• Universités d'Alger 1 • Facultés de sciences

benYoucef ben kH Edda • Département SNV

• M2 Microbiologie appliquée

Thème

Contrôle microbiologique des

produits pharmaceutique
(MP .PF .AC .ENVIRONNEME
NT )

Présente par :
Sellat nour el houda
Sekhi nessrine
Selmi yasmine
Tas rania GROUPE : G4
Année universitaire : 2022-2023
Selmani ikram
 1 Introduction
L
E 2
Contrôle microbiologique des
produits pharmaceutique

P Contrôle
3
L microbiologique(AC)

A 4 Contrôle
microbiologique(env)
n
5 Conclusion
Introduction
 Le médicament et l’un des produits de consommation le plus délicat .
C’est pourquoi la stabilité et la régularité de ce
Produit est une exigence dans la fabrication pharmaceutique ,et pour
l’atteindre il faut une mise en place d’un contrôle de qualité
soigneusement dirigé par un système d’assurance qualité ,parmi ces
contrôles on a le contrôle microbiologique

Types de contrôles microbiologiques

Contrôle Contrôle Contrôle

microbiologiques de microbiologiques des microbiologiques des
l'environnement médicaments aliments
 Contrôle
microbiologique

la qualité microbiologique d’un médicament durant le

procédé de fabrication des différents étapes sont utiliser dans le
but de rechercher et dénombre dans les différents échantillons
prélevés les microorganismes.

Les bactéries aérobies les leveurs et

Les germes spécifique
viable totale moisissures
 Pharmacopée

les critères de pureté des matières premières ou des préparation entrant dans la
fabrication des médicaments et les méthodes d’essai et d’analyses a utiliser pour
assurer leur contrôle dans le but d’unifier la composition des médicaments et
d’indiquer le mode de préparation de certains médicaments
 Les origines de contaminations des produits
pharmaceutique

Condition de
stockage

Les surfaces et D’origine

le matériel . humaine

Condition de
L’air
fabrications

Matière
L’eau
premières
 Technique de Contrôle
microbiologique

Stérilisation

Ensemencement

Isolement
 Objectif

D’identifier toutes causes au agent nuisibles afin de réduire ou d’éliminer

ces contaminations pour assurer l’innocuité et la stabilité du médicament
pendant toute la durée de sa validation des contrôles de qualité sont
réaliser y compris physico-chimique et microbiologique .
Contrôle microbiologique
pharmaceutique
 Les produits obligatoirement
c stériles :
" exempte de micro-organismes".

ainsi que la
Le contrôle qualité recherche de
sa stérilité microbiologique de ces pyrogènes et
produits consiste à vérifier
d’endotoxines

Les produits qui doivent être stériles sont les suivants

Les préparations pour usage parental (introduction

d’une substance dans l’organisme par une autre voie
que la voie digestive, exemple : injection sous-cutané,
intraveineuse ou intramusculaire).
 Les préparations ophtalmiques

Le pansement chirurgicaux et le matériel

chirurgical

Les produits non obligatoirement stériles

Selon la Pharmacopée Européenne, les préparations pharmaceutiques non stériles sont:

Les médicaments à usage non

parentéral

Les matières premières

 Contrôle qualité microbiologique des
préparations non stériles

Il s’agit du :

dénombrement des germes aérobies viables totaux (les bactéries, levures et moisissures).

rechercher des micro-organismes pacifiés: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa et

Staphylococcus aureus, Candida albicans, les Salmonelles, et les entérobactéries.

A. La préparation des échantillons:

La méthode de préparation des échantillons dépend des caractéristiques physiques

du produit à examiner. De façon général, la préparation des échantillons s‘effectue
par:
  L’ajout d’un diluant pour diluer le produit à examiner.
 L’ajout d’un diluant avec neutralisant tamponné pour arrêter l’action des antimicrobiens, si le produit
possède un pouvoir antimicrobien.
 L’ajout d’un tensio-actif pour mélanger les produits de nature non hydrosoluble.

