passa também ao
domínio de neurocientistas que procuram traçar sua ontogenia cerebral, e até mesmo
encontrar semelhanças entre a nossa comunicação e aquela usada por outros animais. De
certo, algumas espécies de animais se comunicam, como as aves, cães, lobos e primatas,

mas até que ponto esta forma de comunicação pode ser equiparada à nossa? Será que
alguma outra espécie poderia aprender a “linguagem dos homens”?
Neste sentido, vários experimentos têm sido realizados, especialmente com
chipanzés. Em um deles, tentou-se ensiná-los a aprender palavras em Inglês de elementos
presentes em seu ambiente, e esperar que falassem ou ao menos entendessem o que lhes
fora apresentado. Um dos resultados mais significativos deste experimento foi perceber que
tais primatas possuem um sistema fonador diferenciado do nosso, o que limita
enormemente a produção de nuances dos sons que podem ser emitidos pela espécie
humana, e também que conseguiam compreender apenas 400 palavras aos 2,5 anos. Em
outra tentativa de ensinar um chipanzé a comunicar-se, optou-se pela Linguagem de Sinais
(ASL), e chegou-se à seguinte conclusão: até os 4 anos de idade, o chipanzé havia
aprendido a sinalizar 160 palavras, e chegou até mesmo a produzir a composição “water
bird” ao ver um cisne em um lago. Pois bem, comparando-se com crianças de nossa
espécie, aos 4 anos de idade, elas já possuem um vocabulário de aproximadamente 3.000
palavras. Além disso, não é possível saber com certeza se a produção de “water bird” por
aquele chipanzé representava uma alegoria ao cisne ou se, simplesmente, eram duas
mensagens separadas – uma indicando a água em si, e a outra indicando o cisne.
De modo muito diferente, a espécie humana parece ter sido selecionada com esta
característica inata à linguagem: atualmente, no planeta, contam-se 10.000 idiomas e
dialetos dentre todos os povos da raça humana. Além disso, casos de indivíduos que
cresceram em total isolamento com a sociedade relatam o desenvolvimento de formas
próprias de comunicação. Por fim, há algumas características que diferem a comunicação
humana daquela encontrada em qualquer outra espécie animal. São elas:
 criatividade: a capacidade de gerar novas associações de palavras – ou até
mesmo criar um novo dialeto;
 forma: uso de fonemas e sílabas para compor palavras, e emprego de regras
sintáticas bem definidas para compor sentenças, tudo isso sem a necessidade de
intrução formal, mas da aprendizagem implícita – experienciada em nosso dia-dia;
 conteúdo: não só as palavras, mas também gestos, expressões faciais e a
entonação utilizadas carregam significado na comunicação humana.
 uso: a língua serve o propósito de meio de comunicação social e também para
identidade própria (expressa nossos pensamentos e emoções).
Assim, podemos dizer que nossa forma de comunicação é única e complexa
dentre os seres vivos de nosso planeta. Surgem também algumas questões, de discussão
atual no meio científico: esta capacidade única do ser humano reflete algum ajuste fino do
cérebro primata para o propósito específico da linguagem? Ou tal capacidade dever-se-ia ao
desenvolvimento de uma arquitetura neural completamente nova? Para melhor nos ajudar

Neurociências
na busca por respostas a estas perguntas, vamos agora olhar para dentro do centro da
linguagem: o cérebro humano.
Neuroanatomia da Linguagem
Todos os aspectos da linguagem são comandados pelo cérebro: a captação de
ondas sonoras provenientes da conversa entre duas pessoas é levada ao sistema nervoso
central pelo nosso sistema auditivo; a produção da fala, envolvendo a articulação dos lábios
e língua, também tem seu controle motor coordenado pelo cérebro; a leitura e a escrita, e
até mesmo nossa linguagem corporal, intermediados pelos sistemas visual e motor, são
orquestrados pelos 1,5 quilo de massa cinzenta que se encontra dentro de nossa caixa
craniana.
Cada uma destas funções linguísticas encontra-se sob responsabilidade de áreas
neuroanatômicas bem definidas e localizadas, que serão ilustradas na Fig. 1 e Tab. 1:
Figura 1 – Principais áreas anatômicas do

cérebro humano.
Tabela 1 - Relação de algumas estruturas cerebrais e seus respectivos papéis na linguagem.
Estrutura neuroanatômica Função controlada

Região temporo-superior posterior
Compreensão da fala e escrita
esquerda
Região frontal inferior posterior esquerda Expressão oral e escrita
Córtex auditivo primário Percepção de sons
Região temporo-parietal esquerda Categorização de fonemas
Córtex estriado e pré-estriado Visualização de palavras
Córtex pré-frontal Iniciação e categorização de palavras
Tálamo Interface semântico-lexical
Percebemos, então, um fenomêno de lateralização cerebral no que se diz respeito

ao controle da linguagem, determinando o hemisfério esquerdo como dominante. De fato,
99% das pessoas destras e 70% dos canhotos desenvolvem tal característica. O hemisfério

direito também participa em características importantes da linguagem, tais como

compreensão de respostas não-verbais, leitura de números, letras e palavras curtas, e
conferir entonação, ritmo e prosódia à lingua falada. O centro de compreensão prosódica
também localiza-se no hemisfério direito (córtex posterior).
Hoje é possível “ver” o cérebro em funcionamento através de procedimentos como
PET e fMRI. Vários experimentos tem sido feito envolvendo linguagem e mapeamento
cerebral. Na Figura 2 estão representados resultados obtidos quando da ativação cerebral
em função de diferentes usos da linguagem:
Figura 2 – Níveis relativos de fluxo sanguíneo

representado por cores. Vermelho indica os
maiores níveis, e níveis progressivamente
menores são indicados por laranja, amarelo,
verde e azul. Retirado de Posner e Raichie, 1994.
Portanto, podemos prever que danos em determinada porção do tecido cerebral

podem afetar uma característica específica da linguagem. São diversas as disfunções
decorrentes de AVC, conhecidas como afasias (difunções na produção ou compreensão da
fala), alexias (disfunções na leitura) e agrafias (disfunções na escrita). As mais conhecidas
são as afasias de Broca, de Wernicke e de Condução.
A afasia de Broca afeta o conteúdo da expressão oral e escrita.Geralmente é
decorrente de lesões na região fronto-posterior esquerda, produzindo alterações no paciente
equivalentes a uma “fala telegráfica”: substantivos são usados apenas no singular, verbos
sem flexão, levando até mesmo a uma total quebra na sintaxe da frase (p.e., “Senhoras e
senhores, por favor dirijam-se à sala de jantar”, seria produzido por um destes pacientes
como “senhora, senhor, sala”). A afasia de Wernicke não prejudica a produção, mas sim a
compreensão da fala e da escrita. Devido a esta dificuldade de compreensão, sua fala fica
afetada por uma fluência em excesso, com abundância de palavras e frequentes trocas de
assunto dentro do mesmo trecho discursivo, produzindo uma espécie de “vazio” na fala.
Geralmente é resultado de lesões na região temporo-posterior superior esquerda. A afasia
de Condução ocorre quando o fascículo arqueado (região parietal esquerda), que interliga
as regiões de Broca e Wernicke, é rompido. Seus principais sintomas são dificuldades na
repetição de frases e palavras e na nomeação de objetos, e troca de letras durante a escrita.

Neurociências
Existem também disfunções da linguagem observadas por lesões no hemisfério

direito do cérebro: indivíduos que utilizam um único tom de voz na linguagem após lesão no
córtex frontal direito, e indivíduos que não conseguem realizar compreensão prosódica após
lesão no córtex posterior direito.
Há, ainda, aqueles distúrbio linguísticos sem lesões vasculares ou mecânicas
aparentes, apontando apenas para um componente genético. A dislexia, por exemplo,
envolve grandes dificuldades em processos fonêmicos, ocasionando atrasos no aprendizado
de leitura e grafia incorreta de palavras. Estudos recentes apontam para um possível
correlato anatômico da dislexia: indivíduos disléxicos apresentam tamanho levemente
reduzido do hemisfério esquerdo, com grupos de neurônios “mal-posicionados” no planum
temporale esquerdo – o que sugere um atraso na migração daquelas células durante o
desenvolvimento. Existe, ainda, uma dificuldade em processar estímulos sensoriais (visuais
ou auditivos) de forma rápida por parte de indivíduos disléxicos, quando comparados à
população normal.
O Cérebro Bilíngue
Comunicar-se, portanto, parece pertencer ao acervo biológico do homem, herdado
geneticamente de nossos ancestrais; em nossa espécie, há um instinto para o
desenvolvimento da linguagem – apesar dos possíveis problemas ou deficiências no
decorrer do percurso. E quanto à comunicação em duas línguas? Como está preparado o
nosso cérebro para aprender dois ou mais idiomas, e processá-los a nível neural? Existem
populações neurais específicas para cada idioma, ou que se complementam no
processamento de mais de um idioma? Aqui, devido à modularidade cerebral - já conhecida
não apenas para diferentes funções cognitivas do ser humano (como memória, motricidade,
visão, olfato), mas também para diferentes características linguísticas, temos novamente
que discernir entre as várias habilidades envolvidas também na comunicação bilíngue:
percepção de fonemas estrangeiros, aquisição de um léxico e de estruturas próprias da
língua em questão, articulação da fala e compreensão auditiva a uma velocidade adequada
para interação com nativos daquela língua, entre outras.
Experimentos em eletrofisiologia têm privilegiado as questões linguísticas que
envolvem aquisição e uso do léxico e da gramática em uma ou mais línguas (Perani &
Abutalebi, 2005), enquanto outros se propuseram a abordar a percepção fonêmica,
destacando-se entre estes Kuhl (2000), Stager & Werker (1997) e Rivera-Gaxola . (2001),
apontando para padrões de organização neural no córtex auditivo primário de crianças e
adultos.
A plasticidade neural particularmente em crianças é algo notável e aceito tanto
pela comunidade científica como pela sociedade leiga em geral, a qual percebe a facilidade

e velocidade de aprendizado de novas tarefas – em especial, a aquisição de outro idioma.

Mehler e Christophe (2000) sugerem que recém-nascidos já discriminam entre dois idiomas
estrangeiros, ao passo que, curiosamente, bebês aos dois meses de idade não o fazem
mais. Isso parece indicar haver um período ótimo para esta percepção, após o qual ela
deixa de existir. Ainda assim, percebe-se que a facilidade em aprender uma outra língua (o
chamado período crítico) continua até aproximadamente quando se inicia a puberdade
(Stromsworld, 2000), caracterizando ao longo do desenvolvimento infantil algumas janelas
de oportunidade - períodos em que a aquisição de habilidades específicas seriam
favorecidas por fatores genéticos, hormonais e de plasticidade neural. Os primeiros estudos
utilizando-se de indivíduos bilíngues demonstraram que adultos que haviam aprendido duas
línguas simultaneamente na infância apresentaram uma região em comum para
processamento de ambas as línguas, ao passo que aqueles adultos que haviam aprendido
duas línguas em momentos distintos de sua vida apresentavam regiões corticais também
distintas quando utilizando cada um dos idiomas (Fig. 3):
Figura 3 – Resultados de fMRI mostrando centros de ativação da linguagem para a fala em dois
idiomas, em dois indivíduos adultos, sendo o da esquerda uma situação de aprendizado tardio do
idioma, e o da direita, de aprendizado simultâneo de duas línguas. Retirado de Kim , 1997.
Outro importante estudo neste campo provou que não somente a idade, mas
também o nível de proficiência (ou domínio) do idioma influi na representação cerebral.
Estudos com fMRI encontraram maior densidade de massa cinzenta na região temporo-
parietal esquerda do cérebro daquelas pessoas que haviam aprendido mais precocemente
duas línguas e que possuíam maior grau de proficiência. (Mechelli, 2004). Isto equivale a
dizer que quanto mais cedo alguém é exposto a um idioma estrangeiro, maior a quantidade
de conexões entre neurônios naquela região cerebral específica envolvida no
processamento daqueles idiomas.
De fato, tomado de um ponto de vista neurobiológico, nascemos prontos para
aprender qualquer idioma. Uma criança que nasce na Coréia vai aprender coreano tão bem
quanto uma criança que aprende italiano por ter nascido na Itália, embora estas duas
línguas possuam sotaques e alguns sons de vogais e consoantes próprios, diferentes entre

Neurociências
elas. Nosso cérebro, nos primeiros anos da infância, não faz distinção entre japonês e
inglês, português e alemão, ou quaisquer outras línguas entre si. É somente após alguns
meses de vida que nosso sistema nervoso central começa a privilegiar os sons mais
freqüentes ao nosso meio, e por consequência, a não mais reconhecer fonemas
estrangeiros que não fazem parte do sistema de sons a que a criança está sendo exposta
(Fig. 4). Daí vem a dificuldade que muitos adultos encontram em, primeiro, perceber
auditivamente e, depois, em pronunciar determinados fonemas estrangeiros – como nas
palavras bad e bed, em inglês, para os brasileiros, ou como nas palavras avô e avó, em
português, para os povos de língua espanhola.
Figura 4 – Linha do
tempo para percepção
de sons da fala em
bebês, de 0 a 12 meses
de idade. Retirado de
Kuhl, 2004.
Conclusão e Perspectivas
O campo da neurociência se abre cada vez mais para estudos da linguagem.
Processos que envolvem desde a aquisição de uma língua, passando pelo seu
processamento, distúrbios, anomalias, codificação gênica, representação mental, e
chegando até o fenômeno do bilinguismo, todos ainda reservam perguntas que têm ajudado
em nossa construção do conhecimento acerca desta fascinante área.
Podemos apontar como perspectivas para o futuro algumas linhas de estudo:
 Interação entre linguagem e sistemas de memória;
 Ontogenia, prevenção e reabilitação de afasias e dislexias;
 Melhor compreensão do papel de estruturas subcorticais no processamento linguístico;
 Organização do léxico de duas ou mais línguas na memória;
Neurofisiologia da aquisição e processamento de duas ou mais línguas em diferentes idades
e níveis de proficiência.


Neurociências
Neurofisiologia da música

[email protected]
Introdução
A música é uma forma de arte e expressão humana presente mundialmente
(Hauser e McDermott, 2003; Gray e col., 2001; Tramo, 2001), irrestrito a gênero, classe
social, língua ou idade. Freqüentemente tratada apenas como uma manifestação cultural,
um alvo de pesquisa “não-essencial” (Zatorre, 2003), essa distribuição global gera indícios
de que a música é mais do que isso. Ainda assim, não há uma explicação clara e
consensual de suas vantagens adaptativas (Pinker, 1998).
A física por trás da música

A grande maioria dos sons encontrados na natureza, senão todos, assim como
notas musicais, são complexos, formados pela composição espectral de ondas senoidais
(isto é, por mais de uma freqüência). A composição de várias ondas produz um som muito
específico, que carrega uma “assinatura sônica” do corpo que a produz. É o seu timbre.
Se tal som tem período definido (chamado som musical) ele possuirá uma
freqüência fundamental, igual à freqüência da senoidal de menor comprimento de onda na
composição espectral. As outras ondas envolvidas naquela composição são chamadas de
harmônicos e são múltiplos da freqüência fundamental. É justamente a composição
espectral de seus harmônicos que dá a cada som seu timbre. A uma composição qualquer é
dado o nome série harmônica.
Notas musicais são uma classificação subjetiva de freqüências sonoras ao longo
do nosso espectro de audição. Elas estão baseadas em uma tonalidade, a qual é um
atributo perceptual do som, o que se contrapõe à freqüência, que é um atributo físico
(Bendor e Wang, 2006). É por isso que nem todos os povos utilizam o mesmo Sistema de
Afinação para compor suas notas musicais (ver Porres, 2007), isto é, diferentes culturas
utilizam em suas músicas diferentes instrumentos musicais com diferentes conjuntos de
notas musicais.
Apesar das diferenças interculturais, há algumas particularidades nos sistemas de
afinação; uma característica sempre presente, independente do sistema de afinação
utilizado é a repetição de notas ao longo do espectro de audição, isto é, por mais que
escutemos sons distintos, um mais grave e outro mais agudo, eles ainda soam muito
semelhantes (e são considerados a mesma nota musical). Portanto, ao longo do espectro de
audição, temos um determinado conjunto de notas (definido de acordo com o sistema de

afinação utilizado) se repetindo em intervalos regulares. A esse fenômeno dá-se o nome

oitavas musicais. É possível explicar neurofisiologicamente esse fenômeno.
Base dos mecanismos neurais da música em humanos

Além do arranjo já descrito no primeiro capítulo deste módulo, temos populações
de neurônios específicas para a percepção de freqüências fundamentais. Bendor e Wang
(2005), estudando o córtex de sagüis, encontraram em A1 neurônios capazes de disparar
potenciais de ação não apenas para um único som complexo, mas também para seus
múltiplos. Exemplificando: a mesma população de neurônios que dispara para sons com
freqüência fundamental de 440 Hz, dispara também para sons com fundamental em 110,
220, 880, 1.760, 3.520 Hz e etc. Uma dada população pode disparar inclusive na ausência
da freqüência fundamental, quando apenas os outros harmônicos da composição espectral
daquele som estão presentes.
Essa descoberta colabora para o entendimento de como o sistema nervoso
processa informações para a percepção de timbre, conceito, que apesar da extrema
relevância (bebês recém-nascidos são capazes de reconhecer o timbre da voz de suas
mães) (Trehub e Hannon, 2006), ainda não tinha o mecanismo fisiológico que o descrevia
completamente compreendido. É o disparo dessas populações de neurônios que permite
que nós associemos vozes diferentes (devido ao espectro de frequências específico das
cordas vocais de cada pessoa) como semelhantes, quando a fundamental envolvida é a
mesma: tais neurônios disparam para sinalizar essa fundamental.
Estes mecanismos perceptuais nos mostram dois fatos importantes: (1) a
percepção de tons musicais está na base do mecanismo fisiológico que propicia a audição
em humanos (e, provavelmente, também em outros organismos); (2) fazemos a
classificação de notas musicais de acordo com aquilo que nosso cérebro está apto a
perceber e não por pura subjetividade. Convencionamos chamar todo som com freqüência
fundamental de 440 Hz de “Lá”. Mas também assim chamamos seus múltiplos (as oitavas)
porque temos uma mesma população de neurônios disparando potenciais de ação para
todos eles, em última instância, fornecendo ao ouvinte a percepção de tais sons são iguais
em alturas diferentes.
Música para quê?

Os mecanismos anteriormente descritos, no entanto, não justificam por si só a
existência de música globalmente. Enfim, para que existe música? Há vantagens evolutivas
nela? Diversos autores já tentaram responder a essa pergunta (Gess, 2007; Masataka,
2007; Hauser e McDermott, 2003; Benítez-Bribiesca, 2001; Gray e col., 2001; Tramo, 2001;

Neurociências
Wright e col., 2000; Pinker, 1998; Clark, 1879, Darwin, 1874; para citar alguns) e não há
consenso nas respostas.
O autor Steven Pinker estabelece uma proposta bem abrangente, baseada em
seis pontos principais, para tentar responder à questão. Ele ousa dizer: “Eu suspeito que a
música seja um ‘bolo de queijo’ auditivo, uma confecção rara artesanalmente construída
para agradar os pontos sensíveis de pelo menos seis de nossas faculdades mentais”
(Pinker, 1998 - pág. 534). O primeiro aspecto levantado por Pinker é a própria fala. O autor
defende que a letra presente nas músicas faz com que ela ative circuitos neurais
“emprestados”, em particular, da prosódia. Achados mais recentes, relacionando música e
linguagem, serão apresentados mais adiante neste texto.
O segundo aspecto refere-se ao circuito neural relacionado à análise auditiva do
ambiente. Pinker compara a audição à visão, dizendo que assim como recebemos uma
série de estímulos luminosos que precisam ser diferenciados e separados (uma pessoa de
um fundo de árvores, por exemplo), precisamos distinguir os diversos estímulos sonoros que
nos são apresentados, por exemplo, separar um solista de uma orquestra, uma voz em um
ambiente cheio de ruídos, uma vocalização animal em meio a uma floresta cheia de ruídos.
O autor defende que nosso ouvido detecta cada freqüência e envia cada uma delas ao
sistema nervoso, que as associa, percebendo-as como um tom complexo.
“Presumivelmente o cérebro as associa para construir nossa percepção da realidade do
som” – pág. 535. Isto é, a interpretação em tons complexos provavelmente se dá pelo fato
de que sons naturais não ocorrem em freqüências puras, mas como tons complexos; logo, o
sistema nervoso associa novamente as diferentes freqüências que constituem um som
oriundo de um mesmo ponto no espaço e ao mesmo tempo porque são, em verdade, uma
mesma fonte sonora. Nesse sentido, “melodias são agradáveis ao ouvido pela mesma razão
que linhas simétricas, regulares, paralelas ou repetitivas são agradáveis aos olhos”. O
sistema nervoso, então, se utiliza desse circuito neural para fazer a interpretação das
melodias e harmonias presentes na música.
O terceiro aspecto defendido por Pinker é a emoção trazida pela música.
Baseando-se na sugestão de Darwin de que a música surgiu no homem devido às
chamadas de acasalamento de nossos ancestrais, o autor defende que uma série de
“chamadas emocionais” (como murmurar, chorar, rir, resmungar, gritar) tem um apelo
acústico próprio; “é provável que melodias evoquem fortes emoções porque sua estrutura
assemelha-se a chamadas emocionais de nossa espécie”. A música, então, traria diversos
sentimentos à tona semelhantemente a essas expressões emocionais. É interessante notar
que, segundo tal proposta de Darwin, a música poderia ser até anterior à fala.
Outro aspecto apontado por Pinker é a seleção de habitat. Fazendo mais uma
comparação entre o campo visual e auditivo, o autor ressalta que prestamos atenção a uma

série de características visuais que sinalizam segurança, insegurança ou mudança de

habitat, como vistas distantes, paisagens verdejantes, nuvens (que trazem chuva) ou pôr-
do-sol. Ele então escreve:
“Talvez nós também prestemos atenção a características do mundo

auditivo que sinalizem segurança, insegurança ou mudança de habitat. Trovões,
ventos, água correndo, pássaros cantando, rosnados, passos, corações e galhos
batendo, todos têm efeitos emocionais, presumivelmente porque eles revelam
eventos dignos de atenção no mundo” - pág. 537.
A música também interferiria com tais circuitos neurais, de tal forma que ela altera
nossas emoções e nossa noção de segurança ou insegurança.
O quinto aspecto ressaltado por Pinker é o controle motor. O ritmo é um
componente universal da música e até mesmo único em algumas culturas. Tal ritmicidade
que nos faz dançar, bater palmas, balançar, e acompanhar a música, certamente estimula
nosso sistema motor.
O último aspecto defendido pelo autor é um “algo a mais” sem explicação
conhecida e que ele coloca como sendo, possivelmente, desde um acidente do
funcionamento conjunto de diversos circuitos neurais até uma ressonância entre disparos
neuronais e ondas sonoras.
As sobreposições entre música e linguagem vão muito além do relatado por
Pinker (1998) em seu livro. Patel (2003a) faz uma revisão da sobreposição existente no
processamento da sintaxe. Música também possui sintaxe e circuitos neurais que fazem o
processamento dessa característica musical parecem ser os mesmos utilizados para a fala.
A evidência vem de ambos os processos gerarem um potencial evocado P600,
significativamente indistinto em amplitude e distribuição no escalpo, após a apresentação de
sentenças verbais ou seqüências de acordes musicais com incongruências de sintaxe
(baseadas em regras de estrutura verbal para os estímulos verbais e regras harmônicas
para os estímulos sonoros). O processamento sintático ocorre em regiões do lobo frontal
anterior.
Koelsch e col. (2004) testaram a capacidade da música para representar
significados. Eles apresentaram palavras aleatórias a voluntários após eles terem ouvido ou
uma frase ou um trecho musical (apenas instrumental). Um eletroencefalograma com
registro de potenciais evocados mostrou a expressão de um componente N400 para a
apresentação de palavras não relacionadas ao estímulo inicial, independente deste ser uma
frase ou um trecho musical, o qual não variou em latência, distribuição no escalpo, fontes
neurais e amplitude. O componente N400 já havia sido descrito em experimentos de
semântica, aparecendo após a apresentação de palavras não relacionadas com o contexto

Neurociências
prévio. Diante dos resultados, os autores concluíram que “a música pode não apenas
influenciar o processamento de palavras, mas ela pode também pré-ativar representações
de conceitos, sejam eles abstratos ou concretos, independente do conteúdo emocional
desses conceitos”; em outras palavras, assim como a linguagem, a música pode facilitar a
compreensão de significados (em palavras e, provavelmente, também contextos).
Há ainda mais: paralelos entre a rítmica da linguagem e a da música (Patel,
2003b). A análise do ritmo da linguagem e da música em subcomponentes e a comparação
entre os domínios revelam que o agrupamento rítmico é semelhante na linguagem e na
música, mas não sua estrutura periódica (que é mais organizada na música). Novas
evidências ainda sugerem que a rítmica de linguagem de uma cultura deixa impressões na
sua rítmica musical. Isto é, diferenças na rítmica da linguagem refletem-se na rítmica
musical nas diferentes culturas. Esses achados reforçam a noção de que a música possui
tanto sintaxe quanto semântica e seja, possivelmente, como a linguagem, relativamente
inerente ao homem e não um simples produto da cultura. Novos estudos transculturais
permitirão afirmar se essas evidências se confirmam.
Fica claro, portanto, que a música tem estreitas e importantes relações com o
funcionamento de diversos circuitos neurais. Estes não foram selecionados por vantagens
adaptativas trazidas pela música, mas permitem, em última instância, sua criação e
percepção. A própria capacidade de discriminação de timbres seguramente não é produto
da necessidade de reconhecimento de diferentes instrumentos musicais. O reconhecimento
de sons complexos com freqüência fundamental definida é importante também para
diferenciar diferentes vocalizações de animais na natureza, além da própria comunicação
entre indivíduos; eles seriam uma boa indicação para distinguir as vocalizações de ruídos de
fundo (Zatorre, 2005). As tonalidades e o timbre certamente serviriam também à
identificação de vozes (lembrem-se dos bebês reconhecendo a voz da mãe). A percepção
de sons complexos evoluiu ao ponto de tornar a percepção de dois sons muito consonantes
como iguais, não só em humanos (Wright e col., 2000). Essa percepção, provavelmente deu
vantagem adaptativa aos seus possuidores. Qual ou quais vantagens é algo ainda incerto.
(Pinker, 1998).
Origens da musicalidade
Se de fato a música tem envolvimento com tantos circuitos neurais, essa
propriedade não pode ser uma exclusividade apenas da espécie humana, mas deve estar
presente no cérebro de outros animais também. A capacidade para interpretar música, de
uma forma diferente de outros sons quaisquer (também chamados sons não musicais) ou,
até mesmo, produzi-la, deve estar presente pelo menos em outras espécies de mamíferos.
O primeiro grupo lembrado quando se fala de música em animais, no entanto, são

os pássaros. Desde o século retrasado (Clark, 1879) tal grupo é investigado. As razões são
óbvias, percebidas por qualquer pessoa que já tenha entrado em contato com a natureza (e
escutado o som dos pássaros). Estudos recentes sobre o assunto (Baptista e keister, 2000)
apontam semelhanças entre a melodia do canto dos pássaros e as melodias produzidas
pelo homem. Segundo os autores, os pássaros “frequentemente usam as mesmas
variações rítmicas, relações tonais, permutações e combinações de notas que os
compositores humanos”. Detalhes presentes nas músicas produzidas pelo homem são
também notadas nas melodias usadas pelos pássaros, como inversões de intervalo,
relações harmônicas simples e retenção de uma determinada melodia com a troca de
registro (tonalidade) usado. O caso mais atípico e impressionante, talvez, seja da espécie
Probosciger aterrimus, a Cacatua-Negra, uma espécie de papagaio do extremo norte da
Austrália e Nova Guiné, que molda gravetos para que se assemelhem a baquetas (de
bateria) e batucam em diversos troncos até que achem um com ressonância agradável e,
então, o utilizam para produzir sons como parte de seu ritual de acasalamento.
Mas voltando aos mamíferos, Wright e col. (2000), trabalhando com macacos-
rhesus, mostraram que os mesmos são capazes de reconhecer como semelhantes melodias
idênticas tocadas em oitavas diferentes, mas não em tons diferentes. Ainda, tal
reconhecimento positivo aconteceu para melodias tonais, mas não para melodias atonais.
Estes resultados são consistentes com o achado de Bendor e Wang (2005), já descrito. O
experimento de Wright e colegas, porém, pode ter sido afetado pela exposição prévia dos
animais a música. Freqüentemente tais animais ficam em ambientes com televisões ligadas
para os mesmos (Hauser e McDermott, 2003), portanto, expostos a música e melodias
diversas.
É provável que o caso mais conhecido e consistente de musicalidade nos
mamíferos esteja nas baleias-jubarte (Megaptera novaeangliae). Há décadas que se
conhece o “canto” dessas baleias e estudos recentes (Payne, 2000) também apontam para
semelhanças estreitas com as regras de construção musical utilizadas pelo homem. A
despeito de poderem produzir sons sem ritmicidade ou tonalidade, as baleias optam por
produzir sons rítmicos, de forma semelhante a composições humanas e com tonalidade
definida. Mais do que isso:
- O canto produzido por elas é composto de fraseados de tamanho semelhante às
frases na música composta por homens e, assim como nós, elas exploram diversos
fraseados dentro de um mesmo tema antes de partir para um tema diferente. Da mesma
forma, são freqüentes composições que exploram um tema, partem para uma seção mais
elaborada e, depois, retornam ao tema inicial (semelhante ao nosso formato de composição:
estrofe – refrão – estrofe);
- O tamanho total de um canto (uma música?) assemelha-se ao tamanho médio

Neurociências
de músicas produzidas pelo homem, possivelmente pelo fato de que o tamanho de seu
córtex permite uma capacidade atencional semelhante à nossa;
- Ainda que elas tenham uma extensão tonal que alcança sete oitavas musicais,
as baleias preferem compor músicas com intervalo entre notas também semelhantes às
nossas composições (que raramente explora toda essa extensão em uma única
composição);
- Elementos percussivos são incorporados à música e intercalados com tons
puros numa taxa semelhante àquela encontrada em composições humanas;
- Algumas repetições encontradas são semelhantes a rimas, indicando que as
baleias possam usar desse artefato tanto quanto os humanos usam: um recurso mnemônico
para lembrar-se de composições complexas.
Tantos elementos comuns entre os sons musicais produzidos por essas diferentes
espécies apontam para o fato de que a música não possa ser apenas um produto cultural
humano. Nas palavras de Gray e col., 2001:
“O fato de que a música das baleias e dos homens tem tanto em comum, mesmo
com nossos caminhos evolucionários não tendo se cruzado em 60 milhões de
anos, sugere que a música deve ‘predar’ os humanos, ao invés de sermos os
inventores dela. Nós somos adeptos tardios do ambiente musical.” – pág. 53
Tais indícios de produção musical em outras espécies animais reforçam a idéia de

que as raízes da musicalidade devem residir em outros fatores que não a cultura humana.
Talvez uma conseqüência natural da interação entre as freqüências sonoras, que causa
sons mais ou menos desagradáveis ao encéfalo dependendo das freqüências envolvidas.
De fato, as notas utilizadas no sistema de afinação da música ocidental, e em grande parte
do mundo, são derivadas da Série Harmônica (ver
http://www.phy.mtu.edu/~suits/overtone.html para maiores detalhes), com as escalas
musicais sendo construídas com base nas interações entre notas de maior consonância.
Sons musicais chamados de dissonantes causam um fenômeno chamado batimento,
relatado como desagradável pela grande maioria das pessoas e que são freqüentemente
utilizados na música para gerar sensações de suspense e tensão. Ainda, sons dissonantes
apresentados a bebês de apenas quatro meses causam afastamento da fonte sonora,
expressões faciais fechadas e até choro, enquanto que sons consonantes os fazem virar-se
para a fonte sonora e freqüentemente sorrirem (Trainor e Heinmiller, 1998). Dado que
recém-nascidos não tem conhecimento algum de escalas musicais, é improvável que tais
respostas emocionais à música acontecem nestes da mesma forma que elas acontecem
nos adultos. É então plausível que a própria física da interação de freqüências induza a
percepção daquilo que é agradável ou desagradável e permita a produção ou

reconhecimento de sons musicais mesmo em espécies que não o homem.

Apesar de tantas evidências, a falta de consenso entre pesquisadores sobre a
musicalidade em outras espécies animais permanece. As críticas são freqüentemente
embasadas no fato dos cantos serem essencialmente produzidos por machos, como parte
do ritual de acasalamento. Ainda assim, tal uso não invalida que elas sejam capazes de
produzir sons musicais e que a estrutura das “músicas” produzidas seja semelhante à
humana. Muito pelo contrário, a organização musical semelhante entre diferentes espécies
nos mostra que ela não é um acidente, mas uma propriedade específica do sistema nervoso
central, que caminha em estreitas relações com a comunicação intra-específica e a seleção
sexual.
É possível que a origem da musicalidade de humanos resida nestes mesmos mecanismos
(de seleção sexual), como apontado por Darwin. Mais provável ainda que sua existência se
apóie em diversos fatores e não apenas em um deles, uma propriedade emergente da
interação de diversos sistemas, como apontado por Pinker (1998). Independente dos
motivos pelos quais a música se originou no homem, seguramente os motivos pelos quais
ela permanece são outros (a não ser que ela já tenha se originado por esses outros motivos,
claro – improvável quando se compara com outros grupos). Na espécie humana, a música
adquire outros significados muito mais fortes como promover a coesão de grupo e a
interação social (podendo até possuir a mesma capacidade de abstração e atribuição de
significados que a linguagem, como apontado por Koelsch e col., 2004). Se há algo de
exclusivo entre homem e música, isso parece ser a produção e a apreciação da mesma por
puro prazer.
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Xavier G.F. (2004). Comunicação Pessoal, Aula Memória - Disciplina BIF211 – Ciências Biológicas –
USP.


Unidade 4
Metabolismo
Aline Dal’Olio Gomes

Lab. de Metabolismo e Reprodução de Organismos Aquáticos
[email protected]
Entendemos como Metabolismo um conjunto de reações químicas que

mantém um organismo vivo. Os processos metabólicos variam ajustando as
respostas dos animais tanto às suas necessidades endógenas quanto às mudanças
ambientais. Sendo assim, este módulo irá abordar as variações do metabolismo
animal decorrentes de diferentes fatores bióticos e abióticos com especial ênfase em
metabolismo energético e temperatura: 1) abordagem geral das definições que
envolvem o metabolismo energético, seguida da apresentação de como os fatores
abióticos influenciam o metabolismo usando como exemplo a temperatura; 2)
técnicas de medida do metabolismo energético em diferentes condições fisiológicas,
com especial atenção à técnica de respirometria; 3) a influência do metabolismo nos
fenômenos comportamentais de vertebrados ectotérmicos frente às alterações da
temperatura ambiental; 4) regulação da temperatura e metabolismo dos animais
endotérmicos e ajustes da febre e queda regulada da temperatura corpórea
relacionada a depressão metabólica em vertebrados; 5) os fenômenos de depressão
metabólica e dormência sazonal apresentados por animais de diferentes grupos
como adaptação comportamental, fisiológica e bioquímica; 6) interação entre
metabolismo energético e reprodução, importância dos lipídios nesse processo e
como esses compostos podem variar em relação a dieta dos pais e às condições do
ambiente; 7) finalizamos o módulo procurando entender o efeito ecofisiológico da
temperatura no metabolismo e como este pode ajudar a estabelecer os limites
ambientais em vários processos fisiológicos dos indivíduos e, conseqüentemente, a
viabilidade das populações, comunidades e ecossistemas, podendo atuar de um
modo ativo na conservação ambiental.
Capítulo 19 Metabolismo e Temperatura: Conceitos e Implicações pág. 205

Carlos Eduardo Tolussi
Revisado pela Dra. Renata Guimarães Moreira
Capítulo 20 Medindo a chama da vida pág. 217

Revisado pela Dra. Silvia C. Ribeiro de Souza
Capítulo 21 Ectotermia: um acesso de baixo custo à vida pág. 235

Jessyca Michele Citadini
Revisado pela Dr. Carlos Arturo Navas
Capítulo 22 Termorregulação em endotérmicos: febre e anapirexia. “Ana” o quê?

pág. 247
Carolina da Silveira Scarpellini
Revisado pela Dra. Kênia Bícego
Capítulo 23 Metabolismo energético em câmera lenta: mecanismos de depressão

metabólica sazonal pág. 257
Lilian Cristina da Silveira

Revisado pela Dra. Silvia C. Ribeiro de Souza
Capítulo 24 Custos e benefícios da reprodução: papel dos lipídios pág. 269
Aline Dal’ Olio Gomes

Revisado pela Dra. Renata Guimarães Moreira
Capítulo 25 A ecofisiologia no cenário das mudanças climáticas globais pág. 279

Lye Otani
Revisado pela Dr. Carlos Arturo Navas

Metablismo
Metabolismo e Temperatura: Conceitos e Implicações
Carlos Eduardo Tolussi

Laboratório de Metabolismo e Reprodução de Organismos Aquáticos
[email protected]
Metabolismo: conceitos e considerações gerais

O metabolismo é definido como o conjunto de transformações das moléculas
orgânicas catalisadas por enzimas nas células vivas; a soma do anabolismo e catabolismo.
As milhares de reações químicas catalisadas por enzimas nas células são organizadas
funcionalmente em muitas sequências de reações, na qual o produto da primeira reação se
torna o reagente da próxima (Nelson e Cox, 2005).
Dentre essas reações, algumas degradam nutrientes orgânicos em produtos finais
simples, extraindo energia química e a convertendo em uma forma útil para a célula; juntas
essas reações degradativas, produtoras de energia livre, são designadas como catabolismo
(Fig. 1). Outras vias começam com moléculas precursoras pequenas e são convertidas em
moléculas mais complexas e maiores, incluindo as proteínas e os ácidos nucléicos. Tais vias
biossintetizadoras, que invariavelmente requerem a adição de energia, são coletivamente
designadas de anabolismo (Fig. 1) (Nelson e Cox, 2005).
Na ausência de trabalho externo ou de armazenagem de energia química, toda
energia liberada durante os processos metabólicos é transformada em calor. Este fato
simples torna possível usar a produção de calor como índice de metabolismo energético
(taxa metabólica), desde que o organismo esteja em um estado térmico estável com o
ambiente (Randall e col., 2000).
Segundo Schmidt-Nielsen (2002), a taxa metabólica refere-se ao metabolismo de
energia por unidade de tempo, e pode ser medida em princípio por três métodos distintos.
1) Cálculo dos valores energéticos ingeridos e o valor de todos os excrementos
(principalmente fezes e urina). Esse método supõe que não haja alteração na
composição do organismo, portanto, ele não pode ser usado para os organismos
em crescimento ou aqueles que têm alguma alteração na quantidade de gordura
ou de outro material;
2) Cálculo através da produção de calor do organismo. Esse método fornece
informações sobre todo o combustível utilizado e, em princípio, é o método mais
preciso;
3) Cálculo da quantidade de oxigênio utilizada nos processos de oxidação, desde que
haja informações sobre as substâncias oxidadas (não havendo metabolismo
anaeróbio).

Figura 1– Esquema dos processos metabólicos, Anabolismo e

Catabolismo (Modificado de Nelson e Cox, 2005).
A taxa metabólica varia com o tipo e a intensidade dos processos que estão
ocorrendo. Esses processos incluem o crescimento e o preparo de tecidos; o trabalho
interno químico, osmótico, elétrico e mecânico; e o trabalho externo para a locomoção e
comunicação. Desta forma, a energia ingerida pode seguir diferentes caminhos, sendo que
uma parte desta será utilizada para realização de diferentes trabalhos como os descritos
acima e também liberada na forma de calor (Fig. 2) (Randall e col., 2000).
Para conhecer a taxa metabólica de um organismo, é necessário analisar
primeiramente a taxa metabólica basal ou padrão (TMB), que consiste na menor taxa
metabólica ou no mínimo de energia que o organismo necessita para viver (Hochachka e
Somero, 2002). Com a TMB é possível calcular o quanto da taxa metabólica deste
organismo foi alterada para realizar algum trabalho.

Metablismo
Figura 2– Caminho que a energia química dos alimentos segue nos

animais (Modificado de Randall e col., 2000).
Em mamíferos, para que a TMB seja validada deve ser levado em consideração as
seguintes condições:
 a análise deve ser no estágio de desenvolvimento adulto;
 o organismo não deve ingerir alimentos (geralmente sendo utilizada uma noite em
jejum para humanos);
 as condições de temperatura devem ser “normais” para aquela espécie;
 não deve haver condições estressantes;
 o animal deve estar em repouso.
A TMB deve ser medida diretamente através da produção de calor, ou indiretamente
pela medição do consumo de oxigênio (VO2 - volume de oxigênio por Kg por minuto). É
possível também calcular a taxa metabólica de repouso (TMR), que é similar a TMB, mas
neste caso o organismo não precisa estar em jejum (Hochachka e Somero, 2002). As
técnicas para medidas do metabolismo energético serão abordados mais detalhadamente
no próximo capítulo.
É importante mencionar que a TMB é tecido especifico (Rolfe e Brown, 1997). Em
humanos, por exemplo, o relativo tamanho do fígado, trato gastrointestinal, rim, pulmão,
sistema nervoso, coração e músculos são 2; 2; 0,5; 0,9; 2; 0,4; e 42%, respectivamente, e a

soma de todos estes tecidos representa 50% da massa total do organismo. Entretanto, a
contribuição de cada tecido na TMB é de 17; 10; 6; 4; 20; 11 e 25% respectivamente,
representando 90% da TMB em humanos (Hochachka e Somero, 2002).
Como foi dito acima, a TMB pode variar devido a diferentes fatores, entre eles a
temperatura. Por isso, é necessário medir o equivalente da taxa metabólica basal, na qual o
animal não está gastando energia metabólica adicional para se aquecer ou resfriar. Por essa
razão, a taxa metabólica padrão (TMP), é definida como o metabolismo do animal em
repouso em jejum em certa temperatura corporal. Para alguns ectotérmicos, a TMP
depende do histórico de sua temperatura prévia, em virtude da compensação metabólica ou
da aclimatação térmica (Randall e col., 2000).
Energia, Temperatura e Calor: conceitos e sua importância nos organismos
Conceitos
Serão apresentados abaixo os conceitos de energia e temperatura necessários para o
entendimento dos tópicos abordados neste capítulo:
 a energia está relacionada à realização de trabalho, como a energia associada
ao movimento (energia cinética). Existem outras formas de energia como a
química provinda, por exemplo, através do ATP (Ferrano e Soares, 1998);
Para a compreensão de como a temperatura pode interferir nos processos
metabólicos é necessário compreender que, quando há um aumento da energia em uma
molécula, a movimentação dos seus átomos é elevada, fazendo com que as mesmas se
choquem com maior intensidade umas com as outras, tal processo é chamando de energia
cinética molecular (Ferrano e Soares, 1998).
 temperatura é a grandeza que mede a intensidade da agitação térmica
(Ferrano e Soares, 1998);
 calor é a energia em trânsito determinada pela diferença de temperatura entre
os sistemas envolvidos (Ferrano e Soares, 1998).
Endotermia e Ectotermia
A velocidade das reações químicas aumenta com a temperatura, devido a isso, a
atividade metabólica de um animal está relacionada diretamente com a sua temperatura
corporal: animais com temperaturas corporais baixas apresentam taxas metabólicas
reduzidas. Sendo assim, é possível utilizar a temperatura corporal, mais especificamente
sua estabilidade, nos organismos para classificar os processos termorregulatórios corporais
(Randall e col., 2000).

Metablismo
Animais expostos a variações de temperatura em laboratório, seja no ar ou na água,

que mantêm sua temperatura corporal acima da ambiental, regulando-a dentro de seus
limites fisiológicos através do controle da produção e da perda de calor, são denominados
homeotérmicos. Na maioria dos mamíferos, a faixa de temperatura corpórea central normal
é de 37°C e 38°C e para as aves esta temperatura é próxima de 40°C. Alguns outros
vertebrados conseguem controlar sua temperatura corporal desta maneira, embora tal
controle seja limitado a períodos de atividade ou crescimento rápido desses organismos. Ao
contrário disso, os pecilotérmicos são os animais nos quais a temperatura corporal tende a
flutuar mais ou menos com a temperatura do ambiente, quando expostos a temperaturas do
ar ou da água variadas experimentalmente (Randall e col., 2000).
Previamente os peixes, anfíbios, répteis e invertebrados foram considerados
pecilotérmicos e, aves e mamíferos homeotérmicos. Porém, com a progressão dos estudos
de campo observou-se que esta classificação não era apropriada, já que, dependendo do
ambiente em que o animal vive ou do seu comportamento a sua temperatura pode variar
Peixes que vivem em águas profundas, na qual as oscilações térmicas são dificilmente
mensuráveis, apresentam uma temperatura corporal constante e, portanto, deveriam ser
denominados homeotérmicos. Há também mamíferos que podem oscilar sua temperatura
em vários graus, podendo chegar até a 0°C em períodos como a hibernação (Schmidt-
Nielsen 2002).
Devido a estas inconsistências em relação a classificação descrita acima, foi
necessário a formação de uma outra nomenclatura baseada na “fonte corpórea” de calor,
sendo separados em: os que geram calor metabólico, endotérmicos; e os que não geram
calor, ectotérmicos (Randall e col., 2000). Endotérmicos são os animais que geram seu
próprio calor corporal. A sua produção se dá pelo subproduto do metabolismo, elevando
suas temperaturas corporais consideravelmente acima das temperaturas do ambiente. Os
maiores exemplos são as aves e os mamíferos. Ectotérmicos são os animais que produzem
calor metabólico em taxas comparativamente menores, normalmente muita baixas para
permitir a endotermia. Frequentemente, os ectotérmicos têm baixas taxas de produção de
calor metabólico e altas condutâncias térmicas, fazendo com que sejam pobremente
isolados (Randall e col., 2000). O mecanismo fisiológico e comportamental adotado pelos
diferentes vertebrados, ectotérmicos e endotérmicos, para o ajuste da temperatura corpórea
será apresentado nos próximos capítulos.
Um outro conceito a ser mencionado é o de heterotermia, que consiste na produção
de vários graus de calor endotérmico pelos animais. Contudo, eles geralmente não regulam
a temperatura corporal dentro de uma faixa estreita. Estes animais podem ser divididos em
dois grupos, os heterotérmicos regionais e os heterotérmicos temporais. Os

heterotérmicos regionais são geralmente ectotérmicos que podem alcançar temperaturas

centrais elevadas, por meio da atividade muscular, enquanto seus tecidos periféricos se
aproximam da temperatura ambiente, como alguns tubarões, salmão e muitos insetos
voadores. Os heterotérmicos temporais constituem em uma grande categoria de animais
cujas temperaturas variam muito com o tempo. Os monotremados, como os équidnas, assim
como outros mamíferos e aves em torpor ou em hibernação são exemplos deste conceito
Metabolismo e Temperatura
Tecido adiposo marrom, UCPs e avUCP

Uma das formas utilizadas pelos mamíferos para produção de calor é através do uso
do tecido adiposo marrom (TAP). Este tecido é estritamente de mamíferos, tentativas de
encontrar órgãos que possuem uma grande geração de calor como o TAP em aves ou
outros animais não mamíferos não foram bem sucedidas. Entretanto, aspectos
fundamentais bioquímicos parecidos com o TAP foram encontrados difundidos nos
eucariotos, que certamente perderam um órgão de geração de calor especializado como o
TAP, mas eles são capazes de explorar alguns dos mecanismos bioquímicos usados pelo
TAP para a produção de calor (Hochachka e Somero, 2002).
O TAP é caracterizado pela alta densidade de triglicerídeos e uma grande
concentração de mitocôndrias, sendo esta última característica a que a diferencia do tecido
adiposo branco, que apresenta uma baixa quantidade dessa organela. Fisiológica e
bioquimicamente, o TAP é caracterizado por uma série de circuitos de regulação genética,
hormonal e neural que estão envolvidos na termorregulação dos mamíferos. Além disso,
existe uma inserção de proteínas desacopladoras (UCPs) na membrana interna da
mitocôndria, que media o influxo de prótons que não são ligados para a geração de ATP
(Hochachka e Somero, 2002). A família das proteínas UCPs (principalmente a UCP1) está
envolvida em uma parcial dissipação do gradiente eletroquímico de prótons da mitocôndria,
que desacoplaria a fosforilação oxidativa, fazendo com que haja a produção de calor (Collin
e col., 2005).
Como mencionado anteriormente, não foi observado um TAP ou um tecido
termogênico em outros animais (Toyomizu e col., 2002). Contudo, em pinguins foi
encontrado desacopladores em células musculares quando os animais eram expostos ao
frio (Skulache e Maslov, 1960; Skulache, 1963), sendo mediado pelos ácidos graxos
(Levechev, e col., 1965). Além disso, foi descoberto outra proteína, denominada avUCP, que
apresenta 70% dos aminoácidos idênticos as UCP2 e UCP3 de mamíferos. Demonstrou-se

Metablismo
que a expressão da avUCP foi aumentada quando os animais foram aclimatados ao frio
(Raimanbalt e col., 2001).
Tais resultados experimentais para aves e os já conhecidos estudos prévios para
mamíferos demonstram que a avUCP e a UCP1, respectivamente, são um dos
responsáveis pela regulação térmica desses grupos que os permitem serem classificados
como endototérmicos.
Efeitos da temperatura nas proteínas

Como já foi dito anteriormente, dentre um determinado limite, a temperatura causa
efeitos em vários processos fisiológicos, como no metabolismo, mais precisamente na ação
e no funcionamento das enzimas. A principal habilidade das enzimas é a diminuir a energia
de ativação, que é o mínimo de energia requerida para uma reação ocorrer (Hochachka e
Somero, 2002). A aplicação deste conceito será abordada com mais detalhes
posteriormente.
Os efeitos da temperatura sobre as taxas de atividade biológicas são quantificadas
pelo cálculo do coeficiente de temperatura ou Q10. Este cálculo mede o efeito que a
alteração de 10°C tem sobre uma determinada taxa de atividade biológica através da
equação (Hochachka e Somero, 2002):
Q10 = (k1/k2)10/(t1-t2)
Na qual, k1 e k2 são a taxa constante determinada pelo aumento e diminuição da

temperatura, t1 e t2 , respectivamente.
Como pode ser observado abaixo (Fig. 3), com um Q10 de 2 e em uma temperatura
inicial de 0°C, a taxa de consumo de oxigênio dobraria com um aumento de 10°C,
quadruplicaria em 20°C, aumentando constantemente e de forma regular com a elevação da
temperatura. Se o Q10 for de 3 o aumento seria 3, 9, 27 e assim por diante (Schmidt-Nielsen,
2002).

Figura 3 – Relação da temperatura e o consumo de oxigênio (Modificado de Schmidt-Nielsen, 2002).
Para muitos processos, como as taxas de respiração e metabólica, os valores de Q10

são próximos a 2, quando realizados testes em animais com uma taxa de temperatura
corpórea “normal”. Para temperaturas que apresentam efeitos letais, o Q10 apresenta valores
menores que 1, assim como para queda de temperatura o valor será menor que 2 também
(Hochachka e Somero, 2002).
A interferência da temperatura para que uma reação química ocorra, origina-se pelo
fato de que a reatividade das moléculas é tipicamente dependente da sua energia cinética.
Porém, isso é uma explicação parcial e qualitativa para os valores de Q10 observados nos
cálculos biológicos. Uma alteração da temperatura em 10°C acarreta em uma menor
mudança relativa na energia cinética das moléculas que integram o sistema, por exemplo,
para 25°C uma mudança de 10°C representa apenas uma alteração entorno de 3% da
média do nível de energia cinética (Hochachka e Somero, 2002). Isto é explicado pelo fato
de que a energia cinética das populações de moléculas segue uma função Maxwell-
Boltzmann. Essa função aborda que as partículas possuem um intervalo de diferentes
velocidades, e a velocidade de uma determinada partícula varia constantemente devido a
colisões com outras partículas (Fig. 4). No entanto, a fração de um número grande de
partículas, dentro de um determinado intervalo de velocidade é quase constante. Com isso,
é importante considerar não apenas a frequência do nível de energia que ocorre dentro da

Metablismo
população, mas também, que a energia daquele sistema é maior que a média de energia
para que ocorra a reação, com isso podemos explicar porque os valores de Q10 ficam em
torno de 2 mesmo com a elevação de 10° da temperatura (Hochachka e Somero, 2002).
Figura 4–Relação da energia de uma molécula e a energia de ativação

(Modificado de Hochachka e Somero, 2002).
Dito isto, é importante mencionar a interferência da temperatura nos eventos
catalíticos das enzimas e para entendermos como se dá esta interferência é preciso
responder duas questões:
 Porque as enzimas são capazes de direcionar as transformações químicas de
maneira tão rápida em temperaturas biológicas adequadas?
 Porque que a temperatura é tão importante na atividade enzimática?
Estas duas questões estão ligadas diretamente com as mudanças da estrutura
tridimensional (conformação) da enzima (Hochachka e Somero, 2002). A questão da
velocidade da atividade catalítica das enzimas foi respondida graças aos métodos que
possibilitaram a caracterização da sua estrutura tridimensional. Isso permitiu desvendar as
mudanças conformacionais no ciclo de catálise, abrangendo a ligação do substrato na
enzima e o fim com a liberação do produto. Esses métodos mostraram a existência de
eventos complexos ocorrendo durante o processo catalítico e que são inadequadamente
representados pela descrição convencional das reações enzimáticas (Hochachka e Somero,
2002):
1) Enzima + substrato enzima – substrato
2) Complexo complexo ativado
3) enzima – produto complexo
4) enzima + produto

Apesar do esquema de catálise enzimática estar de forma geral correto, há falhas na

sugestão do processo da estrutura da enzima durante o ciclo da catálise (Hochachka e
Somero, 2002). Os quatro degraus existentes de ativação com a notável capacidade da
enzima de alterar altas taxas das ligações covalentes no esquema acima demonstram que
após o substrato se ligar a enzima (degrau 1) há a formação e ativação de um complexo
(degrau 2). Os recentes estudos sobre o funcionamento das enzimas concluíram que o
principal evento que governa o ciclo da catálise não é a alteração nas ligações covalentes
dos reagentes (transformação do substrato em produto), mas sim as mudanças
conformacionais durante a ligação e liberação do substrato que alteram a barreira da
energia de ativação para formar ou quebrar as ligações covalentes dos substratos
(Hochachka e Somero, 2002) (Fig. 5).
Figura 5 - Ilustração do funcionamento das enzimas e transformação dos substratos em

produtos (Modificado de Hochachka e Somero, 2002).

Metablismo
É possível integrar os conceitos de energia mudando a conformação da molécula em

temperaturas biológicas normais, e é por isso que as enzimas podem reduzir a energia de
ativação. Desta forma, a alteração da temperatura pode alterar a conformação da enzima e
isto acarretaria na alteração do vácuo catalítico (local onde há a transformação de substrato
em produto), que gera uma alteração na formação ou na quebra das ligações covalentes
alterando a energia de ativação que pode resultar na diminuição da velocidade da reação
(Hochachka e Somero, 2002).
Os fatores mencionados acima ilustram a relação da temperatura com os processos
biológicos, principalmente o metabolismo, demonstrando a importância desse fator abiótico
nos organismos endotérmicos e mais fortemente nos ectotérrmicos, já que esses não
possuem mecanismos fisiológicos como as UCPs para controlar a sua temperatura corporal.
Com base nisso, nos capítulos posteriores serão apresentadas algumas técnicas utilizadas
para medir o metabolismo animal e os diferentes mecanismos utilizados por animais
ectotérmicos e endotérmicos no ajuste dos processos metabólicos frente as alterações
ambientais.


Metablismo
Medindo a chama da vida

Laboratório de Ecofisiologia e Fisiologia Evolutiva
[email protected]
Este capítulo foi baseado no livro Measuring Metabolic Rates de John R.B. Lighton (2008).
Neste capítulo será apresentado um contexto histórico do desenvolvimento de técnicas

para medidas do metabolismo, mostrando os principais estudos de metabolismo e
temperatura que serviram de base para o que conhecemos hoje. Contudo, veremos que a
ciência não segue uma seqüência de eventos ordenada nem linear, e nem caminha
progressivamente da completa ignorância para o conhecimento completo da realidade.
Longe disso, as descobertas científicas e paradigmas geralmente percorrem um grande e
tortuoso percurso histórico. Para o desenvolvimento do conceito de metabolismo,
apresentado no capítulo anterior, não foi diferente do que o que ocorre na ciência em geral.
Entremeada com os trabalhos dos primeiros alquimistas, as primeiras medidas de
metabolismo demoraram cerca de 100 anos para serem feitas desde o surgimento das
primeiras idéias de metabolismo energético. O problema não era, a princípio, a medida de
metabolismo energético em si, mas a necessidade de desvendar o que era o fogo, o ar e a
vida. A seqüência de eventos históricos, simplificada para fins didáticos, apresenta três
relações chave entre: ar e vida, fogo e ar, e fogo e vida.
A conexão mais intuitiva é a relação entre ar e vida. Desde os primórdios da
humanidade sabemos que a vida é depende do ar. Leonardo da Vinci (1452–1519), em seu
Codex Atlanticus produzido entre os anos de 1478 a 1519, declarou sem maiores
explicações que “onde uma chama não pode arder, nenhum animal que respira pode viver”
(tradução livre). O grande desafio para desenvolvimento do conhecimento sobre a relação
entre ar e vida, no entanto, não era exatamente saber que a vida estava ligada à presença
de ar, mas sim, entender o que é o ar e como ele suporta a vida.
A composição do ar foi desvendada juntamente com a compreensão de alguns
aspectos sobre o fogo e o processo de combustão. Boa parte do conhecimento que temos
hoje sobre a matéria foi moldado pelas experimentações alquimistas, pré-método científico.
Em algumas das muitas tentativas de transformar outros metais em ouro, ou de encontrar o
elixir da longevidade, os alquimistas perceberam que, ao término da chama, a queima do
carvão deixava pouco ou nenhum resíduo. A partir daí, deduziram a existência de uma
substância vital presente no material a ser queimado que sustentava e era a própria chama.
Eis que entre 1703 e 1731 o protoquímico e médico alemão Georg Ernst Stahl
(1660–1734) propuseram o nome de flogisto para a tal substância. Segundo a teoria do

flogisto, a combustão cessava quando o ar ficava saturado dessa substância, ou o material

esgotava a sua quantidade de flogisto. Este era o caso da queima de metais, cuja
calcinação deixava para trás como resíduo o calx, o metal supostamente “deflogisticado”. O
calx quando combinado com carvão, teoricamente repleto de flogisto, voltava à sua forma
metálica anterior a calcinação, reforçando a teoria do flogisto.
Um pouco antes da ampla aceitação da teoria do flogisto, Robert Boyle realiza
experimentos mostrando que quando a pressão do ar ao redor de velas, pássaros e
camundongos diminui até certo nível, eles morrem, demonstrando que algo no ar mantinha
tanto a chama da vela quanto a vida dos animais testados. Neste contexto, o ar não podia
estar saturado de flogisto, já que o que se estava fazendo era liberar mais espaço para o
flogisto e, no caso dos animais, não havia chama para saturar o ar de flogisto. Boyle
também mostra que o metal calcinado não perde peso, contrário do que seria esperado pela
teoria, mas sim ganha peso, reforçando ainda mais as idéias contra o flogisto.
Mas é John Mayow (1643–1679) quem faz a pergunta chave: será que a combustão
e a vida são mantidas pela mesma substância? Ao colocar um camundongo em uma jarra
com a abertura voltada para uma vasilha com água (Fig. 1) ele observou o nível da água
subir até o momento que o animal morria. O nível da água sempre subia mais ou menos até
o mesmo nível. O camundongo estava claramente consumindo algo do ar. O mesmo
acontecia com a vela. Mayow havia inventado o primeiro respirômetro semi-quantitativo. Ele
ainda colocou a vela e o camundongo juntos, na mesma jarra, e observou que quando a
vela apagava, instantes depois o camundongo morria, sugerindo que ambos eram
sustentados pela mesma substância presente no ar, a qual chamou de “nitro-aereus”.
Incrivelmente, a partir dessas primeiras descobertas ele propôs que o nitro-aereus passava
pelos pulmões, depois para o sangue onde combinava com o combustível aí presente
aquecendo o animal. Propôs ainda que o mesmo acontecia na atividade muscular e no
coração. Essa substância era o que conhecemos hoje como oxigênio. Pouco tempo depois
de ganhar alguma notoriedade com essas descobertas e de se tornar membro da Royal
Society, John Mayow morre, encerrando abruptamente uma carreira científica que prometia
inúmeras descobertas mais.
O próximo pesquisador que coleciona descobertas que serviram de base para o
entendimento do metabolismo energético foi Joseph Priestley (1733–1804). Ele vivia ao lado
de uma cervejaria e, primeiro, descobriu que o gás resultante da fermentação da cevada
Figura 1 - Ilustração mostrando o equipamento usado por John

Mayow em seus experimentos de combustão e respiração.
Consiste em uma jarra de vidro virada com a abertura em um
recipiente repleto de água (Modificado de
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Mayow).

Metablismo
extingue o fogo. Percebeu, ainda, que o gás que não sustenta mais a chama, em parte
dissolve em água e é semelhante ao gás da fermentação da cevada. Além disso, ele
descobriu que ao jogar óleo de vitriol sobre giz ele conseguia produzir este mesmo gás que
ele chamou de “fixed-air”. Havia, uma terceira fração desse ar que sobrava após a chama se
apagar que não sustentava mais a chama e nem dissolvia em água. Prietley pensou ter
descoberto o flogisto. Hoje conhecemos essa substância como nitrogênio. Ele percebeu
ainda que parte do ar que sobrava na jarra após o camundongo morrer também era “fixed
air”. Propôs ainda que o “fixed air” seria retirado do ar pelas plantas permitindo que o ar
sustentasse a vida e a combustão novamente. O “fixed air” nada mais é que o nosso gás
carbônico. Priestley produziu, ainda, um outro gás ao aquecer óxido de mercúrio.
Incrivelmente, este gás sustentava a chama de velas de forma mais intensa e por mais
tempo do que o próprio ar. Neste momento ficamos tentados a antever o próximo passo e
dizer que Priestley descobre o oxigênio e derruba a teoria do flogisto. Entretanto, como dito
no início deste texto, a ciência percorre caminhos tortuosos e, por mais contraditório que
pareça, Priestley foi um dos mais ardorosos defensores do flogisto e interpretou todos os
seus incríveis resultados segundo este paradigma. De fato foi a partir desta perspectiva que
ele descreveu o experimento em que o óxido de mercúrio é aquecido, atribuindo
erroneamente o efeito ao processo de deflogisticamento do ar.
A teoria do flogisto só é derrubada após um acúmulo massivo de experimentos e
evidências produzidos por Antoine Lavoisier (1743–1794) e os anti-flogistianos que
estabeleceram que era mais parcimonioso assumir que o flogisto era um gás o qual
Lavoisier chamou de oxigênio. Apesar da controvérsia entre flogistianos e anti-flogistianos,
ambos aceitavam as similaridades entre o processo de combustão e a manutenção da vida
na presença de ar. Com os estudos de nutrição e taxa metabólica, Lavoisier juntou todos os
elementos necessários para solidificar o conceito de metabolismo energético como uma
combustão lenta dos alimentos realizada pelos organismos e tecidos vivos. O
desenvolvimento dos paradigmas, a partir de então, acompanharam o desenvolvimento
tecnológico dos equipamentos de medida. Deste modo, a seguir farei uma rápida descrição
das principais técnicas respirométricas: calorímetro de gelo, manômetros e respirometria
fechada, a coulorimetria e a respirometria aberta.
Calorímetro de gelo e primeiros conceitos
Antoine Lavoisier, Marie-Anne Paulze e Pierre-Simon Laplace realizam experimentos

que serão o estopim dos estudos de metabolismo e temperatura como conhecemos hoje. Ao
colocar uma cobaia dentro de uma gaiola de metal envolta por gelo (Fig. 2), medem,
indiretamente, o metabolismo através da transferência de energia (calor) da cobaia para o

gelo. Usando o conceito de calor latente1 proposto por Joseph Black e sabendo que o calor
latente de derretimento do gelo é 0.334kJ/g, calcularam pela primeira vez, através da
quantidade de água produzida por esse
derretimento, a energia perdida por um animal
ajustando o metabolismo para 0ºC. Chegaram
ao valor de 270kJ/h ou 75W de energia,
aproximadamente o mesmo que uma vela
queimando. Daí advém o nome de
calorimetria à técnica e de caloria à unidade
de medida que adotamos nos estudos de
metabolismo energético.
Dentre as muitas descobertas
científicas que o casal é responsável,
somente na área de metabolismo energético
eles realizaram uma série de medidas que
estabeleceram conceitos básicos que ainda
estão sendo desvendados nos dias de hoje.
Medindo humanos e animais estabeleceram
que o consumo de oxigênio aumenta com o
tamanho dos animais e com o exercício,
Figura 2 - Ilustração do primeiro calorímetro descobriram a termogênese induzida por
de gelo usado em 1782 e 1783 por Antoine dieta, inventaram o método de calorimetria
Lavoisier, Marie-Anne Paulze e Pierre-
indireta que mede a taxa metabólica através
Simon Laplace para medir o calor envolvido
do consumo de oxigênio e a calorimetria
em diversos tipos de reações químicas,
direta (calorímetro de gelo). Contudo, o
baseados no conceito de calor latente de
trabalho intelectual do casal Antoine Lavoisier
Joseph Black. Além de inaugurar os
estudos da termoquímica, realizam a e Marie-Anne Paulze é bruscamente
primeira medida de metabolismo energético interrompido com o advento da Revolução
ao medir um porquinho-da-índia no Francesa, momento em que ambos são
calorímetro de gelo (Modificado de decapitados. Somente um século após a
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Ice- morte do casal avanços em instrumentos
calorimeter.jpg.) manométricos proporcionam novidades
técnicas no campo das medidas metabólicas.
1
Energia absorvida por uma substância enquanto muda de estado, sem mudança de temperatura. Os
mais comuns são o calor latente de fusão (estado sólido para líquido) e de ebulição (líquido para
gasoso).

Metablismo
Manômetros e a respirometria fechada

A respirometria fechada baseia-se em medidas indiretas para quantificar o consumo
de oxigênio através de mudanças de pressão e volume de ar presente dentro de um
recipiente hermeticamente fechado. A maneira mais simples de medir a pressão de gases é
usando manometria. As técnicas necessárias para realizar as primeiras medidas
manométricas já existiam na época de Lavoisier. Seu predecessor, Robert Boyle, já havia
estabelecido as bases do método científico aplicado à química tornando-se um marco
divisor de águas que separava o amadorismo e experimentalismo puro dos alquimistas do
que conhecemos hoje como química moderna ao publicar seu livro de 1661, The Skeptical
Chymist. Mais especificamente, Boyle havia descrito o comportamento dos gases em
relação à pressão e a temperatura, estabelecendo o que conhecemos até hoje como Lei de
Boyle. Em 1643, cerca de 20 anos antes, Evangelista Torricelli
inventa o primeiro manômetro usado para medir pressão
atmosférica (Fig. 3). Em 1661, Christian Huygens inventa o
manômetro em tubo-U, permitindo uma nova série de medidas
comparativas, já que no tubo em U (Fig. 4), a diferença na
altura da coluna de líquido é diretamente proporcional à
diferença de pressão em cada uma das aberturas do tubo,
conforme a fórmula:
Pa – Po = H.g.ρ
onde H é a diferença na altura do menisco do líquido, Pa é a

Figura 3 - Esquema pressão medida, Po é a pressão de referência, g é a gravidade
mostrando o primeiro e ρ é a densidade do líquido usado.
manômetro inventado por Assim, foram lançadas as bases para o desenvolvimento de
Evangelista Torricelli em instrumentos que hoje em dia apresentam uma variedade
1643.
enorme, cada qual com as suas vantagens e suas
desvantagens: amplitude de pressão medida, sensibilidade,
dinâmica da resposta às mudanças de pressão e custo que
mudam muito de um instrumento para outro criando uma variedade enorme de
possibilidades de montagem de equipamentos.

Apesar da tecnologia e o conhecimento sobre as

propriedades físico-químicas dos gases terem sido
estabelecidas no século XVII, é somente no início do
século XX que esse tipo de equipamento se populariza e
passa a ser amplamente usado em laboratórios de
pesquisa. Um esquema simplificado de um sistema
respirométrico fechado (Fig. 5) consiste em uma câmara
hermeticamente fechada, com um absorvedor de gás
carbônico colocado, de preferência, no fundo deste
recipiente separado do animal com uma tela de metal, já
que o absorvedor geralmente é composto por uma
substância química corrosiva (Ascarite II ou KOH). A
câmara ainda é ligada a um manômetro líquido que indica
a queda de pressão do ar que preenche a câmara
Figura 4- Esquema mostrando
conforme o organismo consome o oxigênio, e uma seringa
o funcionamento de um
de ar que ao injetar ar na câmara procura manter o
manômetro em tubo-U. Seu
menisco do manômetro no mesmo nível, mantendo,
funcionamento permite a
assim, o mesmo volume de ar durante todo o
comparação entre pressões
experimento. Ao final do experimento, medimos o de dois sistemas. Pressão
consumo do animal através da diminuição total do volume atmosférica versus recipiente
de ar causada pelo consumo de oxigênio do animal. O respirométrico, por exemplo.
que veremos a seguir são as principais variações deste
padrão básico de respirometria fechada.
Figura 5 - Esquema de um sistema simples de respirometria fechada. O sistema geralmente é

mantido em temperatura constante durante todo o experimento. O absorvedor pode ser Ascarite II
(Thomas Co.) ou KOH. O manômetro indica a mudança de pressão do ar que preenche a câmara
respirométrica, e a seringa permite que se injete ar para que o menisco volte para o nível inicial.

Metablismo
Respirômetro de Volume Constante de Warburg

O Respirômetro de Volume Constante de Warburg foi amplamente usado por Otto
Warburg e colaboradores de Berlim e foi o primeiro descrito por Joseph Barcroft e John
Haldane em 1902. A câmara respirométrica é acoplada a um manômetro líquido em U e a
um braço lateral repleto de absorvedor de gás carbônico (Fig. 6). O manômetro em U aqui
possui como pressão de referência a própria pressão atmosférica, diferente do respirômetro
de Gilson, descrito mais adiante. É comum o uso do fluido de Brodie como o líquido do
manômetro (23g de cloreto de sódio, 5g de tauroglicocolato de sódio, 500mL de água).
Neste sistema o volume do recipiente onde fica o animal e a temperatura exata do
momento que foi determinado o volume precisam ser conhecidos para realizar os cálculos:
O2=h [( Vf [ 273.15 / T ] + Vq x b ) / P ]
(consumo em µL O2)
onde h é a altura do menisco no manômetro, Vf é o volume de gás livre (mL) da câmara

somado ao volume de ar dentro do manômetro até a altura do menisco descontado o valor
do volume do animal medido, T é a temperatura em graus Celsius, Vq é o volume em mL de
todos os líquidos na câmara, b é a solubilidade do gás medido no líquido da câmara, e P é a
pressão atmosférica por mililitro do fluido manométrico (geralmente fluido de Brodie).
Este sistema respirométrico é extremamente difícil de ser usado e é muito instável. O
manômetro usa como a pressão de referência a pressão atmosférica que pode mudar com a
altitude ou com a condição climática (p.e. chuva), podendo incutir erro na medição. Outro
fator de instabilidade é a diluição dos gases do ar interno na câmara na solução aquosa de
KOH, o que pode alterar a medição também. Parte desses problemas foram solucionados
pelo sistema respirométrico de Gilson que veremos a seguir.

Figura 6 - Esquema simplificado de um respirômetro de Warburg. Note que a

pressão de referência do manômetro em U é a própria pressão atmosférica.
Respirômetro de Pressão Constante de Gilson

O respirômetro de Pressão Constante de Gilson (Gilson, 1963) é um sistema de
respirometria fechada semelhante ao Warburg, porém resolve o problema de alterações na
pressão atmosférica ao ligar uma das pontas do manômetro líquido em U a um
termobarômetro, que nada mais é do que outro frasco hermeticamente fechado com volume
e pressão de gás constantes. Para manter constantes a pressão e o volume do ar o sistema
todo é mantido em um banho térmico que mantém a temperatura. (Fig. 7). O volume é
mantido constante pela manutenção do menisco do manômetro sempre na mesma altura
através da injeção do mesmo volume de ar que já foi consumido pelo animal. A vantagem
do respirômetro de Gilson é que se trata de uma medida física direta, onde não precisamos
conhecer o volume da câmara onde está o organismo, diferente do sistema de Warburg em
que era necessário saber o volume de ar exato da situação inicial do sistema. Os passos a
serem seguidos são:
1. Coloque o animal na câmara;

2. Absorva qualquer CO2 produzido pelo animal;
3. Meça a mudança de pressão causada pelo consumo de O2;
4. Ajuste periodicamente o volume de ar para que a pressão se mantenha constante.

Metablismo
Cálculos:
O2=( µL x PB x 273.15 ) / ( 101.325 x T )
(consumo em µLO2)
onde µL é o volume de ar que diminuiu no sistema, PB é a pressão barométrica em
kilopascals e T é temperatura em Kelvin.
Figura 7 - Esquema simplificado de um respirômetro de Gilson. Note que

o termobarômetro é um frasco que contém um volume constante de ar.
Transformações para CPTP (Condições Padrão de Temperatura e Pressão):

 microlitros/hora para microgramas/hora=>multiplique por 1.43;
 microlitros/hora para micromoles/hora=>multiplique por 0.04464.
A aparente simplicidade deste sistema respirométrico à primeira vista, esconde uma
série de detalhes técnicos e de procedimento em que o experimentador precisa estar bem
treinado para conseguir um bom funcionamento do sistema. Por exemplo, o líquido que
mantém a pressão pode vazar sobre o organismo durante a montagem do sistema, o animal
pode entrar em contato com o absorvedor e sofrer injúria durante o registro do consumo de
oxigênio, além das limitações próprias da respirometria fechada listadas no final deste item.
Cálculo de Quociente Respiratório (QR)

Como já visto no Capítulo 19, a razão entre o que é produzido como CO2 e o que é
consumido de O2 pode ser usado para estabelecermos o substrato energético (carboidrato,
proteína ou lipídio) que está sendo usado pelo animal no momento da medida para obter
energia. Em uma condição em que o animal tem um QR de 1, ou seja, usa carboidratos
como substrato e o sistema respirométrico não possui absorvedor de CO2, o sistema não

apresenta mudança de volume inicial versus final. Parece que o animal não respira porque o
consumo de oxigênio compensa a produção de gás carbônico. Podemos usar esta
característica para obter o QR usando a fórmula:
QR = (MR-MRap)/MR
onde QR é o quociente respiratório, MR é o metabolismo medido com o absorvedor, MRap é

o metabolismo medido sem o absorvedor.
Os valores de QR variam com o substrato energético que está sendo queimado e
pode ser uma medida interessante a ser realizada, de acordo com a pergunta sobre
metabolismo energético que se quer responder.
Limitações da respirometria fechada

A respirometria fechada foi muito importante no início do século XX e ainda hoje é
usada em condições específicas de medições de ensaios enzimáticos e de cultura de
tecidos. Contudo, a técnica está limitada a medições e condições físico-químicas muito
específicas para que as alterações no ar de dentro da câmara respirométrica sejam passível
de ser acompanhada. Essa limitação torna a técnica inapropriada para medir metabolismo
de organismos íntegros onde a medida não é estável. Isto acontece com animais que
funcionam como conformadores metabólicos (mudam o metabolismo conforme a
concentração de oxigênio), alterando o metabolismo de forma consistente. Este é o caso de
animais que produzem calor, por exemplo abelhas e insetos voadores em geral, que alteram
seus níveis de atividade ao longo do experimento, ou que respiram de forma intermitente,
como os artrópodes traqueados. A respirometria fechada não permite, também, medições
muito longas, que se estendam por dias, por exemplo. O aumento de gás carbônico, perda
de água, alimentação, produção de excretas e diminuição de oxigênio produzem alterações
metabólicas inconvenientes e impeditivas às medidas. Dentre as alterações listadas
anteriormente, as que causam efeitos metabólicos mais importantes são a diminuição
(hipóxia) e esgotamento do oxigênio (anóxia), e o progressivo aumento de gás carbônico
(hipercapnia). Outra limitação quanto ao seu uso, é a impossibilidade de acompanhar a
atividade do animal, o que incute imprecisão na medida de metabolismo energético. Para
pequenos artrópodes o efeito é pior porque estes tendem a aumentar a atividade como
resposta ao confinamento em recipientes pequenos. Ambas as técnicas a seguir aparecem
como soluções a alguns dos problemas da respirometria fechada que acabaram de ser
listados.

Metablismo
Respirometria Coulométrica
A respirometria coulorimétrica foi descrita pela primeira vez por N. T. Werthessen em
1937. Ela baseia-se, como na respirometria fechada, no princípio de constância de volume
e pressão do gás encerrado em um recipiente respirométrico, associado à produção
eletrolítica de oxigênio. Esse sistema de grande precisão resolve o problema de alterações
nas condições do ar interno á câmara respirométrica, porém é pouco utilizada.
O funcionamento é simples: oar de uma câmara respirométrica fica ligado a um
recipiente que contém solução saturada de sulfato cúprico. Como na respirometria fechada,
o gás carbônico produzido pelo organismo medido é absorvido do ar por ascarite ou solução
de KOH. Conforme o volume de ar da câmara diminui, a solução de sulfato cúprico sobe e
encosta no anodo, fechando o circuito. Assim que a eletrólise vai liberando oxigênio,
restabelece a concentrações de oxigênio, o volume de ar da câmara aumenta e empurra a
solução de sulfato cúprico para baixo, desligando o circuito novamente (Fig. 8).
Usando o montante de eletricidade liberada ou consumida, medido em coulombs,
desta reação de eletrólise obtemos a produção de oxigênio em quantidades muito precisas.
Através da fórmula:
nLO2 = Q[Vm/(4F)]
onde Q é a carga de eletricidade, em coulombs, descarregada na solução saturada; Vm é o

volume molar de oxigênio em CPTP; e F é a constante de Faraday (96.485 coulombs /mol).
Figura 8 – Esquema simplificado de um sistema coulorimétrico. Todo o sistema é normalmente

mantido em temperatura constante. Conforme o organismo consome oxigênio, libera gás carbônico
que é retirado do ar pelo ascarite, diminuindo o volume de ar da câmara respirométrica. Isto permite
que o nível de solução de sulfato cúprico suba pelo tubo e atinja o anodo, iniciando a eletrólise. Com
o avançar da reação eletrolítica, o oxigênio produzido preenche a câmara respirométrica novamente
fazendo o nível de solução de sulfato cúprico baixar e desligar o sistema eletrolítico.

