ESI Preprints August 2022 Not Peer-reviewed

Formulation et Fabrication des Suppositoires à visée

Antipaludique à Base du Beurre de Karité Contenant
Artémisia annua Cultivé à l’Ouest Cameroun

Lionel Tematio Nague

Emmanuel Mpondo
Emmanuel Nnanga Nga
Laboratoire de Pharmacie Galénique et Législation Pharmaceutique, Faculté
de Médecine et des Sciences Biomédicales, Université de Yaoundé I,
Yaoundé, Cameroun
Clautaire Mwebi Ekengoue
Association Scientifique Africaine pour l’Innovation et l’Entrepreneuriat
(ASAIE), Yaoundé, Cameroun
Richard Vivien Youagam
Association Scientifique Africaine pour l’Innovation et l’Entrepreneuriat
(ASAIE), Yaoundé, Cameroun
Ministère des Finances (MINFI), Cameroun

Doi: 10.19044/esipreprint.8.2022.p79

Approved: 09 August 2022 Copyright 2022 Author(s)

Posted: 11 August 2022 Under Creative Commons BY-NC-ND
4.0 OPEN ACCESS

Cite As:
Nague L.T., Mpondo E.M., Nga E.N., Ekengou C.M. & Youguam R.V. (2022). Formulation
et Fabrication des Suppositoires à visée Antipaludique à Base du Beurre de Karité
Contenant Artémisia annua Cultivé à l’Ouest Cameroun. ESI Preprints.
https://doi.org/10.19044/esipreprint.8.2022.p79

Résumé
Le but de la présente étude est de formuler et fabriquer des
suppositoires à visée antipaludique à base de matières premières locales afin
d’améliorer la prise en charge du paludisme, essentiellement chez les enfants
âgés de moins de 5 ans. Pour faire cela, on a utilisé comme principe actif la
poudre de feuilles et tiges sèches de Artémisia annua provenant de la Région
de l’Ouest-Cameroun et comme excipient le beurre de karité en provenance
de la région du Nord Cameroun puis amélioré à 4% de silice colloïdale. Les

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essais organoleptiques ont mis en évidence une poudre de couleur grisâtre,

de saveur amère et très odorante. L’analyse granulométrique a montré que la
poudre de feuilles et tiges sèches de Artémisia annua a une granulométrie
allant de très fine à fine. La concentration en flavonoïdes totaux de la poudre
de feuilles et tiges sèches de Artémisia annua est de 76,9 μg/ml d’équivalent
de quercétine. Les suppositoires à visée antipaludique fabriqués à partir de
250mg de poudre de feuilles et tiges sèches de Artemisia annua et 1820mg
de beurre de karité+4% de silice colloïdale ont suivi un contrôle
pharmaceutique. Ce contrôle qualité des suppositoires à visée antipaludique
contenant Artémisia annua fabriqués en utilisant le beurre de karité comme
excipient a donné des valeurs des paramètres physico-chimiques en
adéquation aux valeurs standards. La forme galénique issue de cette formule
pourrait présenter une meilleure prise en charge thérapeutique des patients et
particulièrement les enfants, au Cameroun et ailleurs en Afrique.

Mots-clés: Paludisme, enfants, Artemisia Annua, Beurre de Karité,

suppositoires, prise en charge thérapeutique, Cameroun

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Formulation and Manufacture of Suppositories for

Antimalarial Purposes Containing Artemisia annua
Cultivated at West Cameroon
Lionel Tematio Nague
Emmanuel Mpondo
Emmanuel Nnanga Nga
Laboratoire de Pharmacie Galénique et Législation Pharmaceutique, Faculté
de Médecine et des Sciences Biomédicales, Université de Yaoundé I,
Yaoundé, Cameroun
Clautaire Mwebi Ekengoue
Association Scientifique Africaine pour l’Innovation et l’Entrepreneuriat
(ASAIE), Yaoundé, Cameroun
Richard Vivien Youagam
Association Scientifique Africaine pour l’Innovation et l’Entrepreneuriat
(ASAIE), Yaoundé, Cameroun
Ministère des Finances (MINFI), Cameroun

Abstract
This paper focuses on formulating and manufacturing antimalarial
suppositories based on local materials in order to improve the management
of malaria mainly for children under 5 years of age. Doing it, we used as
active principle the powder of leaves and stems of Artemisia annua from
Western Cameroon and, as an excipient, shea butter improved with 4%
colloidal silica from the Northern Cameroon. The tests revealed a greyish-
coloured powder with a bitter taste and a very fragrant one. The particle size
analysis showed that the powder of leaves and stems of Artemisia annua has
a particle size ranging from very fine to fine. The concentration of total
flavonoids in the powder of leaves and stems of Artemisia annua is 76.9
μg/ml of quercetin equivalent. Antimalarial suppositories made from 250mg
of Artemisia annua leaf and stem powder and 1820mg of shea butter,
enhanced with 4% colloidal silica, have undergone pharmaceutical control.
This quality control of Artemisia annua antimalarial suppositories,
manufactured using shea butter as an excipient, gave values of the physico-
chemical parameters in line with the standards values. The galenic form
resulting from this formula could offer better therapeutic management of
patients, particularly children, in Cameroon and elsewhere in Africa.