B. Méthodes utilisées pour l’examen des échantillons « Méthodes de dénombrement »

Les essais décrits pour le contrôle microbiologique des produits non stériles dénommés
aussi «dénombrement des germes aérobies viables totaux » permettent le
dénombrement des bactéries mésophiles, des moisissures et levures capables de se
développer en aérobiose.

u n p roduit
rm in er si é cifiées
éte s p
n t to ut à d iologiques
e r ve nt ava e s m icrob a co p ée.
e s e s sais s u x ex igenc à la pharm
C
o n fo r me a o g ra p hie
est c on
de sa m
 Les trois techniques les plus couramment utilisées sont:

la méthode de
la méthode de filtration la méthode du nombre
dénombrement sur
sur membrane le plus probable
plaque
Quelle qu
Le choix de la méthode est déterminé e so i t l a m
elle doit p éthode ch
par des facteurs tels que: ermettre d o i si e ,
su r u n é c h ’eff
la nature du produit antillon de ectuer l’essai
pour perm taille suffi
la limite spécifiée pour le nombre de ettre l’éva sante
conformit l u ati
microorganismes. é aux spéc on de la
ifications
 C. Détection de germes pathogènes

Certains germes ont un pouvoir pathogène important qui justifie leurs recherches dans les produits non obligatoirement stériles.
Le tableau 1 présent les différentes caractéristiques de germes pathogènes recherchés.
Tableau 1: Caractéristiques de germes pathogènes recherchés.
 Critères d’acceptation de la qualité
microbiologiques des préparations non stériles

La Pharmacopée Européenne 8éme édition donne des critères d’acceptation fondés sur le dénombrement des
germes aérobies totaux (DGAT) et des moisissures et levures totales (DMLT) ainsi que sur la recherche de
certains germes spécifiés selon la voie d’administration .

Tableau 2 : Critères d’acceptation de la qualité microbiologique des formes pharmaceutiques non stériles.

Le produit satisfait à l’essai si l’on n’observe la présence d’aucune

colonie ou si les essais de confirmation de l’identification sont
négatifs.
 Articles de
conditionnement
 Le
conditionnement

Ensemble des articles entourant la forme pharmaceutique depuis sa fabrication

jusqu’à son utilisation= emballage

Types de
conditionnement

CONDITIONNEMENT CONDITIONNEMENT
PRIMAIRE secondaire

élément en contact direct élément contenant le

avec la forme conditionnement primaire ,Sans
pharmaceutique contact direct avec la forme
pharmaceutique
 Rôles des articles de
conditionnement

Rôle
Rôle de protection Rôle fonctionnel
d'identification

Protéger le médicament  Faciliter l’emploi  Etiquetage

jusqu’au moment de l’utilisation  Seringue graduée en unité  nom
contre: de masse corporelle commercial ,DCI ,dosage ,voie
❖ les agressions extérieurs:  Stylos injecteurs d’insuline d’administration, n lot…..
 Notice
➢ Humidité
➢ lumière  Augmenter la sécurité
de son utilisation  indications, effets indésirables,
➢air
 Conditionnement à sécurité mode d’emploi, précautions à
❖Contaminations prendre
enfant
biologiques.
 Dispositifs de fermeture inviolable
❖Dommages physiques
 Intervenir dans son
❖Contrefaçons
efficacité
 Principaux Matériaux de conditionnement

Les
Le verre Plastiques Les métaux
élastomères
 Type1:verre neutre
 MATIÈRES  Caoutchouc naturel  Aluminium
 Type2:Verre THERMOPLASTIQUES
calcosodique traités en  MATIÈRES  Caoutchoucs synthétiques
THERMODURCISSABLES  acier inoxydable
surface en vue
d’augmenter leur  Caoutchouc de silicones
résistance hydrolytique.
 Type3:Verre
calcosodique de
résistance hydrolytique
moyenne
 Type4:Verre
calcosodique de faible
résistance hydrolytique
 CRITÈRES DE QUALITÉ DES MATÉRIAUX ET
ARTICLES D’EMBEALLAGE

Résistance physique Imperméabilité aux

suffisante agents extérieures

Inertie chimique vis-à-

Peu encombrant que
vis du contenu
possible

L’aptitude à se prêter aux

Imperméabilité aux
divers traitements
constituants du médicament
industriels

Le prix de revient doit

Innocuité absolue être relativement bas
 ESSAIS GÉNÉRAUX DES MATÉRIAUX DE
CONDITIONNEMENT

