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V2 – 25/05/11
Chapman Mannité milieu gélosé (IV) 355-3647
355-3648/356-3844 356-3926/356-4134
DOMAINE D’APPLICATION NB : Des adaptations de la formule ont pu être Milieu utilisé pour la recherche et le réalisées afin d’atteindre les critères de dénombrement des Micrococcaceae (y.c. performance requis. Staphylocoques pathogènes) lors de l’analyse des eaux de piscine. AUTRE(S) PRODUIT(S) NECESSAIRE(S) (NON FOURNI(S)) Equivalent USP 30/NF 25 : Milieu IV • Diluant(s) • Eau distillée REFERENCE(S) USP 30/NF 25 U.S. Pharmacopeia and MATERIEL NECESSAIRE NON FOURNI National Formulary (2007) : Microbial Limit (liste non exhaustive) Tests (61) - Microbiological Tests • Balance • Sacs de pesée stériles PRINCIPE • Broyeur Le principe du milieu repose sur l’aptitude de la • Plaque chauffante plupart des Staphylocoques pathogènes et des • Agitateur-homogénéisateur Micrococcaceae à fermenter le mannitol • Flacons de 200 ml en Pyrex avec bouchons (auréole jaune autour des colonies due au autoclavables virage de l’indicateur coloré). • Boîtes de Pétri stériles (Ø = 90 mm et 55 mm) Le milieu est rendu inhibiteur vis-à-vis des • Appareil de filtration autres bactéries par la forte concentration en • Membranes filtrantes (Ø = 47mm et ≤ 0,45 mm) chlorure de sodium. • Pinces pour manipuler les membranes • Bain-marie avec une précision de ±1°C PRESENTATION • Etuve ou enceinte thermostatée avec une • Précoulé précision de ±1°C 20 boîtes x 90 mm code 356-3844 • Autoclave 10 boîtes x 55 mm code 356-3926 • Tout matériel courant d’un laboratoire • Prêt à l’emploi PREPARATION DU MILIEU DESHYDRATE 200 ml x 6 flacons code 355-3647 Toujours agiter avant chaque utilisation. 10 ml x 25 tubes code 355-3648 Dissoudre 111 grammes de poudre dans un litre d’eau distillée, mélanger jusqu’à l’obtention • Déshydraté d’une suspension homogène. 500 g code 356-4134 Chauffer lentement en agitant fréquemment, puis porter à ébullition jusqu’à dissolution CONSERVATION/VALIDITE/LOT complète. • Précoulé : +2-20°C Répartir à raison de 200 ml par flacon ou de 20 • Prêt à l’emploi : +2-8°C ml par tube et stériliser à l’autoclave à 121°C ± • Déshydraté : +15-25°C, flacon 1°C pendant 15 minutes. soigneusement fermé dans un endroit frais et Couler en boîtes de Petri et laisser sécher. sec • La date de péremption et le numéro du lot Taux de reconstitution : 111 g/l sont indiqués sur le conditionnement. 500 grammes de poudre permettent de réaliser 4,5 litres de milieu. FORMULE THEORIQUE Peptone bactériologique 10 g PROTOCOLE Extrait de viande de bœuf 1g • Préparation des échantillons Chlorure de sodium 75 g A effectuer conformément à la norme du produit Mannitol 10 g concerné. Rouge de phénol 25 mg Agar 15 g • Ensemencement et incubation Eau distillée 1000 ml - Méthode par filtration sur membrane : pH (25 °C) final = 7,5 ± 0,2 Filtrer 100 ml d’échantillon et déposer la 1/2 V2 – 25/05/11
Chapman Mannité milieu gélosé (IV)
membrane à la surface d’une boîte de Pétri MOTS CLES
préalablement coulée et séchée. Chapmann - Méthode par ensemencement en surface : mannité/Micrococcaceae/Staphylocoques Ensemencer 0,1 ml de l’échantillon à analyser pathogènes/Eaux de ou de ses dilutions décimales et étaler. piscine/Recherche/Dénombrement/Mannitol/Mili eu Dans les deux cas, incuber à 37°C ± 1°C pendant 48 heures. BIBLIOGRAPHIE • CHAPMAN G.H. (1948) : An improved stone LECTURE ET INTERPRETATION medium for the isolation and testing of food Dénombrer les différents types de colonies poisoning Staphylococci. Food Research 13 : blanches ou jaunes entourées d’un halo jaune, 100-105 en éliminant les grosses colonies muqueuses qui correspondent à des bactéries du genre • CHAPMAN G.H. (1945) : The significance of Bacillus. sodium chloride in studies of Staphylococci. Pour chaque type de colonies, réaliser un prélè- Journal of bacteriology 50 : 201 vement et une coloration de Gram : considérer comme Micrococcaceae les colonies formées par des Cocci Gram +. Pour le dénombrement des Staphylocoques pathogènes, prélever une colonie de chaque type (préalablement identifiée aux Micrococcaceae) et repiquer sur bouillon Cerveau-cœur (code 355-3664). Après 24 heures d’incubation à 37°C, réaliser un test coagulase sur plasma de lapin (code 355- 6352). Considérer comme Staphylocoques pathogènes toutes les colonies identifiées comme Micrococcaceae et qui possèdent en plus une coagulase pour le plasma de lapin.
PRECAUTION D’EMPLOI Respecter les Bonnes Pratiques de Laboratoire.
CONTROLE QUALITE Au regard des travaux préalables à l'harmonisation des pharmacopées actuellement en cours, nous vous recommandons de vous reporter aux certificats de contrôle pour connaître les modalités mises en oeuvre pour le contrôle de la qualité (performance et sélectivité) des milieux de culture fabriqués par Bio-Rad.
Tous les produits fabriqués et commercialisés
par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot du produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et il n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation.
