16- Stress hydrique et salin

TP : Stress hydrique et salin
I. Manipulations
Toutes les analyses et les mesures seront réalisées sur des plantes (graminées ou légumineuse) stressées (S)
et non stressées ou témoins (T). Chaque mesure, pour chaque paramètre, sera réalisée au moins 3 fois. La
préparation du matériel végétal se fait comme suit :
I.1 Préparation du matériel végétal
I.1.1 Germination
Les graines de l’espèce prise comme modèle biologique (blé, lentilles, haricot, …) sont rincées avec de l’eau
javellisée (NaClO) 10 % pendant 5min pour les désinfecter. Puis soigneusement lavé et trempé pendant 2 à 4
h dans de l’eau distillée. Après elles sont mises à germer sur du papier absorbant. L'arrosage est réalisé
régulièrement avec de l'eau distillée. La germination se déroule dans l’étuve à 26° C (température optimale).
I.1.2 Mise en pots
Après germination de trois à cinq jours, les plantules sont repiquées dans des pots en plastique de 14 cm de
diamètre et de 10 cm de profondeur dont le fond est troué, contenant du terreau (1/3), de la terre argileuse
(1/3) et du sable (1/3) afin de faciliter le drainage de l’eau.
I.2 Application du stress hydrique
Le stress de déficit hydrique est provoqué par un arrêt d’arrosage durant 10-15 jours après deux semaines de
croissance (plantules au stade 2ème feuille). Ainsi, nous obtenons deux lots de plantes dont un lot est arrosé
régulièrement et considéré comme contrôle (témoin) et un autre non arrosé considéré comme stressé (fig. 1).
Figure 1: Photos montrant des plantes de blé tendre Triticum aestivum témoins et stressées par un arrêt
d’arrosage.
TP 1- Mesure de la croissance linéaire (en longueur) de la partie aérienne
Afin de suivre la croissance linéaire des parties aériennes, des mesures de la longueur sont effectuées. Les
mesures d’allongement des plantules sont effectuées sur la deuxième feuille des plantes stressées et non
stressées au stade un mois de croissance correspondant au 15éme jours après l’arrêt d’arrosage pour les
stressées. Ces mesures sont faites soigneusement à l’aide d’un papier millimétré. Chaque valeur représente
la moyenne de dix mesures. Elle est exprimée en cm.
TP 2- Mesure de la croissance pondérale de la partie aérienne
La croissance pondérale indique l’accumulation de matière végétale. Des plantules stressées et non stressées
sont pesées à l’aide d’une balance de précision (poids de la matière végétale fraîche, PMVF), puis placées à
l’étuve (48 h, 80° C). Ensuite, le poids de matière végétale sèche (PMVS) est mesuré. Chaque valeur
représente la moyenne de dix mesures. Elle est exprimée en mg.
1
TP 3- Mesure de la surface foliaire
La surface foliaire est estimée à partir d'un échantillon de 05 feuilles, dont on mesure la longueur (L) et la
plus grande largeur de la feuille étendard. La surface foliaire est déduite par la formule:
SF (cm2) = 0.607 (L x l) Où :
Où :
SF = surface moyenne de la feuille étendard (cm2)
L = longueur moyenne de la feuille étendard (cm)
l = largeur moyenne de la feuille étendard (cm)
0,607 = coefficient de régression de la surface estimée à partir du papier grammage sur celle déduite par le
produit (L x l) (Spagnoletti-Zeuli et Qualset, 1990).
Ensuite, les feuilles étendards sont séchées à 85°C pendant 48 heures et pesées pour obtenir le poids sec
(PS). Le poids spécifique foliaire (PSF) est calculé à partir de la formule donnée par Sarkar et al., (2003) :
PSF (mg/ cm2 ) = PS/SF
TP 4- Mesure de la teneur relative en eau : TRE

(ou RWC, relative water content)
La mesure de TRE a été réalisée au stade épiaison sur un échantillon de cinq feuilles échantillonnées pour
déterminer l’état hydrique des plantes selon la méthode de Barrs et Weartherly (1962). Les feuilles
échantillonnées par traitement sont coupées au niveau de la base du limbe et directement pesées pour avoir
le poids de la matière fraîche (PF, mg). Elles sont ensuite placées dans un tube à essai contenant de l’eau
distillée, à l’abri de la lumière à la température ambiante du laboratoire pendant 4 heures, pour atteindre
l’état turgide. Les feuilles sont à nouveau pesées, après avoir pris soin de l’essuyer de l’excès d’eau avec du
papier buvard, pour obtenir le poids turgide (PT, mg). L’échantillon est enfin mis à sécher dans une étuve, à
65°C pendant 16 heures afin de déterminer le poids sec (PS, mg). Les valeurs de la teneur relative en eau
sont calculées à partir de la formule :
TRE (%) = [(PF-PS) / (PT- PS)] × 100
Où :
TRE = teneur relative en eau foliaire (%)
PF = poids de la matière fraiche foliaire (mg)
PS = poids de la matière sèche foliaire (mg)
PT = poids de la matière turgide foliaire (mg)
TP 5- La perte d’eau par feuille excisée (RWL)
Le taux de déperdition d’eau (RWL, Rate Water Loss) par la feuille excisée. La feuille est coupée à la base
du limbe, la partie sectionnée est trempée immédiatement dans un tube à essai rempli d'eau distillée et
placée à l'obscurité à une température de 4°C pendant 12 heures. A la pleine turgescence, les feuilles sont
essuyées et pesées, ce qui constitue le poids initial (Pi). Elles sont ensuite placées sur une paillasse au
laboratoire, à température ambiante. Des pesées sont effectuées à trois temps différents : après 30 mn
(RWL30), 60 mn (RWL60) et 120 mn (RWL120). La perte d’eau est déterminée après 20 et 60mn par la
formule suivante:
RWL t (mg.cm-2 .mn-1) = (Pi – Pt / Ps) (1 / Sf * t)
Où :
Pi : Poids initial ;
Pt : poids temps (20 et 60mn) ;
PS : poids sec ;
sf : Surface foliaire.

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TP 2- Mesure de la croissance pondérale de la partie aérienne

TP 4- Mesure de la teneur relative en eau : TRE

TP 5- La perte d’eau par feuille excisée (RWL)

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