Keywords: Malaria, children, Artemisia Annua, Shea Butter, suppositories,

therapeutic management, Cameroon

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1. Introduction
Le paludisme reste la principale cause de mortalité dans le monde
(Talapko et al., 2019). C'est la maladie la plus courante en Afrique et dans
certains pays d'Asie. Les principales victimes sont les enfants de moins de 5
ans (Danis & Genetilini, 1998). Plus de la moitié de la population mondiale
souffre du paludisme. Près de 99 % des décès concernent l’Afrique dont 86
% des décès concernent des enfants de moins de 5 ans. Il s’agit d’une
érythrocytopathie due à un hématozoaire du genre plasmodium (Danis &
Genetilini, 1998). Le paludisme est une maladie grave qui se transmet à
l'homme par la piqûre d'un moustique femelle infecté de l'espèce Anophèles
(Talapko et al., 2019).
Le traitement du paludisme repose sur le traitement curatif d’une part
et préventif d’autre part. Dans l’ensemble, l’arsenal antipaludique comporte
plusieurs molécules classées, selon l’Organisation Mondiale de la Santé
(OMS) en fonction de leur mode d’action et leur structure chimique. Le
choix d’une molécule antipaludique dépend de plusieurs critères (SPILF,
2008). L’objectif étant la guérison sans rechute, tout en évitant des
complications iatrogènes (SPILF, 2008). Malheureusement, les efforts
déployés pour lutter contre le paludisme sont contrariés par l’apparition et la
propagation de résistance à la plupart des molécules présentes sur le marché
avec pour conséquence une proportion importante de décès dans les pays en
développement (Basco, 2003).
Face à l’augmentation progressive de cette résistance, il a été
nécessaire de réagir à deux niveaux (Chekem & Wierucki, 2006). D’abord,
proposer l’utilisation de nouvelles molécules reconnues comme efficaces
pour le traitement du paludisme. Ensuite, valoriser les traitements combinant
plusieurs molécules reconnues efficaces afin de diminuer la probabilité de
résistances du parasite (Chekem & Wierucki, 2006). De nos jours, de
nouvelles méthodes de lutte contre le paludisme reposent sur le
développement de nouvelles molécules et surtout le développement de
combinaisons thérapeutiques reposant sur l’association d’un dérivé
d’Artémisinine avec une ou plusieurs autres molécules connues sous le nom
de Artemisinine-based Combination Therapy (ACT) (Davis et al., 2005),
suivant les recommandations de l’OMS en vue de sa rapidité d’action et
l’impact sur la transmission.
L’Artémisinine est une molécule issue de Artemisia annua, d’activité
très rapide. Pour plus de détails sur Artémisia annua, les lecteurs sont invités
à lire les travaux de Chougouo et al. (2012) et Lutgen (2009).
L’Artémisinine est une lactone sesquiterpénique isolé de Artemisia annua et
de formule brute C15 H 22 O5 (Robert et al., 2005). L’Artémisinine a une
action sur les trophozoïtes jeunes et empêche leur évolution vers les
trophozoïtes tardifs responsables des complications de l’accès palustre. Cette

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molécule pénètre dans les globules rouges parasités et arrête précocement la

maturation des schizontes. Elle a également un effet gamétocytocide qui
diminue le risque de transmission de l’infection (Barbara et al., 2008). Les
molécules d’Artemisinine sont des substances qui agissent comme
schizonticides sanguins. Toutefois, chez les enfants de moins de 5 ans, les
plus concernés par la pandémie, il se pose non seulement le problème de
dose mais aussi de forme de médicaments. Chougouo et al. (2013)
démontrent en 2011 que la limonade de Artemisia annua sous sa forme
suppositoire est plus acceptée par les enfants et plus efficace que lorsqu’il est
sous la forme de tisane (Chougouo et al., 2013).
Les suppositoires sont des préparations unidoses. Leur forme, volume
et consistance sont adaptés à l’administration par voie rectale. Ils
contiennent une ou plusieurs substances actives, dispersées ou dissoutes dans
une base appropriée qui est plus souvent fusible à la température du corps,
parfois soluble ou dispersible dans l’eau (Pharmacopée Européenne, 2011).
Il existe deux mécanismes de libération du principe actif à partir des
suppositoires. Le premier correspond à la libération du principe actif par
fusion (à 37°C). Le second repose sur la libération du principe actif par
dissolution de l’excipient dans l’ampoule rectale. Par conséquent, les
suppositoires renferment le plus souvent d’autres excipients tels que les
absorbants, les tensioactifs, les conservateurs antimicrobiens, antioxydants et
les colorants autorisés (Le Hir, 1981; Allen, 2000; Readon, 1997; Schoonon,
1979). Ces derniers sont des substances inactives par elles-mêmes mais qui
facilitent l’administration et la conservation du principe médicamenteux (Le
Hir, 1981; Readon, 1997). Parmi ces substances, on distingue les excipients
hydrophiles et les excipients lipophiles (Liversidge, 1981).
Les excipients lipophiles sont constitués essentiellement des glycérides
hémi-synthétiques et des glycérides naturelles tel que le beurre de cacao.
Djoko et al. (2018) dans leurs travaux portant sur la formulation des
suppositoires et ovules à base de beurre de karité comme excipient, ont
montré que ce dernier présente de grandes similitudes d’utilisation en
cosmétique et en agroalimentaire avec le beurre de cacao. Après une analyse
physique, chimique et pharmacotechnique, des échantillons de beurre de
karité en provenance de la Région du Nord Cameroun ont été améliorés
respectivement par la cire blanche et la silice colloïdale aux taux respectifs
de 1, 2, 4 et 6 %. Ces auteurs sont parvenus à la conclusion que le beurre de
karité amélioré avec 4% de silice colloïdale peut être valablement utilisé
comme excipient pour suppositoires. Ce résultat scientifique associé à
l’intérêt de l’Artemisinine dans le traitement du paludisme constitue notre
motivation à mener cette étude. L’objectif de la présente étude est de
formuler et fabriquer les suppositoires à visée antipaludique sous la base de
matières premières locales disponibles telles que le beurre de karité et

