Stérilisation Et Désinfection 1

Ecole Supérieure d’Agronomie Mostaganem (E.S.A.
M)
Module : Microbiologie
Promotion : 2ème année Chargé de TD : Bechelaghem.N
TD 01 : Désinfection et stérilisation
Introduction
L’élimination et la destruction des microorganismes peuvent être recherchées pour la
protection d’un individu ou d’un produit : ils demandent la mise en œuvre d’agents antimicrobiens qui
servent pour la stérilisation et la désinfection de matériel, des locaux, de l’eau et des aliments, etc.
1/Désinfection
« Opération au résultat momentané permettent d’éliminer ou de tuer les microorganismes
et/ou d’inactiver les virus indésirables portés par les milieux inertes contaminés, en fonction
des objectifs fixés. Le résultat de cette opération est limité aux microorganismes et/ou virus
présents au moment de l’opération » (AFNOR 1981).
La désinfection est valable seulement au moment où elle est pratiquée. Elle ne reste active que
dans un laps de temps relativement court.
La désinfection s’effectue grâce aux désinfectants utilisés sur les supports inertes;
exemple : eau de Javel.
 Antisepsie C’est une opération au résultat momentané, non durable dans le temps qui
permet, au niveau des tissus vivants, et dans la limite de leur tolérance, de détruire les
microorganismes (bactéries, levures, champignons....), et/ou d’inactiver les virus présents à la
surface de ces tissus vivants (peau et muqueuse).
L’antisepsie s’effectue grâce aux antiseptiques utilisés sur les tissus vivants; exemple :
alcool à 70°.
 Asepsie « Ensemble des mesures propres à empêcher tout apport exogène de
microorganismes ou de virus » (AFNOR mars 1981).
 Décontamination Peut être appelée pré-désinfection. C’est le premier traitement qui doit
être effectué sur les objets et matériels souillés par les matières organiques dans le but de
diminuer la population de micro-organisme. Il s’agit d’un nettoyage qui se fait de façon
mécanique (brossage et frottage). Opération utilisant un détergent contenant au moins un
principe actif reconnu pour ses propriétés bactéricides, fongicides, sporicides ou virucides. La
décontamination a également pour but de protéger le personnel lors de manipulation
d’instruments. Elle permet aussi d’éviter la contamination de l’environnement. La
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décontamination ou la pré-désinfection est une étape préalable à la désinfection ou à la
stérilisation.
Les antiseptiques et les désinfectants sont classés d’après leur nature chimique :
Certains produits peuvent être considérés à la fois comme désinfectants et comme

antiseptiques ; exemple : le chlore
 Il est le principe actif de l’eau de Javel ; il est donc désinfectant.
 Il entre aussi dans la composition de la liqueur de Dakin ; il est donc antiseptique.
Les désinfectants et les antiseptiques sont tous actifs sur :
- Les germes GRAM+ et GRAM-
- Les mycobactéries
- Les champignons
- Les virus.
Ils ont 2 types d’action :