Respirometria de fluxo
O próximo avanço nas técnicas respirométricas não vem no sentido de facilitar as
medidas, muito pelo contrário, a grande desvantagem das técnicas de respirometria de fluxo
é a complexidade do equipamento. Enquanto a respirometria fechada é até certo ponto
intuitiva e passível de ser feita de modo artesanal, como descrito acima, a respirometria de
fluxo passa a se valer de equipamentos mais sofisticados e que exigem um conhecimento
técnico mais apurado para que sejam devidamente manejados e as medidas válidas sejam
obtidas. A seu favor, a respirometria de fluxo traz uma significativa expansão das fronteiras
do que é possível de ser medido e do que se pode conhecer do metabolismo dos
organismos, limites estes os quais ainda estamos explorando. Com o equipamento
adequado, montado de maneira eficiente, já podemos obter medidas de consumo de
oxigênio de uma única drosófila em tempo real (Lighton e Schilman, 2007).
Esta respirometria usa um sistema de fluxo criado por bombas de ar à vácuo
associado a analisadores de gases compostos de sensores de oxigênio e gás carbônico.
Enquanto a respirometria fechada baseia-se na medida de consumo de oxigênio, a
respirometria de fluxo permite o registro tanto do consumo de oxigênio quanto do gás
carbônico produzido, isoladamente ou associados no mesmo sistema respirométrico. Ela
tem expandido as possibilidades de medição de fenômenos fisiológicos mais dinâmicos e
ligados a ajustes dos organismos a diferentes contextos biológicos. Uma característica
marcante é a possibilidade de medidas dos animais executando atividades diferentes, com
grande precisão no registro de gasto energético. A respirometria de fluxo teve um impacto
direto na maneira como lidamos com a fisiologia. Seu uso na medicina, na melhoria do
desempenho de atletas, ou na veterinária, no desempenho de animais de corrida, já nos é
cotidiano. Toda a fisiologia do esporte, dos ajustes rápidos realizados pelo corpo durante os
diferentes tipos de práticas esportivas só puderam ser investigadas diante destes avanços
nas técnicas de respirometria, que permitiram obter medidas de gasto energético em tempo
real.
Se em um extremo temos a possibilidade de medir fenômenos fisiológicos mais
dinâmicos e de ajustes rápidos, no outro extremo temos a possibilidade de acompanhar
ajustes de animais diminutos e de baixo metabolismo. Papel de destaque no
desenvolvimento de novos equipamentos e técnicas encontra-se na figura de John R. B.
Lighton (Sable Systems International).
O enorme panorama de desenhos experimentais, de montagem dos equipamentos
(exemplo, Fig. 9) e mesmo de empresas que oferecem soluções para as diferentes
necessidades de pesquisadores e outros profissionais que usam respirometria, tornam o
assunto inesgotável e difícil de sintetizar de maneira satisfatória em um texto introdutório.
Sendo assim, o que irei explorar a seguir são algumas características necessárias para

Metablismo
guiar a escolha do tipo de medida mais adequado à pergunta que se deseja responder,
assim como as vantagens e desvantagens de cada tipo de medida. Para mais detalhes
técnicos, dicas de equipamentos e soluções para possíveis problemas, recomendo o livro
Measuring Metabolic Rates de John R. B. Lighton de 2008.
Figura 9 – Esquema de uma das maneiras de montar um sistema respirométrico de fluxo com
equipamento da Sable Systems International. 1. bomba de ar; 2. câmara para manter estabilidade de
pressão do ar; 3. fluxímetro; 4.controlador de umidade relativa do ar (UR%); 5. controlador de
abertura e fechamento das câmaras respirométricas; câmara respirométrica com animal; 7.
absorvedor de umidade do ar e gás carbônico; analisador de oxigênio; 9. programa que registra os
dados do analisador.
Linha de base: a linha de base é o patamar de referência sobre o qual o consumo de

oxigênio ou a produção de gás carbônico são comparados para se obter a medição. São as
quantidades iniciais dos gases presentes no ar, antes do animal alterar as proporções dos
gases no fluxo. Como a linha de base é o valor de referência a partir do qual se obtém a
medida, esta precisa estar bem estável e estabelecida antes do início do registro de uma
respirometria de fluxo.
Analisador de oxigênio: a quantidade de oxigênio no ar (cerca de 20,95%) faz com que a

medida possa ter uma grande amplitude e flutuabilidade de resposta. Uma boa medida de
consumo de oxigênio demanda um bom sensor de oxigênio, uma boa calibração e ajuste
dos sensores, uma boa estabilidade da composição do ar que entra no sistema e a
manutenção do equipamento em um lugar protegido, detalhes que fazem a refletem na
obtenção de uma medida válida ou não. Conhecer o equipamento também é importante já

que cada sensor responde de uma maneira às perturbações que ocorrem ao redor do
equipamento. Para alguns aparelhos que são sensíveis à vibração, por exemplo, colocar
uma bomba de ar vibrando na mesma mesa pode ser um desastre. Além disso, medir o
consumo de oxigênio demanda tempo e paciência, já que a instabilidade do sistema é uma
grande desvantagem a ser considerada, efeito especialmente sentido na medida de animais
muito pequenos e/ou de metabolismo baixo. A vantagem da medida de consumo de
oxigênio é a sua correspondência direta com o metabolismo energético do organismo (ver
Analisador de CO2).
Analisador de gás carbônico: a quantidade de gás carbônico no ar é muito menor do que

a de oxigênio e este pode ser retirado do ar com o uso de absorvedores, antes de entrar no
sistema. Isto nos permite criar uma linha de base de valores muito pequenos ou até mesmo
de zero CO2, a partir da qual qualquer quantidade de CO2 registrada terá vindo do animal
medido. Por ser uma medida mais estável, é a mais recomendada para a medição de
pequenos artrópodes. A desvantagem em se medir somente gás carbônico é a necessidade
em saber o QR do animal nas diferentes situações em que este está sendo medido, já que o
metabolismo obtido a partir do CO2 depende do QR para ser convertido em unidades de
energia, diferente do que ocorre com o O2. Outro possível problema é a possibilidade da não
correspondência direta com o metabolismo devido a efeitos de liberação massiva de CO2
por mudanças de pH no sangue.
Fluxo de ar: a escolha do fluxo de ar a ser usado depende do fenômeno a ser medido.
Animais com metabolismo alto pedem fluxos de ar alto, tanto para evitar hipóxia e
hipercapnia, em um sistema de lavagem de câmaras, ou mesmo em um sistema de
máscara, em que não há perigo de hipóxia e hipercapnia, para que a dinâmica do consumo
registrado acompanhe as mudanças metabólicas na mesma velocidade em que elas
acontecem. Se a captação da amostra de ar pela máscara acontece em uma velocidade
menor do que as mudanças que se deseja acompanhar do organismo, a lentidão do registro
passa a não captar o fenômeno. Por outro lado, animais que apresentam baixo metabolismo
e/ou pequeno tamanho corpóreo, imprimem baixas trocas gasosas, alterando pouco a
composição do ar que passa pelo sistema. Nestes casos, diminuir o fluxo permite que haja
alteração na composição do ar suficiente para que esta alteração seja sentida pelo sensor
presente no analisador. Porém, fluxos muito baixos causam uma defasagem entre a
atividade observada no animal e o registro do analisador, aspecto que precisa ser
considerado na hora de decidir o fluxo de ar usado.
Lavagem das câmaras respirométricas: o formato da câmara respirométrica tem

Metablismo
influência direta neste tipo de medida devido ao fato do gás carbônico ser mais pesado que
os demais gases presentes no ar e tender a se depositar na parte inferior da câmara. Isto
cria, no melhor dos casos, defasagens de medidas e, no pior dos casos, alterações na
dinâmicas imprevisíveis na lavagem da câmara. Esta alteração na dinâmica de lavagem
pode criar registros no sensor que não tem relação direta com as trocas de gases realizadas
pelo animal medido, mas sim, com lavagens ineficientes, incompletas e irregulares das
câmaras respirométricas. Os melhores desenhos de câmaras respirométricas são câmaras
sem cantos e irregularidades onde o gás carbônico não tenha a possibilidade de ficar retido,
e de tamanho próximo ao tamanho do animal. Por outro lado, o formato e tamanho da
câmara tem impacto direto no comportamento do animal que está sendo confinado e
características do comportamento deste precisam ser considerados para que se evite
fatores de estresse quando não se quer medi-los. Por exemplo, de maneira geral, recintos
sem cantos ou sem irregularidades (exemplo extremo são recintos perfeitamente esféricos)
são altamente perturbadores e podem ser um fator de estresse para o animal, apesar de ser
o melhor formato de câmara sob o aspecto de lavagem.
Absorvedores de água: a presença de vapor de água no ar que passa pelos sensores dos
analisadores de gases altera a medida diminuindo o sinal, ou seja, o valor registrado é
menor do que o registrado por um fluxo de ar seco passando pelo sensor. Em animais que
realizam grandes volumes de trocas de gases, como mamíferos e aves, esse efeito é menor
não afetando de modo impeditivo o registro. Entretanto, quando lidamos com animais de
metabolismo mais baixo, como anfíbios, répteis e artrópodes, o vapor de água causa efeitos
significativos nas medidas. Para lidar com o vapor de água presente no fluxo de ar
normalmente usamos uma sustância que retira essa água do ar (p.e. sílica-gel, drierita ou
perclorato de magnésio).
Absorvedores de gás carbônico: o ponto no sistema onde o gás carbônico será retirado
da corrente de ar muda conforme a montagem do equipamento, como visto acima. Ele pode
ser usado para filtrar o ar inicial que entra no sistema. Se o analisador de oxigênio for o
equipamento escolhido para a medida, o ar precisa passar por um absorvedor de gás
carbônico antes de entrar no aparelho. As substâncias mais usadas em equipamentos
respirométricos são o Ascarite II, o KOH e cal sodada.
Manutenção de temperatura durante a medida: a manutenção de temperatura constante

durante as medidas hoje em dia é feito por câmaras climáticas que vão desde geladeiras
modificadas de modo a manter uma ou duas temperatura programadas, até salas
modificadas para esse mesmo fim. Estas câmaras climáticas permitem boa variedade de

combinações de fatores abióticos que, em conjunto com a respirometria de fluxo, permite a

realização das medidas.
Respirometria de fluxo em medidas de respirometria fechada: ainda é bastante usada

para a medição de animais com baixo metabolismo e/ou muito pequenos. A estratégia
usada aqui é manter a câmara fechada por tempo suficiente para que a quantidade de
oxigênio caia e/ou a produção de gás carbonico seja alta o suficiente para ser detectado
pelo sensor do analisador. Após este período, o fluxo passa novamente pela câmara
respirométrica, renovando o ar dentro desta, permitindo que uma nova medida inicie na
sequência. O ar que sai da câmara é direcionado para os analisadores, podendo ou não
passar por um absorvedor de água e CO2 antes de entrar no analisador (para detalhes
técnicos consultar Lighton, 2008). O tipo de registro que esse procedimento gera está
esquematizado na Fig. 10.
Figura 10 - Ilustração de uma medida de consumo de oxigênio de respirometria fechada feita em um

sistema de fluxo de ar, mostrando a linha de base (pontilhado azul claro), a curva de lavagem da
câmara (linha contínua branca) e a área correspondente ao consumo de oxigênio do animal
(vermelho).
Respirometria de fluxo em medidas de respirometria aberta: é a medida ideal para

estudos de comportamentos e gasto energético em contextos biológicos com mudanças de
estado mais dinâmicas, como pode ser visto na Fig. 11. Sua utilização só não é mais ampla
devido a dificuldades em controlar possíveis problemas de lavagem de câmaras e
interferências na sensibilidade dos equipamentos, e seu uso ainda é limitado para animais
muito pequenos (p.e. pequenos artrópodes) e/ou de metabolismo muito baixo (p.e. anfíbios).
Nestes organismos a respirometria aberta usada mais apropriada é a de produção de CO2.
Apesar de já existir equipamentos capazes de realizar respirometria aberta até mesmo de
uma Drosophila sp. seu uso é restrito devido ao preço dos equipamentos capazes de
realizar estas medidas de forma válida.

Metablismo
Figura 11- Exemplo de registro de respirometria aberta de uma formiga forrageando. Produção de
CO2 da formiga antes de beber uma solução aquosa de açúcar 30% (flecha da esquerda), enquanto
estava bebendo (registro entre as flechas) e depois de beber (registro após flecha da direita)
(Modificado de Schilman e Roces, 2006).
Muitas vezes pensamos que a fronteira do conhecimento científico está delimitada
pelo o que podemos realizar tecnologicamente em determinado momento histórico.
Contudo, a história da ciência e dos cientistas mostra que o mundo científico é feito também
de muita criatividade e ousadia em questionar velhos modelos. Neste contexto, é
emblemático o exemplo do embate de Priestley (representando os flogistianos) e o casal
Lavoisier (representando os anti-flogistianos). É inegável a qualidade de Priestley como
cientista e investigador de propriedades da matéria, porém, sua visão de mundo molda a
interpretação de seus resultados, e mesmo possuindo evidências suficientes para superar o
velho modelo flogistiano, molda a interpretação de seus resultados conforme o paradigma
vigente. Coube a Lavoisier mudar a forma de pensar sobre o ar, a vida e a combustão,
imprimindo uma longeva mudança de perspectiva ao mundo.
Todo este histórico permitiu o desenvolvimento das novas técnicas e dos novos
materiais disponíveis apresentados, como as câmaras respirométricas transparentes e
detectores de movimento, que possibilitaram a medição da determinação das relações
energéticas envolvidas em fenômenos fisiológicos e comportamentais mais dinâmicos.
Estas medidas têm sido carro-chefe de novidades recentes na fisiologia como a endotermia
de insetos, medidas precisas de gasto energético de organismos em estado reprodutivo,
auxiliando também na melhoria de técnicas de criação, medidas de desempenho animal
com implicações em interpretações evolutivas e ecológicas, entre outros. Alguns destes
processos fisiológicos e comportamentais que envolvem alterações no metabolismo
energético de animais ectotérmicos e endotérmicos são apresentados nos cap. seguintes.


Metablismo
Ectotermia: um acesso de baixo custo à vida
Jessyca Michele Citadini

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A temperatura ambiental é um dos fatores físicos mais importantes para

sobrevivência dos animais. Como discutido em capítulos anteriores, os animais ectotérmicos
possuem a temperatura do corpo variável de acordo com a temperatura do ambiente.
Contudo, em muitos desses organismos, a manutenção de uma temperatura corpórea
relativamente alta e estável eventualmente mais apropriada para as atividades metabólicas,
envolve de forma complexa, sinérgica e equilibrada, a fisiologia e o comportamento (Bogert,
1949; 1959).
Transferência de energia
Para que um corpo ou animal mantenha uma temperatura constante, a perda de energia
deve ser igual ao ganho. Uma compreensão dos mecanismos fisiológicos envolvidos nas
trocas de energia que afetam a temperatura dos animais requer o conhecimento de alguns
princípios físicos. Como já mencionado na presente unidade, o calor, por exemplo, é a
transferência de energia entre corpos que diferem em temperatura, e tal transferência
acontece via quatro diferentes formas que são: condução, convecção, irradiação e
evaporação (Schmidt-Nielsen e Duke,1996).
 Condução
A condução ocorre entre corpos físicos que estão em contato entre si, sejam sólidos,
líquidos ou gases.
 Convecção
A transferência de energia que ocorre em fluidos em geral e ocorre devido às
diferenças de densidade das partes envolvidas.
 Radiação
A transferência de energia que ocorre na ausência de um contato direto com um
objeto - é dessa forma que todos os dias o Sol aquece a Terra.
 Evaporação
Energia perdida através da água e o resultado é o resfriamento da superfície
corporal.
Os animais ectotérmicos, utilizam esses mecanismos na regulação da temperatura, por
exemplo: condução (seleção do substrato), a convecção (posições em relação ao sol), a
radiação (comportamento e pigmentação da pele) e a evaporação através do ofego (Fig.1).

Figura 1 - Representação da troca de energia por condução, convecção, radiação e evaporação para
um réptil em um ambiente terrestre (De Heatwole e Taylor, 1987, Modificado de Withers, 1992).
Ectotérmicos
Vamos primeiramente examinar as relações termais de animais ectotérmicos
aquáticos. Os animais de hábitos noturnos geralmente não apresentam uma significativa
troca de energia com o meio, portanto, são termoconformadores, já os de hábitos diurnos
fazem a termorregulação por migrações verticais e horizontais. Em seguida, vamos
examinar os animais ectotérmicos terrestres, os de hábitos noturnos podem evitar
temperaturas extremas, são, portanto termoconformadores, já os diurnos termorregulam por
heliotermia e seleção de substrato (Withers, 1992). No final será abordada a influência da
temperatura sobre a locomoção de vertebrados terrestres e a influência da mesma nas
respostas comportamentais defensivas.
Ectotérmicos Aquáticos
A água tem uma condutividade relativamente baixa de energia e um calor específico
alto, e, por conseguinte leva um longo tempo, tanto para aquecer como para esfriar. Por
causa disto, rápidas flutuações de temperatura do ar fora da água se transformam em
pequenas e lentas mudanças dentro dela. O ar é rapidamente aquecido ou resfriado e
conseqüentemente foram entre os animais terrestres que se desenvolveram as maiores
adaptações a temperaturas extremas (Withers, 1992).
A dissipação de energia através das brânquias é tão eficaz para a maioria dos
animais aquáticos que a produção metabólica de energia não tem nenhum significado
térmico e a temperatura do corpo é semelhante à temperatura da água. Muitos animais
ectotérmicos aquáticos são capazes de termorregulação precisamente a uma temperatura
de preferência (Tpref). Esta regulação da temperatura de preferência é realizada através do
comportamento por uma água de temperatura adequada, ao invés da termorregulação por
meio fisiológico (Withers, 1992).

Metablismo
Os anfíbios são um grupo particularmente interessante de animais ectotérmicos, pois

muitas espécies são de transição entre ambientes aquáticos e terrestres. Eles podem
apresentar uma temperatura corpórea (Tc) entre 0°C (por exemplo, uma salamandra
caminhando sobre um campo de neve) até mais de 40°C (um sapo se aquecendo). Como
seria de esperar, os anfíbios aquáticos tem uma Tc similar a temperatura do ar (Ta), mas
muitos podem selecionar uma temperatura de preferência, se existe um gradiente térmico
adequado na Ta. Por exemplo, muitos girinos selecionam a água mais quente ao redor das
bordas de um tanque e evitam o frio em água mais profunda (Brattström, 1970). Os girinos
de Hyla regilla expõem a superfície dorsal para que seja exposta à radiação solar.
Agrupamentos de girinos podem absorver radiação solar suficiente para aumentar a
temperatura da água local (Brattström, 1962).
Anfíbios terrestres possuem um potencial para aumentar a temperatura corpórea
escolhendo microclimas ou aquecendo através do sol, mas sua alta perda de água por
evaporação cutânea tende a diminuir a eficiência do aquecimento ao sol, no entanto,
quando hidratados são excelentes evitando o sobreaquecimento (Withers, 1992).
Ectotérmicos terrestres
Muitos ectotérmicos terrestres apresentam uma considerável capacidade para a
termorregulação comportamental e fisiológica. O ar tem baixa condutância e uma menor
capacidade de energia do que a água, desta forma é mais fácil para um ectotérmico
terrestre manter o gradiente termal entre Tc e Ta. A taxa de aquecimento ou resfriamento de
um objeto ou animal, em ambientes frios ou quentes é determinada pela temperatura
diferencial, pela propriedade da superfície e pela propriedade termal do meio (condutividade
e calor específico) (Withers, 1992).
Muitas variáveis afetam a condutância dos animais. A mais importante é o tamanho
corpóreo, presença de isolamento e a natureza do meio (ar ou água). A massa corporal é de
suma importância uma vez que a relação área de superfície/massa corpórea do animal
determina inércia termal, ou seja, a tendência a mudar a temperatura do corpo em
decorrência das mudanças na temperatura ambiente. Animais grandes têm uma menor área
superfície/massa que os pequenos animais, e desta forma resfriam ou aquecem mais
vagarosamente (Withers, 1992).
A inversa relação entre condutância termal e massa do corpo tem profundo
significado ecológico. Animais pequenos possuem considerável dificuldade para a
manutenção da temperatura, por exemplo, uma abelha que tem 20 gramas de massa irá
perder temperatura em um ambiente frio em poucos minutos. O isolamento térmico também
pode afetar a condutância, por exemplo, as abelhas que possui os pelos do corpo removido
têm uma maior condutividade que as abelhas que possuem os pêlos (May, 1976). Em

animais geralmente o ganho é mais rápido do que a perda de energia, isto é particularmente
evidente em lagartos e crocodilianos. Existem também mudanças no batimento cardíaco
(mais rápido durante o aquecimento), desta forma os ajustes cardiovasculares e metabólicos
provavelmente facilitam o aquecimento e retardam o resfriamento (Fig.2) (Withers, 1992).
Figura 2- As iguanas marinhas de Galápagos aquecem e resfriam em velocidades diferentes. (A) No

ambiente terrestre a iguana ao tomar sol absorve energia dos raios de sol, ocorrendo a
vasodilatação dos vasos sanguíneos cutâneos e o batimento cardíaco torna-se mais rápido
(conforme registrado pelo Eletroencéfalograma – ECG), o que asseguram o aquecimento do sangue
e circulação eficiente. (B) A perda de energia sobre a água é retardada pela lentidão dos batimentos
cardíacos e pela vasoconstricção dos vasos sanguíneos cutâneos, que miniminizam o fluxo
sanguíneo para a pele (Modificado de Eckert, 1997).
Aquecimento nos insetos

A postura do corpo e a orientação das asas podem afetar significantemente a
temperatura do corpo de um inseto se aquecendo (Fig.3). As libélulas se aquecem em
temperaturas baixas do ar e regulam seu ganho através da radiação solar e dos ajustes
posturais. Diversas espécies se aquecem com as asas posicionadas para frente e para a
trás para reduzir a perda de energia. Muitas borboletas podem elevar a temperatura torácica
150C acima da temperatura do ar por ajustes posturais, embora algumas espécies usem
vias metabólicas para elevar a temperatura torácica (Withers, 1992).

Metablismo
Figura 3- Adaptações posturais da libélula para maximizar o ganho de energia (i) por heliotermia ou
(ii) para minimizar o ganho de energia (May,1976 – Modificado de Withers, 1992).
Coloração
A coloração tem importante efeito na termorregulação, pois 50% da energia radiante
vêm do sol e é no espectro visível. Conseqüentemente a refletância visual (cor) influencia no
ganho de energia. As superfícies pretas refletem menos energia radiante que as superfícies
brancas. Por exemplo, nos animais que apresentam coloração preta é esperado que
absorvam mais radiação e assim apresentem uma temperatura corpórea maior que os
animais de coloração branca (Fig.4) (Withers, 1992).
Figura 4- Temperatura no tórax (símbolos sólidos) e abdômen (símbolos abertos) de besouros do

deserto da Namíbia – Onymacris rugatipennis (élitra preta) e O. brincki ( élitra branca) em ambiente
de luz solar natural (De Henwood, 1975, modificado de Withers, 1992).
Aquecimento em répteis e anfíbios

A temperatura corpórea dos repteis é bastante variável, variando de poucos graus
até acima de 400C. Lagartos noturnos e algumas espécies de diurnos são
termoconformadores, com a temperatura corpórea similar a temperatura do ambiente.

Lagartos noturnos não possuem nenhuma fonte de radiação solar (embora alguns aqueçam
durante o dia enquanto estão inativos), muitos lagartos que habitam as florestas não podem
se aquecer porque eles habitam ambientes sombreados. O lagarto tropical Anolis cristatellus
é um oportunista termal; ele é termoconformador em áreas sombreadas, mas é
termorregulador em áreas abertas. Alguns lagartos absorvem energia através do contato do
ventre com uma superfície ou substrato de energia, por exemplo, em rochas aquecidas.
Esses lagartos são chamados de tigmotermos porque seu maior ganho de energia é através
da condução em vez da radiação (Withers, 1992).
A maioria dos lagartos diurnos se aquece em luz solar e são chamados de
termorreguladores com temperatura de preferência do corpo de aproximadamente 35 a
40°C. Esses lagartos heliotérmicos manipulam a troca de energia através de vias
comportamentais e fisiológicas. Assim, o controle comportamental inclui: mudança na
orientação do corpo em relação ao sol, alterações do contorno do corpo, mudança na
coloração (componente fisiológico) e também o controle fisiológico através das alterações
na circulação periférica. Lagartos heliotérmicos têm uma estreita faixa de temperatura de
preferência, a faixa de tolerância termal é o intervalo de temperatura com o qual o animal
pode sobreviver sem comprometer o sistema fisiológico. A faixa de sobrevivência termal é
definida como a temperatura crítica mínima e a temperatura crítica máxima. A temperatura
“ótima” é um intervalo que seria o ideal para muitas funções bioquímicas e fisiológicas, com
um aumento chegando a um platô e depois decaindo em altas temperaturas, isso ocorre por
causa da instabilidade termal das estruturas e funções das proteínas, como já discutido em
capítulos anteriores (Withers, 1992).
Na caatinga brasileira os sapos Pleurodema diplolistris passam os 10 ou 11 meses
anuais de seca enterrados na areia sem água e sem alimento, quando a chuva chega, os
machos emergem cantando em uníssono e logo saltam para a lagoa mais próxima. Atraídas
pela cantoria, as fêmeas escolhem seus pares e liberam dezenas de óvulos. Em um ou no
máximo dois meses, quando as chuvas cessam e os rios desaparecem os sapos recém-
nascidos precisam estar completamente formados e prontos para se enterrarem na areia
(Carvalho e col., 2010).
Adaptações ao Frio
Muitos ectotérmicos estão bioquímica e fisiologicamente adaptados para sobreviver e
até mesmo funcionar normalmente em baixas temperaturas ambientais. Entretanto,
temperaturas que são frias o suficiente para congelar os tecidos do animal são
potencialmente letais e devem ser evitadas ou requerer adaptações específicas para a
sobrevivência. Muitos ectotérmicos simplesmente evitam condições congelantes por
migrações ou buscando por microclimas mais quentes, mas alguns ocasionalmente têm

Metablismo
contato com temperaturas congelantes. Ectotérmicos aquáticos podem experimentar apenas

condições brandas de congelamento, desde que a água doce ou água do mar congele entre
00C a -20C. Ectotérmicos terrestres, ao contrário, são particularmente mais susceptíveis ao
congelamento porque a temperatura do ar pode cair abaixo de zero (-20 a -500C). Existe
uma variedade de estratégias que permitem aos animais ectotérmicos sobreviverem em
condições congelantes (Withers, 1992).
Estratégias anti-congelamento
Vários ectotérmicos, tais como os artrópodes polares e o peixe icefish, evitam se
congelar diminuindo o ponto de congelamento dos fluidos do seu corpo abaixo da
temperatura média do ambiente, ou permitindo que os fluidos super-resfriem abaixo do
ponto de congelamento normal (Withers, 1992).
Depressão osmótica do ponto de congelamento

A água doce congela a 00C. As soluções apresentam uma depressão do ponto de
congelamento, isso ocorre pela presença de moléculas de soluto. Os ectotérmicos podem
potencializar o congelamento pelo aumento da concentração osmótica de seus fluidos
corpóreos, desta forma o ponto de congelamento fica abaixo da temperatura ambiente. A
normal concentração dos fluidos corpóreos confere uma proteção muito limitada contra o
congelamento em água doce, pois o ponto de congelamento dos tecidos é geralmente entre
-0,60C a -0,7 0C. Os animais marinhos são mais propensos ao congelamento, pois seus
tecidos são geralmente não hiper-osmótico e, portanto, eles podem congelar a mesma ou a
temperatura maior que a água do mar, que seria de aproximadamente -1,86°C. Alguns
ectotérmicos acumulam altas concentrações de solutos específicos para diminuir o ponto de
congelamento entre 1 a 10°C. Esses solutos são açucares ou alcoóis de açúcar. Estes
compostos podem também apresentar um efeito crioprotetor – eles protegem a membrana e
as enzimas contra a desnaturação pelo frio e o ferimento provocado pelo gelo (Withers,
1992).
Super-resfriamento
Um animal pode ficar exposto a uma temperatura consideravelmente abaixo do ponto no
qual seus líquidos corpóreos possivelmente congelariam, todavia, permanecem super-
resfriados, a menos que a formação de gelo se inicie por meio da nucleação. Por exemplo,
se um pedaço de água congelada a −1,9° C for colocada próxima ao peixe, o estado de
super-resfriamento é destruído, e o peixe congela e morre. Desta forma, o super-
resfriamento será uma boa estratégia apenas quando o risco de entrar em contato com

agentes nucleadores for muito baixo. Tal super-resfriamento é de fato de grande importância
para a sobrevivência de muitos animais. Durante uma noite ocasionalmente fria, por
exemplo, o super-resfriamento pode ser essencial para os animais intolerantes ao
congelamento que não conseguem buscar um refúgio mais quente. Répteis e anfíbios, cujos
fluidos corpóreos, se nucleados, começariam a congelar a -0,6°C foram super-resfriados até
-8°C, sem que congelassem (Lowe e col., 1971). Isso pode significar a diferença entre a vida
e a morte para um animal que fica inesperadamente exposto a uma noite muito fria, antes
de encontrar um esconderijo para proteção contra os rigores do inverno. (Schmidt-Nielsen e
Duke, 1996).
Um componente particularmente efetivo na redução do ponto de congelamento e
também do de super-resfriamento é o glicerol. O glicerol freqüentemente ocorre em alta
concentração em insetos hibernantes e é muito eficaz no aumento da tolerância ao frio
(Schmidt-Nielsen e Duke, 1996).
Proteínas anti-congelamento
A substância responsável pela redução no ponto de congelamento tornou-se
conhecida como uma substancia "anticongelativa". Ela foi originariamente identificada e sua
composição elucidada no sangue de um peixe antártico, Trematomus (DeVries, 1970). É
uma glicoproteína que atua impedindo a adição de moléculas de água à matriz de cristais de
gelo e, portanto, o seu desenvolvimento. O anticongelativo impede a adição de moléculas de
água ao cristal, pois se liga a superfície do mesmo e assim bloqueia o seu subseqüente
crescimento (DeVries, 1982).
Tolerância ao congelamento
Embora uma tolerância natural ao congelamento e a formação de gelo sejam
fundamentais para a sobrevivência de muitos insetos no inverno, somente alguns
vertebrados suportam a formação pronunciada de gelo. Os peixes parecem incapazes de
suportá-la e a maior parte dos vertebrados superiores não tolera o congelamento sob
condições naturais (Schmidt-Nielsen e Duke, 1996).
Exceções são encontradas entre alguns anfíbios que enfrentam o inverno no solo. A
rã, Hyla versicolor, apresenta um congelamento parcial e controlado, além disso, há toda
uma preparação para o inverno. Nesta estação esses animais apresentam 3% de glicerol
em seus fluidos corpóreos - possivelmente se o animal estivesse no verão ele seria muito
menos tolerante ao congelamento; mas, por outro lado, em rãs que não toleram o
congelamento, tais como a rã leopardo comum, Rana pipiens, o glicerol encontra-se
ausente. Essa rã suporta o inverno em um habitat aquático, ao passo que a rã no solo tem
contato com temperaturas que rapidamente declinam abaixo de zero. Outras rãs tolerantes

Metablismo
ao congelamento, como a rã madeira, Rana sylvatica, rapidamente elevam seus níveis

glicêmicos como resposta ao início da formação de gelo, e isso parece aumentar a
tolerância das mesmas ao congelamento (Storey e Storey, 1985).
Adaptações a ambientes quentes

Ectotérmicos expostos a temperaturas elevadas podem tentar regular a sua temperatura
corpórea abaixo da temperatura do ar, ou podem usar de adaptações bioquímicas de
tolerância para altas temperaturas corpóreas. A primeira estratégia da termorregulação só
pode ser conseguida através de resfriamento evaporativo, por conseguinte, não está
disponível para os animais aquáticos. A segunda estratégia é o aumento da temperatura
crítica máxima (TCM) (Withers, 1992).
Temperatura Crítica Máxima

O limite máximo térmico para as células vivas é o ponto de ebulição da água (100°C
à pressão atmosférica normal). Nenhum dos animais ou plantas é capaz de sobreviver a
temperaturas próximas do ponto de ebulição, mas algumas bactérias termofílicas podem se
desenvolver a temperaturas acima de 100°C (Brock, 1985)
Ao se discutir tolerância a temperaturas extremas, deve distinguir entre as quais um
organismo pode sobreviver e aquelas nas quais pode completar todo o seu ciclo de vida. A
temperatura letal, na qual ocorrem 50% de mortalidade, não pode ser determinada com
exatidão, pois o tempo de exposição é de grande importância. A maioria dos invertebrados e
vertebrados possui TCM acima de 30°C e alguns superam os 40°C, isto é geralmente
consistente com o grupo taxonômico, mas pode haver considerável variabilidade de acordo
com os habitats e com o ambiente termal (Schmidt-Nielsen e Duke, 1996).
Alguns fatores que contribuem para a morte por excesso de temperatura são os
seguintes (Schmidt-Nielsen e Duke, 1996):
- Desnaturação das proteínas, coagulação térmica;
- Inativação térmica das enzimas a um ritmo que supera o da formação;
- Suprimento inadequado de oxigênio;
-Efeitos de temperaturas diferentes (Q10) em reações metabólicas interdependentes;
- Efeitos da temperatura nas estruturas das membranas.
Resfriamento por evaporação

A evaporação dissipa a energia da água. Por conseguinte, a perda de água por
evaporação pode dissipar uma quantidade considerável de energia e baixar a temperatura

corpórea. O grau de resfriamento evaporativo depende da umidade relativa do ambiente e

da temperatura (Withers, 1992).
Alguns animais ectotérmicos possuem mecanismos para manter sua pele úmida
durante a evaporação. Por exemplo, alguns anfíbios espalham com as patas substâncias
lipídicas de glândulas dérmicas para prevenir a desidratação da pele, e um alto fluxo
sanguíneo cutâneo mantém o nível de hidratação da pele. Ectotérmicos terrestres tendem a
reduzir a evaporação cutânea para evitar a desidratação rápida. Por exemplo, alguns
animais terrestres relativamente impermeáveis são capazes de melhorar o resfriamento
evaporativo regulando a temperatura corpórea a altas temperaturas do ar para aumentar
significativamente sua perda de água cutânea ou respiratória (Withers, 1992).
O lagarto Dipsosaurus dissipa totalmente sua produção metabólica de energia pela
respiração ofegante a uma temperatura do ar (Ta) maior que 40ºC, embora não seja capaz
de reduzir significativamente a temperatura corpórea abaixo da Ta. O lagarto Sauromalus
pode reduzir a temperatura corpórea em aproximadamente 0,9ºC abaixo da temperatura do
ar e a temperatura do cérebro em cerca de 2,7ºC, através do ofego. As rãs Chiromantis e
Phyllomedusa têm significativamente menor perda de água por evaporação do que outros
sapos, conseqüentemente, a sua temperatura corpórea é semelhante à temperatura do ar.
Ambas Chiromantis e Phyllomedusa podem aumentar drasticamente a perda de água,
quando submetidas a altas temperaturas e precisamente regulam a temperatura corpórea
abaixo da temperatura do ar. A Chiromantis apresenta glândulas cutâneas mucosas para
elevar a perda de água da evaporação, enquanto a Phyllomedusa impermeabiliza a
epiderme com uma camada de cera (Withers, 1992).
Correlações ecológicas em ser ectotérmico

(1) São capazes de habitar áreas de grande estresse ambiental;
(2) Possuem tamanho corpóreo pequeno, o que faz com que tenham menor necessidade
energética;
(3) O corpo possui um formato (alongado, achatado dorso-ventralmente ou achatado
lateralmente) que aumenta a relação superfície/massa;
(4) A eficiência da conversão de energia assimilada em biomassa costuma ser mais
eficiente em ectotérmicos do que em endotérmicos;
(5) Permitem aos ectotérmicos acesso a nichos ecológicos não disponíveis aos
endotérmicos.
A influência da temperatura nos sistema locomotor dos vertebrados

ectotérmicos

Metablismo
O desempenho locomotor tem sido considerado um bom indicador quantitativo de

adequação biológica (fitness) em estudos sobre influência da temperatura no desempenho
comportamental de lagartos (Bennett 1980; Hertz e col., 1983; Huey e col., 1984) e
serpentes (Herckrotte,1967; Oliveira e Martins, 2002).
Além dos efeitos sobre a locomoção de vertebrados ectotérmicos, a temperatura
pode influenciar na magnitude e tipo das respostas comportamentais apresentadas.
Mudanças no comportamento defensivo, induzidas pela temperatura, têm sido reportadas
em vertebrados ectotérmicos tão diversos como lagartos (Rand, 1964; Hertz e col., 1982;
Crowley e Pietruszka, 1983), anfíbios anuros (Gomes e col., 2002), salamandras (Brodie Jr.
e col., 1991) e serpentes (Herckrotte, 1967; Arnold e Bennett, 1984; Schieffelin e Queiroz,
1991; Keogh e DeSerto, 1994; Mori e Burghardt, 2001).
Outros estudos com lagartos mostraram que algumas espécies mudam seus displays
defensivos com a temperatura ambiental (Hertz e col., 1982; Crowley e Pietruszka, 1983),
ou tornam-se mais agressivos e menos propensos á fuga quando a temperatura corpórea é
baixa (Hertz e col., 1982). Estudos com serpentes sugerem que também neste grupo há
modulação do comportamento defensivo induzido pela temperatura corpórea. Nos estudos
feitos por Arnold e Bennett (1984) foi observado que serpentes se tornam mais agressivas,
com maior exposição da cabeça e com maiores tentativas de bote, quando apresentam
baixas temperaturas corpóreas.
Desta forma podemos observar que nos animais ectotérmicos, a maioria das
atividades fisiológicas são depende da temperatura do corpo, sendo que a mesma está
diretamente relacionada com a temperatura do ambiente. Muitos processos bioquímicos e
fisiológicos são a base do padrão comportamental e são dependentes da temperatura
(Bartholomew, 1982). Sabemos que vários fatores (abióticos e bióticos) podem influenciar
nos padrões de comportamentos nos animais. Entre os fatores abióticos, a temperatura
pode influenciar diretamente o seu metabolismo e conseqüentemente na sua atividade
(Lillywhite 1987). De acordo com Shine e col. (2000), a temperatura do corpo pode ser uma
das mais importantes influências no comportamento anti-predador em vertebrados
ectotérmicos, pois a temperatura irá determinar a habilidade do animal para detectar, repelir
ou escapar do predador.


Metablismo
Termorregulação em endotérmicos:
febre e anapirexia. “Ana” o quê?
Carolina da Silveira Scarpellini

Lab. de Fisiologia, Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal
UNESP/Jaboticabal
[email protected]
Conforme visto no capítulo anterior, geralmente a Tc de ectotérmicos (peixes,

anfíbios, répteis e alguns invertebrados) varia conforme a temperatura ambiente. Entretanto,
a maioria das espécies endotérmicas – aves e mamíferos – praticamente não tem sua Tc
alterada diante de uma ampla faixa de flutuação da Ta (Bícego e col., 2007).
Os endotérmicos regulam a Tc por meio de mecanismos termorreguladores
autonômicos além daqueles comportamentais já apresentados também pelos ectotérmicos.
Os mecanismos autonômicos podem ser divididos em duas grandes categorias: os de
ganho e os de perda de energia térmica (Branco e col., 2005). Os mecanismos de ganho,
por sua vez, podem ser subdividos em: conservação e produção de energia térmica.
A conservação de energia térmica nos mamíferos ocorre principalmente por
vasoconstrição periférica e piloereção, enquanto que os mecanismos de produção de
energia térmica incluem aqueles resultantes do metabolismo basal, os dependentes e os
independentes de tremor da musculatura esquelética (Bícego e col., 2007). A produção de
energia térmica resultante do metabolismo basal constitui a conhecida “termogênese
obrigatória”, uma vez que todos os processos metabólicos de um organismo resultam na
liberação de energia sob a forma de calor. O tremor consiste em movimentos involuntários
da musculatura esquelética sem que haja alteração na posição do corpo. Assim, como não
há trabalho mecânico, praticamente toda a energia é liberada na forma de calor (Branco e
col., 2005). A produção de energia térmica independente de tremor pode ser originada no
músculo esquelético de aves (Bicudo e col., 2002) e no tecido adiposo marrom de
mamíferos placentários (humanos, ratos, morcegos,...). Este último, localizado próximo às
escápulas e aos rins, é de especial importância para os animais de pequeno tamanho,
recém-nascidos e aclimatados ao frio (Mackowiak, 1998; Branco e col., 2005).
Como já mencionado no capítulo 1, o tecido adiposo marrom é bastante
vascularizado e apresenta alta densidade de mitocôndrias. Neste tecido os ácidos graxos,
derivados da degradação dos triglicerídeos dos adipócitos, servem como substrato para
oxidação na mitocôndria. Nas mitocôndrias das células em geral, a oxidação dos substratos
resulta em um gradiente de prótons entre o espaço intermembrana e a matriz mitocondrial.
Os prótons retornam para a matriz mitocondrial através da enzima ATP sintase, resultando
na formação de ATP. Como já discutido anteriormente, a UCP1, também chamada

Termogenina, é encontrada na membrana interna das mitocôndrias e providencia uma via

alternativa para o fluxo de prótons independente da ATP sintase, logo grande parte da
energia da oxidação dos ácidos graxos é dissipada como energia térmica, contribuindo para
o aquecimento dos animais (Fig. 1).
Figura 1- Representação do fluxo de prótons entre o

espaço intermembrana e a matriz em uma mitocôndria.
A seta tracejada representa a via pela qual os íons
atravessam a membrana interna durante a síntese de
ATP. A seta contínua que atravessa a proteína
desacopladora (termogenina) indica o caminho dos
prótons durante a dissipação de energia térmica na
termôgenese sem tremor (Modificado de Nelson e col.,
2004).
Por fim, os mecanismos de perda de energia térmica são basicamente: vasodilatação

periférica, sudorese (único meio de perder energia quando a Ta é maior que a Tc e é
extremamente importante para humanos, equinos e bovinos) e ofegação (importante para
cães, gatos, ovelhas e aves). A ofegação se dá pela inspiração do ar atmosférico através
das vias aéreas e a expiração através da abertura oral. A exposição da língua ao ar
favorece a evaporação da água da saliva e contrui para a dissipação da energia térmica
corpórea (Randall, 1997).
Os mecanismos comportamentais estão relacionados ao contato com superfícies
mais quentes ou mais frias ou à adoção de posturas corporais que facilitem ou evitem a
troca de energia térmica entre o animal e o ambiente, como visto também para ectotérmicos.
Um comportamento muito comum em ratos é espalhar saliva sobre os pêlos quando
expostos a um ambiente quente, o que promove uma perda evaporativa de energia térmica
nesses animais (Bícego e col., 2007).
No sistema nervoso central (SNC) de vertebrados há uma região chave no controle
dos mecanismos termorreguladores, principalmente autonômicos, denominada área pré-

Metablismo
óptica do hipotálamo anterior (APO). A APO situa-se na transição entre o diencéfalo e o

telencéfalo (Fig. 2) e é considerada termossensível (pois detecta as alterações térmicas
locais), além de termointegradora, já que recebe informações térmicas de várias regiões do
organismo por meio dos termorreceptores cutâneos e/ou espinais. Ainda, a APO contém
neurônios sensíveis ao aumento de temperatura que, segundo o modelo proposto por
Hammel (1965) e modificado posteriormente por Boulant (2006), quando ativados pelos
termorreceptores cutâneos e espinais ou pela alteração local da temperatura, estimulam a
perda e inibem a produção de energia térmica levando à manutenção da Tc. Por outro lado,
quando esses neurônios são inibidos pela queda nas temperaturas ambiente e/ou local,
ocorre uma redução na perda e um aumento na produção de energia térmica com
consequente manutenção da Tc (Matsuda e col., 1992; Boulant, 1998; Bícego e col., 2007).
Figura 2- Esquema de um corte sagital do encéfalo humano mostrando a localização da APO.

(http://healthysleep.med.harvard.edu/_i/198.jpg).
Estados térmicos
Os endotérmicos podem apresentar cinco estados térmicos: eutermia, hipertermia,
hipotermia, febre e anapirexia (Gordon, 2001). Quando o animal apresenta uma Tc
considerada típica para sua espécie, diz-se que ele está em eutermia. Para a manutenção
da eutermia, o animal pode ou não empregar energia além daquela já consumida pelo
metabolismo basal. Quando a eutermia é mantida apenas por meio do metabolismo basal,
isto é, quando nem os mecanismos de produção nem os de perda de energia térmica são

ativados, diz-se que o animal está dentro da zona termoneutra (ZTN) ou zona de conforto
térmico da sua espécie. Dessa forma, ZTN é a faixa de Ta na qual não há gasto extra de
energia para que a eutermia seja mantida. Por exemplo, a Tc em eutermia para humanos é
aproximadamente 37ºC (lembrando que esse valor muda ao longo de 24 horas) e,
geralmente, a ZTN para humanos adultos nus, encontra-se entre 28 e 30ºC (Blatteis, 1998).
Assim, quando a Ta ultrapassa pouco o limite crítico inferior ou superior da ZTN, a energia
extra é empregada para manter a eutermia. Entretando, se a Ta aumenta ou reduz
extremamente, nem mesmo a ativação dos mecanismos de perda ou de produção de
energia térmica é suficiente para a manutenção da eutermia e a Tc acaba acompanhando
tais alterações, resultando nos estados de hiper ou hipotermia, respectivamente, que são
consequências de falhas do sistema termorregulador em manter a eutermia (Fig. 3).
Figura 3- Esquema de três estados térmicos: eutermia, hipotermia e hipertermia. A linha tracejada
·
representa as ·variações de VO2 em relação à Ta. A linha contínua representa as variações da Tc em
relação à Ta. VO2, consumo de O2; TCI, temperatura crítica inferior; TCS, temperatura crítica superior;
Tc: temperatura corporal.
Na hipertermia moderada, a vasodilatação não compromete a oferta de sangue para

outros tecidos porque há uma redistribuição do débito cardíaco. Essa redistribuição se dá
pela redução da perfusão para os tecidos não vitais ou para aqueles que recebem mais
sangue que o necessário considerando o metabolismo local. Porém, na hipertermia severa,
a vasodilatação pode ser tão intensa que conflita com os mecanismos de regulação da
pressão arterial causando o chamado heat stroke, ou choque térmico. A hipertermia severa
resulta em edema nos membros inferiores, tontura, exaustão, dor de cabeça, vômito e
diarréia (Branco e col., 2005). Já a hipotermia severa pode causar redução na velocidade de

Metablismo
condução dos impulsos nervosos culminando em comprometimento da coordenação

motora, amnésia, alucinação, decréscimo da frequência respiratória, dentre outros, podendo
levar o indivíduo ao coma.
Os outros estados térmicos (febre e anapirexia) referem-se a alterações reguladas
da Tc. Na febre, mecanismos de ganho de energia térmica são ativados induzindo o
aumento da Tc (Kluger, 1991) e, durante a anapirexia, mecanismos de perda de energia
térmica são ativados reduzindo a Tc (Gordon, 2001; Steiner e Branco, 2002). Note que os
mecanismos ativados durante a febre são opostos àqueles ativados durante a hipertermia.
O mesmo vale para os mecanismos ativados durante a anapirexia e a hipotermia.
Nesse contexto, há situações em que é mais vantajoso para o organismo um aumento ou
uma queda regulada da Tc do que a manutenção da eutermia. Veremos a seguir quais são
essas situações e porque, nestes casos, a febre ou a anapirexia são mais benéficas ao
organismo que a eutermia.
Febre
A febre, como mencionado anteriormente, é um aumento regulado da Tc, pois é
controlada por sinais encefálicos que ativam os mecanismos de ganho de energia térmica,
diferentemente do que ocorre na hipertermia que também é um aumento da Tc, porém
devido a falhas no sistema termorregulador. Para o desenvolvimento da febre em um
ambiente com Ta baixa, é necessária intensa produção de energia térmica além de redução
na sua perda, enquanto em um ambiente com Ta alta, apenas uma diminuição da perda de
energia térmica pode ser suficiente para elevar a Tc aos níveis febris. A hipertermia, por
outro lado, é mais dependente da Ta: em uma Ta baixa a hipertermia dificilmente ocorrerá.
Deve ser lembrado que valores de Tc muito altos e por muito tempo não são
benéficos, pois podem causar desidratação, delírio, lesões no encéfalo, convulsões, dentre
outros prejuízos. O aumento na produção de energia térmica, em decorrência do
desenvolvimento da febre, implica no aumento da taxa metabólica e isso pode representar
um perigo extra para indivíduos com substratos metabólicos limitados como recém-
nascidos, idosos e subnutridos. O limiar da Tc a partir do qual a febre é considerada
perigosa para a sobrevivência do indivíduo ainda é algo muito discutível entre os
pesquisadores: alguns consideram 39ºC, enquanto outros afirmam que febres de até 41ºC
não são perigosas para humanos (Branco e col., 2005).
A resposta febril é uma reação complexa, geralmente resultante do contato com
agentes inflamatórios ou infecciosos, chamados de pirogênios exógenos e tem sido descrita
em todos os grupos de vertebrados: mamíferos (Kluger, 1991), aves (D'Alecy e Kluger,1975;
Macari e col., 1993; Maloney e Gray, 1998), répteis (Hallman e col., 1990; Don e col., 1994),
anfíbios (Kluger, 1977; Bicego-Nahas e col., 2000) e peixes (Reynolds e col., 1976), além de

alguns invertebrados (Kluger, 1991). Como em ectotérmicos a Tc é muito semelhante à Ta e

a termorregulação se dá essencialmente por mecanismos comportamentais, como já
abordado, uma forma de inferir a Tc dos animais é mensurar a Ta selecionada pelos
animais. Dessa forma, quando os ectotérmicos infectados são colocados em um gradiente
térmico que possibilite a “escolha” da Ta mais confortável, eles direcionam-se e
permanecem no lado mais quente do gradiente, desenvolvendo assim a chamada febre
comportamental (Fig. 4).
Figura 4- Esquema de um gradiente térmico. O animal é colocado no centro do aparato e pode

direcionar-se para o local com temperatura mais confortável. No caso da febre, o animal
desloca-se para o lado com Ta mais alta.
A ampla ocorrência da febre sugere que ela surgiu há muito tempo na escala
filogenética e, que por ser conservada ao longo de tantos anos, deve conferir benefícios aos
organismos (Kluger, 1991; Kluger e col., 1998). De fato, muitos estudos apontam o aumento
da atividade do sistema imune (Fig. 5) e a queda na sobrevida dos agentes patogênicos
como alguns dos benefícios do aumento regulado da Tc (Kluger, 1991; Marnila e col., 1995;
Kluger e col., 1998).

Metablismo
Figura 5- Efeito da Tc sobre a fagocitose (Modificado de Wenisch e col., 1996).
Após o contato do organismo com os pirogênios exógenos (geralmente

microorganismos invasores), estes são fagocitados por células do sistema imune. Os
fagócitos produzem citocinas (IL-1ß, IL-6, TNF-α, IFN-α) que atuam como pirogênios
endógenos e induzem a síntese e a liberação de prostaglandina (PG), principalmente a
PGE2 que atua na APO ativando os mecanismos de ganho e inibindo os de perda de
energia térmica (Kluger, 1991; Matsuda e col., 1992; Blatteis e Sehic, 1997a,b). Em
contrapartida, estudos demonstraram que em ratos há alguns pirogênios endógenos (MIP-1,
IL-6 e endotelina-1) que desencadeiam febre independente da liberação de PGE2
(Zampronio e col., 1994; Fabricio e col., 1998).
Acredita-se que a febre seja gerada por um balanço entre a ação dos pirogênios e
dos antipiréticos. Os antipiréticos são definidos como aqueles agentes que reduzem a
resposta febril, mas não alteram a Tc no estado de eutermia (Branco e col., 2005).
Por fim, os benefícios conferidos pela febre podem ser evidenciados (1) pelo
aumento da sobrevida de animais infectados e febris (mamíferos - inclusive humanos -,
lagartos, peixes e grilos) em comparação àqueles infectados não febris e (2) pelo aumento
da mortalidade de animais (lagartos e coelhos) infectados quando tratados com fármacos
antipiréticos (Branco e col., 2005).
Anapirexia
Anapirexia, segundo o “Glossário de termos para Fisiologia Térmica”, é uma
condição patológica na qual há um decréscimo regulado da Tc devido à ativação de
mecanismos de perda de energia térmica, diferentemente da hipotermia que ativa
mecanismos de ganho de energia. Essa nomenclatura (anapirexia), apesar de bem definida,

ainda gera alguns conflitos quanto ao seu uso (Romanovsky 2004), mas particularmente
neste capítulo estas divergências não serão levadas em conta.
O oxigênio (O2) é crucial para o metabolismo oxidativo e, consequentemente, para a
produção de energia na forma de ATP. Sendo assim, é evidente que um aporte adequado
de O2 é essencial para a sobrevivência dos animais e que um déficit de O2, mesmo que
localizado e passageiro, pode causar prejuízos irreversíveis (López-Barneo e col., 2001). No
entanto, alguns animais enfrentam condições de hipóxia (baixa pressão parcial de O2) ao
longo da vida, seja por exposição ambiental (tocas, altas atitudes, etc) ou por insuficiências
cardíacas, respiratórias e/ou metabólicas, traumatismos cranianos, acidentes vasculares
encefálicos, dentre outros (Bao e col., 1997; Reissmann e col., 2000; Gordon, 2001).
Então, como os animais sobrevivem a tais situações? Uma das respostas
adaptativas mais conhecidas parece ser a queda regulada da Tc, ou anapirexia, que é
observada ao longo de toda a escala filogenética dos vertebrados e em organismos
unicelulares, como é o caso do Paramecium caudatum (Steiner e Branco, 2002). Durante a
anapirexia, ocorre atenuação da hiperventilação e do débito cardíaco causados pela hipóxia
e inibição da termogênese, além de aumento na afinidade da hemoglobina pelo O2, o que
facilita a captação desse gás na superfície respiratória (Mortola e Gautier, 1995; Wood,
1995; Gautier, 1996; Barros e col., 2001; Steiner e Branco, 2002). Todas essas respostas
associadas à anapirexia conferem benefícios ao animal hipóxico, pois diminuem respostas
altamente custosas, contribuindo para uma depressão no metabolismo e facilitando a
captação de O2 nos pulmões. Dessa forma, um aumento na sobrevida de ratos,
camundongos, lagartos e até mesmo no Paramecium é observado quando tais organismos
são expostos à hipóxia e têm suas Tcs reduzidas (Artru e Michenfelder, 1981; Hicks e
Wood, 1985; Malvin e Wood, 1992; Wood, 1995; Wood e Stabenau, 1998). De modo
semelhante ao que ocorre na febre comportamental, a queda da Tc pode ser evidenciada
quando ectotérmicos hipóxicos são colocados em um gradiente de temperatura e
selecionam regiões mais frias do que selecionariam em situações de normóxia (Hicks e
Wood, 1985; Gordon e Fogelson, 1991; Malvin e Wood, 1992).
Com todos esses benefícios associados à queda da Tc, seria de se esperar que
reduzir a Tc de um paciente em situações nas quais o O2 constitui um fator limitante, como
em casos de hemorragia, anemia, isquemia, envenenamento, cirurgias cardíacas e traumas
cranianos, contribuiria para minimizar os efeitos da hipóxia, facilitando assim a recuperação
do indivíduo. De fato, isso vem sendo aplicado na clínica (Schwab e col., 1997; Holzer e col.,
1997, Gordon, 2001; Kline e col., 2004), entretanto, a forma usada para diminuir a Tc do
paciente é a hipotermia forçada que também proporciona benefícios, mas apresenta uma
desvantagem em relação à anapireixa, que é o aumento da resposta metabólica do paciente

Metablismo
por meio da ativação dos mecanismos de ganho de energia térmica, os quais são altamente
custosos e que não é desejável numa situação hipóxica (Gordon, 2001).
Apesar da vasta observação da anapirexia hipóxica nos vertebrados e no
Paramecium caudatum e da sua importância clínica, os mecanismos envolvidos nesta
resposta ainda são pouco conhecidos e apenas nas últimas décadas alguns de seus
mediadores/modularores foram descritos. Dentre estes estão a dopamina, a serotonina, o
óxido nítrico e os receptores opióides kappa atuando especificamente na APO induzindo a
queda da Tc (Steiner e col., 2002a; Gargaglioni e col., 2005; Scarpellini e col., 2009). Por
outro lado, os receptores mi e delta, também na APO, estão envolvidos no retorno da Tc ao
estado eutérmico após o término da hipóxia (Scarpellini e col., 2009). Ainda, a adenosina e o
monóxido de carbono (Barros e Branco, 2000; Paro e col., 2001) parecem atuar em alguma
outra região no SNC para induzir e inibir, respectivamente, a anapirexia. Como pode ser
notado, a anapirexia parece ser resultado de um balanço entre agentes indutores e
inibidores da queda da Tc, assim como acontece na febre.
Steiner e col. (2002a) propuseram um modelo para a indução da anapirexia
dependente dos sistemas intracelulares de segundos mensageiros, GMP cíclico (GMPc) e
AMP cíclico (AMPc). O modelo sugere que os agentes indutores da anapirexia (óxido
nítrico, serotonina, dopamina e talvez os agonistas endógenos dos receptores opióides
kappa) atuem nos neurônios sensíveis ao aumento de temperatura da APO, aumentando os
níveis intracelulares de GMPc e AMPc, induzindo uma menor produção de energia térmica e
uma maior perda desta, levando à queda da Tc. É interessante ressaltar que a redução dos
níveis de GMPc e AMPc, na APO, ou seja, o efeito contrário ao que acontece na indução da
anapirexia, ocorre no desenvolvimento da febre (Steiner e col., 2002b).
A hipóxia é o estímulo anapirético mais estudado, mas uma queda regulada da
temperatura corporal também é observada em animais que apresentam o fenômeno de
depressão metabólica durante a dormência sazonal. Entretanto, nestes animais a queda da
Tc não é induzida por uma diminuição da disponibilidade de oxigênio ambiental, mas parece
ocorrer como parte de uma inibição coordenada de todas as variáveis fisiológicas
contribuindo assim, para a economia energética e para o aumento da sobrevivência dos
animais frente a condições ambientais desfavoráveis (Carey e col., 2003).
Em suma, é importante ressaltar que os animais podem apresentar Tcs diferentes
(febre e anapirexia) do estado de eutermia sem que isso represente um descontrole ou uma
falha nos sistemas controladores. E, geralmente tais alterações na Tc conferem benefícios
aos animais, contribuindo para um aumento da sua sobrevivência durante determinadas
situações, tais como infecção e hipóxia. Deve ser lembrado, evidentemente, que essas
alterações, para serem benéficas, devem ocorrer dentro de limites em que o animal não
sofra com extremos das duas condições.


Metablismo
Metabolismo energético em câmera lenta:

mecanismos de depressão metabólica sazonal
Lilian Cristina da Silveira

Laboratório de Metabolismo e Energética
[email protected]
Diversos animais desenvolveram a habilidade de ‘prever’ uma fase em que as

condições ambientais tornam-se desfavoráveis, ou ótimas, para determinadas funções, por
meio de um sistema temporizador interno e da percepção de sinais ambientais cíclicos, tais
como fotoperíodo, temperatura e umidade. Animais que apresentam dormência sazonal
exibem uma série de ajustes comportamentais e metabólicos meses antes da fase
desfavorável, que possibilitam, dentre outros eventos, o armazenamento de substratos
energéticos que serão utilizados para a produção de energia durante os meses de
dormência, como mencionado acima. A dormência sazonal é caracterizada pela presença
de dois componentes principais: o jejum e a depressão metabólica.
A habilidade de deprimir a taxa metabólica de repouso é de ampla ocorrência nos
animais e pode estar associada à dormência sazonal, como nos casos de estivação e
hibernação, ou dissociada da dormência sazonal, como no torpor diário, sono e anidrobiose.
A depressão metabólica é, portanto, de ampla ocorrência nos animais e considerada um dos
exemplos de flexibilidade fenotípica mais fascinantes. A estivação possibilita que muitos
animais, incluindo anuros, peixes e caramujos, sobrevivam à escassez de água. Já a
hibernação geralmente está associada aos efeitos combinados de temperaturas reduzidas e
escassez de alimento. Beija-flores e alguns pequenos mamíferos apresentam torpor diário,
um estado de hipometabolismo semelhante à hibernação, mas com apenas algumas horas
de duração, que está associado à fase do dia na qual a disponibilidade de alimento é
reduzida. Tartarugas sobrevivem longos períodos em anóxia, sem acesso ao ar atmosférico,
embaixo da camada de gelo que se forma nos lagos durante o inverno. Seja em condições
anóxicas ou na presença de oxigênio, a depressão metabólica estende o tempo de
sobrevivência dos organismos por reduzir a demanda de energia e a velocidade de
utilização das reservas de substratos. Na maioria dos casos, a taxa metabólica é reduzida
para 5–40% da taxa metabólica de repouso, mas alguns organismos como esporos e cistos
sofrem depressão metabólica ainda maior e, em muitos casos, a taxa metabólica
simplesmente não pode ser detectada, uma condição denominada criptobiose (Storey e
Storey, 2004; Carey e col., 2003).
Ciclo Anual
Antecipação
Um dos aspectos mais característicos da dormência sazonal é a antecipação do
fenômeno. Meses antes do estresse ambiental, os animais iniciam uma série de ajustes
comportamentais e fisiológicos que possibilitam, dentre outras respostas, o armazenamento
de substratos, seja na forma de alimento em suas tocas ou tornando-se obesos, ou ambos.
Quando a oferta de O2 no ambiente não é limitante, como na maioria dos casos de
hibernação e estivação, a energia é estocada principalmente na forma de lipídios, uma
forma de estocagem vantajosa do ponto de vista energético uma vez que a oxidação de
ácidos graxos fornece mais energia por grama de substrato que carboidratos. Esquilos, por
exemplo, dobram sua massa corpórea e triplicam a massa adiposa durante a fase de
preparação para a dormência (Dark, 2005).
Os eventos de deposição/mobilização de lipídios, que resultam em
aumento/diminuição da massa adiposa, da taxa metabólica basal e da ingestão de alimentos
estão ligeiramente dessincronizados. A diminuição da ingestão alimentar ocorre bem antes
que a massa corpórea atinja seu máximo. E uma diminuição da TMB já no meio do verão,
antes que a ingestão de alimentos diminua, possibilita um aumento da massa corpórea dado
pelo acúmulo de gordura. A massa corpórea máxima é atingida no final do verão ou início do
outono, quando a secreção de insulina (hormônio lipogênico) também é máxima e os níveis
de absorção de glicose são mínimos, indicando uma possível insensibilidade à insulina nos
adipócitos (Dark, 2005). Tais fenômenos são bem caracterizados em mamíferos, mas ciclos
semelhantes de deposição/mobilização de lipídios ocorrem em ectotérmicos (Souza e col.,
2004).
As alterações da adiposidade em animais hibernantes não são simplesmente
resultado de aumento da ingestão alimentar e/ou diminuição da taxa metabólica, mas
principalmente de uma mudança programada do nível ideal de adiposidade (Dark, 2005).
Lesões cerebrais que produzem obesidade em ratos de laboratório também aumentam a
massa corpórea em hibernantes, mas o ciclo anual de deposição de gordura persiste
(Barnes e Mrosovsky, 1974), fornecendo um indício da robustez desta resposta sazonal.
Desta maneira, estes ciclos parecem ser rigidamente controlados, provavelmente por um
mecanismo central, que deve utilizar-se de um sinal proveniente do tecido adiposo branco
(TAB) que informa a quantidade total de reservas e, desta forma, possibilita o ajuste da
adiposidade do animal ao momento de seu ciclo anual de atividades.
Tem sido proposto que este sinal é dado principalmente pela leptina, um hormônio
peptídico amplamente conhecido por sua atuação no controle da adiposidade em mamíferos
não hibernantes (Ahima e Flier, 2000; Dark, 2005). A leptina é produzida principalmente
pelo TAB e sua concentração plasmática é normalmente correlacionada ao nível de

Metablismo
adiposidade do animal. Este peptídeo de 16kDa age no hipotálamo diminuindo a ingestão

alimentar e aumentando a lipólise (Ahima e Flier, 2000). Entretanto, os poucos estudos que
investigam a ação da leptina em hibernantes tem sido contraditórios e sugerem a existência
de diferentes padrões de secreção ao longo do ciclo sazonal.
No morcego Myotis lucifugus, durante a pré-hibernação, a relação usual entre o nível
de adiposidade e a secreção de leptina não é observada. Os níveis plasmáticos de leptina
elevam-se antes do aumento da massa adiposa e diminuem à medida que a massa adiposa
alcança seu máximo. Neste animal, a secreção de leptina, notoriamente um hormônio cujo
efeito inclui aumento do gasto energético, parece estar dissociada da adiposidade durante a
hibernação, permitindo a diminuição da taxa metabólica durante a fase de armazenamento e
dormência (Kronfeld-schor e col., 2000). Já em marmotas Marmota flaviventris, as
concentrações plasmáticas de leptina são positivamente relacionadas com o aumento da
massa adiposa e tamanho do adipócito. Neste caso, a fim de se esquivarem do efeito
anorexigênico da leptina e alcançarem a adiposidade necessária para sustentar a demanda
de energia na dormência, estes animais parecem ter desenvolvido um estado de resistência
à leptina (Florant e col., 2004).
Recentemente, os efeitos e a estrutura da leptina, antes estudados somente em
mamíferos, têm sido investigados em outros grupos. Vários trabalhos fornecem evidências
da existência de um peptídeo com função e estrutura semelhantes às da leptina em
ectotérmicos (Johnson e col., 2000; Niewiarowski e col., 2000; Paolucci e col., 2001;
Spanovich e col., 2006). A administração diária de leptina durante 15 dias no lagarto
Sceloporus undulatus resulta em efeitos similares aos observados em ratos, ou seja,
elevação da temperatura corpórea e diminuição da ingestão de alimentos, embora a massa
corpórea não tenha sofrido alterações significativas quando comparados ao grupo controle
(Niewiarowski e col., 2000). Neste mesmo animal, que apresenta dormência sazonal, os
níveis circulantes de leptina são menores no outono, quando a quantidade de reservas
lipídicas é máxima (Spanovich e col., 2006), assim como foi observado no morcego Myotis
lucifugus (Kronfeld-schor e col., 2000).
Dormência
Quando o nível de adiposidade adequado é atingido e o animal está pronto para
iniciar a fase de hibernação ele progressivamente diminui a atividade e procura seu abrigo
onde permanecerá até a primavera. A entrada em hibernação é caracterizada por uma
rápida e acentuada diminuição da taxa metabólica, das frequências cardíaca e respiratória,
acompanhadas por uma diminuição da temperatura corpórea. Em endotérmicos, a
temperatura corpórea cai a valores tão baixos quanto 0ºC e os animais ingressam em um
estado de hipotermia voluntária, enquanto que não hibernantes expostos a temperaturas

entre 10 e 25°C tipicamente sofrem falência cardíaca (Driedzic e Gesser, 1994; Ruf e
Arnold, 200).
O efeito letal da hipotermia nas células de mamíferos não hibernantes deve-se, em
grande parte, ao efeito assimétrico da temperatura nas taxas das reações, que resulta em
um desacoplamento entre a produção e o consumo de energia. Dado que a manutenção do
gradiente de íons através das membranas é um processo dependente de energia, que supre
a atividade de enzimas como a Na+,K+-ATPase, um maior consumo em relação à produção
de ATP resulta em despolarização de membranas e em uma cascata de eventos que
culminam na morte celular. Curiosamente, hibernantes durante a fase ativa são tão
suscetíveis a estes efeitos quanto não hibernantes, o que sugere que os mecanismos
celulares de resposta ao estresse são semelhantes em hibernantes e não hibernantes e,
portanto, reforça a importância dos ajustes que ocorrem antes da fase de hibernação
(Storey, 2004). Esta semelhança, somada à constatação de que a habilidade de hibernar é
amplamente observada nos mamíferos e pode ser considerada uma característica ancestral
e uma propriedade básica da sua fisiologia, sugerem que o fenótipo hibernante não seria
resultado da expressão de genes exclusivos de hibernantes, mas sim da expressão
diferenciada de genes comuns a todos os mamíferos (Heldmaier e col., 2004; Storey, 2004).
Com base neste pressuposto, bastaria encontrar um mecanismo para a ativação da
expressão deste conjunto de genes para que a indução do hipometabolismo em não
hibernantes se tornasse possível (Quadro 1).
Durante a depressão metabólica, alguns processos fisiológicos diminuem, enquanto
outros são totalmente interrompidos. Durante toda fase de dormência o coração deve
continuar a bombear sangue, embora, muitas vezes, a uma temperatura corpórea muito
menor e contra uma resistência periférica maior do que durante a fase ativa do animal
(Fahlman e col., 2000). Pequenos mamíferos em torpor reduzem a freqüência cardíaca de
200-300 para 3-5 batimentos por minuto. Diferentemente da função cardíaca, o fluxo
sanguíneo renal, a taxa de filtração glomerular e a formação de urina são muito reduzidos
ou cessam completamente durante o hipometabolismo. Nos mamíferos, estes processos
são retomados durante os despertares periódicos, de maneira que poucas alterações são
observadas na osmolaridade e na concentração de eletrólitos no plasma (Carey e col.,
2003). Outros animais encontraram soluções diferentes para lidar com resíduos: formação
de produtos finais voláteis, estocagem de lactato nas carapaças de tartarugas e acúmulo da
uréia resultante do catabolismo de proteínas a fim de aumentar a resistência à dissecação
durante a estivação (Storey e Storey, 2007).

Metablismo
Quadro 1: Da ficção científica para a

clínica médica: indução de
depressão metabólica
Mark B. Roth
Fred Hutchinson Cancer
Research Center, Seattle
A indução de um estado hipometabólico em humanos já foi considerada em

diversas obras de ficção científica e, de fato, parece que a ciência está cada vez mais
próxima de tornar esta idéia real, o que traria imensos benefícios para a medicina em uma
variedade de condições. Os mecanismos moleculares que preservam a viabilidade dos
órgãos em hibernantes a temperaturas próximas a 0º e em condições de restrição
energética, são de grande interesse para pesquisadores que buscam melhorar e estender
o tempo de preservação de órgãos destinados a transplantes. Esta idéia ganhou novo
fôlego em 2005, quando o pesquisador Mark Roth divulgou que camundongos expostos a
gás sulfídrico (H2S), um inibidor específico e reversível da enzima mitocondrial citocromo
c oxidase (CCO), tiveram seu consumo de oxigênio diminuído em 90% seguido por uma
queda da temperatura corpórea para 2 ºC acima da temperatura ambiente (~15 ºC). Após
6 h de exposição ao H2S, estes animais retomaram sua taxa metabólica e temperatura
normais quando colocados novamente em contato com o ambiente (Blackstone e col.,
2005). Provavelmente, ajustes paralelos nos processos consumidores de energia, assim
como ocorre nas células dos hibernantes, acompanharam a inibição do metabolismo
mitocondrial nestes camundongos, preservando a viabilidade celular.
Dado o elevado custo dos processos de digestão, absorção e assimilação de

alimentos (ação dinâmica específica), a interrupção da alimentação também contribui de
maneira significativa para a economia energética do animal. O trato gastrointestinal
apresenta um intenso metabolismo, atingindo cerca de 20-30% do metabolismo basal em
mamíferos (Tracy e Diamond, 2005) e o jejum prolongado envolve alterações na estrutura e
função deste órgão. Na depressão metabólica sazonal, observa-se uma pronunciada atrofia
do intestino, embora a capacidade funcional do órgão seja preservada, garantindo que o
animal esteja apto a digerir e absorver nutrientes após o despertar (Carey e col., 2003). Na
dormência sazonal de lagartos teiú jovens, a depressão metabólica é acompanhada por
uma redução de 37% da massa do intestino médio, seguida por um aumento de três vezes
da massa total do órgão após o despertar e a retomada da alimentação (Nascimento e col.,
2007).
Em hibernantes clássicos como os esquilos, a depressão metabólica é alcançada
através do efeito termodinâmico das baixas temperaturas no inverno combinado à inibição
ativa do metabolismo através de diversos mecanismos de regulação (Carey e col., 2003).
Por outro lado, alguns endotérmicos e ectotérmicos, apresentam depressão metabólica em
temperaturas relativamente altas (Fig. 1). Lêmures de Madagascar podem hibernar a
temperaturas corpóreas acima de 20ºC e o lagarto teiú hiberna a uma temperatura corpórea

de cerca de 17ºC, apresentando uma redução de cerca de 80% do metabolismo. Nestes

casos, há uma maior contribuição de mecanismos intrínsecos de inibição metabólica e um
efeito menos significativo da temperatura (Heldmaier e col., 2004; Souza e col., 2004).
a b
Figura 1- a) Lagarto teiú Tupinambis merianae; b) Primata lêmure Microcebus murinus.
Hibernação interrompida por episódios de despertar e hibernação contínua

Em pequenos mamíferos, a hibernação consiste de fases de torpor que duram de
uma a três semanas, interrompidas por despertares periódicos que, geralmente, duram
menos de 24 horas, nos quais os animais acordam, elevam a temperatura corpórea para
aproximadamente 37ºC e restabelecem todas as funções fisiológicas (Fig. 2). Este padrão
de hibernação interrompida por episódios de despertar consome substancialmente mais
energia quando comparado à hibernação contínua, apresentada por outros animais, por
exemplo, alguns anfíbios e répteis. Na marmota, 72% da energia consumida durante a
hibernação é gasta nos despertares (17%) e durante os períodos de eutermia (57%)
(Heldmaier e col., 2004). A importância biológica dos episódios de despertar ainda não é
conhecida, mas tem sido sugerido que sejam importantes no reconhecimento de patógenos
e iniciação de resposta imune além de reposição de RNAm e proteínas degradados durante
o hipometabolismo (Prendergast e col., 2002; Knight e col., 2000).

Metablismo
Figura 2– Registro contínuo da taxa metabólica (TM) e da temperatura corpórea (Tc) na marmota
(Marmota marmota), evidenciando o hipometabolismo e hipotermia durante a entrada em hibernação
(1), a manutenção do hipometabolismo durante a hibernação (2), o rápido reaquecimento durante o
despertar (3), e a eutermia (4). A ventilação é reduzida em uníssono com a queda da taxa metabólica
e assume um padrão episódico, com ventilações seguidas por períodos de apnéia que podem durar
de alguns minutos a uma hora ou mais (à direita). Ta representa temperatura ambiente. (Modificado
de Heldmaier e col., 2004).
Despertar
O armazenamento de lipídios é crítico não somente para a sobrevivência do animal
durante a fase de dormência, mas também para que o despertar seja bem sucedido. Na
primavera, quando os animais despertam da fase de dormência, a taxa metabólica eleva-se
antes que a ingestão de alimentos seja restabelecida e ocorre uma diminuição da massa
corpórea mesmo após o início da alimentação (Dark, 2005). Em alguns mamíferos
hibernantes, a elevação da temperatura corpórea envolve o aumento da produção de calor
no tecido adiposo marrom através da oxidação de ácidos graxos e ciclagem fútil de elétrons
através de proteínas desacopladoras (UCPs) da membrana mitocondrial interna, como visto
em capítulos anteriores. Neste momento, as reservas remanescentes de carboidratos são
utilizadas e algum grau de oxidação de proteínas faz-se necessário, provendo aminoácidos
para a síntese de glicose, essencial ao aumento de atividade metabólica dos tecidos
dependentes de glicose (Carey e col., 2003; Souza e col., 2004).
Mecanismos de depressão metabólica: inibição dos processos que produzem

e consomem energia nas células
Fosforilação reversível
Os mecanismos moleculares de depressão metabólica devem ser reversíveis,
possibilitando o rápido restabelecimento das funções metabólicas no despertar. Um
mecanismo bastante conservado filogeneticamente e que parece ser responsável por
grande parte dos ajustes na depressão metabólica é a fosforilação reversível, que consiste
na ligação de grupos fosfato a resíduos de aminoácidos específicos de uma proteína,
catalisada por proteínas quinases, e na remoção desses grupos, catalisada por proteínas
fosfatases. Quando o aminoácido modificado está localizado em uma região da proteína que
é crítica para a sua estrutura tridimensional, ocorrem efeitos marcantes que modificam
algumas de suas propriedades ou a sua interação com outras proteínas ou estruturas sub-
celulares. Em diversas condições fisiológicas, várias enzimas glicolíticas, receptores e
transportadores de membrana, proteínas responsáveis pela transcrição gênica, síntese e

degradação de proteínas e regulação do ciclo celular são reguladas por fosforilação

reversível (Storey, 2004).
O primeiro relato do papel da fosforilação reversível nos ajustes ao hipometabolismo
veio de estudos com moluscos marinhos, nos quais a fosforilação da piruvato quinase
causou diminuição da atividade desta enzima e do fluxo pela via glicolítica (Storey e Storey,
1990). Na depressão metabólica há uma inibição coordenada de processos que produzem e
consomem energia nas células, além de ajustes específicos, como mudanças no tipo de
substrato energético preferencial e de catabólitos acumulados. Em condições anóxicas,
carboidratos são o principal substrato para a produção de ATP, já quando a oferta de O2 no
ambiente não é limitante, como na maioria dos casos de hibernação e estivação, há uma
tendência geral à inibição do catabolismo de carboidratos e maior contribuição dos ácidos
graxos como combustível energético (Carey e col., 2003). Tais ajustes nas vias catabólicas
são alcançados, principalmente, pela regulação de enzimas reguladoras de taxa de reação.
De uma maneira geral, o catabolismo de carboidratos é regulado no nível das
enzimas glicogênio fosforilase, hexoquinase, fosfofrutoquinase-I e II e piruvato quinase, por
regulação alostérica e/ou fosforilação reversível. Observa-se, entretanto, que a regulação
destas enzimas durante o hipometabolismo ocorre de maneira mais sistemática durante a
depressão metabólica anaeróbia. Nos casos de depressão metabólica aeróbia, tem sido
demonstrado que o ponto de regulação mais importante é a piruvato-desidrogenase (PDH),
que exibe uma forte inibição em vários órgãos de todos os hibernantes já estudados. Este
complexo enzimático, que atua convertendo o piruvato proveniente da glicólise a acetil-CoA
e regula desta forma a entrada dos carboidratos na via de fosforilação oxidativa, é
convertido em uma forma menos ativa quando sofre uma fosforilação catalisada pela enzima
piruvato desidrogenase quinase (PDK) (Storey, 2004).
Expressão Gênica
A mudança do tipo de substrato preferencial é regulada, em parte, no nível da
expressão gênica. Para ilustrar como esta regulação acontece, vejamos o que acontece no
coração de esquilos terrícolas durante a hibernação (Fig.3). Durante a fase de dormência,
há um aumento da expressão e síntese da isoforma 4 da PDK (PDK4), o que resulta em
uma diminuição da porcentagem ativa da PDH e, consequentemente, da formação de acetil-
CoA a partir de piruvato. Estes ajustes favorecem: a diminuição do uso de carboidratos,
preservados para utilização pelo cérebro, um tecido dependente de glicose; uma ênfase na
utilização de ácidos graxos e a diminuição da taxa metabólica do animal. Curiosamente,
ratos submetidos a jejum apresentam maior expressão da PDK4 em diversos tecidos,
sugerindo que a resposta observada em animais hibernantes pode ser padrão em
mamíferos, levando à supressão da oxidação de carboidratos em uma condição onde a

Metablismo
oxidação de lipídios deve ser priorizada (Wu e col., 2000).

Confirmando esta idéia, alterações na expressão de enzimas envolvidas na
oxidação e síntese de ácidos graxos também foram observadas durante o hipometabolismo.
A diminuição da expressão da enzima acetil-CoA carboxilase, que catalisa a formação de
malonil-CoA a partir de acetil-CoA, primeiro passo da síntese de ácidos graxos, inibe a
síntese e favorece a oxidação de ácidos graxos ao diminuir a formação de malonil-CoA, um
inibidor da enzima responsável pelo transporte de ácidos graxos para dentro da mitocôndria
(carnitina palmitoil transferase – CPT). Paralelamente, há um aumento da expressão da
lipase pancreática, uma enzima envolvida na hidrólise de triglicerídeos e geralmente
expressa no pâncreas, no coração do hibernante. A quantidade de lipase pancreática, assim
como da lípase hormônio sensível, também se encontra aumentada no tecido adiposo
branco dos esquilos durante a hibernação o que favorece uma maior liberação de ácidos
graxos no plasma (Van Breukelen e Martin, 2002).
A regulação da atividade de enzimas mitocondriais também desempenha importante
papel na depressão das taxas do metabolismo oxidativo (Storey e Storey, 2004). Assumindo
que o equilíbrio redox e o balanço entre as concentrações de adenilatos (carga energética)
não se alteram durante a transição do estado ativo para o estado dormente, a inibição do
fluxo de substratos através do Ciclo de Krebs seria dada por regulação da concentração de
enzimas mitocondriais, como a citrato sintase, e /ou pela regulação de enzimas que suprem
a via com os intermediários que constituem substratos em diferentes etapas de reação
(Storey, 2004).
Figura 3 – Modelo de regulação proposto para a mudança do tipo de substrato preferencial, de

carboidratos para ácidos graxos, durante a hibernação em mamíferos. Foram indicados os efeitos da
concentração plasmática de insulina e ácidos graxos (AG) na expressão gênica da isoforma 4 da
enzima piruvato quinase desidrogenase (PDK4) e na oxidação de carboidratos e ácidos graxos no
coração dos animais durante a atividade de outono e dormência de inverno. As linhas com cabeça de
seta indicam ativação e as linhas terminadas em elipse indicam inibição; linhas sólidas indicam a
regulação predominante e as linhas pontilhadas indicam vias menos atuantes. As setas em vermelho
indicam aumento ou diminuição na concentração ou atividade e o ajuste correspondente nas taxas de
oxidação de AG e de carboidratos. PPARα é um receptor nuclear, ativado por ácidos graxos, que
funciona como fator de transcrição de genes envolvidos no metabolismo de lipídios. TG, triglicerídeos;
HSL, lípase hormônio sensível (Modificado de Carey e col., 2003).
Síntese e degradação de proteínas

Outro processo que envolve alto custo energético e que constitui um alvo na depressão
metabólica é a síntese protéica. As atividades de síntese protéica e transcrição gênica
utilizam 25%-30% e 1%-10% do ATP produzido nos tecidos de mamíferos no estado basal
(Rolfe e Brown, 1997). A síntese protéica pode ser inibida como uma conseqüência da
inibição da transcrição gênica através de uma diminuição dos níveis de RNAm ou
diretamente através da fosforilação reversível de proteínas ribossomais e consequente
inibição da maquinaria de tradução. Em alguns moluscos e mamíferos hibernantes, a
quantidade de RNAm sofre pouca alteração nas células em depressão metabólica e esta
aparente extensão da meia-vida do RNAm levou os autores a proporem o termo “RNAm
latente”. Portanto, a inibição da síntese protéica parece acontecer principalmente através da
fosforilação reversível de proteínas da maquinaria de tradução e de alterações no estado de
agregação dos polissomos. Paralelamente, dada a inibição da síntese de proteínas, a
degradação também parece ser inibida durante o hipometabolismo, aumentando a meia vida
destas moléculas, o que além de contribuir para a economia energética, diminui a formação
de produtos nitrogenados e os custos de seu processamento, estocagem e excreção (Storey
e Storey, 2004).
Composição lipídica das membranas

Estudos envolvendo comparações intra-específicas da composição lipídica de
membrana sugerem que seria um importante alvo de regulação em estados de depressão
metabólica, embora ainda sejam poucos os trabalhos que confirmam esta hipótese que é
baseada em uma teoria intensamente debatida na literatura por Hulbert e col. (2000) na
última década. Uma vez que a fração substancial do metabolismo está relacionada com a
função de enzimas associadas às membranas de suas células, os autores propuseram que
a composição lipídica das membranas desempenha papel determinante na intensidade
metabólica de uma espécie através de sua influência sobre a atividade destas enzimas. De

Metablismo
maneira geral, animais menores possuem membranas mais insaturadas e,

consequentemente, taxa metabólica massa específica maior que animais maiores (Hulbert e
Else, 2000; Hulbert, 2007). Adicionalmente, as adaptações à temperatura em peixes e
outros ectotérmicos que vivem em ambientes frios, próximos à região polar, aparentemente
envolvem um aumento do conteúdo de ácidos graxos polinsaturados (PUFAs) que mantém
a fluidez das membranas e preserva a função de proteínas de membrana em órgãos vitais
(Gibbs, 1998). Em um caramujo terrestre estivante, alterações na composição da membrana
mitocondrial interna do hepatopâncreas, dissociadas de efeitos da temperatura, foram
sugeridas com base na redução de cerca de 80% do conteúdo de cardiolipina durante o
estado hipometabólico e tais alterações estariam relacionadas à redução de proporções
similares da atividade da CCO (Stuart e col., 1998). Esquilos em torpor apresentam uma
diminuição da porcentagem de ácidos graxos saturados (SFAs) e aumento de PUFAs nas
membranas dos cardiomiócitos, provavelmente em resposta à queda da temperatura
corpórea, embora a atividade da Na+,K+-ATPase ainda esteja diminuída em comparação
com as taxas em animais ativos (Charnock e col., 1980). Na marmota, um hibernante
herbívoro, alterações sutis em ácidos graxos específicos dos fosfolipídeos parecem
desempenhar um papel importante na regulação metabólica durante a dormência sazonal,
observando-se um aumento da razão entre os PUFAs n6 e n3 nos cardiomiócitos (Ruf e
Arnold, 2008). Tais alterações estariam relacionadas ao controle dos níveis de Ca++ e à
ausência de arritmia cardíaca durante a queda da temperatura corpórea e o torpor, ao
contrário dos severos efeitos da hipotermia sobre a função cardíaca em mamíferos não
hibernantes. Curiosamente, evidências sugerem que o ajuste não ocorre no ventrículo
cardíaco de lagartos teiú, provavelmente em virtude da dormência nestes animais ocorrer
em temperaturas relativamente elevadas e à ausência de despertares periódicos durante o
estado hipometabólico, além de outras diferenças na morfologia e função do órgão desses
animais (Silveira, dados não publicados).
Face à redução das taxas de produção de energia, a inibição de processos celulares
que a consomem é crucial para que um novo estado de equilíbrio seja alcançado. A
manutenção de gradientes iônicos adequados através das membranas é critica para a
viabilidade celular e, durante a depressão metabólica, há uma diminuição do movimento dos
íons em ambas as direções, tanto passivo através de canais iônicos, quanto pelo transporte
ativo, o que possibilita grande economia energética (Hochachka e Guppy, 1987).
A atividade da Na+,K+-ATPase, utiliza 19%-28% do ATP produzido nos tecidos de
mamíferos no estado basal (Rolfe e Brown, 1997) e a inibição deste processo contribui, de
forma significativa, para a depressão metabólica e sobrevivência dos animais durante a
dormência (Carey e col., 2003). A fosforilação reversível e as alterações da composição
lipídica das membranas têm sido sugeridas como os principais mecanismos que afetam a

atividade desta proteína.
Considerações Finais
A depressão metabólica não se manifesta com a mesma magnitude em todos os
mecanismos e processos no interior das células ou em todos os órgãos e tecidos do animal.
Acredita-se que exista uma ‘hierarquia’ entre os processos consumidores de energia nas
células de mamíferos, com a síntese de proteínas e RNA sendo mais sensíveis a variações
no suprimento de energia do que no bombeamento de íons, o que evidencia a importância
da manutenção do gradiente iônico através das membranas (Buttgereit e Brand, 1995).
Adicionalmente, o grau de inibição em diferentes órgãos e tecidos parece ser variável. Por
exemplo, a atividade da Na+,K+-ATPase no tecido cardíaco de esquilos mantém-se
inalterada durante a hibernação, embora esteja significativamente reduzida no músculo
esquelético, rins e fígado (Balaban e Bader, 1984; MacDonald e Storey, 1999). No conjunto,
a inibição destes vários processos, cuja atividade é mais intensamente deprimida no estado
dormente, resulta na diminuição do gasto energético e da velocidade de utilização das
reservas de substratos endógenos, possibilitando a sobrevivência dos animais durante a
fase de dormência.