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l’Artemisinine, composés chimiques extraits des plantes karité et Artemisia

annua respectivement. Ce faisant, nous allons déterminer dans un premier
temps le caractère organoleptique (couleur, odeur et saveur), les paramètres
physicochimiques (granulométrie, humidité résiduelle, masse volumique
apparente par tassement) et les indices caractéristiques (Indice de Carr et
Indice de Hausner) de la poudre de feuilles et tiges de Artémisia annua. Par
la suite, nous allons procéder au dosage de l’Artémisine contenue dans la
poudre de feuilles et tiges de Artémisia annua ainsi qu’à la formulation, dont
la détermination des proportions des réactifs à utiliser (Poudre de feuilles et
tiges de Artéisia annua et beurre de karité amélioré avec 4% de Silice
colloïdale). Enfin, nous procéderons à la fabrication des suppositoires à visé
antipaludique en utilisant comme principe actif la poudre de feuilles et tiges
sèches de Artémisia annua et comme excipient le beurre de karité dans les
proportions convenablement définies.
Cet article est constitué de cinq parties. La première partie est détaillée
ci-dessus. La seconde partie porte sur la méthodologie de recherche. Dans
cette partie sont présentés de manière détaillée l’ensemble du matériel
utilisé ainsi que les différentes méthodes de collecte, d’analyse et de
traitement des données. Tour à tour, nous avons présenté la méthode de
collecte, de séchage et de préparation de la poudre des feuilles et tiges de
Artémisia annua, les méthodes d’analyses physicochimiques (humidité
résiduelle, granulométrie et volume apparent par tassement) et de
détermination des indices caractéristiques (indices de Carr et de Hausnerr)
de ladite poudre. Toujours dans cette même partie sont présentés les
méthodes d’extraction et détermination de la teneur en flavonoïdes totaux
par le Trichlorure d’Aluminium (AlCl3) ainsi que celle de dosage de
l’Artémisinine contenue dans cette poudre de feuilles et tiges de Artémisia
annua, suivie de la formulation et de la fabrication des suppositoires. La
troisième partie présente de manière claire, précise et concise les différents
résultats de l’étude et leur interprétation. Ces résultats sont discutés dans la
quatrième partie. L’étude s’achève à la cinquième partie par une conclusion.

2. Méthodologie
2.1. Collecte et séchage du matériel végétal
Le matériel végétal est constitué essentiellement des feuilles et des
tiges de Artemisia annua (Figure 1a) récoltés dans la ville de Bangangté, à
l’Ouest du Cameroun. La récolte des feuilles et tiges de Artemisia annua
s’est faite dès l’apparition du premier bouton floral, dans l’après midi (entre
13h et 15h) correspondant à la période de la journée où la plante accumule le
plus de composés actifs dans sa partie aérienne. Les plantules utilisées pour
la culture venaient du CIPCRE (Cercle International pour la Promotion de la
Création) et identifiées à l’HNC (Herbier National du Cameroun) sous le

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numéro Voucher 65647/HNC. Après la récolte du matériel végétal a suivi le

séchage. Le séchage a été effectué dans une salle bien aérée et ventilée d'air
ambiant pendant 3 jours à l'abri du soleil. Pendant ce temps, la plante a été
conservée à température ambiante (25˚C) dans des sachets plastiques en
polyéthylène de densité faible, solidement noués. Après transformation du
matériel végétal (feuilles et tiges de Artémisia annua) en poudre (Figure 1b),
une série de contrôles ont été effectués et exploités dans la suite.

(a) (b)
Figure 1: Matière première constituant le principe actif lors de la formulation et de la
fabrication des suppositoires à visée antipaludique à l’aide du beurre de karité contenant
Artémisia annua cultivé à l’Ouest Cameroun comme excipient. (a) Feuilles et tiges de
Artemisia annua ; (b) poudre de feuilles et tiges de Artémisia annua.

2.2. Essai organoleptique et détermination du taux d’humidité

L’essai organoleptique a consisté en la détermination du caractère
macroscopique de la poudre des feuilles et tiges de Artemisia annua. Il s’est
agit essentiellement d’apprécier la couleur, la texture, la saveur et l’odeur de
la poudre obtenue après avoir séché et écrasé au moulin le mélange de
feuilles et tiges de Artemisia annua. Le mode opératoire a consisté à
observer la poudre des feuilles et tiges de Artémisia annua, à la toucher, à la
sentir et à la gouter. Pour ce qui est du taux d’humidité, la méthode indiquée
par Le Hir et al. (2009) a été utilisée. Au laboratoire, l’analyse s’est déroulée
en deux intervalles: T=145°C, temps=10min; T=135°C, temps=30min. Le
couvercle du dessiccateur infrarouge ouvert, une coupelle en aluminium a
été placée sur ce dernier, puis taré. Enfin, 1g d'échantillon déjà préparé dans
la coupelle en aluminium a été pesé.

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2.3. Mesure de la masse volumique apparente par tassement

La mesure du volume en fonction du tassement a été effectuée à l’aide
d’un voluménomètre. Ce dernier est une éprouvette graduée subissant des
vibrations d’amplitude standardisée. La mesure du volume en fonction du
tassement s’est faite sous très faible contrainte de manière à analyser
l’aptitude de la poudre à se réarranger. Le mode opératoire a consisté à
introduire, dans une éprouvette normalisée de 200ml, 50g de poudre de
feuilles et tiges de Artemisia annua non lubrifiée. La compressibilité de la
poudre a été évaluée à partir de divers indices tels que l’indice de Carr (ICarr)
(Eq.1), l’indice de Hausner (IHausner) (Eq.2) et la quantité V10-V500 dans
laquelle V10 est le volume de la poudre après 10 tassements et V500 le
volume de la poudre après 500 tassements. Dans les équations précédentes
(Eq.1), V0 est le volume sans tassement:

V0 − Volumetassé
I Carr = 100 (1),
V0
Volumeaérée
I Hausner = (2).
Volumetassée

2.4. Analyse granulométrique

L’analyse granulométrique de la poudre de feuilles et tiges de
Artemisia annua s’est faite de deux manières afin de s’assurer de la véracité
des résultats obtenus: d’abord la méthode directe ou tamisage puis la
méthode indirecte ou diffraction laser. Dans le premier cas, chaque tamis a
été pesé à 0,1g près. Un échantillon de poudre de 51g exactement pesé a été
déposé dans le tamis du haut et recouvert d’un couvercle (Figure 2a). La
colonne de tamis a été agitée pendant 5min puis chacun des tamis a été
séparé avec précaution, sans perte de matière. Le refus de chaque tamis a été
de nouveau pesé et la masse déterminée. La même masse du produit
collectée dans la base a été déterminée. La colonne de tamis a été
réassemblée et agitée pendant 5min. Ensuite ; on a séparé et pesé à nouveau
pour ledit tamis comme décrit précédemment. L’opération a été répétée
autant de fois que nécessaire pour atteindre le dernier tamis. L’analyse une
fois terminée, les masses obtenues ont été additionnées. Pour valider
l’analyse granulométrique, un histogramme du pourcentage de poudre
retenue en fonction du diamètre des tamis a été tracé (Figure 2b).
La diffraction laser quant à elle mesure les distributions
granulométriques des particules, en mesurant la variation angulaire de
l'intensité de lumière diffusée lorsqu'un faisceau laser traverse un échantillon
de particules dispersées. Le principe de la méthode consiste à disperser un
échantillon représentatif à concentration adéquate dans un gaz approprié

