Lexploration du

mtabolisme des acides

amins

Dr Morsli.M

4 eme anne pharmacie

Plan
Introduction
I. Structure des acides amines
II. Mtabolisme des acides amins
III. Les pathologies du mtabolisme des
acides amines
IV. Exploration des pathologies du
mtabolisme des acides amines

Introduction
Les acides amines constituent avec les glucides et les lipides
les briques constitutives de la cellule
Ils proviennent essentiellement de la dgradation des
protines alimentaires ainsi que des protines endognes ou
bien dune synthse de novo

acides amines

Protin
es
endog

Protine
s
alimenta

Synth
se de
novo

Introduction
La structure des acides amines leur procure des proprits
physico-chimique qui seront utiles pour leurs mise en vidence
pour le diagnostic des aminoacidopathies, qui sont des
pathologies dues des dficits enzymatiques des voies du
mtabolisme des acides amines

structure des acides amines

Les acides amines sont des molcules qui possdent :
une fonction acide carboxylique
Une fonction amine primaire
Une chaine latrale R
COOH

CH

NH
3

Cette structure leur procure des proprits physico-chimiques qui sont

exploites pour leur mise en vidence, ils existent des ractions communes
tous les AA qui sont dues au groupement carboxyle et amine, et des
ractions spcifiques qui sont dues la chaine latrale R

mtabolisme des acides

amines
le mtabolisme des AA comprend un mtabolisme commun a
tous qui concerne la fonction amine et la fonction carboxyle ,
et un mtabolisme propre a chaque AA et qui concerne la
chaine latrale R
Mtabolisme
anabolisme
catabolisme

Synthse partir dintermdiaires

mtaboliques

catabolisme
NH3

COOH

Dcarboxylation

Dsamination

Transamination

Molcules dintrt
biologiques

Le catabolisme de lazote
amine
NH3
Dsamination

Oxydative

Transamination

Non oxydative

Urogense hpatique
4/5

Ammoniogense rnale
1/5

La transamination
Raction de transfert rversible de groupement amin entre un
acide amin et un corps ctonique, la raction est catalyse
par une aminotransfrase qui utilise le phosphate de pyridoxal
comme cofacteur

Lun des couples est toujours le glutamate/ ctoglutarate

 Exp : lalanine aminotransferase

ALANINE NH3

Ctoglutarate
PLP

PYRUVATE
NH3

GLUTAMATE

La dsamination
Raction dlimination du groupement amin qui transforme
lacide amin en son corps ctonique ,la raction est catalyse
par une dsaminase
La dsamination oxydative:
Catalyse par une glutamate dshydrognase
GLUTAMATE

CTOGLUTARATE + NH3

La dsamination non oxydative:

Catalyse par une dshydratase , elle concerne les AA suivants:
SERINE
THREONINE

PYRUVATE + NH3
CETOBUTYRATE + NH3

La double transamination
La premire transamination:
Elle est spcifique lAA:
AA NH3
CETOGLUTARATE
AC CETONIQUE
GLUTAMATE NH3
La deuxime transamination :
GLUTAMATE NH3
CETOGLUTARATE

pyruvate
alanine NH3

ALAT

GLUTAMATE NH3
CETOGLUTARATE

OXALOACETATE
ASPARTATE NH3

ASAT

La transdsamination
La transamination: catalyse par une aminotransfrase
AA NH3
AC CETONIQUE

CETOGLUTARATE
GLUTAMATE NH3

La dsamination : catalyse par une glutamate

dshydrognase
GLUTAMATE

CTOGLUTARATE + NH3

Lammoniogense
Le NH3 issu de la transdsamination , ragit dans le muscle avec
le glutamate pour la synthse de glutamine, raction catalyse
par la glutamine synthtase
NH3 +glutamate NH3
glutamine (2 NH3)
La glutamine part destination du rein pour subir 2
dsaminations successives catalyse par une glutaminase, et
libre le NH4+ qui sera limin dans les urines

Lurogense
ure

NH3+
HCO3-

ornithine

arginine

Carbamoy
l
phosphate

citrulline
fumarat
e

4
3
argininosuccin
ate

aspara
te

1 Carbamoyl phosphate synthtase

2 Ornithine transcarbamylase
3 Argininosuccinate synthtase
4 Argininosuccinase
5 Arginase

Les pathologies du mtabolisme des acides amines

Ce sont des maladies hrditaires qui se transmettent selon le

mode autosomique rcessif , elles sont dues des mutations des
gnes qui codent pour les enzymes des voies du mtabolisme des
acides amines

I . Les dficits gntique du cycle de

lure
Certaines anomalies congnitales portent sur lune des
enzymes impliques dans la formation de lure , ce qui a pour
consquences une hyperammonimie car lurogense est la
voie principale d limination du NH3 sous forme dure

les symptmes qui se manifestent sont causs par la toxicit

de lammoniac pour le systme nerveux central , il sagit de
nauses , vomissement , trouble du tonus et coma