Metablismo
Custos e benefícios da reprodução: papel dos lipídios
Aline Dal’Olio Gomes

[email protected]
Introdução
Além dos processos fisiológicos e comportamentais apresentados até aqui
(termorregulação, febre, anapirexia, hibernação e dormência), o processo reprodutivo
também ocasiona alterações no metabolismo energético dos animais. Como já discutido, as
células requerem um contínuo fornecimento de energia para biossíntese e metabolismo,
mas a disponibilidade de alimento e a demanda energética flutuam na maioria dos habitats,
e grande parte dos organismos cessa a alimentação quando iniciam os comportamentos
que perpetuam a espécie. Neste período em que o trato digestório está vazio, o organismo
depende das fontes internas (tecido adiposo) e externas (estoques de alimentos) de
nutrientes. Durante a evolução dos animais, a habilidade de armazenar quantidades
significativas de energia no organismo e mecanismos que inibem o comportamento de
ingestão devem ter permitido aos animais a realização de outras atividades que garantissem
o sucesso reprodutivo (Scheneider, 2004).
Essa habilidade para controlar a disponibilidade de energia interna e externa parece ser
central para a ligação entre a reprodução e o balanço energético, e permite que os animais
priorizem suas opções comportamentais de acordo com as flutuações nas condições
energéticas e reprodutivas (Scheneider, 2004). Sendo assim, quando o alimento é
abundante e o requerimento energético é baixo, a energia é disponível para todos os
processos necessários para sobrevivência do indivíduo e da população, incluindo
crescimento, manutenção, termorregulação e reprodução (Fig. 1a). Desta forma, os
comportamentos relacionados à defesa territorial, corte, cópula e cuidado parental recebem
uma alta prioridade, e a energia excedente é armazenada (Scheneider, 2004).
Por outro lado, quando a energia é escassa, os mecanismos fisiológicos tendem a
favorecer aqueles processos que garantem apenas a sobrevivência do indivíduo. Assim, os
processos fisiológicos que promovem os comportamentos de forrageamento,
armazenamento e ingestão recebem prioridade (Fig.1b), pois a reprodução é muito custosa
energeticamente e pode ser retardada quando a sobrevivência do indivíduo está em risco
(Scheneider, 2004). Deste modo, os mecanismos que controlam o balanço energético são
integrados com aqueles que controlam a reprodução, sendo importante entender a ligação
entre a fisiologia do balanço energético e o sucesso reprodutivo.

Crescimentoo
A
Alimento
abundante + Baixa demanda
energética = ↑Energia
Manutenção
Reprodução
B
Crescimento
Alimento Alta demanda
escasso + energética = ↓Energia
Manutenção
Figura 1: Relação entre o balanço energético e a reprodução.
Custos da reprodução
Os processos envolvidos na reprodução que contribuem para o aumento da
demanda energética incluem: esteroidogênese; desenvolvimento gonadal (vitelogênese e
espermatogênese/espermiogênese); comportamentos reprodutivos (defesa de território,
corte, acasalamento, migração) e cuidado parental. Deste modo, para que haja um sucesso
reprodutivo, os animais precisam estar preparados fisiologicamente, e para isso é
necessário que acumulem grande quantidade de reservas energéticas.
Em geral, a reprodução é energeticamente custosa para ambos os sexos, mas a
magnitude do gasto e sua relação com o sucesso reprodutivo diferem entre machos e
fêmeas. Os machos alocam relativamente pouca energia para a produção de gametas e,
então podem se reproduzir com sucesso com um investimento de energia menor, que é
direcionado para corte e cópula. Em contraste, as fêmeas de muitas espécies apresentam
altos custos na atividade reprodutiva independente da fecundidade (como migração, cuidado
parental), e necessitam de uma reserva energética substancial antes de iniciar a atividade
reprodutiva (Aubret e col., 2002).
Diferentes padrões da relação entre a captação de reservas energéticas e a
reprodução podem ser observados entre os vertebrados. Os peixes, principalmente
migratórios como o salmão, não se alimentam durante a migração reprodutiva, assim toda a
energia necessária para o desenvolvimento gonadal e para atividade de natação são
provenientes das reservas energéticas obtidas anteriormente ao período reprodutivo (Lucas
e Baras, 2001).

Metablismo
Em espécies de anfíbios de zona temperada, que apresentam reprodução explosiva

durante o verão, os animais devem acumular energia suficiente para sobreviver durante a
dormência no inverno e ainda suportar as atividades reprodutivas ao despertar, como
vocalização, defesa de território, corte e cópula (Wells, 2007). Os machos de Rana
temporaria e Bufo bufo, geralmente não se alimentam ao longo de todo esse período
reprodutivo (Jorgensen, 1992). Contudo, em espécies com períodos reprodutivos
prolongados e relativamente baixa taxa de vocalização, pode ocorrer apenas uma
diminuição da ingestão de alimentos, sendo o gasto energético suplementado através da
alimentação (Wells, 2007). Adicionalmente, machos de Scinax mantêm a alimentação
durante toda a estação reprodutiva, sugerindo o aumento do suporte energético para a
vocalização (Carvalho e col., 2008).
Algumas espécies aumentam a ingestão de alimentos durante o período de intenso
cuidado parental, considerando que outras aumentam tanto a captação quanto o
armazenamento em antecipação ao nascimento da prole (Wade e Schneider, 1992). Em
muitas espécies de aves, a necessidade energética da nova prole requer aumento do
forrageamento e da alimentação por ambos os pais em ordem deles produzirem um
fornecimento suficiente do leite do papo (Schneider, 2004). Em mamíferos, a lactação e o
comportamento termorregulatório do cuidado parental são energeticamente custosos às
fêmeas. Assim, anteriormente ao nascimento da prole, as fêmeas de alguns mamíferos se
alimentam muito e armazenam o excesso de nutrientes, que são posteriormente
direcionados a alta demanda energética da lactação. Contrariamente a isso, algumas
espécies apresentam uma pequena ingestão de alimentos ao longo da gravidez, enquanto
os estoques de alimentos aumentam durante esta fase, para serem consumidos durante a
lactação (Bronson, 1989). Há ainda espécies nas quais a ingestão de alimento e o
armazenamento precedem a estação reprodutiva: elefantes marinhos e pinguins imperador
apresentam um período de massiva alimentação que ocorre 3 meses antes do período de
jejum, competição pela corte e reprodução (Anderson e Fedak, 1987; Groscolas, 1990).
Papel dos lipídios e ácidos graxos na reprodução

Durante o processo de vitelogênese, o fígado é estimulado pelo hormônio estradiol a
sintetizar a vitelogenina, uma fosfoglicolipoproteína, que dentre seus diferentes
componentes é formada por ácidos graxos que são mobilizados das reservas de lipídios
(tecido adiposo, músculo e/ou fígado) e incorporporados nos oócitos por pinocitose (Fig. 2).
Desta forma, a qualidade e a quantidade dos lipídios e também de ácidos graxos podem
variar com o status reprodutivo.

Ovário Estradiol
Lipídios Tec. adiposo

Vitelogenina
Fígado
Proteína
Músculo
Figura 2: Vitelogênese nos vertebrados.
Lipídios como fonte energética

De modo geral, para os vertebrados, os lipídios são a principal fonte de reserva
energética, sendo geralmente armazenados no fígado, tecido adiposo e/ou músculos. O
fígado, juntamente com o tecido adiposo, são órgãos de armazenamento que apresentam
importante papel na reprodução (Sheridan, 1994). Além disso, o tecido adiposo serve como
reserva energética durante a hibernação e estivação; e está também envolvido na
vitelogênese de espécies ovíparas que produzem muitos ovos, e no desenvolvimento intra-
uterino de embriões (Jared e col., 1999).
Deste modo, o acúmulo de lipídios nos diferentes tecidos é altamente dependente da
qualidade nutricional, bem como da estação do ano e do status de desenvolvimento e
reprodução (Sheridan, 1994), motivo pelo qual a concentração de lipídios armazenados se
altera significativamente ao longo do tempo entre os indivíduos e populações, em resposta
às necessidades energéticas (Meffe e Snelson, 1993; Moreira e col., 2002).
Love (1980) discutiu o processo de mobilização lipídica durante o ciclo reprodutivo
entre espécies de peixes estudadas até aquele momento. Em algumas, como por exemplo,
Gadus morhua, ocorreu um aumento de lipídio hepático nas fases iniciais da vitelogênese
seguido de uma redução nestes teores na fase que antecede a desova. Em outras, como
Coreogonus clupeanorfis, conforme avança o período reprodutivo, declinam os teores de
lipídio hepático e muscular. Trabalhos mais recentes mostraram que, em fêmeas, com a
chegada da fase vitelogênica ocorreu a mobilização de lipídios hepático e muscular para as
gônadas (Oreochromis niloticus, El-Sayed e col., 1984; Trisopterus lucus, Merayo, 1996). Ao
contrário disso, em machos e fêmeas de Diplodus sargus ocorreu um aumento de lipídios

Metablismo
em todos os órgãos de reserva analisados (fígado, músculo e gônadas) durante a fase

reprodutiva (Pérez e col., 2007).
Para os anfíbios, os corpos gordurosos parecem ter um papel muito importante na
reprodução, variando com as alterações sazonais e os ciclos reprodutivos. No anuro Bufo
arenarum, este tecido está relacionado ao aumento de massa ovariana (Penhos, 1953). O
mesmo é observado para Rana sculenta, em que a variação do peso e a composição
química dos corpos gordurosos estão relacionados com a atividade sexual (Roca e col.,
1970), e para Rana cyanophlyctis, na qual foi encontrado uma diminuição do peso dos
corpos gordurosos com o aumento dos ovários (Pancharatna e Saidapur, 1985). Nas
fêmeas de uma espécie de cecília vivípara, Typhlonectes compressicauda, foi observado um
aumento em todos os órgãos de reserva (tecido adiposo e fígado) no início da estação
chuvosa, que parece estar relacionado com a vitelogênese e o preparo para a gravidez
(Exbrayat, 1988). Contudo, os machos de Anuros e Gymnophiona mostram que os órgãos
podem ser considerados como reserva polivalente, podendo ser utilizado em muitas
circunstâncias (Exbrayat e Hraoui-Bloquet, 2006).
Para os répteis, os corpos gordurosos também representam o principal estoque de
lipídios (Scott e col., 1995, Sheridan, 1994), contudo, os lipídios do fígado contribuem para o
crescimento folicular (Bonnet e col., 1994) e os lipídios do músculo podem ser usados
quando as fontes energéticas do tecido adiposo são limitadas (Derickson, 1976). As fêmeas
reprodutivas de serpentes viperinas Natrix maura, têm mais lipídios no fígado do que as
fêmeas pós-reprodutvas (Fig. 3), suportando a importância deste órgão na produção de
vitelogenina. Além disso, comparações feitas entre as cobras pré e pós-reprodutivas nessa
mesma espécie, indicaram que os corpos gordurosos foram a principal fonte de lipídios para
a reprodução em machos e fêmeas (Fig. 3). O padrão de variação de lipídios nos machos foi
similar à disponibilidade de alimento, indicando que as serpentes aumentaram a atividade
de forrageamento e as reservas lipídicas de acordo com a maior disponibilidade de presas.
Contudo, de maio a junho, as reservas de lipídios diminuíram mesmo com o aumento de
presas, o que sugere que durante este período a taxa de investimento energético foi alta
devido à atividade reprodutiva (espermatogênese). Em contraste, os lipídios nas fêmeas não
foram correlacionados com a disponibilidade alimentar, pois durante a vitelogênese as
reservas de lipídios diminuíram mesmo com um aumento na disponibilidade de alimento.
Durante este período, as fêmeas mobilizaram tanto os lipídios armazenados quanto os
lipídios obtidos diretamente da dieta para a síntese de vitelogenina (Santos e Llorente,
2004).

C. gordurosos
Fígado
Músculo
Músculo
% de lipídios
no tecido seco
Figura 3: Alocação de lipídios dos órgãos de reserva em machos e fêmeas pré e pós-reprodutivos
(NRM e NRF, respectivamente) e machos e fêmeas reprodutivos (RM e RF, respectivamente) de
serpentes viperinas Natriz maura (Modificadode Santos e Llorente, 2004).
Muitas medidas do metabolismo lipídico variam significativamente com a estação

reprodutiva ativa dos lagartos tree (Urosaurus ornatus), especificamente a massa dos
corpos gordurosos, o conteúdo de lipídios totais hepáticos, a atividade da enzima
diacilglicerol aciltransferase (enzima responsável por ligar uma molécula de acetil-Coenzima
A no diacilglicerol formando um triacilglicerol) no fígado e corpos gordurosos, e a
concentração de ácidos graxos livres circulantes (Lacy e col., 2002). Estes resultados são
consistentes com muitos dados existentes em que machos e fêmeas exibem ciclos de
armazenamento e depleção de lipídios coincidente com os eventos reprodutivos, como a
vitelogênese, gravidez, defesa territorial e corte (Castilla e col., 1992; Derickson, 1976).
Como podemos observar o local e a forma de armazenamento, variam conforme a
espécie estudada. Em geral, os lipídios são armazenados nos tecidos de reserva na forma
de triacilgliceróis e as diferenças encontradas no local de armazenamento podem refletir a
história de vida dos animais (Sheridan, 1988).
Ácidos graxos
Os lipídios, em sua maioria, são compostos por ácidos graxos (AG), que são ácidos
carboxílicos com cadeias hidrocarbonadas de 4 a 36 átomos de carbono. Em alguns, esta
cadeia é totalmente saturada e em outros contém uma insaturação (monoinsaturado; MUFA)
ou mais insaturações (polinsaturado; PUFA) (Nelson e Cox, 2005). De modo geral, os
lipídios podem ser classificados em neutros (triacilgliceróis - TG) e polares (fosfolipídios -
FL). Sabe-se que 90% da composição dos triacilgliceróis, principal substrato energético,
Metablismo
corresponde aos ácidos graxos, compostos principalmente por saturados e

monoinsaturados. Nos fosfolipídios, 70 a 80% da sua composição é de ácidos graxos e na
sua maioria polinsaturados, formando a bicamada lipídica que é responsável pelo controle
da fluidez das membranas biológicas (Bell e col., 1986).
Os ácidos graxos polinsaturados participam de importantes funções biológicas, como
crescimento, regulação da resposta imune e ainda as alterações fisiológicas dos animais
frente a um estresse ambiental (Bell e cols., 1995). Adicionalmente, os PUFAs participam
também dos processos reprodutivos dos vertebrados, influenciando na concentração de
hormônios esteróides gonadais, vitelogênese, na manutenção da estrutura de membrana
dos espermatozóides, na qualidade dos ovos, desova e sobrevivência larval (Izquierdo e
col., 2001; Wathes e col. 2007). Contudo, a composição desses ácidos graxos pode variar
muito em relação à dieta dos pais e às condições do ambiente. Desta forma, quando as
dietas maternas são deficientes, a transferência de ácidos graxos para as gônadas se torna
insuficiente para um desenvolvimento oocitário adequado, reduzindo a qualidade dos
gametas e da progênie (Adams, 1999).
Ovíparos x Vivíparos
Os lipídios que compõem o vitelo são compostos principalmente por fosfolipídios e
triacilgliceróis, e a sua proporção pode variar entre as espécies. Fêmeas de lagartos
ovíparos possuem de 26 a 34% de lipídios no vitelo (Speake e Thompson, 2000).
Proporções similares de lipídios (20%) são encontradas na composição da vitelogenina de
peixes (Yaron e Sivan, 2006). Contudo, o vitelo de aves é composto por 40 a 65% de lipídios
(Jones e col., 1998).
A maioria dos fosfolipídios presentes no vitelo são ricos em PUFAs e suportam o
crescimento tecidual dos embriões, enquanto os triacilgliceróis são utilizados como reserva
energética para o desenvolvimento embrionário (Yaron e Sivan, 2006). O perfil de PUFAs do
vitelo pode ser afetado pela composição da dieta materna, e também é dependente de
fatores metabólicos, os quais diferem entre as espécies (Speake e Thompson, 2000). Os
ovos colocados pelas espécies ovíparas devem conter todos os nutrientes requeridos para
sustentar o desenvolvimento completo do embrião até a eclosão. Contudo, a evolução da
viviparidade, apresentou a oportunidade para as mães reduzirem o investimento no ovo,
como um abastecimento compensatório de nutrientes ao embrião via placenta durante a
gestação. Sendo assim, os ovos de espécies ovíparas de aves, tartarugas e jacarés
possuem altas proporções de triacilglicerol (80-86%) e apenas 9-12% de fosfolipídios.
Contrariamente a isso, os ovos de espécies vivíparas possuem uma proporção de TG de 65-
70%, considerando que a proporção de fosfolipídos é de 18-23% (Speake e Thompson,
2000).

Há uma clara distinção no perfil das classes de lipídios do vitelo entre espécies
ovíparas e vivíparas. Esta reorganização do perfil de lipídios do vitelo contribui para uma
redução no investimento materno de energia durante a maturação oocitária (Speake e
Thompson, 2000). Espécies vivíparas possuem menos triacilgliceróis no vitelo que espécies
ovíparas, pois a energia, presumivelmente na forma de ácidos graxos livres, pode ser
provida para o embrião através da placenta durante o desenvolvimento, uma vez que todo o
requerimento lipídico para espécies ovíparas deve estar contido no vitelo do ovo no tempo
da ovulação (Thompson e Speake, 2006).
Fecundidade
A composição de ácidos graxos dos ovários é altamente afetada pelo conteúdo de
ácidos graxos da dieta, o qual influencia significativamente a qualidade dos ovos. A
porcentagem de PUFAs aumenta com o aumento desses AGs na dieta dos reprodutores
(Izquierdo e col., 2001). Estudos realizados com uma espécie de peixe, Siganus guttatus,
mostraram que a elevação do conteúdo lipídico na dieta dos reprodutores resultou em um
aumento na fecundidade e eclosão das larvas (Duray e col., 1994). Altas porcentagens
importantes de PUFAs (como ácido eicosapentanóico, EPA-C20:5n3 e ácido araquidônico,
AA-C20:4n6) são encontradas também nos ovos de anuros e lagartos insetívoros, refletindo
a importância da dieta dos reprodutores (Huang e col., 2003).
Fertilização
Dietas contendo concentrações de EPA e DHA (C22:6n3, ácido docosahexanóico)
mostram uma correlação com a reprodução de algumas espécie de peixes (Fernández-
Palacios e col., 1997). A composição de ácidos graxos dos espermatozóides depende do
conteúdo de AGs essenciais na dieta dos reprodutores de espécies de truta arco-íris
(Watanabe e col., 1984) e seabass (Asturiano, 2001). É possível que a motilidade dos
espermatozóides durante a fertilização seja afetada. Particularmente em salmonídeos, em
que a criopreservação dos espermatozóides é utilizada, a composição de ácidos graxos nos
espermatozóides pode ser um fator que determina a integridade da membrana após o
descongelamento (Izquierdo e col., 2001).
A alta porcentagem de DHA encontrada nos testículos de peixes é similar aos
espermatozóides de humanos e, assim como nos mamíferos, a concentração de DHA em
peixes pode ser positivamente correlacionada com a densidade, número de
espermatozóides móveis e a motilidade (Jeong e col., 2002). O comportamento de
membrana pode ser importante no controle da fusão dos espermatozóides com o óvulo (Bell
e col., 1999).

Metablismo
Contudo, há grande diferença entre aves e mamíferos com respeito à composição de

AGs dos fosfolipídios dos espermatozóides. Os espermatozóides de mamíferos, como em
peixes, são caracterizados por altas proporções de PUFAs da série n3, principalmente DHA,
em aves, ao contrário, predomina os PUFAs da série n6. Essa diferença no perfil de AG
parece representar uma adaptação à temperatura, já que as aves apresentam uma
temperatura corpórea maior do que a de mamíferos (41°C/37°C). Além disso, os testículos
dos mamíferos estão mantidos a uma temperatura mais baixa do que o resto do corpo,
devido a externalização da cavidade testicular. Desta forma, os espermatozóides das aves
devem se desenvolver e funcionar em um ambiente consideravelmente mais quente que o
experimentado por mamíferos. O principal PUFA dos espermatozóides das aves, o C22:4n6,
possui o mesmo comprimento de cadeia do DHA (C22:6n3), o principal PUFA dos
espermatozóides de peixes e mamíferos, mas com 2 insaturações a menos. Essa diferença
no grau de insaturação pode representar a manutenção de propriedades biofísicas das
membranas dos espermatozóides nas diferentes temperaturas (Kelso e col., 1997).
Esteroidogênese
Os PUFAs são importantes também na síntese de eicosanóides (prostaglandinas,
tromboxanos e leucotrienos), podendo interferir na esteroidogênese gonadal em peixes
(Izquierdo e col., 2001) e mamíferos (Wathes e col., 2007). O EPA é conhecido por ser o
precursor das prostaglandinas (PG) da série III, considerando que o AA é o precursor das
prostaglandinas da série II. In vitro, o AA estimula a produção de testosterona no testículo
de goldfish através da conversão a PGE2. Ao contrário, o EPA e DHA bloqueiam a ação
esteroidogênica do AA e PGE2 (Wade e col., 1994). Assim, o tempo de espermiação pode
ser retardado e subsequentemente a taxa de fertilização reduzida pela depressão da
esteroidogênese causada pela deficiência de AG. Adicionalmente, o AA pode regular a
transcrição do gene que expressa a proteína Star, responsável pelo transporte do colesterol
da membrana externa da mitocôndria para a interna, onde se localizam a maioria das
enzimas envolvidas na esteroidogênese (Wang e col., 2000). Além disso, algumas PGs
produzidas por fêmeas de golfish parecem estimular o comportamento sexual dos machos e
sincronizar machos e fêmeas para a desova (Sorensen e col., 1988).
Desenvolvimento embrionário e larval

A comparação entreos ovos de animais marinhos e de água doce mostrou que o AA
e a razão DHA/EPA nos fosfolipídios dos ovos são positivamente correlacionados com a
simetria e a viabilidade dos ovos. Como já mencionado, estes ácidos graxos participam de

um papel estrutural importante como componentes dos fosfolipídios das biomembranas e

estão associados aos processos de fluidez.
O tecido neural, especialmente dos olhos, pode formar relativamente grande
proporção da massa corporal total de embriões e larvas, assim o requerimento de DHA nos
estágios embrionários e larval pode ser crítico para a função do sistema neural e visual
(Furuita e col., 2000). Estudos com mamíferos indicam que uma deficiência na dieta em
DHA traz prejuízos para a visão. O ácido araquidônico (C20:4n6) é também um importante
constituinte dos fosfolipídios de tecidos embrionários, principalmente cérebro, coração e
fígado, devido a síntese de eicosanóides (Speake e Thompson, 2000).
A necessidade do desenvolvimento dos tecidos para AA e DHA pode ser cumprida
diretamente pela transferência destes ácidos graxos do vitelo, ou alternativamente, por sua
síntese feita pelos embriões a partir de seus precursores (Speake e Thompson, 2000).
Assim, os AGs podem ser oxidados para a produção de energia, mas o requerimento para
síntese de fosfolipídios em tecidos em desenvolvimento são mais seletivos.
Conclusão
Como visto até agora, a estreita relação entre o balanço energético dos animais e os
processos fisiológicos, nesse caso a reprodução, garante a sobrevivência dos indivíduos e a
perpetuação da espécie. Contudo, alterações do habitat podem resultar em diminuição ou
eliminação de muitos recursos alimentares para os animais, alterando assim, toda a
composição de lipídios, e ácidos graxos, o que pode resultar em uma redução na qualidade
dos gametas dos pais e da sua prole. Dentro do cenário global das mudanças ambientais
ocasionadas por ações antrópicas, é fundamental que estudos de conservação sejam feitos,
envolvendo a influência do balanço energético nos processos fisiológicos, principalmente no
funcionamento do sistema reprodutivo, para garantir a sobrevivência das espécies.

Metablismo
A ecofisiologia no cenário das mudanças climáticas globais
Lye Otani
[email protected]
Relações energéticas no contexto ecológico

O orçamento energético dos animais e
suas diversas relações com o ambiente são muito
utilizados como base de teorias ecológicas que
visam explicar a diversidade da história evolutiva
observada nos vertebrados (McNab, 1992). O
orçamento energético de um animal é constituído
basicamente dos processos e mecanismos de
obtenção e dispêndio, os quais são influenciados e
regulados por diversos fatores. A obtenção de
energia nos animais ocorre através da ingestão,
digestão, assimilação e metabolização do alimento
(Nagy e Negus, 1993; Robbins, 1993; Speakman,
2000). Apesar do processo ser aparentemente
simples, a obtenção de energia para manutenção
do equilíbrio energético é limitado por fatores
intrínsecos e extrínsecos ao animal (Fig. 1).
No ambiente natural, os animais devem
lidar primeiramente com a sazonalidade e
Figura 1. Ilustração da aquisição e disponibilidade do alimento, além disso, sua
gasto de energia. O modelo mostra qualidade também influenciará na quantidade de
alguns gargalos que limitam a energia disponível para ser assimilada. Essa
assimilação de energia e alguns
assimilação de energia, por sua vez, é controlada
processos que demandam um maior
por uma série de limites intrínsecos do animal
gasto energético (Modificado de Weiner,
(Castle e Wunder, 1995; Toloza e col., 1991;
1992).
Speakman, 2000; Bacigalupe e Bozinovic, 2002;
Karasov e col., 2004). A cada passo dentro do processo de alimentação, desde a
manipulação do alimento até o processo de excreção existem uma série de gargalos onde
ocorre uma perda de energia (Speakman, 2000; Bacigalupe e Bozinovic, 2002; Speakman e
Król, 2005). Esses gargalos são importantes uma vez que estão diretamente ligados à
ecologia animal, influenciando na taxa alimentar, no tempo de forrageamento e nas diversas

atividades envolvidas com o dispêndio de energia, que são importantes para estabelecer o
papel do animal no ecossistema (Karasov, 1990).
Os processos e mecanismos relacionados ao despêndio de energia são importantes
na determinação da sobrevivência e sucesso reprodutivo dos animais dentro do seu
contexto ecológico.
Como visto nos capítulos anteriores, as diversas atividades que contribuem para o
gasto energético (e.g. reprodução, termorregulação, forrageamento, locomoção, estresse,
produção de tecidos, entre outros) estão extremamente ligados aos diversos fatores
ambientais, tanto bióticos como abióticos que compõe o ecossistema ao qual o animal está
inserido (Weiner, 1992, McNab, 1992). Toda essa cadeia de relações envolvidas no
orçamento energético animal determina o potencial dos diferentes grupos sistemáticos para
produzir ajustes comportamentais, morfológicos e/ou fisiológicos para a manutenção do seu
equilíbrio energético, ao longo de gradientes ecológicos espaciais e temporais. Assim, a
diversidade e os padrões de distribuição dos diversos táxons de animais estão relacionados
com esse potencial de ajuste, no entanto, qualquer alteração dentro dessa grande cadeia
pode mudar drasticamente esse cenário (Bennett, 1987; Feder, 1987; Spicer e Gaston,
1999). De fato, constantes mudanças ambientais, sejam naturais ou causadas pelo homem,
afetam as relações energéticas do ecossistema, possibilitando a evolução e extinção das
espécies.
Extinções e perda da biodiversidade no mundo atual

O ambiente está em constante alteração desde o surgimento do planeta. Essas
alterações, como visto anteriormente, afetam o balanço energético dos seres vivos levando
a uma série de processos evolutivos que moldam a distribuição e os padrões das inúmeras
espécies (Hughes e col., 1997; Crowley e col., 1988; Myers e Knoll, 2001). Juntamente com
esses ciclos evolutivos são observados processos naturais de extinção, tais processos
foram registrados em diversas épocas ao longo da história do planeta (Fig. 2). No entanto,
com o surgimento do ser humano há 100 mil anos, e principalmente com a Revolução
Industrial, o consumo e o desperdício dos recursos naturais tem levado espécies e
comunidades inteiras ao ponto de extinção (Williams e Fraústo da Silva, 2005). Assim, além
das variações ambientais naturais, os seres vivos agora têm que lidar com as alterações
ambientais causadas pelas atividades humanas (Carey, 2005).
Uma das alterações mais antiga e mundialmente problemática causada pelo homem
é a perda e a subseqüente fragmentação de hábitats (Miller e Cale, 2000; Primack e
Rodriques, 2001). Como resultado do desmatamento, a diminuição do tamanho do hábitat e
o aumento do isolamento dos organismos acarretam em alterações nas comunidades
biológicas de maneira complexa, englobando diversos fatores concomitantemente (Fahring

Metablismo
e Merriam, 1994; Zuidema e col., 1996, Drinnan, 2005). A principal consequência da

fragmentação ambiental é a redução da dispersão das populações, o que as tornam mais
susceptíveis à depressão endogâmica, redução da diversidade genética, e a outros
problemas associados com o isolamento e o tamanho populacional (Fahring e Merriam,
1994; Zuidema e col., 1996). A habilidade de se deslocar e os seus padrões de
deslocamento, juntamente com a ecologia, o uso do hábitat e a habilidade de interagir com
as mudanças em seu ambiente, são exemplos de fatores nos possibilitam entender como os
efeitos da fragmentação atuam sobre essas populações (Pearman, 1997).
Além da redução populacional, a fragmentação modifica as condições de luz,
temperatura, umidade e vento, influenciando diretamente os microhábitats, evidenciadas
pelo efeito de borda (Kapos, 1989; Bierregaard e col., 1992; Rodrigues, 1998; Galindo-Leal
e Câmara, 2005). Desse modo, as espécies que conseguem se estabelecer nesse novo
ambiente devem ser capazes de responder rapidamente a essas alterações de hábitats,
incluindo as matrizes devastadas entre eles (Laurance e Yensen 1991, Tocher e col., 1997,
Gascon e col., 1999). Essa capacidade de tolerância se deve a fisiologia e a capacidade
para manter o balanço energético e o equilíbrio interno (homeostase) face às novas
condições (Calow, 1991; Zachariassen e col., 1991; Carey, 2005). Sob a óptica da fisiologia
comparada e abordando as relações energéticas, as diferenças fisiológicas e sua
plasticidade observada entre as espécies animais nos possibilita entender e prever quais
serão os organismo mais afetados e quais serão os beneficiados com esse novo ambiente.
A dispersão e a invasão de diversas espécies exóticas de animais e plantas em todo
o planeta, além do surgimento e dispersão de novas patologias estão intimamente
relacionadas com os limites fisiológicos dessas novas espécies em adaptar-se às condições
ambientais criadas pelo ser humano. Como conseqüência da instalação dessas espécies
invasoras no novo ecossistema, podemos observar um desequilíbrio nas relações
ecológicas através das alterações no hábitat e o surgimento de novas interações ecológicas
que antes não eram observadas, por exemplo: competição, predação, parasitismo (Dukes e
Mooney, 1999; Vitousek e col., 1996; Kolar e Lodge, 2001). A proliferação de patologias
e/ou surgimento de novas doenças é uma das principais conseqüências das ações
conjuntas das diversas alterações ambientais, uma vez que há a instalação de espécies
invasoras e as comunidades nativas estão mais vulneráveis (Daszak e col., 2000; Daszak e
col., 2001; Primack e Rodrigues, 2001; Navas e Otani, 2007).

Figura 2 - Panorama geral das extinções em massa ao longo da história geológica de nosso planeta
(Modificado de Otani e Patrício, 2010).
A vulnerabilidade das comunidades e o crescente surgimento de novas patologias
evidenciam o desequilíbrio energético do ecossistema. Essa vulnerabilidade dos
ecossistemas, por sua vez, também pode ser potencializada pela introdução de poluentes
resultantes das diversas atividades antrópicas. Esses poluentes podem contaminar a água o
solo e o ar, sendo prejudicial a saúde pública e ambiental. A poluição da água, por exemplo,
é resultante da liberação de produtos químicos tóxicos e esgotos urbanos. Tais poluentes
comprometem fontes de alimento e água potável, essenciais para qualquer organismo vivo,
além de desencadear um desequilíbrio neste ecossistema. Alguns desses compostos
propiciam a proliferação de determinadas espécies, as quais modificam outras
características da água, como por exemplo, a incidência de luz e a concentração de gases
(Primack e Rodrigues, 2001). No ar, os poluentes podem promover a formação de ácidos,

Metablismo
que por sua vez, alteram o pH do solo e de corpos d’água, reduzindo e até dizimando
populações de animais (Beebee e col., 1990; Blaustein e Wake, 1995; France e Collins,
1993) e plantas (Hinrichsen, 1987; Mackenzie e El-Ashry, 1988).
No Brasil, a produção de lixo por ano chega a cerca de 90 milhões de toneladas
(IBGE, 2009), e a principal fonte de CO2 é proveniente das mudanças no uso do solo e da
terra e, também, das queimadas (Sampaio e col., 2008). Entre os anos de 1970 a 2004
houve um aumento na emissão anual de CO2 de aproximadamente 80%, atingindo 38
gigatoneladas em 2004 (IPCC, 2007 – AR4). Como conseqüências dessas ações,
observamos a elevação de 0,75% da temperatura média no Brasil (Marengo, 2007; Sampaio
e col., 2008). Além de alterações na temperatura, podemos observar um aumento da
precipitação nas regiões sudeste e centro-oeste do Brasil e o aumento do nível relativo do
mar, da ordem de 4 mm nos últimos 50 anos (Marengo, 2007; Sampaio e col., 2008).
As respostas climáticas frente à degradação ambiental podem acarretar em
alterações e redistribuição dos grandes biomas brasileiros (Sampaio e col., 2008). Essa
reestruturação radical dos biomas terá conseqüências dramáticas nas comunidades
biológicas, favorecendo, mais uma vez, aquelas espécies capazes de se adaptar às novas
condições (Bazzaz e Fajer, 1992; Buckeridge, 2008). É provável que as espécies de
distribuição mais restrita e de pouca habilidade de dispersão sejam mais afetadas por essas
mudanças, podendo ser extintas. É valido ressaltar que essas alterações não afetarão
apenas os organismos terrestres, comunidades marinhas são afetadas pela alteração da
temperatura e da elevação do nível do mar. Tais conseqüências já podem ser observadas
em algumas espécies de corais que necessitam de uma determinada luminosidade,
temperatura e correntes de água (Carey, 2005).
Diante desse cenário, fica evidente que a fisiologia comparada tem um papel
fundamental dentro da Biologia da Conservação, ao estabelecer os limites ambientais que
garantem o equilíbrio energético dos indivíduos. Tal equilíbrio é, por conseguinte,
indispensável para a eficiência reprodutiva das espécies, bem como a viabilidade das
populações em um determinado ambiente. A análise integrada da variação fisiológica, em
diferentes níveis de abordagem, e de suas relações com as pressões de seleção torna-se
essencial para se compreender os padrões atuais de distribuição da diversidade animal
(Pough, 1989; Mangum e Hochachka, 1998, Wells, 2001; Angilletta e col., 2002).
Fisiologia comparada e a conservação biológica

Entender as relações biológicas com o ambiente, através do conhecimento sobre a
história natural das espécies, é a melhor maneira de proteger e manejar as comunidades
biológicas (Gilpin e Soulé, 1986). De natureza multidisciplinar, a biologia da conservação
propõe complementar as diversas disciplinas aplicadas e entender os efeitos da atividade

humana nas espécies, comunidades e ecossistemas, além de desenvolver abordagens

práticas para prevenir a extinção de espécies e, se possível, reintegrar as espécies
ameaçadas ao seu ecossistema funcional (Primack e Rodrigues, 2001). Dentro desta
perspectiva, os princípios, conceitos e métodos utilizados na área da fisiologia são de
extrema importância para o entendimento dos declínios populacionais e para a conservação
ambiental (Koeman, 19991; Zachariassen e col., 19991; Carey, 2005; Wikelski e Cooke,
2006; Navas e Otani, 2007). A aptidão de sobrevivência e reprodução dos diversos
organismos vivos estão relacionados à variação ambiental, e os mecanismos por traz
desses padrões podem ser entendidos através de estudos da fisiologia comparativa (Carey,
2005; Wikelski e Cooke, 2006).
O estudo do balanço energético provido pela fisiologia comparativa nos possibilita
estabelecer relações de causa-e-efeito entre os agentes estressores e as respostas obtidas
nos diversos níveis de organização biológica (Clements, 2000; Carlisle, 2000). Os padrões e
processos do ecossistema podem ser influenciados, mesmo que indiretamente, pelas
ligações energéticas entre o individuo e o ecossistema (Parmelee, 1995; DeAngelis, 1995).
Diversas técnicas para avaliar o equilíbrio energético dos animais podem ser utilizadas em
laboratório e em campo, como por exemplo: a biotelemetria, detectando alterações
comportamentais e fisiológicas (freqüência cardíaca, temperatura corpórea, taxa opercular,
batimento caudal, da asa ou de outros apêndices) em tempo real, a quantificação de
produção de CO2 através de isótopos (Speakman, 1997; Nagy e col., 1999; Costa e Gales,
2003), além das técnicas de respirometria já abordadas no capítulo 2 desta unidade. Os
índices de condição corpórea também podem fornecer importantes informações sobre o
estado nutricional e o equilíbrio energético das mais diversas espécies de animais e são
facilmente obtidos a partir de vários métodos, inclusive métodos não-invasivos (Stevenson e
Woods, 2006).
Através desses métodos apresentados pela fisiologia comparativa, somos capazes
de entender como as modificações do ambiente relatadas anteriormente podem afetar os
diversos aspectos da fisiologia metabólica dos animais (Calow, 1991; Zachariassen e col.,
1991; Hopkins e col., 1998; Beyers e col., 1999; Barbieri e col., 2002; Carey, 2005). A
fisiologia da conservação tem sido amplamente explorada dentro do cenário da
ecotoxicologia, assunto que será abordado mais especificamente em capítulos posteriores.
Diante da introdução dos poluentes, a fisiologia comparada nos possibilita detectar o nível
de estresse enfrentado pelos organismos e diagnosticar o nível de alteração ambiental, além
de servirem como base de planos de manejo e acompanhamento dos resultados
provenientes desses procedimentos (Wikelski e Cooke, 2006). A grande maioria dos
trabalhos nesta área é realizada com organismos aquáticos e será discutida com mais
profundidade na Unidade de Ecotoxicologia. Em peixes foi observado que pesticidas podem

Metablismo
afetar a homeostase dos animais levando a alterações de comportamento alimentar, taxa de

crescimento, capacidade natatória, metabolismo de repouso e regeneração de tecidos
(Beyers e col., 1999; Barbieri e col., 2002). Poluentes também têm sido relacionados a
mudanças na demanda energética e associados ao declínio das populações de anfíbios
(Carey e Bryant, 1995; Calow, 1991; Rowe e col., 1998; Rowe e col., 2001).
Apesar da grande importância do equilíbrio energético para a conservação, a maioria
dos trabalhos ligando a fisiologia da conservação com a energética estão relacionados aos
efeitos dos pesticidas (Calow, 1991; Rowe e col., 1998). Porém, é valido ressaltar que os
poluentes não são os únicos fatores que afetam o equilíbrio energético dos animais. O
aumento de extinções localizadas ligados a diminuição do tamanho do hábitat e o aumento
do isolamento dos organismos também podem estar relacionados com as relações
energéticas dos animais (Fahring e Merriam, 1994; Zuidema e col., 1996; Drinnan, 2005;
Neckel-Oliveira e Gascon, 2006). Dentro do panorama da diminuição da fragmentação e
redução do hábitat, por exemplo, a fisiologia comparativa nos propicia entender como o
desempenho locomotor pode estar relacionado com a capacidade de dispersão (Navas e
Otani, 2007) ou até entender como alterações hormonais causadas por essas mudanças
podem prejudicar o ciclo reprodutivo (Suorsa e col., 2003; 2004). Tais características
fisiológicas podem atuar na seleção natural dentro do contexto da fragmentação ambiental,
determinando a estrutura das comunidades presentes em cada fragmento (Navas e Otani,
2007).
Em suma, podemos concluir que os estudos provenientes da fisiologia da
conservação nos possibilitam entender o modo como as alterações ambientais causadas
pelo homem podem afetar as diferentes espécies. Uma vez que há uma alteração nessa
equação de obtenção e consumo de energia, esses mecanismos podem acarretar em
conseqüências graves para a aptidão dos indivíduos e também na viabilidade das
populações (Navas e Otani, 2007). Através desses dados, podemos detectar quais os
principais organismos mais vulneráveis para cada fator estressor (Mangum e Hochachka,
1998; Somero, 2000; Costa e Sinervo, 2004), possibilitando o desenvolvimento de planos de
manejos apropriados para cada táxon e, mais a longo prazo, de planos para monitoramento
dos ambientes alterados (Carey, 2005; Wikelski e Cooke, 2006). Além disso, os dados da
fisiologia comparada também são muito importantes para a construção de modelos que
propõem prever futuras distribuições geográficas das espécies juntamente com simulações
de mudanças climáticas e ambientais.

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Unidade 5
Neuroendocrinologia
comparada
Renato Massaaki Honji

[email protected]
O que é neurociência ou neurobiologia? E endocrinologia? E neuroendocrinologia?

Como visto na Unidade 3, a neurociência ou neurobiologia refere-se a todos os estudos
ligados ao sistema nervoso. Neste capítulo, uma breve descrição sobre o conceito de
endocrinologia será abordada, apresentando principalmente a endocrinologia comparada
em vertebrados, visto que, em invertebrados (Unidade 7), vários organismos apresentam
substâncias secretadas por células, que causam efeitos direta ou indiretamente em células
alvos, distantes do seu centro de origem. Em relação à neuroendocrinologia, ciência que
pode ser caracterizada pela interseção entre a neurobiologia e a endocrinologia, será
intensamente discutida neste capítulo. Os sistemas biológicos: nervoso, endócrino e imune,
estão, fisiológica e anatomicamente interligados, interagindo multidirecionalmente para
garantir a homeostase do organismo. Neste contexto, vários eixos biológicos são
identificados e pesquisados na área de neuroendocrinologia, como por exemplo: o eixo
hipotálamo-hipófise-gônadas (H-H-G), o hipotálamo-hipófise-adrenal (H-H-A) e o eixo
imune-pineal. Desta forma, veremos, ao longo deste capítulo, a importância dos estudos em
fisiologia comparada, em especial a neuroendocrinologia, destacando-se as principais vias
de comunicação entre os diferentes eixos biológicos e entre os diferentes grupos de
vertebrados. Adicionalmente, os sistemas nervosos e endócrinos, agem em conjunto para
integrar as informações ambientais com a fisiologia e ecologia (endocrinologia ambiental),
focando não apenas nos fatores ambientais naturais, mas também nos efeitos dos
compostos orgânicos de origem antrópica (disruptores endócrinos). Esses compostos
químicos (poluentes) que podem interagir com o sistema endócrino serão discutidos na
Unidade 6.
Lista de abreviações pág. 301
Capítulo 26 Neuroendocrinologia comparada: análise comparativa entre o encéfalo

e a hipófise de peixes e mamíferos pág. 305
Revisado pela Dra Renata Guimarães Moreira
Capítulo 27 Neuroendocrinologia comparada: o encéfalo e a hipófise de anfíbios,

répteis e aves pág. 323
Revisado pelar Dra. Renata Guimarães Moreira
Capítulo 28 Sistema neuroimunoendócrino pág. 337

Marina Marçola
Revisado por Dr. Eduardo Koji Tamura e Sanseray Cruz-Machado

Lista de abreviações
AA-NAT – enzima aril-alquilamina-N-acetiltransferase

Ach – acetilcolina
ACTH – hormônio adrenocorticotrópico
ADH – hormônio antidiurético
AH – adeno-hipófise
Ala – alanina
ARC – núcleo arqueado
Arg – arginina
Asn – asparagina
Asp – ácido aspártico
AVT – arginina vasotocina
cfGnRH – hormônio liberador de gonadotropinas de catfish
cGnRH-II – hormônio liberador de gonadotropinas de chicken-II
CRH – hormônio liberador de corticotropina
CRH-like – similar ao hormônio liberador de corticotropina
Cys – cisteína
DA – dopamina
DIT – 3,5 diiodotirosina
FSH – hormônio folículo estimulante
GABA – ácido gama-aminobutílico
GH – hormônio de crescimento ou hormônio somatotrópico
GHRH – hormônio liberador de hormônio de crescimento
Gln – glutamina
Glu – ácido glutâmico
Gly – glisina
GnIH – hormônio inibidor de gonadotropinas
GnRH – hormônio liberador de gonadotropinas
gpGnRH – hormônio liberador de gonadotropinas de guinea pig
Gpr54 – receptor acoplado à proteína G (54)
GtHs – gonadotropinas
H-H – hipotálamo-hipófise
H-H-A – hipotálamo-hipófise-adrenal
H-H-G – hipotálamo-hipófise-gônadas
H-H-T – hipotálamo-hipófise-tireóide
HIOMT – enzima hidroxiindol-O-metiltransferase

His – histidina
IGF – fator de crescimento insulínico
IL– interleucina
Ile – isoleucina
IST – isotocina
kiss1/GPR54 – kisspeptina/receptor acoplado à proteína G (54)
Leu – leucina
LH – hormônio luteinizante
LPH – lipotropinas
LPS – lipopolissacarideos
Lys – lisina
MCH – hormônio concentrador de melanina
ME – eminência média
Met – metionina
mGHRH – hormônio liberador de hormônio de crescimento de mamíferos
mGnRH – hormônio liberador de gonadotropinas de mamíferos
MIS – hormônio indutor da maturação final e ovulação
MSH – hormônio melanotrópico
MST – mesotocina
NH – neuro-hipófise
NO – óxido nítrico
NSQ – núcleo supraquiasmático
OC – quiasma óptico
PD – pars distalis
Phe – fenilalanina
PI – pars intermedia
PIF – fator inibidor da prolactina
pjGnRH – hormônio liberador de gonadotropinas de peixe rei
PN – pars nervosa
POA – area pré-óptica
POMC – proopiomelanocortina
PPD – proximal pars distalis
PRF – fator liberador de prolactina
PRL – prolactina
Pro – prolina
PT – pars tuberalis
PVN – núcleo paraventricular

RHs – hormônios liberadores

RIHs – hormônios inibidores
RPD – rostral pars distalis
sbGnRH – hormônio liberador de gonadotropinas de seabream
Ser – serina
sGnRH – hormônio liberador de gonadotropinas de salmão
SHAM – animais falso-operados
SL – somatolactina
SNC – sistema nervoso central
SON – núcleo supra-óptico
SS – somatostatina
T3 – triiodotironina
T4 – tiroxina
Tgb – tiroglobulina
Thr – treonina
TNF – fator de necrose tumoral
TPO – tiróide peroxidase
TRH – hormônio liberador de tireotropina
Trp – triptofano
TSH – hormônio estimulador da tireóide
Tyr – tirosina
Val – valina
VGX – vagotomia bilateral cervical
α7nAchR – receptor nicotínico de acetilcolina α7


Neuroendocrinologia comparada: análise comparativa entre o encéfalo e

a hipófise de peixes e mamíferos

[email protected]
A endocrinologia é uma área específica de uma das disciplinas mais amplas da

biologia, conhecida como fisiologia. Considerando que a fisiologia é o estudo dos processos
biológicos que permitem a vida existir e funcionar, a fisiologia animal comparada tem um
foco nas comparações e contrastes dos mecanismos, processos ou respostas fisiológicas
de diferentes animais (escala evolutiva) ou de uma simples espécie, que estão submetidas a
diferentes condições, sejam elas: naturais ou artificiais (Withers, 1992; Norris, 2007). Já a
neuroendocrinologia, pode ser caracterizada pela interseção entre a neurobiologia e a
endocrinologia, ou seja, é o estudo da modulação exercida pelo cérebro sobre o sistema
endócrino e vice-versa, o estudo dos efeitos exercido pelo sistema endócrino sobre o
cérebro (Zohar e col., 2010). Um dos principais objetivos deste capítulo é ilustrar a
diversidade de processos neuroendócrinos empregados por diferentes grupos de animais
(principalmente em relação às diferenças observadas nos sistemas fisiológicos entre os
mamíferos e os peixes). Adicionalmente, o entendimento do sistema endócrino, é um dos
caminhos essenciais para que se possa entender como os mecanismos bioreguladores e
sistemas evoluíram nos animais e como eles operam para manter a vasta gama de espécies
viventes.
Endocrinologia e neuroendocrinologia: um pouco de história

As glândulas endócrinas, ou glândulas de “secreção interna”, secretam os produtos
sintetizados em seu interior na corrente sanguínea e essas moléculas funcionam como
sinais químicos nos organismos. Esses produtos de secreção, também denominados de
hormônios, assim como os estudos das glândulas endócrinas começaram a ser pesquisados
a cerca de 100 anos atrás (Norris, 2007). O estudo da neuroendocrinologia em mamíferos,
especialmente em relação ao conceito de que o encéfalo controla as funções hipofisárias
está bem estabelecido na literatura (Guyton e Hall, 2006). Segundo Zohar e colaboradores
(2010), este conceito foi estabelecido depois da segunda Guerra Mundial, com os estudos
propondo que fatores liberados pelo encéfalo eram transportados pela corrente sanguínea
até a glândula hipofisária (conhecida também como pituitária) e estimularia a liberação de
substâncias por esta glândula (Donovan e Harris, 1954). Inicialmente, as substâncias
sintetizadas pelo sistema nervoso eram denominadas de fatores, até que, sua estrutura

química específica seja conhecida e passaram a ser denominadas de hormônios (Guyton e

Hall, 2006; Norris, 2007).
Já em peixes, neuroendocrinologia é um assunto mais recente, e as primeiras
informações sobre a relação do hipotálamo e hipófise neste grupo de animais eram
realizadas experimentos, olhando apenas a atividade das células hipofisárias isoladamente,
ou seja, analisando essas atividades celulares da glândula hipofisária, desconectadas do
encéfalo (Olivereau e Ball, 1966). Outros estudos posteriores a esta época, apresentaram
pela primeira vez, em peixes, que extratos encefálicos, estimulavam as células hipofisárias
em carpas (Cyprinius carpio) (Breton e Weil, 1973). Estes estudos foram considerados os
pioneiros em neuroendocrinologia da reprodução em peixes, sendo que, passados
aproximadamente 35 anos, apesar de grandes progressos na área de neuroendocrinologia
em peixes, vários tópicos ainda permanece incertos.
Neuroendocrinologia em mamíferos
O conceito de que o encéfalo coordena às funções hipofisárias em mamíferos está
bem descrito na literatura especializada (Revisões: Withers, 1992; Guyton e Hall, 2006;
Berne e Levy, 1998; Norris, 2007). Neste sentido, forneceremos uma visão geral sobre as
principais características do eixo hipotálamo-hipófise (H-H) em mamíferos, pois, este eixo
pode ser considerado o componente mais complexo e, em alguns casos, o mais dominante
de todo o sistema neuroendócrino.
De uma forma geral, as relações anatômicas e fisiológicas deste eixo são
elaboradas e sutis. Anatomicamente, o encéfalo de mamíferos compreende às seguintes
regiões: cérebro, que pode ser subdividido em: telencéfalo e diencéfalo; cerebelo; e tronco
encefálico, que também pode ser subdividido em: bulbo (localizado mais caudalmente),
mesencéfalo (localizado mais cranialmente) e ponte (localizado entre ambos, bulbo e
mesencáfalo) (Hansen e Koeppen, 2002). Fisiologicamente, um dos principais núcleos
responsável pela coordenação da glândula hipofisária, é o hipotálamo (Withers, 1992;
Guyton e Hall, 2006; Norris, 2007). Em relação à hipófise, esta pode ser dividida em:
hipófise anterior, ou adeno-hipófise (AH); e hipófise posterior, ou neuro-hipófise (NH).
Fisiologicamente, numerosos hormônios são sintetizados, armazenados e liberados pela
hipófise (Berne e Levy, 1998; Norris, 2007). Para melhor compreensão do eixo H-H, a seguir
cada parte deste eixo é considerada separadamente.
Hipotálamo em mamíferos
O hipotálamo desempenha um papel fundamental na regulação da hipófise e pode
ser considerado como uma estação central de transmissão, atuando na recepção,
integração e no redirecionamento de sinais. Nas diferentes regiões (núcleos) hipotalâmicos

são identificados conjuntos de hormônios liberadores e inibidores que se dirigem à hipófise,

regulando a síntese e a liberação de outros hormônios. Originalmente, os nomes dos
peptídeos hipotalâmicos baseiam-se nos hormônios hipofisários, cuja estimulação/secreção,
é influenciada por estes peptídeos (Berne e Levy, 1998). A tabela 1 fornece uma lista de
hormônios hipotalâmicos atualmente conhecidos.
Tabela 1. Hormônios e fatores hipotalâmicos (modificado de Berne e Levy, 1998).
Devido à diversidade de hormônios hipotalâmicos e a complexidade da fisiologia

hormonal, abordaremos apenas um exemplo hormonal para ilustrar toda essa diversidade, o
mecanismo de ação e apresentar algumas interações fisiológicas.
Levando-se em consideração apenas a reprodução, o principal representante do
primeiro passo na cascata de hormônio que participa diretamente na coordenação da
atividade reprodutiva em animais, é o hormônio liberador de gonadotropinas (GnRH)
(Schally e col., 1973). Esta molécula é sintetizada em neurônios específicos do encéfalo e
alcança a glândula hipofisária, estimulando as células gonadotrópicas (GtHs) via sistema
porta em tetrápodes ou por inervação direta das GtHs em peixes teleósteos (Parhar, 2002;
Lethimonier e col., 2004). Adicionalmente, este decapeptídeo foi originalmente caracterizado
em tecidos nervosos de mamíferos (Matsuo e col., 1971; Burgus e col., 1972), no entanto, o
GnRH é identificado em todos os vertebrados, de lampreias a mamíferos (Guilgur e col.,
2006). Acreditava-se que o GnRH de mamíferos era a única forma da molécula, entretanto,
alguns anos depois, foram identificadas outras variantes de GnRH em outros vertebrados
(Sherwood e col., 1983). Desde então, múltiplas formas de GnRH têm sido identificadas em

espécies representativas de todas as classes de vertebrados (Tab. 2) (Weltzien e col.,

2004), ou seja, foram identificadas múltiplas variantes de GnRH em agnatas (Sower e col.,
1993), em elasmobrânquios (Lovejoy e col., 1991a), em peixes teleósteos (Sherwood e
Adams, 2005), em anfíbios (Conlon e col., 1993), em répteis (Lovejoy e col., 1991b), em
aves (Miyamoto e col., 1984) e em mamíferos (White e col., 1998). Segundo Sherwood e
Adams (2005); Guilgur e colaboradores (2006) e Zhang e colaboradores (2008), são
caracterizadas 25 diferentes formas moleculares de GnRH em várias espécies de
vertebrados e invertebrados (14 formas em vertebrados e 11 formas em invertebrados),
entretanto, todas as formas são decapeptídeos, exceto em Octopus vulgaris (Iwakoshi e
col., 2002) e Aplysia californica (Zhang e col., 2008), que possuem doze aminoácidos e,
além disso, os aminoácidos número 01, 04, 09 e 10 são perfeitamente conservados ao
longo da evolução (Tab. 2). É importante salientar, que as diferentes formas de GnRH são
comumente conhecidas pelo nome da espécie em que foi primeiramente isolada (Weltzien e
col., 2004; Guilgur e col., 2006; Tsai, 2006).
Em geral, duas formas de GnRH têm sido identificadas no sistema nervoso de uma
única espécie, o cGnRH-II (chicken-II) localizado em áreas do cérebro médio (midbrain),
cuja função ainda é especulativa e uma outra forma, relacionada com a liberação das GtHs
pela hipófise (Gorbman e Sower, 2003). Em mamíferos, essa outra forma de GnRH
identificada foi o mGnRH (mamíferos) ou gpGnRH (guinea pig) (Dubois e col., 2002;
Whitlock, 2005). Essa variedade de formas de GnRH, também sugere-se que existam
diferentes formas de receptores para GnRH, mas em geral, as diferentes formas de GnRHs
exercem diversas ações intracelulares através de ligações específicas com os receptores
acoplados à proteína-G (família Gq/11), como por exemplo, a ativação da fosfolipase C,
elevação do segundo mensageiro, ativação da proteína kinase C e mobilização do cálcio
(Blomenröhr e col., 2005). Os receptores de mGnRH diferem de outros receptores
acoplados a proteína-G, pois, faltam a cauda C-terminal e apresentam mudanças em alguns
aminoácidos altamente conservados (Blomenröhr e col., 2002).
A modulação (inibição e/ou estimulação) dos neurônios de GnRH está sob a
influência de substâncias carreadas pela corrente sanguínea (feedback), uma vez que, a
liberação de GnRH, estimula as células gonadotrópicas a produzirem os hormônios
gonadotrópicos, que por sua vez, geram alterações nas concentrações dos hormônios das
glândulas periféricas, e estes, podem exercer um controle por feedback no hipotálamo
(Berne e Levy, 1998).

Tabela 2. Estrutura das 25 formas de hormônio liberador de gonadotropinas (GnRH) conhecidas.

Os aminoácidos grifados em azul são diferentes da forma de GnRH de mamíferos. As formas de
GnRH grifadas em cinza, tem sido identificadas em peixes. Adaptado de: Iwakoshi e col., (2002);
Sherwood e Adams, (2005); Guilgur e col., (2006).
Adicionalmente, outras complexas interações de sinais neuronais, que se

convergem para os neurônios hipotalâmicos, estariam atuando nesta modulação do GnRH.
Alguns exemplos de interações de sinais neuronais são: alterações das características
ambientais, semelhantes, ao fotoperíodo (alternância de claro e escuro), mudanças de
temperatura, entre outros, são convertidos em sinais eletroquímicos e são transmitidos via
neurônios sensoriais até o hipotálamo, influenciando na síntese e liberação de GnRH (Takei
e Loretz, 2006); o ciclo de claro e escuro (dia/noite), que estimula a glândula pineal a
sintetizar a melatonina, que por sua vez, pode atuar na modulação do GnRH (Ekströn e
Meissl, 1997); a kisspeptina, uma nova proteína descoberta recentemente e o seu receptor

(GPR54), ambos são regulados pelos esteróides gonadais, e também estão diretamente
relacionado com a secreção de GnRH (Colledge, 2008). E ainda no ano 2000, foi
identificado um novo dodecapeptídeo hipotalâmico que age diretamente sobre a hipófise,
inibindo a liberação de GtHs, denominado de hormônio inibidor de gonadotropinas (GnIH)
(Tsutsui e Osugi, 2009). Estes são alguns exemplos de interações fisiológicas observadas
nos animais.
A proposta desta introdução foi mostrar o histórico dos hormônios hipotalâmicos,
i.e. quando foram descobertos, a sua natureza química, as diferentes formas (quando for
aplicado), as possíveis células alvos, o mecanismo de ação, o mecanismo de modulação
(inibição e/ou estimulação) e suas interações fisiológicas com outros eixos biológicos. Desta
forma, foi discutida resumidamente, a complexidade fisiológica observada nos neurônios
hipotalâmicos, e agora, veremos como agem estas substâncias quando são liberadas no
sistema porta hipofisário (presente em mamíferos e ausente em peixes teleósteos), sistema
este, de grande importância para a regulação das funções hipofisárias, pois através deste
sistema, os neuro-hormônios sintetizados no hipotálamo podem ser levados diretamente a
AH, controlando as funções de suas células.
Hipófise em mamíferos
Como dito anteriormente, a hipófise pode ser dividida em duas porções distintas, a
adeno-hipófise (AH), ou hipófise anterior, a neuro-hipófise (NH), ou hipófise posterior, e
entre essas duas partes, há uma zona intermediária, chamado de pars intermedia (Guyton e
Hall, 2006; Berne e Levy, 1998). Esta zona intermediária é pouco desenvolvida em
mamíferos (humanos), sendo maior e mais funcional em outros vertebrados.
Embriologicamente, a NH, se origina do assoalho do diencéfalo e constitui a porção nervosa
da hipófise e a AH se origina do ectoderma do teto da cavidade oral primitiva (Junqueira e
Carneiro, 2004). Desta forma, dois hormônios são sintetizados por neurônios no hipotálamo,
e são armazenados e liberados pela NH, são eles: o hormônio antidiurético (ADH) e a
ocitocina. Já na AH, cinco tipos celulares são possíveis de identificar: as células
corticotrópicas, que sintetizam a adrenocorticotropina (ACTH) e a β-lipotropina; as células
tireotrópicas, que produzem a tireotropina (TSH); as células gonadotrópicas que sintetizam o
hormônio luteinizante (LH) e o hormônio folículo estimulante (FSH); as células
somatotrópicas que produzem o hormônio de crescimento (GH) e as células lactotrópicas,
que sintetizam a prolactina (PRL) (Guyton e Hall, 2006). A tabela 3 fornece uma lista de
hormônios hipofisários atualmente conhecidos.
Os hormônios hipofisários em mamíferos, como observado para os hormônios
hipotalâmicos, são bem conhecidos na literatura especializada (Revisões: Withers, 1992;
Guyton e Hall, 2006; Berne e Levy, 1998; Norris, 2007). Em geral, as funções dos hormônios

hipofisários podem ser sintetizadas da seguinte forma: o ADH, também conhecido como
arginina-vasopressina, formado primariamente nos núcleos supra-ópticos (são
polipeptídeos), tem a função primária de conservar a água corporal e regular a tonicidade de
líquidos corporais, ou seja, a ausência de ADH impede a reabsorção significativa de água
pelos ductos coletores (excreção diminuída de água pelos rins) e na presença de ADH, a
permeabilidade dos ductos à água aumenta muito, conservando assim a água no corpo e
produzindo uma urina muito concentrada. Já a ocitocina, é formada primariamente nos
núcleos paraventriculares (são polipeptídeos) e o papel principal consiste em ejetar o leite
da glândula mamária no processo de lactação, mas também apresenta um papel nas
contrações do útero, especialmente ao final da gestação (Guyton e Hall, 2006; Berne e
Levy, 1998).
Tabela 3. Hormônios hipofisários atualmente conhecidos (modificado de Berne e Levy, 1998).
Em relação à AH, o hormônio ACTH, produzido pelas células corticotrópicas, é um

hormônio, cuja função fisiológica consiste em regular o crescimento e a secreção do córtex
supra-renal, ou seja, os hormônios mais importantes de sua glândula alvo são os
corticosteróides, relacionados com o metabolismo (controle do metabolismo de proteínas,
carboidratos e gorduras) e com o estresse nos animais. O ACTH é estimulado pelo
hormônio liberador de corticotropina (CRH), sintetizado pelo hipotálamo. O hormônio TSH,
sintetizado pelas células tireotrópicas, é um hormônio glicoprotéico, cuja função consiste em
regular o crescimento e o metabolismo da tireóide e a secreção de seus respectivos
hormônios (a tiroxina, T4 e a triiodotironina, T3), relacionado também com o metabolismo
corporal. O TSH, por sua vez, é estimulado pelo hormônio liberador de tireotropina (TRH).
As células gonadotrópicas, que sintetizam o FSH e o LH, que são hormônios glicoprotéicos,
estão diretamente relacionadas com a reprodução animal, atuando principalmente nas
gônadas, estimulando a síntese dos esteróides gonadais (testosterona, progesterona e
estradiol) e como descrito acima (item 2.1.), as GtHs são estimuladas pelo GnRH

(sintetizado no hipotálamo). O GH e a PRL, são hormônios cuja função fisiológica consiste

respectivamente em: estimular o crescimento e o desenvolvimento somático pós-natais e
ajuda a manter a massa corporal magra e a massa óssea normais em adultos, além de
atuar no metabolismo, incluindo especificamente, o aumento da síntese protéica,
mobilização dos ácidos graxos e diminuição da taxa de utilização da glicose; já a PRL, em
humanos, participa na estimulação do desenvolvimento das mamas e na produção de leite.
O GH é estimulado pelo hormônio liberador do hormônio de crescimento (GHRH) e inibido
pela somatostatina (SS), ambos sintetizados em núcleos hipotalâmicos. A PRL é estimulada
pelo fator liberador de prolactina (PRF) e inibido pelo fator inibidor da prolactina (PIF), mas
também sofre influência negativamente pela SS e positivamente pelo TRH. Para maiores
informações sobre os hormônios hipofisários em mamíferos, ver as revisões de: Guyton e
Hall, (2006) e Berne e Levy, (1998). Adicionalmente, a figura 1 sintetiza os principais pontos
abordados no eixo H-H em mamíferos.
Figura 1. A combinação das tabelas 1 e 3, sumarizando o eixo hipotálamo-hipófise em

mamíferos. Modificado de Berne e Levy, (1998) e Guyton e Hall, (2006).
Neuroendocrinologia em peixes
Em geral, a neuroendocrinologia em peixes, é um assunto recente se compararmos
este tema com os mamíferos. Neste caso, uma abordagem geral em peixes se faz

necessária para posteriormente entendermos as diferenças observadas neste diverso grupo

de vertebrados e compará-los com o grupo dos mamíferos.
Os peixes em geral são os representantes mais numerosos e diversos entre os
vertebrados, contando com aproximadamente 50% deste grupo (Nelson, 2006; Moyle e
Cech, 2003). São conhecidas cerca de 28000 espécies viventes de peixes que ocupam os
mais diversos ambientes aquáticos, ocorrendo desde as altas altitudes até as fossas
submarinas dos oceanos. Em relação à sua distribuição, 58% são marinhos, 41% são
dulciaqüícolas e 1% vivem entre esses dois ambientes, ou seja, essas espécies realizam
migrações entre o ambiente marinho e o ambiente de água doce (Wooton, 1990). Além da
importância como fonte alternativa de alimento, os peixes também constituem uma rica fonte
de material biológico que podem ser utilizados como modelos para entender os controles
dos processos biológicos (Blázquez e col., 1998).
Desta maneira, com esse grande número de espécies existentes, a constantes
descobertas de novas espécies e a distribuição mundial, esse sucesso do grupo é atribuído
a uma série de adaptações fisiológicas, anatômicas, morfológicas, comportamentais entre
outras características relacionadas aos processos de respiração, nutrição, osmorregulação,
flutuação, percepção sensorial e reprodução (Hoar, 1969; Wooton, 1990; Moyle e Cech,
2003; Zavala-Camin, 2004). Em relação à reprodução, os peixes são ótimos exemplos da
complexidade reprodutiva, com as diferentes formas anatômicas observados nas gônadas
entre as espécies; as diferentes formas de liberação dos gametas para a fertilização externa
(como por exemplo, a desova total ou a desova parcelada); desenvolvimento de diferentes
órgãos especializados para a fertilização interna (gonopódio, por exemplo); as diferentes
formas de cuidado com a prole (guardadores e não guardadores de ovos e larvas); além das
diferentes formas de construções de ninhos e a migração reprodutiva, seja nas formas de
“piracema” ou naquelas longas migrações entre os mares e os rios e vice-versa, que são
acompanhadas por grandes alterações osmóticas e metabólicas (Wooton, 1990; Vazzoler,
1996; Lowe-McConnell, 1999; Hochachka e Somero, 2002; Moyle e Cech, 2003; Zavala-
Camin, 2004).
Todos estes mecanismos apresentados acima sofrem influência direta ou
indiretamente do eixo hipotálamo-hipófise e levando-se em consideração o mesmo exemplo
apresentado acima para o hipotálamo em mamíferos (item 2.1.), apresentaremos as
diferenças observadas no hormônio liberador de gonadotropinas (GnRH) entre peixes e
mamíferos.
Hipotálamo em peixes
O conceito de que o hormônio liberador de gonadotropinas (GnRH) é um
neuropeptídeo hipotalâmico essencial na cascata de hormônios que coordena a fisiologia

reprodutiva, ou seja, o GnRH é um link essencial na integração dos estímulos externos e

internos que controlam a reprodução em todos os animais, também é aplicado aos peixes
teleósteos (Weltzien e col., 2004; Guilgur e col., 2006; Zohar e col., 2010). O GnRH é
sintetizado em áreas específicas do encéfalo de peixes e estimula a produção de GtHs na
AH, que em teleósteo, ao contrário dos mamíferos, ocorre via inervação direta das células
gonadotrópicas (Lethimonier e col., 2004; Guilgur e col., 2006).
Neste contexto, em várias espécies foram descritas múltiplas formas de GnRH,
sendo que, para a maioria das espécies de peixes foram encontradas três formas, sendo:
cGnRH-II (chicken II), sGnRH (salmon) e uma terceira forma que pode ser considerada
específica (Weltzien e col., 2004; Guilgur e col., 2006; Zohar e col., 2010). Em geral para
Characiformes (Characidae) a terceira forma de GnRH encontrada foi o sbGnRH
(seabream) (Powell e col., 1997), para Cyprinidontiformes (Atherinopsidae) o pjGnRH (peixe
rei) (Somoza e col., 2002), para Perciformes (Cichlidae) o sbGnRH (Pandolfi e col., 2005),
entre outras formas (Lethimonier e col., 2004; Guilgur e col., 2006). Entretanto, em algumas
espécies de teleósteos, apenas 2 formas de GnRH foram identificadas, como por exemplo,
em Siluriformes, no qual, foram identificado apenas o cfGnRH (catfish) e o cGnRH-II
(chicken II) (Bogerd e col., 1994; Zandbergen e col., 1995; Dubois e col., 2002). A presença
destas diferentes formas de GnRH identificadas em várias espécies de teleósteos levanta a
questão sobre a precisa função das múltiplas formas de GnRH e o controle da reprodução e
de outros processos fisiológicos, como por exemplo, o comportamento reprodutivo.
Ainda em relação a diferentes formas de GnRH, em peixes teleósteos, os neurônios
sintetizadores de GnRH apresentam distribuição neuro-anatômica diferenciada, como por
exemplo, o sGnRH é expresso por neurônios do gânglio nervoso terminal, o cGnRH-II pelos
neurônios localizados no tegumento do mesencéfalo (anterior, o “midbrain”) e na região
posterior do diencéfalo (o sinencéfalo) e a terceira forma é expressa principalmente pelos
neurônios pré-ópticos (telencéfalo ventral), hipotálamo basal e glândula hipofisária (ver
revisões de: Gorbman e Sower, 2003; Guilgur e col., 2006; Zohar e col., 2010). Com isto, as
diferentes formas de GnRH são identificadas em diferentes regiões do encéfalo e
adicionalmente, tem sido observado diferentes origens embriológicas destes neurônios que
sintetizam e secretam este hormônio (Dubois e col., 2002; González-Martínez e col., 2004;
Pandolfi e col., 2005). As diferentes funções destas diversas formas de GnRHs encontradas
em peixes, ainda são discutidas na literatura especializada. Sugere-se que o cGnRH-II atue
como um neuromodulador e/ou possui um papel fundamental no comportamento
reprodutivo. Já a segunda ou terceira forma, está relacionada especificamente com a
reprodução, ou seja, sugere-se que esteja relacionada com a liberação das GtHs na adeno-
hipófise dependendo da espécie a ser considerada (Dubois e col., 2002; Sherwood e
Adams, 2005; Pandolfi e col., 2005).

Em peixes teleósteos não é observado um sistema porta hipotálamo-hipofisário

(como em mamíferos) e com isso, as fibras nervosas de GnRH terminam próximas as
células gonadotrópicas da AH e como consequência, os GnRHs estão presentes nos
extratos de encéfalo e de hipófise. Entretanto, em vários teleósteos, pelo menos uma das
formas de GnRH encontrada no encéfalo não foi detectável na hipófise, levantando-se outra
questão a respeito de qual (ou quais) formas estão presentes na hipófise e qual (is) estimula
(m) a produção de GtHs na AH (Powell e col., 1994; Somoza e col., 1994; Goos e col.,
1997). Neste sentido, alguns estudos apontam que, apenas o cGnRH-II foi identificado no
encéfalo e não foi observado na hipófise (é importante salientar que o cGnRH-II é
identificado em todas as espécies de teleósteos) e com isso, a distribuição diferencial das
diferentes formas de GnRHs sugerem diferentes funções para estes diferentes peptídeos
(Goos e col., 1997). Neste contexto, a identificação exata das formas de GnRH e a
distribuição é de suma importância para entender os primeiros passos no controle da
reprodução de peixes teleósteos.
As espécies da Ordem Siluriformes são bons modelos biológicos por apresentarem
diferenças dentro deste grupo de peixes teleósteos em relação aos demais grupos, como
por exemplo, no catfish africano, apenas duas formas de GnRH foram identificadas, como
mencionado anteriormente (cGnRH-II e cfGnRH), entretanto, não necessariamente as duas
formas de GnRH são liberadas na hipófise e controlam a síntese e liberação de
gonadotropinas, pois, peixes teleósteos não apresentam sistema porta hipotálamo-hipófise e
a morfologia da NH e AH é exclusiva em teleósteos (Zandbergen e col., 1995; Dubois e col.,
2001). Adicionalmente, neste grupo, por exemplo, em extratos de hipófise (Schulz e col.,
1993) e de encéfalo (Bogerd e col., 1992) de catfish africano, foram identificadas estas duas
formas de GnRH, e em alguns estudos indicam a presença de apenas uma gonadotropina
(Schulz e col., 1995; Agulleiro e col., 2006). Portanto, sugere-se que as duas formas de
GnRH observadas em catfish africano estejam relacionadas com a liberação de apenas uma
gonadotropina. A identificação da presença de uma ou duas gonadotropinas em
Siluriformes, ainda não é bem compreendida. Desta forma, uma análise descritiva na
hipófise de peixes teleósteos se faz necessária, o que veremos a seguir.
Hipófise em peixes
A hipófise em peixes, assim como em mamíferos, é dividida em duas regiões
distintas: a adeno-hipófise (tecido glandular endócrino) e a neuro-hipófise (origem nervosa),
identificadas de acordo com os diferentes tipos celulares, e provavelmente, possuem a
mesma origem embriológica que os mamíferos (Junqueira e Carneiro, 2004; Weltzien e col.,
2004). Em relação aos hormônios hipofisários, na região da NH, são encontradas as
terminações axonais dos neurônios hipotalâmicos, sendo que, em geral, nos teleósteos

nessa região são liberadas os neuro-hormônios, como por exemplo, a arginina – vasotocina
(AVT), a isotocina (IST) e o hormônio concentrador de melanina (MCH), entre outros
neuropeptídeos (Acher, 1996; Batten e col., 1999; Duarte e col., 2001; Weltzien e col., 2004;
Kawauchi, 2006). Apesar de a NH estar diretamente relacionada com a reprodução, os
estudos sobre o controle neuroendócrino das funções hipofisárias em teleósteos requerem o
conhecimento da morfologia da hipófise, inervação dessa hipófise e a identificação e
localização dos diferentes tipos celulares encontradas na região da AH (Weltzien e col.,
2004).
Em geral, a AH em peixes é subdividida em três regiões distintas, no que diz
respeito ao arranjo e localização topográfica das células, características tintoriais dessas
células e distribuição dos ramos da NH (Laiz-Carrión e col., 2003; Cala e col., 2003;
Weltzien e col., 2004; Kawauchi e Sower, 2006; Cinquetti e Dramis, 2006). Essas regiões
são denominadas de: “pars intermedia” (PI), “rostral pars distalis” (RPD) e “proximal pars
distalis” (PPD). Na PI encontram-se as células produtoras de melanotropina (MSH) e as
células produtoras de somatolactina (SL); na PPD localizam-se as células produtoras de
gonadotropinas (GtHs), comumente chamadas de FSH (hormônio folículo estimulante) e de
LH (folículo luteinizante). As células produtoras de tireotropina (TSH) e as células produtoras
de hormônio de crescimento (GH), conhecidas como células somatotrópicas, também são
identificadas na região PPD. Já a RPD contém as células produtoras de prolactina (PRL) e
as células produtoras de hormônio adrenocorticotrópico (ACTH). Adicionalmente, segundo
Kawauchi e Sower (2006), os hormônios adeno-hipofisários podem ser agrupados conforme
sua similaridade estrutural e funcional em 3 famílias: a família derivada de
proopiomelanocortina, que abrange a adrenocorticotropina (ACTH) e a melanotropina
(MSH); a família prolactina/somatotropina, que inclui prolactina (PRL), hormônio de
crescimento (GH) e somatolactina (SL); e a família dos hormônios glicoprotéicos, que
contém gonadotropinas (GtH) e tireotropina (TSH) (Agulleiro e col., 2006; Takei e Loretz,
2006; Kawauchi e Sower, 2006).
É importante salientar, que todos esses hormônios, exceto a somatolactina, estão
presentes nos outros vertebrados (Ono e col., 1990; Kaneko, 1996). Neste caso, as funções
fisiológicas dos hormônios hipofisários são semelhantes ao apresentado para mamíferos e,
portanto, serão discutidas apenas as diferenças observadas entre estes dois grupos de
vertebrados. Proopiomelanocortina (POMC) é um precursor protéico de vários hormônios,
como por exemplo, a adrenocoticotropina (ACTH), melanotropina (MSH) e β-endorfina
(Kawauchi e Sower, 2006). O papel fisiológico de ACTH é estimular a síntese e liberação de
cortisol no tecido inter-renal de teleósteos (Segura-Noguera e col., 2000), sendo que, em
teleósteos, o principal hormônio desta glândula é o cortisol, e em peixes, este hormônio atua
em vários processos fisiológicos, como por exemplo, no metabolismo, nos aspecto

relacionados ao estresse e na osmorregulação (Segura-Noguera e col., 2000; Kawauchi e

Sower, 2006). Em relação ao MSH, o papel fisiológico desse hormônio em teleósteos é
estimular a dispersão dos grânulos de pigmentos nos melanócitos, produzindo assim uma
rápida mudança de coloração no peixe (Cala e col., 2003; Kawauchi e Sower, 2006).
Sabe-se ainda, que o papel fisiológico da PRL em teleósteos, está relacionado
principalmente com a osmorregulação (Segura-Noguera e col., 2000; Forsyth e Wallis, 2002;
Cala e col., 2003; Kawauchi e Sower, 2006; Mancera e Fuentes, 2006). Adicionalmente,
alguns estudos indicam que a PRL esteja envolvida também na reprodução e nos aspectos
relacionados ao estresse (Cala e col., 2003). O hormônio GH tem um papel fundamental na
regulação do crescimento e desenvolvimento em teleósteos, além de estar envolvido em
outros processos fisiológicos, como por exemplo, osmorregulação, reprodução e
metabolismo (Segura-Noguera e col., 2000; Forsyth e Wallis, 2002; Cala e col., 2003;
Kawauchi e Sower, 2006; Agulleiro e col., 2006).
As células produtoras de somatolactina (SL), também conhecidas como PIPAS-
cells, foram primeiramente descritas por Ono e colaboradores (1990); Rand-Weaver e
colaboradores (1991); e até o momento este hormônio só foi encontrado em peixes
(Kaneko, 1996; Kawauchi e Sower, 2006). Apesar de ser um hormônio descoberto a mais ou
menos 20 anos atrás, o verdadeiro papel fisiológico da SL em peixes, ainda continua
desconhecido. Algumas evidências indicam que a SL esteja envolvida em vários processos
fisiológicos, como por exemplo: no metabolismo, na regulação ácido-básica e na
osmorregulação (Kakizawa e col., 1993; Kakizawa e col., 1995; Kaneko, 1996), no
desenvolvimento embriológico (Laiz-Carrión e col., 2003), nos aspectos relacionados ao
estresse (Rand-Weaver e col., 1993; Kaneko, 1996), na reprodução (Olivereau e Rand-
Weaver, 1994; Kaneko, 1996; Vissio e col., 1997; Johnson e col., 1997; Mousa e Mousa,
2000) e na produção de esteróides sexuais (Planas e col., 1992; Mayer e col., 1998).
Em relação ao TSH, as possíveis funções fisiológicas deste hormônio seriam: pode
estar envolvido na metamorfose em Pleuronectiformes (Schreiber e Specker, 1999), no
desenvolvimento ontogenético (larval) (Laiz-Carrión e col., 2003) e indiretamente na
reprodução, pois, foi observado que o hormônio tireoidiano (T3) intensifica o efeito
estimulatório do GnRH em Salmo trutta (Mylonas e col., 1994) e em outros trabalhos
sugerem que os hormônios tireoidianos agem sinergisticamente com as gonadrotopinas
(Sullivan e col., 1989 apud Mylonas e col., 1994).
Finalmente, os últimos hormônios hipofisários a serem discutidos neste capítulo,
são as GtHs, ou seja, o FSH e o LH. Estes hormônios exercem um papel fisiológico muito
importante na reprodução de peixes, desta forma, abordaremos especificamente o eixo H-H-
G em peixes e as possíveis relações com o ambiente externo, tanto em relação ao estímulo
para a reprodução como no bloqueio do mesmo.