4 -ESSAIS DE RÉSISTANCE
1/IDENTIFICATION
CHIMIQUES

2- ESSAIS MÉCANIQUES 5- TRANSPARENCE

3- ESSAIS DE
PERMÉABILITÉ DES 6- ESSAIS D’INNOCUITÉ
MATIÈRES PLASTIQUES

7- ESSAIS DE CONSERVATION
(STABILITÉ)
 1/IDENTIFICATION

 L’identification des constituants des matières plastiques et élastomères

est complexe

 Le dosage et l’identification des éléments minéraux se font après

calcination.

 Identification des Adjuvants organiques:

• Effectuée sur des extraits avec de l’eau pure, acide ou alcaline ou avec des solvants organiques
par spectrographie ( UV , IR) ou par chromatographie.
.

2- ESSAIS MÉCANIQUES

OBJECTIF

 vérifier que le conditionnement est apte à protéger le

médicament .

A` titre d’exemple:
 Des essais de traction et d’allongement
 Des essais de résistance au déchirement, à l’éclatement, aux chocs, à l’écrasement.
 Essai de dureté. o Essai de perçage pour les fermetures des préparations injectable
 3- ESSAIS DE PERMÉABILITÉ DES
MATIÈRES PLASTIQUES

Perméabilité à la vapeur d’eau: Perméabilité aux gaz Perméabilité aux principes Perméabilité aux liquides
•Méthode gravimétrique: ( O2 , CO2 , air): volatils :(solvants, :
Mesure du poids du récipient avant  Mesure de la essences…):  Perte de masse après
et après exposition à un atmosphère différence de  Détermination de perte avoir fait subir au
humide. pression à l’aide de poids en fonction du contenant et à son
 Cas d’un récipient: Mettre dans le d’un manomètre temps du récipient dans contenu des
récipient à tester un produit lequel ont été placées variations de pression
avide d’eau ( gel de silice, CaCl2 ) les substances volatile
 Cas d’un film: Mettre le CaCl2
dans une capsule d’Al. Placé le
film à étudier sur la capsule en
assurant son étanchéité par un
joint de cire.
 4 -ESSAIS DE RÉSISTANCE CHIMIQUES

Objectif

 Prévoir la tendance des matériaux de conditionnement à donner lieu

à des phénomènes de décharge

Principe:
 Mettre un liquide (eau , solvants) en contact direct avec le récipient à étudier à T° donnée puis
analyser le liquide en vue de mettre en évidence d’éventuelles substances passées en solution
.

5- TRANSPARENCE

Objectif

 Vérifier que la transparence du matériau permet le contrôle de limpidité ou bien au

contraire s’assurer qu’il protège le produit contre les radiations lumineuses (cas des
récipients colorés).
 6- ESSAIS D’INNOCUITÉ

 Essai de tolérance locale

 Essai de cytotoxicité: sur cultures des cellules fibroblastiques

 Exposer le médicament sous son emballage prévu pour sa

commercialisation à des conditions climatiques variées et vérifier que
sa qualité est conservée.
L'environnement
 Le contrôle microbiologique
de l'environnement

Le contrôle d’environnement est un domaine qui prend de plus en plus d'importance du fait
de son lien avec une éventuelle contamination des produits pharmaceutiques

Eau Surface Personnel

Air
 1-Contrôle microbiologique
de l'air

L'air est un important vecteur de contamination. Les micro-organismes de l'air sont présents
sur des particules de plus grande taille (squames, microgouttelettes de salive, poussières).

Sédimentation Aspiration
 Méthodes par sédimentation :
prélèvement passif de l’air

Une boîte de Pétri contenant un milieu gélosé est laissée ouverte pendant une durée prédéterminée
afin de recueillir les particules par sédimentation

Boite de sédimentation Près d’équipement Dans un coin Sur paillasse

 Méthode par aspiration :
prélèvement actif de l’air

 Le biocollecteur a été́ placé à un mètre du sol au niveau du centre de la salle, avec la fermeture
des portes, un échantillon prélevé dans un 1 m3 par salle, l’essai est mené à double ;
échantillonnage sur milieu de culture PCA et sur le milieu SAB.