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(voie sèche) ou un liquide approprié (voie humide). Celui-ci est traversé par
un faisceau de lumière monochromatique, généralement produit par une
source laser. Les grosses particules diffractent la lumière à de petits angles
par rapport au faisceau laser et les petites particules diffractent la lumière à
des angles supérieurs. Les données relatives à l'intensité diffusée en fonction
de l'angle sont analysées pour calculer la taille des particules qui ont créé
l'image de diffraction sous la base de la théorie de Mie. La taille des
particules est représentée par le diamètre de la sphère équivalente, ayant le
même volume que la particule (Pharmacopée Européenne, 2011). Au
laboratoire, deux échantillons de 1g et 2g respectivement de poudre de
feuilles et de tiges de Artemisia annua non lubrifiée ont été dispersés dans la
cellule de mesure avec une pression d’air de 0,8; 1 et 1,2 bar pour la
méthode par voie sèche, à partir de la quelle le diamètre des particules a été
déterminé.

(a) (b)
Figure 2: (a) colonne de tamis utilisé pour l’analyse granulométrique ; (b) histogramme du
pourcentage de poudre retenue en fonction du diamètre des tamis.

2.5. Dosage de l’Artemisinine

Le dosage de l’Artémisinine s’est effectué en plusieurs phases. La
première est la chromatographie sur couche mince densitométrie (CCMD).
Cette phase a permis d’identifier et de déterminer la teneur en Artémisinine
dans la gamme d’étalonnage de la poudre de feuilles et tiges de Artemisia
annua. Le principe de la méthode est basé sur les différences d’affinité des
substances à l’égard de deux phases dont l’une est stationnaire ou fixe et
l’autre mobile. La CCMD s’effectue pour analyser un mélange. Sur la phase
fixe sont déposées des microquantités du mélange à séparer et cette phase est
mise au contact de la phase mobile. La phase mobile migre de bas en haut
par capillarité le long de la phase fixe en entraînant les constituants du

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mélange. Chaque constituant migre à une certaine distance, caractéristique

de la substance qui est appelée rapport frontal ou rétention frontale (Rf).
Chaque tache correspond à un constituant et peut être identifiée par
comparaison de son Rf avec celui d’un témoin. Au laboratoire, afin de
déterminer la teneur en Artémisinine, une CCMD a été effectuée avec
comme phase mobile un solvant constitué d’hexane/diéthyléther (1,2/1) et
comme phase stationnaire de la silice sur support d’Aluminium. Cette
opération a permis de vérifier la présence d’Artémisinine dans les différents
échantillons. Une fois la plaque révélée, avec de l’Anisaldéhyde en milieu
acide (acide acétique + acide sulfurique), elle a été chauffée à 100°C puis
balayée afin d’obtenir un support numérique. Le logiciel MESURIM a été
utilisé pour la lecture du scan de manière à tracer les courbes en fonction des
absorbances au niveau de chaque tache sélectionnée. Ces absorbances
correspondent à la teneur du composé étudié.
La seconde phase porte en la vérification de la présence
d’Artemisinine dans la poudre de feuilles et tiges de Artemisia annua. Pour
ce qui est du mode opératoire, 100mg de poudre de feuilles et de tiges ont
été mixés pendant 30s dans 5ml de Toluène. L'extrait a été centrifugé
(3770trs/min) pendant 5min. La concentration en Artémisinine a été établie
en se référant à la droite d'étalonnage. Une solution mère d'Artémisinine à
1mg/ml a été préparée dans du Toluène. 5 standards ont été préparés à partir
de cette solution pour être déposés sur la plaque de silice. Leurs
concentrations en Artémisinine étant de 50, 100, 150, 200, et 250μg/ml. La
lecture a été faite par le logiciel MESURIM. La droite d'étalonnage a été
tracée en rapportant avec la concentration en Artémisinine à la surface de la
tache du dépôt. Sur une plaque avec gel de silice (l0x20cm), ont été déposés
des extraits à 15mm du bord inférieur de la plaque à 5mm, 15mm, à 25mm,
35mm, 45mm, 55mm de largeur. Le développement ayant duré 60min. La
révélation a été effectuée en pulvérisant sur la plaque une solution composée
d'acide acétique, d'acide sulfurique et d'anisaldéhyde pendant 10s, puis en
portant pendant 10min à l’étuve à 100˚C. Après migration, la plaque a été
révélée et les Rf des différentes taches ont été calculés.
Le dosage de l’Artemisinine dans la poudre de feuilles et de tiges de
Artemisia annua par la CCMD représente la troisième phase du dosage de
l’Artemisinine. Cette phase consiste à déterminer la capacité de la méthode
d’analyse à donner des résultats proportionnels à la concentration de la
substance à analyser. Pour cette phase, la solution standard a été préparée à
partir de 1mg d’Artémisinine pure dissout dans 1ml de Toluène. Quant à la
gamme d’étalonnage, celle-ci a été faite dans une série de tubes de
concentrations croissantes. Ensuite, des dépôts ont été effectués sur la plaque
CCMD équivalent à 2μl d’Artémisinine. Les aires sous la courbe lues à
l’aide du logiciel MESURIM ont permis de tracer la droite de régression à