Eixo hipotálamo-hipófise-gônadas em peixes e sua relação com o ambiente

externo
A reprodução em peixes, apesar de ser modulada por fatores ambientais
(temperatura, fotoperíodo, pluviosidade entre outros), é controlada endogenamente por um
sistema endócrino, principalmente pelo eixo hipotálamo-hipófise-gônadas, que sintetiza e
libera gonadotropinas, esteróides gonadais e hormônios moduladores do processo
reprodutivo entre outras substâncias (Takei e Loretz, 2006; Zohar e col., 2010; Levavi-Sivan
e col., 2010). Esse processo ocorre naturalmente com o desenvolvimento das gônadas,
maturação, liberação e fertilização dos gametas, sendo que em geral, em peixes, a desova e
a fertilização ocorrem no ambiente externo (Rocha e Rocha, 2006). Os ovos fertilizados
originam embriões e posteriormente larvas, que crescem e se tornam adultos, reiniciando o
ciclo.
Em geral, a fisiologia da reprodução em peixes pode ser sintetizada da seguinte
forma (Fig. 2) (Blázquez e col., 1998; Weltzien e col., 2004; Zohar e col., 2010; Levavi-Sivan
e col., 2010): a partir do momento em que a idade e o peso mínimo são atingidos para o
início da reprodução, alterações ambientais como o fotoperíodo, a temperatura e,
possivelmente as chuvas, são captadas através dos olhos, pineal, narinas e receptores
cutâneos, que as convertem em sinais eletroquímicos e são transmitidos via neurônios
sensoriais até o hipotálamo. O papel do fotoperíodo na influência sazonal do ciclo
reprodutivo em peixes teleósteos é bem estabelecido na literatura, entretanto, os
mecanismos fisiológicos envolvidos nesta modulação ainda não são bem compreendidos.
Em várias espécies de teleósteos, foram registrados, efeitos positivos, negativos ou nenhum
efeito da melatonina sobre a maturação gonadal. Por outro lado, sabe-se também, que a
secreção da melatonina é realizada durante a fase escura e acredita-se que este hormônio
seja um dos principais responsáveis pelos efeitos do fotoperíodo sobre o sistema endócrino
(Kah e col., 1999; Falcón e col., 2010). Adicionalmente, este preciso link entre as
mensagens do fotoperíodo e os efeitos sobre o sistema neuroendócrino em peixes,
precisam ser investigados mais profundamente.

Figura 2. Representação esquemática dos principais fatores relacionados com o controle

neuroendócrino da reprodução em peixes teleósteos (explicações no decorrer do texto). Imagens:
Renato Massaaki Honji, Rafael Henrique Nóbrega e Leonardo Gastón Guilgur.

Os fatores ambientais citados estimulam o hipotálamo a sintetizar e liberar o

hormônio liberador de gonadotropinas (GnRH), que estimula as células gonadotrópicas na
hipófise a sintetizar e liberar o hormônio folículo estimulante (FSH), que via corrente
sanguínea chega às camadas foliculares dos oócitos em desenvolvimento e na camada
teca, converte o colesterol em testosterona. Esta é transportada à camada granulosa, na
qual é aromatizada a 17-estradiol pela enzima aromatase, também sob influência do FSH.
O 17-estradiol age no fígado (via corrente sanguínea), estimulando a síntese da
glicolipofosfoproteína (vitelogenina) que, também via corrente sanguínea, é “sequestrada”
pelo oócito por micropinocitose (processo dependente de FSH), promovendo o crescimento
do oócito e incorporação de vitelo.
A detecção da vitelogenina, como precursora do vitelo tem sido intensamente
pesquisada nas últimas décadas, desde a síntese do 17-estradiol como produto de ação no
fígado até estudos com enfoques ambientais, como por exemplo, os disruptores endócrinos
que são fatores externos que podem afetar o sistema endócrino e assim toda a fisiologia
reprodutiva (GoksØyr e col., 2003). Os machos de teleósteos também possuem o gene para
vitelogenina, entretanto, o mesmo não é expresso devido ao baixo nível de estradiol
circulante, podendo ser expresso em situações adversas, como por exemplo, na exposição
dos indivíduos aos poluentes com ação estrogênica (Moncaut e col., 2003). Este assunto
será descrito intensamente no capítulo de ecotoxicologia, principalmente em relação aos
disruptores endócrinos na neuroendocrinologia.
Assim, na fase de vitelogênese, que é um processo pelo qual o citoplasma do
oócito acumula substâncias de reservas para posterior utilização pela larva, ocorre um
aumento nos níveis plasmáticos de 17-estradiol e testosterona e esse aumento inibe a
síntese de FSH (feedback negativo) e juntamente com a ação do GnRH estimulam a
secreção do hormônio luteinizante (LH) nas fases finais da vitelogênese. O LH estimula a
camada teca do folículo a produzir 17-hidroxiprogesterona, que é transportada à camada
granulosa e convertida a 17α,20-dihidroxy-4-pregnen-3-one ou 17α,20-21-trihidroxy-4-
pregnen-3-one pela enzima 20-hidroxiesteróide-desidrogenase, dependendo da espécie
considerada (Peter e Yu, 1997). O hormônio 17-20-dihidroxy-4-pregnen-3-one é
conhecido como o hormônio indutor da maturação final e da ovulação (MIS) na maioria dos
peixes. Nos machos, o controle da síntese de esteróides é semelhante ao das fêmeas. FSH
e LH estimulam a esteroidogênese testicular e a espermatogênese, sendo os andrógenos,
testosterona e 11-cetotestosterona produzidos pelas células de Leydig no tecido intersticial
dos testículos, sendo, esses hormônios gonadais os mais importantes no desenvolvimento
do testículo e das características sexuais secundárias nos machos (Grier, 1993; Cyr e Eales,
1996; Nagahama, 2000; Haider, 2004; Garcia-López e col., 2006).

Recentemente, foi descoberto mais um sistema neuroendócrino que possui íntima

relação com a regulação da reprodução e da puberdade em vertebrados, o chamado
sistema kiss1/GPR54 (Zohar e col., 2010; Taranger e col., 2010). Zohar e colaboradores
(2010), que apresentam resultados obtidos em relação ao sistema kiss1/GPR54 em peixes,
confirmam a existência deste sistema em vertebrados considerados mais basais durante a
evolução deste grupo. Por outro lado, estudos adicionais sobre este novo sistema
neuroendócrino em espécies de peixes que apresentam distintas estratégias reprodutivas é
necessário (Zohar e col., 2010). Portanto, estas múltiplas e complexas interações hormonais
existentes entre os vários sistemas (sensoriais e reprodutivos) durante a reprodução dos
peixes é controlada endogenamente pelo sistema neuroendócrino, principalmente pelo eixo
hipotálamo-hipófise-gônadas como dito anteriormente (Fig. 2).
De uma forma em geral, sabe-se que todo esse controle ocorre quando os peixes
encontram-se no ambiente natural, mas altera-se de alguma forma, ainda pouco
esclarecida, quando espécies migradoras são transferidas para o cativeiro, em operações
de cultivo, pois neste ambiente confinado, os peixes não conseguem eliminar os seus
gametas. Neste caso, intervenções hormonais exógenas em diferentes níveis do eixo
hipotálamo-hipófise-gônadas (Fig. 2) são necessárias para dar continuidade ao processo de
maturação gonadal (Zohar e Mylonas, 2001), procedimento necessário para a maioria das
espécies ícticas tropicais, por serem reofílicas (peixes de piracema). Adicionalmente,
considerando-se que as espécies de peixes de piracema, quando são impedidas de migrar,
apresentam um bloqueio na reprodução, fica evidente, que a construção de reservatórios
nos rios brasileiros causa grandes impactos no ciclo de vida dos peixes reofílicos,
principalmente nos aspectos relacionados à fisiologia reprodutiva.
Os estudos sobre a disfunção endócrina de peixes em cativeiro, principalmente em
relação ao eixo hipotálamo-hipófise-gônadas são escassos mesmo em espécies de clima
temperado, e raros em teleósteos de clima tropical, e o fato de que muitas espécies de
peixes encontram-se em vias de extinção, tornam as pesquisas envolvendo o eixo H-H-G de
suma importância, pois, estes estudos contribuem para uma ação urgente de conhecimento
da fisiologia reprodutiva dessas espécies, para que não ocorra o risco de uma espécie ser
extinta sem nem mesmo ter sido estudada a sua fisiologia reprodutiva, premissa básica para
um futuro trabalho de repovoamento da espécie. Adicionalmente, veremos no capítulo 32,
os efeitos dos poluentes (disruptores endócrinos) na neuroendocrinologia dos animais.


Neuroendocrinologia comparada: o encéfalo e a

hipófise de anfíbios, répteis e aves

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Considerando-se a evolução do sistema nervoso dos vertebrados pode-se dizer

que a tendência mais importante foi o aumento na complexidade, no tamanho, na
conformação e na capacidade funcional do encéfalo. Este processo evolutivo, também
denominado encefalização, levou a consolidação de diversas capacidades funcionais,
incluindo as respostas rápidas às informações do ambiente interno e externo, a alta
capacidade de armazenar informações e um aumento na complexidade e flexibilidade do
comportamento destes animais. Outra consequência da encefalização foi a capacidade de
formar associações entre eventos passados, presentes e, pelo menos em humanos, eventos
futuros (Hickman e col., 2004).
O evento da encefalização gerou em todos os vertebrados um órgão que é o centro
de controle do organismo, sendo este centro o integrador de todas as funções fisiológicas.
Os diversos sistemas que formam o organismo não funcionam de modo independente. Ao
contrário, estão ao mesmo tempo em funcionamento, respondendo a diferentes estímulos
para a realização dos processos vitais, gerando também assim, um ritmo biológico. Desta
forma, o sistema nervoso e o sistema endócrino são os maiores responsáveis pela
coordenação dos ajustes das atividades de cada sistema fisiológico que compõe um
organismo vertebrado, sendo o encéfalo considerado também um importante órgão produtor
de hormônios (Schmidt-Nielsen, 2002).
Neste contexto, no presente capítulo serão apresentados, de forma comparativa
entre os grupos de vertebrados: anfíbios, répteis e aves, alguns aspectos da anatomia e dos
efeitos fisiológicos de hormônios produzidos pelo eixo hipotálamo-hipófise e a influência
destes em outros sistemas.
Breve descrição do desenvolvimento do sistema nervoso em vertebrados

O sistema nervoso central dos vertebrados surge, na fase embrionária, de uma
faixa dorsal ectodérmica, que é conhecida como placa medular. Esta placa se invagina para
formar um tubo oco, chamado tubo neural. A extremidade anterior deste tubo se alarga e
cresce muito mais rapidamente do que o restante e dá origem a um encéfalo primitivo,
composto por três vesículas primárias. No sentido antero-posterior estas vesículas são
denominadas prosencéfalo, mesencéfalo e rombencéfalo. A parte contínua do tubo neural,

posterior ao rombencéfalo, da origem à medula espinhal e grande parte do restante do

sistema nervoso (Orr, 2000; Hickman e col., 2004).
Mesmo nos vertebrados mais primitivos como os ciclóstomos (lampreias e peixes-
bruxa) a vesícula anterior e a posterior se subdividem em duas partes, formando o total de
cinco vesículas encefálicas. Assim, o prosencéfalo divide-se em telencéfalo e diencéfalo, o
mesencéfalo não se divide, e o rombencéfalo divide-se em metencéfalo e mielencéfalo (Orr,
2000; Hickman e col., 2004).
Em todos os vertebrados, o telencéfalo dá origem aos lobos olfativos e ao cérebro,
no entanto a importância destas duas novas estruturas varia marcadamente na escala
filogenética. Sobre este mesmo aspecto, uma das grandes e notáveis mudanças associada
à importância do desempenho do papel biológico destas duas estruturas, foi como o cérebro
de grupos mais primitivos, como o dos peixes e anfíbios, se expandiu para formar uma
estrutura profundamente sulcada e enormemente emaranhada na linhagem que leva aos
mamíferos (Hickman e col., 2004). Nos peixes o telencéfalo se desenvolve em lobos
olfativos grandes, destacando sua principal função sensorial e os hemisférios cerebrais são
formados por uma massa ganglionar basal conhecida como corpo estriado e por uma fina
camada epitelial dorsal chamada de pálio. Portanto, o pálio é composto por tecido não
nervoso e o mesencéfalo é o centro da atividade encefálica neste grupo de animais. Nos
anfíbios o centro da atividade encefálica permanece na região dorsal do mesencéfalo, onde
as células cinzentas se encontram numa região chamada teto, e pela primeira vez em
vertebrados, células nervosas são encontradas invadindo o pálio (região do telencéfalo)
resultando em aumento dos hemisférios cerebrais. Na classe dos répteis ocorre um
destacado aumento dos hemisférios cerebrais devido à invasão de células cinzentas no
pálio, sendo agora esta estrutura denominada de neopálio. Este evento está diretamente
relacionado à mudança do centro nervoso do mesencéfalo para o cérebro. Como as aves e
os mamíferos têm seu ancestral nesta classe de animais, não surpreende que o pálio,
invadido por substância cinzenta, seja o centro da atividade encefálica também nestes
outros dois grupos derivados. Assim, nas aves o telencéfalo se desenvolve em pequenos
lobos olfativos, sugerindo alguma relação pelo olfato notavelmente pobre neste grupo de
animais, e em um cérebro grande que recobre o diencéfalo e os lobos ópticos (Orr, 2000).
As diferenciações do diencéfalo serão, neste momento, descritas de forma geral
para os vertebrados sendo, posteriormente, abordadas as particularidades dos grupos de
interesse de discussão deste capítulo. Assim, das paredes do diencéfalo surgem os
pedúnculos ópticos e as camadas sensoriais e pigmentares da retina. No local onde estas
duas estruturas se encontram, certas fibras de cada nervo óptico cruzam para o lado oposto
formando o quiasma óptico (Orr, 2000). O diencéfalo diferencia-se em três regiões: o
epitálamo (dorsal), o tálamo (central), e o hipotálamo (ventral). O epitálamo é derivado do

teto do diencéfalo e dá origem ao complexo endócrino epifisário, que inclui a glândula

pineal. A maior parte do diencéfalo se torna o tálamo. Este compreende a principal estação
de retransmissão de sinais entre a porção superior e inferior do cérebro, atuando como um
centro de impulsos olfativos e visuais, além de estar associado a várias estruturas
glandulares e sensoriais. O hipotálamo, oriundo do piso do diencéfalo, contém vários
núcleos neurossecretores que são fontes de neuro-hormônios envolvidos com a regulação
da função hipofisária. É também da região ventral do diencéfalo que se origina o pedúnculo
da hipófise ou infundíbulo, e o lobo posterior, conhecido também por pars nervosa ou
neurohipófise (Orr, 2000; Norris, 2007). Adicionalmente, o lobo anterior da hipófise
(adenohipófise) é derivado, na fase embrionária, da ectoderme dorsal da cavidade oral
primitiva de uma região denominada bolsa de Rathke. Assim, a hipófise se origina da fusão
do infundíbulo com a bolsa de Rathke durante o desenvolvimento embrionário. E apesar de
a adenohipófise não possuir qualquer ligação anatômica com o encéfalo, ela está
funcionalmente ligada a ele por um sistema circulatório chamado sistema porta-hipofisário,
com exceção dos teleósteos, como visto no capítulo anterior (Orr, 2000; Hickman e col.,
2004; Norris, 2007; Guyton e Hall, 2006).
O mesencéfalo sofre uma mudança relativamente pequena no grupo dos
vertebrados. No entanto, possui maior importância principalmente no grupo dos peixes, mas
também no dos anfíbios, atuando como o centro de coordenação nervosa, como comentado
anteriormente. Na parte dorsal, o mesencéfalo desenvolve-se em duas proeminências
conhecidas como lobos ópticos, que tem função na recepção visual. Nas aves os lobos
ópticos são excepcionalmente grandes e esta característica parece ter relação com a visão
aguçada que este grupo apresenta (Orr, 2000; Hickman e col., 2004).
O metencéfalo, dorsalmente, dá origem ao cerebelo, sendo este um centro de
coordenação muscular e equilíbrio. O cerebelo nos anfíbios é muito pequeno e é discutido,
na anatomia funcional, que esta característica tenha relação com os movimentos
notavelmente vagarosos deste grupo. O cerebelo dos répteis é geralmente maior que dos
anfíbios, no entanto não atinge o tamanho do cerebelo de alguns peixes, como os tubarões,
nem o tamanho do das aves e dos mamíferos (Orr, 2000; Hickman e col., 2004).
O mielencéfalo forma o bulbo do encéfalo, é extremamente importante em todos os
vertebrados já que é o centro de muitas atividades vitais como a respiração, o batimento
cardíaco e o metabolismo. Em peixes também é o centro de controle da linha lateral e do
ouvido interno (Orr, 2000; Hickman e col., 2004).
Estes aspectos são importantes do ponto vista evolutivo visto que o
desenvolvimento das três vesículas encefálicas apresenta relações funcionais, incluindo as
funções de percepção do ambiente externo. Estas relações primitivas do encéfalo, apesar
de extremamente fundamentais, foram, em alguns casos, amplificadas e em outros

reduzidas e/ou mantidas ao longo da contínua evolução conforme as prioridades sensitivas

eram moldadas pelo habitat do animal e pelo seu modo de vida (Hickman e col., 2004).
Considerações anatômicas do eixo hipotálamo-hipófise: anfíbios, répteis e

aves
Pelo sistema neuroendócrino ter sido mais bem estudado na classe dos mamíferos,
a nomenclatura aplicada às estruturas, aos hormônios e funções foi, primeiramente,
atribuída a este grupo. Posteriormente estes conhecimentos foram empregados a
vertebrados não mamíferos. Por isso para discutir alguns aspectos anatômicos entre
anfíbios, répteis e aves, será aqui apresentado um esquema morfológico generalizado do
eixo hipotálamo-hipófise de mamíferos, uma vez que o sistema neuroendócrino entre os
tetrápodes exibe muitas características encontradas neste grupo de vertebrados (Fig. 1)
(Norris, 2007).
Figura 1. Eixo hipotálamo-hipófise generalizado de mamíferos. O hipotálamo contém vários

centros neurossecretores incluindo a área pré-óptica (POA), núcleo supraquiasmático (NSQ),
núcleos arqueados (ARC), núcleos supra-ópticos (SON), e núcleos paraventriculares (PVN). A
eminência média (ME) e pars nervosa (PN) são áreas neurohemais separadas. A ME conecta,
pelo sistema de vasos sanguíneos passando pela pars tuberalis (PT), o hipotálamo a pars distalis
(PD) onde os hormônios hipotalâmicos estimulam ou inibem a liberação dos hormônios trópicos.
A pars nervosa armazena os nonapeptídeos produzidos no hipotálamo e é suprida por outro
sistema de vasos sanguíneos. (OC) representa o quiasma óptico e (PI) significa pars intermédia
(Modificado de Norris, 2007).
A adenohipófise é um epitélio de estrutura glandular que pode ser dividida em três

regiões anatômicas: pars distalis (PD), pars tuberalis (PT) e pars intermedia (PI). Estas
regiões podem ser distinguidas tanto pelos tipos celulares quanto pelas relações anatômicas
com a neurohipófise. Já a neurohipófise, como dito anteriormente, é derivada de tecido

nervoso e nela podem ser identificadas duas regiões: a eminência média (ME), mais
anterior, e a pars nervosa (PN), região posterior. Um sistema vascular denominado sistema
porta hipotálamo-hipofisário se desenvolve entre a eminência média da neurohipófise e a
pars distalis da adenohipófise. É através deste sistema que, por exemplo, o sangue
contendo os hormônios liberadores hipotalâmicos flui para a pars distalis, e então os
hormônios trópicos da mesma fluem para o sistema venoso alcançando a circulação geral
do organismo. O sistema de vasos da pars nervosa se conecta diretamente com o sistema
de drenagem venosa, não tendo associação com o sistema porta hipotálamo-hipofisário.
Das subdivisões da adenohipófise pode-se dizer que a pars tuberalis é constituída
por uma fina camada celular da adenohipófise e está em contato com a eminência média, e
que o sistema porta passa por ela. Estudos recentes têm demonstrado que a PT tem um
importante papel de conexão endócrina entre a glândula pineal e a secreção de prolactina
(PRL) pelas células da pars distalis (Norris, 2007).
Diferentemente do que foi descrito para teleósteos no capítulo anterior, a pars
intermedia nestes grupos de vertebrados apresenta um único tipo celular sendo responsável
pela produção do hormônio melanotrópico (MSH) e a pars distalis possui cinco tipos
celulares sendo responsáveis pela produção de seis hormônios trópicos: hormônio
adrenocorticotrópico (ACTH), hormônio estimulador da tireóide (TSH), hormônio de
crescimento (GH), a prolactina (PRL), e duas gonadotropinas (GtHs) produzidas pelo
mesmo tipo celular, sendo comumente em células distintas, estas são: o hormônio folículo
estimulante (FSH) e o hormônio luteinizante (LH). Adicionalmente a adenohipófise libera
lipotropinas (LPH) e endorfinas, embora não listados como hormônios trópicos, estes
peptídeos podem exercer função endócrina ligando-se a receptores opióides no sistema
nervoso (Guyton e Hall, 2006; Norris, 2007).
Quanto ao hipotálamo, seus núcleos neurossecretores da área pré-óptica produzem
neuro-hormônios que são armazenados na neurohipófise, estes são nos grupos de
vertebrados aqui discutidos, a arginina-vasotocina (AVT) e mesotocina (MST). Os axônios
destes núcleos atravessam a ME chegando na PN. Núcleos neurossecretores incluindo
núcleo supraquiasmático (NSQ), núcleos arqueados (ARC) e núcleos paraventriculares
(PVN) controlam o funcionamento da PD. Outros hormônios hipotalâmicos, como: o
hormônio liberador de tireotropina (TRH), o hormônio liberador de gonadotropinas (GnRH), o
hormônio liberador de corticotropina (CRH), o fator liberador de prolactina (PRF) e a
dopamina (DA), percorrem através do sistema porta hipotálamo-hipofisário e se ligam a
receptores em diferentes tipos celulares liberando hormônios trópicos na adenohipófise
(Norris, 2007).

Em anfíbios, a pars tuberalis aparece pela primeira vez na filogenia dos vertebrados
e a pars intermedia, neste grupo, é pouco vascularizada apresentando inervações diretas
por neurônios dos núcleos hipotalâmicos. Os répteis ocupam uma posição central na
evolução dos tetrápodes, e por isso a hipófise deste grupo de vertebrados apresenta grande
diversidade anatômica, podendo ser encontrados animais com características anatômicas
similares a anfíbios e também similares a aves e mamíferos. De forma, geral pode-se dizer
que não é encontrada inervação direta do hipotálamo na adenohipófise sendo esta
característica mantida para os grupos derivados, aves e mamíferos. A pars tuberalis é bem
desenvolvida em Rhynchocephalia, Chelonia e Crocodilia, mas é bem reduzida e algumas
vezes ausente em lagartos. Em serpentes adultas, a PT é completamente ausente. Ainda
não há uma explicação para o desaparecimento da PT nos Squamatas. Ao contrário,
enquanto a pars intermedia é bem desenvolvida em quelônios e crocodilos e em algumas
cobras, a PI é reduzida ou ausente em lagartos e algumas cobras. Nas aves, diferentemente
de todos os tetrápodes, a pars intermedia é ausente em todos os indivíduos adultos de
todas as espécies. Em algumas aves, como os pombos e o pardal de coroa branca, a
eminência média é separada em anterior e posterior sendo que cada uma destas regiões
possui seu próprio sistema porta com a PD. Não se sabe ao certo quão frequente este
sistema duplo é encontrado em outras aves, entretanto, é discutido que este sistema de
regionalização da ME e PD poderia representar um mecanismo mais eficiente de entrega
dos neuro-hormônios hipotalâmicos a específicos tipos celulares na PD (Norris, 2007).
Considerações fisiológicas do eixo hipotálamo-hipófise: anfíbios, répteis e

aves
Como dito anteriormente, o sistema neuroendócrino é constituído pelo eixo
hipotálamo-hipófise, e de forma resumida, este sistema funciona da seguinte maneira: o
hipotálamo, modulado por variáveis ambientais e pelo sistema nervoso, promove a síntese
de hormônios liberadores (RHs - Releasing Hormones) ou hormônios inibidores (RIHs -
Release-Inhibiting Hormones) em seus neurônios neurossecretores. Através de seus
prolongamentos axônicos, que terminam ou na ME (encontrando com o sistema porta) ou no
interior do infundíbulo na PN, os hormônios produzidos no hipotálamo chegam até a hipófise
e, atuando em células específicas regulam a secreção dos hormônios trópicos, que por sua
vez, regulam outras glândulas endócrinas. Esses hormônios trópicos atingem certas
glândulas endócrinas periféricas, como exemplo, a glândula tireóide que em resposta libera
seus hormônios na corrente sanguínea e assim, afetam células específicas não endócrinas,
além de exercerem um efeito de controle negativo sobre o hipotálamo e a hipófise. A figura
2 apresenta os hormônios produzidos neste eixo, de forma geral, em anfíbios, répteis e aves
(Norris, 2007).

Fatores ambientais
Feed back
alça longa
Encéfalo
Arginina- Hipotálamo
vasotocina
(AVT) Eminência média
Mesotocina (MST)
Pars intermedia
Pars nervosa
Feed back
alça curta
Pars distalis
AVT MST
Hormônios
Somatotrópico (GH) e Hormônio
Hormônios Trópicos (TSH, melanotrópico
Prolactina (PRL)
LH, FSH, ACTH, GH) (MSH)
Alvos não Alvos não Alvos

endócrinos endócrinos endócrinos
Efeito Efeito Hormônios
Tecidos
Efeito alvos
Figura 2. Sistema neuroendócrino dos vertebrados: anfíbios répteis e aves. O

hipotálamo secreta RHs e RIHs, estes são armazenados na ME e liberados (sistema porta
hipofisário) na PD e PI (PI ausente em aves) onde regulam a liberação dos hormônios
trópicos. A atividade do hipotálamo é influenciada por vários fatores ambientais via sistema
nervoso central. Os hormônios trópicos afetam alguns alvos não endócrinos, mas
principalmente alvos endócrinos que respondem liberando hormônios que tem efeitos em
células-alvo específicas. Estes, por sua vez, modulam a liberação dos hormônios
hipotalâmicos (RHs/RIHs) e adenohipofisários. O hipotálamo também secreta
nonapeptídeos, mesotocina e arginina-vasotocina, que são armazenados na PN até que
sejam liberadas no sistema de vasos sanguíneos (Modificado de Norris, 2007).
Existem vários eixos distintos envolvendo o hipotálamo, a hipófise e o alvo

endócrino específico. E entre tantos fatores produzidos por este sistema integrativo, os eixos
que mais recebem a atenção dos pesquisadores são: o eixo hipotálamo-hipófise-gônadas
(H-H-G), discutido no capítulo anterior, o eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (H-H-A), que será
abordado no capítulo seguinte e o eixo hipotálamo-hipófise-tireóide (H-H-T), que terá um
pouco mais de destaque neste capítulo.

Hormônios da tireóide
Os hormônios da tireóide são derivados de duas moléculas de tirosina iodadas.
Primeiramente, a tirosina é incorporada por uma proteína conhecida por tiroglobulina (Tgb) e
então iodada pela enzima tireóide peroxidase (TPO). Uma tirosina iodada tem 2 iodetos
ligados nas posições 3 e 5 do anel fenólico, respectivamente. Essa molécula é chamada de
3,5 diiodotirosina, ou DIT. Duas DITs são unidas pela TPO removendo o anel fenólico de
uma DIT e ligando um grupo hidroxila de um grupo fenólico de outra DIT. O resultado desta
estrutura química é uma tironina com 4 iodetos ligados, resultando na molécula chamada de
T4. A tiroglobulina acoplada a molécula T4 é hidrolizada na tireóide e o hormônio T4 é
liberado na corrente sanguínea. Normalmente, nos vertebrados, o T4 é a tironina mais
circulante e é convertida a T3 com a remoção de um iodeto de seu anel externo pela tireóide
deiodinase antes de ser liberada da glândula tireóide (Norris, 2007). Os hormônios
tireoidianos são hidrofóbicos e, portanto, pouco solúveis em água, e da mesma forma como
os esteróides, atravessam facilmente as membranas celulares. No entanto, mesmo com
esta natureza existe um mecanismo de transporte específico para melhorar a circulação
destes hormônios da tireóide pelas membranas celulares. Na circulação os hormônios da
tireóide são transportados ligados a proteínas plasmáticas sendo estas ligações facilmente
reversíveis. Assim, que esta ligação é desfeita pela entrada do hormônio na célula, outras
moléculas do mesmo hormônio são ligadas nas proteínas plasmáticas. Várias e diferentes
proteínas séricas são capazes de se ligar e transportar os hormônios da tireóide, e somente
aproximadamente 1% destes hormônios são transportados livremente no plasma podendo
entrar no tecido alvo, por difusão ou por transporte mediado por carreador, ser
metabolizados no fígado e rins.
O mecanismo molecular da ação dos hormônios da tireóide é similar ao mecanismo
de ação descrito para estrógenos. Os hormônios da tireóide entram na célula alvo onde
migram para o núcleo e se ligam a receptores específicos. O dímero, formado pelo hormônio
e o receptor nuclear, promove o início da transcrição gênica resultando na síntese de
proteínas (Guyton e Hall, 2006). Receptores nucleares para os hormônios da tireóide têm
sido isolados e caracterizados em todos os grupos de vertebrados (Helbing e col.; 2006;
Brown e Cai, 2007). Normalmente, os receptores têm maior afinidade para o T3 do que para
os T4 (Fig. 3), apoiando a hipótese de que a conversão de T4 para T3 é requisito para a ação
do hormônio da tireóide, o T3 é mais ativo, mais relevante na fisiologia dos vertebrados
(Gross e Pitt-Rivers, 1952; Kistler e col., 1975; Norris, 2007; Sechman e col., 2009).
Adicionalmente, as células-alvo para os hormônios tireoidianos estão equipadas com uma
enzima específica, conhecida como deiodinase, que realiza essa conversão (Brown, 2005).
Os hormônios da tireóide, triiodotironina (T3) e tiroxina (T4), têm sua produção estimulada

pelo TSH produzido na adenohipófise sob influência do hormônio hipotalâmico TRH (Guyton
e Hall, 2006; Norris, 2007).
Figura 3. Ação do hormônio da tireóide em células-alvo. Tiroxina (T4) e triiodotironina (T3)

facilmente difundem através da membrana celular. Grande parte da T4 é desiodada para formar T3,
que interage com o receptor do hormônio tireoidiano, ligado como um heterodímero com um receptor
de retinóide X. Isso faz com que aumente ou diminua a transcrição dos genes que levam a formação
de proteínas, sendo esta a resposta da célula-alvo dos hormônios tireoidianos (Modificado de Guyton
e Hall, 2006).
Alguns estudos têm mostrado que o hormônio CRH também age como o TSH
estimulando a produção de tireotropinas em vertebrados não mamíferos (Groef e col., 2006).
Em vertebrados, as tireotropinas têm atuação no desenvolvimento embrionário, na formação
do sistema nervoso, na regulação do metabolismo (Norris, 2007). Em anfíbios,
desempenham função importante na metamorfose, sendo extensivamente estudadas neste
contexto biológico, estando envolvidas no aparecimento de membros e desaparecimento da
cauda (Nishikawa e Yoshizato, 1986; Yaoita e Nakajima, 1997; Nakajima e Yaoita, 2003;
Brown e col., 2005), bem como na reestruturação de órgãos, reorganizando a pele
(Yoshizato, 1996), o sistema respiratório, o fígado, o trato digestório, desenvolvendo as
criptas viliais, o encéfalo e a medula espinhal, o sistema imune (Rollins-Smith, 1998), o

sistema hematopoiético, entre outros trabalhos. Shi (2000) escreveu um livro dedicado
exclusivamente a metamorfose em anfíbios. O primeiro experimento em anfíbios foi
realizado por Gross e Pitt-Rivers em 1925 quando a glândula tireóide de um girino foi
retirada e a metamorfose foi inibida. Desde então, tem sido identificados cada vez mais
mecanismos e relações de influência destes hormônios tireoidianos no desenvolvimento de
vertebrados (Brown e Cai, 2007).
Nos répteis e aves os hormônios T3 e T4 possuem importante papel na troca de
escamas e penas, além da influência no metabolismo. Em frangos, o TRH pode estimular a
produção e liberação de TSH bem como de GH, e o efeito do TRH nos dois hormônios
trópicos é inibido por outro hormônio hipotalâmico, a somatostatina (SS). A liberação do
TSH em anfíbios, répteis e aves é menos específica que o observado para mamíferos, uma
vez que sua liberação tem sido estimulada inclusive por hormônios exógenos como mGnRH
(hormônio liberador de gonadotropina de mamíferos), mGHRH (hormônio liberador de
hormônio de crescimento de mamíferos), e peptídeos como CRH-like (similar ao hormônio
liberador de corticotropina), sauvagina e urotensina I (Norris, 2007). Sechman e
colaboradores (2009) mostraram em estudos realizados com galinhas que hormônios da
tireóide estão envolvidos na regulação do eixo H-H-G nos processos associados com o
crescimento e maturação do folículo ovariano. É bem estabelecido que em aves que se
reproduzem sazonalmente os hormônios T3 e T4 desempenhem um importante papel na
regulação das mudanças gonadais fotoperiódicas (Follet e Nicholls, 1988; Wilson e Reinert,
1999, Sechman e col., 2009). Neste processo vários estudos têm evidenciado o aumento da
concentração dos hormônios sexuais no plasma e a diminuição da concentração de T3,
sendo estabelecida uma relação negativa entre a concentração plasmática do hormônio
tireóideano e a função ovariana durante a maturação sexual (Sechman e col., 2000).
Hormônios hipofisários
As gonadotropinas (FSH e LH) e tireotropina (TSH) são hormônios glicoprotéicos
compostos por duas subunidades a α (alfa) e a β (beta), sendo a subunidade α comum para
estes três hormônios e a β específica. O FSH promove a produção do óvulo e a secreção de
estrógenos nas fêmeas e nos machos auxilia na produção dos espermatozóides. O LH induz
a ovulação, produzindo os esteróides sexuais femininos: a progesterona e o estrogênio. O
LH, nos machos, promove a produção dos esteróides sexuais masculinos, primeiramente
testosterona. Estes três hormônios são encontrados em anfíbios, répteis, com exceção dos
Squamatas que foi encontrado somente o hormônio FSH, e aves. Foi visto que o LH de
sapo-boi estimula a tireóide de aves e répteis, destacando a similaridade destas moléculas e
suas ações, mantendo também sua influência no eixo gonadal (Norris, 2007).

A prolactina (PRL) e o hormônio do crescimento (GH) são hormônios protéicos e

pertencem à mesma família de hormônios por apresentarem similaridades estruturais. A
prolactina, nos vertebrados apresenta cerca de 300 atuações distintas, além de seu papel
mais tradicional, nos processos reprodutivos, como cuidado parental, e em mamíferos com a
produção de leite, também controla os equilíbrios hídrico e eletrolítico, o desenvolvimento e
crescimento, o metabolismo, o comportamento. Além disso, é um mediador químico do
sistema imunológico, sendo importante na formação de novos vasos sanguíneos e,
diferentemente dos outros hormônios trópicos a prolactina age diretamente em tecidos alvo
e não através do estímulo de outros hormônios. Tem sido mostrado que a PRL desempenha
ação de promoção de crescimento em larvas de anfíbios, em alguns anfíbios como os
Anuros a PRL tem agido nas larvas como um hormônio anti-metamórfico. Em répteis este
hormônio foi pouco estudado, no entanto, em experimentos com Lacerta além de a PRL
estimular o crescimento também estimulou o apetite neste grupo de animais. Nas aves a
PRL apresenta vários papeis na reprodução, incluindo o desenvolvimento de uma porção
ventral depenada e altamente vascularizada durante a incubação dos ovos, realizando
assim a transferência de calor. Ainda sobre os aspectos reprodutivos e comportamentais a
PRL tem sido associada ao comportamento de cuidado parental em machos. Além disso,
estimula a nutrição, tendo importante papel na pré-engorda das aves migratórias, e também
é responsável pelo comportamento agitado destas aves no período que antecede a
migração. Em pombos, a PRL estimula a produção de um leite que é regurgitado para a
alimentação da prole (Norris, 2007).
O GH desempenha um papel vital no controle do crescimento do corpo através de
seu efeito estimulador na mitose celular, no metabolismo, especialmente nos novos tecidos
dos jovens vertebrados, e na síntese do RNA mensageiro e de proteínas. O hormônio do
crescimento age diretamente no crescimento e no metabolismo e indiretamente na produção
de um hormônio polipeptídico, o fator de crescimento insuliníco (IGF), ou somatomedina
produzida pelo fígado. Há uma grande similaridade nas propriedades físicas do GH de
anfíbios e mamíferos sugerindo uma considerável conservação deste hormônio na evolução
dos tetrápodes.
Os mecanismos de ação e função do ACTH entre os tetrápodes são muito
similares. A síntese do ACTH é estimulada pelo hormônio hipotalâmico CRH e tem ação nas
células corticotrópicas na glândula adrenal, influenciando no metabolismo de proteínas e
lipídeos e carboidratos, também pela produção de hormônios corticosteróides.
O único hormônio da adenohipófise produzido pela pars intermedia é o hormônio
estimulador de melanócitos (MSH). Assim como em peixes, em anfíbios e répteis, este
hormônio tem ação direta sobre o tecido epitelial promovendo a dispersão do pigmento
melanina no interior dos melanócitos, causando o escurecimento da pele. O MSH é

produzido nas células da pars distalis das aves já que o lobo intermediário é ausente, mas
sua função fisiológica neste grupo ainda é incerta. A coloração nesta classe de vertebrados
parece estar sob a influência e/ou controle de fatores vindos do eixo reprodutivo (GtHs e
esteróides gonadais), e da tireóide. O MSH e o ACTH são derivados de uma molécula
precursora que é transcrita e traduzida a partir de um único gene, a proopiomelanocortina
(POMC) (Norris, 2007).
Os dois hormônios sintetizados na pars nervosa são a mesotocina e a arginina-
vasotocina, são muito semelhantes quimicamente, pois sendo compostos por nove
aminoácidos diferenciam-se por apenas dois. Estes hormônios são, respectivamente,
homólogos à ocitocina e a arginina-vasopressina encontrados em mamíferos. Estes
hormônios estão entre os de ação mais rápida, pois são capazes de produzir uma resposta,
segundos após a sua liberação (Licht e col., 1984; Choy e Watkins, 1986; Nojiri e col., 1987;
Acher e col., 1995; Acher, 1996).
Entre estes dois os hormônios da PN, a arginina-vasotocina tem a distribuição
filogenética mais ampla, acreditando-se ser ele o hormônio original a partir do qual os
demais nonapeptídeos evoluíram (Tab. 1).
Tabela 1- Hormônios animais nonapeptídeos (Modificado de Norris, 2007).

Peptídeos similares a vasopressina
Name Sequência de aminoácidos Grupos de animais
Arginine vasopressin C-Y-F-Q-N-C-P-R-G-NH 2 Mamíferos
Lysine vasopressin C-Y-F-Q-N-C-P-K-G-NH2 Sui formes
Phenypressin C-F-F-R-N-C-P-K-G-NH2 Marsupiai s
Arginine vasotocin C-Y- I-R- N-C-P-R-G-NH2 Não mamíferos
Lysine conopressin C-F- I-R- N-C-P-K-G-NH2 Moluscos gastrópodes,
sanguessugas
In sect diuretic hormone C-L- I-T- N-C-P-K-G-NH 2 Gafanhotos
Peptídeos similares a Ocitocina
Name Sequência de aminoácidos Grupos de animais
Oxytocin C-Y-I-Q-N-C-P-L G-NH 2 Mamíferos
Mesotocin C-Y-I-Q-N-C-P-I-G-NH 2 Peixes pulmonados, anfíbios,
répteis, aves, alguns marsupiais
Isotocin C-Y-I- S-N-C-P-LG-NH 2 Pei xes ósseos
Aspargtocin C-Y-I-N-N-C-P-L G-NH2 Eslamobrânquios
Asvatocin C-Y-I-N-N-C-P-VG-NH 2 Eslamobrânquios
Glumitocin C-Y-I-S-N-C-P-L G-NH 2 Eslamobrânquios
Phasvatocin C-Y-F-N-N-C-P-VG-NH 2 Eslamobrânquios
Valitocin C-Y-I-Q-N-C-P-VG-NH2 Eslamobrânquios
Annectocin C-F-V-Q-N-C-P-TG-NH 2 Anne lida – minhoca
Cephal otocin C-Y-F-Q-N-C-P-I-G-NH 2 Octopoda
A arginina-vasotocina é um hormônio de controle hídrico, especialmente nos

anfíbios Anuros, nos quais age para a conservação da água promovendo o aumento da

permeabilidade da superfície epitelial (a fim de promover a absorção a partir do meio),

estimulando a reabsorção da água na urina, na bexiga urinária e diminuindo o fluxo urinário.
A ação da arginina-vasotocina é mais claramente compreendida nos anfíbios, e parece
desempenhar um certo papel na conservação da água também nas aves e répteis. Para
estas três classes de vertebrados tem sido descrita a influência da arginina-vasotocina e da
mesotocina no comportamento sexual reprodutivo, pouco se sabe a respeito das funções
endócrinas da mesotocina nos vertebrados (Hollis e col., 2005, Norris, 2007).
Conclusão
O que foi exposto evidencia que a complexidade do sistema neuroendócrino nos
vertebrados e a diversidade de respostas fisiológicas e seus efeitos em um organismo é
reflexo da integração de todos os sistemas fisiológicos, tendo o hipotálamo e a hipófise
como mediadores fundamentais. Além disso, mais estudos a respeito dos efeitos destes
hormônios hipotalâmicos e hipofisários nestes grupos de vertebrados são necessários para
que as modulações de respostas fisiológicas sejam mais bem elucidadas também do ponto
de vista evolutivo.


Sistema neuroimunoendócrino
Marina Marçola
Laboratório de Cronofarmacologia
[email protected]
No decorrer da evolução dos organismos, percebe-se que a organização celular

tende a atingir um grau de especificidade permitindo o agrupamento de células capazes de
desempenhar funções específicas e assim, formar os órgãos. Estes por sua vez, apesar de
manterem suas especificidades, se organizam de forma a permitir a integridade e
funcionalidade do sistema do qual fazem parte. Essa forma organizacional nos permite uma
visualização e compreensão anatômica e fisiológica desses sistemas.
De maneira geral, o sistema nervoso é responsável pelo controle das demais
funções do organismo. Cabe a ele receber inúmeras informações das diferentes partes do
corpo e integrá-las para determinar a melhor resposta a ser dada para o estímulo recebido.
Para que isso ocorra, existe uma maquinaria de alta complexidade que garante a
transmissão, o processamento e a armazenagem da informação. No Unidade 3
(Neurociências), você teve mais informações sobre a anatomia e funcionamento do sistema
nervoso. Juntamente com o sistema nervoso, o sistema endócrino também é responsável
pelo controle de várias funções do organismo, sobretudo as funções metabólicas, tais como,
velocidade de reações celulares e transporte de substâncias para o interior das células. Está
também associado ao controle da reprodução, crescimento corpóreo, ritmos biológicos entre
outros. Já o sistema imune desempenha o papel de defesa do organismo. Sua função é a
de reconhecer agentes estranhos e montar a resposta apropriada para combatê-los,
garantindo a homeostase do organismo (Guyton e Hall, 2006).
A Ciência até hoje conseguiu desvendar e descrever os sistemas no decorrer da
evolução dos organismos. Evidentemente que há muito que se descobrir da particularidade
de cada um deles, porém, atualmente tem-se direcionado a compreender a interligação
entre eles, garantindo que não só operem na sua particularidade, mas também interagem e
modulem entre si. Nesse sentido, enquadram-se os novos estudos direcionados à
compreensão do chamado Sistema Neuroimunoendócrino.
Os primeiros passos
Os antigos anciões gregos acreditavam na influência do cérebro sob a integridade
do organismo, dizendo que o estado da mente interferia no decurso da doença. Essa crença
perdurou por séculos até a descoberta dos antibióticos, quando se dizia que o tratamento da
doença se resumia na eliminação do ‘corpo estranho’ causador da infecção ou inflamação.

Porém, ultimamente tem-se retornado aos princípios antigos, e novas descobertas abrem
precedentes que comprovam a integração do sistema nervoso e endócrino com a efetivação
e eficiência da resposta imune (Sternberg e Gold, 1997).
Já na década de 1970, Besedovsky e Sorkin, (1977) mostram que durante a
montagem de uma resposta imune são observadas mudanças no decurso temporal de
secreção de alguns hormônios (Fig. 1A) e na atividade elétrica de neurônios da porção
ventromedial do hipotálamo de ratos (Fig. 1B), sugerindo uma comunicação entre esses
sistemas.
Figura 1. (A) A injeção de 4x109 células vermelhas de ovelhas em ratos aumentou a secreção de
corticosterona a partir do quinto dia após o tratamento. Animais controles, injetados com glóbulos
vermelhos de ratos, não apresentaram mudanças significativas na secreção de corticosterona (barras
brancas). (B) A injeção de 5x109 células vermelhas de ovelha aumentou os disparos de neurônios do
hipotálamo no quinto dia após o tratamento com o antígeno. Animais tratados com salina (barras
brancas) não sofreram alterações (Modificado de Besedovsky e Sorkin, 1977).
Hoje, já se sabe que os sistemas nervoso, endócrino e imune estão fisiológica e

anatomicamente interligados. As células desses sistemas estão equipadas com uma
maquinaria capaz de reconhecer sinais mútuos permitindo que essa comunicação
multidirecional ocorra. Células imunes produzem citocinas que são reconhecidas pelo
sistema nervoso o qual é capaz de regular imediatamente essa resposta. Essa comunicação
ocorre por sinalização nervosa ou por vias humorais (Sternberg e Gold, 1997; Chesnokova e
Melmed, 2002).
Comunicação bidirecional: resposta imune e sistema nervoso central

Durante uma resposta inflamatória, células do sistema imune são capazes de
produzir e liberar citocinas que sinalizam não apenas células do sistema imune, mas

também células de outros tecidos e sistemas. Por ser um sistema difuso, células e
mediadores do sistema imune são capazes de sinalizar para diversas regiões do organismo,
seja via sanguínea ou linfática.
Até recentemente acreditava-se que o sistema nervoso central (SNC) era provido
de um privilégio que não permitia o recebimento e reconhecimento de sinalizações
imunológicas. De fato, a barreira hematoencefálica, além de outros mecanismos, garante
um grau de privilégio ao SNC, no entanto esse privilégio não acontece de maneira absoluta
(Galea e col., 2006). Fisiologicamente, essa barreira impede a passagem de certas
substâncias da corrente sanguínea para estruturas do SNC, porém, durante um processo
inflamatório ela se torna mais acessível, permitindo uma maior comunicação entre
elementos da periferia com elementos centrais. Assim, citocinas produzidas pelo sistema
imune são capazes de sinalizar diretamente células do SNC (Sternberg e Gold, 1997;
Chesnokova e Melmed, 2002; Galea e col., 2006).
Além desse contato direto, essas citocinas são capazes de estimular outras células
que estejam fora do SNC e próximas à barreira, como as células endoteliais, que revestem o
vaso sanguíneo, a produzirem mediadores que atingem facilmente o SNC, tais como
prostanglandinas e óxido nítrico (NO) (Fig. 2).
Figura 2. Frente a uma resposta inflamatória, a barreira hematoencefálica sofre

uma alteração que permite a passagem de certas citocinas que sinalizam
diretamente células do SNC. Além disso, tais citocinas estimulam células
próximas à barreira, tais como as células endoteliais, a produzirem mediadores
secundários, como NO e prostaglandina, os quais agem sobre as células no
SNC (modificado de Sternberg e Gold, 1997).

As citocinas são capazes de estimular diretamente nervos periféricos, como o nervo

vago, levando o sinal rapidamente (na ordem de milissegundos) para o SNC (Sternberg e
Gold, 1997). Fibras do nervo vago possuem receptores para interleucina-1 (IL-1), mediador
inflamatório produzido por células imunes, cujo reconhecimento traduz uma sinalização
imediata para o SNC (Thayer e Sternberg, 2009). Outras evidências sugerem que algumas
regiões neurais expressam citocinas e seus respectivos receptores (Chesnokova e Melmed,
2002) e células progenitoras neurais possuem receptores de reconhecimento de padrões
moleculares que desencadeiam uma resposta imunológica (Rolls e col., 2007). Os dados
acima descritos corroboram com a idéia de que o SNC está equipado a receber as
sinalizações provindas de uma resposta imune e que isso pode ser feito de forma rápida e
eficaz.
Por outro lado, o SNC não apenas recebe, como também é capaz de responder
prontamente a tais estímulos. Borovikova e colaboradores (2000) demonstraram que a
acetilcolina in vitro, principal neurotransmissor do nervo vago, e o estímulo elétrico in vivo
deste nervo são capazes de diminuir a liberação de citocinas que favorecem a resposta
imune, as chamadas pró-inflamatórias, como por exemplo, o fator de necrose tumoral (TNF;
Fig. 3, Borovikova e col., 2000). Recentemente, essa via de resposta é conhecida como via
colinérgica anti-inflamatória (Rosas-Ballina e Tracey, 2009).
Assim sendo, percebe-se a existência de um reflexo nervoso que modula a
resposta imune. Resumidamente, existe um arco aferente estimulado por citocinas que leva
o sinal inflamatório para o SNC. A fim de prevenir danos teciduais durante a resposta
inflamatória, mediadores anti-inflamatórios são importantes para impedir uma resposta
exacerbada. A resposta enviada pelo SNC através de um arco eferente é um exemplo de
inibição da produção de mediadores pró-inflamatórios (Fig. 4, Rosas-Ballina e Tracey,
2009).

Figura 3. A produção de mediadores pró-inflamatórios por macrófagos estimulados com

lipopolissacarídeo (LPS, 100ng/ml) foi inibida pela incubação com acetilcolina nas
concentrações indicadas acima (A-C). A estimulação do nervo vago reduziu a
concentração de fator de necrose tumoral (TNF) no soro e fígado e o desenvolvimento
de choque endotóxico, induzido por LPS (15mg/kg). SHAM: animais falso-operados,
VGX: animais submetidos a vagotomia bilateral cervical (D-F; modificado de Borovikova
e col., 2000).
Comunicação multidirecional: sistema imune e sistema neuroendócrino

Enquanto que a regulação nervosa da resposta imune ocorre de forma local e
regional, visto que a liberação de acetilcolina é feita nas terminações nervosas que inervam
órgãos e células imunes (Thayer e Sternberg, 2009), os hormônios se encarregam de fazer
essa comunicação de forma sistêmica, uma vez que caem na corrente sanguínea.
Eixo hipotálamo–hipófise–adrenal (H-H-A): o estresse e a resposta imune

O eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (H-H-A) é o mais conhecido comunicador entre
sistema neuroendócrino e sistema imune. Sucintamente, o hipotálamo e outras regiões
produzem o hormônio liberador de corticotropina (CRH), o qual estimula a liberação do
hormônio adrenocorticotropina (ACTH) pela glândula hipofisária. Este estimula a glândula
adrenal a liberar corticosterona em ratos, e cortisol em humanos, conhecida pela sua
atuação nos mecanismos de estresse. Como feedback negativo, a corticosterona inibe a
produção de CRH (Fig. 5, Sternberg e Gold, 1997).

Figura 4. Frente a um estímulo inflamatório, células imunes produzem citocinas que agem na
tentativa de solucionar o problema. Essas citocinas estimulam neurônios aferentes do nervo
vago que sinalizam o SNC. Este, por meio de um reflexo eferente modula a função imune,
impedindo uma exacerbação da resposta e conseqüente dano tecidual. Tal comunicação é
denominada via colinérgica anti-inflamatória (A; modificado de Rosas-Ballina e Tracey, 2009).
As células imunes são reguladas a partir do reconhecimento de acetilcolina (Ach) pelos
receptores (α7nAchR). Essa sinalização leva a inibição de fatores de transcrição responsáveis
pela síntese de citocinas pró-inflamatórias (B; modificado de: Pavlov e Tracey, 2006).
A corticosterona tem propriedades anti-inflamatórias e age diretamente em diversos

alvos imunes. Classicamente, a corticosterona é conhecida pelos seus efeitos anti-
inflamatórios. Este hormônio é capaz de inibir a proliferação de linfócitos, estimular a
apoptose de neutrófilos e eosinófilos, inibir ou reduzir a expressão de inúmeras citocinas
pró-inflamatórias assim como de seus respectivos receptores (Sorrells e Sapolsky, 2007).
Durante uma situação de estresse, espera-se que a resposta imune seja
amenizada devido aos efeitos anti-inflamatórios da corticosterona. Porém, estudos recentes
têm demonstrado que em certas situações de estresse a resposta inflamatória é favorecida.
Isso acontece quando um estímulo estressor ocorre logo antes do desafio inflamatório, caso
contrário, quando o estresse é crônico, tem-se um efeito de impedir a exacerbação da
resposta imune. Esse efeito pró-inflamatório gerado em casos de estresse agudo pode ser
decorrente da atuação de catecolaminas, porém a corticosterona também pode mediar
alguns desses efeitos, provavelmente via ativação de receptor (Sorrells e Sapolsky, 2007).

A produção de citocinas está também relacionada ao desenvolvimento e

amadurecimento do sistema endócrino, uma vez que a exposição à citocinas durante o
desenvolvimento intrauterino ou neonatal altera a funcionalidade de eixos endócrinos,
sobretudo o H-H-A. Além disso, a superestimulação do eixo H-H-A leva a uma
imunossupressão, aumentando a suscetibilidade à infecção (Chesnokova e Melmed, 2002).
Figura 5. O eixo H-H-A está associado aos processos de estresse, mas também é um
dos principais comunicadores entre o sistema neuroendócrino e o sistema imune. O
hipotálamo quando estimulado, libera CRH que estimula a produção de ACTH pela
glândula pituitária. Este age sobre a glândula adrenal a qual produz coricosterona
(cortisol). Como uma resposta de feedback negativo, a corticosterona inibe a produção de
CRH pelo hipotálamo. Além de principal mediador do estresse, classicamente, a
corticosterona age sobre a resposta imune como um mediador anti-inflamatório
(modificado de Sternberg e Gold, 1997).
Eixo imune-pineal: efeitos da melatonina no sistema imune

Outro modulador neuroendócrino e inflamatório é a melatonina. A melatonina é uma
indolamina sintetizada a partir da serotonina, através de uma acetilação catalizada pela
enzima aril-alquilamina-N-acetiltransferase (AA-NAT) e pela metilação da N-acetilserotonina
pela enzima hidroxiindol-O-metiltransferase (HIOMT) (Simmoneaux e Ribelayga, 2003). É
um hormônio produzido de forma rítmica pela glândula pineal. De maneira geral, o pico de
produção dessa indolamina ocorre durante a fase escura. O núcleo supraquiasmático (NSQ)

recebe a informação fótica provinda da retina e funciona como um relógio central. A partir
dele, projeções são lançadas para outros osciladores periféricos, tais como a glândula
pineal. Dentre suas propriedades cronobiológicas, a melatonina é sinalizadora da
intensidade e duração do escuro, sendo responsável, portanto pela sinalização de ritmos
sazonais e circadianos (Simmoneaux e Ribelayga, 2003).
Existe também a produção extra-pineal de melatonina. Essa produção ocorre de
forma não rítmica ao longo do dia em medula óssea (Tan e col., 1999), trato gastrintestinal
de ratos (Bubenik e col., 1992), fígado, rim e baço de roedores e primatas (Menendez-
Pelaez e col., 1993), placenta humana (Lanoix e col., 2008) e células imunocompetentes,
como macrófagos da cavidade peritoneal (Martins e col., 2004), linfócitos humanos (Carrilo-
Vicco e col., 2004) e células do colostro humano (Pontes e col., 2006, 2007).
O ritmo diário de melatonina no sangue, onde é observado um aumento de cerca
de 100 vezes durante a noite, ocorre exclusivamente devido ao ritmo de produção da
glândula pineal (Markus e col., 2007). As demais fontes de produção estão envolvidas em
ações locais e sua produção tônica pode elevar de forma indiscriminada os níveis
plasmáticos tanto de dia quanto de noite.
Estudos recentes demonstram que a melatonina é capaz de agir sobre alguns
aspectos imunológicos, sobretudo na camada endotelial, em concentrações compatíveis
com sua produção noturna: reduz a adesão de neutrófilos e o aumento de permeabilidade
vascular induzido por leucotrieno B4 (Lotufo e col., 2006), o rolamento e adesão de
neutrófilos à camada endotelial (Lotufo e col., 2001) e a atividade da sintase de óxido nítrico
constitutiva (Silva e col., 2007).
Fisiologicamente, leucócitos circulantes estão equipados para agir caso necessário.
Porém a integridade vascular, sobretudo da camada endotelial, é mantida por diversos
mediadores que impedem a transmigração desnecessária desses leucócitos para o tecido. A
melatonina noturna e a corticosterona podem estar agindo nesse conjunto de mediadores.
Levando em consideração a produção rítmica desses hormônios, é importante que o
organismo tenha um mecanismo de resposta imune que não dependa das variações
rítmicas. Assim, durante a fase inicial da montagem de uma resposta inflamatória, o
organismo deve responder prontamente independente da hora do dia.
Considerando o paradigma acima, Markus e colaboradores, (2007) descreveram o
chamado eixo imune-pineal, que consiste na ação endócrina e parácrina da melatonina
sobre a resposta inflamatória. Durante a montagem da resposta inflamatória, a produção de
melatonina pela glândula pineal é inibida por mediadores pró-inflamatórios, tais como TNF,
permitindo a montagem de uma resposta rápida e eficiente (Markus e col., 2007). Hoje já se
sabe que a glândula pineal está equipada para o reconhecimento desta citocina (Cruz-
Machado e col., no prelo). No entanto, como dito anteriormente, a resposta inflamatória deve

ser controlada para que não haja danos teciduais. Em um segundo momento, células
imunocompetentes localizadas próximo ao local da injúria são capazes de produzir
melatonina em altas concentrações agindo de forma parácrina nas células das proximidades
e colaborando com uma montagem anti-inflamatória da resposta (Fig. 6; Markus e col.,
2007). Estudos in vitro, demonstraram que a produção extra-pineal de melatonina
desempenha um papel protetor contra danos teciduais, visto que é capaz de reduzir a
síntese de NO (Tamura e col., 2009). Além do mais, existe uma alça que interliga as
glândulas adrenal e pineal. A corticosterona é capaz de aumentar a síntese de melatonina,
visando uma resposta mais apropriada frente a uma injúria (Fernandes e col., 2009).
Figura 6. O Eixo Imune-Pineal descreve a relação da resposta imune com as

propriedades da melatonina. Fisiologicamente, a melatonina noturna age sobre o
endotélio inibindo a transmigração de células imunes para o tecido. No entanto, o
organismo precisa responder prontamente ao estímulo inflamatório independente
da hora do dia. Na primeira fase da resposta inflamatória, citocinas pró-
inflamatórias (TNF) agem sobre a glândula pineal inibindo a síntese de
melatonina. Em um segundo momento, células imunocompetentes presentes no
local da injúria produzem melatonina que age localmente na tentativa de
solucionar o problema (modificado de Markus e col., 2007).

Outra relação da melatonina está relacionada à manutenção funcional de certos

órgãos imunes. A remoção cirúrgica ou a perda da funcionalidade da pineal acomete a
manutenção de diversos órgãos imunes, tais como baço e timo. O tamanho desses órgãos é
reduzido nesses dois casos, e, portanto, seu papel funcional é comprometido. Em casos de
reposição da melatonina, essas situações são revertidas, visto que a capacidade
proliferativa de diversas células imunes é recuperada (Carrillo-Vicco e col., 2005).
3.3 – Eixo hipotálamo-hipófise-gônadas (H-H-G): Os hormônios reprodutivos e

o sistema imune
Para garantir a perpetuação da espécie, dois aspectos de relevância devem ser
tomados em conta. O primeiro é a capacidade do indivíduo de deixar descendentes que
carreguem seu código genético, e isso é garantido pelo sistema reprodutor, regulado por
diversos órgãos e mediadores endócrinos (ver capítulos acima). Já o segundo é a
capacidade de garantir sua própria sobrevivência frente a um processo que o ameaça, como
uma doença. Cabe ao sistema imune garantir esse aspecto. Dessa forma, considerando a
integridade dos organismos, existe uma correlação entre a incapacidade reprodutiva durante
um processo infeccioso (Morale e col., 2001; Tomaszewska-Zaremba e Herman, 2009).
A regulação endócrina do eixo reprodutivo é feita por hormônios produzidos pelo
hipotálamo, hipófise e gônadas, caracterizada como eixo hipotálamo-hipófise-gônadas (H-H-
G). Resumidamente, o hipotálamo produz o hormônio liberador de gonadodropina (GnRH)
que age sobre a porção anterior da hipófise, a qual produz e libera o hormônio luteinizante
(LH) e o hormônio folículo-estimulante (FSH), estes são responsáveis pela produção de
hormônios nas gônadas sexuais, tais como testosterona ou progesterona, os quais
completam a alça de feedback negativo inibindo a produção dos hormônios hipotalâmicos e
hipofisários (Guyton e Hall, 2006).
Como visto anteriormente, durante uma resposta inflamatória ocorre a ativação do
eixo H-H-A aumentando a liberação de corticosterona, por outro lado as atividades
reprodutivas são inibidas. Existem poucos estudos que interligam os hormônios sexuais com
a resposta imune. De maneira geral, a inibição nos níveis de GnRH e LH durante uma
resposta inflamatória pode estar associada ao aumento no nível de corticosterona, à
liberação de prostaglandinas e citocinas pró-inflamatórias como IL-1β. O efeito de TNF e IL-
6, assim como opióides, catecolaminas, neurotransmissores, óxido nítrico e prostaglandinas
na inibição desses hormônios ainda é contraditório (Fig. 7; Tomaszewska-Zaremba e
Herman, 2009).
Outro aspecto importante na intermodulação entre o eixo reprodutivo e o sistema
imune é a manutenção do período gestacional. Durante a gravidez é necessário uma
associação íntima entre estes aspectos. Para manter a gestação até o final do seu período

correto é necessário que haja uma supressão do sistema imune para que o feto não seja
rejeitado antes do tempo, caso isso não ocorra, a probabilidade de um aborto é aumentada.
Estudos têm relacionado a participação da progesterona na regulação da resposta imune
durante a gestação (Morale e col., 2001).
Figura 7. Durante uma resposta inflamatória as atividade reprodutivas são inibidas devido a
diminuição nos níveis de GnRH e LH. Ainda não está muito esclarecido com é feito essa
inibição. Estudos indicam que o reconhecimento de citocinas como IL-1β por estruturas do
SNC é o responsável. Por outro lado, a ação de opióides, catecolamindas, GABA, óxido
nítrico (NO) e prostaglandinas, assim como o reconhecimento do estímulo inflamatório
(LPS) diretamente pelo SNC podem estar associados à modulação dos hormônios sexuais,
porém ainda não estão muito bem descritos (modificado de Tomaszewska-Zaremba e
Herman, 2009).
Concluindo
Vimos que para a manutenção da integridade do organismo é necessário que os
sistemas estejam interligados entre si garantindo uma regulação recíproca que visa a
continuidade do equilíbrio homeostático. Quando essa harmonia é rompida é importante que
todo o organismo esteja apto a reconhecer os sinais e respondê-los de maneira organizada
e eficiente. Neste contexto vimos que os sistemas Nervoso, Endócrino e Imune se
organizam e comunicam mutuamente para garantir o perfeito funcionamento do organismo.

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Unidade 6
Tiago Gabriel Correia

[email protected]
Em sua definição clássica, a ecotoxicologia é a “Ciência que estuda os efeitos

das substâncias naturais ou sintéticas sobre os organismos vivos, populações e
comunidades, que constituem a biosfera, incluindo assim a interação das
substâncias com o meio nos quais os organismos vivem num contexto integrado”.
Neste módulo serão abordadas as consequências fisiológicas tanto para
invertebrados como para vertebrados, resultantes da exposição a alguns metais, tais
como Al, Mn, Zn, Cu e Cd. Entre os principais efeitos apresentados, destacam-se o
transporte de Cd e Cu nas brânquias de crustáceos e a interface com os
ecossistemas marinho e estuarino, a interferência do Al e Mn como possíveis
agentes causadores de desequilíbrio metabólico e as implicações para a
sobrevivência e reprodução, além de disfunções sobre o eixo hipotálamo – hipófise –
gônadas de teleósteos nas vias de síntese hormonal sistêmica e neural.
Capítulo 29 Metal não essencial: o cádmio e seus efeitos pág. 361

Priscila Ortega
Revisado pela Dra Flavia Pinheiro Zanotto
Capítulo 30 Transporte de Metais Essenciais em Organismos Aquáticos: o cobre e

o zinco pág. 371
Marina Granado

Vanessa Ap.Rocha Oliveira Vieira
Revisado pela Dra Renata Guimarães Moreira
Capítulo 32 Alterações neuroendócrinas resultantes da exposição a metais

pág. 395

Metal não essencial: o cádmio e seus efeitos
Priscila Ortega
Laboratório de Fisiologia Comparada
[email protected]
O cádmio
Os metais, de maneira geral, são distinguidos entre essenciais e não essenciais.
Metais essenciais, como o cobre e zinco, estão associados com mecanismos bioquímicos,
que, dentro de limites, tendem a assegurar uma concentração fixa do metal dentro de um
tecido particular. Os metais não essenciais, como o cádmio e o mercúrio, por sua vez, não
são regulados, então, a concentração interna varia de tecido para tecido de acordo com a
exposição (Turoczy e col., 2001).
O cádmio é um poluente ambiental que aumentou sua importância nos últimos anos
devido a industrialização, ao fumo e à falta efetiva de terapias para a contaminação por
cádmio. Em geral, a população é contaminada por este metal através da exposição a águas
e alimentos contaminados (Jeong e col., 2000). Ele é um dos metais que frequentemente
ocorre combinado com o zinco em uma taxa de zinco/cádmio de 1 para 100, sendo um raro
elemento que pode ser encontrado acumulado no corpo, principalmente no fígado e rins,
onde apresentam entre 50-75% do total de acúmulo do metal, devido aos seus processos de
detoxificação (Fasset, 1975). Por isso, animais terrestres, marinhos e animais de água doce
apresentam a maioria do cádmio acumulado em fígado, rim e glândulas digestivas.
Suas características típicas são uma coloração branco ou acinzentado, dúctil à
temperatura ambiente. É um bom condutor de calor e eletricidade, não reagindo com o
oxigênio do ar e, geralmente, está associado ao zinco. Sua massa atômica é de 112,40
gramas e número atômico 48, possuindo distribuição eletrônica terminada em 5s2 4d10.
Dessa forma, o cádmio é considerado um metal de transição devido à sua distribuição
eletrônica, apesar de muitos autores descrevê-lo como um metal pesado, levando em
consideração sua massa atômica e todos os seus efeitos nocivos nas células e tecidos em
que pode se acumular (http://www.tabela.oxigenio.com, acessado em 02/05/2010).
Este metal é tóxico, sendo encontrado em pilhas e baterias, além de dejetos industriais
descartados no meio ambiente, não possuindo uma função fisiológica conhecida. Ele pode
atingir cursos de água e até mesmo manguezais, onde o descarte de lixo vem crescendo a
cada ano.

Figura 1: Localização do elemento químico cádmio na Tabela Periódica

(www.mundofisico.joinville.udesc.br/PreVestibu..., acessado em 02/05/2010).
Ele pertence ao grupo II B da Tabela Periódica, com valência +2, tendo

aproximadamente o mesmo raio iônico (0,92 Å) do íon cálcio. Assim, o cádmio poderia
competir com o íon pelos canais de cálcio para entrar nas células.
Além disso, o cádmio pode substituir o zinco e cobre (por possuírem a mesma
valência) como co-fatores ou em funções enzimáticas. Ele ainda induz a produção de
metalotioneínas, proteínas sequestradoras de metais.
Os crustáceos
Os crustáceos pertencem a um grupo diversificado de organismo, estando presentes
em diversos hábitats: estuarino, marinho, dulcícola e terrestre. Ao longo da evolução destes
organismos, surgiram adaptações especializadas das células epiteliais encontradas nas
brânquias, tegumento, hepatopâncreas e glândula antenal (análogo ao rim), para a
regulação e passagem de moléculas e íons entre o meio externo e a hemolinfa (Ahearn e
col., 1999; Monteilh-Zoller e col., 1999). Isso faz com que esse grupo apresente sucesso
adaptativo em ambientes tão diversos, mesmo em ambientes com contaminação por metais
pesados.
Assim, os crustáceos possuem uma variedade de formas de detoxificação celular que
reduzem a concentração de metais potencialmente tóxicos encontrados no ambiente. Essas
formas incluem: (1) mecanismos fisiológicos regulatórios que equilibram taxas de excreção e
ingestão de metais do ambiente (Ahearn e col., 1999); (2) mecanismos de sequestro
intracelular de metais que envolvem locais de união de alta afinidade com proteínas de
baixo peso molecular conhecidas como metalotioneínas, seguida por sua eliminação pela

membrana lisossomal (Ahearn e col., 1999); e (3) processos de sequestros intracelulares de

metais envolvendo vacúolos específicos contendo grânulos metálicos fosfóricos ou
sulfurosos que subsequentemente são eliminados por exocitose (Ahearn e col., 2004).
Contudo, metais não essenciais, como o cádmio, podem ser capturados e acumulados em
invertebrados marinhos através da água ou dieta contaminada (Nuñez-Nogueira e Rainbow,
2005).
Por isso, a concentração do metal depende de fatores como a espécie de crustáceo
estudada, a localização, a dieta, o tamanho, o sexo do animal e o tipo de tecido. Quando
animais de espécies diferentes são comparados, nota-se uma diferença significativa na
concentração de metal detectada. Em espécies particulares, o tamanho dos animais e o tipo
de tecido são fatores significantes para o acúmulo de metal, mas aparentemente o sexo dos
animais não parece ter importância (Turoczy e col., 2001).
Acumulação de cádmio em tecidos de crustáceos

O cádmio, por não apresentar qualquer função fisiológica conhecida, pode acumular
em tecidos de acordo com a concentração externa do metal, não sendo evidenciada
qualquer regulação interna em animais, causando toxicidade inclusive em baixas
concentrações (Playle e col.., 1993). Efeitos tóxicos podem ser encontrados com a
acumulação do excesso do metal, tornando-se metabolicamente disponível e agindo na
destruição de processos celulares (Harris e Santos, 2000). O acúmulo de mercúrio e zinco
em alguns tecidos aumenta com o tamanho do caranguejo, sendo encontradas altas
concentrações destes metais principalmente na carapaça. Altas concentrações de cobre,
mercúrio e zinco são encontrados no tecido muscular, enquanto que altas concentrações de
cádmio são encontradas no hepatopâncreas, indicando que o acúmulo do metal depende do
tipo de dieta do animal (Turoczy e col., 2001). O que se sabe, atualmente, é sobre acúmulo
do metal no hepatopâncreas de crustáceos. Este acúmulo se dá em maior quantidade
quando comparado com as brânquias.
Outros aspectos importantes devem ser citados, como é o caso de alterações na
resposta imune de mexilhões resultante da exposição ao cádmio. Por ser moluscos bivalves,
os mexilhões são organismos indicadores de poluição do ambiente, pois são filtradores,
possuindo sistema circulatório aberto exposto às flutuações do ambiente e a fatores
contaminantes. Seu sistema imune pode representar o estado de sua saúde, refletindo o
grau de poluição a que está submetido. As células imunes, principalmente hemócitos,
desempenham um papel principal na defesa do organismo. Os antígenos estimulam a
migração de hemócitos, seguido pela fagocitose e degradação intracelular do patógeno por
enzimas líticas ou pela produção de metabólitos reagentes ao oxigênio (Coles e col., 1995).

Assim, com a exposição ao cádmio, o número de hemócitos circulantes aumenta. Isto

leva a um aumento na produção de radicais superóxidos pelos hemócitos, que desempenha
um importante papel na morte intra e extracelular de patógenos invasivos na célula. Este
excesso de radicais superóxidos acarreta na intoxicação da própria célula (Coles e col .,
1995).
Exceto o cádmio, com a permanência dos animais em ambientes poluídos, seus
processos regulatórios são ajustados para conter os efeitos do metal e para manter a
homeostase. Assim, alguns sistemas fisiológicos desenvolvem uma “resistência” à presença
de metais tóxicos (Harris e Santos, 2000). Desse modo, peixes expostos a metais pesados
podem apresentar suas brânquias danificadas e afetar as suas funções respiratórias e
regulação iônica. Já em Oncorhynchus mykiss, longas aclimatações em ambientes com
exposição ao cobre podem resultar na restauração da atividade da Na/K ATPase (Harris e
Santos, 2000).
A tabela a seguir retrata os tecidos que sofrem acumulação por metais e a ordem de
crescimento deste acúmulo em diferentes caranguejos estudados previamente.
Transporte de cádmio
Poucos estudos foram realizados com as células do hepatopâncreas de crustáceos,
por isso, assim como em células de brânquias, a interação do cádmio com as células ainda
é pouco conhecida. Acredita-se que o contato com o metal se dá através da alimentação e
da entrada de água. Vários estudos mostram que altas concentrações de cádmio podem ser
letais para vários animais, principalmente crustáceos, possibilitando a ocorrência de efeitos
fisiológicos adversos, especialmente na respiração e osmoregulação. Assim, as brânquias,
como órgão responsável pela respiração, regulação ácido-base, regulação osmótica e
iônica, ao entrar em contato com altas concentrações do metal, podem sofrer danos
morfológicos resultando em deficiência respiratória e osmoregulatória.
Estudos focam na retirada de cádmio do meio aquático e sua acumulação, mas pouco
se sabe sobre seu transporte celular. As respostas tóxicas dos metais geralmente envolvem
aspectos geoquímicos, pois a competição e a complexação desses metais pode interferir
com a quantidade de metal livre disponível na água, afetando a biodisponibilidade para os
animais expostos (Matsuo, e col., 2005).

Tabela 1: Resumo dos estudos realizados com diferentes concentrações de metais

acumulados nos tecidos em caranguejos (modificado de Turoczy e col., 2001).
Em crustáceos, a aparente retirada de metal ocorre através das brânquias. Silvestre e

colaboradores (2004) estudaram no caranguejo Eriocheir sinensis o influxo de cádmio em
brânquias perfundidas. Além disso, observa-se que o cálcio compete com o cádmio e o
influxo deste último aumenta com a retirada de cálcio do meio externo, aumentando a
toxicidade do cádmio. A retirada de sódio do meio parece inibir a entrada de cádmio em
brânquias perfundidas de caranguejos (Silvestre e col.., 2004). Em anfípodas, o cádmio
diminui o influxo de sódio. Isso sugere que o cádmio pode entrar nas células epiteliais por
trocadores de cálcio, como o Na/Ca. Outro aspecto importante é que o cádmio poderia
passar pelo epitélio através das difusões paracelulares, junções ou entradas transcelulares.
Já no caranguejo Carcinus maenas em pós-muda, observou-se que o cádmio é retirado do
meio via canais de cálcio localizados na membrana apical das brânquias (Bondgaard e
Bjerregaard, 2005).
Em peixes, cátions metálicos se acoplam às brânquias e determinam a toxicidade do
metal (Matsuo, e col.., 2005). O cádmio causa alterações na homeostase do cálcio,
envolvendo competições entre os dois íons pelo canal de entrada do cálcio, provavelmente
contido nas células de cloreto das brânquias dos peixes (Matsuo, e col., 2005), além de

interromper a homeostase de cálcio através da inibição de canais Ca-ATPase basolaterais

nestas mesmas células (Matsuo, e col., 2005).
Figura 2: Possível transporte de cádmio em células estriadas de crustáceos eurialinos.
Em resumo, o cádmio parece entrar em células de crustáceos e peixes via canais para
cálcio, trocadores Na/Ca e via Ca-ATPase, embora não haja estudos em nível celular para o
transporte de cádmio utilizando-se de inibidores específicos para cada tipo de transportador.
Interação do cádmio com a salinidade

Vários estudos realizados com peixes e invertebrados marinhos demonstram um alto
grau de variabilidade na entrada e acumulação de metais. Em crustáceos, as respostas
metabólicas e fisiológicas à exposição de cádmio são altamente afetadas pelas condições
dos animais experimentais e pelo estágio do ciclo da muda. No entanto, a acumulação e
efeitos tóxicos do cádmio parecem aumentar em ambientes com baixas salinidades ou
baixos níveis de cálcio. Isso se dá devido à competição entre o cádmio e cálcio por sítios de
ligação, além das taxas de entrada e retorno de íons que aumenta em caranguejos expostos
em meios diluídos (Zanders e Rojas, 1996).
Acredita-se que o influxo de Cd é dependente da salinidade, porém há resultados
contraditórios. Por exemplo, enquanto a acumulação de cádmio em tecidos e no
exoesqueleto em Carcinus maenas se mostra inversamente relacionado com a salinidade

externa ou concentrações de cálcio, encontram-se caranguejos em localidades marinhas

que apresentam alta acumulação de taxas do metal na hemolinfa em relação a aqueles
situados em estuários (Zanders e Rojas, 1996).
No entanto, muitos estudos mostraram que a acumulação e os efeitos tóxicos do
cádmio aumentam em ambientes com baixas salinidades ou baixos níveis de cálcio
(Zanders e Rojas, 1996). Quando há diminuição de salinidade, a quantidade de Cd livre no
meio aumenta, tornando-o mais tóxico por não se complexar com íons de cloreto que ficam
indisponíveis em baixa salinidade. Como o cádmio compete com o cálcio por sítios de
associação, em baixas concentrações de cálcio há a maior entrada de cádmio,
principalmente em animais que estão em meios diluídos.
Estes metais, em geral, são fortes inibidores da anidrase carbônica, enzima
responsável pelas trocas gasosas. A anidrase carbônica é uma enzima central nos
processos integrativos de transporte iônico e osmorregulação em crustáceos eurialinos, e a
inibição dessa enzima poderia potencialmente afetar a regulação de múltiplos íons de
maneira indireta.
A tabela abaixo demonstra concentrações de cádmio encontradas em diferentes
salinidades, resultando no acúmulo do metal em órgãos em salinidades menores,
comprovando a competição entre os íons cádmio, cálcio e sódio.
Tabela 2: Concentração de cádmio em vários tecidos de caranguejos aclimatados em diferentes

salinidades (125 ou 25) e expostos a diversas concentrações de cádmio (modificado de Zanders e
Rojas, 1996).

Interação do cádmio com órgãos de mamíferos

Atualmente tem-se considerado o cádmio como um contaminante ambiental. O
reconhecimento de propriedades metalúrgicas disponíveis para o Cd, como a resistência à
corrosão, conduziram ao aumento da produção do metal após 1910 (Fasset, 1975).
Exposição de trabalhadores à fumaça de óxidos foi reconhecida por ser a causa de
agudas e, às vezes, fatais edemas pulmonares. A atenção foi voltada para doenças renais e
enfisemas em trabalhadores expostos ao pó de óxido de cádmio por longos períodos em
fábricas de baterias. Assim, físicos japoneses estudaram uma única doença que afetava
mulheres idosas. A doença era caracterizada por osteomalacia, proteinúria e glicosúria em
mulheres que viveram muito tempo em lugares contaminados. Concluiu-se que a doença
teria sido causada por um grande aumento na exposição ao cádmio e possíveis outros
metais contaminando a água e arroz, associados a baixas ingestões de cálcio, vitamina D,
estresse da gravidez e lactação (Fasset, 1975). A doença foi denominada de Itai-Itai devido
à severas dores nos ossos.
Nesta época, estudos bioquímicos e toxicológicos mostraram que pequenas
quantidades de cádmio absorvidas normalmente tendem a ser retidas por longos períodos,
particularmente no rim. A descoberta de ligantes protéicos específicos no fígado e rim, e
várias interações entre cádmio, zinco e cobre conduziram a um aumento no interesse da
toxicologia do cádmio e de como este poderia desempenhar um papel importante na
hipertensão (Fasset, 1975). Assim, muitas pesquisas envolvendo formações de complexos e
ligantes foram desenvolvidas para se tentar entender a dinâmica do metal.
Atualmente, os principais estudos envolvendo mamíferos foram feitos com ratos e
camundongos. Seus efeitos foram encontrados nos rins, fígado e testículos. Em testículos, o
cádmio pode ser transportado de forma oportunista para o interior de suas células
endoteliais vasculares, resultando em um aumento da acumulação celular e toxicidade, e
formação de células cancerosas (Dalton e col.., 2005). É conhecido que a necrose testicular
induzida por cádmio é comum em várias espécies de animais como roedores, sapos, peixes,
entre outros. Os eventos celulares que precedem a toxicidade testicular induzida por cádmio
indicam que células endoteliais vasculares são danificadas primeiramente, causando, talvez,
os eventos. Dados sugerem que o gene Cdm produz o ZIP8 responsável pelo transporte de
íons como manganês e, talvez o zinco. Desse modo, o cádmio seria transportado de forma
oportunista para o interior de células endoteliais vasculares do testículo resultando no
aumento da acumulação e toxicidade do íon nas células (Dalton e col.., 2005).
Nos rins, o cádmio pode ter uma possível relação com a hipertensão. Estudos feitos a
partir de autopsias mostram uma grande taxa de acúmulo de cádmio, ou do complexo
zinco/cádmio em pessoas com hipertensão (Fasset, 1975). Ratos e coelhos que foram
tratados com cádmio também desenvolveram um quadro de hipertensão. Porém, esses

resultados não foram confirmados já que outras pesquisas evidenciaram que o cádmio
poderia não participar da hipertensão, pois isto poderia estar relacionado com o fumo, a
idade, o sexo e patologias renais (Fasset, 1975).
Outro aspecto relacionado com a patologia renal é a proteinúria. Ela é considerada por
ser o primeiro sinal de disfunção nos túbulos renais, quando níveis de cádmio acumulado no
córtex renal alcançam taxas de 200 ppm (Fasset, 1975). Atualmente, o principais danos nos
rins se dão nos túbulos renais associados com numerosos tumores em animais de
laboratórios e humanos (Jeong, e col.., 2000).
O fígado é um dos principais órgãos alvos da toxicidade do cádmio. Os danos
causados no fígado através da exposição aguda ao cádmio são caracterizados por apoptose
e necrose. Os danos morfológicos refletem nos altos níveis de enzimas serosas do fígado
como: alanina aminotransferase (ALT) aspartato aminotransferase (AST) e sorbitol
dehidrogenase (SDH). Já os efeitos crônicos da toxicidade por cádmio manifestam
primeiramente como inflamações granulomatoses, proliferação celular, hiperplasia nodular e
apoptose (Jeong, e col.., 2000).
No fígado, assim, o cádmio pode induzir uma disfunção na homeostase tecidual, ou
seja, uma modificação na proliferação e morte celular. Isso indica que as junções gap são
alteradas ou inibidas pelo acúmulo de cádmio. As junções gap são comunicações
intercelulares que regulam a homeostase celular através da passagem de moléculas
solúveis em água de baixo peso molecular. Elas consistem na reunião de proteínas
conhecidas como conexinas, sendo importantes na regulação da proliferação celular,
diferenciação e morte, desenvolvimento embriônico e carcinogênese (Jeong, e col.., 2000).
Assim, o cádmio induz a morte celular (apoptose e necrose) e a proliferação celular
(regeneração celular) através da exposição aguda. A exposição crônica de cádmio também
induz a morte celular (apoptose) e a proliferação celular (regeneração celular e hiperplasia
nodular). O rompimento da homeostase do tecido pelo cádmio sugere que as junções gap
são alteradas pelo cádmio (Jeong e col.., 2000).
Essa alteração ou até mesmo inibição das junções gap pode acarretar o
desenvolvimento de tumores. Além disso, o cádmio pode causar o rompimento da actina do
citoesqueleto, que forma a rede de microfilamentos das células e são altamente associadas
com as junções gap. Isto resulta na mudança estrutural das junções intercelulares,
destruição das junções ou até mesmo na sua internalização (Jeong e col., 2000).