La couverture du biocollecteur a été désinfectée après chaque utilisation à l’aide d’une compresse
stérile imbibée d’un agent désinfectant.

 Une incubation directe des boites de pétries du prélèvement par le bio-collecteur et les boites de sédimentation à
30-35°C pour le milieu PCA pendant 48H à 72H et à 20-25°C pour le milieu sabouraud pendant 5 jours
 2- Contrôle microbiologique de l’eau purifié:
(eau de rinçage de verrerie et d’équipements)

 L’eau purifiée est l’utilité la plus utilisée dans l’industrie pharmaceutique.

L’eau est utilisée en tant qu’excipient, pour reconstituer un médicament, lors des étapes de synthèse du principe actif
(PA) ou de la formulation du produit fini ou comme élément principal de nettoyage des cuves, des équipements ou
des emballages primaires.

 L’échantillonnage est réalisé́ par la collection d’eau purifiée à partir des vannes de distribution:
au niveau de la production et au niveau du laboratoire
  La vanne de sortie d’eau purifiée est premièrement désinfectée par de l’alcool à
70°, après 5min d’écoulement d’eau la récolte de la quantité́ nécessaire pour
l’analyse a été́ effectuée dans des flacons vides stériles et préalablement
désinfectés de l’extérieur,

 Le prélèvement est identifié et renseigné : le point de prélèvement, la date et

l’heure, la quantité́ prélevée et le visa du préleveur, ce dernier est de suite
acheminé au laboratoire pour contrôle microbiologique.
.

 L’analyse a été́ réalisée sous hotte à flux laminaire vertical type en présence de bec
bensun. Une quantité́ de 5ml d’eau purifiée a été́ filtrée, à la fin la membrane
filtrante a été́ déposée sur le milieu gélosé́ R2A et les boites de pétri ont été́
incubées à 30-35°C pendant 5 jours.

 Les résultats ont été́ exprimes en nombre d’UFC/ml comme suit: R= nb de colonies
dénombrées/ volume filtré, avec un seuil d’intervention de 100UFC/ml.
 3- Contrôle microbiologique des
surfaces:

Toutes les surfaces doivent faire l’objet d’un suivi, que ce soient les sols, les murs ou les
surfaces des équipements. Différentes méthodes existent.

Empreinte Écouvillonnage Chiffonnettes

 Méthodes par empreinte

 La méthode de prélèvement est basée sur le contact direct des doigts des operateurs sur le milieu gélosé ́
Sabouraud et PCA, avec une légère pression et après incubation a température adéquate.
 Méthode par écouvillonnage

 Ecouvillon sec ou humidifié qui est frotté contre la surface à contrôler. Cet écouvillon sert ensuite à ensemencer
avec le milieu TSA et Sabouraud, par la technique d’étalement en surface à l’aide d’un râteau stérile, une incubation
à 30-35°C pendant 48H à 72H pour le milieu TSA et 20-25°C pendant 5 jours pour le milieu Sabouraud.

 Cette méthode a été́ appliqué pour le contrôle des surfaces sur les différents points critiques (sol, panneau,
.
portes, équipements) et pour le contrôle d’habillage au niveau du : coude, poignet et abdomen.
 Méthodes par chiffonnettes ou épongettes

 La méthodologie est identique à l’écouvillonnage.

Après prélèvement, les milieux de cultures sont mis à incuber à température adéquate.
 4-Contrôle du personnel

 Des échantillons microbiologiques des surfaces des gants de chaque operateur doivent être
prélevés. Des prélèvements supplémentaires peuvent être réalises pour le personnel travaillant
en zone de classe A/B, tels que par exemple un contact de la cagoule, des avant-bras et du
torse.

 Les tenues doivent être stérile , donc conçues pour ne libérer ni fibres ni particules et doivent
retenir les particules émises par l'operateur
 conclusion

Garantir une bonne qualité

hygiénique .

Garantir une bonne qualité

marchande du produit fabriqué .

Garantir un bon rendement .

Minimiser les pertes dues a des mauvaises

conditions de stockage et donc avoir le moins
possible de produits non conforme .