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partir de laquelle le coefficient de corrélation a été calculé. 2µl de chaque

solution ont été déposés sur la plaque de silice préalablement activée (c’est-
à-dire chauffé à l’étuve à 100°C pendant 1h). Après migration et révélation,
la plaque a été scannée et lue avec le logiciel MESURIM. Les valeurs
obtenues ont été utilisées pour tracer la droite d'étalonnage. La migration a
été effectuée dans le mélange hexane/acétate d’éthyle (1,2/1). La révélation
de la plaque a été faite avec de l’acide acétique + acide sulfurique +
l’anisaldéhyde dans les proportions (10/0,2/0,1) avant d’être chauffée à
100°C sur une plaque chauffante. 03 essais ont été réalisés. Après la CCMD
et la lecture au densitomètre, des valeurs pour chaque tache de chacune des
plaques ont été obtenues. Par la suite, la moyenne des valeurs pour chaque
tache ainsi que l’écart-type et le coefficient de variation de chacun ont été
calculés. En utilisant la droite d’étalonnage Y = a + bX , la limite de détection
est la plus petite concentration que l'on peut distinguer du blanc. C’est la
valeur à partir de laquelle un test statistique de comparaison de la réponse à
la valeur 0 devient significatif. Il vient donc les équations ci-dessous (Eq.3 et
Eq.4) dans lesquelles YLD est la densité optique pour X = 0 et S a l'écart-
type sur l'ordonnée à l'origine de la droite de régression.

YLD = a + 3S a (3),
a + 3S a
X LD = (4).
b

2.6. Extraction et détermination de la teneur en flavonoïdes totaux par

le Trichlorure d’Aluminium (AlCl3)
L’extraction des flavonoïdes est basée sur leur solubilité dans les
solvants polaires tels que l’eau et l’alcool. 4g de poudre de feuilles et tiges
séchées ont été macérés dans 100ml du mélange éthanol/eau distillée (7/3) à
froid avec renouvellement deux fois de suite du solvant laissé à 4°C pendant
24h à chaque renouvellement. Cette opération a permis de solubiliser les
flavonoïdes. Après filtration, les solvants ont été évaporés à l’étuve à 35°C.
Ensuite chaque extrait a été repris dans 25ml d’éthanol à 70°C et débarrassé
de la chlorophylle, des lipides, des cires et des graisses par lavage avec 25ml
d’éther de pétrole. La teneur en flavonoïdes a été déterminée dans la phase
aqueuse. En revanche, la détermination de la teneur en flavonoïdes totaux
par le trichlorure d’Aluminium (AlCl3) est une méthode de dosage basée sur
la formation d’un complexe de couleur jaune résultant de la liaison entre
l’AlCl3 et les doublets libres de l’oxygène des groupements OH des
flavonoïdes. A 1ml de chaque extrait préalablement dissout est ajouté 1ml de
solution d’AlCl3. Après 1h d’incubation à température ambiante,

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l’absorbance est mesurée à 420nm. La teneur en flavonoïdes est calculée en

termes de mg d’équivalent de quercétine par g de matière sèche.

2.7. Formulation galénique

En vue de la formulation galénique, le choix de l’excipient a été fait
en fonction des caractéristiques du principe actif, de l’indice d’hydroxyle, du
point de fusion et de la température de coulée et de prise en masse. Pour la
détermination du facteur de déplacement, deux séries de six suppositoires
pour enfant ont été préparées. La première série ne contenant que de
l’excipient (beurre de karité+4% de silice colloïdale) et la seconde série
contenant de l’excipient additionné à la poudre de feuilles et tiges de
Artemisia anuua. La masse des deux séries de suppositoires ainsi que la
masse totale de poudre de Artemisia annua ont permis par la suite de
déterminer le facteur de déplacement suivant l’équation 5. Dans cette
équation, les paramètres x , y , p et y − p représentent respectivement le
poids de l’excipient pur, le poids des six suppositoires (poudre de feuilles et
de tiges de Artemisia annua additionnée à l’excipient) de la série, la quantité
de principes actifs à répartir dans la série ainsi que la masse en grammes
d’excipient.
x − ( y − p)
f = (5).
p

2.8. Préparation des suppositoires

La préparation des suppositoires n’est réellement possible qu’après
détermination de la formule unitaire des suppositoires. Connaissant le
facteur de déplacement et la quantité de poudre de feuilles et tiges de
Artemisia annua par suppositoire, la masse exacte d’excipient à utiliser est
donnée par l’équation 6 dans laquelle M est la quantité totale d’excipient à
utiliser en grammes, F la contenance du moule pour le nombre de
suppositoires à fabriquer, f le facteur de déplacement du principe actif et S
la quantité de principe actif pour le nombre de suppositoire à fabriquer. M(g)
de beurre de karité+4% de silice colloïdale et S(g) de poudre de feuilles et
tiges de Artemisia annua, quantités majorées à 10% pour couvrir les pertes,
ont été utilisés pour préparer 6 suppositoires. Après fonte du beurre de karité
dans un mortier préalablement chauffé, la silice colloïdale à 4% a été
ensuite ajoutée, puis la poudre de feuilles et tiges de Artemisia annua sous
agitation constante. L’agitation a été maintenue jusqu’au début de
l’épaississement de la préparation, moment où a eu lieu la coulée dans les
alvéoles des moules. Après 10min, l’excédent de masse a été raclé et les
moules ont été laissés à la température du laboratoire jusqu'à durcissement
complet. Le Tableau I présente les étapes détaillées de fabrication des

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suppositoires à visée antipaludique pédiatriques à base de Artemisia annua

en prenant le beurre de karité amélioré avec 4% de silice colloïdale comme
principal excipient.
M = f − (F  S ) (6).
Tableau I. Synoptique de fabrication des suppositoires à visée antipaludique chez les
enfants à l’aide du beurre de karité+4% de silice colloïdale contenant Artemisia annua
cultivé à l’Ouest Cameroun. Source : Travail original.
Etape Lieu Parcours des produits
Introduction de la masse d’excipient (beurre de karité) avec un
1
excédent de 10 %, préalablement chauffé, dans le mortier puis
Mortier de 4% de silice colloïdale anhydre.

