Génie Génétique

Université de Béchar « Algérie »
LE MODE
D’OBTENTION
DES OGM
2009-2010
PLAN DE TRAVAIL:
1)Introduction
2) Le mode de création des OGM
3)Application de la méthode de transfère chez les procaryotes
Création des bactéries productrices de l’insuline
4)Application de la méthode de transfère chez les eucaryotes
L’obtention de mais bt (le mon810)
5)La conclusion
6)Les références bibliographiques
INTRODUCTION:
Les organismes transgéniques ou OGM (l’organisme
génétiquement modifié ) contient un ADN recombinant intégré de
manière stable dans toutes cellules de l’organisme, qu’il s’agit
d’une plante, d’un animal ou d’un microorganisme, provenant
d’un organisme de la même espèce ou d’un autre organisme
(plante, animal ou autre).
le nouveau morceau d’ADN renferme un gène qui code pour une
protéine particulière. Par conséquent, les OGM acquièrent
habituellement une nouvelle fonction ou un nouveau caractère.
Comment crée un OGM?
Pour quoi on fabrique des OGM ?

LA CRÉATION DES OGM:
LA CRÉATION DES OGM:
un plasmide
possédant un gène
de résistance à un
antibiotique
L’isolement
d’un gène
fonctionnelInsertion
Insertion
du gène
Sélection des
Transfert du bactéries
plasmide dans porteuses de
bactéries hôtes gène d’
intérêt
Transfert
du gène
LA CRÉATION D’UN OGM
«PROCARYOTE »:
Les bactéries productrices
d’insuline humain
LE BUT DE TRANSGÉNÈSE:
Les personnes atteintes le

diabète, ont des cellules
pancréatiques incapables de
synthétiser l’insuline.
Ces malades ont été traités
avec l'insuline d’origine
animale (bœuf, mouton). L’INSULINE
Gène humain :
GGC ATT GTG GAA CAA TGC TGT ACC AGC ATC TGC TCC …
Insuline humaine :
Gly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Thr-Ser-Ile-Cys-Ser-…
Gène du bœuf :
GGC ATT GTG GAA CAA TGC TGT GCC AGC GTC TGC TCC…
Insuline du boeuf :
Gly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Ala-Ser-Val-Cys-Ser-…
Gène du mouton :
GGC ATT GTG GAA CAA TGC TGT GCC GGC GTC TGC TCC…
Insuline du mouton :
Gly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Ala-Gly-Val-Cys-Ser-…
LA CRÉATION DES BACTÉRIES
TRANSGÉNIQUES:
Site de
restriction un gène de
résistance à
l’ampicilline
pBR322 Gène de
l’insuline
humain
un gène de
résistance à La coupure
tétracycline par Pst I
La liaison
Un plasmide
recombiné
Un plasmide recombiné
L’introduction de
plasmide recombiné
Un milieu avec l’ampicilline
24h
Un milieu avec la
tétracycline+ l’ampicilline
l’obtention des bactéries
transgéniques
Méthodes de
purification
l’obtention d’insuline
humain
injectée aux patients

LA CRÉATION D’UN OGM
«EUCARYOTE »:
Le maïs bt (le MON810)
Le maïs:
-Le maïs «Zea mays » une
plante tropicale herbacée
annuelle de la famille des
Poacées.
-Le maïs possède dix paires de
chromosomes (n = 20).
-Le génome compte 50 000

à 60 000 gènes.
Les insectes nuisibles:
Les pyrales (Ostrinia nubilalis) «
foreur européen du maïs » et les
sésames sont les principales
insectes dommageables de maïs, les
modifications permettent aux maïs
d’avoir une meilleure résistance face
à certains insectes.
BACILLUS THURINGIENSIS SUBSP. KURSTAKI
est une bactérie terricole à

Gram positif qui produit des
endospores.
Au stade de la sporulation, il
produit plusieurs cristaux de
protéines.
LA PROTÉINE CRY1A(B) :
est une δ-endotoxine qui lutte
activement contre certains insectes
comme la pyrale du maïs, la livrée, la
fausse teigne des crucifères, la
noctuelle verdoyante et la piéride du
chou.
cette protéine n’est pas toxique
pour les humains et les autres
vertébrés.
LE MODE D’ACTION DE LA TOXINE:
insertion dans la
Ingestion
Interaction
Changement
et solubilisation
avecdeun
Activation
membrane
La lyse deprotéolytique
pour
la cellule
former
récepteur
de
conformation
la protoxine
membranaire.
un pore
Le maïs MON810:
Nouvelle caractéristique: résistance

