Université Mohamed Khider /Biskra
Faculté des sciences exactes et des sciences de la nature et de vie
Département des sciences biologiques
Module : Immunologie générale
Etudiants cibles : 2ème année LMD tronc commun
TD N°6 : Test ELISA
Année universitaire: 2019/2020
1/ Définition
• La technique d'ELISA (Enzyme-Linked
ImmunoSorbent Assay) aussi appelée EIA
(Enzyme Immuno Assay).
• Elle repose sur :
➢une réaction immunologique,
➢ se déroulant sur un support solide et,
➢ révélée par une réaction enzymatique en
phase liquide.
• La mesure de la réaction colorée finale se fait
à l'aide d'un spectrophotomètre.
• L'ELISA peut être réalisé à visée:
✓qualitative ou quantitative;
✓ selon que l'on utilise ou non une courbe
d'étalonnage (ou gamme étalon);
• Le seuil de détection des ELISA quantitatifs est
de l'ordre du pmol/L ou du ng/mL.
• Les antigènes d'intérêt ou les anticorps
spécifiques sont immobilisés sur le support
solide.
Types
d'ELISA
La nature de la molécule La technique de
à doser révélation
Elisa direct
Elisa
indirect
Elisa
sandwich
Elisa
compétitif
Tableau 1. Différence entre ELISA indirect et ELISA sandwich
l'analyte recherché : antigène ou anticorps
Analyte Type de Analyte Premier Deuxième Réactif
recherché technique adsorbé réactif réactif soluble de
Elisa soluble soluble révélation
Anticorps Indirect Antigène Anticorps Anticorps Substrat/
primaire secondaire chromogène
marqué
Antigène Sandwich Anticorps Antigène Anticorps Substrat/
de capture de chromogène
détection
marqué
2/ Méthodologie
a. Adsorption des molécules:
• l'immobilisation de la molécule à adsorber sur
un support solide,
• le plus généralement des microplaques (de 96
ou 384 puits) de polystyrène.
Lecteur de microplaques à absorbance
b. Saturation du support adsorbant
Elle permet :
❖d'éviter toute adsorption ultérieure de
matériel présent dans l'échantillon à doser ;
Tampon
(PBS + BSA)
Lavage
c. Première réaction antigène–anticorps
Saturation de la plaque
Lavages
Dépôt du
premier Incubation
réactif soluble
Liaison des Ag ou Ac en
solution à la molécule
adsorbée
d. Deuxième réaction antigène–anticorps
Plusieurs lavages
Réactif secondaire
ELISA
ELISA
indirects
sandwich
Plusieurs molécules d’Ac Ac secondaire ou de
secondaire peuvent se détection monoclonal
fixer à l’Ac primaire peuvent se fixer à l’Ag
recherché
e. Révélation
• Après lavages, l'étape ultime de
l'ELISA est la révélation
consistant en l'ajout du substrat
et du chromogène spécifiques de
l'enzyme.
• Mesure de la densité optique
F. Expression des résultats
• Différentes courbes de
titration peuvent être obtenues.
Exemples
Détection
ELISA SANDWICH de l’Ag
Détection
ELISA INDIRECTE de
l’Anticorps
Exemples d'applications
L'ELISA est une technique très couramment développée dans :
❖ le domaine du diagnostic biologique;
❖ ou en recherche fondamentale;
❖ le dosage de protéines d'intérêt dans un surnageant ou
lysats cellulaires est réalisé fréquemment en ELISA.
Applications industrielles et vétérinaires :
❖ dans le contrôle qualité des produits finis ou en cours de
production,
❖ ainsi qu'en épidémiologie et,
❖ contrôle vétérinaire.
En clinique :
❖ le sérodiagnostic des maladies infectieuses ;
❖ pour le diagnostic et le suivi de maladies auto-immunes.