2
Ajouter de la quantité de poudre de feuilles et tiges de
Artemisia annua nécessaire pour remplir les six (6) alvéoles du
moule, puis agitation.

3 Couler du mélange dans le moule avant prise totale en masse.

Refroidissement jusqu’à la prise totale en masse.

4
Moule

5 Démoulage et conditionnement du produit fini.

3. Résultats
Dans cette partie, l’ensemble des résultats présentés regroupe :
- Le caractère organoleptique de la poudre de feuilles et tiges de
Artémisia annua ;
- Les résultats d’analyse physicochimique de la poudre de feuilles et tiges
de Artémisia annua ;
- Les valeurs des indices caractéristiques de la poudre de feuilles et tiges
de Artémisia annua ;
- La concentration en flavonoïdes totaux par le AlCl3 et d’Artémisinine
dans la poudre de feuilles et tiges de Artémisia annua;
- Les résultats de formulation, de fabrication et du contrôle
pharmaceutique des suppositoires.
3.1. Caractère organoleptique de la poudre de feuilles et tiges de
Artémisia annua

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Le caractère organoleptique de la poudre de feuilles et tiges de

Artémisia annua utilisée pour la formulation et la fabrication des
suppositoires à visée antipaludique en utilisant le beurre de karité amélioré à
4% de Silice colloïdale comme excipient est indiqué dans le Tableau II. Le
Tableau II montre que la poudre des feuilles et tiges de Artemisia annua
utilisée pour la fabrication des suppositoires à visée antipaludique est de
couleur grisâtre, très odorante et de saveur amère.
Tableau II. Caractères organoleptiques de la poudre de feuilles et tiges de Artémisia annua
utilisée pour la formulation et la fabrication des suppositoires à visée antipaludique.
Source : Résultat original.
Paramètre Couleur Saveur Odeur
Caractère Grisâtre Amère Très caractéristique
organoleptique

3.2. Analyse physicochimique de la poudre de feuilles et tiges de

Artémisia annua
Les résultats d’analyse physicochimiques de la poudre de feuilles et
tiges de Artémisia annua utilisée pour la formulation et la fabrication des
suppositoires à visée antipaludique en utilisant le beurre de karité amélioré à
4% de Silice colloïdale comme excipient sont indiqués dans les Tableaux III
à VI. Ces résultats montrent que la poudre de feuilles et tiges de Artémisia
annua utilisée a une granulométrie allant de très fine à fine. L’humidité
résiduelle moyenne de la poudre de Artemisia annua est de 12,35 % par
séchage à l’étuve et 12,69 % par séchage à l’infrarouge. Le volume moyen
obtenu sans tassement est de V0 = 200ml et ceux obtenus après 10, 500 et
1250 tassements (V10, V500, V1250) sont respectivement 192, 156 et 154ml.
Tableau III. Granulométrie de la poudre de Artémisia annua obtenue par tamisage.
Source : Résultat original.
Numéro Refus Pourcentage Refus Pourcentage Pourcentage
ou (g) de poudre cumulé de refus des
diamètre retenue (%) (g) cumulé tamisats
tamis (%) cumulés
(μm) (%)
1000 0,6 1,17 0,6 1,88 98,81
710 0,65 1,27 1,25 2,47 96,36
500 0,6 1,17 1,85 3,66 92,7
315 0,45 0,8 2,3 4,55 88,15
250 0,75 1,47 3,05 6,03 82,11
125 2,4 4,7 5,45 10,79 71,32
63 28,75 56,37 34,2 67,76 3,55
Fond du 16,35 32,05 50,45 100 96,44
tamis

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Tableau IV. Granulométrie de la poudre de Artémisia annua obtenue par diffraction laser.
Source : Résultat original.
Paramètre Essai 1 Essai 2 Essai 3 Moyenne
Pression (bar) en 0,8 1 1,2 /
fonction du diamètre
D du tamis utilisé
D(10) 19,6 18 19,1 18,9 ± 0,8
D(50) 84,5 84 86,1 84,8 ± 1,1
D(90) 188,4 202 216 202,1 ± 9,8

Tableau V. L’humidité résiduelle de la poudre en fonction des méthodes de séchage.

Source : Résultat original.
Méthode de Essai 1 Essai 2 Essai 3 Moyenne de
séchage l’humidité
résiduelle (%)

Etuve 105 ˚C 12,60 12,26 12,21 12,35 ± 0,27

pendant 24 h

Infra rouge 12,66 12,72 / 12,69 ± 0,04

Tableau VI. Différents volumes obtenus après tassement. Source : Résultat original.
Volume (ml) Essai 1 Essai 2 Essai 3 Essai moyen

V0 200 200 200 200,00 ± 0,00

V10 192 190 194 192,00 ± 1,41

V500 156 156 156 156,00 ± 0,00

V1250 154 154 154 154,00 ± 0,00

3.3. Indices caractéristiques de la poudre de feuilles et tiges de

Artémisia annua
Les indices caractéristiques (indices de Carr et de Hausner) de la
poudre de feuilles et tiges de Artémisia annua utilisée pour la formulation et
la fabrication des suppositoires à visée antipaludique en utilisant le beurre de

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karité amélioré à 4% de Silice colloïdale comme excipient sont indiqués

dans le Tableau VII.
Tableau V. Indices caractéristiques de la poudre de Artemisia annua comparés aux valeurs
indiquées par la Pharmacopée Européenne. Source : Résultat original.
Indices Résultats Intervalles de valeurs des indices
caractéristiques de la poudre de Artémisia
Annua selon la Pharmacopée Européenne
(2011).