Les dficits gntique du cycle de

lure
PATHOLOGIE

ENZYME
DEFICIENTE

SYMPTOMES

HYPERAMMONIEMIE
TYPE I

CARBAMOYL
PHOSPHATE
SYNTHETASE

LETHARGIE,CONVULSI
ON, MORT

HYPERAMMONIEMIE
TYPE II

ORNITHINE
LETHARGIE,CONVULSI
TRANSCARBAMYLASE ON, MORT

ACIDEMIE
ARGININOSUCCINIQUE

ARGININOSUCCINASE

VOMISSEMENT,
CONVULSION

ARGININEMIE

ARGINASE

RETARD MENTAL

Lurogense
ure

NH3+
HCO3-

ornithine

arginine

Carbamoy
l
phosphate

citrulline
fumarat
e

4
3
argininosuccin
ate

aspara
te

II . Les phnylctonuries
a) Dfinition et incidence:
Cest une maladie gntique hrditaire qui se transmet selon le
mode autosomique rcessif , cest la plus frquente des
maladies hrditaire du mtabolisme des AA ( 1/10000 )
Elle est due un dficit en phnylalanine hydroxylase PAH, ou
plus rarement son cofacteur la tetrahydrobioptrine THB
par dficit de la dihydrobioptrine rductase ,lenzyme qui
permet la rgnration de THB

DHB
REDUCTA
SE

TH
B

DH
B

PHENYLALANI
NE

TYROSINE
PAH

b) Clinique:
Lenfant est normal la naissance , des signes autistiques
apparaissent au 6eme mois qui se dveloppent en retard
mental due laction toxique de la phy sur la mylinisation
des nerfs
Une hypothyroidie par hypotyrosinmie
Une hypo pigmentation par dficit en mlanine
MELANINE
PHENYLALANI
NE

TYROSINE

THYROXINE
CATECHOLAM
INE

c) Biologie:
Le dficit en PAH entraine une accumulation de la phy dans le sang ,
ce qui entraine lactivation dune voie mineur dans les conditions
physiologique qui synthtise les corps ctoniques de la phy qui
sont limins dans les urines do le nom phenylctonurie
PHENYLALANI
NE

PHENYLPYRUV
ATE
PHENYLACETA
TE

PHENYLLACTA
TE

D) Traitement:
Il sagit dun rgime pauvre en phy, car cette AA reste essentielle
lorganisme
Une concentration leve en phy chez la femme enceinte
phenylctonurique peut provoquer des anomalies du
dveloppement du ftus
Dans les pays dvelopps le dpistage de la PCU est
systmatique la naissance

III Les erreurs innes du mtabolisme de la

tyrosine
TYROSINE

TYROSINE
AMINOTRANSFE
RASE

TYROSINEMI
E II

4-OH PHENYLPYRUVATE
4OH
PHENYLPYRUVA
TE OXYGENASE

TYROSINEMI
E III

HOMOGENTISATE
ALCAPTONU
RIE

HOMOGENTISAT
E OXYGENASE

MALEYLACETOACETATE

FUMARYL
ACETOACETAS
E

FUMARYLACETOACETATE

FUMARATE

TYROSINEMI
EI

ACETOACETATE

 La tyrosinmie type I:
Due un dficit en fumarylacetoacetase, ce qui provoque
laccumulation de fumarylacetoacetate qui est lorigine
datteintes hpatiques conduisant des cirrhose , et datteintes
tubulaires conduisant au syndrome de Fanconi

La tyrosinmie type II:

Due un dficit en tyrosine aminotransferase , peut affecter les yeux,
la peau et le dveloppement mental. Les premiers symptmes sont
le larmoiement excessif, la douleur oculaire et l'apparition
d'ulcres la corn. Une dficience intellectuelle est note sur
50 % des personnes atteintes.

La tyrosinmie typeIII:
Due un dficit en 4 OH phenylpyruvate dioxygenase. Elle cause
des convulsions, une dficience intellectuelle et, de faon
intermittente, une absence de coordination des membres (ataxie).