Transporte de Metais Essenciais em Organismos

Aquáticos: o cobre e o zinco
Marina Granado
Laboratório de Fisiologia Comparada de Crustáceos
[email protected]
Introdução
Durante a evolução, organismos aquáticos e terrestres desenvolveram diversas
estratégias para manutenção do equilíbrio das relações de íons de metais presentes e
viáveis no meio ambiente. As células selecionam íons necessários para o desenvolvimento
e excluem aqueles que não o são e posteriormente mantém a concentração interna dos íons
em situação ótima (Perales-Vela e col., 2006).
Metais são tomados e acumulados por organismos aquáticos, tanto através do meio
em que vivem, quanto através da dieta. Muitos metais traço atuam como metais essenciais
no metabolismo, mas todos eles possuem potencial para causar efeitos ecotoxicológicos
(Rainbow, 2000). Foi concluído que metais traço dissolvidos podem também ser tomados de
acordo com o habitat e por último, depende do grau de adaptação de animais aquáticos à
água salgada, salobra ou doce (Rainbow, 2000). Metais traço acumulados requerem
detoxificação fisiológica, tipicamente pela ligação com grânulos inorgânicos de alta
afinidade, frequentemente com base fosfato, ou por ligação com uma proteína
detoxificadora, como metalotioneína ou ferritina (Rainbow, 2000).
Nas águas não poluidas, os animais obtêm muito do cobre necessário pela absorção
através da alimentação e consequentemente a tomada de cobre pelas brânquias é a de
menor contribuição para o total de cobre presente no organismo como um todo (Campbell e
col., 1999). No entanto, a situação é muito diferente em águas poluídas com cobre, onde as
brânquias de truta arco íris podem apresentar aumento de 10% no acúmulo de cobre em
intervalo de poucas horas de exposição e simultaneamente há registro de aumento da
concentração de cobre no sangue destes animais (Campbell e col., 1999).
Metais traço, incluindo os definidos como metais pesados, oriundos da atividade
industrial e mineira são descartados nas águas costeiras e estuarinas em diversos locais.
Os derivados descartados antropogenicamente podem acumular em sedimentos locais (até
5 vezes mais do que na água) e os invertebrados que habitam tais sedimentos estão
potencialmente expostos às altas concentrações de metais (Harris e Santos, 2000).
Metais de transição (Cu, Zn, Fe, Co, Se, Mn) são essenciais para a saúde da maioria
dos organismos, formando componentes integrantes de proteínas envolvidas em todos os
aspectos das funções biológicas. Sua ubiqüidade é “governada” por suas habilidades de
formar uma gama grande de coordenadas geométricas e estados de redox, que permitem a

esses elementos a interação com muitas entidades celulares, atuando ambiguamente na

respiração celular, transporte de oxigênio, estabilidade protéica, “limpeza” de radicais livres,
e ação de diversas enzimas celulares, bem como transcrição de DNA (Bury e col., 2003).
A superfície dos crustáceos é coberta por uma cutícula secretada pelas células do
epitélio exterior. Pequenos crustáceos são tipicamente permeáveis como um todo,
enquanto que grandes malacostracas podem restringir a permeabilidade para regiões
selecionadas, como as brânquias. A cutícula impermeável atua como um local para
absorção passiva de metais pesados para o corpo do crustáceo e não serão considerados
neste texto (Rainbow, 2000).
Abaixo da cutícula, a membrana celular do epitélio consiste numa barreira para
entrada de metais, como funciona para entrada de químicos para qualquer célula,
protegendo os caminhos bioquímicos do organismo dos químicos provenientes do ambiente
(Rainbow, 2000).
Hepatopâncreas
O hepatopâncreas está envolvido numa variedade de processos fisiológicos que
incluem secreção de suco digestivo, absorção e estoque de alimento como tambem
detoxificação e estoque de metais pesados. Possui ainda a capacidade de concentrar
metais oriundos da hemolinfa e do trato digestório e estocá-los em vacúolos intracelulares
das células F e R e este é o maior órgão de detoxificação ao lado da glândula antenal, que é
análoga aos rins (Alcorlo e col., 2006).
Figura 1 - Vista ventral de um crustáceo, onde é visualizado estômago,

hepatopâncreas, músculo e intestino.
http://resweb.llu.edu/sdunbar/students/epidermis_removed.jpg (04/05/2010).
Brânquias

As brânquias representam um órgão vital para organismos aquáticos com função

indispensável no transporte iônico. Os prejuízos estruturais ocorridos devido à presença de
cobre inclui a “demolição” das estruturas celulares e anormalidades das barreiras de
absorção e transporte. Dessa maneira, essas alterações afetam a fisiologia do animal,
como as trocas de oxigênio e íons nas brânquias. O epitélio branquial é basicamente uma
camada única de células e a habilidade adaptativa para se “recuperar” dos danos causados
pelos metais pesados é restrita (Yang e col., 2007).
Para muitos animais aquáticos, as brânquias são um órgão muito importante para a
manutenção da vida. Em animais marinhos, as brânquias são cruciais para respiração,
excreção, balanço acido-base e regulação iônica e osmótica (Wu e Chen, 2004).
Sendo a primeira proteção nos animais aquáticos, as brânquias são imediatamente
expostas ao ambiente externo e consiste no primeiro órgão exposto aos poluentes quando a
água está contaminada (Wu e Chen,2004).
Figura 1: Brânquias de um peixe retiradas por completo.

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/b/bc/Tuna_Gills_cut_out.jpg/250px-
Tuna_Gills_cut_out.jpg (04/05/2010).
Membrana celular
A membrana celular é uma bicamada de lipídeos, com grupos hidrofóbicos
direcionados para o lado interno e grupo hidrofílico para o lado externo da camada. A
membrana celular também contem diversas proteínas e estas são essenciais para
passagem através da membrana de moléculas hidrofóbicas e íons, incluindo metais traço
(Rainbow, 2000).

Figura 2: Desenho esquemático de um filamento branquial de crustáceo. Modificado de: Freire e col.,
2008.
Várias possibilidades de rotas têm sido propostas para o transporte de metais traço
através da membrana citoplasmática. São 4 rotas principais: (a) transporte mediado por
carreadores onde o metal se liga à membrana que possui uma proteína e é transportado
através da membrana. Já no citosol, o metal se liga a uma proteína e é carreado
cineticamente; (b) transporte através de canais de proteínas onde os íons de metal são
transportados por gradientes hidrofílicos; (c) difusão passiva do metal lipossolúvel (não
polar) através da bicamada lipídica; (d) endocitose, onde há o engolfamento de partículas e
sua transferência para vesículas intracelulares. Essas duas últimas rotas são
provavelmente de menor importância para a tomada típica de metais pesados da solução
(Rainbow, 2000).
Fora da membrana apical, o ion metal precisa ser apropriado quimicamente para entrar
pelo canal da membrana ou ligado em proteínas da membrana. Geralmente são
considerados biodisponíveis quando estão na forma livre e na forma hidratada. Não entendi
bem aqui!
Diversos estudos com tecido epitelial indicaram que a membrana plasmática,
mitocondrial e lisossomal possuem proteínas que atuam no transporte de cálcio e de metais
pesados como zinco, cádmio e cobre, tanto quanto atuam no transporte de cálcio. Desse
modo existem mecanismos regulatórios da atividade intracelular que pode ser interrompida
ou até mesmo abolida na presença de concentração significativa de metais pesados
(Mandal e col., 2005).

Figura 4: Esquema da membrana celular, demonstrando o glicocálice, proteínas transmembranas,

lados hidrofílico e hidrofóbico.
(http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/La_celula/imagenes/membrana_pl
asmatica_bort.gif) (04/05/10)
Cobre
A natureza redox do cobre é utilizada em um grande número de processos
enzimáticos, incluindo a catalização pelo citocromo c mitocondrial, o qual faz do cobre um
elemento essencial para as células aeróbicas dos organismos. No entanto, as propriedades
redox do cobre podem causar rapidamente a geração de oxigênio reativo quando os níveis
celulares de cobre são elevados (Grosell e Wood,2002). O cobre é um dos nutrientes
essenciais necessários para a síntese de hemocianina nos crustáceos. O cobre é requerido
para funções biológicas normais de diversas proteínas, incluindo muitas das enzimas
necessárias para o crescimento e desenvolvimento. No entanto, o excesso de cobre é
toxico e causa efeitos biológicos adversos em níveis molecular, celular e tecidual (Yang e
col., 2007).
A tomada de cobre pelas brânquias envolve diversas etapas: (a) ligação inicial do
cobre com a superfície branquial; (b) movimento do cobre através da membrana apical e
entrada nas células branquiais; (c) “trafego” intracelular de cobre para a membrana
basolateral; (d) movimentação do cobre vindo das células para o sangue (Campbell e col.,
1999).
Em sistemas de mamíferos o cobre é transportado por subfamílias P-ATPases e a Cu-
ATPase tem uma sequência de ligantes de metal que é análoga entre bactérias e seres
humanos, implicando desse modo que seja a mesma sequência conservada para os peixes

(Campbell e col., 1999). A completa inibição da tomada de cobre pela aplicação de

50umol/L de vanadato sugere que P-ATPase, localizada basolateralmente é a principal
responsável pela tomada de cobre da água (Campbell e col., 1999).
Enquanto que o requerimento de cobre em peixes é claramente obtido pela dieta
através da ingestão, a homeostase de cobre nas brânquias tem sido observado até
recentemente. No entanto, estudos toxicológicos mostram que elevadas concentrações de
cobre na água pode levar ao aumento de cobre, particularmente nas brânquias e no fígado,
sugerindo que as brânquias possam servir como rota de tomada de cobre (Grosell e
Wood,2002).
Kamunde (2001 e 2002) demonstrou duas rotas diferentes para tomada de cobre pelas
brânquias: (a) na base da competição da tomada de cobre pela baixa concentração de sódio
no ambiente e a sensibilidade da proporção da tomada de cobre por bafilomicina A1, um
dos caminhos de tomada, aparenta ser através de canal apical de sódio, sendo sensível ao
sódio; (b) segunda pela tomada continua de cobre , uma vez que na presença de altas
concentrações de sódio no ambiente (1-20mmol/L), sendo insensível ao sódio (Grosell e
Wood,2002).
Dependendo da concentração de sódio no ambiente, a tomada de cobre através da
rota sensível ao sódio é de 2 a 5 vezes maior que através da rota insensível ao sódio. Isso
sugere que a rota sensível ao sódio pode ser modulada pelo status interno de sódio, em
adição aos níveis aquáticos de sódio (Grosell e Wood,2002). O sódio claramente inibe a
tomada de cobre e o inverso também é verdadeiro e uma resposta similar foi descrita para
o zinco (Grosell e Wood,2002).
Mudanças na salinidade não só causam alterações físico-químicas no meio como
também pode haver efeito na fisiologia do crustáceo (Rainbow, 2000). No caso do
crustáceo estuarino ser exposto à baixa salinidade, os fluidos corpóreos são hiperosmóticos
em relação ao meio, então a água entra osmoticamente (Rainbow, 2000).
O crustáceo responde tipicamente ao aumento da entrada osmótica de água pelo
aumento da produção urinária e a urina é isotônica em relação à hemolinfa, e desse modo, o
aumento da excreção de água é associado com a concomitante perda de íons como sódio e
cloreto na urina (Rainbow, 2000).
Desse modo, uma redução na salinidade poderá causar aumento da tomada de cálcio,
posteriormente potencializando a entrada de metais, como cobre e zinco via rotas de
tomada de cálcio. Esse tipo de tomada esta potencialmente sob controle fisiológico
(Rainbow, 2000). Alguns crustáceos podem ainda alterar a permeabilidade em resposta
à baixa salinidade, e talvez assim fazer mudanças nas proporções da tomada de metais
(Rainbow, 2000).

Essa regulação da tomada de cobre é aparentemente mediada por um ou mais

carreadores de cobre específicos, em contraste à tomada que ocorre pelo canal apical de
sódio primariamente envolvido na manutenção da homeostase de sódio (Grosell e
Wood,2002). Um mecanismo similar do transporte de cobre através da membrana
basolateral pode estar envolvida na regulação da tomada de cobre (vanadato Cu-ATPase)
(Grosell e Wood,2002).
Geralmente, a concentração de metalotioneína em organismos aquáticos é baixa. No
entanto, a síntese pode ser aumentada quando animais estão expostos à altas
concentrações de metais. Então, as metalotioneínas atuam na detoxificação de metal,
seqüestro e regulação (Yang e col., 2007).
É conhecido que a exposição de crustáceos às águas poluídas resulta em prejuizos
branquiais que pode resultar em danos para a função respiratória. Como as brânquias de
crustáceos também estão envolvidas na osmorregulação e ionorregulação, é possível que
os danos branquiais resultem em prejuízos para a osmorregulação (Spicer e col., 1998).
Zinco
O zinco é homeostaticamente regulado, talvez em um nível mais preciso do que o
cobre. Os mecanismos de regulação do zinco são aparentemente diferentes, como acúmulo
interno negligenciável, o que reflete a redução da tomada branquial de zinco identificado
como parte importante do mecanismo de aclimatação (McGerr e col., 2000). Por ser um
micronutriente importante para os organismos aquáticos incluindo os peixes, mas pode ser
tóxico por interferir na tomada de cálcio e no seu metabolismo quando o zinco estiver em
concentrações que excedam o normal (Rodriguez e col., 2007).
O transporte de zinco e cálcio através das brânquias ocorre através de uma
competição simples e há correlação evidente de que as células cloreto participam da
tomada de zinco. Ainda é desconhecido onde esta competição ocorre: nos canais apicais,
ATPase basolateral ou em ambos (Wood,1992). De todas as concentrações testadas de
metais essenciais, cobre e zinco produzem hipercalcemia. De acordo com o tempo de
exposição, em todos os casos, a glicemia atingiu pico após 3 horas do inicio da exposição,
retornando ao normal após 8 horas na maioria dos casos (Rodriguez e col., 2007).
Em peixes, o zinco pode ser assimilado através da fase aquosa ou da dieta. Para a
fase aquosa do zinco, as brânquias e o intestino são os melhores “pontos” de absorção
(Zhang e Wang,2005). Estudos anteriores mostram que a tomada de zinco através da dieta
é a rota predominante de acúmulo do metal oriundo do ambiente em peixes marinhos
(Zhang e Wang,2005).
Em ambientes poluídos, os peixes são continuadamente expostos ao ambiente rico em
zinco, tanto pela água quanto pela dieta. Diversos estudos recentes em truta cor de arco íris

tem indicado que as mudanças nas tomadas de metal e nos processos fisiológicos ocorrem
após exposição ao zinco (Zhang e Wang,2005).
O metabolismo de zinco nas lagostas e no siri azul são similares e aparentam ser
regulados, mas se as lagostas forem alimentadas com altas concentrações de zinco através
das ostras, poderão acumular quantidades significativas de zinco e este será retido com o
passar do tempo. O zinco também é abundante nos sedimentos, onde as lagostas utilizam
como habitat (Engel e col., 2001).
Embora em algumas espécies possam ocorrer altas concentrações de metal e ainda
manter continuo e funcional o processo fisiológico pode ocorrer uma alteração nos
processos de excreção e formas de detoxificação (Harris e Santos, 2000).
A Na/K-ATPase branquial demonstra a redução sugerida da exposição aguda ao cobre
em Carcinus maenas e esta redução é acompanhada por uma severa depleção do sódio na
hemolinfa (Harris e Santos, 2000).
A água contaminada com cobre e zinco também interfere na função respiratória das
brânquias dos crustáceos, resultando na redução da transferência de gases e na sua
eficiência, e assim na diminuição da performance respiratória. Foi observado também a
redução do consumo de oxigênio e performance cardíaca. É nítido que animais que
habitam áreas cronicamente poluídas fazem ajustes em seus processos regulatórios para
contra-atacar esses efeitos dos metais e assim manter a homeostase (Harris e Santos,
2000).
Existe um custo fisiológico para reestabelecer as condições normais, incluindo
reparação dos danos celulares, aumento da quantidade de células para repor células
efetoras e para que haja processo de detoxificação. Tudo isso gera custo substancial e
essencial para a sobrevivência do animal. Já a longo prazo, mudanças compensatórias,
incluindo controle do fluxo metabólico, indução da supressão de enzimas e seleção natural
das enzimas variantes, consistem num processo de competição entre as espécies para que
haja continuidade na reprodução e desenvolvimento no ambiente contaminado (Harris e
Santos, 2000).
A alta disponibilidade de comida proveniente de esgoto pode ser uma razão para a
presença de espécies bênticas (tais como moluscos e lagostas) e presença de peixes nos
sedimentos. Estes organismos podem “captar” metais do sedimento onde habitam e da
dieta que consomem (Perales-Vela e col., 2006).
A lagosta, por exemplo, é uma espécie que apresenta diversos caminhos/rotas para
bioacumulação de metais e outros poluentes, absorvendo pela superfície branquial, ingestão
de água e sedimentos e o consumo de organismos já com acúmulo de metais (Morales-
Hernandéz e col., 2004).

Alsop e Wood (1999) demonstraram que o cálcio presente na água reduz a tomada de
zinco (em 3 horas) e isso também foi demonstrado por Barrom e Albeke (2000) em trutas
(Niyogi e Wood, 2006).
É razoável assumir que o aumento do influxo de zinco branquial ocorra devido ao
aumento do influxo do cálcio, desde que utilizem a mesma via de tomada (Niyogi e Wood,
2006).
Na membrana basolateral, o zinco não aparenta ser transportados pela Ca-ATPase
porque a inibição é tanto competitiva quanto não competitiva e o zinco também não é
transportado por mecanismos dependentes de sódio (Marshall, 2002).
Além disso, é comum encontrar altos níveis de metais no exoesqueleto, mas tem sido
postulado que este fato é principalmente relacionado mais com adsorção do que bioacúmulo
(Alcorlo e col., 2006). A tomada em nível da membrana celular é governada por um
transportador específico, transporte por canais de proteínas, difusão passiva de metais
lipossolúveis e endocitose (Alcorlo e col., 2006).
Cálcio em interação com os metais cobre e zinco

Há evidências de que a concentração de cálcio afeta a tomada de cobre e zinco no
caranguejo Carcinus maenas, independentemente do efeito da salinidade e a tomada de
cobre e zinco pelo anfípoda Gammarus pulex é ao menos parcialmente explicado pela
tomada do metal via rota de cálcio. Mas por outro lado, a tomada de zinco pelo decápoda
Palaemon elegans não aparenta ser seguido por nenhuma rota de outros íons, respondendo
a mudanças na osmolalidade do meio (Rainbow, 2000).
Elevações do nível de cálcio na água geralmente protegem contra metais, gerando
inibição ou redução da entrada de metais como cobre e zinco nos peixes (Wood,1992).Há
ainda uma resposta fisiológica adicional nos crustáceos que podem afetar a tomada de
metais traço, a permeabilidade intertegumental que diminui conforme o gradiente de
salinidade vai do ambiente marinho para o estuarino e para água doce e a tomada do metal
acompanha este “decaimento” (Rainbow, 2000).
Em organismos expostos a metais pesados, a metalotioneína, uma proteína de ligação
rica em cisteina que tem além de tudo propriedade detoxificante e pode ser sintetizada
quando se torna necessário, ou seja, quando os níveis de metal estão muito altos. A
metalotioneína tem como proposta ser usada como biomarcador para o estudo da evolução
da poluição por metais pesados (Yang e col., 2007).
Resultados indicam que a exposição ao ambiente aquático rico em cobre leva à
mudanças nas microestruturas das brânquias e do hepatopâncreas de Eriocheir sinensis em
termos de dose resposta (Yang e col., 2007).


Efeitos da toxicidade de metais no metabolismo

de organismos aquáticos
Vanessa Ap.Rocha Oliveira Vieira

[email protected]
A fisiologia comparativa está intimamente relacionada à biologia da conservação,

sendo assim, a fisiologia da conservação é definida como o estudo de respostas fisiológicas
de organismos, frente a alterações antrópicas no meio ambiente, que possam causar ou
contribuir para um declínio populacional. Neste estudo está incluído o organismo e suas
interações com o meio ambiente tais como: metabolismo, relações térmicas, nutrição,
respostas endócrinas às mudanças ambientais e alterações em padrões imunes, sendo que,
estes parâmetros podem ser utilizados como biomarcadores, indicando que muitas
substâncias tóxicas podem interagir com o organismo como um todo (Wikelski e Cooke,
2006).
A influência humana nos sistemas naturais tem aumentado continuamente, justificando
a importância de investigar os aspectos antrópicos que causam estresse em animais em
seus sistemas naturais. No ambiente aquático, as ações antrópicas são muito evidentes,
levando os organismos muitas vezes a ficarem expostos a efeitos subletais que provocam
consequências imprevisíveis como alterações nas funções celulares, metabólicas e/ou
bioquímicas (Araújo, 1998). As águas continentais encontram-se contaminadas por uma
grande variedade de poluentes cujas fontes principais são os efluentes líquidos de origem
doméstica e industrial. A diversidade e complexidade destes poluentes resultam em diversos
efeitos biológicos e estes efeitos estão relacionados com a composição química de cada
poluente despejado no ambiente aquático, dentre estes estão os poluentes das classes dos
metais e considerando que há mais de um contaminante presente nas águas pode haver
interação entre eles com possíveis efeitos sinergéticos, antagônicos, de potenciação ou
adição (Zagatto e Bertoletti, 2006; Mozeto e Zagatto, 2006).
O monitoramento e a avaliação do risco dos ambientes impactados não podem ser
baseados exclusivamente em análises químicas de amostras ambientais, pois dados como
estes não refletem os efeitos reais causados a biota (Barsiene e col. 2006,), sendo assim
para avaliar os impactos dos poluentes na qualidade ambiental é fundamental que se avalie
os efeitos que estas substâncias causam nos organismos vivos destes ecossistemas (Wells
e col. 2001).
Os estudos em ecotoxicologia vêm se baseando nas avaliações de riscos ambientais
ou ERA (Ecological or environmental risk assessment) causados por poluentes a fim de
definir os efeitos adversos sobre os ecossistemas utilizando metodologias científicas

(Depledge e Fossi, 1994), porém os efeitos deletérios sobre as populações, muitas vezes,
são difíceis de detectar dado que muitos desses efeitos tendem a se manifestar apenas
após longos períodos de tempo e quando finalmente tornar-se claro, o efeito pode ter ido
além do ponto onde possa ser revertido através de ações de correção ou redução dos riscos
(Oost e col., 2003). Neste capítulo veremos alguns dos metais que se tornam tóxicos
quando em excesso e os efeitos dessa toxicidade observados em alguns grupos de animais
aquáticos.
Metais
Os metais, normalmente, estão presentes em baixa concentrações nos ambientes
aquáticos (Ash e Stone, 2003), no litoral e rios próximos a centros urbanos, os metais
podem ser encontrados em concentrações muito mais elevadas, provavelmente devido à
entrada de sistemas fluviais (Morillo e col., 2004) e à poluição, associada a efluentes
líquidos de origem doméstica e industrial que muitas vezes não recebem o tratamento
adequado. (Chen e col., 2005; Wannaz e col., 2006).
Alguns metais, em baixas concentrações, são importantes no metabolismo,
participando de processos fisiológicos, são os chamados metais essenciais, e são
frequentemente transportados ativamente através das membranas (Tamás e Wysocki 2001,
Van Ho e col., 2002) mas, em elevadas concentrações podem se tornar tóxicos. Nessa
classe destacam-se os metais ferro (Fe), zinco (Zn), cobre (Cu) e manganês (Mn), por outro
lado, existem metais como chumbo (Pb), cádmio (Cd) e mercúrio (Hg), que não são
essenciais aos organismos e podem alterar o estado fisiológico, além disso, muitos fatores
afetam os efeitos dos metais pesados, tais como sua forma química, via de entrada no
organismo, duração da exposição, idade e espécie do animal (Kostial e col., 1978; Madsen-
Moller, 1991)
Metais essenciais : sua importância no organismo
Cobre
O cobre é um metal de transição, considerado micronutriente essencial. Órgãos como
fígado, cérebro e coração contêm quantidades consideráveis de cobre (Watanabe e col.,
1997), ele é um fator requerido para a função celular (Karan e col., 1998; McGeer e col.,
2000) atuando como cofator enzimático em vários processos biológicos, além de estar
envolvido no processo de transferência de elétrons na cadeia respiratória (Watanabe e col.,
1997, Camakaris e col., 1999; Celik e Oehlenschager, 2004) em reações redox em enzimas
tais como citocromo, oxidase e superóxido dismutase (Watanabe e col., 1997, Camakaris e
col., 1999). Apesar disso, em altas concentrações pode vir a ser prejudicial ao organismo.

Mangânes
O manganês, em seu estado divalente, tem papel fundamental em vários processos
biológicos como no metabolismo de aminoácidos, lipídios, proteínas e carboidratos, além
disso, há muitas enzimas que são manganês-dependente incluindo as oxidoredutases,
transferases, hidrolases, liases, isomerases e ligases. Alguns autores citam a participação
deste metal na função das metaloenzimas como arginase, glutamina sintetase,
fosfoenolpiruvato, descarboxilase e manganês superóxido desmutase. Além desta
importante função como co-fator enzimático o manganês também está envolvido na função
do sistema imune, regulação de glicose no sangue e energia celular, reprodução, digestão e
mecanismos de defesa contra radicais livres (Keen e col.,1999; Freeland-Graves e
Llanes,1994). Após ser transportado nas células e oxidado intracelularmente por reação
com superóxidos a um estado trivalente, este metal mostra-se altamente tóxico
principalmente ao sistema nervoso (Archibald e Tyree, 1987).
Zinco
O zinco participa do metabolismo de ácidos nucléicos, replicação celular e do reparo e
crescimento dos tecidos (Murakami e Hirano, 2008). Em baixas concentrações são
importantes no processo de neurotransmissão e ainda participam da estrutura de
receptores excitatórios de glutamato, no entanto são tóxicos quando em altas concentrações
(Smart, 2004).
Ferro
O ferro faz parte de muitos processos enzimáticos de óxido-redução, dos citocromos,
catalases e peroxidades, age também como transportador de oxigênio na hemoglobina
(Maham e Arlin, 1995), no entanto, seu excesso pode ocasionar aumento na produção de
radicais livres (Schuartsman, 1985).
Metais não essenciais
Alumínio
O alumínio é um metal não essencial e muito tóxico ao organismo, apesar de ser um
dos mais abundantes na crosta terrestre, as concentrações deste metal em águas doces
são notavelmente baixas. O alumínio não é muito solúvel em água, mas em associação com
outros compostos como, por exemplo, F-, OH-, SO-, PO-, H, Si, O, pode acarretar na sua
solubilização e capacidade de se ligar a diversas macromoléculas (Lydersen, 1990;
Lydersen, 1990a). Segundo Teien (2006) o pH tem um forte controle na especiação de

metais podendo determinar a hidrólise, agregação, precipitação e competição de prótons por

locais de ligação disponível (Smith, 1996). A porta de entrada destes compostos nos peixes
é através das brânquias, pois os fosfolipídios e as glicoproteínas conferem à membrana
externa das brânquias sítios de carga negativa (Wold e Selset, 1977), e o alumínio na forma
de hidróxido, torna-se rico em cargas positivas, penetrando facilmente pela superfície
branquial (Shi e Haug, 1980; Wilkinson e Campbell, 1993).
Cádmio
O cádmio é um metal não essencial e geralmente tóxico para os organismos, este
metal afeta a estrutura de ácidos nucléicos e atividade de muitas enzimas e
neurotransmissores (Cooper e Manalis, 1984).
Chumbo
As concentrações de chumbo geralmente são baixas em águas continentais, este
metal se acumula nos rins, fígado e cérebro e geralmente seu grau de toxicidade varia com
o tempo de exposição a que o organismo é submetido (Bastos e Nefussi, 1986).
Mercúrio
O mercúrio é um dos metais mais tóxicos aos seres vivos, pode ser encontrado em
três formas: elementar, inorgânico e orgânico, cada uma com seu grau de toxicidade (Guzzi
e La Porta, 2008). A forma inorgânica é a fonte mais significativa de contaminação aquática
e seus efeitos estão diretamente relacionados a respostas adversas do sistema nervoso
central (Senger e col., 2006).
Mecanismos de toxicidade e avaliação

Os produtos químicos hidrofóbicos podem acumular-se nos organismos aquáticos
através de diferentes mecanismos: via captação direta da água através da pele ou
brânquias, via captação de partículas em suspensão (ingestão) e através do consumo de
alimentos contaminados. A Transferência de metais pesados através das membranas tem
sido estudada em vários tipos celulares. Apesar de muitas semelhanças, os mecanismos
envolvidos freqüentemente apresentam propriedades características de cada célula e devido
à sua elevada afinidade por proteínas e muitas outras moléculas biológicas, os metais
pesados não existem no sistemas biológicos na forma livre ou desvinculado (Bevan e
Foulkes, 1989)
A absorção intestinal e pulmonar são as principais rotas de entrada de metal no
organismo. No intestino a absorção envolve células apicais e basolaterais das membranas

celulares, e o transporte do lúmen se deve a afinidade por proteínas de ligação de metais,

as metalotioneínas (Foulkes e McMullen, 1987). Além disso, essa interação é sensível a
temperatura devido a fluidez de membrana (Foulkes, 1988). Já no epitélio alveolar o contato
com metais é acompanhado por efeitos potencialmente negativos, especialmente porque a
absorção do metal através do epitélio alveolar é muito mais eficiente do que através da
parede intestinal (Friberg e col., 1985), uma possível explicação é que no epitélio alveolar a
dinâmica de movimentação de metais pela membrana é maior nos fluidos intestinais devido
às menores concentrações de ligantes metal-obrigatório.
Os túbulos renais também podem ser uma porta de entrada para os metais, assim
como no intestino, células tanto apical quanto basolateral da membrana participam da
absorção. Os metais circulantes no plasma são filtrados e reabsorvidos por metalotioneínas.
Alternativamente a este processo, os metais podem se ligar a pequenas moléculas como
cisteína, glutationa e bicarbonato (Foulkes, 1978).
Blazka and Shaikh (1991) demonstraram que nos hepatócitos os metais entram na
célula via canais de cálcio, a interação entre Cádmio e cálcio foi descrita por Souza e col..
(1997) onde descreveram que Cádmio inibe a entrada de Cálcio na célula.
A maior parte de chumbo e cádmio circula no sangue carreado por eritrócitos, estas
células acumulam eficientemente estes metais. As membranas dos eritrócitos diferem das
membranas de outras células por sua permeabilidade a anions, a entrada de vários metais,
tais como, Cd, Pb, Zn, e Cu é facilitada por formar complexos aniônicos com carbonato,
bicarnonato, grupos hidroxil e íons de cloro (Simons, 1986).
Mesmo sem a detecção aguda ou crônica dos efeitos, os testes de ecotoxicidade de
acumulação do poluente, devem ser considerados como um critério de risco em si, uma vez
que alguns efeitos só podem ser reconhecidos em uma fase mais tardia. Os biomarcadores
de exposição irão refletir a distribuição da substância química em todo o organismo e essa
distribuição pode ser rastreada através de vários níveis biológicos, desde molecular ao
ecossistema como um todo (Who, 1993). Um biomarcador pode ser definido como uma
resposta biológica, o que pode estar relacionado com exposição ou efeitos tóxicos de
substâncias químicas ambientais e podem ser usados para avaliar os sinais do organismo
como um alerta dos riscos ambientais (Peakall e col., 1994).

Principais marcadores biológicos ou Biomarcadores

Estresse oxidativo
Muitos poluentes exercem toxicidade promovendo o estresse oxidativo, este pode ser
definido pela toxicidade gerada pelo oxigênio molecular através das espécies reativas de
oxigênio (ROS) referindo-se a produtos intermediários do oxigênio (ROIs) ou ainda radicais
livres ou oxiradicais (Di Giulio e col., 1989a). Os produtos da redução do O2 molecular são o
radical superóxido (O2-), peróxido de hidrogênio (H2O2) e o radical hidroxil (OH-). São
potentes oxidantes capazes de reagir com macromoléculas celulares, possivelmente
levando a inativação enzimática, peroxidação lipídica (LPO), danos ao DNA e, finalmente, a
morte celular (Winston e Di Giulio, 1991). As atividades das enzimas antioxidantes, que
inibem a formação dos oxiradicais como a superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT),
peroxidase glutationa-dependente (GPOX) e glutationa redutase (GRED) defendem os
organismos contra ROS e são criticamente importantes na desintoxicação. Numerosos
antioxidantes de baixo peso molecular como a glutationa reduzida (GSH), betacaroteno,
vitamina B, ácido ascórbico (vitamina C), alfatocopherol (Vitamina E) e ubiquinol10 também
tem sido descrito com função de desintoxicação (Stegeman e col., 1992; Lopez-Torres e
col., 1993). Em ecossistemas aquáticos o oxigênio dissolvido e a temperatura são variáveis
ambientais que influenciam os processos oxidativos (Parihar e col., 1997).
Proteínas de estresse e Metalotioneínas

As proteínas de estresse (também chamadas de proteínas de choque térmico ou HSP)
constituem um conjunto de proteínas abundantes envolvidas na proteção e reparação da
célula contra o estresse e condições prejudiciais como baixas e altas temperaturas, luz
ultravioleta, condições oxidativas, anóxia, metais e xenobióticos (Sanders, 1993). São
compostas por dois grandes grupos: as HSPs e as GRP (proteínas reguladoras de glicose),
que são altamente sintetizadas quando o organismo é submetido a estresse físico e químico
e na privação de glicose e oxigênio respectivamente (Stegeman e col., 1992).
Um grupo especial de proteínas de estresse de baixo peso molecular, rico em cisteína,
são as metalotioneínas (MTs), que funcionam na regulação de metais essenciais como Cu e
Zn e na desintoxicação destes e outros metais não essenciais como Cd e Hg (Roesijadi e
Robinson, 1994). A indução da síntese de MT é dependente da espécie em questão, pode
ocorrer por aumento da concentração intracelular de metal (Thiele, 1992), e alguns estudos
mostram que glicocorticóides e hormônios peptídicos também promovem sua indução
(Gerpe e col., 2000)

Peroxidação de lipídios
Os fosfolipídios de membrana de organismos aeróbios estão continuamente sujeitos a
oxidação por fontes tanto endógenas quanto exógenas, mas a própria célula contém
mecanismos antioxidantes para prevenção da peroxidação e uma variedade de mecanismos
que mantém a integridade da membrana e a homeostase (Vigo-Pelfrey, 1990; Dix e
Aikens,1993). O processo de peroxidação é uma reação em cadeia especialmente para os
ácidos graxos polinsaturados que são mais sensíveis a ação de ROS devido à dupla ligação
de carbonos. Membranas peroxidadas tornam-se rígidas e perdem a permeabilidade e os
produtos resultantes podem provocar mutações no DNA e alterações nos padrões de
expressão gênica (Marnett, 1999) e os efeitos acumulativos deste processo podem implicar
em numerosas condições patológicas (Steinberg, 1997).
O processo é iniciado principalmente por radicais hidroxil, especialmente reações
catalisadas por metais de transição. Os metais, como os sais de ferro, na presença de
peróxido de hidrogênio pode produzir HO (Schaich, 1992): Fe2+ + H2O2 Fe3+ + HO- +
HO . Metais e seus complexos implicam na peroxidação de lipídios e subsequentemente na
promoção da carcinogênese. (Sole e col., 1990; Kasprzak, 1995).
Outros potenciais marcadores biológicos

Parâmetros hematológicos - Alguns parâmetros hematológicos são potenciais
biomarcadores. A presença de enzimas específicas, como as transaminases, no sangue
pode ser indicativa de ruptura das membranas celulares em certos órgãos (Moss e col.,
1986). Apesar de serem menos específica, outros parâmetros hematológicos, como
hematócrito, hemoglobina, proteína e glicose, podem ser sensíveis a determinados tipos de
poluentes, além disso, os níveis de hormônios esteróides sanguíneos ou proteínas
normalmente induzidos por esses poluentes podem ser indicativos para determinados
efeitos toxicológicos (Correia e col., 2010).
Parâmetros imunológicos - Um grande número de substâncias químicas ambientais
tem o potencial de prejudicar os componentes do sistema imunológico. Muitos anticorpos e
células mediadoras do sistema imune podem ser deprimido por determinados poluentes,
como revisto por Vos e col.. (1989). Embora a maioria das pesquisas sobre o sistema imune
foi realizada em espécies de mamíferos, outros organismos também podem ser
considerados como promissores neste campo de pesquisa (Wester e col., 1994).
Parâmetros reprodutivos e endócrinos- O impacto dos compostos xenobióticos na
reprodução e na regulação hormonal tem atraído crescente interesse nos últimos anos pois
diante de todos os efeitos causados pela toxicidade de metais, deve-se considerar que a
permanência de uma espécie em um ecossistema não está somente relacionada com a sua

capacidade de adaptação e sobrevivência, mas também na capacidade se reproduzir na

presença destes poluentes (Kime, 1995), uma vez que uma diminuição na taxa reprodutiva
das espécies pode, a longo prazo, ameaçar a sobrevivência de um grande número de
espécies alterando todo um ecossistema (Spies e col., 1990).
Parâmetros neuromusculares - Estudos recentes demonstram que baixos níveis de
contaminantes no meio aquático podem alterar as funções neuromuscular agindo sobre a
ação da acetilcolinesterase (AChE) (Payne e col.., 1996).
Parâmetros genotóxicos : A exposição dos um organismo a substâncias químicas
genotóxicas pode induzir um cascata de eventos como alterações estruturais e/ou dano no
DNA e posterior expressão do gene mutante e doenças resultantes de danos genéticos
(Shugart e col., 1992). A detecção e quantificação de vários eventos neste sentido podem
ser utilizados como biomarcadores de exposição.
Parâmetros fisiológicos e morfológicos: As alterações na fisiologia e as consequências
desses efeitos também podem ser utilizados como biomarcadores. A determinação dos
efeitos adversos causados por um composto pode ser realizado através de análises dos
substratos metabólicos ou através de alterações histológicas nos tecidos (Ricard, 1998;
Pratap e Wendelaar Bonga, 1990).
Mecanismos de defesa a poluentes

Os organismos possuem eficientes formas de defesa a um agente externo, a
biotransformação ou metabolismo, pode ser caracterizado como uma conversão enzimática
de compostos xenobióticos em uma forma mais solúvel em água, que pode ser excretado do
organismo mais facilmente (Lech e Vodicnik, 1985). Na Maioria das vezes esses processos
envolvem enzimas que possuem um grau relativamente baixo de especificidade de
substrato, quando comparada com as enzimas envolvidas no metabolismo de compostos
constitutivos (Melancon e col.. 1992; Vermeulen, 1996). Os efeitos tóxicos podem se
manifestar quando, o composto ou os seus metabólitos, liga-se a macromoléculas celulares,
que conduzem a passagem pela membrana provocando danos celulares e/ou efeitos
genotóxicos que posteriormente, pode levar ao desenvolvimento e progressão de doenças.
O metabolismo é, portanto, um importante determinante da atividade de um composto, da
duração da sua atividade e do tempo que este composto permanecerá no organismo
(Timbrell, 1991).
O principal local de desintoxicação é o fígado através de um mecanismo enzimático
subdividido em fases I, II e III. A Fase I é uma alteração de oxidação, redução ou hidrólise
da molécula original. Essas reações são catalisadas por enzimas monooxygenases
microssomais, citocromo e NADPH citocromo P450 redutase, localizadas principalmente no
retículo endoplasmático, que transformam os compostos em produtos hidrofílicos facilitando

a excreção. (Bucheli e Fent, 1995). A fase II envolve a conjugação do xenobiótico a um

ligante endógeno, frequentemente um grupo químico polar, um açúcar ou aminoácido. As
enzimas desta fase catalisam essas conjugações facilitando a excreção por adição de mais
grupos polares como a glutationa e ácido glucorônico (Commandeur e col., 1995; Mulder e
col., 1990). As enzimas da fase III, peptidases, hidrolases e â-liases catalisam o catabolismo
dos metabólitos conjugados para formar produtos mais facilmente excretáveis, mas este
processo ainda não está muito bem definido (Oost e col., 2003)
Efeitos dos metais nos organismos aquáticos
Fitoplâncton
Algas são os organismos aquáticos que acumulam metais mais facilmente, estudos
recentes com Ulva laetevirens and Gracilaria verrucosa tem demonstrado uma alta afinidade
por bioacumular Cd, Cu e Zn (Roncarati, 2003), além da ocorrência natural e abundante,
esses organismos fotossintetizantes estão sendo utilizados para programas de
biomonitoramento de xenobióticos (Conti and Cecchetti, 2003; Conti e col., 2007).
Macroalgas (Conti and Cecchetti, 2003) e microalgas (Tripathi e col., 2006) são ferramentas
importantes para monitorar mudanças fisiológicas na presença de metais pesados, estes,
são frequentemente transportados ativamente pelas membranas (Tamás e Wysocki, 2001;
Van Ho e col.., 2002) e esses transportadores podem ser portas de entrada para metais
tóxicos (Zalups e Ahmad, 2003) . As Microalgas empregam uma variedade de estratégias
bioquímicas para reduzir a toxicidade de metais e para manter a homeostase no citoplasma
(Perales-Vela e col., 2006), uma destas estratégias é o aminoácido cisteína que contém um
grupo sulfidril que se liga ao sítio ativo do metal, esse grupamento contém peptídeos como a
glutationa que são responsáveis pelo seqüestro do metal nas células, e outra alternativa são
as metalotioneínas (Klaassen e col.., 1999)
Diante destas características as algas absorvem os poluentes do ambiente aquático
e biotransformam em compostos orgânicos tornando-os menos tóxicos, não permitindo que
cheguem a níveis tróficos superiores (Pflugmacher e col., 1999). Adicionalmente a isto,
estes organismos tem sido utilizados como biorremediadores no tratamento de metais
pesados e poluentes orgânicos (Munoz e col., 2006) e sugere-se a utilização destas algas
como bioindicadores de poluição aquática e de respostas fisiológicas a xenobióticos (Witton
and Kelly, 1995).
Invertebrados

Invertebrados respondem diferentemente a exposição de metais. Em moluscos e

crustáceos as glândulas digestivas, hepatopâncreas (Viarengo e col., 1984; Olafson e col.,
1979a,b) e brânquias (Mouneyrac e col., 1998) são os tecidos que estão diretamente
envolvidos com o contato, estoque e excreção de metais e possuem alta capacidade de
síntese de MTs. Em ostras e mexilhões a dinâmica de acúmulo é diferente (Arco-íris, 1992),
em um estudo com três espécies de bivalve (M. edulis, M. galloprovincialis, R. decussatus)
que foram expostos a uma mesma concentração de Cd por um mesmo período de tempo
(Bebianno e Langston, 1991, 1992,; Bebianno e col., 1993), foi observada uma relação
linear entre a concentração do metal e a síntese de MT, e observou-se que em ambas as
espécies de mexilhões (M. edulis, M. galloprovincialis) a quantidade de MT sintetizada foi
mais acentuada que na espécie de ostra (R. decussatus).
Peixes
Os peixes são amplamente utilizados no biomonitoramento da poluição aquática (Zhou
e col., 2008) e a contaminação em peixes por metais tóxicos deve ser considerada muito
relevante, pois estes animais estão no topo da cadeia alimentar e servem de alimentos para
outros animais. Neste grupo a faringe é o principal sítio pelo qual os poluentes aquáticos
entram, e as brânquias são freqüentemente afetadas por estas substâncias devido a grande
área da sua superfície e espessura deste tecido (Mallat, 1985). Há numerosos estudos que
indicam mudanças estruturais induzidas por toxicantes e outros poluentes presente na água
(Ferguson e col., 1992; Partearroyo e col., 1992).
Estudos demonstraram que efeitos adversos foram observados em peixes expostos ao
cobre, por exemplo, podem-se citar alterações nas funções respiratórias e ionoregulatórias
devido aos danos em órgãos alvos como as brânquias, como conseqüência, houve um
aumento no metabolismo aeróbico, no consumo de oxigênio que por sua vez, reduziu o
desempenho natatório (McGeer e col., 2000; Handy, 2003). Além disso, McGeer e col.
(2000) demonstraram que a exposição crônica ao cobre aumentou a atividade da Na+K+-
ATPase branquial, implicando em um maior custo energético para a osmorregulação.
Pelgrom e col. (1995) expuseram exemplares de Oreochromis mossambicus a diferentes
concentrações de Cu e observaram um aumento no número de células de cloreto conforme
se aumentava a concentração do metal. Neste estudo também foi observado um diâmetro
aumentado destas células e um aumento das concentrações de cobre nas brânquias e no
plasma. Além disso, altos níveis de cobre diminuem o crescimento e prejudicam a
conversão alimentar em peixes (Marr e col., 1996; Schlenk & Benson, 2001).
O alumínio, por sua vez, provoca acidose plasmática, hipóxia e hipercapnia, perda de
eletrólitos, principalmente Na+ e Cl- (Howells e col., 1990; Rosseland e col., 1990). Vários
autores observaram ainda nas brânquias, inflamação (edema e inchaço) e em alguns casos

fusão lamelar e excessiva produção de muco (Fischer-Scherl and Hoffmann, 1988;

Goossenaerts e col., 1988).
O mangânes tem sido associado a citotoxicidade, especialmente para células
dopaminérgica (Archibald e Tyree, 1987), além disso, já foram demonstrados os efeitos do
manganês nas mitocôndrias, onde este metal parece inibir o complexo I, alterando as
fosforilações oxidativas (Chen, e col., 2001; Ali e col., 1995).
Outros efeitos causados pela exposição a metais estão a diminuição dos estoques de
glicogênio no fígado em truta arco-íris (Ricard, 1998) e tilápia (Pratap e Wendelaar Bonga,
1990) e aumento na atividade de enzimas como a aspartato transaminase (AST) e alanina
transaminase (ALT), lactato desidrogenase (LDH) e malato desidrogenase (MDH) em
Channa punctatus (Sastry e col., 1997).Várias respostas enzimáticas tem sido observada
em animais expostos a contaminantes metálicos em campo e em laboratório, experimentos
indicaram um aumento ou uma diminuição na atividade, esta dependente de dose, espécie
e via de exposição (Wong and Wong, 2000; Jiraungkoorskul e col., 2003; Sanchez e col.,
2005).
A exposição dos peixes a metais pode causar aumentos de espécies de oxigênio
altamente reativas (ROS), já citadas anteriormente, levando ao estresse oxidativo,
disfunções osmorregulatórios associado com a inibição da ATPase e dano tecidual (Radi e
Matkovics, 1988; Wong e Wong, 2000; Dautremepuits e col., 2004).
Muitas substâncias que poluem os ecossistemas podem de alguma forma alterar o
sistema endócrino dos animais, estas substâncias são conhecidas como EDC do inglês
Endocrine Disrupting Compouds. Os disruptores endócrinos, mesmo em baixas
concentrações, exercem efeitos biológicos neste sistema alterando os processos de síntese
e/ou degradação de hormônios, seja bloqueando os receptores hormonais ou interferindo na
ação dos próprios hormônios (Mathissen e Johnson, 2007). Um dos eixos afetado por
metais é o eixo hipotálamo-hipófise-gônadas, entre estes efeitos podemos destacar a
diminuição na síntese dos esteróides gonadais, vitelogenina, gonadotropinas e aumento nos
níveis de dopamina (Karels e col.,1998). Em estudos com tilápias foram relatadas elevações
nos níveis de cortisol (Foo & Lam, 1993) e redução de progestágenos (Correia, 2010), em
Oncorhynchus mykiss houve impedimento e/ou atraso no amadurecimento de
espermatogônias em espermatócitos (Karels e col.,1998) além de elevação e/ou diminuição
dos níveis de esteróides fora do período reprodutivo e inibição da síntese de
gonadotropinas, com simultâneo bloqueio sobre as gônadas de responderem à ação destes
hormônios (Cooney, 1995). Em truta arco-íris,o cádmio pode inibir a atividade dos
receptores de estrogênio (Le Guevel e col., 2000).
Outro eixo afetado por compostos metálicos é o eixo hipotálamo-hipófice-interrenal
que controla a produção de cortisol e sua secreção no sangue em resposta ao estresse

(Brodeur e col., 1997 a,b; 1998), os metais podem alterar o mecanismo de sinalização deste
sistema e ainda alterar a síntese de esteróides pelas células interrenais (Girard e col., 1998).
Em adição, os metais têm demonstrado alterar outros sistemas hormonais tais como
os tiroidianos e os hormônios de crescimento (Comeau e col., 2001; Devlin e col., 2001).
Trutas arco-íris submetidas a toxicidade por Cádmio durante o desenvolvimento,
apresentaram modificações na expressão de mRNA do hormônio de crescimento até os
últimos estágios do desenvolvimento larval (Jones e col., 2001). Exposição a vários
poluentes metálicos alteraram os níveis de triiodotironina (T3) e tiroxina (T4) no plasma de
espécies de peixes em ensaios agudos (Sinha e col., 1991) e crônico (Hontela e col., 1995).
Anfíbios
Segundo Pough (1976) de 30 a 50% das espécies de salamandras e anuros utilizam
lagoas temporárias (que aparecem na primavera e secam no verão) para porem seus ovos e
esse processo ocorre em tempo suficiente para ocorrer a metamorfose até a lagoa secar.
Um dos grandes problemas enfrentados nestes pequenos ambientes, que são dependentes
principalmente de água da chuva, é a acidificação devido ao pequeno volume e como
conseqüência a biodisponibilização de alumínio (Freda e col., 1991). Já em pântanos ocorre
uma ambiente naturalmente ácido devido a crescimento denso de musgo de sphagnum e
altas concentrações de ácidos orgânicos (Gorham e col., 1985), níveis elevados de metais
podem estar presentes nestas águas porque ácidos orgânicos têm uma alta afinidade por
metais (Reuter & Perdue, 1977).
A toxicidade por alumínio é totalmente dependente do pH da água, em muitas
espécies este metal só é tóxico em pH abaixo de 5, mas há situações que ele se torna
biodisponível em pH alto. O íons de hidrogênio e o alumínio podem inibir a enzima de
eclosão presente na membrana vitelínica dos ovos de anfíbios, inibindo a ação desta enzima
a membrana se torna resistente para o processo de eclosão e impermeável a água e íons
(Yoshizaki, 1978).
O alumínio divalente age como o Ca e Mg na célula (Freda & Dunson, 1985a),
reduzindo a permeabilidade da membrana podendo bloquear a passagem de Na+ e Cl-
(Gordon & Sauerheber, 1982), a perda destes eletrólitos é a causa primária de morte de
anfíbios (Freda & Dunson, 1984; Freda & McDonald, 1990).
Larvas de Pleurodeles waltl (anfíbio urodela) expostos a cádmio não sofreram
modificações nos primeiros passos do desenvolvimento, mas tiveram a metamorfose inibida
assim como a diferenciação e desenvolvimento gonadal (Flament e col., 2003). O cádmio
induz a síntese de HSP (Ait-Aissa e col.., 2000) e estas proteínas interagem com os
receptores estrogênicos ou androgênicos e pode alterar os padrões de ação destes
hormônios (Pratt and Toft, 1997).

Répteis
Há poucos estudos com metais em répteis, há trabalhos com concentração de metal
pesado em tecidos de tartaruga (Godley e col., 1998, 1999; Sakai e col., 2000 a,b), mas
nenhuma informação em efeitos ou limiar de concentração toxicológicos estão disponíveis.
O impacto de metais em tartarugas pode ser medido pelo acúmulo destes nos tecidos e
Franzellitti e col. (2004) quantificaram as concentrações de Cd, Cu, Fe, Mn, Ni, e Zn no
fígado, pulmão, músculo e tecido adiposo de Caretta caretta, encontradas mortas, da região
do noroeste da Itália. A escolha destes metais pesados foi realizada com base em estudos
prévios que mostraram níveis particularmente altos de Ni, Cu e Zn em sedimentos, Cd e Ni
na água e Mn e Fe em bivalves conhecidos por serem base alimentar de C. caretta (Dinelli
e col., 1996; Dinelli e Lucchini, 1999; Tankere e col., 2000; Fagioli e col., 1994) e
encontraram concentrações altamente significativas de Ni, Mn, Cd e Cu no pulmão, músculo
e tecido adiposo e de Mn e Ni no fígado, valores estes comparados a tartarugas de outras
áreas não contaminadas, sugerindo a toxicidade por metais como causa da morte.
Xu e col. (2006), encontraram altas concentrações de metais pesados na casca,
membrana e no conteúdo de ovos de crocodilo (Alligator sinensis) e comparou com outros
estudos (Burger e Gochfeld 1991; Burger 1994) e sugere que as altas concentrações de
metais presentes nos ovos é um meio que as fêmeas encontraram para tentar reduzir a
carga corporal de substâncias tóxicas através da transferência para os ovos,
semelhantemente ao que ocorre com outras espécies de répteis já analisadas, incluindo
tartarugas (Caretta caretta, Chelonia mydas e Trachemys scripta (Sakai e col., 1995, 2000;
Burger e Gibbons, 1998). E ainda, para completar, estudos com ovos de tartarugas e
crocodilos demonstraram que de forma similar que a presença de altos níveis de metais
aumentam a mortalidade de embriões (Nagle e col., 2001, Manolis e col., 2002b),
Conclusão
A presença de substâncias poluentes nos corpos aquáticos quando modificam as
características do meio alteram toda a cadeia trófica, a sociedade ainda não percebeu a
importância do meio ambiente para sua sobrevivência. As causas das agressões ao meio
ambiente são de ordem política, econômica e cultural, não pode haver proteção do ambiente
enquanto houver desigualdades sociais. Os países ricos consomem os recursos naturais de
forma exagerada e são que mais poluem enquanto que os países pobres também mostram
uma parcela de culpa por falta de oportunidades. A ciência busca minimizar esses efeitos
adversos a biodiversidade tentando identificar os problemas antes que o compartimento
ambiental como um todo seja afetado. Se muitas das alterações forem observadas com uma

certa antecedência, talvez seja possível minimizar os efeitos deletérios causados ao meio
ambiente ao se elaborar medidas mitigadoras e de proteção a estes ambientes. A utilização
de bioindicadores de poluição ambiental constitui uma ferramenta eficiente para avaliação
de risco de impacto ambiental, porém cabe ressaltar que este monitoramento requer
conhecimentos profundos da fisiologia dos organismos utilizados.

Alterações neuroendócrinas resultantes da

exposição a metais

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Desreguladores endócrinos
Grande parte dos ecossistemas aquáticos encontra-se contaminado por inúmeros
poluentes, os quais podem causar os mais diversos tipos de impactos. Nesse contexto,
pode-se destacar uma classe de poluente capaz de alterar as funções endócrinas, não
apenas na fauna aquática, mas também sobre toda a cadeia trófica associada. Essa classe
de poluentes tornou-se conhecida por desreguladores endócrinos, ou ainda “disruptores”
endócrinos, (do inglês, endocrine disruptor compound, ou EDC). É importante destacar que
a palavra disruptor não existe na língua portuguesa, sendo, portanto um neologismo
(fenômeno linguístico que consiste na criação de uma palavra ou expressão nova, ou na
atribuição de um novo sentido a uma palavra já existente) e é comumente utilizada na
literatura, principalmente na ecotoxicologia.
Observações dos efeitos da exposição aos desreguladores endócrinos (DE) em
peixes e outras espécies aquáticas, como por exemplo, invertebrados e anfíbios, têm
contribuído para um esforço global na tentativa de estabelecer métodos para a detecção dos
efeitos destes compostos sobre populações e para avaliação dos riscos ecológicos (Owen e
col., 2008). Os DE podem ser desde compostos químicos sintéticos tais como pesticidas e
fertilizantes a xenoestrógenos, fitoestrógenos e metais. Biologicamente podem ter ação
sobre os receptores dos hormônios esteróides (nos tecidos alvo) como agonistas ou
antagonistas, resultando em estímulo ou redução/bloqueio, respectivamente, nos processos
de síntese hormonal (Matthiessen e Johnson, 2007).
Há um consenso de que em sua grande maioria esses compostos antropogênicos
interferem sobre a afinidade hormônio-receptor, especialmente os envolvidos na
reprodução, pois esses parecem ser mais vulneráveis a pertubarções. Dessa forma, são
freqüentes em mamíferos as alterações gonadais, má formação do trato genital, infertilidade
e tumores; inibição da reprodução e alterações no comportamento de corte em aves e
anormalidades nos órgãos reprodutivos em crocodilianos (Depledge, 1999).

Desafios em endocrinologia e fisiologia comparativa: a perspectiva de

Hutchinson e Pickford
Sob uma perspectiva ecotoxicológica, uma das principais preocupações globais para a
fauna aquática está em torno de quatro tipos de desregulação endócrina, a saber:
antiestrógenos e antiandrógenos (inibidores da esteroidogênese), perturbadores da tiróide e
os compostos capazes de alterar o sistema endócrino de invertebrados, como por exemplo,
o hormônio juvenil e hormônios ecdisteróides; uma vez que mais de 95% das espécies
animais são invertebrados e também são potenciais alvos para a desregulação endócrina
(Hutchinson e Pickford, 2002).
Diante das diferenças filogenéticas e especializações fisiológicas específicas em
determinados táxons, torna-se quase impossível extrapolar dados registrados, por exemplo,
da exposição a DEs em mamíferos para vertebrados mais simples como, por exemplo,
peixes e anfíbios; semelhantemente para invertebrados; sendo, portanto, necessários testes
específicos para cada composto em que exista a possibilidade de alterações endócrinas
(Kendal e col, 1998). Não obstante, moléculas de determinados hormônios, apesar de
apresentarem certo grau de conservação evolutiva, desempenham diferentes funções
fisiológicas, por exemplo, enquanto o papel principal de prolactina (PRL) em mamíferos é a
estimulação da lactação, em peixes a PRL está envolvida na osmorregulação e em anfíbios
desempenha um papel na metamorfose e crescimento (Norris, 1996). Enquanto um mesmo
DE pode vir a afetar um mamífero de uma determinada maneira, o mesmo nem sempre
poderá ser aplicado a outros vertebrados, ou invertebrados.
Atualmente é prioridade para a comunidade científica e reguladora internacional, o
estabelecimento de métodos de ensaio de eco-toxicidade, a avaliação de risco ecológico e
programas de monitoramento ambiental, e em última instância, avaliar se os dados obtidos
em laboratório que são essenciais, não são contraproducentes quando comparados com a
realidade observada no meio ambiente, para que dessa forma possam apoiar
cientificamente de forma significativa e eticamente justificável orientações para testes de
desregulação endócrina (Hutchinson e Pickford, 2002).
Alterações Neuroendócrinas em Crustáceos

A maioria dos estudos ecotoxicológicos, cujo objetivo é o de avaliar possíveis efeitos
de desregulação endócrina, considera apenas dados para animais vertebrados,
negligenciando representantes dos filos de invertebrados. Isto é alarmante, levando em
conta a importância ecológica dos invertebrados. Eles são componentes essenciais de todos
os ecossistemas e, portanto, a ameaça de desregulação endócrina deve ser totalmente
avaliada para assegurar a proteção ambiental (Matthiessen e Law, 2002).

Alguns estudos realizados em laboratório sob condições controladas demonstram que

compostos metálicos (íons ou substâncias contaminantes) podem afetar o controle hormonal
da muda, a regeneração de membros, o nível de glicose no sangue e causar alterações na
pigmentação e na reprodução de crustáceos (Depledge, 1999).
O Cd (cádmio) e o Se (selênio) são um dos metais mais deletérios, chegando a afetar
o processo de muda (crustáceos), o desenvolvimento gonadal em mexilhões, a ovogênese
de ouriços do mar e a alteração do metabolismo de esteróides na estrela do mar Asterias
rubens (neste caso, Cd e Zn) (Depledge, 1999). Apesar do número de trabalhos publicados
na literatura sobre desregulação endócrina ter aumentado muito nos últimos anos, para os
invertebrados, com exceção de crustáceos e insetos, estes dados são escassos.
Tratando-se de ecotoxicologia aquática, o filo dos crustáceos possui espécies que são
amplamente utilizadas neste tipo de estudo, pois além do fato de serem extremamente
representativos para o ambiente aquático, apresentam características que os designam
como potenciais espécies sentinela (Depledge, 1999).
Metais, como por exemplo, o Cd, tem efeito direto sobre crustáceos, pois pode ser
absorvidos através de canais de Ca, ou ainda através de proteínas de membrana (Norum e
col., 2005). Uma vez absorvido, o Cd pode impedir o processo de muda em indivíduos
adultos de Chasmagnathus granulatus, possivelmente pela inibição da secreção do
hormônio da muda (ecdisona). Entre outros efeitos, Barata e col. (2004), sugerem que
“metais pesados”, podem afetar a absorção de alimentos em microcrustáceos, tais como
cladóceros e copépodos e dessa forma reduzir a aquisição energética, e/ou aumentar a
demanda energética associada com o estresse causado por esses poluentes, afetando a
reprodução e o crescimento. Rodríguez e col. (2000) concluíram que o Cd é capaz de inibir
o crescimento/desenvolvimento gonadal em fêmeas de Uca pugilator (caranguejo violinista),
devido a um aumento na secreção do hormônio GIH ( gonad inhibiting hormone) que regula
o crescimento das gônadas.
Estudos com o hormônio hiperglicemiante de crustáceos CHH, (crustacean
hyperglycaemic hormone) realizados por Lorenzon e col., (2000) demonstram que vários
metais pesados, como Hg, Cd e Cu induzem a hiperglicemia. Esses autores perceberam
que o camarão Palaemon elegans mostrava uma resposta hiperglicêmica, entretanto os
efeitos fisiológicos observados dependiam de alguns outros fatores, tais como: o metal
testado, a concentração utilizada e o tempo de exposição.
O Cd, possui um efeito semelhante a bisfenóis policlorados e ao naftaleno, no que se
refere a capacidade de interferir sobre o controle endócrino da pigmentação, sendo capaz
de inibir a dispersão de pigmentos dos cromatóforos da glândula do seio; além deste efeito,
pode prejudicar o pigmento da retina distal impedindo-o de migrar em direção à luz em Uca
pugilator (Fingerman e col.,1998).

Para o filo dos crustáceos, espécies sentinela precisam ser estabelecidas

urgentemente para a elaboração de biomarcadores adequados ao monitoramento
ambiental. Algumas características básicas das espécies-sentinela consistem em: ser
capturadas em locais poluídos, bem como no local íntegro (controle), a biologia e as
mudanças sazonais do ambiente devem ser bem conhecidas e, de preferência,
ecologicamente importantes. Além disso, outro requisito para as espécies sentinela a serem
utilizadas para avaliar o impacto ecológico está no fato de que elas devem ser facilmente
cultivadas em laboratório, de preferência apresentar dimorfismo sexual, ter um ciclo de vida
curto e um sistema endócrino relativamente conhecido (Matthiessen e Johnson, 2007).
Figura 1- Controle endócrino da reprodução em crustáceos - XO: órgão X, SG: glândula do seio, MO:
órgão mandibular, B: cérebro, TG: gânglio torácico, HEP: hepatopâncreas, OV: ovario, T: testiculo,
AG: glândula androgênica, A.Gl.: glândula antenal, GIH: hormônio inibidor gonadal, GSH: hormônio
estimulador gonadal, MOIH: hormônio inibidor do órgão mandibular, CHH: hormônio hiperglicemiante,
MF: methyl farnesoato, OH: hormônio ovariano, AGH: hormônio da glândula androgênica e VITELL:
vitelogenina. (Modificado de Rodrigues e col., 2007).
A seleção de uma espécie de crustáceo que preencha perfeitamente todos os

requisitos acima mencionados não é uma tarefa fácil. Por exemplo, dafnídeos têm tempos
de geração curtos e são facilmente cultivados, contudo são muito sensíveis a diversos

poluentes e seu sistema endócrino é pouco conhecido, por outro lado, decápodes são
relativamente resistentes a muitos poluentes, mas enquanto seu sistema endócrino é o mais
extensivamente estudado entre os crustáceos, seu ciclo de vida é relativamente longo e o
manejo em laboratório nem sempre é uma tarefa fácil. Portanto, a seleção de crustáceos
sentinela que ocorram no mesmo ambiente poderá requerer mais de uma espécie para o
monitoramento ambiental (Rodriguéz e col., 2007).
Alterações neuroendócrinas em teleósteos

Apesar do reconhecimento de que muitos xenobióticos alteram as funções
reprodutivas, o entendimento acerca dos mecanismos pelos quais tais alterações ocorrem
ainda são incipientes em muitos aspectos (Thibaut e Porte, 2004). Os esteróides sexuais
possuem duas funções clássicas em peixes: agem como fatores morfogenéticos durante a
diferenciação e maturação sexual. Considerando-se que poluentes (xenobióticos ou metais)
podem afetar tanto os receptores para os hormônios esteróides (expressão/ transcrição) e
as enzimas envolvidas na síntese dos mesmos, a figura 2 representa a conversão
bioquímica entre os principais hormônios da reprodução em teleósteos: 17 α
hidroxiprogesterona (17 OHP), 17α, 20 β dihidroxi-4 – prenen – 3 ona, Testosterona (T) 17 β
Estradiol (E2) e os possíveis sítios de ação de poluentes
A neuromodulação da reprodução em teleósteos ocorre principalmente através de

duas moléculas secretadas pela proximal pars distalis da hipófise, chamadas de
gonadotropinas, GTH – I e GTH – II, as quais são estruturalmente similares ao FSH
(hormônio folículo estimulante) e LH (hormônio luteinizante) de mamíferos, respectivamente.

Outra gonadotropina, o decapeptídeo GnRH (gonadotropin releasing hormone) e a

dopamina (DA), são os principais neurohormônios que estimulam e inibem a liberação das
gonadotropinas, respectivamente (Blazquez e col., 1998). Da mesma forma que ocorre para
os hormônios esteróides, o controle neuroendócrino da reprodução também é passível de
sofrer alterações por poluentes, ou seja, todo o eixo hipotálamo – hipófise – gônadas.
Processos neurodegenerativos: Manganês e Alumínio

Os metais “pesados” têm um importante papel em muitas doenças neurológicas. A
maioria destas doenças é decorrente da exposição excessiva proveniente do ambiente,
como por exemplo, envenenamento por chumbo. Um segundo grupo de doenças
neurológicas, está associado com deposições anormais de metais sem a exposição
ambiental excessiva, tais como a doença de Wilson. Há também um terceiro grupo de
transtornos nos quais a patogênese pode ser uma extensão natural da presença dos íons
metálicos (Montgomery, 1995). O sistema nervoso é um alvo sensível para uma variedade
de metais e a neurotoxicidade induzida por um metal tem sido descrita em seres humanos
em conexão com a poluição ambiental (Hg, Pb, Cu, Mn, Fe), uso de medicamentos (Li,

cisplatina, Bi, sais de ouro (Au)) e a ingestão acidental de inseticidas e raticidas contendo As
ou sais de tálio (Ti) (Manzo, 2007).
A exposição crônica a certos metais tem sido relacionada a fisiopatologia de algumas
doenças neurodegenerativas, tais como a doença de Alzheimer, a doença de Parkinson, e a
esclerose amiotrófica; no entanto, os dados ainda são controversos (Manzo, 2007). Pb, Al e
Mn são muitas vezes (mas não sempre) encontrados em excesso na autópsia do sistema
nervoso obtidos de vítimas dessas desordens neurológicas; entretanto, doenças do sistema
nervoso também podem ser induzidas pela deficiência de metais, logo Zn, Cu e Mn são
exemplos de elementos essenciais ao organismo, cuja deficiência pode levar a distúrbios
neurológicos. Essa deficiência pode resultar da ingestão inadequada de alimentos, efeitos
de drogas e outras situações em que as perdas corpóreas do metal são aumentadas
(Manzo, 2007).
Tabela 1: Metais e doenças neurogenerativas em humanos
Neurodegeneração Neurodegeneração
Metais neurotóxicos
associada a metais associada a deficiências de
acumulados no cérebro metais essenciais
Chumbo (Pb)
Mercúrio (Hg) Chumbo (Pb) Manganês (Mn)
Lítio (Li) Mercúrio (Hg) Cobre (Cu)
Manganês (Mn) Manganês (Mn) Zinco (Zn)
Tálio (Ti) Alumínio (Al)
Arsênio (As) Cobre (Cu)
Bismuto (Bi)
Sais de ouro (Au)
Manganês
O manganês é encontrado em todos os tecidos e é fundamental para muitos
processos fisiológicos, como por exemplo, na regulação dos processos reprodutivos, no
metabolismo de carboidratos, lipídios, proteínas e como co-fator de várias enzimas
(Prestifilippo e col., 2007), por exemplo, a SOD manganês (superóxido dismutase), e
glutamina sintetase (enzima que sintetiza glutamina do neurotransmissor glutamato). Na
verdade, cerca de 80% do manganês no cérebro está contido nesta enzima (Quintanar,
2008); como também para as metaloenzimas (manganoproteínas) envolvidas no
metabolismo do oxigênio e do nitrogênio (Morello e col., 2007) e enzimas relacionadas ao
DNA e neurotransmissores (Lima e col., 2008).

Em relação à toxicidade do manganês, independente da rota de absorção, quando em

altas concentrações torna-se tóxico para o cérebro e pode acarretar em desordens
neurológicas caracterizadas inicialmente por sintomas psicóticos semelhantes à doença de
Parkinson que resultam em uma síndrome conhecida por manganismo (Morello e col.,
2007), cujos sintomas são bradicinésia, rigidez e distonia (Gerber, 2002). O manganismo
está associado ao acúmulo de manganês no cérebro, mais especificamente em estruturas
do gânglio basal, putamen caudato, globus pallidus, substância negra, hipotálamo e núcleo
subtalâmico (Erickson e col., 2004).
Algumas células do SNC, particularmente os astrócitos, regulam o metabolismo de
neurotransmissores, a concentração de íons e removem toxinas do espaço extracelular,
portanto, um estressor, como por exemplo, um íon metálico, pode induzir disfunções sobre
estas células e conseqüentemente sobre neurotransmissores, como o gaba, o glutamato e a
dopamina, ambos do fluído extracelular (Takeda e col., 2003).
Segundo Erickson & Aschner (2003), a chave para as alterações neuroquímicas
associadas com a neurotoxicidade do Mn são modificações nos níveis do glutamato
extracelular, pois o glutamato é o mais freqüente neurotransmissor excitatório, enquanto que
o GABA é o mais abundante neurotransmissor inibitório. Estes mesmos autores ainda
apontam que alterações sobre estes neurotransmissores podem contribuir para
modificações sobre o metabolismo da dopamina.
Alumínio
A exposição às altas concentrações de Al, assim como de Mn, resulta em efeitos
neurotóxicos sobre o sistema nervoso central (SNC) de mamíferos. No caso do alumínio,
não se conhece um papel fisiológico no organismo (Nayak, 2002), desta forma este metal
pode produzir efeitos fisiológicos adversos, entre os quais estão alterações bioquímicas,
imunológicas respiratórias cardiovasculares, endócrinas (Campbell & Bondy, 2001),
neurológicas, esqueléticas, hematológicas, insuficiência renal avançada (Zatta e col., 2003),
entre outras. Aparentemente o efeito mais pronunciado ocorre sobre o SNC, com sintomas
similares aos que ocorrem na doença de Alzheimer.
Desregulação endócrina causada pela exposição ao Al

Distúrbios reprodutivos têm sido propostos como a principal razão para o declínio de
populações ícticas (Vuorinen e col., 1991). Em países escandinavos, o alumínio presente na
água (rios e lagos) juntamente com os efeitos de acidez, despontam como os principais
agentes responsáveis por este quadro (Poléo e col., 1997), que não se limita a estes países,
incluindo-se aqui os Estados Unidos e Canadá (Heming & Blumhagen, 1988).

O Al presente nestes rios e lagos não têm sua fonte diretamente relacionada a
efluentes antrópicos, pois originalmente está presente em constituintes geológicos naturais
do solo, sendo mobilizado para a coluna d’água principalmente por intermédio de eventos de
precipitação ácida (Bjerknes e col., 2003). Entretanto, este metal, em sua forma sulfatada
(alum) é amplamente utilizado em estações de tratamento de água como coagulante de
partículas sólidas e o resultante desta combinação é descartado para cursos d’água
adjacentes (Hullebusch e col., 2002).
O Al não é encontrado em seu estado puro na natureza (Constantino e col., 2002),
mas sim sob a forma mineral, sendo o mesmo observado para o Mn (Lima e col., 2008). A
solubilidade e a disponibilidade biológica de metais dependem não apenas da concentração,
mas também das formas físico-químicas nas quais podem vir a ocorrer (Kalembiekiewics e
col., 2008). Este metal não é muito solúvel em água, entretanto a chuva ácida (formando
ácidos inorgânicos) pode solubilizar parte deste metal produzindo uma diversidade de
complexos e formas físico-químicas, desde simples formas iônicas a polímeros, colóides e
partículas. O principal fator abiótico que influencia as diferentes espécies químicas
apresentadas por este metal é o pH (Teien, 2007). De maneira geral, pode-se dizer que o
pH tem um forte controle na especiação de metais, pois influencia a hidrólise metálica, a
polimerização, a agregação, a precipitação e a competição de prótons por locais de ligação
disponíveis (Smith, 1996).
As condições em que o Al torna-se mais tóxico para os organismos aquáticos e mais
facilmente absorvido ocorre em pH ácido; íons de Al e de H+ podem interferir sobre a
atividade de hormônios esteróides, desde alterações nos processos de síntese nas gônadas

(Mount e col., 1988; Kime, 1995; Tam e col., 1987; Tam & Zang, 1996), alterações sobre a
vitelogênese (Mugyia & Tanahashi, 1998; Hwang e col., 2000, Berg e col., 2004), alterações
sobre a síntese e atividade gonadotrópica (Kime, 1995) e alterações na maturação e desova
de oócitos (Vuorinen & Vuorinen, 1991; Vuorinen e col., 2003).
Atualmente, apenas alguns poucos estudos apontam as conseqüências endócrinas da
exposição ao Al em teleósteos, pois a maior parte dos estudos refere-se a
neurodegeneração em humanos. Nesse caso, é conhecido para Oreochromis niloticus
(tilápia) que o Al possui um efeito anti-esteroidogênico, pois esse metal em pH 5,5 foi capaz
de reduzir a concentração plasmática de 17 α – OHP , após exposição aguda (96 h); porém,
os mecanismos bioquímicos pelos quais o Al causa essa desregulação endócrina ainda são
desconhecidos (Correia e col., 2010).
Sabe-se que os progestágenos são produzidos sob o controle do LH (Young e col.,
2005), portanto a diminuição na concentração de 17 OHP de O. niloticus poderia estar
relacionada a um efeito tóxico na hipófise suprimindo a síntese, ou a expressão do LH, ou
ainda um efeito tóxico sobre o hipotálamo em que a síntese/expressão do GnRH tenha sido
suprimida/reduzida. No entanto, devido aos conhecidos efeitos do Al e de outros metais
sobre a atividade enzimática, a possibilidade de este metal ter estimulado a atividade da
enzima 20β-hidroxiesteróide desidrogenase (20β HSD), responsável pela conversão da 17
OHP em 17 α, 20 β-diidroxi-4-pregnen – 3 - one (17,20 P), também conhecida por MIS (do
inglês, maturation induction steroid) não pode ser excluída (Young e col., 2005).
Como nos mamíferos, o controle da síntese de esteróides nos ovários de peixes é
mediado pelo FSH e LH, sendo esta uma via que envolve pelo menos parcialmente,
proteínas quinases (PK) (Méndez e col., 2003) e cAMP nas camadas foliculares (Planas e
col., 1997). Substâncias que promovem o aumento do cAMP intracelular também podem
estimular a esteroidogênese (Kanamori e Nagahama, 1988). Antagonistas de cAMP podem
bloquear parcialmente a ação esteroidogênica das gonadotropinas (Planas e col., 1997). Na
verdade, o efeito estimulante do LH na síntese de esteróides está relacionado à ativação de
PKA/cAMP (Méndez e col., 2003). Portanto, o conhecido efeito do Al sobre a fosforilação
anormal na ativação da PK dependente de cAMP pode ser a causa dos níveis plasmáticos
alterados de 17 OHP em resposta à ação do LH após a exposição ao Al (Correia e col.,
2010). Nesse contexto, é importante notar que Morrissey e col. (1983) observaram que o Al
reprimiu a síntese do hormônio da paratireóide devido a uma diminuição dos níveis de
cAMP.
Sabe-se também que o Al em teleósteos é capaz de inibir a síntese e/ou exportação
de vitelogenina (VTG) do fígado para o plasma, no entanto o exato mecanismo pelo qual
este metal inibe a síntese de VTG não é bem compreendido. Como mencionado acima, o Al
é conhecido por induzir ou inibir fosforilações anômalas pela ativação das proteínas

quinases dependentes de cAMP (Johnson & Jope, 1987). O Al pode interferir sobre a
fosforilação da VTG, que em sua constituição normal contém um grupo altamente
fosforilado, a fosvitina (Mugyia e col., 1998).
Outro efeito do Al está na sua capacidade de impedir a transcrição do RNAm da VTG
(Hwang e col., 2000), pois também é possível que os íons de Al possam atuar sobre os
receptores de E2, impedindo a formação do complexo ER-E2, inibindo dessa forma a
ativação do gene da VTG pelo E2. Este mecanismo foi sugerido para o Al, pois foi observado
para o Zn e Cu (Yeo e col., 1997), cujos efeitos sobre a vitelogênese da mesma forma que o
Al, são reversíveis. Hwang e col. (2000) sugerem que a influência do alumínio sobre os
níveis transcricionais do RNAm da VTG depende da concentração deste metal, e a VTG
quando transportada no plasma, liga-se a íons metálicos, como o Zn, Ca e Mg (Falchuk &
Montorzi, 2001).Sugere-se que o Al, quando em altas concentrações no plasma também
seja capaz de se ligar a VTG, possivelmente nos mesmos locais que os íons essenciais
ligam-se nesta molécula.
Desregulação endócrina causada pela exposição ao Mn

Vários estudos com mamíferos in vivo e in vitro têm relatado que o Mn altera os níveis
de neurotransmissores como a dopamina (DA), o glutamato (Glu), e o ácido gama
aminobutírico (GABA) (Quintanar, 2007); esses três neurotransmissores são intimamente
relacionados e, por conseguinte, uma alteração em um deles inevitavelmente terá efeito
sobre os outros. Por exemplo, no metabolismo de Glu e GABA, o Glu é transformado em
glutamina (Gln), por uma enzima chamada glutamina sintetase – Mn, e a Gln, por sua vez
pode ser convertida em GABA pela enzima ácido glutâmico desidrogenase (Hazell, 2002).
Todas essas inter-relações têm complicado a interpretação dos resultados referentes aos
níveis de neurotransmissores em consequência da neurotoxicidade do Mn (Erickson e
Aschner, 2003)
Embora seja conhecido que o Mn é um desregulador neuroendócrino, o mecanismo
pelo qual altera os níveis de Glu, GABA e DA ainda não foi elucidado, e apesar de que tais
estudos sejam conduzidos devido a relação deste metal com neuropatias humanas, deve-se
levar em consideração que a desestruturação no metabolismo da DA, principalmente, pode
afetar o controle neuroendócrino da reprodução em vertebrados, pois a DA é um agente
inibidor na síntese de hormônios hipofisários (Erickson e Aschner, 2003).
O Mn pode aumentar/estimular a liberação de LHRH (hormônio liberador de LH) no
hipotálamo de roedores devido a sua capacidade de estimular a atividade da óxido nítrico
sintetase (ONS), resultando em aumento na produção de óxido nítrico (ON) e,
consequentemente, no aumento do cGMP (guanosina monofostato cíclico), PKG (proteína

quinase G) e finalmente, no aumento da liberação de LHRH (Lee e col., 2007; Pine e col.,
2005). Globalmente, estes resultados sugerem que, embora este metal possa facilitar a
secreção de LHRH. existem importantes diferenças quanto à sensibilidade entre sexos e o
estágio de maturação (Prestifilippo e col., 2007).
Paralelamente aos mecanismos bioquímicos envolvidos na liberação do LHRH acima
mencionados, o GLU e as catecolaminas são importantes neurotransmissores envolvidos na
liberação deste neurohormônio (Cheng, 2005). O GLU estimula os terminais neuronais
noradrenérgicos resultando na liberação de norepinefrina (NE); que por sua vez, ativa
receptores α 1 - adrenérgicos localizados em neurônios nitridérgicos, assim, aumentando o
cálcio intracelular (Ca2+). Este ativa a ONS e leva a produção de ON (Rettori e col., 1993).
Além disso, o Mn (na forma MnCl2) é capaz de estimular a secreção de DA e a atividade da
NOS. Foi demonstrado que a DA pode induzir ONS / ON (Melis e col., 1994, 1996), e com
base no importante papel do ON no controle da LHRH (Rettori e col., 1993), sugere-se que a
ativação de DA / ON pode mediar a estimulação e a secreção de LHRH (Quintanar, 2007).
Os conhecidos efeitos do Mn na estimulação do controle hipotalâmico na secreção de
gonadotropinas, como por exemplo, na relação LHRH/LH e na alteração/elevação dos níveis
séricos de LH, FSH e E2 gonadal (Lee e col, 2007) deixa evidente seu potencial em impactar
a reprodução em mamíferos (Pine e col., 2005). Efeitos similares são esperados para os
demais vertebrados, embora dados na literatura a este respeito sejam escassos ou
praticamente inexistentes.
A exposição ao Mn (roedores machos) diminui a concentração plasmática de
testosterona (T); estes dados sugerem que as células de Leydig podem ser um alvo para o
Mn nos testículos (Cheng e col., 2003). No início da esteroidogênese gonadal, o transporte
de colesterol nas células é mediado pela proteína StAR (steroidogenic acute regulatory),
sendo esta uma proteína da família das fosfoproteínas mitocondriais expressas nos tecidos
adrenal e gonadal por estimulação dos hormônios ACTH, LH e FSH (Stocco e Clark, 1996);
Após isso, o colesterol é convertido em pregnenolona através da atividade do complexo
enzimático localizado na membrana interna das mitocôndrias, o citocromo P450scc (side
chain clivage), que promove a clivagem da cadeia lateral do colesterol (Martyniuk e col.,
2006).
Experimentos conduzidos por Chang e col, (2005) demonstraram que o Mn é capaz de
suprimir a expressão da proteína StAR, impedindo que o colesterol chegue como substrato
para a enzima P450scc, bloqueando a esteroidogênese nas células de Leydig. Tal fato é
possível pois este metal interrompe o gradiente eletroquímico através da membrana
mitocondrial interna (Walsh e col., 2000).
Muito pouco é conhecido sobre a relação entre o Mn e os hormônios da tireóide.
Postula-se que o Mn pode afetar a homeostase dos hormônios tireoidianos agindo

diretamente sobre glândula tiróide e seus respectivos hormônios (T3 e T4), ou indiretamente
através de alterações no controle dopaminérgico da glândula tireóide (Soldin e Aschner,
2007). A dopamina é um modulador na secreção do TSH e os efeitos prejudiciais de
manganês para os neurônios dopaminérgicos podem resultar em efeitos profundos sobre a
síntese de hormônios tireoidianos. Os poucos dados disponíveis atualmente sugerem que o
Mn pode afetar diretamente os hormônios tireoidianos, alterando a enzimas deiodinases
(Soldin e Aschner, 2007).
A concentração plasmática de prolactina (PRL) foi utilizada como biomarcador no
índice de exposição biológica ao Mn em alguns casos específicos, como por exemplo, para
trabalhadores (soldadores) no qual foi constatada uma elevação da concentração deste
hormônio (Kim e col., 2007). Embora a PRL seja um dos hormônios que são
produzidos/controlados pela hipófise, não existem estudos que expliquem a relação dos
hormônios que controlam a secreção de PRL, tais como a DA e o hormônio estimulante da
tiróide (TRH) com a exposição ao Mn (Ellingsen e col., 2003).
Devido à complexidade das mudanças hormonais no sistema endócrino, ainda não se
dispõe de uma ferramenta eficaz para a avaliação integrada das respostas e da interação
entre os hormônios e os contaminantes metálicos.
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50.