Indice de Hausner (IHa) 1,3 1 ˂ IHa ˂ 1,2 légèrement compressible

et cohésive
1,2 < IH ˂ 1,4 compressible et cohésive
Indice de Carr (ICarr) 23 23-35 coulabilités médiocres

V10-V500 36 ˂ 20 ml bonne réorganisation de la

Poudre

3.4. Extraction, détermination de la teneur en flavonoïdes totaux par le

Trichlorure d’Aluminium (AlCl3) et dosage de l’Artémisinine
Les résultats d’extraction et la détermination de la teneur en
flavonoïdes totaux par le AlCl3 ainsi que ceux du dosage d’Artémisinine
contenue dans la poudre de feuilles et tiges de Artémisia annua utilisée pour
la formulation et la fabrication des suppositoires à visée antipaludique en
utilisant le beurre de karité amélioré à 4% de Silice colloïdale comme
excipient sont indiqués dans les Tableaux VIII et IX. Ces tableaux montrent
que la concentration en flavonoïdes totaux de la poudre de feuilles et tiges
sèches de Artémisia annua est de 76,9 μg/ml d’équivalent de quercétine. Par
ailleurs, le coefficient de variation moyen inférieur à 5 % (3,94 %) traduit
une bonne répétabilité de la méthode.
Tableau VIII. Evaluation de la répétabilité de la méthode de dosage de l’Artemisinine.
Source : Résultat original.
Concentration en Moyennes des surfaces Ecart type Coefficient de
Artémisinine (μg/ml) sous la courbe variation (%)
50 601 0,5 0,08
100 1112 0,53 0,04
150 1518 0,53 0,03
200 1965 0,53 0,02
250 2457 0,52 0,02
Moyenne 0,03

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Tableau IX. Évaluation de la répétabilité de la méthode de dosage des flavonoïdes.

Source : Résultat original.
Concentration de Absorbance (429 nm) Coefficient de variation
quercétine (μg/ml) (%)
5 0,150 ± 0,002 1,73
10 0,317 ± 0,014 4,41
15 0,499 ± 0,023 4,66
20 0,671 ± 0,029 4,32
25 0,852 ± 0,039 4,58
Moyenne 3,94

3.5. Formulation, fabrication et contrôle qualité des suppositoires

Suite aux résultats d’analyse du principe actif présentés dans les
sections précédentes ainsi que ceux de l’excipient obtenu par Djoko et al.
(2018), la formule obtenue pour un suppositoire consiste à additionner
250mg de poudre de feuilles et tiges de Artemisia annua à 1820mg de beurre
de karité+à 4% de silice colloïdale. Après fabrication, les suppositoires
obtenus sont illustrés à la Figure 3. Le contrôle qualité des produits finis a
porté essentiellement sur le caractère organoleptique, l’uniformité de masse,
le temps de désagrégation, le temps de fusion ainsi que la détermination de
la teneur en Artémisinine du produit. Dans le premier cas, les suppositoires à
visée antipaludique contenant Artemisia annua fabriqués sont de forme
torpille, d’aspect brillant, de couleur noirâtre, de texture lisse, sans fissures
et homogène. La masse moyenne des suppositoires fabriqués à visée
antipaludique à l’aide du beurre de karité contenant Artémisia annua est de
2,15g avec un écart maximum tolérable e = 5% , soit e = 0,10 g . Pour ce qui
est du temps de désagrégation, le test a été effectué sur une série de 6
suppositoires. Au bout de 8min16s, tous les suppositoires se sont désagrégés.
Pour ce qui est du point de fusion, une valeur moyenne de 35,7 ± 0,3oC a été
obtenue. Les suppositoires fabriqués ont été conservés à l’abri de la lumière.
Au bout de 4 semaines, le dosage de l’Artémisinine a été effectué dans le but
d’apprécier la stabilité de la teneur en Artémisinine. Le résultat obtenu a
révélé une teneur en Artémisinine de 6,35% pour un suppositoire de 2g dosé
à 250mg de poudre totale de feuilles et tiges de Artémisia annua, ce qui
représente 0,5% d’Artémisinine comme dans la matière première. Ces
différentes valeurs obtenues suite au contrôle qualité des produits finis sont
dans les plages de valeurs que recommande la Pharmacopée Européenne
(2011). Le conditionnement des produits finis a consisté à les conserver dans
des moules emballages et conditionnés dans une boîte portant chacune une
étiquette sur laquelle sont mentionnées les informations indiquées dans le
Tableau X.

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Figure 3: Suppositoires à visée antipaludique fabriqués à base du beurre de karité+4% de

silice colloïdale et contenant Artemisia Annua cultivé à l’Ouest-Cameroun.

Tableau X. Informations inscrites sur les étiquettes des moules emballages des
suppositoires à visée antipaludique formulés et fabriqués à l’aide du beure de karité
contenant Artémisia annua cultivé à l’Ouest Cameroun. Source : Résultat original.
Désignation Information
Nom du Palustop Plus
médicament
DCI Poudre de Artemisia annua
Excipient Beurre de karité + 4 % de silice colloïdale
Forme galénique Suppositoire
Dosage 250 mg
Numéro de lot 14S – 001
Date d’expiration /
Présentation Boîte de 12 suppositoires enfants
Composition 250mg de poudre de Artémisia annua exprimée en 1,25 mg
d’Artémisinine et 0,03 mg équivalent de quercétine
Indication Palustop Plus est indiqué pour le traitement du paludisme simple

4. Discussion
La Détermination du caractère organoleptique a montré que la poudre
des feuilles et tiges de Artemisia annua utilisée pour la fabrication des
suppositoires à visée antipaludique est de couleur grisâtre, très odorante et de
saveur amère. Cette amertume a été également confirmée par Willcox et al.
(2011) et N’Guessan et al. (2019). Ce goût désagréable peut être la cause du