 Lalcaptonurie:
Due un dficit en homogentisate dioxygenase qui provoque
laccumulation dacide homogentisique donnant la peau une
coloration bruntre, cest une affection bnigne
Lacide homogentisique est incolore mais soxyde lair libre
donnant une coloration bruntre aux urines

Lalbinisme:
Due un dficit en tyrosinase , lenzyme qui permet la synthse
de mlanine partir de tyrosine ce qui induit une perte de
pigmentation ( cheveux blanc , peau rose )
TYROSINAS
E

TYROSINE

MELANINE

IV La leucinose:
Cest un dficit enzymatique en dshydrognase des corps
ctoniques des acides amines chaine ramifie, ce qui
provoque laccumulation de valine, leucine et isoleucine qui
seront limins dans les urines et lui confrent une odeur de
sirop drable
Les signes cliniques sont des vomissements, convulsion et
mort prcoce

V. Les
hyperhomocysteinmies
Maladie hrditaire transmise selon le mode autosomique
rcessif, elle est due un trouble enzymatique du mtabolisme
de la mthionine .Le dfaut enzymatique porte sur la
cystathionine-synthase.
METHIONINE

HOMOCYSTEI
NE
cystathioninesynthase.

CYSTATHIONI
NE

 Le taux d'homocysteine sanguin est trs augment (100

micromole / L au lieu de 10 micromole normalement).
Cette hyperhomocysteinmie est responsable d accidents
vasculaires, thromboemboliques ou plus rarement
dathrosclrose. Lhomocystine a un rle dltre sur
lendothlium vasculaire, et stimulent la production des
mdiateurs de linflammation

Tab :les maladies gntiques affectant

le mtabolisme des acides amins
LES
PATHOLOGIES

ENZYME
DEFICIENTE

HYPERAMMONIEMIE
TYPE I

CARBAMOYL
PHOSPHATE
SYNTHETASE

LETHARGIE,CONVUL
SION, MORT

HYPERAMMONIEMIE
TYPE
II

ORNITHINE
TRANSCARBAMYLASE

LETHARGIE,CONVUL
SION, MORT

ACIDEMIE
ARGININOSUCCINIQU
E

ARGININOSUCCINASE

VOMISSEMENT,
CONVULSION

ARGININEMIE

ARGINASE

RETARD MENTAL

PHENYLCETONURIE

PHY HYDROXYLASE
DHB REDUCTASE

RETARD MENTAL,
HYPOPIGMENTATION

FUMARYLACETOACET
DESHYDROGENASE
ASE
DES CORPS
CETONIQUES DES AA
RAMIFIEE
HOMOGENTISATE
CYSTATHIONINE
DIOXYGENASE
SYNTHETASE

ATTEINTES
CONVULSION
HEPATIQUE ET
TUBULAIRE

TYROSINEMIE
LEUCINOSE

ALCAPTONURIE
HYPERHOMOCYSTEIN
EMIE

BIOLOGIE
SYMPTOMES

PIGMENTS
ACCIDENTSNOIR SUR
LA
PEAU
THROMBOEMBOLIQU

AMMONIUM

AMMONIUM
AMMONIUM ,
ARGININOSUCCINATE
AMMONIUM,
ARGININE
PHY,
PHENYLACETATE,
PHENYLLACTATE,
TYROSINE
LEUCINE,VALINE
FUMARYLACETOACETAT
ET
ISOLEUCINE
E ET
MALEYLACETOACETATE
HOMOGENTISATE
HOMOCYSTEINE
SANGUIN ET URINAIRE

Exploration des pathologies du mtabolisme des acides amines

Lexploration repose sur la structure chimique des acides

amins qui procure une ractivit aux diffrents groupements
fonctionnelles et permet leurs sparation , identification et
quantification dans un milieu biologique

EXPLORATION

DEPISTAGE

QUANTIFICATI
ON

DOSAGE
SPECIFIQUE

FRACTIONNEME
NT

I. Techniques de dpistage:
Ce sont des ractions qui permettent de dtecter rapidement une
concentration anormale en AA ou en leur catabolites, elles se
font sur les urines fraiches du matin
1) Raction de BRAND: permet de mettre en vidence les AA
soufrs comme la cysteine et lhomocysteine, qui dveloppent
une coloration rouge avec le nitroprussiate de sodium en milieu
alcalin
2) Le 2,4 dinitrophenylhydrazine DNPH en milieu chlorhydrique
donne avec les acides ctoniques un prcipit jaune dhydrazone
3) Le perchlorure de fer fecl 3 en milieu acide donne une coloration
variable selon le driv
PHENYLPYRUVATE
TYROSINE ET
DERIVE
DERIVE DE
LHISTIDINE

VERT FUGACE
VERT FUGACE
BLEU VERT STABLE

4)

Les ions mercuriques :

En prsence de nitrites , la tyrosine et ses mtabolites donnent un
compos rouge violace
NB:
Le dpistage permet dorienter le diagnostic