Unidade 7
Fisiologia Comparada de Invertebrados Marinhos:

Trocas Gasosas, Digestão e Sistema Imune
Patrícia Lacouth
Lab. de Biologia celular de invertebrados marinhos
[email protected]
Nesta unidade iremos abordar e caracterizar de forma geral os principais

mecanismos fisiológicos que conferem à diferentes grupos de invertebrados
marinhos a capacidade de exploração e colonização de seu ambiente. Descrever
diferentes mecanismos fisiológicos utilizados pelos principais grupos marinhos para
a integração de alguns de seus sistemas e atividades. Mostrando similaridades dos
seus sistemas respiratório, digestório e imunológico com os de animais mais
complexos. Buscando despertar a curiosidade e sentido de observação na
descoberta de fenômenos fisiológicos nestes organismos. Foi estudando
invertebrados marinhos que muitas descobertas foram feitas sobre os mecanismos
mais simples de sobreviência e manutenção da homeostase.
Todos os capítulos revisados pelo

Prof Dr. Márcio Reis Custódio
Capítulo 33 Trocas gasosas em invertebrados marinhos pág. 427

Suélen Felix
Capítulo 34 Adquirindo energia: formas de alimentação e digestão em inverte-

brados marinhos pág. 435
Camila Queiróz

Patrícia Lacouth

Fisiologia de Invertebrados Marinhos
Trocas gasosas em invertebrados marinhos

Suélen Felix
Lab. de Biologia Celular de Invertebrados Marinhos
[email protected]
Introdução
O modelo de trocas gasosas em organismos com respiração aérea ou aquática é
determinado por características anatômicas e circulatórias e por propriedades físicas do
meio respiratório, especificamente com relação à solubilidade e à difusibilidade do oxigênio
na água e no ar (Weibel, 1984; Bicudo e Weibel, 1987).
Suprir com O2 as células metabolicamente ativas do interior do corpo dos indivíduos
e retirar eficientemente o CO2 é um dos problemas fundamentais para a sobrevivência de
todos os organismos (Schmidt-Nielsen, 2002). Os problemas são diferentes na água e no ar
por duas razões principais: (1) o ar é rico em oxigênio enquanto que em uma mesma
pressão parcial o conteúdo de oxigênio na água é 30 vezes menor por causa da sua baixa
solubilidade; (2) o oxigênio se difunde 300 000 vezes mais rápido através do ar do que
através da água (Tab. 1) (Schimidt-Nielsen, 2002). Por esses motivos os invertebrados
marinhos desenvolveram estratégias e órgãos respiratórios diferentes para se adaptarem as
peculiaridades exigidas pelo meio que habitam (Bicudo e Weibel, 1987).
Tabela 1. Comparação entre ar e água enquanto meios respiratórios, destacando-se a concentração

de oxigênio e sua constante de difusão nesses dois meios (Modificado de Schimidt-Nielsen, 2002).
Princípios para a determinação dos modelos de trocas gasosas

Em princípio, a função das trocas gasosas seja em organismos de respiração aérea
ou de respiração aquática é supri-los constantemente com O2 para atender suas demandas
e também eliminar dos compartimentos interiores do corpo o CO2 que é o gás final da
combustão (Fig. 1) (Gray, 1954). A eficiência das trocas gasosas é determinada por certas

propriedades estruturais que serão discutidas a seguir. Entretanto, as trocas gasosas entre
a água ou o ar e o sangue são determinadas por três princípios básicos: a) quanto maior for
a área da superfície da troca gasosa maior é sua eficiência; b) quanto menor for a
espessura das barreiras de tecido que separa o capilar e o meio respiratório maior será a
taxa de troca e; c) quanto maior o número de capilares sanguíneos expostos água ou ao ar
mais melhor será a difusão dos gases (Meban, 1980).
Figura 1. Troca gasosa entre o interior do corpo e o meio respiratório via difusão simples.
Modificado de http://www.uic.edu/classes/bios/bios100/summer2002/lect17.htm (09/05/2010).
Design dos órgãos respiratórios

Por causa do conteúdo de O2 na água ser aproximadamente 30 vezes menor na
água do que no ar e também por causa da baixa difusibilidade do O2 na água, os
organismos com respiração aquática precisam renovar o meio ao redor da superfície de
troca gasosa em uma taxa maior do que o sangue dos capilares é renovado (Bettex-Galland
e Hughes, 1973). A ventilação é constante nos pulmões, mas normalmente contínua e
unidirecional nas brânquias (Burri, 1985). O design básico das brânquias é um conjunto de
fendas que fornece um fluxo laminar de água - as fendas branquiais - separadas pelos arcos
branquiais (Fig. 2). Quando a demanda respiratória aumenta, a ventilação das fendas é
realizada de forma mais complexa, adicionando-se estruturas secundárias (filamentos) e
terciárias (lamelas) aos arcos branquiais (Fig. 3). Isso é alcançado pela construção dessas
estruturas de troca gasosa sobre um sistema vascular estruturado hierarquicamente. Desta
forma, a estrutura das brânquias forma-se como evaginações dos arcos branquiais dentro

das câmaras branquiais. O princípio dessa construção fornece ventilação através de um

fluxo de água contínuo, sem a formação de bolsas de água e de espaços mortos virtuais,
onde o O2 não conseguiria se difundir (Gray, 1954).
Figura 2. Estrutura branquial mostrando fluxo laminar de água passando pelas fendas branquiais
onde estão evidenciados os capilares sanguíneos e as trocas gasosas que ocorrem nessas
estruturas. Modificado de http://www.biologyreference.com/Fo-Gr/Gas-Exchange.html (09/05/2010).
Figura 3. Estrutura secundária (filamentos branquiais adicionais) e terciária (lamelas) que são
formadas quando os organismos requerem maiores demandas respiratórias. Modificado de
http://www.revisionworld.com/country.php (10/05/2010).

Respiração aérea versus respiração aquática: contraste dos designs

As trocas gasosas que evoluíram diferentemente para a respiração aérea e aquática,
respectivamente, têm seus designs adaptados para as condições de limite das trocas
gasosas impostas pelo meio respiratório (Bicudo e Weibel, 1987). Brânquias de
invertebrados e peixes mostram basicamente o mesmo padrão de design: a vascularização
está contida em lamelas paralelas que estão circundadas por um fluxo de água constante e
o órgão respiratório é evaginado (Fig. 4a) (Weibel, 1984). Nos órgãos respiratórios aéreos
os maiores riscos são a perda de água e os estresses mecânicos gerados na superfície ar-
tecido. A invaginação da trocas gasosas contribui para a solução de ambos os problemas,
sem haver desvantagem na ventilação (Fig. 4b) (Burri, 1985). As forças mecânicas são
suprimidas nos insetos, pois a traquéia é composta por uma espiral rígida de quitina. Nos
pulmões essas forças são compensadas montando os elementos das trocas gasosas
(septos alveolares) em um sistema fibroso mantido constantemente sob tensão, e provendo
a superfície com uma camada surfactante (Meban, 1980).
Figuras 4a e b: figura 4a mostrando sistema respiratório aquático evaginado de um nudibrânquio,

figura 4b mostrando a invaginação de sistema respiratório aéreo.
Adaptações primárias em invertebrados para a respiração em meio aquático

As esponjas são os invertebrados marinhos mais basais, não apresentam tecidos
verdadeiros, portanto, nem brânquias e nenhum tipo de sistema, nesses animais as trocas
gasosas acontecem por difusão simples em uma relação direta água-célula, devido á
constante corrente de água que fui pelo interior do corpo desses indivíduos (Fig. 5a). Esta
corrente de água é promovida pelo batimento dos flagelos de células especializadas
chamadas coanócitos que se localizam dentro de câmaras no interior do corpo das esponjas
(Randall e col., 2001). Da mesma forma que as esponjas, os cnidários, não possuem
brânquias, nem outro tipo de órgão respiratório. Nos indivíduos pertencentes a este filo, as
trocas gasosas acontecem por difusão simples através da superfície do corpo (Fig. 5b)

Figura 5a e b. Trocas gasosas em esponjas e cnidários respectivamente.
Moluscos aquáticos como polvos e lulas, têm brânquias especialmente

desenvolvidas para as trocas gasosas, enquanto que nos bivalves, as brânquias exercem
função dupla (respiração e alimentação por filtração). Os cefalópodes em geral são animais
muito ativos requerendo trocas gasosas mais efetivas as quais são realizadas facilitadas
pela circulação capilar nas brânquias e pela presença de pigmento respiratório no sangue,
normalmente hemocianina (Fig. 6). Gastrópodes aquáticos, embora menos ativos que os
cefalópodes também possuem brânquias e hemocianina como pigmento circulatório
Figura 6 –
Brânquias de
polvo. O
esquema ao
centro mostra o
primeiro vaso
aferente que
leva para as
brânquias o
sangue
desoxigenado
que é distribuído
inicialmente via
vaso aferente
secundário e
então via vaso aferente terciário. Já os vasos eferentes secundários são responsáveis por levar até o
vaso eferente primário o sangue rico em oxigênio, que será então conduzido para as demais partes
do corpo do organismo. Acima brânquia de polvo mostrando vaso eferente primário e embaixo a
esquerda vaso aferente terciário. http://tolweb.org/articles/?article_id=4200 (11/05/2010).

Nos equinodermos as trocas gasosas normalmente são feitas através do sistema

hidrovascular ou ambulacrário, entretanto, nos equinóides, além do sistema hidrovascular
existem brânquias externas próximas a cavidade oral que auxiliam este processo. Nos
holoturóides as trocas gasosas ocorrem de forma diferenciada, certa quantidade de água
entra através da cloaca e fica em contato com uma grande estrutura chamada árvore
respiratória por cerca de 6-10 minutos. Esse tempo é o necessário para as torças gasosas
acontecerem, após esse período a água é liberada em uma única contração (Fig. 7)
Figura 7. Morfologia interna de holotúria, enfatizando a ampla estrutura da árvore respiratória, que é o
órgão responsável pelas trocas gasosas nesses organismos. http://www.tolweb.org/Holothuroidea
(11/05/2010).
Crustáceos aquáticos apresentam brânquias que são normalmente ventiladas por

movimentos de apêndices especiais o que garante um maior aporte de água nessas
estruturas e conseqüentemente maior oxigenação (Fig. 8). Crustáceos de maior tamanho
são melhores vascularizados e contém pigmento circulatório (hemocianina) no sangue,
embora não desenvolvam capilares como os encontrados nos cefalópodes (Randall e col.,
2001).

Figura 8. Diagrama do sistema ventilatório em crustáceos decápodes, mostrando o padrão de fluxo

de água através da câmara branquial, com a água entrando pela base dos pereópodes, fluindo
através das brânquias e saindo pelo canal exalante (Modificado de Taylor, 1982).


Adquirindo energia: formas de alimentação e digestão

em invertebrados marinhos
Camila Queiroz
Lab. de Biologia Celular de Invertebrados Marinhos
[email protected]
Os animais precisam se alimentar para prover a energia necessária para

permanecerem vivos e manterem processos físicos como a contração muscular,
crescimento e reprodução. Utilizam o alimento também como matéria-prima para formar e
manter mecanismos celulares e metabólicos (Eckert, 2000). Este alimento é conseguido por
meio de uma diversidade de métodos mecânicos, que determinam a natureza do que um
dado animal pode obter e utilizar (Shmidt-Nielsen, 2002).
Obter uma alimentação adequada em quantidade e qualidade dispende muito tempo
da rotina comportamental da maioria dos animais. Certamente sua fisiologia e morfologia
são o resultado da seleção natural que favorece a aquisição efetiva de energia dos
alimentos, evitando que o predador se torne presa ao se alimentar.
A principal razão para que os animais utilizem diversos mecanismos de alimentação
relaciona-se com os nutrientes que devem ser adquiridos pelo predador. Esta captura
envolve como a presa deve ser localizada, identificada, subjugada e ingerida. Em contraste
com a simplicidade das palavras, a diversidade dos mecanismos existentes é complexa.
Esponjas marinhas carnívoras, cnidários com toxinas, estrelas do mar que se alimentam
invaginando sua presa no estômago.
Entre os invertebrados marinhos há um grande número de espécies com níveis de
complexidade alimentar diferentes. O método de alimentação que é menos especializado
envolve a absorção de nutrientes diretamente através da superfície do corpo. Este processo
chamado de endocitose ocorre a nível celular e pode ser dividido em fagocitose e
pinocitose. As outras formas de alimentação incluem a filtração, comum em uma ampla
variedade de espécies; animais que se alimentam de detritos orgânicos depositados no
substrato, e outros que possuem mecanismos que evoluíram para manipular maiores
massas alimentares, incluindo vários dispositivos para a apreensão, raspagem, perfuração,
mordedura e mastigação (Hickman et al 2001).
O alimento obtido consiste de matéria orgânica e grande parte dele pertence a três
grupos principais: proteínas, lipídios e carboidratos. Estes três tipos de compostos orgânicos
dominam completamente a composição de quase todos os vegetais e animais, que são
presas potenciais de diversos outros.
Seja o alimento utilizado como combustível, para desenvolvimento ou manutenção,
as grandes moléculas de alimento são inicialmente degradadas em unidades mais simples;
estas são então absorvidas e podem ser incorporadas ou metabolizadas para fornecer

energia. A principal função da digestão é decompor com o auxílio de enzimas, as moléculas

grandes e complexas presentes no alimento de modo a torná-las absorvíveis e disponíveis
para as células (Fig. 1) (Shmidt-Nielsen 2002).
Figura 1 - Sequência de acontecimentos durante a digestão.
Todos os filos animais evoluíram no mar, um habitat muito estável e uniforme, a não
ser nas zonas costeiras e entre-marés. As espécies marinhas necessitam então, de dois
requisitos principais para a sobrevivência – ambos relacionados com a alimentação. Elas
devem obter alimento em quantidade suficiente e evitar transformar-se em alimento de
outros organismos. A forma de obtenção do alimento e a otimização de seus nutrientes
entre os invertebrados marinhos é bastante diversa e uma abordagem dos processos que
ocorrem em esponjas, cnidários, moluscos, crustáceos e equinodermos são abordadas
neste capítulo.
Poríferos
Quase todas as esponjas dependem da digestão intracelular, e, portanto, da
fagocitose e pinocitose como captura de alimento. Para que estes processos ocorram nas
esponjas, a circulação da água é feita de forma orientada. Ao entrar a água traz partículas
alimentares; ao sair, remove excretas nitrogenadas. Esponjas são consumidoras seletivas
em relação ao tamanho das partículas, com tamanhos de poros variando na maioria das
espécies entre 5 e 50 µm. (Bergquist, 1978; Simpson, 1984) Cerca de 80% da matéria
orgânica absorvida por demosponjas tinham tamanho menor do que o observável por
microscopia ótica e 20% são bactérias e dinoflagelados (Reiswig 1970). A água penetra na
esponja pelos poros inalantes, percorre os canais do corpo e alcança uma grande cavidade
central — o átrio ou espongiocele (Fig. 2). Os coanócitos revestem o átrio ou, na maioria dos
casos, pequenas câmaras que ficam no trajeto dos canais. O agitar dos flagelos dessas

células provoca um fluxo de circulação da água, puxando-a de fora para dentro do corpo.
Ondulações nos colares dos coanócitos movem as partículas alimentares capturadas em
direção ao corpo celular destas células, onde são ingeridas por pinocitose ou fagocitose.
Esponjas não possuem cavidade digestiva específica, e todo processo alimentar é
intracelular. Os coanócitos digerem as partículas parcialmente e passam diretamente para
outra célula no interior da matriz para a digestão final. A fagocitose também pode ser
realizada diretamente pelos arqueócitos, com a formação de vacúolos digestivos (Bergquist,
1978; Simpson, 1984).
Embora a maioria possua a filtração como modo de alimentação, algumas esponjas
marinhas são conhecidas por abrigar organismos fotossintetizantes. Esses simbiontes,
cianobatérias e dinoflagelados, produzem compostos utilizados pela esponja, e a utilizam
como substrato.
Figura 2 - Morfologia e funcionamento da digestão em esponjas. Disponível em:

http://www.mun.ca/biology/scarr/Porifera.htm.
Outra forma de obtenção de alimento diferenciada ocorre em espécies de esponjas

da família Cladorhizidae. Espécies desta família não possuem sistema aqüífero e são
carnívoras, se alimentando de pequenos crustáceos (Fig. 3). Utilizam espículas em forma de
gancho para capturar as presas, que depois são envolvidas por células que efetuam a
digestão e a absorção. (Vacelet & Boury-Esnault 1995).

Figura 3 - Esponja carnívora se alimentando; a. microcrustáceos sendo presos nas espículas; b.

presa sendo envolvida pela esponja. (Vacelet & Boury-Esnault 1995)
Cnidários
Diferentemente das esponjas, os cnidários apresentam uma cavidade digestiva, a
cavidade gastrovascular ou celêntero, vindo dai o nome do grupo (gastro= estômago; cele =
oco; êntero= intestino) (Fig. 4). No entanto, não possuem uma abertura anal, o que
caracteriza um tubo digestivo incompleto. A gastroderme possui células glandulares que
produzem enzimas digestivas e atacam o alimento no celêntero (digestão extracelular), e
células que fazem a digestão intracelular dos fragmentos alimentares parcialmente
digeridos. Os resíduos são expulsos pela boca.
Figura 4: Esquema geral do corpo de cnidário (Brusca e col.,2003)
Nas formas mais volumosas, a cavidade digestiva ou celêntero é ramificada,

facilitando a chegada do alimento a todos os pontos do corpo. De certa forma, essa
ramificação da cavidade digestiva substitui o aparelho circulatório (por isso é chamada
cavidade gastrovascular) (Brusca & Brusca 2005, Eckert 2000, Hickman 2001).

Cnidários são conhecidos como

predadores nas cadeias ecológicas
marinhas e sua alimentação consiste
principalmente de animais
macroscópicos, embora alguns utilizem
microzooplâncton, outros que habitam
substratos perto da superfície podem
conter formas simbiontes, e alguns
consomem diretamente material
orgânico dissolvido (Arai, 1997).
Entretanto, são considerados últimos
consumidores nestas cadeias
alimentares, já que não são muito
predados, provavelmente devido a seu
corpo gelatinoso possuir baixo valor
Figura 5: Sistema digestório de cnidários energético (Sommer et al.2002).

(Modificado de Hill e col., 2008) Na maioria dos cnidários, defesa
e alimentação estão intimamente relacionadas. Os tentáculos da maioria das anêmonas e
águas-vivas servem a ambos os propósitos, e os pólipos defensivos das colônias de
hidrozoóides frequentemente auxiliam também na alimentação. Esses animais utilizam
toxinas, a maioria com atuação no sistema nervoso, para subjugar a presa mas também
para espantar predadores. Os nematocistos, concentrados em grandes quantidades sobre
os tentáculos alimentares, injetam toxinas paralisantes nas presas e as imobilizam enquanto
os tentáculos levam o alimento até a boca (Eckert, 2000) (Fig. 5)
Para facilitar a digestão, há na gastroderme células produtoras de enzimas que
facilitam a digestão e cílios que ajudam a misturar os conteúdos do trato digestivo. Como
resultado dessa fase inicial é produzido um caldo de polipeptídios, gorduras e carboidratos
que células absorvem por processos de endocitose. A digestão se completa no interior
dessas células, com a formação de vacúolos alimentares.
Como vários organismos aquáticos, os cnidários obtém parte do alimento de
populações de algas simbióticas – autótrofos sintetizantes. Após as algas sintetizarem
moléculas orgânicas de precursores inorgânicos utilizando luz solar, elas exportam algumas
das moléculas orgânicas para o tecido do animal hospedeiro. Os corais formadores de recife
são os mais famosos animais que obtem compostos orgânicos através de algas simbiontes
endógenas. Todas as seis mil espécies de corais tropicais conhecidos contem algas
simbiontes. Alem de prover energia ao coral, estas algas facilitam a formação do esqueleto
de calcário desses cnidários (Hill e col 2008).

Vários outros grupos de cnidários também adotaram métodos de alimentação que

não dependem do uso direto dos tentáculos e nematocistos. Algumas espécies de
anêmonas apreendem crustáceos e pequenos peixes com o disco oral formando uma
espécie de rede de captura. A presa encosta no disco e três segundos a partir de
estimulação das células, três segundos após o disco ter sido estimulado há o fechamento
completo desse disco. Muitas espécies de corais são também suspensívoras e utilizam uma
rede formada por uma fina camada de cordões de muco, que cobre a superfície da colônia e
que coleta a fina matéria particulada que se precipita na coluna d´água. O muco, já com
alimento fixado, é levado para a boca pelos cílios. Este muco contém uma mistura variável
de componentes macromoleculares como glicoproteínas, lipídios e mucopolissacarídeos e
possui características específicas para cada espécie.
Figura 6- a. Recife de coral tropical; b. Pólipos de coral; c. Esquema de um único

pólipo seccionado. (Modificado de Hill e col., 2008).
Cnidários são bem conhecidos por sua ampla predação em ovos de peixes, sendo
uma importante fonte de recursos para muitas espécies. Por exemplo, a espécie Aurelia
aurita tem de 2 a 5 % de seu alimento diário constituído por ovos de arenque (Moller 1980).
Outro estudo calculou que Rhizophysa eysenhardti consumiu 28% das larvas de peixe
disponíveis a cada dia, e Purcell (1984c) estima que 60% de larvas de peixes poderiam ter
sido consumidos por Physalia physalis em um único local.

Moluscos
Moluscos marinhos podem ser predadores (herbívoros ou carnívoros) ou
suspensívoros. Possuem tubo digestivo completo no qual a boca conduz à cavidade bucal,
que em muitos organismos contém várias glândulas salivares secretoras de enzimas. Com
exceção dos bivalves, a maioria apresenta a rádula, uma estrutura exclusiva dos moluscos e
que se modificou entre as espécies dependendo da presa potencial.
O aparelho radular é constituído por uma faixa de tecido conjuntivo, repleto de
dentes e esticado sobre uma haste cartilaginosa. A rádula é composta de uma esteira de
dentes quitinosos recurvados, podendo ser simples, serrilhados ou modificados de outras
maneiras (Fig. 7b). O aparelho chamado rádula, é composto por duas partes: a base
cartilaginosa, com o músculo protrator da rádula e o músculo retrator da rádula; e a rádula
propriamente dita, com suas fileiras longitudinais de dentes quitinosos recurvos. A base
cartilaginosa se move para fora e para dentro da boca do animal por intermédio dos
músculos protratores e retratores, e a rádula se movimenta (Fig. 7a ). Através desses
movimentos os dentes da rádula se erguem e raspam a superfície, cortando e recolhendo
partículas de alimento que são conduzidas ao esôfago.
Os dentes são recobertos por muco (secretado por uma glândula salivar), que facilita
o recolhimento e a ingestão da comida. À medida que se desgastam são substituídos por
novos dentes que são continuamente produzidos na parte posterior da cavidade bucal, no
saco radular. O número, a forma e o arranjo dos dentes variam e são adaptados ao tipo de
alimentação, sendo usados para identificar as várias espécies. Em geral, os herbívoros
possuem mais dentes, e nos carnívoros estes são menores. O maior número de dentes na
rádula é encontrado em um gastrópode, Pleurotomaria, com cerca de 200 dentes por fileira.
Certos gastrópodes usam a rádula para caçar outros gastrópodes e bivalves, ralando e
ingerindo as partes macias. Alguns possuem uma rádula formada por um único dente que
pode ser atirado como um arpão contra a presa, liberando uma neurotoxina (Fig. 7d) (Hill e
col., 2008).
A digestão extracelular é efetuada por enzimas e ocorre principalmente no estômago
e nos cecos digestivos, enquanto a absorção e digestão intracelular ocorrem nas paredes
dos cecos e intestino. Na maioria dos moluscos, a digestão é intracelular, na qual as
partículas alimentares são fagocitadas por células da parede de dutos alimentares. No
entanto, em grupos mais derivados como os cefalópodes predomina a digestão extracelular.
As enzimas secretadas principalmente pelos cecos e estômago, digerem o alimento e a
absorção ocorre no estômago, nos cecos e no intestino.
Bivalves são animais ecologicamente importantes, e um exemplo interessante de
quão diferentes dos vertebrados alguns animais podem ser, em relação a seus processos
digestivos e de absorção dos nutrientes. Nesta classe não existe a rádula, e estes são

animais filtradores. Primeiramente, esses moluscos dependem fortemente da ação de cílios

junto a contrações musculares para mover o alimento através do trato digestivo. A ação
ciliar é importante, pois é capaz de selecionar as partículas de acordo com seu tamanho e
outras características. A segunda grande diferença é que na maioria dos bivalves a digestão
é intracelular.
Figura 7- a. Cavidade da boca de um gastrópode mostrando a rádula; b. Rádula com a fileira de

“dentes”; c. Concha de um molusco morto por outro molusco carnívoro; d. Rádula com toxina de um
molusco. (Hill et al 2008).
Nos bivalves o estômago é associado com divertículos digestivos O processamento

do alimento nos bivalves ocorre com auxilio do estilete cristalino, uma haste circular,
cilíndrica e transparente alojada numa dilatação do estômago e apoiada nas extremidades
por dois escudos gástricos quitinosos que lhe proporciona um movimento de rotação. O

estilete contém redutoras de amido, muito úteis na digestão do plâncton. Os movimentos

rotativos do estilete funcionam como um molinete para recolher o muco contendo o alimento
para o estômago (Hill e col., 2008) (Fig. 8).
Outro exemplo diferencial ocorre em nudibrânquios. Estes são pequenos animais
marinhos pertencentes ao grupo dos moluscos gastrópodes e chamados popularmente de
lesmas-do-mar. Os nudibrânquios são animais carnívoros que se alimentam de outros
invertebrados, como cnidários, esponjas, cracas e ascídias. Algumas espécies se alimentam
dos ovos de outros nudibrânquios e, até mesmo, de indivíduos adultos.
Figura 8- Esquema de digestão em molusco bivalve. (Hill et al 2008).
Geralmente, a relação entre estes moluscos e sua presa é muito estreita, e é comum
que cada espécie se alimente apenas de alguns tipos específicos de presa. Nudibrânquios
aeolíeos possuem uma reputação devido ao seu modo particular de obter alimento, no qual
porções do corpo dos cnidários que constituem suas presas são agarradas pelas
mandíbulas acionadas por músculos, enquanto a rádula arranca pedaços para ingestão.
Algo impressionante neste sistema, é que muitos nudibrânquios ingerem os nematocistos da
presa sem que este seja disparado. Os nematocistos são deslocados ao longo do tubo

digestivo do nudibrânquio, mas como isto acontece sem que eles sejam disparados não é
bem documentado. Possivelmente as secreções mucosas do nudibrânquio limitam as
descargas desses nematocistos e ocorra uma inativação temporária. Muitas vezes os
nematocistos são armazenados em estruturas chamadas cnidossacos no interior dos
ceratos dorsais. Este armazenamento foi mostrado em diversos trabalhos e
presumivelmente ajudam na defesa do nudibrânquio. Outras espécies de nudibrânquios
também utilizam suas presas não apenas para obtenção de energia, mas também para
obter compostos químicos. As “dançarinas espanholas”, Hexabranchus sanguineus, utilizam
para sua própria defesa um composto químico obtido da esponja que se alimenta (Conklin &
Mariscal 1977).
Dentre os moluscos, entretanto, são os cefalópodes aqueles predadores mais
vorazes no ambiente marinho. Estes animais são bem adaptados a uma alimentação
predatória e uma dieta carnívora. A presa é localizada pelos olhos bem desenvolvidos e a
captura efetuada pelos tentáculos ou braços. Nos cefalópodes as rádulas são muito fortes e
em forma de bico, cuja função é perfurar e rasgar grandes pedaços de tecidos das presas.
Figura 9: Anatomia interna de um cefalópode (Hickman 2001)

Ao contrário das sépias e lulas que rasgam sua presa com as mandíbulas, o hábito
alimentar dos polvos é mais semelhante ao das aranhas. Eles injetam veneno na presa e
em seguida, quando a presa está segura, secretam enzimas sobre ela. Os tecidos
parcialmente digeridos são absorvidos. O mesmo mecanismo é realizado para remover os
gastrópodes das conchas. Após perfurar a concha com a rádula, os polvos secretam as
enzimas.
O esôfago e estômago desses animais é bastante muscular. Há também glândulas
digestivas, divididas em pâncreas e uma outra parte, comparada a um fígado, mas ainda
primitivo.Principalmente devido a eficiência dessas glândulas secretoras de enzimas, a
digestão nos cefalópodes é extracelular. As enzimas de ambas as divisões celulares
chegam através de um duto comum no interior do estômago e reto. A absorção do alimento
ocorre diferentemente nas espécies, podendo ocorrer nos cecos ou nas glândulas

digestivas. Os resíduos indigeríveis passam do estômago para o intestino e são

transportados pelo ânus com auxílio de um jato d´água exalante.
Crustáceos
Crustáceos exploram diversas dietas e estratégias de alimentação. Alguns
representantes deste filo assumiram hábitos bentônicos, e determinados apêndices
tornaram-se mais fortes e adaptados para o rastejamento e a escavação. As ações de
apêndices adaptaram-se para o consumo de suspensão, a predação ou a coleta de
alimento, e as maxilas e a mandíbula funcionam na preensão, na mordedura e no
direcionamento do alimento para a boca.
O trato digestivo dos crustáceos é quase sempre reto, composto por uma boca
ventral, seguida por um esôfago tubular e um estômago. Condições ácidas são criados no
estômago durante a digestão, mas não tão os ácidas como na digestão humana. Nos
crustáceos o pH é em torno de 4, ao contrário de 2 ou 1 em muitos mamíferos. O estômago
é dividido em duas câmaras. A câmara anterior é chamada estômago cardíaco e é bastante
muscular, e muitas vezes especializada para além de armazenar, também triturar o
alimento. Esta trituração é auxiliada com a adição de enzimas digestivas que chegam ao
estômago anterior por movimentos retrógrados do intestino. A segunda parte do estômago
é chamada de estômago pilórico, sendo este menor que o primeiro. Seu revestimento
cuticular frequentemente tem cerdas singulares, que agem coletivamente, como uma
peneira, impedindo as partículas de alimento de deixarem o estômago antes que sejam
reduzidas para um tamanho pequeno.
O intestino médio de crustáceos varia em complexidade, sendo um tubo
relativamente simples em algumas espécies ou partes elaboradas com divertículos
anteriores e posteriores (cecos) em outros. A digestão química acontece principalmente com
o auxílio de grandes glândulas digestivas esponjosas chamadas de hepatopâncreas. Este é
um órgão que consiste de numerosos túbulos cegos, conectado a parte anterior do sistema
digestivo por dutos. Cada túbulo é composto de células que funcionam na secreção
enzimática, na endocitose e na digestão intracelular do alimento particulado, na absorção e
armazenamento de nutrientes, além de participar da remoção de detritos.
Como os crustáceos são primariamente aquáticos há um grande número de
crustáceos filtradores e nestes, a filtração envolve cerdas em vez de cílios. O pente de
cerdas localiza-se em um ou vários pares de apêndices, mas a localização varia de um
grupo de crustáceos para outro. As cerdas finas funcionam como filtros na coleta de
partículas alimentares, e é possível que o espaçamento das cerdas determine o tamanho da
partícula coletada. Este mecanismo é realizado através de um processo em que a corrente
hídrica é produzida por batimento de apêndices filtradores. As partículas coletadas são

removidas das cerdas do filtro por outras cerdas em forma de pente e transportadas para as
partes bucais pelos apêndices.
Figura 10: Sistema digestório de crustáceos (Modificado de Hill 2008).
Figura 11: Crustáceo com numerosas cerdas utilizadas para coletar algas
unicelulares e pequenos animais. Estas cerdas são extensões do exoesqueleto.
Em um estudo partículas constituídas por uma mistura de três de tamanhos de

esferas de poliestireno foram oferecidas a Daphnia magna (Fig. 12), sendo duas maiores
que o tamanho da malha do filtro. Os resultados mostraram que a pulga d´água capturava

60% das partículas menores e 100% das partículas maiores, evidenciando que este
processo de coleta não é uma triagem simples. É um mecanismo em a captura se dá pela
atração das cargas opostas entre as partículas e a superfície do filtro. (Higler 1961).
a b
Figura 12: a. Cérdulas coletoras de partículas da pulga d´água Daphnia. b. Dois
tamanhos de partículas de poliestireno coletadas pelas cérdulas ilustradas em a.
Outro exemplo de crustáceo filtrador são os cirripédios sésseis, conhecidos como

cracas. Estes animais alimentam-se com o uso de estruturas denominadas cirros para filtrar
material em suspensão da água circundante. Alimentam-se ativamente, estendendo os
últimos três pares de cirros e movendo-os ritmadamente “varrendo” a água. Entretanto, em
áreas de movimento intenso de água, as cracas apenas estendem seus cirros durante o
refluxo das ondas. Estudos indicam que as cracas são capazes de capturar partículas
alimentares de tamanho variando de 2um a 1mm, incluindo detritos, bactérias, algas e
vários representantes do zoôplancton. O alimento é digerido através do aparelho digestivo,
passando pela boca, estômago e intestino. Os resíduos são eliminados através do ânus.
(Fig. 13).
a b
Figura 13- a. Craca com mecanismo filtrador; b. Esquema de sistema digestório da craca.

Dentre os crustáceos predadores destacam-se os da ordem Decapoda, que contem

os familiares camarões, lagostins, lagostas, caranguejos e siris. A maioria dos decápodos
combina a alimentação predatória com o consumo de detritos. Suas presas mais comuns
são invertebrados grandes, tais como cnidários e moluscos (Fig. 14).
Figura 14: a. Caranguejo se alimentando de uma medusa; b. Caranguejo do gênero Sargassum se

alimentando de molusco.
As muitas espécies que incluem moluscos em sua dieta têm quelipodes, apêndices
em forma de pinças, dimórficos. A forte garra direita possui dentes proximais nos dedos e é
usada para esmagar; a garra esquerda é mais delgada e adaptada para cortar. Caranguejos
do gênero Calappa, possuem um dente grande no dátilo e um par de protuberâncias no
quelípodo direito (Fig. 16) Com essas modificações e um padrão de comportamento
associados, estes caranguejos podem ser eficazes para abrir conchas de gastrópodes e
outros moluscos e, portanto, se alimentam de partes moles ou fechados ermitões.
Figura 15: Caranguejo do gênero Callapa abrindo a concha de um molusco (Brusca e col., 2007).
Equinodermos

Equinodermos são animais marinhos e incluem os crinóides ou lírios do mar, os

ouriços do mar, os pepinos do mar, os ofiuróides e as estrelas do mar. Exibem uma ampla
variedade de estratégias alimentares e estruturas de seus tubos digestivos. Possivelmente
esta característica, mais do que outras, é responsável pelo sucesso do filo desde o período
Cambriano. No entanto, a fisiologia nutricional destes animais é estudada para poucas
espécies e na maioria dos casos o entendimento ainda é incompleto.
Crinóides possuem uma boca que se abre em um esôfago curto e leva ao intestino,
fazendo uma volta completa no ânus, que pode ser levantado em um cone (Fig.17). São os
únicos equinodermos que retém a boca voltada para cima como as formas ancestrais.
Presumivelmente seus mecanismos de alimentação são adaptados para explorar partículas
suspensas.
Estes equinodermos mantém sua superfície oral voltada para cima e alimentam-se
removendo matéria orgânica particulada da água do mar. Seus braços e pínulas são
mantidos esticados a favor do fluxo da corrente, para capturar o alimento sem grande
dispêndio energético. Os sucos ambulacrais se localizam nas pínulas e em sua superfície
encontram-se cílios que auxiliam a jogar plâncton e partículas orgânicas para a boca.
Figura 17. Estrutura de um crinóide. A. Lírio do mar com parte da haste. B. Vista oral do cálice dos
crinóides (Hill e col 2008).
Dentre os equinodermos a captura tentacular de alimentos é utilizada pelos pepinos-do-mar,

que vivem entocados na lama com seus tentáculos acima da superfície do substrato. Esses
animais são os únicos que possuem um alongamento do eixo oral-aboral o que se relaciona
com o alongamento do trato digestório. São comedores de depósitos ou de suspensões e os
tentáculos cobertos de muco são distendidos e envolvem finas partículas, incluindo plâncton
em suspensão. Os pepinos-do-mar também ingerem alimento contido na areia ou lama
enquanto se movem no substrato (Shimidt & Nielsen 2002).

O intestino é longo, um tubo em espiral, que normalmente percorre o comprimento do corpo

três vezes na passagem da boca ao ânus. Há diferenças regionais, sendo as regiões
geralmente referidas como estômago, intestino delgado e grosso (Boolotian 1966). Como
nos outros representantes do filo, os pepinos-do-mar apresentam enzimas digestivas como
principal auxílio na digestão. O revestimento do intestino é composto por células cilíndricas
mucosas em abundância e outros tipos de células que secretam enzimas digestivas que
foram descritas por Hammann (1884). Há também um grande número de amebócitos
descritos por Oomen (1926).
Desde os primeiros experimentos feitos por Cohnheim (1901) foram realizados diversos
estudos sobre a atividade das enzimas digestivas em holotúrias. Extratos de tecido das
espécies Holothuria tubulosa e Paracaudina chilensis mostraram a presença de proteases,
carboidrases e lípases. Em todos os casos as enzimas foram capazes de hidrolizar caseína,
fibrina, e outros aminoácidos (Oomen 1926; Sawano 1928).
Estudos mais recentes com a espécie Stichopus japonicus indicaram certa seletividade na
alimentação desta espécie. Materiais de fundo coletados na área habitada por esses
animais continham quantidade de nitrogênio total de 0,03%, enquanto as amostras de
comida retiradas da garganta e igualmente analisados apresentaram um total de nitrogênio
de 0,11%.
Figura 18: Lanterna de Aristóteles, um complexo mecanismo utilizado pelo ouriço-do-mar para
mastigar seu alimento. Cinco pares de músculos retratores extraem os dentes e a lanterna para fora
e, cinco pares de prolongadores empurram a lanterna para baixo e expõem os dentes. Outros
músculos produzem uma variedade de movimentos. Apenas partes maiores do esqueleto e os
músculos são mostrados neste diagrama (Hickman e col., 2001).
Estratégias alimentares entre os equinóides incluem varias formas de herbivoria,

suspensivoria, detritivoria e predação. Na maioria das espécies deste grupo, a alimentação
depende da ação da Lanterna de Aristóteles (Fig 18). Este aparato mastigador se localiza
dentro da boca e possui cinco dentes calcários protáteis (Brusca & Brusca, 2005). Os
ouriços usam os dentes da lanterna para raspar principalmente algas e esponjas do

substrato e arrancar pedaços do alimento de tamanho apropriado. Aqueles que não

possuem lanterna usam seus pés ambulacrais para coletar alimento da areia ou partículas
da água e levá-los à boca. (Hickman, 2001).
O aparelho digestivo dos ouriços-do-mar é semelhante ao da classe Holothuroidea,
sendo longo e enrolado. Nas espécies de bolachas do mar, adaptadas a uma dieta de
detritos e partículas em suspensão, há uma redução da lanterna e um intestino mais curto
também.
Em quase todos os equinóides um tubo estreito, um sifão ciliado liga o esôfago ao
intestino e permite a circulação de água no estômago e a concentração de alimento para a
digestão do intestino. Seu revestimento não possui flagelos, e as correntes passam por ele,
o que constitui claramente um caminho pelo qual líquidos podem chegar ao estômago. Além
disso, uma série de apêndices cecais está presente, geralmente no início e no final do
estômago, e intestino.
As características do epitélio refletem especializações em regiões do trato digestivo.
Descrições em várias espécies de equinóides mostraram que o epitélio da faringe é estriado
abundantemente e provido com glândulas mucosas e tipos de células secretoras com
grânulos basófilos (Holland e Nimitz 1964). A secreção dessas células é responsável pela
acidez do estômago e esôfago desses animais. (Stott 1955, Fuji 1961).
O processo digestivo em ouriços do mar é bastante estudado. Experimentos
registraram a presença de enzimas capazes de digerir diferentes tipos de carboidratos
presentes no tipo de alimento ingerido pelo ouriço. Extratos de estômago da espécie S.
purpuratus continham enzimas que digeriram caseína, amido e o carboidrato iridoficina,
presente na alga vermelha Iridophycus, principal alimento da espécie(Lasker & Giese 1954).
Em espécies que se alimentam de diatomáceas e outros microorganimos, extratos do
estômago demonstraram a atividade de lípases como enzima digestiva característica (Giese
1961).
Entre os ofiuróides encontra-se o sistema digestivo mais simples deste filo. A boca
central liga-se ao estômago, uma cavidade em forma de saco que preenche todo o espaço
do disco (Fig. 19). A parede do estômago é irregular e dobrada em bolsas radiais e
interradiais situadas entre as bursas genitais (Fedotov, 1926) e contem células secretoras
(Hamann 1889, Anderson 1960). Estes animais não possuem intestino ou ânus, sendo a
boca a única abertura externa.

Figura 19 – Vista aboral do disco de um ofiuróide contendo as estruturas

internas e o estômago em forma de saco (Hickman e col., 2001).
Os hábitos alimentares das espécies de ofiuróides são muito diversos. A espécie

Ophiocomina nigra se alimenta de detritos presos no muco e passando-os para a boca
através dos pés ambulacrais. A mesma espécie, assim como outros ofiuróides, pode habitar
algas, se alimentando de animais mortos, ou ingerir vermes vivos, moluscos e pólipos
(Vevers, 1956).
Ofiuróides também possuem uma orientação positiva em relação às correntes. Estes
animais podem prolongar seus pés ambulacrais para a retirada de alimento em suspensão
usando suas superfícies cobertas de muco como uma armadilha. Há também ofiuróides que
não reagem aos movimentos das correntes de água, e se alimentam a partir de detritos
depositados sobre a superfície do substrato. Estas espécies utilizam também as pontas de
seus pés ambulacrais pegajosos para apanhar as partículas, que são passados de um pé
ambulacral para outro até a boca (Buchanan, 1964).
Um dos primeiros trabalhos realizado em 1918 por Wintzell identificou a existência de
enzimas na espécie Ophiura texturata. Enzimas como uma protease com forte atuação em
uma ampla faixa de pH, uma amilase e, também uma lípase.
Trabalhos posteriores identificaram enzimas em diversas espécies. Ensaios em
Amphipholis gracilima mostraram que a espécie possui enzimas solúveis e de membrana
capazes de hidrolizar o polissacarídeo laminarina (comum em algas pardas e diatomáceas)
e alginato (também produzido por algas). A existência de certas carboidrases no estomago
pode indicar que estes animais bênticos comedores de depósitos tem como principal
recurso alimentar, organismos presentes no plâncton (Hyman 1955).
Estrelas do mar assim como os ofiuróides possuem braços com pés ambulacrais.
Alimentam-se de uma variedade de espécies de moluscos, crustáceos e outros

invertebrados. Em algumas áreas podem desempenhar um papel ecológico importante

como um carnívoro de topo na cadeia ecológica.
O trato digestivo das estrelas-do-mar passa diretamente pelo eixo oral-aboral da
boca ao ânus no curto eixo vertical do corpo, sendo dividido em sucessivas regiões
especializadas, denominadas estômago cardíaco, estômago pilórico e intestino (Fig. 20)
(Anderson, 1960). Não possuem aparato mastigador específico, tais como dentes ou placas
ósseas, sendo a boca circundada apenas por uma membrana peristomial espessa. No início
do processo, proteases e agentes emulsificantes são secretados no estômago cardíaco para
auxiliar na desintegração do alimento. O alimento parcialmente digerido é então levado aos
cecos pilóricos, que se estendem ao longo dos braços e que contém proteases adicionais,
amilases e lipases que atuam em meio mais ácido que a água do mar (Boolotian 1966).
Completada a digestão, os restos são liberados por um ânus localizado na região aboral.
Uma característica particular associada aos hábitos alimentares de algumas estrelas-do-mar
é a alimentação extraoral. Nela, o estômago é evertido pela boca e as fases iniciais da
digestão ocorrem fora do corpo.
Figura 20: Anatomia interna de estrela-do-mar (Hickman e col., 2001).
Estrelas do mar usam seus braços para conseguir alimento. A parte inferior, ou a
superfície ventral de cada braço contém inúmeros pequenos pés ambulacrais localizados
em um sulco e com poder adesivo. Quando o disco de sucção do pé ambulacral entra em
contato com a superfície, ele adere a essa superfície. Músculos auxiliam a captura puxando
o alimento até próximo a boca.
Estrelas-do-mar consomem uma ampla variedade de alimentos, mas mostram
preferências particulares. Muitas são carnívoras e se alimentam de moluscos, crustáceos,
poliquetas, equinodermos, outros invertebrados, e, por vezes, pequenos peixes. Alguns

asteróides alimentam-se exclusivamente de moluscos (Fig. 21). Quando se alimenta de um

bivalve, a estrela do mar envolve a concha do animal, encostando seus pés ambulacrais
cobrindo as válvulas. Depois exerce uma tração constante, que pode chegar até a 1,3 kg,
usando seus pés para abrir a concha. Para a maioria das espécies esta força pode ser
aplicada por aproximadamente meia hora, até que os músculos adutores do bivalve entrem
em fadiga e relaxem. As inserções dos pés ambulacrais da estrela então auxiliam a eversão
do estômago sobre o espaço entre as válvulas. Após a alimentação, a estrela do mar retrai
seu estômago para dentro do disco por contração dos músculos do estômago e o
relaxamento dos músculos da parede do corpo (Boolotian, 1966; Hickman, 2001; Hyman,
1955).
Figura 21: Estrela-do-mar Orthasterias koehleri se alimentando de um molusco. (Hickman et al 2000).
A espongivoria também foi observada em estrelas, encontradas com o estômago

parcialmente evertido sobre esponjas, sendo visíveis danos teciduais (Ferguson, 1967). Por
everterem o estômago, estrelas podem ser capazes de digerir o material fora do corpo,
deixando para trás partes maiores do esqueleto (Dayton e col., 1974, Wulff 1995).
No entanto, não está claro se há algum mecanismo seletivo que permita ao
organismo ingerir apenas a fração nutritiva, excluindo elementos esqueléticos que são
necessariamente pequenos, da ordem de algumas dezenas de micra. E, se estes são
ingeridos, quais seriam os meios utilizados para dispor dessas partículas em seu trato
digestivo e na excreção.

Sistema Imune de Invertebrados marinhos:

mecanismos, funções e similaridades
Patrícia Lacouth
[email protected]
Laboratório de Biologia celular de invertebrados marinhos
Histórico
Em dezembro de 1882 um zoológo russo chamado Élie Metchnikoff, durante um
passeio pela praia encontrou uma larva de uma estrela-do-mar comum na região. Espetou o
espinho de uma roseira na larva e depois de 24 horas observou que havia diminutas células
cobrindo o espinho, tentando encapsulá-
lo. Metchnikoff imediatamente reconheceu
a importância desta observação – as
células estavam tentando defender a larva
ingerindo o invasor, e deu a este processo
o nome de fagocitose.
O fenômeno da fagocitose já era
conhecido quando certas células humanas
especializadas encontravam e englobavam
bactérias ou leveduras. É um mecanismo
fundamental através do qual diferentes
representantes do reino animal se
defendem contra invasores.
Com esta perspicaz descoberta, Élie Metchnikoff criou a disciplina “Imunologia Celular”. Foi
também por este trabalho pioneiro que ele dividiu o prêmio Nobel de Medicina com Paul
Ehrlich, que propôs a importância de outro componente fundamental do sistema imune,
conhecido como imunidade humoral.
Tão impressionante como a descoberta deste zoólogo russo é o seu objeto experimental, a
estrela-do-mar. Trata-se de um grupo que sofreu poucas adaptações desde o seu
surgimento a mais de 600 milhões de anos atrás. Este fenômeno que ele observou não
deveria ser diferente do mesmo fenômeno a dez milhões de anos nos oceanos, antes do
surgimento dos vertebrados. Metchnikoff era ciente disto e seus estudos eventualmente
mostrariam que o sistema de defesa, contra elementos invasores, de todos os animais
modernos tem suas origens em organismos que povoaram o planeta desde o inicio da vida
na terra.
Como a imunidade funciona

Para entender a evolução do sistema imune ao longo de milhões de anos é

necessário entender como ele funciona. A primeira função básica de qualquer sistema
imune é a distinção de células, tecidos e órgãos que são legitimamente parte do corpo do
organismo de outros corpos estranhos que podem estar presentes.
O segundo requisito é a capacidade de eliminar estes corpos estranhos que são
freqüentemente prejudiciais, como bactérias ou vírus. Estes mecanismos evoluíram
juntamente com a complexidade dos organismos. Mamíferos, como o homem, possuem os
mais sofisticados mecanismos de reconhecimento e eliminação de invasores. No entanto,
invertebrados representam mais de 90% de todas as espécies de animais e isso
freqüentemente leva a conclusão que as “primitivas” defesas contra elementos estranhos
destes animais são altamente eficazes e permitiram a perpetuação destes animais no
planeta.
Se considerarmos o que acontece quando furamos o dedo com um espinho, após a
lesão dentro de alguns minutos o sistema imune começa a funcionar para eliminar
microorganismos indesejáveis introduzidos através da ferida. Para isso glóbulos brancos
fagocíticos chamados macrófagos engolfam e destroem os organismos invasores e liberam
proteínas que sinalizam a outras células que podem ser necessárias. Esta rápida resposta
celular é chamada de Imunidade Inata, as células que executam esta resposta já estavam
ativas no corpo antes da invasão de organismos indesejados. Todos os animais possuem
um mecanismo de defesa deste tipo, o qual se acredita ser a mais antiga forma de defesa
imune.
A imunidade inata usualmente é suficiente para combater organismos invasores.
Quando não, existe um outro recurso, presente nos vertebrados, para combater a invasão
chamado imunidade adquirida. Os principais componentes desse mecanismo são os
linfócitos, células sanguíneas que circulam inativadas pelo plasma sanguíneo e glândulas
linfáticas. São ativados e se multiplicam ao se encontrarem com moléculas específicas
chamadas antígenos, que estão associadas ao organismo invasor. Estas células liberam
anticorpos, proteínas de defesa que se ligam aos antígenos e auxiliam na eliminação do
corpo estranho.
A questão central é: Quantas dessas características, ou similares, são
compartilhadas e aparecem em organismos mais antigos? Algumas destas características
de fato são observadas em quase todos os organismos, e um exemplo é a fagocitose.
Mesmo através do tempo, algumas destas características permanecem basicamente
idênticas de um organismo para outro. Algumas características são exclusivas de
vertebrados, mas carregam semelhanças com o sistema de defesa de invertebrados. Essas
similaridades são importantes por sugerirem que mecanismos de defesa de invertebrados
foram precursores dos mesmos em vertebrados.

Um dos aspectos fundamentais da imunidade é o reconhecimento do que é próprio e

não próprio e isso também é visto desde o início da vida no planeta. Alguns protozoários
que vivem em colônias com mais de centenas de indivíduos precisam ser aptos a
reconhecer uns aos outros. É difícil imaginar como a vida em uma colônia ou a reprodução
pode ocorrer sem a habilidade de reconhecimento entre os organismos. Até mesmo as
esponjas, que são vistas como os metazoários mais simples e antigos, são capazes de se
distinguir de outras espécies.
O funcionamento do sistema imune em todos os animais se dá através de
mecanismos que dependem de células específicas, chamada de resposta imune celular, e
da presença de moléculas responsáveis pelo reconhecimento e/ou desencadeamento de
vias de respostas e sinais, chamada de resposta imune humoral.
Invertebrados não possuem linfócitos nem um sistema imune baseado em anticorpos
e fatores humorais. Contudo, têm mecanismos que seriam precursores desses processos
em vertebrados. Possuem moléculas que parecem funcionar como os anticorpos, e podem
ser seus precursores. Essas são um grupo de proteínas chamadas lectinas. Elas se ligam a
açúcares nas células fazendo com que elas se aglutinem. Lectinas provavelmente surgiram
bem cedo, pois são presentes em plantas, bactérias, invertebrados e vertebrados.
A evolução parece ter conservado não apenas muitos aspectos do sistema de
defesas contra organismos invasores, encontrado em invertebrados, mas também muitos
dos sinais que controlam este mecanismo. Algumas moléculas de invertebrados se
assemelham às citocinas de vertebrados. Estas são proteínas liberadas por várias células
do sistema imune que podem estimular ou inibir outras células e respostas do sistema de
defesa. Citocinas incluem as interleucinas e os TNF (fator de necrose tumoral) que se tratam
de moléculas reguladoras de vários aspectos do sistema imune de vertebrados.
Resposta Imune Celular
Fagocitose, formação de nódulos e cápsulas

As reações de defesa mediada por células (hemócitos) incluem a fagocitose,
encapsulamento e formação de nódulos (Wickins e O'c Lee, 2002). A fagocitose é um
processo onde o agente invasor é inicialmente reconhecido, englobado por pseudópodes,
interiorizado e destruído intracelularmente através de vários mecanismos degradativos e
microbicidas.
Como nos fagócitos dos vertebrados, os hemócitos de invertebrados contêm
estruturas semelhantes aos lisossomos. Estes se fundem com os vacúolos fagocíticos
denominados fagossomo, formando o fagolisossomo e promovendo a degradação das

partículas endocitadas A eliminação destas partículas envolve a liberação de enzimas

degradativas dentro do fagolisossomo e a geração de espécies ativas de oxigênio (EAO)
(Barracco, 2004).
A formação de nódulos ocorre quando a cavidade corpórea do organismo é invadida
por uma quantidade maciça de microorganismos. Nesse processo, os invasores são
aprisionados por várias camadas de hemócitos junto ao local da infecção, evitando dessa
forma sua disseminação dentro do hospedeiro. Nas regiões mais centrais dos nódulos,
observam-se geralmente sinais de fagocitose e de necrose celular (Rendón e Balcázar,
2003).
O encapsulamento ocorre quando a partícula invasora é demasiadamente grande
para ser fagocitada, assim os hemócitos se dispõem em várias camadas, circundando o
material estranho, com a função de imobilizá-lo e segregá-lo do hospedeiro. O
encapsulamento ocorre geralmente contra helmintos, hifas de fungos ou determinadas
formas de protozoários.
Estas estruturas, cápsulas e nódulos, tornam-se bastante melanizadas em alguns
invertebrados, como os crustáceos (Fig. 1), devido à atividade da fenoloxidase, sendo os
patógenos geralmente destruídos pela liberação de moléculas citotóxicas ou líticas
(Barracco, 2004).
Figura1- Reações celulares de defesa em crustáceos (H - I) H: encapsulamento in vitro do nematóide

Panagrellus redivirus por hemócitos de M. rosenbergii; I: encapsulamento in vitro de hifas do fungo
Ganoderma sp por hemócitos de F. paulensis, com forte reação de melanização.(Modificado de
Barracco, 2004).
Resposta Imune Humoral

Os fatores humorais compreendem moléculas envolvidas no reconhecimento,
aglutinação, melanização e coagulação, que agem na defesa imune sem o envolvimento
direto de células.. Entre as proteínas de reconhecimento estão as lectinas, os peptídeos
antimicrobianos, as proteínas de ligação de β-1-3-glucana e de lipopolissacarídeo (Bachère,
2000).

Moléculas de reconhecimento
Na presença de compostos microbianos as proteínas de reconhecimento presentes
no plasma têm a função de ampliar a resposta imune celular (Rendón e Balcázar, 2003).
A proteína de ligação de β-1-3-glucana (βGBP) reconhece a β-glucanas, presentes
na parede celular de leveduras, induzindo a degranulação dos hemócitos e a ativação do
sistema proPO (Vargas-Albores, 2000; Rendón e Balcázar, 2003).
A proteína de ligação de lipopolissacarídeo (LPSBP) reconhece lipopolissacarídeos
(LPS) presentes na parede celular de bactérias gram-negativas. Esta proteína funciona
como uma aglutinina, pois se une às células fagocíticas e estimula a fagocitose (Rendón E
Balcázar, 2003).
Lectinas
Um dos mecanismos de defesa da imunidade humoral é mediada pelas lectinas e/ou
aglutininas. Estas são proteínas ou glicoproteínas, dissolvidas no plasma, que se ligam a
carboidratos específicos expressos na superfície de diferentes células, promovendo sua
aglutinação. Além disso, podem atuar como opsoninas facilitando a fagocitose, promovem
adesão celular e formação de nódulos (Cominetti et al., 2002).
Devido a sua propriedade de reconhecer o não próprio, aglutinar células e da
possibilidade de atuar como opsonina, as lectinas foram inicialmente consideradas análogas
funcionais dos anticorpos. No entanto, sabe-se que as lectinas são estruturais e
funcionalmente diferentes das imunoglobulinas (Marques e Barracco, 2000).
Sistema profenoloxidase (proPO) e formação de melanina

Os mecanismos de defesa em muitos invertebrados são freqüentemente
acompanhados pelo processo de melanização. Em artrópodes, a síntese de melanina está
envolvida no processo de cicatrização de feridas da cutícula e nos mecanismos de defesa
celular tais como: fagocitose, formação de nódulos e cápsulas que atuam combatendo os
patógenos presentes na hemocele (Söderhäll, 1992).
A enzima envolvida na formação da melanina é a fenoloxidase (PO), que está
presente na hemolinfa, sob a forma de uma pró-enzima inativa, a profenoloxidase (proPO).
A ativação da PO é mediada por uma serinoprotease, denominada enzima ativadora de
profenoloxidase (ppA). Em crustáceos, tanto o proPO como a ppA inativa estão estocadas
em grânulos secretórios dos hemócitos granulares e semi-granulares, de onde eles são
secretados por exocitose (Johansson e Söderhäll, 1989; Rendón e Balcázar, 2003).
O sistema de ativação da profenoloxidase inicia-se a partir do reconhecimento de
padrões moleculares nos microorganismos, tais como β-1-3-glucana de fungos,

peptideoglicanos de bactérias Gram-positivas e de lipopolissacarídeos (LPS) de bactérias

Gram-negativas. A enzima PO ativa catalisa a oxidação de compostos fenólicos e quinonas
que se polimerizam formando depósitos insolúveis de melanina, processo este chamado de
melanização. A melanina sempre se deposita em torno de microrganismos encapsulados,
em nódulos de hemócitos e em sítios de infecção fúngica na cutícula (Lucien-Brun, 2006).
A ativação da proPO deve ser altamente controlada, para evitar a melanização em
locais que não estejam infectados. O papel da melanina nas respostas imunológicas, ainda
não está claramente elucidado. No entanto, sabe-se que a síntese deste componente e de
seus compostos intermediários gera moléculas tóxicas, como as quinonas, e vários radicais
livres das EAO, que são altamente reativos e podem funcionar como potentes destruidores
de patógenos (Maggioni, 2004).
O sistema proPO pode ser ativado na ausência de polissacarídeos microbianos, isso
ocorre se a concentração do íon cálcio (Ca2+) diminuir na hemocele. Essa rota de ativação
do sistema proPO provavelmente ocorre durante as respostas aos ferimento e na
coagulação (Söderhäll, 1992). Outro fato interessante do sistema proPO está na sua
similaridade com a via alternativa do sistema complemento dos mamíferos. Ambos os
sistemas são ativados em cascata, sendo acionados por endotoxinas e β-1,3-glucana
(Ratcliffe, 1985; Rendón e Balcázar, 2003).
Peptídeos antimicrobianos (PAM)

Um dos componentes de defesa, encontrados em invertebrados, que vem
despertando interesse são os peptídeos antimicrobianos (PAM). Os PAM podem apresentar
uma atividade microbicida rápida e potente contra bactérias gram-positivas, fungos,
leveduras e, em alguns casos, até contra vírus envelopados e protozoários. São moléculas
catiônicas de baixo peso molecular que funcionam como antibióticos naturais, promovendo a
inibição do crescimento, ou o aumento da permeabilidade da membrana celular dos
microrganismos levando a lise (Hoffmann e col., 1999).
Sistema Imune e Invertebrados Marinhos

Foi a partir de sistemas modelos com invertebrados que se definiu que o sistema
imune inato é dividido em três características que garantem a efetividade do sistema imune:
(1) os organismos são capazes de distinguir o que é próprio deles e o que não é, (2) armam
uma resposta defensiva que mata ou inativa o componente invasor e (3) são capazes de
reconhecer e eliminar suas próprias células que estejam danificadas. Estes requisitos
dependem de três mecanismos essenciais do sistema imune: a fagocitose, a ativação de

respostas humorais levando a opsonização, melanização e coagulação, e a produção de

compostos antimicrobianos.
Na seqüência vamos tratar da imunidade entre os invertebrados marinhos, incluindo
filos mais basais, como Porifera e Cnidaria, com enfoque nos filos que são ecologicamente,
ambientalmente e economicamente relevantes que não são organismos modelos e tem
sofrido substanciais perdas devido a surtos de doenças.
Os elementos do sistema imune inato de invertebrados marinhos mais conhecidos
são os seguintes: (a) respostas de reconhecimento tal como lectinas, proteínas de
reconhecimento de padrões, fatores de adesão celular; (b) respostas humorais livres de
células caracterizadas por peptídeos antibióticos; (c) respostas celulares, tais como
barreiras físico-quimicas (melanina), fagocitose, vesículas granuladas, enzimas e proteínas
adesivas; (d) vias de comunicação e integração das funções imunes incluindo o sistema
complemento, citocinas; e (e) evidências de memória e especificidade imune primitivas.
Porifera
No início do século XX pesquisadores observaram a notável capacidade das células
de esponjas de reagregarem após terem sido dissociadas. Este comportamento
extremamente complexo envolve inúmeras moléculas e vias de sinalização. Adesão em
esponjas envolve moléculas como galectina, integrina, fibronectina e colágeno (Muller e col.,
1999). Em algumas espécies de Demosponjas estudadas, revelou-se que íons cálcio atuam
como mensageiros intracelulares na resposta ao estimulo de acoplamento durante a
agregação de células. Sabendo desta capacidade de auto-reconhecimento presente nesses
organismos, rejeições alogênicas possuem componentes celulares envolvidos. Interações
entre esponjas de diferentes espécies ativam pinacócitos e várias células do mesohilo, que
muitas vezes possuem metabólitos secundários que participam do processo de rejeição.
Entre as células que compõe as esponjas são encontrados os Arqueócitos, células
amebóides capazes de se diferenciar em qualquer tipo celular presente nas esponjas. São
células fagocíticas que desempenham funções como digestão, transporte de alimento e
defesa. Atuando como macrófagos primitivos, não são seletivas no que fagocitam, portanto
não possuem especificidade imune. Todavia, a digestão intracelular é um poderoso
componente do sistema imune de esponjas, por exemplo, Lisozimas são secretadas por
células do mesohilo quando essas células são expostas a peptideoglicanos presentes na
parede celular de bactérias gram-positivas
Esponjas também aparentam apresentar uma memória imune primitiva, quando
expostas várias vezes a um enxerto de espécie diferente o tempo de reação é diminuído. De
fato, embora as esponjas não possuam um sistema circulatório, a memória imunológica se
espalha rapidamente através do corpo da esponja e permanece por várias semanas. Mas na

Demosponja Geodia cydonium, rejeições alogênicas envolvem a produção de uma enzima a

qual inicia a via de formação da melanina (Muller e col, 1999)
Cnidaria
Cnidários possuem células mais especializadas do que as encontradas em esponjas,
também possuem tecidos organizados e especializados, incluindo o sistema nervoso. São
invertebrados sésseis, coloniais. Possuem uma grande capacidade de distinguir o que é
próprio e o que não é próprio como espécies competidoras e microorganismos (Hidaka,
1985).
Do ponto de vista de defesas, pouco se sabe sobre reações imunes nestes
organismos. Mas como primeira linha de defesa contra parasitas, predadores é a presença
de muco na epiderme e de cnidócitos ou nematocistos, que também são funcionais na
captura de presas.
Assim como as esponjas, cnidários possuem células fagocíticas móveis, chamadas
amebócitos. Gorgônias além de realizarem a fagocitose, amebócitos ajudam na cicatrização
e reorganização dos tecidos. E também reagem a infecções por fungos através do processo
de melanização (uma barreira física formada de quinonas polimerizadas) localizada ao
redor da lesão causada pelo fungo assim como a formação de nódulos (Mullen e col., 2004).
A imunidade humoral nestes organismos é composta apenas pelas lectinas.
Molusca
O sistema imune dos moluscos, assim como dos outros invertebrados, consiste
apenas da imunidade inata. Esta é considerada freqüentemente como uma forma de
imunidade mais primitiva do que as repostas adaptativas vistas em vertebrados. Mas na
verdade é surpreendentemente uma complexa e eficiente forma de proteção contra muitos
parasitas encontrada pelos moluscos. O sucesso adaptativo dos moluscos e a habilidade de
colonizar uma grande quantidade de habitats claramente mostram a eficiência destes
animais de combater infecções e invasões de parasitas.
Barreiras externas, como epitélio, muco e conchas, constituem a primeira linha de
defesa contra patógenos e parasitas. Quando essas barreiras são violadas, a segunda linha
de defesa interna envolve a ação de componentes celulares e humorais presentes na
hemolinfa destes animais.
Os componentes humorais dos moluscos contêm enzimas lisossomais, lectinas
incluindo aglutininas, proteínas relacionadas ao fibrinogênio, peptídeos antimicrobianos que
ajudam no reconhecimento de patógenos e parasitas marcando-os para destruição via
opsonização e também são responsáveis pelo alto grau de especificidade mostrado pelo
sistema imune inato de moluscos (Vasta e Ahmed, 2008).

Enquanto a imunidade humoral é muito importante para a defesa do hospedeiro, é

incontestável que os componentes celulares da hemolinfa, hemócitos (Fig. 2),
desempenham um papel central na resposta imune inata dos moluscos.
Figura 2 - Micrografia de Transmissão de hemócitos (H) presentes nas brânquias (A) e

hepatopâncreas (B) de ostras. (Modificado de Sokolova 2009).
Hemócitos são os principais componentes efetores do sistema imune inatos de moluscos

e são responsáveis pela fagocitose de parasitas, patógenos e partículas estranhas. Todos
esses mecanismos necessitam de um complexo processo que inclui reconhecimento,
adesão, ingestão, destruição ou encapsulamento e eliminação dos corpos estranhos.
Hemócitos também reagem para a eliminação de parasitas e patógenos através de uma
reação de stress oxidativo (uma rápida geração de espécies reativas de oxigênio tóxico -
ROS) por uma enzima ligada a membrana, a NADH-oxidase. ROS é posteriormente
convertido pela mieloperoxidase, presente nos hemócitos, em ácido hipoclórico (HOCl) que
possui fortes propriedades bactericidas e antivirais (Tiscar e Mosca, 2004)
Nos moluscos existem dois tipos principais de hemócitos: os hialinócitos (pequenas
células com o citoplasma preenchido por poucos ou nenhum grânulos) e os granulócitos
(grande células fagocíticas contendo um grande número de grânulos no citoplasma) (Tiscar
e Mosca, 2004).
Granulócitos de moluscos se assemelham fortemente a monócitos e macrófagos de
vertebrados tanto estruturalmente como funcionalmente e compartilham com os macrófagos
propriedades como fagocitose, stress oxidativo induzido pelo patógeno, produção e
liberação de óxido nítrico e enzimas lisossomais (Canesi e col., 2002)
Arthropoda (Crustacea)
O filo Arthropoda compreende animais celomados com uma grande diversidade de
forma, tamanho e hábitos de vida. Crustáceos, incluindo caranguejos, lagostas e camarões,

são os mais abundantes e ecologicamente relevantes no contexto de imunidade inata dos

artrópodes marinhos. O sistema imune inato dos crustáceos é mediado por reações
celulares e humorais que estão intimamente relacionados ao seu sangue ou hemolinfa.
Célula Hialina
Fagocitose
Célula Semi-granular
Nodulação/Encapsulação
Célula granular
Melanização
Figura 3 - As funções dos hemócitos de artrópodes. Hemócitos hialinos funcionam como células
fagocíticas. Hemócitos semi-granulares são responsáveis pela formação de nódulos e
encapsulamento. Hemócitos granulares estocam os componentes que desencadeiam a melanização
(Modificado de Rendón e Balcázar, 2003).
Como primeira linha de defesa, os crustáceos contam com um exoesqueleto de

quitina, que além de servir como estrutura de suporte, funciona como barreira física e
mecânica protetora contra invasores microbiológicos, e também química, pois contém
secreções mucosas que inibem ataques enzimáticos (Lee e Söderhäll, 2002). Contudo,

quando ocorre uma lesão na carapaça ou durante o processo de muda, microrganismos

oportunistas ou patogênicos podem invadir o tecido e rapidamente estabelecer um processo
infeccioso, uma vez que o sistema circulatório dos crustáceos é aberto. Em seguida,
moléculas presentes na hemolinfa reconhecem padrões moleculares conservados nos
patógenos, acionando mecanismos de defesa celulares e humorais (Theopold e col., 2004).
O primeiro processo imune consiste no reconhecimento de microorganismos
invasores, mediado pelos hemócitos e pelas proteínas presentes no plasma. Os hemócitos
têm papel central na iniciação e manutenção da resposta imune celular dos crustáceos,
cujas funções envolvem o reconhecimento do não próprio, a fagocitose, formação de
nódulos, encapsulamento, melanização e destruição de patógenos pela produção e/ou
liberação de moléculas tóxicas e microbicidas (Fig. 3) (Rendón e Balcázar, 2003).
Além dessas funções, hemócitos participam do processo de cicatrização de feridas,
iniciam o processo de coagulação, transportam e secretam na hemolinfa o sistema
profenoloxidase (proPO) e as proteínas α2 – macroglobulina, aglutininas e peptídeos
antimicrobianos (Rendón e Balcázar, 2003).
Echinodermata
Este filo é composto por animais celomados deuterostômios que possuem um
sistema de canais preenchidos por fluido e celomócitos.
As respostas imunológicas que ocorrem em equinodermos são o reconhecimento de
material não próprio que tenha invadido o corpo, a expulsão deste material ou tornando-o
inofensivo e a cicatrização. Esses mecanismos chave de defesa são mediados por
respostas celulares e humorais.
As respostas celulares são efetuadas por vários tipos celulares, chamados
celomócito, que circulam pelo fluido celômico e que constituem o sistema imune celular, e
pelas respostas humorais, as quais dependem de moléculas presentes no fluido celômico.
Os celomócito de echinodermos produzem uma série de fatores humorais, incluindo
lectinas, aglutininas, lisinas e outros (Gross e col., 1999).
Infecções na cavidade corpórea dos equinodermos por microorganismos ou
parasitas, ou o transplante de enxertos induzem um processo que envolve moléculas
humorais que reconhecem e atacam o corpo estranho ou estimulam a proliferação dos
celomócitos.
Nos equinodermos, celomócitos podem ser definidos como as células efetoras do
sistema imune, são a primeira linha de defesa contra infecções e injúrias. Encontrados no
fluido celômico e nos sistemas hemal e aquafaringeal e a principal fonte dessas células é o
órgão axial, o qual pode representar um ancestral primário da glândula linfóide (Leclerc,
1992).

