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    immunohistochimie

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    Immunocytochimie

    introduction
    Les cellules vivantes sont des structures fragiles, non colorées et non
    contrastées.
    Les structures biologiques sont pour leur plus grande part transparente.

    La grande révolution en études cytologiques et histologiques

    La découverte des colorants: des molécules colorées qui se


    répartissent dans les structures biologiques en fonctions de
    leurs affinités.
    On dispose aujourd’hui d’un grand choix de colorants dont chacun possède une
    affinité spécifique pour des composants subcellulaires particuliers
    Colorants acides:
    Les colorants acides ont une bonne affinité avec les substances alcalines, ils
    mettent en évidence des tissus basiques donc acidophiles.
    éosine (rouge)
    acide picrique (jaune)
    vert rapide
    orange G
    fuchsine acide (rouge)
    érythrosine [rouge]
    Colorants basiques:
    Coloration au Carmind'un Monogène (ver parasite)
    Ils mettent en évidence des tissus acides, dits basophiles.
    hématoxyline (colore l’ADN en bleu/noir)
    safranine (orange)
    carmin (rouge)
    thionine (bleu)
    fuchsine basique (rouge)
    Colorations argentiques:
    Certains tissus fixent l'argent. On parle de structures argentaffines ou de
    structures argyrophiles.
    Coloration aux sels de Chrome:
    exp : l’hématoxyline qui a
    une affinité pour les Coloration à
    molécules chargées l’hématoxyline /
    éosine
    négativement, met en
    d’une coupe
    évidence la répartition de transversale
    l’ADN, de l’ARN et des d’intestin de rat
    protéines acides dans les
    cellules.
    Les limites de la coloration

    manque de sensibilité et de spécificité à l’échelle moléculaire

    La solution

    La résolution du problème grâce à une approche alternative


    beaucoup plus générale: techniques histochimiques, immuno-
    histochimiques et histoenzymatiques

    La spécificité La sensibilité

    l’utilisation d’anticorps
    l’utilisation de
    spécifiques des
    molécules recherchées traceurs
    Immuno-cytochimie
    Principe:
    Détection d’une substance d’intérêt (antigène) après application d’un anticorps
    spécifique et révélation des complexes antigènes-anticorps à l’aide d’un
    marqueurs
    • De la cellule à l'atome
    • de X10 en X10

    Fig 9-1

    Nanomètre (10-9 mètres) invisible au microscope


    Immunoréaction : principe

    Traceur
    Système
    Système révélat
    Anticorps révélateur
    secondaire

    Anticorps primaire

    Epitope
    Antigène
    Echantillon

    Une immunoréacion est composée de trois éléments principaux :

    1 . la préparation (tissu, cellule, organite subcellulaire, virus ...)


    contenant l'antigène à étudier ;

    2. un anticorps dirigé contre l'antigène recherché ;

    3 . le système révélateur qui permet de visualiser l'immunoréaction


    (ligand + traceur).
    traceurs : étapes marquantes

    Année Traceur Application Auteurs

    1939-41 Fluorescéine Immunofluorescence Coons


    1959 Ferritine M. électronique Singer
    1966 Enzymes M. optique Nakane
    1971 Enzymes M. électronique Avrameas & Ternynck
    1971 Or colloïdal M. électronique Faulk & Taylor
    1975 Or colloïdal M. balayage Horrisberger & coll.

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