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refus par les enfants de la limonade de Artémisia Annua sous forme de

tisane. Une remarque qui a été également faite par N’Guessan et al. (2019)
qui, dans leur étude ont relevé que l’amertume de la poudre de feuilles et
tiges de Artémisia Annua pourrait influencer négativement l’observance du
traitement par les tisanes notamment chez les enfants. Suite à cette
amertume, Willcox et al. (2011) ont proposé l’ajout d’un édulcorant pour
faciliter l’administration des tisanes tandis que N’Guessan et al. (2019) ont
vu en la formulation des comprimés un moyen d’améliorer cet inconvénient
surtout à l’aide d’un enrobage.
Les valeurs moyennes de taux d’humidité résiduelle de la poudre de
Artémisia annua, obtenues par séchage à l’étuve à 105°C pendant 24h et par
séchage par rayonnement infra-rouge sont respectivement 12,35% et 12,69
%. Ces valeurs du taux d’humidité résiduelle de la poudre de feuilles et tiges
de Artémisia annua sont très proches de la valeur indiquée par la littérature,
qui prévoit un taux d’humidité de 11,4% (Agarwal et al., 2009). Cette
valeur élevée de la teneur en eau dans la poudre de feuilles et tiges de
Artémisia annua peut favoriser d’éventuelles réactions enzymatiques ainsi
que le développement de microorganismes (Iqbal et al., 2012). Toutefois,
des valeurs plus faibles, et particulièrement en dessous de 10% sont
recommandées par Pharmacopée Européenne (2011). La faible teneur en eau
de poudre de feuilles et tiges de Artémisia Annua laisse présager pour une
bonne conservation des suppositoires à température ambiante.
Pour évaluer les propriétés rhéologiques de la poudre de Artémisia
annua, le test de compressibilité sur la poudre a permis de déterminer les
indices de Carr et de Hausner qui sont respectivement de 23  0,9 et
1,3  0,5 . Ces résultats sont en adéquation avec ceux de N’Guessan et al.
(2019), et traduisent selon Blanco et al. (2020), la médiocrité de la poudre de
feuilles et tiges de Artémisia annua à l’écoulement. En revanche, la
différence des volumes moyens obtenus après 10 et 500 tassements (V10 et
V500) a donné une valeur de 36, caractéristique d’une réorganisation
moyenne de la poudre de Artémisia annua selon la Pharmacopée Européenne
(2011).
L’analyse granulométrique de la poudre de feuilles et tiges de
Artémisia annua montre que cette dernière a une granulométrie allant de très
fine à fine. Ce résultat est en accord avec celui obtenu par Begat et al.
(2004). Ces derniers ont montré qu’une telle finesse de la poudre de feuilles
et tiges de Artémisia annua pourrait expliquer sa mauvaise aptitude à
l’écoulement et à contrario, traduire sa forte cohésivité.
Le dosage de la poudre de feuilles et tiges de Artémisia annua au
AlCl3 par la CCMD a permis de mettre en évidence la présence de
flavonoïdes équivalents de quercétine par gramme de matière sèche. Les
travaux de Ogwang et al. (2011) ont également révélé la présence des

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flavonoïdes dans la poudre de feuilles et tiges sèches de Artémisia annua.

Dans la poudre de feuilles et tiges de Artémisia annua, ce sont
l’Artémisinine et les flavonoïdes qui agissent en synergie (Bilia et al., 2006).
En effet, les flavonoïdes présents dans la poudre de feuilles et tiges de
Artémisia Annua favoriseraient l’absorption intestinale de l’Artémisinine en
inhibant les enzymes responsables de la métabolisation de l’Artémisinine
(N’Guessan et al., 2019). Les flavonoïdes présents dans la poudre de feuilles
et tiges de Artémisia annua auraient également des propriétés
immunomodulatrices bénéfiques chez les sujets atteints de maladies
parasitaires (Ferreira et al., 2010 ; Bilia et al., 2006). La poudre de feuilles
et tiges sèches de Artémisia annua utilisée comme matière première pour la
formulation et la fabrication des suppositoires à visée antipaludique a une
concentration en flavonoïdes de 76,9μg/ml d’équivalent de quercétine. Ce
résultat est très différent de ceux obtenus par Weathers et Towler (2012),
Weathers et Towler (2014) et N’Guessan et al. (2019) qui ont obtenu
respectivement des taux de 2,97mg/g ; 5,04mg/g ; 18,32mg/g et 8,8mg/g .
Cette différence s’explique par plusieurs facteurs, et notamment l’origine des
variétés de Artémisia annua utilisées dans les différentes études, les
conditions de croissance mais aussi les variations saisonnières et
géographiques de ces plantes comme le montre bien Iqbal et al. (2012) et
Soni et al. (2015). Toutefois, la valeur de la concentration en flavonoïdes
dans la poudre de feuilles et tiges de Artémisia annua est 03 fois plus faible
que celle obtenue par Chougouo et al. (2012), ce qui peut être justifié par le
fait que la poudre utilisée soit un mélange de feuilles et de tiges de Artémisia
annua.
Le caractère organoleptique et les valeurs limites des masses des
suppositoires à visée antipaludique formulés et fabriqués à l’aide du beurre
de karité contenant Artémisia annua cultivé à l’Ouest Cameroun sont en
conformité aux exigences de la Pharmacopée Européenne (2011).
L’élévation du point de fusion facilite l’administration du suppositoire.

Conclusion
Il a été question dans cette étude de formuler et fabriquer les
suppositoires à visée antipaludique à l’aide du beurre de karité contenant
Artémisia annua cultivé à l’Ouest Cameroun comme principe actif. La
poudre de feuilles et tiges sèches de Artémisia annua utilisée est de couleur
grisâtre, de saveur amère et très odorante. L’analyse granulométrique a
montré qu’il s’agit d’une poudre à granulométrie allant de très fine à fine. La
concentration en flavonoïdes totaux de la poudre de feuilles et tiges sèches
de Artémisia Annua est de 76,9μg/ml équivalent de quercétine. La formule
retenue pouvant permettre une fabrication des suppositoires à visée
antipaludique a consisté à additionner 250mg de poudre de feuilles et tiges

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de Artemisia annua à 1820mg de beurre de karité+4 % de silice colloïdale

anhydre. Le contrôle pharmaceutique des suppositoires fabriqués a donné
des valeurs des paramètres pharmacotechniques en adéquations aux valeurs
standards. La forme galénique issue de cette formule pourrait présenter
d’énormes avantages pour la qualité de prise en charge des patients et
essentiellement les enfants.

Conflits d’intérêt
Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêt.

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