Pelo menos seis tipos, morfológicamente distintos, de celomócitos são encontrados

no fluido celômico dos equinodermos: células progenitoras, amebócitos fagocíticos,
esferulócitos coloridos e sem cor, células vibráteis, hemócitos e células cristal (Bolootian,
1959). Nem todos os seis tipos são encontrados em todas espécies de equinodermos.
Desempenham uma série de funções, incluindo o reconhecimento do que é próprio e não
próprio, fagocitose, citotoxicidade, agregação celular, encapsulamento e reações de defesas
humorais.
Amebócitos possuem um importante papel no inicio da cicatrização de feridas tanto
internas como externas. Suas ações incluem a acumulação, fagocitose de debris celulares e
a formação de uma camada de células na região da injúria. E eles exibem duas fases
morfologicamente distintas: a forma petalóide, a qual fagocita ativamente, e a forma
filopodial, a qual parece estar envolvida na coagulação. Após uma injúria, os amebócitos
petalóides migram para a região da injúria, mudam o seu formato para filopodial e formam
um coágulo juntamente com outros celomócitos (Smith, 1981). Amebócitos também são
responsáveis pela fagocitose de partículas estranhas, neles estão constitutivamente
presentes enzimas lisossomais que ajudam nesse processo. Juntamente com os
esferulócitos, amebócitos fagocíticos parecem estar envolvidos na coagulação de células e
na formação de cápsulas em volta de parasitas. Isto é possível já que esferulócitos secretam
substâncias bactericidas, incluindo lípases e peroxidases.
Infecções na cavidade corpórea desses animais por microorganismos ou parasitas,
ou o transplante de enxertos ou células, induz um processo que envolve moléculas
humorais que reconhecem e atacam o corpo estranho ou estimulam a proliferação de
celomócitos (Glynsky, 2000).
Um sistema complemento simples foi identificado em uma espécie de ouriço-do-mar
que é homólogo a via de vertebrados onde celomócitos secretam proteínas complemento
análogas ao componente C3 do sistema complemento de vertebrados (Al-Sharif e col.,
1998). Na estrela-do-mar Asterias rubens também foram identificadas moléculas com
funções semelhantes a Interleucina e receptores para estas de vertebrados
É evidente que os equinodermos fornecem muitos modelos interessantes para o
estudo da evolução células efetoras e suas funções. Alguns pontos precisam ser estudados
mais detalhadamente como a comunicação célula-célula na resposta imune, inter-relações
da imunidade celular e humoral, filogenia, e o papel das citocinas na regulação da resposta
imune.O fato de que o sistema imune dos invertebrados é sensível e responde a ínfima
quantidade de moléculas ambientais coloca em questão como os contaminantes presentes
no ambiente podem modificar a resposta imune dos equinodermos. Além disso, pouco é
conhecido sobre a ação de xenobióticos sobre o sistema imunitário. (Glynsky, 2000)

Defesa Imune em Larvas de Invertebrados Marinhos

A imunidade em invertebrados tem sido extensivamente estudada em animais
adultos da maioria dos filos, no entanto, pouco se sabe sobre os mecanismos de defesa em
fases larvais. Sabe-se que células fagocíticas móveis estão presentes em larvas véliger de
bivalves, que larvas pluteus de equinodermos possuem substâncias antibióticas. Atividades
citotóxicas e antimicrobianas também foram encontradas em ovos de moluscos
opistobrânquios, mas não foram descritos para as larvas. Defesas químicas, as quais
podem possuem capacidades antimicrobianas e citotóxicas além do propósito antipredatório
também foram vistas em larvas de zooantideos, equinodermos e tunicados. Há evidências
de que células de larvas de mexilhões possuem algumas enzimas que se assemelham a
compostos de hemócitos de adultos capazes de realizar fagocitose.
Uma ampla gama de mecanismos de defesa tem sido estudada em filos de
invertebrados (Ratcliffe e col., 1985; Smith, 1991). Isso inclui processos como fagocitose ou
encapsulamento, e a produção de componentes solúveis os quais podem ser
antimicrobianos ou citotóxicos. As células “sanguíneas” de invertebrados são as primeiras
células efetoras na defesa dos hospedeiros. No entanto, pouco se sabe sobre as origens
dessas células em alguns grupos de invertebrados, ou da participação delas na defesa
imune nos estágios iniciais do ciclo de vida desses organismos. Assim como se esses
organismos são capazes, nos primeiros estágio do ciclo de vida, de produzir substâncias
que participem do sistema imune humoral. (Dyrynda e col., 1995)
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Unidade 8
Bruno Madio
Laboratório de Produtos Naturais Marinhos
[email protected]
Toxinologia é a ciência que estuda os venenos e peçonhas. A principal

diferença entre venenos e peçonhas esta em sua forma de atingir a presa.
Organismos venenosos são aqueles que acumulam toxinas em diversos tecidos.
Sua ação tóxica se dá, normalmente, pela absorção através do contato ou pela
ingestão de um organismo venenoso. Já animais peçonhentos possuem um local de
armazenamento dos compostos e apresentam uma estrutura especializada para a
inoculação (quelíceras, nematocistos, ferrões, presas, aguilhão, pedipalpos, entre
outros).
Toxinas naturais podem ser encontradas em praticamente todos os grupos de
organismos como mamíferos, répteis, artrópodes, cnidários, fungos, bactérias.
Alguns organismos parecem possuir apenas um único composto tóxico, enquanto
outros produzem um coquetel de compostos com diferentes alvos e efeitos.
A aquisição de alimento, defesa e redução da competição são as funções
mais comuns das toxinas e peçonhas. As especificidades dessas funções e alvos
determinaram e determinam a forma de seleção que modificam esses compostos e,
por sua vez, os detalhes de suas conseqüências e gravidade.
As toxinas naturais demonstram uma enorme diversidade de funções
farmacológicas e ecológicas, uma vez que podem afetar o sistema hemostático,
lesionar tecidos, causar quadros inflamatórios e dolorosos, interromper processos
digestivos e até agir na ligação e/ou bloqueio com um único tipo de canal iônico
voltagem-dependente em um tecido específico. Sendo assim, esses compostos vêm
sendo utilizados na fisiologia para melhor compreensão de diversos processos
envolvidos na regulação da homeostase.
Capítulo 36 Co-evolução entre peçonhas e seus alvos pág. 473

Bruno Madio
Revisado pelo Dr André Junqueira Zaharenko
Capítulo 37 Produtos naturais e sua função como defesa química pág. 483
Suélen Felix
Revisado pelo Dr. Márcio Reis Custódio
Capítulo 38 Invertebrados marinhos: toxinas e seus mecanismos de ação pág. 493

Bruno Cesar Ribeiro Ramos
Revisado pelo Dr André Junqueira Zaharenko
Capítulo 39 Lepidópteros: aspectos biológicos e toxinológicos pág. 501

Priscila Aparecida Ozzetti
Capítulo 40 Raias – biologia e envenenamento pág. 511

Louise Faggionato Kimura
Revisado pelo Dr Emerson José Venâncio
Capítulo 41 Serpentes peçonhentas do Brasil: biologia, fisiologia e epidemiologia

pág. 519
Luana Valente Senise
Revisado pela Dra. Ida Sigueko Sano Martins

Co-evolução entre peçonhas e seus alvos
Bruno Madio
[email protected]
Introdução
A biodiversidade de animais e plantas também resulta em uma grande diversidade
de peçonhas e venenos naturais. Essas, contêm toxinas altamente ativas que representam
uma grande variedade de compostos químicos que variam de pequenas moléculas, como as
aminas até grandes e complexas proteínas. Estas toxinas podem variar consideravelmente
em estrutura e função entre indivíduos, espécies, gêneros ou famílias (Brodie, 1991).
Os venenos naturais e peçonhas constituem um arsenal químico resultante de um
longo processo de co-evolução de espécies que compartilham um mesmo nicho ecológico.
As pressões de seleção que conduziram a uma modificação em venenos naturais e toxinas
foram fundamentalmente diferentes para outras proteínas, e resultaram em algo com uma
dinâmica evolutiva diferente (Brodie e Brodie, 1999).
Toxinas naturais podem ser encontradas em praticamente todos os grupos de
organismos como mamíferos, répteis, insetos, cnidários, fungos, bactérias. Alguns
organismos parecem possuir apenas um único composto tóxico, enquanto outros produzem
um coquetel de compostos com diferentes alvos e efeitos. Alguns compostos são
encontrados de forma idêntica em até cinco filos diferentes, sendo que esses surgiram em
cada filo independentemente, mostrando uma convergência adaptativa (Fry e col., 2009).
Animais adquirem toxicidade por síntese metabólica de toxinas (metabólitos
secundários), pela expressão de genes de toxinas ou pela captação, armazenamento e
sequestro de toxinas produzidas por outros organismos, ou seja, os micróbios, plantas ou
outros animais. Toxinas, embora contando com um número limitado de estrutura, muitas
vezes exibem uma considerável hipervariabilidade estrutural. O ritmo acelerado da evolução
na estrutura do gene da toxina (introns conservados, mas alta taxa de substituição nos
exons) conduz à diversidade funcional destes peptídeos ou proteínas. As forças seletivas
que podem conduzir a evolução da toxina ainda são desconhecidas. Ser peçonhento ou
venenoso pode ser essencial para a sobrevivência, mas a vantagem da biossíntese de
toxinas também pode ser de menor importância ou perdida durante a evolução.
Função
Toxinas e venenos possuem uma variedade de funções. Os três usos mais comuns
são a aquisição de recurso ou predação, defesa e redução da competição. As

especificidades dessas funções e alvos determinaram e determinam a forma de seleção que

modificam esses compostos e, por sua vez, os detalhes de suas conseqüências e
gravidade. Isso não quer dizer que todos os compostos tóxicos encontrados na natureza
tenham seus efeitos como resultados de modificação adaptativa. Muitas das peçonhas mais
extremas podem ter efeitos acidentais, ou funcionar como exaptações (adaptação biológica
que não evoluiu dirigida principalmente por pressões seletivas relacionadas à sua função
atual) que surgiram para algum outro propósito ou objetivo e, ancidentalmente agem como
toxinas em algum contexto ecológico.
A distinção entre peçonha e veneno natural se faz importante, porque a pressão da
seleção natural “guiou” diretamente a base de sua evolução para funções distintas.
Venenos, normalmente não são mecanismos eficazes para captura de presa, porque neste
caso o composto deve ser ingerido pela presa. Dessa forma, não ocorre um ataque na
vítima para que o composto atue sobre ela. Assim, a pressão de seleção dos venenos são
menos propensas para direcionar a imobilização ou ação digestiva do que aquelas em
peçonhas (Fry, e col., 2009; Mebs, 2001).
Forrageamento
A maioria das peçonhas parecem ter evoluído para atuar como adaptação de
forrageamento, com funções específicas que influenciam nas peculiaridades dos compostos
e sua forma de inoculação. A imobilização da presa pode ser crucial para reduzir o risco de
injúrias para o predador e para velocidade e sucesso de captura da presa. Isto é
especialmente importante para as espécies de forrageamento de presas grandes, ou presas
com defesas significativas. A seleção para imobilização favoreceu peçonhas que agem
rapidamente e influenciam diretamente na mobilidade e coordenação. Por esta razão,
muitas peçonhas possuem um componente neurotóxico que interrompe a transferência de
informação nos nervos ou músculos. Um exemplo notável de convergência funcional são as
peçonhas de serpentes e moluscos do gênero Conus (Oliveira e col., 1990). Essas
evoluíram componentes neurotóxicos, conhecidos como alfa-neurotoxinas, que excitam os
receptores nicotínicos de acetilcolina no músculo esquelético. Esta classe de toxinas inclui
muitos compostos diferentes com diferentes sítios de ligação, mas o efeito geral é o mesmo
- a transferência de informação pós-sináptica é bloqueada, resultando em uma rápida
paralisia. Outros predadores alcançaram o mesmo efeito através do bloqueamento de
potenciais de ação nos nervos, geralmente visando os canais iônicos voltagem-
dependentes.
Mambas, serpentes do gênero Dendroaspis, imobilizam a presa através de
bloqueadores de canais de potássio, denominadas “dendrotoxinas”. Escorpiões, aranhas,
anêmonas do mar, himenópteros e conus produzem diferentes compostos que têm o
mesmo efeito farmacológico, o de bloquear canal de potássio. Convergências similares em

sítios-alvo são encontradas em todo sistema nervoso para outros receptores e canais
iônicos.
Componentes comportamentais do envenenamento também são críticos para
produzir os efeitos necessários. Temos como exemplo uma espécie de vespa parasitóide
que caça baratas através de três ferroadas. A primeira ferroada, voltada para o gânglio
protóraxico, produz paralisia de curta duração, impedindo a barata de se defender. As
ferroadas seguintes tem como alvo o gânglio subesofágico e o cérebro, fazendo com que a
fique em uma prolongada hipocinesia (2-3 semanas). Componentes da peçonha desses
parasitóides normalmente incluem bloqueadores de receptores de glutamato, bem como
bloqueadores de canais iônicos para produzir tanto uma ação rápida quanto paralisia de
longa duração. Este conjunto integrado de comportamentos permite que a peçonha atue
sobre a presa e a vespas leve a barata para uma câmara e coloque um ovo em cima dela,
posteriormente as larvas se alimentarão da presa viva até a pupação.
Defesa
Toxinas com função de defesa abrangem uma série de categorias químicas e
atividades fisiológicas, incluindo neurotoxinas bloqueadoras de canais, alcalóides que
quebram a sinalização neuronal, terpenos e quinonas que “irritam” membrana, inibidores de
protease que impedem a digestão, e uma variedade de compostos que causam uma maior
ou menor injúria ao seu alvo.
Alguns compostos provocam comportamentos específicos em predadores, como os
peptídeos no muco da pele de rãs Xenopus que estimulam um incontrolável bocejo e
abertura da boca, o que permite que os sapos se arrastem para fora da boca de cobras. A
diversidade de compostos e efeitos resultam de um cenário seletivo bastante simples que
direcionou sua evolução - um composto que impede, atrasa ou repele ataques.
As toxinas encontradas em qualquer linhagem particular têm mais a ver com a
história evolutiva de um determinado grupo, ou fontes de toxinas do meio ambiente, do que
com os efeitos específicos que elas produzem. Em geral, a convergência evolutiva é menos
comum entre os compostos de defesa do que entre as peçonhas.
Um dos paradoxos mais intrigantes na evolução dos venenos é porque os
organismos evoluem para ser mortíferos - ao contrário das peçonhas, que têm uma clara
vantagem possuindo efeitos mortíferos. Extrema toxicidade ocorre repetidamente, a partir de
lagartas saturniidae até rãs da família Dendrobatidae. A seleção favorece os indivíduos com
adaptações, e esses devem ser os que evitaram a predação. Matando um único indivíduo
predador não lhes dá uma vantagem sobre aqueles que simplesmente o afastam,
especialmente se a vítima tem que ser manuseada ou comida por um predador para o
veneno ter efeito. Como, então, podemos explicar a evolução da toxicidade mortal? Em
certo sentido, venenos mortais são acidentais - doses pequenas de cogumelos “cicuta
verde” (Amanita phalloides) são letais para os seres humanos, mas amatoxinas certamente
não evoluiram para evitar os seres humanos. A resposta pode estar relacionada com a
corrida armamentista entre predadores e presas que direcionaram a exagerada evolução de
toxicidade, em geral, sem resultar em consequências fatais para o principal agente
selecionado. Por exemplo, algumas serpentes do gênero Thamnophis são resistentes à
tetrodotoxina, bloqueador de canal de sódio, encontrada na pele de salamandras (Taricha
granulosa) e outros organismos. Coevolução com estes predadores resistentes tem
direcionado a quantidade de tetrodotoxina em salamandras Taricha granulosa em alguns
lugares a um nível suficiente para matar seres humanos ou 10-20 mil camudongos. Ao
mesmo tempo, este nível de toxicidade mal prejudica serpentes do gênero Thamnophis.
As peçonhas algumas vezes desempenham um papel defensivo, mas acredita-se
que esta função seja secundária. Apesar do conhecimento popular ser contrário, cobras
peçonhentas muitas vezes mordem defensivamente sem injetar sua peçonha, o ataque ou
mordida por si só é suficiente para desencorajar o predador.
Muitas peçonhas que evoluíram como imobilizadores de presas também causam
dor imediata e intensa por causa do seu efeito sobre a comunicação neuronal. Esses
compostos, comum em himenópteros, escorpiões e água-viva, tem uma vantagem óbvia
como mecanismos anti-predação.
A seleção para aumentar a função defensiva pode ter modificado alguns
componentes da mistura da peçonha para provocar dor. Tal processo pode explicar porque
alguns peptídeos produzidos por escorpiões da família Buthidae são seletivamente
excitatórios de canais de sódio em nervos periféricos, causando dor intensa, mas não
imobilidade (Possani, 1984; Froy e col., 1999). Alguns organismos podem ter desenvolvido
secundariamente a capacidade de colocar a peçonha de forma mais ativa (o que melhor
encaixa na definição de peçonha), como acontece com os pêlos urticantes das lagartas
Lonomia que “levam” peçonha hemorrágica que, às vezes, resultam em insuficiência renal e
morte.
Competição
A vantagem ecológica de muitos compostos produzidos por bactérias, fungos e
plantas envolvem a exclusão competitiva. Os produtos químicos alelopático de plantas são
um exemplo bem conhecido de toxinas que reduzem competição. Juglone produzido pela
noz preta inibe a respiração de muitas plantas, deixando a área em torno de nogueiras
relativamente livre de outros potenciais competidores. A maioria das toxinas produzidas por
bactérias são perigosas para os seres humanos, incluindo a toxina botulínica. Acredita-se
que essas toxinas tenham função como inibidores de outras bactérias que crescem em
diversas comunidades
Fontes dos venenos e peçonhas

Animais que aplicam ou são portadores de toxinas utilizam sua própria maquinaria
genética e metabólica ou de outros organismos para a produção desses compostos.
Dois métodos para a síntese intrínseca de uma toxina são conhecidos: a expressão
do gene que conduz diretamente a um peptídeo ou proteína tóxica ou através de uma via
metabólica complexa, que inclui numerosas reações químicas catalisadas por enzimas
específicas que levam a um metabólito secundário exibindo aleloquímicos, por exemplo,
com atividade tóxica. Outra forma de adquirir toxicidade envolve a absorção, o acúmulo e
armazenamento de compostos tóxicos produzidos por outros organismos, tais como
micróbios, plantas ou outros animais. Isto pode ser realizado através da alimentação de
organismos tóxicos e utilização de seus metabólitos tóxicos para fins próprios ou através da
adoção de um estilo de vida simbiótica com microorganismos patogênicos, que produzem
toxinas eventualmente utilizada pelo hospedeiro.
É difícil avaliar qual a forma de aquisição de toxicidade é a mais eficiente quando os
aspectos econômicos são levados em concideração. Obter toxinas de outros organismos,
aparenta ser uma forma simples e "barata", mas o animal em questão tem de desenvolver
resistência à ação da toxina, um investimento, que muitas vezes superam os benefícios de
economia de energia metabólica. Isto pode incluir mudanças drásticas ao nível molecular
em receptores ou sítios de canais-iônicos, nos potenciais alvos das toxinas adquiridas e / ou
na necessidade de transferência da toxina de forma segura para os compartimentos do
corpo onde será armazenada sem o risco de auto-intoxicação. Além disso, os animais têm
que confiar em uma fonte de alimentação específica para manter um nível adequado de
toxicidade ou fornecer condições para acolher os simbiontes produtores de toxinas.
No reino animal, as duas estratégias têm sido igualmente aprovadas: tanto a
biossíntese como a aquisição externa de toxinas. Isto também indica que estes métodos
totalmente diferentes para a aquisição de toxicidade foram ambos bem sucedidos durante a
evolução.
Peçonhas são muitas vezes produzidas em glândulas especializadas ou em outras
estruturas que estão anatomicamente ligadas a uma máquina de entrega (dentes, ferrões,
arpões, nematocistos, etc).
Muitos componentes da peçonha de cobras, moluscos, aracnídeos e himenópteros,
têm sido relacionado com genes específicos para a produção de peptídeos e outros
compostos. Comparações filogenéticas dos genes de toxinas em répteis, artrópodes, e
cefalópodes, indicam uma origem de um antepassado peçonhento bem como uma
considerável convergência na estrutura de classes e componentes da peçonha. Uma

interpretação desses resultados é que a peçonha teve uma importância ecológica para que
ocorrece a irradiação dos lagartos e essa persistiu em muitas linhagens de répteis antes do
que acreditava-se.
Da mesma forma, polvo, lula e outros cefalópodes compartilham composições
bioquímicas semelhantes em suas peçonhas, sugerindo tanto um antepassado peçonhento
no grupo quanto uma evolução tendenciosa dos componentes específicos da peçonha.
Alguns grupos parecem incapazes ou menos propensos a produzir suas próprias
toxinas. Insetos, como borboletas monarca, sequestram toxinas das plantas hospedeiras
quando as larvas se alimentam dessas. Assim, a concentração e a presença de alguns
compostos estão relacionadas com a alimentação em alguns organismos (Mebs, 2001).
As plantas não são a única fonte para sequestro de toxinas. A peçonha
concentrada na pele de rãs da família dendrobatidea representam uma ampla gama de
neurotoxinas (Daly e col., 1987). Os compostos específicos e suas misturas variam entre as
espécies, e até dentro de uma população. Trabalhos recentes correlacionaram perfis de
toxinas com as proporções de várias centopeias e formigas que produzem os alcalóides
encontrados em rãs - explicando porque estas rãs perdem sua toxicidade em cativeiro (Daly
e col., 1997).
Em um caso surpreendente de convergência evolutiva, rãs Madagascar do gênero
Mantella compartilham fatores ecológicos, padrões de coloração e de toxicidade com os
dendrobatídeos, que também sequestram toxinas de artrópodes que são suas presas (Clark
e col., 2005). Já foram identificado que esses compartilham pelo menos 9 alcalóides.
Outros organismos podem adquirir toxicidade através simbiontes. A grama festuca
é comumente infectada com o fungo endófito Acremonimum coenophialum, que produz um
alcalóide indólico com propriedades vasoconstritoras. A infecção com fungos diminui a
herbivoria e pode aumentar diretamente o crescimento da grama. Não está claro se esta
simbiose surgiu através da seleção de toxicidade em festuca, ou se o fungo começou como
um parasita que produzia toxina para auto-defesa e, inadvertidamente, protegeu o seu
hospedeiro.
Fontes de simbiontes podem ser a explicação mais provável para a ampla
distribuição de outros compostos em taxons muito diferentes. Tetrodotoxina (TTX) é
conhecida em pelo menos cinco filos e cerca de 20-30 espécies. Isto é quase inimaginável
que tantos taxons poderiam ter evoluído de forma independente um composto tóxico
idêntico para qual não se conhece sua via biossintética. Isso levou alguns pesquisadores a
suspeitar de uma origem bacteriana, e certamente as bactérias produtoras de TTX foram
cultivadas a partir de alguns dos animais marinhos que possuem tetrodotoxina, mas nunca a
partir de taxons terrestres. No entanto, cada uma das espécies animais que possuem

tetrodotoxina devem ter evoluído uma resistência para o efeitos do bloqueio de canal
causado pela tetrodotoxina, por isso, é claro que a convergência evolutiva aconteceu em
algum nível.
Diversidade de Toxinas
A diversidade das toxinas aumentou drásticamente através do aumento do pool de
genes para codificação de proteínas ou peptídeos tóxicos. As mutações pontuais,
duplicações e recombinação de genes e modificações pós-traducional do produto do gene
levam a uma grande variedade de peptídeos e proteínas toxicas. Acredita-se que a seleção
natural foi a responsável por “excluir” genes inadequado e ineficiente.
A variabilidade na composição da peçonha ocorre praticamente em todos os níveis:
dentro de famíias, gêneros e inter e intra espécies (Chippaux e col., 1991). Dados
acumulados mostram que este alto grau de variação da peçonha está sob controle genético.
Padrões evolutivos
Existem dois principais, aparentemente contraditórios, temas na evolução de
venenos e peçonhas: por um lado, a convergência evolutiva de ambas é generalizada, por
outro lado, as peçonhas podem apresentar algumas das mais rápidas divergências
evolutivas e variabilidade de qualquer categoria de proteínas.
A convergência é o exemplo perfeito da evolução encontrando soluções similares
para os desafios seletivos. Este tema se desenrola em todos os aspectos da biologia de
venenos e peçonhas, desde a aquisição e produção até estrutura química e ação
farmacológica. No entanto, observando o mesmo composto em diversas linhagens não
implicam sempre em uma convergência evolutiva.
Peçonhas, mais do que os venenos, exibem um grau de convergência estrutural
através de profundas lacunas filogenética, o que sugere que estas evoluíram com um grau
de comprometimento funcional ou com uma produção restrita. Muitas das classes de
proteínas comum em peçonhas de répteis também foram recrutadas em diversas peçonhas
de cefalópodes. Estas proteínas incluem uma ampla variedade de estruturas e mecanismos
de ação, mas algumas famílias de proteínas são visivelmente inexistentes das peçonhas,
incluindo enzimas globulares, transmembrana e proteínas intracelulares. Ainda não esta
claro se esta convergência na estrutura química surgiu devido a restrições seletivas na
atividade farmacológica da peçonha, ou a partir de limitações genéticas que limitam a
diversidade de classes produzidas ou recrutadas através da evolução. Ao mesmo tempo, a
rápida divergência evolutiva e variabilidade é a marca da evolução das peçonhas.

Conus são moluscos predadores que disparam um arpão peçonhento que quase
instantaneamente imobiliza a presa-alvo. Os dardos carregam uma mistura de neurotoxinas,
surpreendentemente diversificadas, que bloqueiam os canais iônicos ou receptores
neuronais. Análises genética demonstram que estes compostos estão sob forte seleção
para diversificação. A taxa de evolução da proteína e genes de conotoxinas é de três a cinco
vezes maior do que as maiores taxas observadas para outras proteínas. Há evidências de
duplicação e diversificação de genes conduzindo à uma radiação das formas das toxinas
(Duda e Palumbi, 2000).
Conus tendem a alimentar-se em um intervalo relativamente limitado dentro de
populações de presas, mas o grupo como um todo se alimenta de muitos grupos de
invertebrados e vertebrados. Conus que se alimentam de diferentes tipos de presas
divergem em suas misturas de peçonha, mas a bioquímica de conotoxinas é muito mais
diversificada do que sua dieta (um indivíduo pode ter 50-200 componentes tóxicos distintos)
(Duda e Palumbi, 2000).
Semelhantemente, a rápida diversificação também é observada para as proteínas
da peçonha de serpente . Em ambos os casos, supõe-se que a forte seleção para subjugar
a presa é direcionada à uma evolução rápida.
Alguns viperídeos apresentam diferenças na composição da peçonha de acordo
com a variação geográfica. Isso pode ser relacionada à diferenças em sua dieta (Daltry, e
col., 1996). Entre as espécies de elapídios (cobras e seus familiares), as neurotoxinas
diversificam rapidamente de acordo com a dieta dos produtores de veneno
Todos esses exemplos sugerem que uma corrida armamentista relacionando
toxicidade e resistência entre predador e presa direcionam a diversificação das peçonhas.
No entanto, análises funcionais que confirmam mais solidamente a existência desse
processo ainda não foram realizadas.
Organização genômica
É um fenômeno paradoxal que animais peçonhentos podem ter em comum: a parte
não-codificantes dos genes de sua toxina, os íntrons, representam elementos estruturais
altamente conservados, enquanto que as peças de codificação, os exons, apresentam uma
alta taxa de variabilidade, o que geralmente é o inverso para outros genes. Isso tem sido
observado para os genes de toxinas de conus e serpentes, e tem sido sugerido como uma
explicação para a hipermutação e diversificação de parte do gene da toxina (Craig e col,
1999). Os exons das toxinas, bem como as enzimas são consideradas como "hot-spots" da
evolução (John e col., 1996).

O que guia a evolução das toxinas?

Na verdade, é tentador especular que a pressão de seleção faz com que a
versatilidade de toxinas e a adaptação a um tipo especial de presa esteja associada com a
evolução acelerada das toxinas (Li, 1997). A vantagem de produzir ou seqüestrar e
conservar toxinas nem sempre é evidente e não deve ser superestimado, considerando que
animais sem peçonhas e venenos sejam menos eficiente. Esses também estão aptos para
sobreviver em um ambiente altamente competitivo. A adaptação de toxinas para alterar ou
inibir a função de um receptor ou canal-iônico pode realmente seguir os mecanismos de
seleção. No entanto, existem exemplos de que as mutações também podem levar a uma
toxina que é menos ativa ou, talvez, sem qualquer efeito sobre o processo de intoxicação.
Das dendrotoxinas até peçonhas de mamba são altamente ativas e específicas para
bloquear canais K +, mas em estado puro, são essencialmente não-tóxicas em mamíferos
(Harvey e Anderson, 1991). Embora possam exercer algum efeito sinérgico com outros
componentes da peçonha, a sua baixa concentração na peçonha pode impedir a sua
importância no envenenamento. Nas peçonhas de escorpião existem peptídeos fracamente
tóxicos que são, na verdade, protótipos estruturais das toxinas mais potentes (Babin e col.,
1974).
Os mecanismos que criaram "hot-spots" da evolução molecular ainda permanecem
obscuros. A suposição de que uma forte pressão de seleção está envolvida, o que explicaria
a extraordinária rapidez na taxa de mutação, precisa de mais esclarecimentos. Os animais
que produzem toxinas ou substâncias químicas tóxicas que receberam de outras fontes têm
de ser vistas no seu contexto ecológico. O uso que fazem das suas toxinas e se eles
realmente precisam desses componentes ativos para sobreviver tem de ser criticamente
avaliados. A idéia também pode ser enfatizada em que a vantagem da produção e posse de
toxinas pode ter sido perdida durante a evolução. As toxinas podem preservar seu
significado original, enquanto o gasto metabólico não está prejudicando seu fitness
(Habermann, 1992).
Conclusão
Os compostos que reconhecemos como venenos e peçonhas abrangem uma
enorme diversidade de funções farmacológicas e ecológica. As pressões de seleção que
conduziram a modificação de peçonhas e venenos são fundamentalmente diferentes das de
outras proteínas, e resultaram em algo com uma dinâmica evolutiva diferente.
Venenos muitas vezes aparecem convergentes porque compostos externos
disponíveis são usados para defesa, enquanto peçonhas parecem evoluir para uma melhora
em alguns conjuntos de alvos de funções e classes de compostos. Ao mesmo tempo, as

peçonhas dentro das linhagens diversificam, pelo menos, tão rápido quanto qualquer outro
grupo de proteínas conhecidas.
Com mais ferramentas experimentais para mais grupos de organismos, iremos
começar a descobrir que, em geral pressões evolutivas e restrições moldaram o perfil de
venenos e peçonhas.

Produtos naturais e sua função como defesa química
Suélen Felix
Laboratório de Biologia Celular de Invertebrados Marinhos
[email protected]
Introdução
A vida baseia-se em processos químicos que são utilizados para múltiplos
propósitos e o conjunto desses processos é denominado metabolismo (Harper e col., 2001).
Entende-se por metabolismo primário as vias de síntese (anabolismo) e de degradação
(catabolismo) de compostos químicos mediados por enzimas que ocorre em todos os seres
vivos. Essas vias de síntese são altamente conservadas ao longo de todos os reinos e dão
origem a substâncias químicas essenciais para os organismos. Os principais metabólitos
primários são os monossacarídeos, aminoácidos, ácidos graxos, ácidos nucléicos e
polímeros derivados destes (polissacarídeos, proteínas, lipídios, ADN, e ARN dentre outros)
(Mann, 1978).
A maior parte dos organismos produz por via metabólica secundária, compostos
que normalmente não possuem qualquer função aparente (Mann, 1978). Esses metabólitos
secundários são também denominados Produtos Naturais por serem compostos químicos
de origem biogênica cujos potenciais vem sendo amplamente explorados por diversas áreas
das ciências aplicadas (Fig. 1a, b) (Maschek e Baker, 2008).
Figura 1. a) Estrutura química da Penicilina que é um produto natural sintetizado por fungos da
espécie Penicillium notatum e vem sendo amplamente explorado com antibiótico. b) Estrutura
química da Briostatina, um produto natural sintetizado por briozoários da espécie Bugula neritina e
muito utilizado no tratamento de diversos tipos de tumores.
A separação entre metabolismo primário e secundário é confusa, mas sabe-se que

estão interconectadas, pois o metabolismo primário fornece as moléculas que são utilizadas
como base para todas as vias do metabolismo secundário (Fig. 2). Cada precursor de

metabólitos secundários é também usado na biossíntese de vários metabólitos primários

mais complexos como: proteínas, ácidos graxos e polissacarídeos (Mann, 1978).
Figura 2. Principais vias metabólicas secundárias, enfatizando a via do acetato (Acetil coenzima A),
precursora de florotaninos, polifenóis e poliacetilenos; a via do Ácido chiquímico precursora de
compostos aromáticos e de hidroquinonas preniladas; a via de aminoácidos aromáticos, precursora
de alcalóides; e a via do Mevalonato, precursora de terpenóides. (Modificado de Maschek e Baker,
2008).
Bioatividade dos metabólitos secundários e sua função como defesas

químicas
Os metabólitos secundários são indiscutivelmente bioativos e a bioatividade é uma
resposta fisiológica a moléculas ou íons presos a um ligante desencadeando assim uma
cascata de conseqüências (Maschek e Baker, 2008). Williams e colaboradores (1989)
concluíram que os metabólitos secundários evoluíram sob pressão de seleção natural para

se ligarem a receptores específicos e desta forma representarem respostas ecológicas dos

organismos ao ambiente.
Existem desestabilidades no equilíbrio entre os organismos que ocupam um mesmo
nicho ecológico. Essas desestabilidades podem ser mudanças ambientais, distúrbios no
balanço predador-presa ou escassez de alguns recursos como alimento e refúgio, que vão
exercer pressões sobre organismos para que se tornem adaptados, para emigrarem ou se
extinguirem (Mann, 1978). Por muito tempo foi questionado o porquê de vários organismos
alocarem quantidades significativas de recursos - que poderiam inicialmente ser alocados
para crescimento e reprodução - para a produção de metabólitos secundários, uma vez que
estes não têm função essencial na estrutura dos indivíduos (Davies, 1992). Entretanto,
avanços nos estudos em Ecologia Química mostraram que esses metabólitos secundários
estão envolvidos em diversas interações atuando como verdadeiras defesas químicas para
os indivíduos que as produzem, assegurando assim sua adaptabilidade às desestabilidades
do ambiente (Mann, 1978). Isso justifica o alto dispêndio metabólico na produção destes e
mostra que a variabilidade das defesas químicas é um importante caractere evolutivo, pois é
sobre esta variabilidade que a seleção natural atua (Hay, 1996).
Como já é conhecido, os organismos vivem em uma incessante batalha pela sua
sobrevivência buscando alimento, procurando parceiros reprodutivos e tentando evitar seus
predadores (Mann, 1978), Além disso, competem com outros indivíduos pelo alimento, pelos
parceiros reprodutivos, por espaço e por luz (Harper e col., 2001). Portanto, não é estranho
que tenham desenvolvido diversos mecanismos de defesa incluindo estratégias
comportamentais, físicas e químicas, sendo que sinergias entre estas estratégias têm sido
amplamente descritas (Fig. 3a, b, c, d) (Hay e Fenical, 1988; Stachowicz, 2001).
Defesas químicas apesar de não serem essenciais para o metabolismo basal dos
organismos, são responsáveis por assegurar o sucesso destes frente às diversas interações
ecológicas, pois atuam como: substâncias antipredação (sendo citotóxicas ou reduzindo a
palatabilidade), mediadores de competição espacial, inibidores de epibiose, agentes
antimicrobianos e proteção contra danos causados por raios ultravioletas (Harper e col.,
2001). São classificadas em constitutivas, ativáveis ou induzíveis, dependendo da forma
com que são armazenadas dentro do corpo do organismo. Estas podem ser armazenadas já
na sua forma ativa ou em uma forma normalmente menos tóxica e menos dispendiosa
metabolicamente, que é ativada apenas quando houver algum estímulo que justifique o seu
uso (Harvell,1990; Paul e Van Alstyne, 1992; Karban e Baldwin, 1997). Existem ainda
organismos que não possuem a capacidade de produzir defesas químicas, mas que podem
adquiri-las através da sua alimentação sem sofrerem danos (resistência), acumulá-las na
sua forma ativa nos seus órgãos ou músculos e usá-las em seu próprio benefício quando for
necessário. Este mecanismo caracteriza o seqüestro de defesas químicas (Harbone, 1993).

Figura 3. a) Polvo adotando comportamento críptico como mecanismo de defesa; b) espinhos em

ouriços-do-mar funcionando como defesas físicas; c) Gambás liberam substâncias químicas com
odor desagradável para afastar seus predadores (defesa química); d) No peixe-leão os espinhos no
dorso (defesa física) têm a função de perfurar e injetar dentro do corpo dos seus predadores e presas
substâncias químicas com alta toxicidade (defesa química), sendo um claro exemplo de sinergia de
defesas.
Defesas químicas constitutivas, induzíveis e ativáveis

A teoria da defesa ótima pressupõe que as defesas químicas podem ser
diferentemente alocadas para as partes do corpo do organismo mais susceptíveis a
predação, ou que os metabólitos defensivos podem ser induzidos em resposta a predação
(Rhoades, 1979). As defesas químicas podem ser constitutivas (sempre presentes),
induzidas (produzidas sob regulação gradual), ou ativadas (produzidas imediatamente a
partir de precursores disponíveis) em resposta a ataques (Karban e Baldwin, 1997). Defesas
químicas induzíveis ou ativáveis são desencadeadas por lesões ou contato com predadores
resultando em mudanças químicas dentro dos organismos que aumentam sua resistência
ao tipo de dano que levou a produção ou ativação da defesa. A resposta induzida pode
ocorrer em uma escala de horas a meses (Fig. 4a) (Karban e Baldwin, 1997), enquanto que

a ativação pode ocorrer dentro de segundos após o dano causado pelo predador (Fig. 4b)
(Paul e Van Alstyne, 1992).
Figura 4. a) Indução (0.5 – 6 dias) na produção de oroidina por esponjas da espécie Agelas conífera
(Modificado de Richelle-Maurer e col., 2003). b) Ativação (15 – 60 segundos) na produção de
psammplina A por esponjas da espécie Aplysinella rhax (Modificado de Thoms e Schupp, 2008).
O uso de defesas químicas é dispendioso para o seu produtor, reduzindo assim a

energia disponível para o crescimento e a reprodução (Baldwin, 1998; Pavia e col., 1999).
Se a predação for uma pressão constante e previsível, o organismo pode se beneficiar com
defesas constitutivas, pois os custos com a sua produção são bem compensados pelos
contínuos benefícios da proteção. Em contraste, se a pressão de predação for variável
espacial ou temporalmente os custos associados com defesas constitutivas podem exceder
os benefícios da proteção. Sendo assim, o uso de defesas induzíveis ou ativáveis pode ser
preferido, se estas incorrerem em menores custos (Karban e Baldwin, 1997; Koricheva,
2002).
As defesas químicas ativáveis podem representar muitos benefícios adicionais em
relação às defesas constitutivas e as induzíveis. Primeiro, a ativação aumenta a resistência
aos predadores no ato do ataque repelindo o primeiro predador, em vez de proteger o
organismo de predadores que se alimentam vagarosamente (que não causam tantos danos
e dão ao hospedeiro tempo para se recuperar) ou de possíveis futuros predadores, como é
o caso das defesas induzíveis. Segundo, se as defesas químicas forem tóxicas para o
organismo que as produz, então, se a produção for regulada somente para quando houver o
ataque e por pequenos períodos de tempo, os custos associados com proteção contra auto-
toxicidade serão minimizados com relação às defesas constitutivas e induzíveis. Terceiro,
mesmo sendo menos efetivo do que uma defesa induzível ou constitutiva, cujo status
defensivo dura de horas a meses ou pode ser contínuo, um componente instável poderia ser
utilizado como uma defesa ativável, pois se decompõe logo após sua exposição ao

estímulo. Quarto, existem compostos que tem funções alternativas dentro de um organismo
ou que servem como precursores para vários produtos biogênicos - um dos quais uma
defesa ativada. Se a ativação ocorre com pouca freqüência, o metabólito pode ser usado em
outras funções dentro do organismo, ou desviado para sintetizar produtos diferentes
enquanto o organismo não estiver sendo atacado (Prusak, 2004).
A ativação de defesas químicas pode acontecer por pelo menos três mecanismos:
1) quando o organismo for danificado fisicamente, pela conversão de algum tipo de
composto deterrente em um composto mais deterrente ainda (Fig. 5). Na esponja marinha
Aplysinella rhax o composto menos deterrente sulfato de psammaplina A considerado
constitutivo (Tabudravu e col., 2002) é convertido no composto mais deterrente
psammaplina A em um intervalo de poucos segundos após a lesão causada pelo predador
(Thoms e Schupp, 2008); 2) pela produção de um composto deterrente a partir de
precursores não deterrentes. Após o contato com fungos, as diatomáceas Thalassiosira
rotula e Asterionella formosa oxidam os ácidos graxos eicosanóides rapidamente nos
aldeídos insaturados C-10 e C-12 respectivamente (Pohnert, 2000); 3) pelo aumento na
concentração de um metabólito deterente que normalmente é expresso em níveis muito
baixos. Quando esponjas da espécie Aplysilla glacialis são expostas a algum tipo de
distúrbio, aumentam rapidamente a produção de esteróides endoperóxidos que começam a
ser secretados externamente junto com o muco (Bobzin e Faulkner, 1992). Devido à
ativação de defesas envolver mudanças metabólicas que ocorrem em intervalos de poucos
segundos (Paul e Van Alstyne, 1992; Cetrulo e Hay, 2000) é provável que precursores
metabólicos e enzimas já estejam presentes antes do ataque, pois a transcrição e tradução
de enzimas leva em torno de 40 segundos (Mathews e col., 1999), tempo maior que o
necessário para um predador lesar seriamente sua presa.

Figura 5. Uso dos alcalóides isoxazolínicos brominados aerofobina-2 (1), aplisinamisina-1 (2) e da
isofistularina-3 (3) como precursores para a ativação dos metabólitos mais deterentes aeroplisinina-1
(5) e dienona (6) nos tecidos de Aplysina aerophoba. (Modificado de Thoms e col., 2006).
Seqüestro de defesas químicas

Existem várias divergências sobre os fatores responsáveis pela origem da
especialização alimentar (Barbosa, 1988; Thompson, 1988; Cronin e col., 1995). Entretanto,
acredita-se que a resposta comportamental à química de uma presa é importante para
manter associações especializadas (Futuyma e Moreno, 1988). Em comunidades terrestres
as principais investigações sobre relações de consumidores especialistas estão focadas nas
relações inseto-planta e presume-se que cerca de 90% das espécies de insetos são
especializados em consumir até três famílias de plantas (Bernays, 1989). Nos ambientes
marinhos, casos de especialização são raros, pois a maior parte dos consumidores são
onívoros generalistas (Hay e Steinberg, 1992).
A proteção contra inimigos naturais tem sido proposta como um fator importante
para promover preferência e especialização alimentar em ambos os ambientes (Bernays,
1989; Hay, 1992) e o seqüestro dos metabólitos secundários produzidos pela presa é um

mecanismo efetivo na obtenção desta proteção (Paul e Van Alstyne, 1988; Rogers e Paul,
1991). O seqüestro de defesas químicas ocorre quando organismos (especialistas)
conseguem se alimentar de presas quimicamente defendidas sem sofrerem danos e, além
disso, acumulam essas defesas químicas nas suas formas ativas em seus tecidos e órgãos,
usando-as contra seus próprios predadores (Pawlik, 1988; Thoms e col., 2003).
Nos ambientes marinhos os principais organismos conhecidos por seqüestrarem
defesas químicas de suas presas são gastrópodes opistobrânquios (nudibrâquios e
sacoglossos). São raramente atacados pelos consumidores generalistas com os quais
coexistem, mesmo não apresentando concha de proteção como a maior parte dos
gastrópodes (Fig. 6a, b) (Cronin e col., 1995). Evidências evolutivas presumem que a perda
da concha foi atribuída ao seqüestro de defesas químicas a partir da alimentação (Faulkner
e Ghiselin, 1983). Os opistobrânquios carnívoros – os nudibrânquios – se especializaram em
invertebrados, seqüestrando os metabólitos secundários (Faulkner, 1992) ou mesmo
nematocistos funcionais das suas presas. Já os seus homólogos herbívoros – os
sacoglossos – se especializaram em algas, das quais seqüestram suas defesas químicas e
cloroplastos funcionais (Cronin e col., 1995). Em alguns casos os organismos que
seqüestram as defesas químicas podem modificá-las, usando-as como precursoras para
produzirem outras defesas, para detoxificá-las (por serem muito tóxicas para serem
armazenadas) ou para torná-las mais eficientes contra seus predadores (Cimino e col.,
1993).
Figura 6. a) Nudibrânquio Tritonia hamnerorum especialista em se alimentar e seqüestrar defesas

químicas do octocoral Gorgonia ventalina (Cronin e col., 1995).
http://www.seaslugforum.net/images/dup031.jpg (20/05/2010). b) Sacoglosso Elysia subornata
especialista em se alimentar e sequestrar defesas químicas e cloplastos da clorófita Caulerpa taxifolia
(Thibaut e col., 2001). http://www.sbg.ac.at/ipk/avstudio/pierofun/ct/scans/fig5e.jpg (20/05/2010).

Principais produtores de defesas químicas e suas potencialidades econômicas

Tanto nos ambientes terrestres quanto nos ambientes aquáticos, os principais
produtores de defesas químicas são em geral organismos com poucos mecanismos físicos
de defesa e/ou com reduzida mobilidade. Sujeitos a grandes pressões por parte de
organismos competidores, estes grupos lograram desenvolver suas defesas químicas como
forma de se protegerem e garantirem a sobrevivência. (Hay e Fenical, 1988). Nos ambientes
terrestres, as defesas químicas até então descobertas são em sua maioria provenientes de
plantas, seguidas de fungos e bactérias. Já nos ambientes aquáticos, 33% das defesas
químicas são produzidas por esponjas, 25% são provenientes de algas (micro e
macroalgas), 18% são de cnidários e os 24% restantes são derivados de outros
invertebrados como ascídias, briozoários e poliquetos, dentre outros (Kijjoa & Sawangwong,
2004).
O estudo das substâncias derivadas do metabolismo secundário fornecem uma
enorme contribuição na descoberta de drogas com potencial terapêutico. Muitas delas têm
sido descobertas pela extração da defesas químicas de plantas, animais, organismos
marinhos e microorganismos (Rocha & Schwartsmann, 2001). De origem vegetal, alguns
exemplos de drogas já comercializadas descobertas a partir de produtos naturais são:
aspirina, derivada do salgueiro (analgésico, antinflamatório); atropina, derivada da erva-
moura (dilatador de pupila e antiespasmóico); taxol, derivado do Teixo do Pacífico (agente
anticancer); morfina derivada do ópio (analgésico). De microorganismos foram descobertas
as drogas penicilina, derivada do bolor de pão Penicillium sp. (antibiótico); cefamicina,
derivada de actinobactérias Streptomyces sp. (antibiótico). Produtos naturais de origem
marinha também deram origem a drogas como a briostatina, derivada do briozoário Bugula
neritina (anti-tumoral); aurantosides, derivado da esponja Theonella sp. (antifúngico);
manoalide, derivada da esponja Luffariela variabilis (analgésica e antinflamatória) (Rocha &
Schwartsmann, 2001).
Os produtos bioativos também despertam interesse de outros segmentos
econômicos. O potencial antiincrustante de vários invertebrados marinhos têm sido
amplamente exploradas pela Indústria Naval, pois após o banimento de tintas a base de
tributilestanho (TBT), há a necessidade de criar tintas igualmente eficazes mas que não
causem danos ao meio-ambiente (Burgess e col., 2003). A indústria agrícola tem investido
no desenvolvimento de defensivos baseados em defesas químicas produzidas por plantas e
fungos (Duke, 1990). Já a indústria cosmética vem investigando o potencial de proteção
contra raios UV exibidos por algumas defesa químicas de invertebrados marinhos (Michalek-
Wagner, 2001), bem como de metabólitos com capacidade antioxidativa e antiinflamatória
(Furey, 2010).

Os produtos naturais ja foram considerados detritos com estruturas químicas
interessantes, porém inúteis (Mann, 1978). No entanto, cada vez mais se observa que
possuem funções importantíssimas para os organismos que os produzem. Atualmente já é
conhecido que muitos desses metabólitos secundários possuem papéis vitais, pois medeiam
interações ecológicas. Ou seja, possuem a função de assegurar a sobrevivência em um
ambiente hostil onde muitos organismos competem uns com os outros pelos mesmos
recursos.
O estudo dos metabólitos secudários com função de defesas químicas é um campo
de estudo amplo e multidisciplinar, englobando a química e todos os aspectos biológicos.
Apesar dos maiores esforços ainda serem voltados para a descoberta de novos produtos
com potencial farmacêutico e industrial, muito tem sido feito a fim de se descobrir qual a
importância dessas substâncias para os organismos que as produzem. Mesmo que alguns
experimentos não consigam demonstrar a real função de um metabólito secundário, não
significa que este papel não exista, portanto não é prudente argumentar contra sua
relevância ecológica e fisiológica.

Invertebrados Marinhos: Toxinas e seus Mecanismos de Ação
Bruno Cesar Ribeiro Ramos

[email protected]
Introdução
Há muito tempo postula-se que a vida tenha surgido nos oceanos, assim não é de
se surpreender que esse ambiente continue a abrigar uma enorme diversidade de animais,
o que inclui uma grande variedade de invertebrados (Brusca, r. c.; Brusca, g. j., 2007).
Alguns grupos como os cnidários e os equinodermos, são completamente ou em grande
parte marinhos. Essa tremenda variedade e abundância de invertebrados nos oceanos de
todo mundo é o resultado de vários números de fatores, muitos dos quais estão
relacionados a condições de redução de estresse químico e físico nas atividades diárias dos
organismos (Brusca, r. c.; Brusca, g. j., 1990).
Em um ambiente com grandes pressões seletivas e uma enorme variedade de
organismos, as interações intra e interespecíficas tem um papel determinante na evolução
desses organismos. Muitas dessas interações são mediadas pela liberação de substâncias
biologicamente ativas e podem ser classificadas de acordo com seu papel ecológico (Burks
e Lodge, 2002; Ruther, e col, 2002): feromônios são substâncias que atuam na
comunicação entre membros da mesma espécie; cairomônios atuam na comunicação entre
membros de espécies diferentes com vantagens para a espécie receptora; e alomônios,
substâncias químicas defensivas e ofensivas com vantagens adaptativas para a espécie que
libera a substância no meio. Nesse contexto alomônios ofensivos são substâncias
empregadas por organismos predadores, para paralisar e subjugar sua presa, enquanto
alomônios defensivos são utilizados para deterem inimigos (predadores ou competidores)
(Sher e col., 2005). O uso de alomônios já foi amplamente registrado nos diversos táxons do
reino Metazoa, mas nesse capítulo nos concentraremos nos invertebrados.
Invertebrados venenosos ou peçonhentos são comumente encontrados em
Poríferos, Cnidários, Moluscos e Artrópodes. Porém, alguns dinoflagelados também
produzem toxinas extremamente potentes e também serão abordados a seguir.
Dinoflagelados
Os dinoflagelados são um dos grupos mais abundantes no plâncton marinho e,
como em sua maioria são autotróficos, têm um importante papel na produção primaria do
globo. No entanto esses organismos são também os principais responsáveis pelo fenômeno
conhecido como proliferação nociva de algas (HABs), ou popularmente, maré vermelha.
Normalmente as espécies que produzem substâncias tóxicas estão presentes em baixas

concentrações no ambiente e não provocam impactos à saúde humana. Porém, em

condições favoráveis de temperatura e nutrientes estas podem reproduzir-se em grande
escala, produzindo grandes quantidades de toxinas (Da-Zhi Wang, 2008). Nessas condições
esses organismos podem representar um risco à saúde publica pela ingestão de animais
contaminados ou pela exposição à água. Todo ano são registrados de 50 a 500 mil casos de
intoxicação por toxinas produzidas por algas, com uma média de mortalidade de 1,5%. Além
do efeito adverso causado a saúde humana essas toxinas também são responsáveis pela
morte de peixes, moluscos e podem causar episódios de mortalidade de mamíferos
marinhos, pássaros e outros animais dependendo da cadeia alimentar (Da-Zhi Wang, 2008).
As toxinas produzidas pelos dinoflagelados são extremamente potentes e em sua
maioria são neurotoxinas que interagem com receptores específicos; ou associados a
receptores de neurotransmissores ou a canais iônicos dependentes de voltagem. Dentre as
neurotoxinas mais estudadas e conhecidas estão, a saxitoxina, que bloqueia canais de
sódio voltagem-dependentes, produzida por membros dos gêneros, Alexandrium,
Gymnidinium e Pyrodinium; a brevetoxina, encontrada primeiramente em organismos da
espécie Karenia brevis, que atua abrindo e impedindo a inativação de canais de sódio
voltagem-dependentes; a ciguatoxina, isolada da espécie Gambierdiscus toxicus, que atua
da mesma maneira que a brevetoxina, porém com um potencial 30 vezes maior; e a
palitoxina, isolada recentemente da espécie Ostrepsis siamensis atua na Na+/K+-atpase e é
uma das toxinas mais potentes existentes (Da-Zhi Wang, 2008).
Porífera
O filo Porífera é constituído por animais extremamente simples e popularmente
conhecidos como esponjas. São os mais primitivos animais entre os multicelulares, não
possuem órgãos, mas tem tecido conjuntivo desenvolvido. Seu esqueleto pode ser formado
por espículas calcárias, espículas silicosas, fibras de espongina protéicas ou uma
combinação dessas duas últimas (ruppert e barnes, 1994).
Vários animais se alimentam de esponjas, embora o dano causado por estes
predadores seja geralmente pequeno. Alguns moluscos, ouriços e estrelas-do-mar, além de
peixes tropicais (donzelas, peixes-borboleta) e tartarugas, comem esponjas. Muitas
espécies são totalmente expostas aos predadores, e na impossibilidade de “bater em
retirada” apresentam mecanismos alternativos de defesa contra a predação excessiva. O
mecanismo primário de defesa das esponjas é de natureza química. As esponjas produzem
ou acumulam uma ampla gama de compostos tóxicos, alguns bastante potentes e que
podem ser expelidos por poros presentes na superfície externa desses animais
(www.poriferabrasil.mn.ufrj.br).

Um exemplo marcante é o da espécie Latrunculia magnífica, esse organismo

quando atacado por predadores libera um líquido avermelhado que causa a fuga do
predador da vizinhança onde se encontra essa esponja. Testes químicos e em laboratório
atribuem esse efeito a uma toxina denominada latrunculina-A ou B que causa morte de
peixes em alguns minutos (Proksch, 1994). Apesar de produzirem toxinas relativamente
potentes não são freqüentes os relatos de acidentes com humanos. Na maioria dos casos, o
contato com esses animais geram pequenas abrasões ou mesmo nenhum tipo de efeito.
Porém algumas espécies que produzem toxinas, ou de modo geral chamadas crinitoxinas,
podem causar severas irritações e dermatites, como espécies do gênero Tedania e
Neofibularia (Ibster e Hooper, 2005)
Além de defesas antipredação e contra infecções microbianas, as toxinas de
esponjas também são utilizadas para a competição por espaço com outros invertebrados,
como briozoários, ascídias, corais e até mesmo outras esponjas. Esponjas do gênero
Siphonodictyon habitam corais vivos, e para prevenir que sejam recobertas pelos pólipos
dos corais secretam um muco contendo uma toxina denominada sifonodictidina, gerando
uma “zona morta” de 1-2 cm ao redor da região onde se encontra. Isto permite que algumas
esponjas cresçam rapidamente e recobram a fauna e flora adjacentes (Proksch, 1994).
Cnidários
Um dos grupos que mais vem ganhando destaque no quadro internacional quando
o assunto é toxina, são os cnidários. Os cnidários possuem células urticantes características
presentes em todos os representantes do filo. Essas células produzem organelas
especializadas denominadas nematocistos, que contém um bulbo venoso e um filete
eversível capaz de injetar toxinas. A peçonha contida nos nematocistos desses animais
contém uma grande variedade de toxinas provocando efeitos dos mais diversos quando
injetado na presa ou no predador.
Extensivos estudos têm sido realizados nesse grupo devido aos vários relatos de
contato desses animais, principalmente das classes Cubozoa e Sciphozoa, com humanos,
com resultados potencialmente fatais.
As classes Cubozoa e Sciphozoa são representadas pelas conhecidas medusas,
onde se destacam os cubozoários Chironex fleckri, tido como o animal mais peçonhento do
mundo (Turk; Kem, 2009), e Carukia barnesi, conhecido por causar a “síndrome de
Irukandji” (forte hipertensão que pode resultar em edema pulmonar, hemorragia intracerebral
e infarto agudo) (Suput, 2009) e os cifozoários Cyanea capillata e Chrysaora quinquecirrha.
De maneira geral, as fatalidades observadas em humanos e animais de laboratório
se devem aos efeitos cardiotóxicos gerados pela peçonha. A entrada de cálcio através de
poros formados nas células, a liberação de substâncias endógenas como epinefrina e
histamina, a interferência nos canais iônicos das membranas celulares, ou a combinação

desses fatores, e de fatores ainda não conhecidos, podem levar ao colapso cardiovascular
(Suput, 2009).
Apesar de décadas de estudos, muito pouco é conhecido da peçonha desses
animais do ponto de vista farmacológico. O grande número de proteínas e substâncias
presentes na peçonha aliado a instabilidade de muitas toxinas faz do seu estudo um
trabalho difícil e complexo.
Diferentemente dos membros das duas classes anteriores, os membros da Classe
Anthozoa, representada pelas anêmonas e corais, produzem potentes toxinas estáveis. Por
esse motivo, muitas toxinas de varias espécies já foram isoladas e caracterizadas. As mais
conhecidas são as neurotoxinas que agem nos canais de sódio. São polipeptídios de
3~5KDa e foram primeiramente isoladas da espécie Anemonia viridis e denominados ATX I,
ATX II e ATX III (hoje Av1, Av2 e Av3). Essas toxinas agem impedindo a inativação dos
canais de sódio através da estabilização das conformações do seu estado ativo (Moran,
2009).
Toxinas que agem nos canais de potássio também têm sido descritas em diversos
membros dessa classe. Essas toxinas fazem parte de uma única família de bloqueadores de
canais de potássio, com massa variando entre 3.5 - 6.5KDa, onde a primeira toxina a ser
isolada foi a ShK, da anêmona Stichodactyla hielanthus.
Outra classe de toxinas bem estudada e caracterizada em anêmonas são os
polipeptídios citolíticos. Essas toxinas podem agir formando poros nas membranas
celulares, onde são destacados os estudos realizados com Equinatoxina II (Eqt II), da
anêmona Actínia eqüina e Sticholisina (St II), da Stichodactyla hielanthus, ou atuando como
enzimas, que podem ter ou não ação fosfolipásica (Suput, 2009).
A última Classe dentro do grupo dos cnidários analisada aqui, é a Classe Hydrozoa.
Os poucos trabalhos realizados com membros desse grupo se restringem a algumas
espécies de hidras, caravelas (Physalia) e hidrocorais (Millepora). As dificuldades no estudo
desses organismos são o tamanho diminuto de seus pólipos, a dificuldade de extrair a
peçonha diretamente dos seus nematocistos e a instabilidade de suas toxinas. Mesmo com
essas dificuldades algumas toxinas interessantes foram isoladas desses animais como, por
exemplo, as hidralisinas, uma nova categoria de citolisinas formadoras de poros (Sher e col,
2005), isoladas primeiramente da hidra Chlorohydra viridissima e a phisalia toxina, uma das
primeiras toxinas de cnidários isoladas diretamente dos nematocistos. Essa toxina tem
massa de 240KDa, é composta por 3 subunidades glicosiladas e é letal quando injetada
intraperitonialmente em camundongos (Suput, 2009).

Moluscos e crustáceos
Dentro do grupo dos moluscos, os animais mais estudados são os pertencentes à
família Conidae. Todas as 500 espécies conhecidas são predadoras e se alimentam de
outros moluscos, vermes e peixes. A imobilização da presa é resultado da ação da peçonha
relativamente complexa desses animais que é injetada na vítima através de uma
modificação da rádula semelhante a um arpão. A peçonha de cada espécie contém mais de
200 compostos farmacologicamente ativos, e os mais estudados são compostos de origem
peptídica (Becker e Teriau, 2008).
Os alvos dos conopeptídeos são geralmente canais dependentes de voltagem e
dependente de ligantes. Uma característica marcante dessas toxinas é sua propriedade
farmacológica: conopeptídeos são conhecidos por serem extremamente potentes e
altamente específicos. A -conotoxina, por exemplo, especificamente se liga a canais de
cálcio do tipo N (Cav 2.2) e possui baixa afinidade por outros subtipos de canais de cálcio.
Como os canais de cálcio do tipo N são encontrados nos espaços pré-sinápticos, a ação da
-conotoxina resulta no bloqueio da transmissão sináptica (Becker e Teriau, 2008). Existem
ainda outros tipos de conotoxinas bem conhecidas, como a -conotoxina, que inibe
receptores nicotínicos de acetilcolina nos nervos e músculos; a -conotoxina, que inibe a
inativação dos canais de sódio dependentes de voltagem; -conotoxina que inibe as
correntes de sódio dependentes de voltagem; e a -conotoxina, que interage com canais de
potássio. Dessa maneira, com relação a toda a peçonha produzida por esses animais, cada
peptídeo representa um “especialista” otimizado para cada alvo (Becker e Teriau, 2008),
fazendo dessa peçonha, se não a mais potente, uma das mais potentes do reino animal.
Existem relatos de acidentes fatais decorrentes do contato de seres humanos com
esses animais, porém, devido ao habito noturno dos conídeos, esse número seja bastante
limitado
Os crustáceos venenosos normalmente concentram as toxinas em seu interior por
se alimentarem de algas que as produzem. Ao serem ingeridos por seres humanos, podem
apresentar ação tóxica e muitas vezes letal. O estômago desses animais normalmente é
impermeável a essas toxinas e, portanto, são resistentes a ela. O Lophozosimus pictur, por
exemplo, sintetiza uma proteína capaz de inativar a tetrodotoxina, além de acumular
palitoxina em seu interior (www.psiconeuroendocrinologia.com.br).
Outros exemplos podem ser citados: o Actaeodes tomentosus, do Japão, é
concentrador de toxinas da Jania sp, tendo provocado incidentes fatais entre seres
humanos; o Zosimus aeneus, da Ilha Ishigaki (Japão), o Portunus pelagicus, da Malásia,
que recebe as toxinas da Pyrodinium bahamense; o Cancer magister, dos EUA, que recebe
toxinas da Gonyaulax tamarensis (assim como o Cancer irroratus, o Cancer productus e o
Cancer borealis). Algumas espécies de lagostas, também são capazes de concentrar
toxinas (fitotoxinas/tetrodotoxina). Alguns exemplos podem ser citados: Panulirus versicolor

e Panulirus longipes que recebem suas toxinas do Pyroidinium bahamense; a Homarus
americanus, que recebe as toxinas da Gonyaulax tamarensis e da Alexandrium tamarense.
Os camarões penacídeos (Penacidae) e penaeídeos, também concentram toxinas,
recebendo-as de Pyrodinium bahamense (www.psiconeuroendocrinologia.com.br).
Mecanismos de ação
Toxinas que agem em canais celulares

De maneira geral essas toxinas agem bloqueando, ativando, impedindo ou
retardando o fechamento dos canais presentes nas células excitáveis, causando um
completo desequilíbrio iônico e levando, consequentemente, ao colapso funcional da célula.
Em organismos, incluindo humanos, os canais iônicos dependentes de voltagem, como
canais de sódio, cálcio e potássio são responsáveis pela geração de sinais elétricos. Esses
sinais elétricos controlam a contração muscular, secreção de hormônios, percepções
ambientais, processamento das informações no cérebro e emissão dessa informação para
os tecidos periféricos (Becker e Teriau, 2008), fazendo com que esses canais sejam alvos
perfeitos para toxinas. Dentre os três tipos de canais citados acima, merece maior destaque
os canais de sódio voltagem-dependentes (Navs). Esses canais exercem um papel primário
na excitabilidade da maioria dos animais, permitindo a iniciação e propagação dos
potenciais de ação e por isso é o maior alvo das toxinas conhecidas (Moran, 2009).
Toxinas que agem nas membranas celulares

Conhecidas como citolisinas essas toxinas atacam a célula alvo pelo aumento,
muitas vezes não especifico, da permeabilidade da membrana a íons e pequenas
moléculas. O efeito da permeabilização pode ser letal se for forte o suficiente para alterar a
capacidade de regulação homeostática da célula para além de sua capacidade de regulação
ou mesmo se comprometer a estrutura da membrana. As citolisinas podem ser classificadas
da seguinte maneira:
 Toxinas formadoras de poros, as quais produzem lesões bem definidas nas
membranas celulares.
 Toxinas com características enzimáticas (fosfolipase e esfingomielase)
 Toxinas com característica detergente, que promovem a desestabilização da
membrana através da solubilização dos componentes lipídicos da membrana.

Toxinas que agem no citoesqueleto celular

Muitas toxinas isoladas de organismos marinhos exercem sua citotoxicidade
modulando as propriedades do citoesqueleto, principalmente aquelas associadas aos
filamentos de actina (Lousao e col, 2008).
Por muito tempo acreditava-se que esse sistema (filamentos de actina e proteínas
associadas) era meramente estrutural, oferecendo o suporte necessário para manter o
formato e a organização da célula e para ancoragem de moléculas com ações catalíticas
como as proteínas motoras. Hoje se sabe que o citoesqueleto de actina é uma estrutura
muito dinâmica e que está submetida a constantes processos de reconstrução e
reorganização. Em células eucarióticas o citoesqueleto de actina possuem um papel crucial
em muitas funções celulares como: mobilidade e remodelação da superfície celular; varias
atividades contráteis como contração muscular e separação de células irmãs; controla
interações célula-célula e célula-substrato juntamente com moléculas de adesão; e participa
ativamente na transdução de sinais, regulação do volume celular, secreção e modulação de
receptores de superfície. Dessa maneira não é de se surpreender que a maioria das toxinas
citotóxicas atue sobre os filamentos de actina (Lousao e col, 2008). Essas toxinas se ligam
ao citoesqueleto e provocam a inibição ou aumento da polimerização dos filamentos (Saito,
2009), o que, consequentemente, leva a uma completa disfunção celular.
Palitoxina
Palitoxina é uma das toxinas mais potentes existentes e foi isolada primeiramente
de zoantharios (Hexacorallia) do gênero Palytoa. Hoje, a palitoxina e vários dos seus
análogos são encontrados em uma grande variedade de organismos marinhos, incluindo
anêmonas, poliquetos, dinoflagelados, algas, caranguejos e peixes (Chau H. Wu, 2009).
A palitoxina demonstrou ser 200 vezes mais potente do que a tetrodotoxina quando
injetada intraperitonialmente em camundongos. Essa toxina atuou em todas as células
animais testadas, provocando violentas contrações de músculos lisos, estriados e cardíacos,
induzindo secreção massiva de células secretoras e despolarizando todo tecido excitável
investigado (Chau H. Wu, 2009).
Devido ao seu mecanismo não usual de ação, aos inúmeros tipos de células
afetadas e ao mascaramento do seu mecanismo, devido aos efeitos secundários gerados,
muitas conclusões erradas foram feitas a respeito do seu mecanismo de ação. Após anos
de investigação e discussão finalmente foi descoberto o mecanismo de ação dessa toxina.
Essa possui um mecanismo único que transforma a bomba de Na+/K+ em um canal iônico
não especifico para íons monovalentes. Esse canal permite o influxo de sódio e o efluxo de

potássio, acabando rapidamente como o equilíbrio iônico da célula e levando ao colapso

celular (Chau H. Wu, 2009).
Toxinas como ferramentas fisiológicas?

Além do potencial obvio de interferir nas vias metabólicas, e por esse motivo serem
utilizadas como remédios ou venenos, as toxinas ainda possuem uma terceira função de
extrema importância na área de pesquisa. Devido à grande especificidade que muitas
toxinas têm com sítios celulares específicos elas também se tornaram importantes
ferramentas no estudo de diversos processos fisiológicos.
A palitoxina é um bom exemplo, assim que seu mecanismo de ação foi
determinado essa toxina se tornou uma importante ferramenta no estudo do funcionamento
da bomba de Na+/K+. O melhor exemplo dessa utilidade foram os estudos realizados sobre a
influência da palitoxina na oclusão dos cátions (um passo intermediário no ciclo da bomba) e
na fosforilação da bomba (processo necessário para sua mudança de conformação) (Chau
H. Wu, 2009).
Outro bom exemplo são as conotoxinas citadas anteriormente. As -conotoxinas
são extensivamente usadas na neurociência e também em outras áreas de pesquisa para
estudar a função de subtipos de canais de cálcio. O subtipo mais utilizado de -conotoxina,
o GV1A, foi utilizado em mais de 2 mil papers publicados como ferramenta de estudo para
esses canais. Os conopeptídeos também são uma valiosa ferramenta na obtenção de
informação estrutural de seus alvos. Especialmente para proteínas transmembrânicas onde
pouca ou nenhuma informação estrutural esta disponível, a interação desses peptídeos
tóxicos pode ser usada como uma “impressão digital” da superfície de interação do alvo
(Becker e Teriau, 2008).
Dessa maneira podemos perceber como essas toxinas e muitas outras possuem
um papel fundamental na área de pesquisa, não apenas como potenciais drogas, mas como
importantes ferramentas para caracterização de diversos processos fisiológicos.

Lepidópteros: Aspectos biológicos e toxinológicos
Priscila Aparecida Ozzetti

Lab. Fisiopatologia - Inst. Butantan
[email protected]
Ordem Lepidoptera
Os lepidópteros estão descritos no Reino Metazoa, Filo Arthropoda, Subfilo
Hexapoda, Classe Insecta, Subclasse Pterygota, Ordem Lepidoptera (Brusca e Brusca,
2007). Essa ordem possui mais de 150 mil espécies descritas e inclui todo o grupo de
borboletas e mariposas (Funasa, 2001).
Os adultos alimentam-se primariamente de néctar e muitos são importantes
polinizadores, e alguns dos mais conhecidos pertencem à família Sphingidae. As lagartas ou
larvas são herbívoras (Ruppert e col, 2005). A alimentação das lagartas de importância
médica está baseada em folhas de árvores frutíferas comestíveis, como abacateiro,
ameixeira, pessegueiro ou mesmo em árvores nativas dentro das matas.
O ciclo de vida dos lepidópteros engloba as seguintes etapas: ovo, larva (lagarta),
pupa (crisálida) e a fase adulta (imago). Os períodos larvais mudam de acordo com a
espécie, mas a forma como ocorrem é semelhante. Depois da eclosão dos ovos, as lagartas
estão no que se chama de 1º instar e se alimentarão continuamente até atingirem o
tamanho máximo desta fase. Antes de passarem para o próximo instar, cessam sua
alimentação e tornam-se imóveis por um tempo devido a formação do novo tegumento que
é maior e mais colorido. Esse processo é chamado de ecdise ou muda. A fase larval é
constituída de 6 a 7 mudas, sendo que podem atingir até 7 cm de comprimento no último
instar. As glândulas salivares produzem seda que pode ser usada, entre outras finalidades,
na construção de um casulo dentro do qual a larva de último instar empupa (Moraes, 2009).
Os lepidópteros adultos apresentam corpo mole com as asas, corpo e apêndices
recobertos por escamas pigmentadas coloridas ou cerdas em forma de pêlo.
O corpo das lagartas urticantes é ornamentado dorsolateralmente por estruturas
pontiagudas, chamadas de cerdas, setas, ou pêlos e que contem glândulas secretoras de
toxinas (Moraes, 2009).
As borboletas e as mariposas estão entre os mais bem conhecidos e mais coloridos
de todos os insetos. As borboletas podem ser distinguidas das mariposas por duas
características: suas antenas são sempre longas e afiladas, terminando em um nódulo (as
antenas das mariposas nunca apresentam um botão na ponta), e suas asas são tipicamente
mantidas juntas sobre o corpo em repouso (as mariposas nunca mantêm suas asas nessa
posição) Mais de 80% das espécies descritas de Lepidoptera são mariposas (Brusca e
Brusca, 2007).

A grande maioria dos lepidópteros não apresenta riscos ao homem, como o bicho
da seda que é a lagarta da mariposa Bombix mori que desencadeou um grande
desenvolvimento econômico na produção do tecido (sericultura). Já outros lepidópteros
causam prejuízos às lavouras, onde as lagartas devoram o cultivo inteiro.
A Ordem Lepidoptera possui importância em saúde pública devido aos efeitos
danosos causados ao homem, pelo contato das cerdas de algumas espécies de lagartas
que contêm toxinas. Das famílias que compõem o grupo, as que apresentam interesse por
causarem acidentes no Brasil são a Megalopygidae, Saturniidae, Limacodidae e Arctiidae
(Moraes, 2009).
Denomina-se eruscismo as intoxicações causadas pelo contato com a lagarta de
diferentes famílias de lepidópteros. De acordo com a Tabela 1 podemos observar que
existem elevados números de acidentes ocorridos com lagartas, mas que o sistema de
notificação desses casos não restringe a família ou espécie por dificuldade de identificação
do animal pelos profissionais da saúde e também, em muitos casos, por não levar o animal
até a unidade de saúde.
Tabela 1 - Notificações de acidentes ocorridos com lagartas entre os anos de 2007 a 2009.
Tipo de 2 2 2 T
acidente 007 008 009 otal
Lagarta 3 3 3 1
.305 .907 .286 0.498
Fonte: Sinan (Sistema de Informação de Agravos de Notificação – Ministério da

Saúde).
A seguir descreveremos algumas características importantes das principais famílias

de lepidópteros de importância médica no Brasil.
Megalopygidae
Os megalopigídeos que merecem destaque por sua toxina é do gênero Podalia sp.
(Figura 1B). Possuem longas cerdas sedosas, recobrindo as cerdas pontiagudas que são
menores e inseridas no tegumento onde contêm as glândulas produtoras de veneno
(Moraes, 2009). São popularmente conhecidos pelos nomes de taturana-gatinho, taturana-
cachorrinho ou lagarta-de-fogo. O colorido dessas lagartas é variado, sendo as mais
comuns de cor marrons ou castanhas (Moraes, 2007). Por serem lentas e de aspecto
atraente, não aparentando agressividade, aguçam a curiosidade de crianças.

No momento do contato, o acidentado sente dor intensa local, sensação de

queimação, vermelhidão e ínguas. Esses sintomas regridem naturalmente e não deixam
seqüelas.
Nesta família outras espécies causadoras de eruscismo são Megalopyge albicolis
(Figura 1A), Megalopyge lanata e Megalopyge sp. Segundo o trabalho de Cardoso e
colaboradores (1992), que estudou os casos de erucismo atendidos pelo Hospital Vital Brazil
(HVB), observou que há predominância da família Megalopygidae.
Os megalopigídeos são encontrados em todo o Brasil e se alimentam de diversas
plantas, geralmente encontrados em árvores frutíferas como a goiabeira e são animais
solitários.
Figura 1- A) Lagarta de Megalopyge albicolis, B) Podalia sp. (modificado de Moraes, H.P.M.)
Saturniidae
A família Saturniidae possui cerdas venenosas em forma de espinhos aparentes,
chamado de scolus, são projetadas do tegumento e se assemelham a pequenos “pinheiros”.
A coloração normalmente é verde com desenhos variados no tegumento. Apresentam
hábitos gregários, vivendo em grupos com muitos indivíduos. Na família Saturniidae,
existem várias espécies que são de importância médica como a Automeris naranja,
Automeris leucanela, Dirphia sabina, Dirphia multicolor, sendo que as do gênero Hylesia
(Hylesia paulex, Hylesia nigricans) e do gênero Lonomia (Lonomia obliqua, Lonomia
achelous) são as que merecem destaque e serão descritas a seguir:
Hylesia sp.
Os acidentes desencadeados pelo contato com as formas adultas aladas de
mariposas são escassos, ao contrário dos acidentes pelas formas larvárias que são muito
comuns.
No caso particular de uma espécie de mariposa pertencente ao gênero Hylesia,
Fig.2A, da família Saturniidae, apresenta destaque para estudos já que o contato com suas
cerdas desenvolvem manifestações clínicas. Chama-se lepidopterismo o acidente
provocado pelo contato com as formas adultas (mariposas) desses artrópodes.
Figura 2 – A) Mariposa Hylesia paulex, B) membro acidentado com quadro pápulo-pruriginoso.

(modificado de Moraes, H.P.M.)
As mariposas provocam surtos epidêmicos em áreas rurais nos meses quentes e

chuvosos, quando circulam e se debatem contra focos de luz. Quando se debatem liberam
espículas ou cerdas que flutuam no ambiente, atingindo a superfície cutânea ou se
depositam em roupas e objetos. Somente as fêmeas adultas desse gênero apresentam
cerdas no abdome que causam dermatite (Haddad Junior e Cardoso, 2009).
A simples penetração das cerdas é capaz de provocar reações inflamatórias
intensas Figura 2B, manifestadas por pápulas e prurido (Cardoso e Haddad Junior, 2005).
As lesões são observadas em poucas horas após o contato com as cerdas e
acompanhadas de intenso prurido. O quadro completo ocorre em 7 a 14 dias após o início
dos primeiros sintomas (Haddad Junior e Cardoso, 2009). O exame histopatológico costuma
evidenciar inflamação intensa e pode mostrar a presença das cerdas (Moreira e col, 2007) e
até revelar áreas de necrose cutânea com infiltrado inflamatório de polimorfonucleares.
Pode causar comprometimento oftalmológico, como ceratite e irite. O tratamento mais
indicado é o uso de anti-histamínicos via oral e compressas frias, banhos de amido e até
cremes a base de corticosteróides, com uso tópico no local da dermatite (Haddad Junior e
Cardoso, 2009).
Lonomia sp.
Lonomia obliqua (Figura 3A) é geralmente encontrada nas regiões Sul e Sudeste do
Brasil. Os adultos vivem em média 15 dias e não se alimentam, pois seu aparelho bucal é
atrofiado. Após a cópula, fazem posturas dos ovos nas folhas e galhos de plantas nativas
como Alchornia (tapiá), porém pode se adaptar facilmente às frutíferas domiciliares. Depois
de 25 dias em média, as larvas eclodem dos ovos passando a se alimentar das folhas da
planta durante a noite. São gregárias, ou seja, vivem em grupos e podem ser vistas nos
troncos das árvores durante o dia (Figura 3B). Após a última ecdise, elas se transformam

em pupas, alojando-se na base das árvores, sob o húmus, pois a temperatura é mais alta.
Esta fase é muito importante no desenvolvimento do lepidóptero devido às mudanças
morfológicas e fisiológicas que ocorrem. Depois desse período de pupa formam os adultos,
reiniciando o ciclo biológico.
O aumento significativo da população de Lonomia gerou várias hipóteses, sem
contudo, terem sido explicadas em estudos mais aprofundados. Basicamente, alguns
aspectos sempre foram comentados como, por exemplo, a possível falta de inimigos
naturais devido à excessiva utilização de agrotóxicos e o desmatamento contínuo de
grandes áreas para diversos fins. (Moraes, 2002)
Apenas duas espécies do gênero Lonomia apresentam sintomas de alteração na
coagulação sanguínea e a morte de pessoas pelo contato acidental. Os primeiros registros
de acidentes hemorrágicos com vítimas fatais ocorreram na Venezuela com a lagarta
Lonomia achelous (Arocha-Pinango e Layrisse, 1969). Os primeiros relatos de acidentes no
Brasil com vários óbitos causados pela mesma espécie ocorreram no Estado do Amapá
(Fraiha Neto e col., 1985). A situação se repetiu em 1989 no Rio Grande do Sul e em Santa
Catarina, com L. obliqua, onde foram registrados quatro óbitos (Duarte e col., 1990).
Sempre que se aproxima o período quente, como as estações de primavera e verão
nos estados de Rio Grande do Sul e de Santa Catarina, aumenta a preocupação das
pessoas que vivem no meio rural e próximas de matas. Até nas áreas urbanas as pessoas
não estão livres desses insetos, pois já foram encontradas colônias em locais muito
próximos às residências (Lorini, 1999). Já foi relatada a presença de L. obliqua em
municípios dos estados da Bahia, Minas Gerais, Espírito Santo, Rio de Janeiro, São Paulo,
Paraná, Santa Catarina e Rio grande do Sul (Lemaire, 2002).
Na tabela 2 podemos observar o elevado número de acidentes por lagarta nos
estados do Paraná, Minas Gerais, São Paulo, Santa Catarina e Rio Grande do Sul. Apesar
de não apresentar o gênero e espécie do animal causador do acidente podemos considerar
que essa região é de predominância da L. obliqua, a qual apresenta quadros mais graves e
provavelmente mais internações em hospitais.
Os desmatamentos ocorridos nos Estados do Rio Grande do Sul e Santa Catarina
bem como o cultivo de monoculturas, provavelmente forçaram a adaptação de L. obliqua as
plantas próximas às residências. A utilização de agrotóxicos nas grandes culturas pode ter
diminuido os inimigos naturais, ainda desconhecidos, desequilibrando o controle natural da
lagarta. Sabe-se que a Moreiria wiedemanni, Lespesia affinis e a Belvosia sp. pertencentes
a Ordem Diptera e a Enicospilus sp. da Ordem Hymenoptera são inimigos naturais de L.
obliqua. O poliedrovírus LoobMNPV (Lonomia obliqua Multiplo Nucleopolyhedrovirus) é um
agente exterminador de colônias de L. obliqua (Moraes, 2002).

Tabela 2 - Notificações de acidentes ocorridos com lagartas nos Estados do Brasil em 2009.
UF notificação Lagarta
Paraná 906
Minas Gerais 794
São Paulo 433
Santa Catarina 364
Rio Grande do Sul 249
Tocantins 157
Amazonas 50
Alagoas 44
Bahia 42
Espírito Santo 34
Goiás 34
Mato Grosso do Sul 27
Rio Grande do Norte 24
Distrito Federal 20
Pará 20
Maranhão 16
Piauí 16
Rondônia 14
Mato Grosso 13
Pernambuco 12
Acre 9
Sergipe 4
Ceará 4
Rio de Janeiro 4
Paraíba 3
Amapá 2
Roraima 2
Total 3.297
Fonte: Sinan (Sistema de Informação de Agravos de Notificação – Ministério da Saúde).

Figura 3 – A) lagarta Lonomia obliqua, B) hábito gregário em troncos de árvores, C) equimose e D)

hematúria causada pelo acidente de L. obliqua. (modificado de Moraes, H.P.M.)
O acidentado chega ao hospital apresentando dor e queimação, eritema, edema,

prurido, dormência, bolhas e adenomegalia. As manifestações gerais mais comuns são
cefaléia, náusea, tonturas, dor abdominal e artralgia. Não são todos os pacientes que
apresentam sangramento à admissão, os mais comumente observados são gengivorragia,
sangramento pós-traumático ou em feridas recentes, equimose (Figura 3C), hematúria
(Figura 3D), epistaxe e hematêmese (vômito com sangue) ou melena (fezes com sangue) e
hemoptise (tosse com sangue) (Wen e Duarte, 2009). As hemorragias podem surgir
espontaneamente, no período de 1 a 72 horas após o contato, quando se instala um quadro
de discrasia sangüínea, com o aumento do tempo de coagulação (TC), até tornar-se
incoagulável. A insulficiência renal aguda é a principal complicação da síndrome
hemorrágica, estando presente em uma pequena porcentagem, cerca de 5% dos casos
(Funasa, 2001).
Não existem métodos diagnósticos específicos. O diagnóstico diferencial com as
dermatites urticantes provocadas por outros lepidópteros deve ser feito pela história clínica,
identificação do agente e presença de distúrbios hemostáticos. O sangue está incoagulável
na maioria dos casos e pode ser aferido pelo prolongamento do tempo de coagulação (TC),
do tempo de protrombina (TP), do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) e
diminuição dos níveis plasmáticos de fibrinogênio. A incoagubilidade sanguínea não é

detectada imediatamente após o acidente, mas depois de algumas horas ou até 24 horas. O
número de plaquetas não se mostram alteradas (Wen e Duarte, 2009).
Segundo o Manual de diagnóstico e tratamento de acidentes por animais
peçonhentos da Funasa (2001) de acordo com a intensidade dos distúrbios hemostáticos, o
acidente pode ser classificado em:
a) Leve: paciente com alteração local e sem alteração da coagulação ou
sangramentos até 48 horas após o acidente, confirmado com a identificação do agente;
b) Moderado: paciente com alteração local, alteração da coagulação somente ou
manifestações hemorrágicas na pele e/ou em mucosas (gengivorragia, equimose,
hematoma), hematúria e sem alteração hemodinâmica (hipotensão, taquicardia ou choque);
c) Grave: paciente com alteração da coagulação, manifestações hemorrágicas em
vísceras (hematêmese, hipermenorragia, sangramento pulmonar, hemorragia intracraniana),
e com alterações hemodinâmicas e/ou falência de múltiplos órgãos ou sistemas.
Em 1994 foi registrado um avanço no bloqueio da toxina e na recuperação de
vítimas com acidentes envolvendo a L. obliqua, a partir da produção do soro antilonômico,
pelo Instituto Butantan em São Paulo. A partir das cerdas das lagartas foi preparado um
extrato contendo o veneno para inoculação em cavalos, seguindo esquema de imunização
análogo ao dos demais soros antipeçonhentos. As recomendações para administração do
soro antilonômico (SALon) são estabelecidas de acordo com a gravidade do acidente
(Tabela 3).
Tabela 3 – Classificação da gravidade e orientação terapêutica nos acidentes por Lonomia.

Manife Quad Tempo Sangra Tratame
stações e ro local de coagulação mento nto
gravidade (TC)
LEVE Prese Normal Ausent Sintomát
nte e ico
MODE Prese Alterado Ausent Sintomát
RADO nte ou ausente e ou presente ico + soroterapia:
em pele/ 5 ampolas de
muscosas SALon
GRAV Prese Alterado Presen Sintomát
E nte ou ausente tes em vísceras ico + soroterapia:
Risco 10 ampolas de
de vida SALon
Fonte: modificado de Wen e Duarte, 2009.

A introdução do antiveneno mostrou ser um fator importante para redução da

mortalidade no envenenamento que pode ser evidenciada pela diminuição de complicações
e óbitos.
Limacodidae
Na família Limacodidae, a lagarta que merece destaque é a Sibine sp. (Figura 4).
Esses lepidópteros são lentos e pequenos com aproximadamente 20 mm, tem grande parte
do dorso nu e as cerdas de veneno ficam restritas à região cefálica e anal em aglomerados,
bem visíveis e distintos. Possuem coloração verde no dorso, amarelo no ventre e sua
principal característica é a ausência de falsas pernas. Geralmente são encontradas em
limoeiros (Moraes, 2009).
Figura 4 – Lagartas Sibine sp. (modificado de Moraes, H.P.M.)

Arctiidae
Da família Arctiidae, a única espécie de importância médica é a lagarta Premolis
semirufa (Figura 5A), conhecida popularmente como pararama. Possuem cerdas longas,
sedosas e inofensivas e as verdadeiras cerdas de veneno estão dispostas sobre “verrugas”.
Esses animais são coloridos e bonitos, realçando tufos dourados dorsais e falsas pernas
vermelhas (Moraes, 2009).
Figura 5 – A) lagarta Premolis semirufa, B) pararamose. (modificado de Moraes, H.P.M.)

A pararama é responsável pela periartrite falangeana, pararamose ou reumatismo

dos seringueiros (Figura 5B). Além dos sintomas iniciais de dor, edema e sensação de
queimadura, alguns pacientes evoluem para um quadro de limitação dos movimentos
articulares, fibrose periarticular e anquilose (deformações que simulam a artrite reumatóide)
(Funasa, 2001).
Acidentes com pararama são verificados apenas na Amazônia, região Norte do
Brasil (Moraes, 2009). As vítimas, em quase sua totalidade, são homens que se acidentam
durante o trabalho de coleta da seiva das seringueiras. Mais de 90% dos acidentes
comprometem as mãos, sendo a direita a mais atingida (Funasa, 2001). Os seringueiros
poderiam evitar os acidentes utilizando luvas durante a coleta, já que alguns casos o contato
com a lagarta pode trazer seqüelas graves com limitação dos movimentos articulares.