à la pyrale du maïs (Ostrina nubilalis).
Méthode d’introduction: biolistique

(accélération des particules).
Utilisation : destiné à la consommation
humaine (monture sèche ou humide ou
huile de graines), la production de farine
et l’ensilage pour l’alimentation
animale.
LE MODE D’OBTENTION DE
MAÏS MON810 :
1. Extraction d’ADN
plasmidique:
2. Construction d’une banque d’ADN génomique:
Gène de Site de Gène de

la bt restriction résistance
Cry1A(B)
Coupure par le
même enzyme de
restriction
La ligature des
deux plasmides
Plasmide plus long

Un choc thermique
ou électrique
La pénétration des
plasmides dans la bactérie
Un milieu contient la
néomycine
Une banque génomique

3. La construction d’un gène chimère:
promoteurs
insensibles à un terminateur
Partie codante connu
leurs
environnement
gène chimère
Le vecteur de transfert de mais MON 810:
Promoteur 35Sdu virus de
un gène de
la mosaïque du chou-fleur.
néomycine
phosphotransferase
II
un segment
contient la
région de
réplication
Une partie de
la LAC Z
Terminateur de
gène de la
nopaline
synthétase «
NoS3’ » La partie codante de
la Cry1A(b)
4. La multiplication de vecteur:
Un choc thermique
ou électrique
La pénétration des
plasmides dans la bactérie
Un milieu sélective
Une clone
5. L’insertion dans les cellule de maϊs:
« La biolistique »
canon à particule
L’insertion est réalisé Se fait par bombarder des cellules ou

par cette méthodes de tissus végétaux à l’aide de
par ce que les cellule microbilles d’or ou tungstène
de maϊs sont sensibles enrobées d’ADN et projetées par un
à l’ Agrobactérium. canon .
6. Le contrôle d’insertion:
A. CONTRÔLE D’INSERTION DE GÈNE:
Se fait par PCR ou par

la technique Southern
blot pour but de vérifiée
l’intégration de gène
dans la cellule.
B. CONTRÔLE DE L’EXPRESSION DE GÈNE:
Tableau 1 : Teneurs moyennes en protéine Cry1Ab mesurée

dans des variétés de maïs portant l’événement MON810 en
µg/g de poids frais.
MON810*USA MON810*Europe Hybride
1994 1995 MON810*Europe 1995
Feuille 9,35 (7,93- 8,60 (7,59-9,39) 9,26 (8,20-10,51)
10,34)
Grain 0,31 (0,19-0,39) 0,53 (0,42-0,69) 0,46 (0,35-0,60)
La transformation est réussite puisque le

maϊs conserve le nouveau caractère.
Les applications des OGM :
alimentaire
agronomique
environnement
Pour la médecine
Conclusion:
Sur les six milliards humains que compte la planète en ce
début de XXI° siècle, plus de deux milliards soufrent de graves
maladies, insuffisances alimentaires et de malnutrition dues à
des carences en nutriments (Fe, I, Ca, vit A, C…).
Pour les uns, l’utilisation des OGM pourra remédier ces
problèmes.
Pour les autres, le doute les anime toujours à cause des
études non claires et non concluantes.
Il s’agit à ceux qui prônent leur utilisation de prouver leur
innocuité, ce qui n’est pas encore gagné car le consommateur
actuel est devenu plus mature.
LES RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES :
Les ouvrages :
•Eberhard Passarge, 2005, Atlasde poche de génétique, flammarion, 2 éme édition pp33-38.
•Caroline Debuissy et Eric Clément, 2002, Les risques biotechnologiques : état de la question dans
l’industrie agroalimentaire canadienne.
•Yves Tourte, 2001, Les OGM la transgenése chez les plantes ; dunod, 23-67.
•Francine CASSE, JEAN Chritophe BREITLER, OGM description-méthodes d’obtention
domaines d’application, edition France agricole, 2001, pages 97-100.
Les sites web :
•http://académie-en-ligne... 14:12. 15/12/2009
•http://frane.fr/ogm... 10:53. 06/01/2010
•http://wiki.org/mais-bt/..11:23. 17/12/2009
•http://wiki.org/mais.... 11:23. 17/12/2009
•http://wiki.org/mon810….14:12. 15/12/2009
•http://monsanto.fr 10:53. 06/01/2010
•http://natura-science11:23. 17/12/2009
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Pour quoi on fabrique des OGM ?

Les personnes atteintes le

Un milieu avec l’ampicilline

injectée aux patients

-Le maïs possède dix paires de

-Le génome compte 50 000

est une bactérie terricole à

Nouvelle caractéristique: résistance

Méthode d’introduction: biolistique

Gène de Site de Gène de

Plasmide plus long

Une banque génomique

L’insertion est réalisé Se fait par bombarder des cellules ou

Se fait par PCR ou par

Tableau 1 : Teneurs moyennes en protéine Cry1Ab mesurée

La transformation est réussite puisque le

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