II. Techniques de quantification des acides amines

1. Raction la ninhydrine:
Les AA en prsence de ninhydrine, chaud et en milieu tamponn Ph 5,5
forment un compos violac appel pourpre de ruhemann dont labsorbance
est mesur 570nm
Avec la proline qui est un iminoacide ont obtient une coloration jaune qui
absorbe 440nm
2. Raction la fluorescamine:
La fluorescamine ragit rapidement avec les AA dans un tampon borate PH9 et
permet dobtenir un driv fluorescent trs sensible qui dtecte des
concentration de lordre du nano gramme
3. Le chlorure de dansyle:
Il forme avec les AA un dansylaminoacide fluorescent
4. Le 1 fluoro 2,4 dinitrobenzene DNFB ( raction de Sanger )
ph 9 les AA forment avec le DNFB le dinitrophenylaminoacide color en
jaune qui absorbe 420 nm
Rmq: Ces ractifs ragissent avec le groupement amin des AA

III. Technique de fractionnement des

acides amines

1. Chromatographie sur couche mince:

Cette technique permet la sparation des AA entre 2 phases:

Phase stationnaire :la couche de gel en silice ou cellulose
Phase mobile: un solvant qui est un mlange de butanol, dacide
actique et deau
Aprs migration des AA sur le gel , la rvlation se fait la
ninhydrine, on peut identifier lacide amin grce la
comparaison avec des tmoins qui sont des standards
dacides amins

III. Techniques de fractionnement

des acides amines
2. Electrophorse sur papier:
Les AA soumis un tampon acide acquirent une charge qui
dpend du groupement fonctionnelle R, cette diffrence de
charge permet leurs sparation par migration lorsqu'ils sont
soumis un champ lectrique

3. Electrochromatographie:
Cest un couplage entre lectrophorse dans une premire
tape, et une chromatographie dans une tape ultrieur
Cette technique a un excellent pouvoir de rsolution

IV. Techniques de dosage spcifique

Mthodes
chromatographiques

Mthodes
microbiologiques

Mthodes
chimiques

a) Mthodes chromatographiques :

1. La chromatographie changeuse
dions:
Cest une technique qui permet la sparation, lidentification
et la quantification de chaque AA dans un liquide
biologique
La colonne de chromatographie est form dun tube remplie
de particules synthtiques charges , ceux avec
groupements anioniques sont appels rsines
changeuses de cations et ceux qui possdent des
groupements cationiques sont appels rsines
changeuses danions
Les AA seront lus en fonction de leur affinit pour la rsine

 Exp: colonne changeuse de cations

Des groupements anioniques sont fixs sur la rsine SO3- qui attire les
AA chargs positivement
La solution dacide amin est amen ph 3, ce ph tous les AA sont
chargs positivement, cette charge diffre par le radical R
Les AA ayant la charge la plus positive se lie solidement la rsine et
migrent plus lentement ,ceux ayant la charge la moins positive
migrent rapidement et seront lus les premiers.
Chaque fraction recueillie la sortie de la colonne est quantifies par la
raction la ninhydrine

a)Mthodes
chromatographiques

2. La chromatographie liquide haute

performance HPLC : Cest une chromatographie haute
pression , la pression permet une sparation en un temps plus court
avec une meilleur rsolution, llution, la collection et lanalyse des
fractions sont automatiss , le rsultat est un chromatographe qui
donne la nature de lAA par le temps de rtention et sa concentration
par la surface du pic . Cest la technique de rfrence pour ltude
des AA

b) Mthodes
microbiologiques:

Test de Guthrie:

La phenylalanine est un facteur essentiel la croissance de

certaines souches de Bacillus subtilus
On additionne une glose le B2 thyenylalanine ,cest un
antagoniste de la phy qui inhibe la croissance bactrienne
On tale sur la glose une suspension de la bactrie et on pose un
disque de papier imprgn de sang , si la concentration de la
phy dpasse 120 umol/l on aura une croissance bactrienne ,
la zone de croissance est compare avec celle obtenues laide
de disques tmoins

c) Mthodes chimiques:
Ces mthodes permettent de doser spcifiquement des AA ou des
produits de leur mtabolisme
Dosage de la phenylalanine: raction de McCaman et Robins
En prsence dun dipeptide L-leucyl-L-alanine, la PHY forme un
complexe fluorescent avec la ninhydrine-Cu
Dosage de la tyrosine:
Le 1 nitroso 2 naphtol et le nitrite forment en solution dacide nitrique
avec la tyrosine un complexe fluorescent
Dosage de lammoniac:
Glutamate
dshydrognasNAD+glutamate
e

Cetoglutarate+NADH,H +NH3
On mesure la diminution de labsorbance du NADH,H 340 nm

AMINOACIDES ET
DERIVES
ORNITHINE
ARGININE

CONCENTRATION
PLASMATIQUE
mol/l
45 20

190

- 140

VALINE

90

- 290

LEUCINE

70

- 155

ISOLEUCINE

35

PHENYLALANINE

30

TYROSINE

25

85

- 70
-

90

Concentrations plasmatiques des acides amines et drivs