Raias – Biologia e envenenamento
Louise Faggionato Kimura

Laboratório de Imunopatologia - IBU
[email protected]
Introdução
Classificação taxonômica
As raias são cordados pertencentes à classe Chondrichthyes, a qual se divide em
duas subclasses, a Elasmobranchii e a Holocephali. Este grupo é composto por vertebrados
aquáticos caracterizados por apresentarem esqueleto cartilaginoso, o qual pode possuir
regiões calcificadas, conferindo maior rigidez e resistência aos membros. Os representantes
da subclasse Holocephali são as quimeras, animais muito primitivos, e a subclasse
Elasmobranchii é composta pelos tubarões e raias (Nelson, 1994).
As raias são agrupadas em diversas ordens, dentre elas a Myliobatiformes, a qual
agrupa as famílias de raias conhecidas como raias-de-ferrão, ou “stingrays” no inglês, por
possuírem um ou mais ferrões em sua cauda, com exceção da família Mobulidae. As raias-
de-ferrão estão agrupadas em cinco diferentes famílias, constituídas por animais marinhos
(Gymnuridae, Dasyatidae, Myliobatidae, Rhinopteridae e Urolophidae) e somente uma
família é restrita a rios de água doce da América do Sul (Potamotrygonidae) (Garrone;
Haddad Jr., 2009).
As raias pertencentes à família Gymnuridae, conhecidas como raias-borboletas
(“butterfly rays”), apresentam cauda curta e uma grande envergadura (Figura 1A). Estão
amplamente distribuídas pelos mares tropicais. Já as raias da família Dasyatidae são
popularmente conhecidas como raias-com-cauda-de-chicote, do inglês “whiptail stingrays”
(Figura 1B) e estão distribuídas por todo o Oceano Atlântico e alguns exemplares aparecem
também no Mar Mediterrâneo.
A família Rhinopteridae é composta por exemplares popularmente conhecidos
como raias-com-nariz-de-vaca (“cownose rays”) (Figura 1C) e apresentam uma distribuição
ampla pelos oceanos, assim como as raias da família Urolophidae (Figura 1D) e da família
Myliobatidae (“eagle rays”) (Figura 1E), porém estas últimas costumam apresentar-se em
bandos.
As únicas raias-de-ferrão que habitam rios de água doce na América do Sul
pertencem à família Potamotrygonidae e estão localizadas tanto nos sistemas de rios da
Bacia Araguaia-Tocantins como nos rios da Bacia Paraná-Paraguai, no Brasil, existindo até
mesmo uma espécie endêmica de um único rio (Potamotrygon leopoldi) (Carvalho e col.,
2003).

A B
C D
E F
Figura 1: Exemplares de raias-de-ferrão das famílias Gymnuridae (Gymnura altavela) em A,

Dasyatidae (Dasyatis kuhlii) em B, Rhinopteridae (Rhinoptera bonasus) em C, Urolophidae (Urobatis
concentricus) em D, Myliobatidae (Myliobatis aquila) em E, e Potamotrygonidae (Potamotrygon
motoro) em F. Fonte: www.elasmodiver.com.
Morfologia
Geralmente, as raias apresentam corpo achatado dorsiventralmente, com
avantajadas nadadeiras peitorais fusionadas à cabeça, e uma cauda terminal. Possuem de
5 a 7 pares de fendas branquiais e, na maioria dos exemplares, o corpo é coberto por
escamas placóides (dentículos dérmicos). Em algumas espécies também aparecem
nadadeiras caudais e dorsais, mas nenhum destes elasmobrânquios apresenta nadadeira
anal, diferindo-se da maioria dos tubarões.

Como a maior parte das raias possui hábito bentônico, elas permanecem por algum
tempo enterradas em areia ou lodo, deixando à mostra apenas os olhos, os espiráculos e a
cauda (Meyer, 1997; Garrone Neto; Haddad Jr., 2009). Os espiráculos, os quais se
localizam próximo aos olhos, permitem o fluxo contínuo de água e oxigenação das
brânquias, o que normalmente acontece quando o animal está em movimento. Além disso,
algumas espécies apresentam certos acessórios, como espinhos dorsais, órgão elétrico ou
ferrões na cauda, presentes nas espécies da ordem Myliobatiformes, exceto a família
Mobulidae, como dito anteriormente. Estes ferrões podem se posicionar tanto na porção
proximal, mediana, ou ainda na porção distal na cauda (Figura 2), sendo que esta última
localização facilita ainda mais a ocorrência dos acidentes.
Figura 2: Diferentes posicionamentos dos ferrões nas caudas das raias, o que pode interferir na
incidência de acidentes pelas espécies. Fonte: Garrone Neto e Haddad Jr., 2010.
Biologia
As raias são animais de ambientes bentopelágicos. Geralmente, encontram-se
enterradas em covas rasas na areia ou lodo, o que dificulta sua visualização (Pardal, 2003),
ou podem ainda viver em cardumes. Sua alimentação é variada, sendo à base de pequenos
crustáceos, vermes e moluscos (Acott; Meier, 1995; Meyer, 1997) (Figura 3A). São animais
que se reproduzem, na maioria das vezes, de forma ovovivípara, com fecundação interna.
Para tanto, durante o acasalamento, os machos se utilizam de um órgão acessório
exclusivo, o clásper, o qual é introduzido na cloaca da fêmea no momento da fecundação
(Figura 3B). Os clásperes são modificações das nadadeiras pélvicas, responsáveis pelo
dimorfismo sexual presente nos elasmobrânquios em geral (Figura 4).

A B
Figura 3: Exemplar de raia marinha alimentado-se de um molusco (A) e o acasalamento entre raias
da família Urolophidae (B). Fonte: www.compfight.com e www.elasmodiver.com
Figura 4: Dimorfismo sexual entre raias pela presença do clásper (setas) no macho à direita da foto.
Fonte: www.fao.org.
Raias de água doce

As espécies de raias de água doce estão presentes em rios da América do Sul, na
África Equatorial e em um sistema de rios Indo-Chinês (Magalhães e col., 2008). Na
América do Sul, as raias de água doce pertencem à família Potamotrygonidae, composta
por três gêneros: Plesiotrygon, Paratrygon e Potamotrygon (Rosa, 1991), que até o
momento, agrupam 18 espécies descritas, no total. Algumas espécies dessa família são
endêmicas em rios do Brasil, como àquelas presentes na Bacia do rio Paraná, Tocantins e
seus afluentes (Carvalho e col., 2003) (Figura 5A).

A B
Figura 5: Espécie de Potamotrygon falkneri (A) e a presença de dois ferrões em sua cauda (B).
As raias do gênero Potamotrygon possuem um ou mais ferrões mineralizados

retroserrilhados bilateralmente localizados na região mediodistal do dorso da cauda, a qual é
robusta e pode acompanhar o tamanho corporal do animal (Rosa, 1991) (Figura 5B). Essas
espécies eram restritas à jusante da barreira natural de Sete-Quedas localizada nas
proximidades do Município de Guairá, no estado do Paraná. Porém, com a construção da
hidrelétrica de Itaipu em 1982, essa barreira natural foi submersa, possibilitando a invasão
destes elasmobrânquios e de outras espécies aquáticas no alto do Rio Paraná e
adjacências, como os rios Paranapanema e Tietê (Figura 6). Atualmente, após cerca de 20
anos da construção de Itaipu, populações de raias estão se estabelecendo a mais de 350
quilômetros do ponto de sua dispersão inicial, aumentando cada vez mais a incidência de
acidentes (Garrone Neto e Haddad Jr., 2010).
Ferrão
O ferrão presente nas raias-de-ferrão é uma estrutura mineralizada recoberto por
camadas de células epidérmicas ricas em conteúdo protéico. Por não apresentarem uma
glândula específica produtora de toxinas, as raias são classificadas como animais
venenosos, e o extrato obtido da raspagem do tecido que recobre o ferrão é o que
chamamos de “veneno”.
Pedroso e colaboradores (2007) analisaram histologicamente o ferrão de algumas
espécies de raias dulcícolas e marinhas e verificaram algumas diferenças entre eles. O
ferrão das raias marinhas Dasyatis guttata e Aetobatus narinari apresentaram células
especializadas, ricas em material protéico, apenas ao redor ou nos sulcos do ferrão (Figura
7A). Em contrapartida, nos ferrões das espécies de água doce Potamotrygon falkneri, P.
orbignyi e P. leopoldi, um grande número dessas células encontravam-se organizadas em
uma camada epidérmica intermediária que cobria todo o ferrão (Figura 7B). Segundo os
autores, a variabilidade observada na distribuição e na quantidade dessas células
especializadas poderia influenciar no quadro clínico observado nos envenenamentos por

raias fluviais que, usualmente, são mais graves e apresentam maior porcentagem de
necrose quando comparados aos acidentes por raias marinhas.
Figura 6: Mapa ilustrativo

da região do Rio Paraná,
no Brasil, onde espécies
de raias tornaram-se
invasoras a partir da
construção da Usina de
Itaipu, em 1982. Este
evento causou a
inundação da barreira
natural de Sete-Quedas,
no estado do Paraná, o
que propiciou a invasão
destes e de outros
animais rumo à montante.
Fonte: Garrone Neto e
Haddad Jr., 2010.
Figura 7: Fotomicrografia de corte transversal do ferrão de raias do gênero Dasyatis (A) e

Potamotrygon (B). No centro é possível observar a região mineralizada (MR) e, ao redor, a presença
de células especializadas (*) na epiderme (E). Fonte: Pedroso et al., 2007.

Peçonha
O veneno das raias é constituído por muitos componentes tóxicos e/ou enzimáticos.
Barbaro e colaboradores (2007) compararam as atividades dos venenos da raia marinha D.
guttata e da raia dulcícola P. falkneri em modelo murino. Os autores verificaram que ambos
os venenos foram capazes de induzir nocicepção e edema em resposta à injúria no tecido,
embora o veneno de P. falkneri demonstrou induzir maior nocicepção. Porém, somente o
veneno de P. falkneri causou atividade miotóxica, letal, inflamação local intensa e necrose,
corroborando com dados anteriores que relatam que a injúria do envenenamento por raias
de água doce em seres humanos é mais severa quando comparada à induzida por raias
marinhas (Haddad Jr, 2000; Haddad Jr e col., 2004).
Certos componentes presentes nos venenos de raias já foram descritos. Alguns
deles com atividades proteolítica e hialuronidásica presentes no veneno da Dasyatis guttata
(marinha) e da Potamotrygon falkneri (dulcícola) foram identificados (Barbaro e col., 2007).
Além disso, o veneno da raia fluvial Potamotrygon motoro apresenta fosfolipases, fosfatases
ácidas, gelatinases, proteases e elastases (Magalhães, 2001), bem como a enzima
hialuronidase, já isolada e caracterizada (Magalhães e col., 2008). Outros componentes
também foram isolados, como o peptídeo vasoconstritor, denominado Orpotrin, e um
peptídeo bioativo, chamado de Porflan, ambos isolados do veneno da raia Potamotrygon
orbignyi (Conceição e col., 2006, 2009). Este último induz o rolamento de leucócitos pelo
endotélio. Porém, até o momento, são poucos os estudos sobre componentes isolados e
caracterizados dos venenos de raias, no geral.
Acidentes, Sintomatologia e Tratamento

Os acidentes por raias fluviais, no Brasil, ocorrem quando os humanos, em sua
maioria os pescadores, manipulam ou pisam acidentalmente no dorso desses animais e
estes, como um comportamento defensivo, giram a cauda em direção ao local estimulado,
permitindo a inserção do ferrão. Por esses motivos, os membros superiores e inferiores são
os mais acometidos (Haddad Jr e col., 2004).
O envenenamento por raias de água doce em seres humanos é caracterizado por
apresentar dor local intensa, lancinante e imediata. Isto ocorre tanto pelas propriedades do
veneno como pelo próprio trauma mecânico causado pela ferroada. Este sintoma é seguido
por formação de edema e eritema, com eventual aparecimento de ulceração, infecção
secundária e necrose (Figura 8). Manifestações sistêmicas também são relatadas,
principalmente na fase aguda, como: febre, mialgia, vômito, tontura e enxaqueca.
Dependendo da injúria, o local pode sangrar intensamente (Haddad Jr. e col., 2004;
Magalhães e col., 2006; Barabaro e col., 2007). Até o momento, o Brasil não possui

registros de morte em consequência de acidentes por raias, embora casos fatais envolvendo
espécies marinhas em decorrência de perfurações torácicas e abdominais são descritos na
literatura internacional (Halstead e col., 1990; Pardal, 2003; Haddad Jr.e col., 2004).
Figura 8: Acidente com arraia fluvial Presidente Epitácio - SP, o qual apresentou necrose superficial
instalada após 48 horas do acidente (A) e escara enegrecida resultante do tecido necrosado após 8
dias. Fonte: Garrone Neto e Haddad Jr., 2010.
Até o momento, não existe um soro comercial específico para o tratamento do

envenenamento por raias. A terapêutica é sintomática, e consiste primeiramente na limpeza
da ferida e retirada do ferrão ou de seus fragmentos, que devem ser realizados por
profissionais em hospitais. Para alívio da dor, a administração de anestésicos, analgésicos,
antiinflamatórios, compressas e inserção do membro acometido em água quente são
utilizados. Este último tratamento é realizado a fim de desnaturar proteínas do veneno e
dissipar as toxinas pela vasodilatação causada pela água quente (HADDAD JR, 2000).
Os estudos com toxinas de raias são importantes uma vez que podem dar
subsídios para o entendimento do mecanismo de ação deste veneno e, com isso, procurar
alternativas para o tratamento, já que a dispersão destes animais está aumentando e o risco
de acidentes está se tornando cada vez maior.

Serpentes peçonhentas do Brasil: Biologia, Fisiologia e Epidemiologia
Luana Valente Senise

Laboratório de Fisiopatologia – Inst. Butanã
[email protected]
Introdução
As serpentes são os representantes da subordem Ophidia, que juntamente com a
Subordem Sáuria e Amphisbaenia, compõem a Ordem Squamata, o mais moderno e
numeroso grupo dos répteis viventes (Melgarejo, 2003; Cubas e col., 2007). No Brasil,
Ophidia é representada por nove famílias, 75 gêneros e 321 espécies (Franco, 2003; Cubas
e col. 2007).
Algumas das características diagnósticas que definem o grupo das serpentes são o
corpo extremamente alongado, sem apêndices locomotores e cintura escapular, o
fechamento lateral da parede da caixa craniana, a substituição da sutura óssea das
hemimandíbulas por um ligamento elástico, e a perda de pálpebras móveis (Franco, 2003).
Apesar da ausência de membros locomotores, características singulares
relacionadas aos órgãos sensoriais permitiram às serpentes explorar os ecossistemas de
que fazem parte. Estes animais tem o sentido da audição relacionada à sensibilidade a
vibrações no substrato (Schimidt-Nielsen, 2002) uma vez que o sistema auditivo não seria
tão sensível ao som quanto a vibrações sentidas por mecanorreceptores presentes ao longo
do corpo e na região da cabeça (Hartline, 1971). A visão está mais vinculada à detecção de
movimentos que de formas (Melgarejo, 2003). Funcionalmente, as serpentes são lagartos
ápodes extremamente especializados. Diferenças entre os olhos de lagartos e de serpentes
são interpretados como uma evidência da transição de um ambiente de superfície para um
ambiente fossorial (de escavação subterrânea). Nos lagartos, os olhos são focalizados pela
distorção das lentes, modificando assim seu raio de curvatura, enquanto nas serpentes, as
lentes são movimentadas em relação à retina, colocando o objeto em foco. Existem
diferenças também na própria morfologia da retina. As serpentes não possuem fóvea
central, suas células retinianas não possuem gotículas coloridas de óleo e existe um único
cone duplo, exclusivo desse grupo de répteis. Essas diferenças podem indicar que os
ancestrais das serpentes passaram por um estágio no qual eram tão especializados para a
escavação que os olhos haviam quase sido perdidos. Entre as serpentes e os lagartos
escavadores mais especializados, os olhos são muito reduzidos e provavelmente capazes
de distinguir somente estágios de luz ou escuridão. De acordo com essa hipótese, o olho
evoluiu novamente quando as serpentes reocuparam a superfície (Melgarejo, 2003; Pough e
col., 1999). Já o sentido do olfato não estaria vinculado à presença de epitélio nas fossas
nasais, mas sim a um mecanismo de varredura de partículas suspensas no ar. A partir da

projeção e vibração da língua bífida, cujas extremidades se encontram amplamente

separadas e podem mover-se independentemente, partículas são capturadas e, após a
retração do órgão, são encaminhadas para o órgão de Jacobson, uma estrutura
quimiorreceptora revestida por epitélio sensorial localizada na região anterior do céu de
boca (Pough e col., 1999; Schmidt-Nielsen, 2002).
As estruturas denominadas fossetas loreais merecem atenção especial. Órgãos
característicos de serpentes peçonhentas da família Viperidae, estes funcionam como
receptores especializados de radiação infravermelha que detectam alterações de calor no
ambiente, sendo usados na procura e captura de presas (Schmidt-Nielsen, 2002; Melgarejo,
2003). Todas as serpentes que possuem esses órgãos receptores alimentam-se
preferencialmente de presas homeotérmicas. As fossetas são estruturas membranosas,
finas e transparente, localizadas bilateralmente entre as narinas e os olhos, que separam
duas câmaras, uma interna e outra externa. Existem várias hipóteses que tentam explicar o
mecanismo de funcionamento da fosseta. A mais provável está relacionada à discreta
elevação de temperatura produzida quando a radiação infravermelha atinge a membrana. A
radiação infravermelha pura pode ser produzida pelo laser, e experimentos com tal radiação,
com comprimento de onda conhecido, fornecem fortes evidências de que o tipo de recepção
da fosseta loreal é inteiramente térmica (Harris e Gamow, 1971; Schmidt-Nielsen, 2002).
As serpentes podem apresentar atividade predominantemente diurna ou noturna,
mas existem espécies que são ativas nos dois períodos. O padrão de atividade pode estar
relacionado com a procura de alimento, de parceiro para acasalamento, de locais de
desova, ou mesmo para controle da temperatura corporal. Por se tratarem de animais
ectotérmicos, estas dependem da temperatura externa para manter sua temperatura
corpórea. Assim, buscam locais adequados para que possam se aquecer, ou mesmo esfriar.
A termorregulação das serpentes ocorre principalmente durante o período diurno. Nesse
período, esses animais podem ser encontrados em locais com mosaicos ensolarados e
sombreados, que fornecem camuflagem e abrigo contra predadores (Marques e Sazima,
2003).
Com relação à alimentação, pode-se dizer que as serpentes são animais
exclusivamente carnívoros, que apresentam ampla diversidade de hábitos alimentares.
Dependendo da espécie, podem se alimentar de invertebrados, como moluscos, anelídeos e
artrópodes, e vertebrados, como peixes, anfíbios, lagartos, aves, mamíferos, além de outras
serpentes. Algumas espécies são especialistas e se alimentam de um único ou de poucos
tipos de presas, enquanto outras são generalistas, incluindo em sua dieta uma ampla
variedade de presas. O hábito de se alimentar pode se modificar ao longo da vida. Observa-
se em diversas espécies do gênero Bothrops a mudança do padrão de alimentação, uma
vez que indivíduos jovens que se alimentam de presas ectotérmicas como anfíbios, lagartos

e lacraias, passam a se alimentar de presas endotérmicas, como mamíferos, quando se

tornam adultos (Marques e Sazima, 2003). Modificações corporais permitem que esses
animais se alimentem de grandes presas inteiras, maiores que seu diâmetro (Franco, 2003).
Assim sendo, a especialização alimentar está diretamente ligada à morfologia do crânio das
serpentes. Nesses animais, o crânio é muito mais flexível que o de um lagarto por possuir
um maior número de ligações móveis com articulações que permitem rotação, o que
ocasiona uma maior complexidade de movimentos. Nas mandíbulas existe uma região
frouxamente conectada por um ligamento elástico, a hemimandíbula, que juntamente com a
pele flexível da boca e pescoço permitem que as extremidades mandibulares se separem,
de modo que a porção mais larga da presa passe ventralmente à articulação da mandíbula
com o crânio (Gans, 1961; Pough e col., 1999).
O desenvolvimento evolutivo da dentição ocorreu possivelmente de forma
simultânea ao da glândula de veneno, sendo que o estágio extremo de especialização da
estrutura inoculadora, bem como da própria glândula, é observado nos membros família
Viperidae (Kochva, 1987; Melgarejo, 2003). Com relação ao mecanismo de inoculação da
peçonha de serpentes, são caracterizados três estágios evolutivos de adaptações que
levam em conta principalmente a dentição (Pough e col., 1999; Melgarejo, 2003):
Serpentes opistóglifas (opistho= atrás; glyph= sulcado): possuem um ou mais
dentes aumentados, próximos à porção caudal do maxilar, com dentes menores na frente.
Em algumas formas, as presas inoculadoras são maciças, em outras, há um sulco na
superfície da presa que pode ajudar na condução da peçonha dentro do ferimento.
Serpentes proteróglifas (proto= primeiro): incluem as serpentes marinhas da
família Elapidae. As presas inoculadoras canaliculadas dessas serpentes estão localizadas
na porção cranial do maxilar e, muitas vezes, há vários dentes pequenos e maciços atrás
das presas. Estas são permanentemente eretas e relativamente curtas.
Serpentes solenóglifas (solen= tubo): incluem as serpentes Viperidae. Nessas
serpentes, as presas inoculadoras canaliculadas são os únicos dentes do maxilar, que giram
de modo a dobrarem-se contra o teto da boca quando as maxilas estão fechadas. Esse
mecanismo de dobramento torna possível a presença de dentes inoculadores longos, que
injetam a peçonha profundamente no tecido da presa.
Em comparação com serpentes constritoras, a aptidão de serpentes solenóglifas
de injetar uma dose letal de peçonha consiste em um método mais seguro de captura, uma
vez que o contato direto com as presas acarreta risco de ferimento por conta das tentativas
de fuga da própria presa. Uma presa inoculada com a peçonha está livre para fugir, mas
acaba deixando uma trilha de odor que pode ser seguido pela serpente, que a encontra já
sem vida. Este é o padrão de captura da maioria dos membros da família Viperidae. É
interessante ressaltar que uma serpente é capaz de distinguir a trilha de odor de um rato

que foi mordido por ela, de trilhas deixadas por ratos que não foram atacados (Pough e col.,
1999).
Distribuição geográfica
As serpentes têm ampla distribuição e ocupam praticamente todos os tipos de
ambientes disponíveis, desde os terrestres, subterrâneos (fossoriais) e arborícolas, até
águas continentais e oceânicas. Porém, por se tratarem de animais ectotérmicos,
encontram-se normalmente ausentes em regiões de frio intenso (Schmidt-Nielsen, 2002;
Franco, 2003; Marques e Sazima, 2003; Cubas e col., 2007). Diversas espécies de
serpentes peçonhentas brasileiras, como a grande maioria das representantes do gênero
Micrurus, a maioria das Bothrops e todas as Lachesis, necessitam de sombra e umidade,
sendo então dependentes de áreas florestadas. A exceção no gênero Micrurus é a Micrurus
ibiboboca, que habita ambientes abertos de Caatinga, no gênero Bothrops as espécies dos
grupos neuwiedi e alternatus, que vivem em áreas abertas, e a espécie Bothrops moojeni,
que é típica de áreas de Cerrado, mas vive associada às Matas ciliares que margeiam os
rios. O gênero Crotalus é típico de áreas abertas. Observa-se que sua distribuição
geográfica está em expansão por conta de desmatamentos e aumento da área destinada à
pecuária (Marques e Sazima, 2003).
Veremos a seguir ilustrações do padrão de distribuição geográfica das principais
espécies de Micrurus, Bothrops, Lachesis e Crotalus, juntamente com informações mais
detalhadas de cada um destes gêneros de serpentes peçonhentas que ocorrem no Brasil.
Famílias e Gêneros
Família Viperidae Laurenti, 1798

A família Viperidae, compreende cerca de 250 espécies. Os membros desta família
possuem aparelho inoculador do tipo solenóglifo, cabeça triangular, recoberta de pequenas
escamas de aspecto similar às do corpo, e fosseta loreal (Melgarejo, 2003). Dentro desta
família se encontra a subfamília Crotalinae Oppel, 1811, que contém três dos gêneros mais
importantes do ponto de vista de acidentes ofídicos: Bothrops Wagler, 1824, Crotalus
Linnaeus, 1758, e Lachesis Daudin, 1803.
Gênero Bothrops Wagler, 1824

As serpentes do gênero Bothrops são popularmente conhecidas como jararaca,
ouricana, jararacuçu, urutu-cruzeira, jararaca do rabo branco, malha de sapo, patrona,
surucucurana, combóia e caiçaca (Pinho e Pereira, 2001). Este gênero é composto por
algumas das espécies responsáveis pela maioria dos acidentes ofídicos registrados no

Brasil, como a Bothrops erythromelas, Bothrops neuwiedi, Bothrops atrox, Bothrops

jararacussu, Bothrops alternatus, Bothrops leucurus, Bothrops moojeni, e principalmente a
Bothrops jararaca (Jorge e Ribeiro, 2000; Pinho e Burdmann, 2001; Melgarejo, 2003;
Santoro e col., 2008), além de espécies raras, ou endêmicas, como a Bothrops insulares
(restrita a Ilha de Queimada Grande) (Zelanis e col., 2007) e Bothrops alcatraz (Furtado,
2005) (restrita a Ilha de Alcatrazes).
Morfologicamente, as espécies do gênero Bothrops podem ser caracterizadas por
possuírem a cauda sem maiores modificações (sem guizo), apresentando geralmente
escamas subcaudais em pares. O padrão de cores pode variar muito, dependendo da
espécie e da região onde vivem. Podem habitar desde áreas abertas e campos (B.
alternatus), regiões de Caatinga (B. erythromelas) e Cerrado (B. moojeni), beiras de rios e
igarapés (B. atrox) e faixas litorâneas (B. leucurus) (Melgarejo, 2003). Algumas espécies
têm grande capacidade adaptativa, como a B. jararaca, que pode ser encontrada
colonizando áreas silvestres, agrícolas, suburbanas e até urbanas, tendo preferência para
ambientes úmidos, como matas e áreas cultivadas e locais onde haja facilidade para
proliferação de roedores. (FUNASA, 2001).
Recentemente, em revisão taxonômica do gênero Bothrops (Fenwick e col., 2009)
baseada em dados obtidos por análises filogenéticas, moleculares e morfológicas, foi
proposta uma mudança na classificação do gênero, com a criação de um novo gênero,
denominado Bothropoides. Este passaria a incluir algumas das espécies de Bothrops, como
B. jararaca, B. erythromelas e B. neuwiedi, sendo esta última definida como a espécie tipo
do gênero. Ainda não há um consenso pela adoção do gênero Bothropoides e, portanto,
para fins didáticos, manteremos a classificação antiga ao nos referirmos à Bothrops.
A seguir pode-se visualizar a distribuição geográfica das espécies de Bothrops de
maior importância para a saúde pública. Populações destas espécies são muito abundantes
e apresentam uma ampla distribuição por todo o território nacional.
Figura 1: Distribuição geográfica de Bothrops alternatus (Modificado de Cardoso e col., 2003).

Figura 2: Distribuição geográfica de Bothrops atrox (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Figura 3: Distribuição geográfica de Bothrops erythromelas (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Figura 4: Distribuição geográfica de Bothrops jararaca (Modificado de Cardoso e col., 2003).

Figura 5: Distribuição geográfica de Bothrops jararacussu (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Figura 6: Distribuição geográfica de Bothrops leucurus (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Figura 7: Distribuição geográfica de Bothrops moojeni (Modificado de Cardoso e col., 2003).

Figura 8: Distribuição geográfica de Bothrops neuwiedi (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Gênero Crotalus Linnaeus, 1758

Popularmente conhecidas por cascavel, boicininga, maracambóia e maracá, as
serpentes do gênero Crotalus são representadas na Neotropical (e parte da região Neártica)
por um complexo de espécies, o complexo Crotalus durissus. As espécies deste complexo
são encontradas em locais abertos e sazonalmente secos e se distribuem desde o México
até o norte da Argentina, estando ausentes na América Central e na região Amazônica,
formando assim um padrão de distribuição descontínuo (Wüster e col., 2005). No Brasil, as
Crotalus durissus habitam regiões de Cerrado central, regiões áridas e semi-áridas do
Nordeste e os campos abertos do Sul, Sudeste e Norte, com clara preferência para áreas
secas, arenosas e pedregosas (Melgarejo, 2003). Ao longo do território nacional, são
reconhecidas cinco subespécies deste complexo, que podem ser denominadas formas
geográficas de acordo com seu padrão de distribuição: Crotalus durissus terrificus,
encontrada nas zonas altas e secas da região sul oriental e meridional; Crotalus durissus
collilineatus, distribuídas nas regiões secas dos Estados de São Paulo, Mato Grosso, Minas
Gerais, Distrito Federal e Goiás; Crotalus durissus cascavella, encontrada nas áreas da
caatinga do nordeste; Crotalus durissus ruruima, observada na região norte do país e
Crotalus durissus marajoensis, observada nas áreas abertas de Ilha de Marajó, Pará
(Melgarejo, 2003).
As cascavéis são serpentes terrestres, robustas e pouco ágeis. Não têm hábito de
atacar e, quando ameaçadas, denunciam sua presença pelo ruído característico do
chocalho (ou guizo), estrutura morfológica característica de Crotalus, que se localiza na
extremidade caudal. O corpo, com a linha vertebral bem pronunciada, apresenta um colorido
de fundo castanho-claro, de tonalidades variáveis, sobre o qual se destaca uma fileira de
manchas dorsais em forma de losango, de cor marrom, mais ou menos escuras e
marginadas de branco ou amarelo (Melgarejo, 2003).

Pode-se visualizar abaixo a distribuição geográfica do complexo C. durissus no

Brasil.
Figura 9: Distribuição geográfica do complexo Crotalus durissus (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Gênero Lachesis Daudin, 1803

As popularmente conhecidas surucucus são serpentes muito temidas por sua
agilidade e tamanho. Estas representantes do gênero Lachesis são as maiores serpentes da
família Viperidae, podendo chegar a 3,5 metros de comprimento. São conhecidas três
espécies: Lachesis stenophrys, Lachesis melanocephala e Lachesis muta. A L. stenophrys é
encontrada na costa atlântica da Costa Rica, Panamá e noroeste da América do Sul,
enquanto a L. melanocephala é encontrada apenas na costa pacifica do sudoeste da Costa
Rica. Já a espécie L. muta é encontrada na Amazônia brasileira, em áreas de mata Atlântica
e enclaves de matas úmidas do nordeste (Málaque e França, 2003; Melgarejo, 2003;
Fernandes, 2004). Morfologicamente, as espécies deste gênero também possuem fosseta
loreal, assim como os demais gêneros da família Viperidae, porém a característica que
diferencia este dos outros gêneros é a presença de cauda com escamas eriçadas (Málaque
e França, 2003). Além disso, como exceção numa família de espécies vivíparas, as
Lachesis são ovíparas (Melgarejo, 2003).
Pode-se visualizar abaixo a distribuição geográfica de L. muta.

Figura 10: Distribuição geográfica de Lachesis muta (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Família Elapidae Boie, 1727

A família Elapidae compreende 55 gêneros, amplamente distribuídos ao longo do
globo, e totalizam aproximadamente 250 espécies que ocupam ambientes terrestres e
marinhos. Esta é a família das conhecidas serpentes do gênero Naja, presentes no
Continente asiático e africano, e das temidas mambas africanas do gênero Dendroaspis
(Melgarejo, 2003; Silva Jr e Bucaretchi, 2003). Os Elapíneos marinhos estão incluídos na
subfamília Hydrophiinae e Lauticaudinae, sendo que esta última contém espécies totalmente
adaptadas a vida marinha. Praticamente metade dos gêneros de Elapidae estão restritos ao
Continente australiano e fazem parte da subfamília Notechinae. Já a subfamília Elapinae
Bóie, 1727, agrupa todas as serpentes não australianas, sendo representada pelos gêneros
Micruroides Schmidt, 1928, cujos exemplares se distribuem pelo sul dos Estados Unidos e
México, Leptomicrurus Schmidt, 1937, distribuídos pela América do Sul, e Micrurus Wagler,
1824, com espécies distribuídas do sul dos Estados Unidos até a Argentina (Silva Jr e
Bucaretchi, 2003). Nas Américas, as popularmente conhecidas corais fazem parte do
gênero Micrurus, que possui mais de 50 espécies descritas no mundo, e no Brasil,
compreendem cerca de 18 espécies distribuídas em todo o território nacional (Melgarejo,
2003).
Gênero Micrurus Wagler, 1824

As serpentes representantes do gênero Micrurus são popularmente conhecidas
como cobra coral, coral verdadeira, ibiboboca ou boicorá. As espécies mais comuns são a
Micrurus corallinus, encontrada na região sul e litoral da região sudeste; Micrurus frontalis,
também encontrada nas regiões Sul, Sudeste e parte do Centro-Oeste e Micrurus
lemniscatus, distribuídas nas regiões Norte e Centro-Oeste (Melgarejo, 2003).

O termo de origem grega Micrurus significa pequena cauda, e advém da

característica cauda curta e roliça destes animais. Estas serpentes são ovíparas, e
apresentam dentição do tipo proteróglifa, cabeça oval recoberta por grandes placas de
escamas simétricas, e fosseta loreal ausente (diferentemente dos membros da família
Viperidae). Os olhos são pequenos e pretos, com pupilas elípticas verticais, e estão quase
sempre localizados em uma faixa preta da cabeça (Melgarejo, 2003; Silva Jr e Bucaretchi,
2003).
A grande maioria das espécies possui o padrão de coloração das escamas
formando anéis completos em torno do corpo, que se encontram isolados ou em tríades, em
tons de vermelho, amarelo (ou branco) e preto, e formam uma coloração de advertência, de
característica aposemática. O mesmo padrão de coloração ocorre em um complexo de
espécies miméticas, cujos representantes são em sua maioria da Família Dipsadidae. Essas
espécies similares são as denominadas “falsas corais”, porém, nota-se que esses animais
são desprovidos de dentição inoculadora (opistóglifa) e que a configuração dos anéis nem
sempre envolve toda a circunferência do corpo (Melgarejo, 2003; Silva Jr e Bucaretchi,
2003).
A alimentação é geralmente composta por pequenas serpentes e outros répteis
serpentiformes. São animais de hábitos fossoriais ou subfossoriais, habitando a serrapilheira
que cobre o chão das matas ou a camada superficial do solo. O hábito escavador acarretou
um fortalecimento dos ossos do crânio e da musculatura cervical, tornando o pescoço
destes animais pouco pronunciado. Sendo assim, os representantes do gênero Micrurus
apresentam notadas limitações na cinética craniana. A abertura bucal, que não ultrapassa
um ângulo de 30o, repercute diretamente no tamanho das presas inoculadoras, que
alcançam, em Micrurus de 90 cm, um comprimento aproximado de apenas 2,5mm. A
injeção da peçonha acaba sendo, portanto superficial, mas o tempo de inoculação acaba
sendo prolongado por conta do hábito peculiar de morder sem soltar (Melgarejo, 2003; Silva
Jr e Bucaretchi, 2003).
O conjunto de limitações anatômicas e funcionais somadas a um comportamento
pouco agressivo de Micrurus pode explicar a baixa incidência de acidentes ofídicos por
serpentes do gênero Micrurus, que fica em menos de 0,5% do total de acidentes por
serpentes peçonhentas no Brasil (FUNASA, 2001; Melgarejo, 2003).
Pode-se visualizar abaixo a distribuição geográfica das espécies de Micrurus que
ocorrem no Brasil.

Figura 11: Distribuição geográfica de Micrurus corallinus (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Figura 12: Distribuição geográfica de Micrurus lemniscatus (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Figura 13: Distribuição geográfica de Micrurus spixii (Modificado de Cardoso e col., 2003).

Figura 14: Distribuição geográfica de Micrurus surinamensis (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Figura 15: Distribuição geográfica de Micrurus frontalis (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Figura 16: Distribuição geográfica de Micrurus ibiboboca (Modificado de Cardoso e col., 2003).
Epidemiologia
No Brasil, os acidentes ofídicos representam um grave problema de Saúde Pública.
De acordo com dados do Ministério da Saúde, no ano de 2009 foram notificados 21.618

casos de acidentes por serpentes em todo território nacional (SINAM, 2010). Parte destes
casos é decorrente de acidentes por serpentes não peçonhentas (4%). Em relação ás
serpentes peçonhentas, observa-se um predomínio absoluto de acidentes por Bothrops,
com 74%, seguidos por acidentes por Crotalus (7%), Lachesis (3%) e Micrurus com apenas
1% (fig. 17). Ao se excluir o número de casos “Ignorados/brancos” e os referentes a
serpentes não peçonhentas da análise, esse padrão fica mais evidente (fig. 18). Deve-se
ressaltar que apesar da grande melhora nos serviços de notificação, infelizmente, grande
parte da informação sobre o gênero de serpentes envolvido no acidente acaba se perdendo.
Este fato se torna evidente ao se observar a grande quantidade de Ignorados/brancos”
(11%), que se referem a casos em que o gênero da serpente não foi informado (fig. 17).
9% 1% 4%
86%
Bothrops Crotalus Micrurus Lachesis
Figura 17: Distribuição percentual de casos de acidentes ofídicos no Brasil no ano de 2009, de acordo
com o gênero da serpente (SINAM, 2010).
3% 11%
4%
1%
7%
74%
Bothrops Crotalus Micrurus Lachesis Não Peçonhenta Ign/branco
Figura 18: Distribuição percentual de casos de acidentes ofídicos no ano de 2009, de acordo com o
gênero da serpente, e condição (peçonhenta e não peçonhenta) (SINAM, 2010).

Com relação à distribuição dos casos por região do país, pode-se observar na
figura 19 que a maioria dos acidentes foram registrados nas regiões Norte (31%), nordeste
(29%) e sudeste (21%). Nas regiões Sul e Centro-Oeste observa-se um menor número de
notificações, de 9 e 10%, respectivamente. Estes dados contrastam com referentes ao
período de 1990-1993, publicados no “Manual de diagnóstico e tratamento de acidentes por
animais peçonhentos” da Fundação Nacional de Saúde (FUNASA, 2001), onde se observa
um predomínio das regiões Sudeste e Sul. Este fato pode indicar uma melhora na qualidade
da informação na região Nordeste e, principalmente, na região Norte, onde a subnotificação
sempre foi muito alta por conta da dificuldade de acesso aos serviços de saúde e
contrastava com a grande abundância de espécies de serpentes peçonhentas.
10%
9% 31%
21%
29%
Norte Nordeste Sudeste Sul Centro-Oeste
Figura 19: Distribuição percentual de casos de acidentes ofídicos no ano de 2009 de acordo com a
região do país (SINAM, 2010).
Sabe-se que os acidentes ofídicos estão, em geral, relacionados a fatores
climáticos e aumento da atividade humana nos trabalhos de campo. Sendo assim, é
possível observar um padrão sazonal para a ocorrência de acidentes. Normalmente, há um
aumento dos acidentes nas regiões Sul, Sudeste e Centro-Oeste no período de setembro a
março, e na região Nordeste no período de janeiro a maio. Não se observa padrão sazonal
definido na região Norte .
Em relação as característica dos indivíduos acometidos, existe um predomínio
marcante nas faixas etária de 15 a 19, 20 a 39, e 40 a 59 anos, que correspondem ao grupo
onde se concentra a força de trabalho (fig. 20), além de uma clara preponderância de
indivíduos do sexo masculino (fig. 21).

40.0
35.0
30.0
25.0
20.0
15.0
10.0
5.0
0.0
co
4
9
<1
>
-1
-1
-3
-5
-6
-6
-7
1-
5-
80
an
10
15
20
40
60
65
70
br
g/
In
Figura 20: Distribuição de casos de acidentes ofídicos por faixa etária da população brasileira no ano
de 2009 (SINAM, 2010).
7000
6500
6000
5500
5000
4500
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
co
14
19
39
59
64
69
79
<1
>
1-
5-
80
-
an
10
15
20
40
60
65
70
br
g/
In
Homens Mulheres
Figura 21: Distribuição de casos de acidentes ofídicos por gênero da população brasileira no ano de
2009 (SINAM, 2010).
Com base nas manifestações clínicas do envenenamento, os casos são

classificados atualmente quanto a sua gravidade em leves, moderados ou graves (Tab. 1).
Um caso de natureza leve é aquele em que não existe dor ou edema evidente, e
manifestações hemorrágicas locais e sistêmicas são pouco intensas ou ausentes. Um caso
de natureza moderada é caracterizado por dor e edema evidente, acompanhado ou não de
alterações hemorrágicas locais e sistêmicas. Em um caso grave, o edema local é intenso e

extenso, acompanhado de dor também intensa e presença de bolhas, além de hemorragia,

choque, anúria e equimose (FUNASA, 2001).
Tabela 1: Evolução de caso de acidente ofídico de acordo com o gênero de serpente, em 2009 (SINAM 2010).
Caso Gênero
Não Total
Classificação final Bothrops Crotalus Micrurus Lachesis Ing/branco
peçonhenta
Ign/Branco 1035 102 14 40 44 341 1576
Leve 7923 691 71 236 750 1407 11078
Moderado 5999 626 26 344 27 598 7620
Grave 986 202 35 35 2 84 1344
Total 15943 1621 146 655 823 2430 21618
A indicação do número de ampolas a serem utilizadas na soroterapia é definida

após a classificação de um caso como leve, moderado ou grave. De acordo com o manual
de diagnóstico e tratamento de acidentes por animais peçonhentos (FUNASA, 2001), a
recomendação da quantidade de soro antibotrópico a ser administrado é a seguinte: casos
leves, de 2 a 4 ampolas; moderados, de 4 a 8 ampolas e graves, 12 ampolas.
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Unidade 9
Quantificação e Análise
de Dados
Fábio de Andrade Machado

Laboratório de Herpetologia e Laboratório de morfometria/MZUSP
[email protected]
A quantificação e a análise de dados são passos essenciais de qualquer

programa de pesquisa quantitativa. Por “quantificação” entendemos qualquer
espécie de processo que nos permita representar simbolicamente, normalmente de
forma numérica, um evento natural observado. A “análise de dados” refere-se à
avaliação do produto do processo de quantificação com a finalidade de se responder
alguma questão ciêntifica. O presente módulo pretende abordar brevemente
principios de quantificação normalmente negligenciado em pesquisas comparativas,
integrando com conceitos sobre a origem da variação em sistemas biológicos. O
estudo dessa variabilidade é importante não apenas do ponto de vista metodológico,
uma vez que a variação pode ocultar os efeitos de interesse, mas também para a
formulação de novas perguntas a respeito da fisiologia dos animais. Adicionalmente
descreveremos alguns principios práticos de análise estatística, explicando o
funcionamento de alguns testes clássicos. Devido ao caráter altamente experimental
da fisiologia comparada a adequação de desenhos experimentais, ferramentas
estatísticas e medições bem definidas é essencial para a formulação de hipóteses e
o desenvolvimento de um programa de pesquisa.
Capítulo 42 Quantificação de Fenômenos Fisiológicos pág. 547

Revisado por:
Dra. Erika Hingst-Zaher
Rodrigo Cesar Marques
Paulo Miranda Nascimento
Thiago Macek Gonçalves Zahn

Quantificação de Fenômenos Fisiológicos

Laboratório de Herpetologia e Laboratório de morfometria/MZUSP
[email protected]
Quantificação e amostragem
O processo de quantificação é um aspecto comumente negligenciado durante a
produção de conhecimento científico. Por “quantificação” entendemos qualquer espécie de
processo que nos permita representar simbolicamente um evento natural observado.
Durante tal processo podemos nos valer de qualquer forma de expressão simbólica. Por
exemplo, taxônomos comumente se valem de minuciosas descrições das estruturas
anatômicas enquanto etólogos computam complexos fluxogramas comportamentais
(“etogramas”) para fornecer uma representação detalhada do comportamento animal.
Ambos os exemplos citados podem ser entendidos como “quantificação”. Entretanto, essa
palavra costuma ter uma conotação mais restrita em ciências exatas, como física e química,
e é utilizada para denotar processos que “de fato produzem numeros” (Kuhn, 1961). Neste
contexto a quantificação seria um processo objetivo de mensuração de dada característica
de um sistema, expressando-o de forma objetiva e numérica, e estaria diretamente ligado ao
processo histórico científico, permitindo a avaliação do paradigma vigente à luz das
evidencias (Kuhn, 1962). Por esse motivo faremos uma breve digressão sobre o método
científico.
Método Científico
Como já visto anteriormente, uma característica geral de toda empreitada científica
está na utilização de um arcabouço conceitual de regras e procedimentos que permitem
avaliar e justificar o conhecimento. Tal arcabouço é chamado de método científico (ver
capítulo I) e uma de suas principais funções é nos proporcionar a capacidade de distinguir
entre crenças racionalmente justificadas e crenças irracionais (injustificadas). O
procedimento exato pelo qual isso se dá é questão de intenso debate (Popper, 1959; Kuhn,
1962; Lakatos, 1978; Sokal e Bricmont 1999). Apesar disso, é geralmente aceito que o
processo de geração de conhecimento cientifico necessita do confronto entre previsões
teóricas e observações (Kuhn, 1962). Para ilustrar podemos recorrer à metáfora do “Moedor
de Carne de Kuhn” (Fig. 1). No moedor temos à esquerda um conjunto de teorias a respeito
do sistema em estudo que entram no moedor. O moedor em si representa as manipulações
lógicas e matemáticas dessas teorias com a finalidade de prever os resultados que
podemos obter. Na esquerda temos os produtos dessas manipulações, que são as
previsões teóricas, podendo estar em valores numéricos, resultados qualitativos e outros

formatos. Na coluna seguinte temos resultados obtidos experimentalmente de forma

independente. Kuhn (1961) coloca que o trabalho do cientista é buscar “concordância
razoável” entre essas duas colunas, sendo o limite do “razoável” uma questão especifica
para cada área. O foco do presente capítulo é auxiliar o aluno na obtenção de medidas de
forma precisa e objetiva, ajudando à delimitar o que seria “concordância razoável”.
Figura 1. Moedor de carne de Kuhn, representando o processo de formulação e verificação de

previsões teóricas através da manipulação lógica e formal de um conjunto de teorias. Modificado de
Kuhn (1961)
Definição de quantificação em ciências

Como já colocado, a quantificação é uma representação simbólica de dado
fenômeno natural. Tal processo pode ser tão simples quanto a descrição de uma estrutura,
contagem de ocorrências, ou a medição de taxas metabólicas através de equipamentos
especificamente desenhados para esse propósito. Apesar de ser uma definição ampla, isto
não a torna desprovida de rigor. Veremos abaixo que existem critérios para avaliar se uma
quantificação é boa ou não, e como o entendimento dos princípios de quantificação nos
permite elaborar e utilizar protocolos de medição que são adequados para a construção e
avaliação de hipóteses fisiológicas. Para constituir uma boa quantificação, uma medida deve
ser operacionalmente definível, apresentar reprodutibilidade, validade e agregação (Wilks,
1961).
Ser operacionalmente definível significa que dado processo pode ser
sistematicamente descrito através da definição das circunstâncias nas quais as medidas
foram tomada, quais as ferramentas utilizadas, que tipo de resultado ela pode nos fornecer,
etc. Por exemplo, se quisermos correlacionar a temperatura corpórea de serpentes com o
grau de agressividade temos que especificar não apenas como a temperatura corpórea e o
nível de agressividade foram medidos, mas também a que temperatura tais experimentos
foram realizados, a que hora do dia, o grau de saciedade dos animais, etc. Isso permite não

apenas que você mantenha um protocolo experimental que possa ser explorado mais a
fundo no futuro (variando o grau de saciedade do animal, por exemplo), mas principalmente
que seus pares (outros pesquisadores) avaliem sua metodologia atrás de possíveis erros
(seja em uma banca examinadora, seja durante o processo de revisão de um artigo). Isso
também permite que outros reproduzam o seu experimento para conferir seus resultados ou
mesmo aplicá-lo em outros grupos. A transcrição do processo de medição é um aspecto
essencial de qualquer documento científico, e compõem o que costuma ser uma porção
substancial da seção dos Materiais e Métodos
Uma segunda requisição básica do processo de medição é que o resultado seja
reprodutível. Isto significa que, tendo em mãos um processo operacionalmente bem
definido, o que se espera é que, dado o mesmo equipamento e as mesmas condições
iniciais, o resultado seja o mesmo em diferentes repetições do processo, seja pelo mesmo
individuo, seja por pesquisadores diferentes. Em fisiologia comparada a questão de
reprodutibilidade (ou precisão) é mais complexa do que em outros ramos da biologia, como
morfologia. Ao passo que podemos perfeitamente pegar o mesmo paquímetro e medir o
mesmo animal diversas vezes e pedir para que outros façam o mesmo (obtendo resultados
similares), o mesmo não é possível para muitos fenômenos fisiológicos; não se espera que
a medição do metabolismo de repouso de um animal realizado em um dia seja equivalente à
medição realizada em outra hora desse dia, quiçá em outros dias. Isso ocorre pelo caráter
complexo e temporalmente restrito de muitos destes fenômenos e a interação desses
fenômenos com outros sistemas biológicos, um ponto que será melhor explorado mais
abaixo.
Um terceiro fator é o que chamaremos de validade, e refere-se à capacidade de
dada medida de estimar os valores “verdadeiros” da variável sob avaliação. Tal
característica, apesar de poder estar fortemente associada à reprodutibilidade, não deve ser
confundida com esta última e, apesar de uma alta validade e uma alta reprodutibilidade
serem muito importantes para uma medida, esses fatores revelam características distintas
sobre o processo de medição. Para ilustrar o ponto podemos imaginar dois soldados com
um alvo na sua frente (Fig. 2). Ambos são exímios franco-atiradores e são capazes de
acertar no centro do alvo quase que 100% das vezes. O fato de eles acertarem no mesmo
ponto, ou pelo menos quase no mesmo ponto, indica um alto grau de reprodutibilidade das
suas habilidades. Porém, se a mira de ambos estiver levemente deslocada no mesmo
sentido, isso pode significar que ambos os atiradores conseguirão repetir o procedimento
com um alto grau de reprodução, acertando em pontos similares, porém errando o alvo
“real”, que é o centro (2B). Uma alta validade só seria atingida quando ambos conseguissem
acertar não apenas no mesmo ponto, mas também no alvo designado (2A). Essa pode
parecer uma distinção pouco lógica, porém o problema se torna óbvio quando recorremos a

qualquer medição que necessita de calibração: sem a calibração o equipamento pode ser
igualmente preciso, no sentido de que os resultados são reprodutíveis, porem o valor obtido
não reflete a realidade, tornando o procedimento como um todo inválido. Podemos ainda
conceber medidas com reprodutibilidade reduzida e alta validade (2C). Um caso trivial de
uma medição deste tipo é o uso de uma simples régua para medir o tamanho de um objeto.
Réguas costumam apresentar uma precisão em termos de casas decimais, o que diminui a
reprodutibilidade da medida, uma vez que medidores diferentes podem arredondar as
medidas de forma distinta. Adicionalmente cada medidor varia, mesmo que levemente, em
seu estilo de medida, introduzindo assim um erro de medição que, adicionado ao
arredondamento, diminui a reprodutibilidade ainda mais. Entretanto a validade da medida
em si é inalterada, uma vez que sabemos que há uma estrutura a ser medida e que uma
régua reflete, de certa forma, a realidade dessa grandeza. A validade da medida só seria
alterada, por exemplo, se a distancia entre as marcas da régua não fossem equivalentes ao
que se espera.
Figura 2. Representação da reprodutibilidade e
da validade de uma medição como tiro ao alvo. A)
Procedimento com alta reprodutibilidade e alta
validade B) Procedimento com baixa validade,
porém alta reprodutibilidade. C) Procedimento
com alta validade, porém com reprodutibilidade
reduzida. D) Procedimento com reprodutibilidade
baixíssima, dificultando o grau de validade.
Uma ultima característica essencial

no processo de quantificação é a
possibilidade de agregação das medidas.
Esse fator refere-se à possibilidade de se agrupar medidas de uma mesma classe (peso
corpóreo, consumo de oxigênio por hora, metros por segundo, etc) em um conjunto. Esse é
um fator extremamente essencial na análise de dados em qualquer ciência. O motivo disso
é que você não pode basear conclusões robustas em apenas uma observação. Por
exemplo, se queremos avaliar o nível de stress de um lobo-guará (Chrysocyon brachyurus)
e quantificar a influência do tamanho de área de vida nos níveis de corticóides fecais em seu
sangue (que é usado como estimativa de estresse), qualquer interpretação a respeito do
registro de um nível de 431 ng/g fecal de corticóides em um animal que vive em 0,5 hectare
será fortemente subordinada às nossas noções subjetivas da magnitude dessas medidas.
Note que o registro das mesmas variáveis em outros animais pode não ser suficiente para
que possamos inferir uma relação sólida entre esses fatores (Fig. 3).

Figura 3. Exemplo da investigação entre a relação do estresse em lobos-guará (C. brachyurus) e área
de vida e a influencia de baixa amostragem na corroboração ou falseamento de hipóteses.
Isso costuma ser facilitado pelo aumento do número de observações, medindo as

mesmas variáveis em outros animais em outras localidades, atingindo um numero de
observações que nos permita inferir com precisão a relação real entre as variáveis sob
estudo. Sendo assim o conceito de agregação está diretamente ligado ao de amostra, no
sentido de que, ao tirar medidas, o que se faz é obter medições de uma mesma população
natural com o objetivo de se estimar algum tipo de parâmetro de interesse (média,
correlação, etc) escolhido de acordo com a pergunta científica que se quer responder. Note
que o critério de agregação não diz apenas sobre a necessidade de se agrupar conjuntos de
variáveis, mas também se refere ao número adequado de observações necessárias para se
obter uma análise consistente. O motivo disso é que uma baixa amostragem pode estar

fortemente influenciada por fatores aleatórios, sejam eles problemas de medição

(reprodutibilidade), sejam variações de origem biológica ou problemas de amostragem.
Vamos abordar mais detalhadamente esses dois últimos fatores a fim de esclarecer as
problemáticas que podem emergir no processo de formação de agregados de medidas (ou
“amostragem”).
Origens de variação em sistemas biológicos

Os critérios de agregação, validade e reprodutibilidade nos dizem algo sobre a
realidade da variável que desejamos obter. Ou seja, dado que existe um valor “real”, o
propósito da agregação é simples: tentar, através de amostragem, obter uma estimativa
deste valor, a despeito da variação introduzida por reprodutibilidades sub-ótimas (como
exemplificado na Fig. 2C). Essa noção é muito bem ilustrada em áreas mais exatas das
ciências naturais, como a Física. Quando tentamos, por exemplo, estimar a força exercida
sobre um objeto, dado que possuímos tanto a aceleração quanto a massa do objeto, temos
um valor que podemos chamar de “real”. Contudo, não é razoável esperar que o valor obtido
experimentalmente seja exatamente igual, uma vez que temos limitações físicas de nosso
processo de quantificação. Tais limitações podem estar ligadas não apenas à
imprecisão do sistema de medição, mas também à nossa incapacidade de avaliar alguns
fatores imprevistos que podem perturbar nossa medição (ruídos). Nessa perspectiva, os
desvios em nossas medições são causados por fatores indesejados, sejam eles erros de
medição ou variáveis não controladas.
Entretanto, quando avaliamos sistemas biológicos esse cenário se torna rapidamente
suspeito: sabemos que organismos, diferente de partículas, apresentam variação em suas
características que não são impostas por problemas de medição. Ou seja, mesmo supondo
que eu consiga obter o peso de um indivíduo sem qualquer erro de medição, o esperado é
que os valores sejam diferentes em diferentes indivíduos. Isso se deve principalmente pelos
fatores geradores da biodiversidade e suas diferentes escalas de atuação, dos quais
destacamos quatro principais conjuntos de fatores: processos de desenvolvimento
(ontogenia), processos intraespecíficos, complexidade e processos interespecíficos (Fig. 4).
A ontogenia de um organismo traz claras influências em seu fenótipo. Em termos
morfológicos isso é bastante óbvio, uma vez que esperamos que juvenis e adultos sejam
diferentes em termos de forma e, principalmente, tamanho. Tais processos afetam também
a fisiologia do organismo, sendo que o exemplo mais claro é a chegada do estágio
reprodutivo: o organismo começa a produzir hormônios sexuais que modificam sua química,
influenciando até o desenvolvimento de órgãos e comportamentos. O tratamento desse tipo
de variação costuma ser complicado, uma vez que não consideramos animais em diferentes
estágios de desenvolvimento como sendo membros de uma mesma amostra equiparável de

indivíduos. Isso fica nítido em casos mais extremos, como a tentativa de se estimar o gasto
energético médio de duas espécies de anuros, sendo que agrupamos girinos e sapos
adultos em uma mesma amostra. Isso não faz sentido uma vez que sabemos da existência
de um fator (metamorfose) que diferencia esses organismos em duas categorias distintas.
Para solucionar possíveis problemas, uma possibilidade é tentar comparar estágios
ontogenéticos similares entre os grupos sob estudo. Apesar disso não ser tão apropriado
quanto, digamos, registrar a idade de cada indivíduo, é uma abordagem prática que
costuma ser bem aceita, e viabiliza o estudo de animais coletados em campo, sobre a idade
dos quais não possuímos informação exata.
Figura 4. Representação esquemática das fontes de variação presentes em

sistemas biológicos. Modificado de Hennig (1966).
Quando falamos de processos intraespecíficos estamos falando de qualquer

processo que ocorre dentro de uma espécie e gera variação biológica. Tais processos
podem ser tanto de origem genética, explicada pela distribuição de diferentes alelos em uma
população, quanto de origem ambiental, como por exemplo polimorfismos gerados por
diferenças nos habitats onde os animais vivem, decorrentes de diferentes variáveis
climáticas. Esse tipo de variação costuma ser controlada pela utilização de linhagens
endogâmicas de laboratórios, que permitem restringir a variação genética e ambiental ao
extremo. Isto, entretanto, não oferece completo controle da variação uma vez que, mesmo

nesse tipo de linhagem, diferenças fenotípicas emergem pela presença de fatores

imprevisíveis (ex. Ward e col. 1990). Um dos motivos para isso se deve ao fato de que a
classe de objetos investigados em biologia, os organismos, são complexos, formados pela
interconexão de diversos outros elementos, sob a influência de inúmeros fatores, sendo que
o resultado é algo que não pode ser avaliado pela simples soma de suas partes (Mayr,
1997). Em termos práticos isso significa que, mesmo em experimentos extremamente
controlados, nada nos permite dizer que meu sistema de estudo está totalmente livre da
interação perturbadora de outros sistemas, que podem influenciar o fenótipo e,
conseqüentemente, o valor das variáveis de interesse. O controle para esse tipo de
problemática costuma ser experimentalmente complexo: apesar de ser possível utilizar de
técnicas que isolam um sistema fisiológico, essas metodologias podem ser extremamente
invasivas e pouco práticas. Adicionalmente, mesmo que tal procedimento seja possível, ele
provavelmente será realizado em espécies modelo (ratos de laboratórios, Xenopus, etc), o
que limita bastante esse tipo de abordagem para grande parte da diversidade.
Um último conjunto de fatores essencial para a geração de variabilidade biológica é,
não coincidentemente, o mais óbvio, e podemos os chamar de relações interespecíficas,
ou relações filogenéticas. Resumidamente, o que se espera é que os processos
intraespecíficos citados acima gerem mudanças fenotípicas nas populações naturais, sendo
que essas são compartilhadas (ou passiveis de serem compartilhadas) por outros indivíduos
da população por reprodução, ancestralidade comum ou similaridade de ambiente. Quando
esse compartilhamento só ocorre em um conjunto de organismo em detrimento de outros,
as populações naturais divergem geneticamente e fenotipicamente em um processo que
conhecemos como especiação. A separação das linhagens permite que estas evoluam de
forma independente, acumulando mudanças exclusivas, gerando combinações únicas de
caracteres. Isso se torna particularmente relevante em estudos evolutivos nos quais
avaliamos a existência de padrões de larga escala. O controle experimental desse tipo de
variação é impossível. Uma maneira simples de minimizar ou neutralizar possíveis
problemas seria o estudo de apenas uma ou duas espécies (Felsestein, 1985). Essa
estratégia é obviamente restritiva quando a nossa questão científica aborda exatamente
padrões evolutivos, um aspecto central de muitos dos programas de pesquisa em fisiologia
comparada. A impossibilidade de controle amostral e experimental da variação
intraespecífica em trabalhos de larga escala não é, entretanto, um problema incontornável.
Foi com esse tipo de questão em mente que em 1985 dois artigos seminais sobre o assunto
foram publicados (Felsestein, 1985; Cheverud e col. 1985), expondo formas de se controlar
estatisticamente as dependências introduzidas pelos padrões filogenéticos. Desde então tais
propostas foram revistas e ampliadas, criando uma área específica designada ao estudo e
desenvolvimento dos métodos filogenéticos comparativos, área esta que apresenta sua

própria entrada na Wikipédia em inglês, assim como seus dois maiores proponentes: Joseph
Felsestein e Theodore Garland, Jr. Não iremos nos alongar nesse tópico devido a sua
complexidade e extensão (ver capítulo o livro do Curso de Inverno 2008 sobre métodos
comparativos disponível na página do Curso de Inverno), mas é bom que o aluno tenha em
mente que a estrutura da variação filogenética é um fator de variação que deve ser
considerado nas análises. Aos interessados fica a sugestão de consultar não apenas o
capítulo e as entradas na Wikipédia, mas também os artigos de Garland Jr. e col. (2005) e
Freckleton e Jetz (2008) para algumas revisões completas sobre o assunto.
É importante notar que os quatro fatores citados podem agir em conjunção
adicionando variabilidade em nossas amostras. Ou seja, mesmo que consigamos controlá-
los de alguma forma, sempre esperamos o surgimento de variação não explicada, dado o
numero de interações possíveis entre os diversos componentes dos sistemas biológicos.
Animais podem diferir em fenótipo, por exemplo, exatamente pela maturação diferencial de
diferentes sistemas do organismo, causada por bases genéticas ou ambientais. Esse
desenvolvimento diferencial, por sua vez, afeta outros sistemas de forma imprevisível (dada
a complexidade do organismo) e que todas estas mudanças se estruturam
filogeneticamente. Uma prática essencial para a avaliação das origens e efeitos das
variações biológicas é a identificação e agrupamento de entidades em classes equivalentes
(agregação). Ao planejamento e execução desse procedimento damos o nome de desenho
amostral.
Desenho amostral
Podemos subdividir os tipos de pesquisas científicas em dois grandes grupos: os
experimentos controlados, que permitem o controle experimental das variáveis, e
experimentos não-controlados, que normalmente não permitem a intervenção do
pesquisador no sistema de interesse (Manly, 1991). Gradações entre essas categorias são
possíveis, como no caso da ecologia experimental, onde a grande maioria dos efeitos são
gerados por fatores que não podem ser controlados, mas mesmo assim o pesquisador se
vale de algum tipo de manipulação para responder sua pergunta (Hurlbert, 1984). Em
fisiologia comparada, entretanto, os experimentos costumam ser realizados em laboratório,
propiciando um alto grau de controle, simplificando os protocolos experimentais e amostrais.
Discutiremos a seguir brevemente três conceitos centrais para a elaboração de um
experimento fisiológico: réplicas, pseudoréplicas e tratamentos.
Réplicas são as diversas observações independentes obtidas através do processo
de mensuração. O conceito de “replicações” remete, novamente, à idéia da existência de
valores reais a serem observados na natureza, e que diferentes repetições (réplicas) do
procedimento de mensuração nos dão informação sobre estes valores. Um ponto central

desse conceito é que tais observações precisam ser independentes entre si. O motivo disso
é que se as observações apresentam algum tipo de dependência, seus valores tenderão a
ser similares, o que pode dificultar a avaliação da relação entre as variáveis de interesse
escolhidas. Quando isso ocorre, dizemos que nossas medições não são réplicas reais, mas
sim pseudoréplicas. A existência de pseudoreplicação é extremamente comum em
investigações fisiológicas e normalmente decorrem da falta de controle de alguma fonte de
variação biológica, como as descritas previamente. A falta de controle experimental,
entretanto, não necessariamente causa a introdução de pseudoréplicas (apesar de
necessariamente diminuir a reprodutibilidade das observações). Isso só ocorre quando há
estruturação da variação não controlada.
Quando falamos de tratamentos imediatamente evocamos imagens de cientistas
ministrando diferentes substâncias em cobaias de laboratório, a fim de verificar o efeito da
substancia na fisiologia do animal. Apesar de esta imagem não estar incorreta, ela é
limitada: um tratamento é toda e qualquer alteração do estado original dos objetos sob
investigação, podendo ou não ser diretamente causada pelo pesquisador. Sendo assim,
essa definição abrange não apenas variações manipuladas pelo pesquisador, como aquelas
introduzidas por fontes de variações naturais, como por exemplo milhões de anos de
evolução, estágios ontogenéticos etc. Nesse contexto a problemática das pseudoréplicas se
torna clara, pois se suas observações são influenciadas por uma fonte de variação não
controlada que se correlaciona com seu tratamento, a identificação de um sinal não significa
necessariamente que seu tratamento causou alguma alteração nas medições, uma vez que
o sinal pode ter sido causado pelo fator não controlado. No exemplo do lobo-guará da figura
3, caso o tamanho da área de vida (tratamento) fosse diretamente relacionado com a
densidade de lobos-guará na região, não saberíamos se os animais estão mais estressados
pela diminuição da área de vida ou se o stress é causado pelo freqüente confronto com con-
específicos. Uma forma de minimizar efeitos indesejados é a utilização de controles
(administração de um tratamento com efeito nulo) e a aleatorização dos tratamentos
(alocação aleatória de tratamentos às unidades experimentais).
As armadilhas de um desenho experimental mal construído são diversas e a
literatura sobre o assunto é extensa. Não existem receitas únicas para esses problemas, o
que acaba complicando sua avaliação (ver Manly, 1991). De fato a publicação de trabalhos
com erros metodológicos não é um evento raro (Hurlbert, 1984), e é sempre importante
mantermos em aberto a possibilidade de revermos nossos métodos. A construção de uma
metodologia coesa e bem estruturada é uma das premissas essenciais para a utilização de
testes estatísticos na investigação científica.

Testes estatísticos
Como vimos anteriormente, os sistemas biológicos apresentam múltiplas fontes de
variação. Na prática, essa variabilidade dificulta a inferência de padrões e processos
fisiológicos, uma vez que as variações naturais dos indivíduos podem se confundir com os
efeitos dos tratamentos. Na figura 5 temos o exemplo da investigação da taxa de consumo
de alimentos de duas variedades de uma população natural de roedores. Hipotetizou-se que
a variedade melânica estaria melhor adaptada a ambientes de baixa incidência solar,
gastando menos energia para a termorregulação, necessitando consumir menos alimento. A
simples inspeção do padrão de variação das medições não é o suficiente para inferir se há,
de fato, uma diferença entre as populações, uma vez que, apesar dd os animais não-
melânicos aparentemente apresentarem uma tendência para valores maiores, alguns
animais melânicos apresentam valores tão altos quanto, ou até mais altos que os não-
melânicos. Esse padrão de distribuição de dados é muito comum em sistemas biológicos e é
uma das principais motivações para o emprego de testes estatísticos em nossas pesquisas.
Figura 5. Consumo de alimento diário em gramas de alimento por 100 gramas de peso do animal por
dia em dois morfótipos de uma espécie de roedores. Como saber se existe diferença significativa
entre os grupos?
O que são testes estatísticos?

Quando falamos em “estatistica”, normalmente estamos nos referindo à maneiras de
descrever grandes quantidades de informação de uma maneira simplificada. De fato, a
etimologia da palavra vem do termo em latim para “conselho do estado”, e está
historicamente relacionado ao uso de censos e pesquisas pelo estado com o objetivo de
direcionar esforços de arrecadação de impostos e de formulação de políticas de governo.
Sendo assim, quando falamos de uma estatística, estamos falando de parâmetros que
usamos para resumir (modelar) os nossos dados (Zar, 2007).

Uma forma muito comum de se modelar a distribuição de variáveis que descrevem

aspectos fenotípicos dos animais é a utilização de distribuições normais (Fig. 6; Batschelet,
1978). Essa distribuição de probabilidade modela a variação do fenótipo de forma contínua,
o que a torna muito útil para estudar variáveis que não estão distribuídas em estados
discretos. Adicionalmente, distribuições normais podem ser descritas apenas por dois
parâmetros: médias (uma estimativa da tendência central das amostra) e desvios padrão
(uma estimativa da dispersão dos valores ao redor da tendência central). Entretanto, o
simples cálculo desses parâmetros em amostras distintas não nos permite dizer se as elas
estão sendo afetadas por algum fator ou tratamento. Para isso necessitamos de testes
estatísticos que se valem do poder de sumarização proporcionado pela estatística com o
objetivo de testar hipóteses científicas. Isso é realizado através da redução de nossos dados
a valores estatísticos especialmente construidos para abordar certo problema.
Figura 6. Distribuição normal representando uma amostra do morfótipo não-melânico de roedor

exemplificado na figura 5. Os pontos mais altos da curva indicam as regiões onde esperamos
encontrar uma maior quantidade de observações. A média está representada pela linha vermelha
contínua. As linhas tracejadas representam o intervalo de confiança de 95% definido pela média ±
1.96 desvios padrão. Note que nenhuma observação coincide precisamente com a média da amostra,
apesar de muitas se agruparem próximas a ela.
Por exemplo, voltando ao exemplo da figura 5 poderíamos dizer que temos uma
hipótese científica: a cor da pelagem (tratamento) influencia no consumo de alimentos. Para
testar a diferença entre os grupos, poderíamos obter estatísticas que expressem essa
diferença, como por exemplo a diferença entre as médias. Sabemos, entretanto, que nem
sempre uma média é estimada com perfeição, uma vez que existem fatores que podem
influenciar nessa estimativa (problemas de medição, variação biológica, baixa amostragem,
etc). Como saber, então, se tais grupos são diferentes?

No contexto dos testes de hipótese estatísticos esse problema é contornado a partir

da construção de um modelo que expressa uma hipótese nula: uma hipótese estatística
que será testada para possível rejeição (Weisstein, 2010). No caso dos testes estatísticos
normalmente empregados em estudos experimentais, essa hipótese costuma descrever um
modelo estatístico no qual o tratamento não apresenta qualquer efeito sobre as
observações. No exemplo da figura 5, se quisermos avaliar a diferença entre os grupos,
uma possível hipótese nula seria que ambos são amostras aleatórias de uma mesma
população natural. Essa descrição nos permite construir um modelo estatístico (expresso
através de uma distribuição teórica da estatística de interesse) para expressar tal hipótese
nula (Fig. 7). Entretanto não é razoável esperar que amostras aleatórias de uma população
sejam exatamente iguais entre si (Fig. 7), o que nos impede de rejeitar automaticamente a
hipótese nula frente a qualquer desvio da estatística esperada.
Figura 7. Distribuições normais representando a hipótese de que os roedores melânicos e não-

melânicos diferem quanto à média do seu consumo de alimento diário (linhas contínuas) e a hipótese
nula (H0), de que só há um grupo. É importante ressaltar que mesmo que ambos os grupos sejam
uma amostra aleatória de uma mesma população, isso não significa que estas amostras irão
apresentar uma mesma média e desvio padrão. O gráfico da direita apresenta duas amostragens
aleatórias da população proposta para H0, evidenciando que mesmo amostras de uma mesma
população podem diferir.
Para algumas estatísticas (como as que serão comentadas mais abaixo), as

hipóteses nulas são muito bem estudadas, o que nos permite construir distribuições de
densidade probabilística das estatísticas de interesse. Ou seja, podemos formalizar o “grau
de incerteza” a respeito dessas estatísticas, o que nos permite quantificar a probabilidade de
se achar um valor igual ou mais extremo do que o observado, supondo que a hipótese nula

é verdadeira (Kanji, 1999). Se obtemos valores baixos dessa probabilidade (chamado de

valor p) isso significa que nosso resultado é muito improvável para ser considerado um
desvio aceitável do modelo nulo. Não há, porém, um parâmetro universal para se definir o
que é “improvável” de fato. Na prática, o que o investigador faz é estabelecer, a priori, um
valor que será usado como um limiar máximo para definir se tal valor p é significativo ou
não. Tal valor costuma ser chamado de (alfa), e tradicionalmente são aceitos valores
iguais à 0,05 ou 0,01. Isso significa que um valor de p inferior ao  designado nos permite
descartar a hipótese nula com um certo grau de certeza. O procedimento de teste de
hipóteses estatísticas é um assunto bastante complexo, e os interessados em se aprofundar
devem consultar livros como Sokal e Rohlf (1995) ou Zar (2007) para estudar livros-texto
voltados a questões biológicas. A seguir serão apresentados métodos estatísticos simples
que podem ser usados para responder algumas questões em fisiologia comparada.
Teste T (e suas aplicações)

Teste-T é o nome dado à uma classe ampla de testes nos quais a estatística de
interesse segue uma distribuição específica chamada distribuição T de Student. Podem ser
usadas em diversos contextos, desde testes de diferenças entre grupos a regressões. Aqui,
entretanto, enfocaremos no uso do teste T pareado. Tal teste é particularmente
interessante para fisiologia comparada pois nos permite averiguar o efeito de tratamentos
quando há correspondência de um-a-um nas observações. Esse tipo de teste permite que
as observações sejam dependentes (ex: que o mesmo individuo seja medido duas vezes).
Esse protocolo de amostragem é uma ferramenta importante, pois permite controlar efeitos
indesejados ao utilizar o mesmo indivíduo sob dois tratamentos distintos como controle.
A estatística T deste tipo de teste é estimada a partir das diferenças entre as
amostras. Para isso, os indivíduos são pareados e a diferença entre suas medidas é obtida.
A estatística T é calculada como:
sendo XD a média das diferenças entre os grupos, sD o desvio padrão das diferenças, 0 o
valor da diferença na hipótese nula (normalmente 0) e n o número de observações. Dessa
fórmula podemos inferir que quando a média das diferenças tende a 0, o valor da
estatística tende à zero também. De forma análoga, quando a variação dessas diferenças
tende a valores altos, t tende a diminuir. Isso significa que valores baixos de t indicam que o
tratamento ou não está afetando as médias da variável, ou que não está afetando os
indivíduos de maneira uniforme.

A figura 8 apresenta a representação gráfica de um teste T pareado. É importante

notar que um dos pontos principais deste tipo de teste é a correspondência entre as
observações dos diferentes tratamentos. Esse tipo de desenho experimental é comumente
utilizado quando se quer avaliar a influência de uma droga na fisiologia dos indivíduos,
registrando a variável de interesse antes do tratamento (t0) e depois do tratamenro (t1).
Outros protocolos são possíveis, como por exemplo avaliações das diferenças de alguma
variável fisiológica em dois estágios ontogenéticos dos indivíduos.
Figura 8. Representação gráfica de um teste T pareado em uma amostra de 20 indivíduos. As linhas

pontilhadas mostram as correspondências entre os indivíduos. Os pontos vermelhos e a linha
vermelha indicam as médias dos grupos, mostrando que houve um aumento no valor médio da
variável. De fato, a maioria dos indivíduos apresentaram aumento do valor da variável no t1 em
relação a t0.
ANOVA (e suas aplicações)

A análise de variância, ou ANOVA, foi um método concebido por R. A. Fisher nas
décadas de 1920 e 30 para avaliar se existe alguma diferença entre as médias de uma
mesma medida realizada em diversos grupos. Diferente do teste T pareado, esse método
não está restrito apenas à comparação de dois grupos, e pode ser aplicado quando não há
correspondência direta entre as observações. Essas características tornam a ANOVA um
método bastante versátil, principalmente quando avaliamos os efeitos de diversos
tratamentos.
A ANOVA se vale de uma estatística F que pode ser calculada facilmente como:

sendo s12 a variância da medida entre os grupos (variância entre as médias dos grupos) e
s22 a variância intra-grupo (variância interna a cada grupo). Sendo assim, ao usar a
estatística F para avaliar a diferença entre os grupos nós levamos em conta a variação
interna desses grupos como fator de normalização.
A figura 9 apresenta a representação gráfica de um teste ANOVA. Note que as
observações devem ser independentes e podem estar distribuídas por um número grande
de tratamentos. Esse tipo de teste pode ser aplicado em experimentos mais complexos
onde há a avaliação de diversos tratamentos distintos sobre uma mesma variável,
normalmente com a introdução de um grupo controle. Um dos reveses deste tipo de
abordagem é que ele não permite a identificação de quais grupos são diferentes entre si,
par-a-par. Ou seja, apesar do teste permitir a avaliação de experimentos complexos, há uma
perda de informação que deve ser levada em conta quando se opta por esse teste.
Figura 9. Representação gráfica da ANOVA em amostras de 20 observações para cada grupo.

Pontos em vermelho representam as médias de cada grupo, e a linha tracejada indica a média das
médias dos grupos. O resultado do teste indica que há diferença significativa, porém note que alguns
grupos apresentam médias muito próximas entre si.

Regressão (e suas aplicações)

Regressões lineares são utilizadas para modelar a relação entre duas variáveis,
das quais uma é considerada dependente de uma outra, que é chamada independente. Isso
é feito através do ajuste de uma equação linear simples do tipo
na qual x é a variável independente (o tratamento), y a variável dependente e  e  os

coeficientes linear e angular da equação, respectivamente.
Intuitivamente o que fazemos quando realizamos uma análise de regressão é tentar
achar a reta que passe por nossa “nuvem” de dados, de forma a minimizar a dispersão das
observações (o erro) no entorno da reta (figura 10). Assim como a ANOVA, regressões
lineares também são avaliadas com o uso da estatística F. No caso da regressão o
parâmetro s12 denota a variância explicada pelo modelo (a variância dos valores “projetados”
sobre a reta de regressão) e o parâmetro s22 denota a variância não explicada pelo modelo
(o erro). Isso significa que, assim como a ANOVA, quando a variação introduzida pelo
tratamento é muito baixa ou os erros são muito grandes, a estatística F tende a ser baixa.
Isso nos força a aceitar a hipótese nula que, no caso da regressão, é de que não há
correlação entre as duas variáveis, ou seja, de que o tratamento não influencia a variável
dependente.
Esse tipo de análise é extremamente plástica, pois nos permite avaliar variáveis que não se
comportam de forma categórica, mas sim contínua. Isso significa que podemos avaliar a
relação entre fatores incluindo desde variáveis morfométricas como tamanho e peso, até
variáveis ambientais, como temperatura média anual da região ou pluviosidade. Um dos
exemplos mais comuns de análises de regressões lineares simples são análises de
alometria, ou seja, como certa variável fisiológica se comporta em animais de diferentes
tamanhos corpóreos.

Figura 10. Representação gráfica de uma análise de regressão. A linha tracejada representa a
equação escrita no canto inferior direito da figura e mostra a relação entre a variável dependente (y) e
a independente (x). A estatística F apresenta valor significativo, o que indica que podemos rejeitar a
hipótese nula de não correlação entre as variáveis. Entretanto é importante notar que esse resultado
não indica que a reta estimada apresenta a real relação, ou que ela pode ser usada para obter
valores não observados da variável dependente a partir da variável independente, uma vez que a
dispersão das observações no entorno da reta pode ser muito grande. Outros parâmetros, como
estatísticas de ajuste podem ser utilizados para avaliar se esse tipo de extrapolação é possível.
Bibliografia
Batschelet, E. (1978). Introdução à Matemática para Biocientistas. Editora da USP. São Paulo. SP.
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Amanda de Moraes Narcizo

Coordenador: Prof. Dr. Márcio Reis Custódio

VII Curso de Inverno:

A idéia da criação do Curso de Inverno: Tópicos em Fisiologia Comparativa surgiu

Desejamos uma boa leitura a todos!

VII Curso de Inverno - IB/USP Pág. i

Na tentativa de sempre melhorar a qualidade das aulas e a comunicação dos pós-

Pág. ii VII Curso de Inverno - IB/USP

Capítulo 1 O que é ciência e como praticá-la pág. 03

Capítulo 5 Comunicação celular: entendendo a ritmicidade endógena pág. 23

Capítulo 8 História da neurociência pág. 79

VII Curso de Inverno - IB/USP Pág. iii

Capítulo 18 Neurofisiologia da música pág. 187

Capítulo 19 Metabolismo e Temperatura: Conceitos e Implicações pág. 205

Lista de abreviações pág. 301

Capítulo 29 Metal não essencial: o cádmio e seus efeitos pág. 361

Pág. iv VII Curso de Inverno - IB/USP

Capítulo 31 Efeitos da toxicidade de metais no metabolismo de organismos

Capítulo 33 Trocas gasosas em invertebrados marinhos pág. 427

Capítulo 36 Co-evolução entre peçonhas e seus alvos pág. 473

VII Curso de Inverno - IB/USP Pág. v

Capítulo 42 Quantificação de Fenômenos Fisiológicos pág. 547

Pág. vi VII Curso de Inverno - IB/USP

Método Científico Aplicado a Estudos

Por que ler este texto?

Todos os capítulos revisados pelos profs

Capítulo 1 O que é ciência e como praticá-la pág. 03

Capítulo 2 Formulando perguntas em fisiologia comparativa pág. 09

Capítulo 3 Evitando confundir-nos: aspectos fundamentais do desenho

Capítulo 4 O Fim da Picada: Comunicando Ciência pág. 17

O que é ciência e como praticá-la.

Métodos conceituais de obtenção do conhecimento.

são primatas; Sócrates é um homem) permitem inferir um novo conhecimento, também

O que é Fisiologia Comparativa?

Em 1950, Prosser listou alguns objetivos da fisiologia comparativa como disciplina.

sp1 sp2 sp3 sp4 sp5 sp6 sp7 sp8

Hoje em dia, métodos indutivos (análise bayesiana) e verificacionistas (análise da

Formulando perguntas em fisiologia comparativa

Agustín Camacho Guerrero

Buscando trabalho: como levantar uma pergunta a responder.

Como ser objetivo: Transformação da

(etiquetas, categorias). Entre os exemplos mais comuns de variáveis contínuas estão:

O CHUMBO NA ÁGUA INFLUENCIA A TAXA METABÓLICA DOS GIRINOS?

pouco muito concentração de

Como mostra a Fig. 3, quando categorizamos variáveis podemos perder informação

Evitando confundir-nos: aspectos fundamentais do desenho

Agustín Camacho Guerrero

Agora que já sabemos qual é nossa pergunta e como representá-la, deveremos

O que significa testar uma hipótese?

Frequentemente, queremos realizar algum de dois tipos de testes: A) se os valores

f ator tratamento tratamento

Figura 4. “Scatter-plots” mostrando a distribuição da variação em dois tipos básicos de análise: A)

Repetição, pseudorepetição e confiança.

O Fim da Picada: Comunicando Ciência.

Agustín Camacho Guerrero

Partes e estrutura de um relatório de pesquisa.

Busque críticas, seja crítico e ajude à ciência progredir.

Tabela 1: Lista de verificação na redação de um relatório de pesquisa.

Tratamento: aqui tratado como manipulação.