 Fixation de la substance sur la paroi cellulaire des germes. Elle entraîne :
- Une altération de la paroi
- La perte des constituants du germe et sa mort.
 La substance est dite bactéricide, fongicide, virucide, sporicide.
 Combinaison de la substance avec les protéines de la cellule ; les enzymes sont détruites
: le germe ne peut plus ni grandir, ni se reproduire.
 La substance est dite bactériostatique, fongistatique, virostatique.
Mode opératoire :
- Lavage avec un détergent.
- Rinçage à l’eau.
- Désinfection
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2/Stérilisation
C’est le procédé par lequel on détruit ou on élimine d’un objet, des milieux inertes ou d’un
lieu toutes les cellules vivantes, les spores viables et les virus, et ce de manière durable.
Un objet stérile est totalement dépourvu (exempt) de microorganisme et de spores, l’agent
chimique ou physique qui permet la stérilisation est appelé agent stérilisant.
Les objets stérilisés doivent être protégés jusqu’à l’utilisation suivante pour éviter une
recontamination.
En microbiologie, le but de la stérilisation est d’une part de maitriser les microorganismes
introduits dans le milieu d’étude, et d’autre part d’éviter la contamination du milieu extérieur
et des personnes.
2.1/Stérilisation par chaleur
La chaleur détruit les bactéries et les spores, on distingue les procédés à chaleur sèche ou
humide.
2.1.1/Chaleur humide
a/L’autoclavage: à l’aide d’un appareil indispensable dans un
laboratoire de microbiologie. Le chauffage a lieu sous pression de
vapeur d’eau, à une température de 121°C pendant une durée qui
varie en fonction du milieu, de la température utilisée et du volume
des récipients (généralement 20min). Elle provoque la dégradation
des acides nucléiques et la dénaturation des enzymes et autres
protéines.
Ce procédé tue toutes les cellules végétatives et les endospores, utilisé pour stériliser les
milieux de culture, matériel métallique en inox, en caoutchouc, ou en verre.
b/La tyndallisation : Décrite par Tyndall, cette opération consiste à stériliser certains milieux
liquides qui ne tôlèrent pas une température élevée, par chauffage discontinu à une
température inférieure à 100°C. La tyndallisation est une série de 3 chauffages brefs à une
température de 60°C ou 70°C durant 30 minutes ou 1 heure en ménageant un intervalle
régulier de 24h entre chaque chauffage. Le premier chauffage tue les formes végétatives et
induit la germination d’éventuelles spores. Le deuxième chauffage, effectué dans les mêmes
conditions, tue les formes végétatives issues du premier chauffage et induit un choc thermique
pour d’éventuelles spores résiduelles. Le troisième chauffage détruit les formes végétatives
issues du deuxième chauffage. Généralement sont les milieux non autoclavable qui subissent
ce type de traitement ex ; vaccin, sérum, …etc
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 Pasteurisation (procédé de conservation): développée par Pasteur entre 1866 et 1876.
La pasteurisation est un traitement à chaud qu’on l’applique à certains produits naturels (lait,
les jus de fruits, jambon, beurre....) dont on veut assurer momentanément la conservation sans
en altérer les caractères organoleptiques (couleur, odeur, saveur). La pasteurisation entraine la
destruction des formes végétatives, en particulier de celles des micro-organismes pathogènes
(Salmonella, Listeria, Escherichia…) ou responsables d’altérations organoleptiques, à
l’exclusion de la plupart des formes sporulées bactériennes.
On distingue :
- La pasteurisation basse température : Chauffage à 60 à 70°C pendant des temps plus
longs(quelques minutes).
- La pasteurisation haute température : Le lait est porté à 90°C pendant 30 secondes puis
brusquement refroidi à 10°C.
- La pasteurisation Ultra Haute Température (UHT) : La plus récente, elle est appliquée
au lait et au jus de fruit. Une température de 140°C pendant quelques secondes, puis on
refroidit brutalement.
 L’ébullition peut être considérée comme une forme de pasteurisation haute permettant de
détruire le maximum de germes ; on l’utilise quotidiennement au cours de la cuisson des
aliments. En outre, la cuisson ou la pasteurisation des aliments ne détruise pas en particulier
les spores. Parcontre, Yersinia enterocolitica est très thermosensible.
2.1.2/chaleur sèche
a/Le flambage (brulure à gaz/incinération): Le passage dans la
flamme (bec Bunsen) de la surface du matériel non inflammable
assure une parfaite stérilisation. On stérilise de cette façon le
matériel métallique, en inox ou en verre ; les pinces, les pipettes
Pasteur, les anses.
b/Le four Pasteur (Air chaud) : C’est un four étuve à air

chaud et sec. Il est utilisé à 180°C pendant 60 à 90 minutes
pour détruire les formes végétatives et les spores, Cet appareil
n’est utilisé que pour la stérilisation du matériel en verre et en
porcelaine préalablement nettoyé et séché ou de matériel
métallique pouvant tolérer de très hautes températures.
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2.3/La stérilisation par filtration
La filtration est une technique qui consiste à faire
passer un liquide à travers un filtre dont les pores ont
un diamètre inférieur à 0.22um. Les microorganismes
sont trop gros et sont donc retenus par le filtre.
Cette technique est intéressante lors de l’utilisation de produits thermolabiles
(thermosensibles) comme certains acides aminés aromatiques, vitamines, hormones de
croissance, acides nucléiques et une bonne partie des antibiotiques.
2.4/La stérilisation par radiations

a/Les rayons ultraviolets : ne pénètrent pas en profondeur des
objets. On les utilise pour la stérilisation de l’air et surface de travail,
laboratoires, salle d’ensemencement, bloc opératoire.
b/Les rayons X et ᴕ : pénètrent en profondeur des objets, On les utilise pour la stérilisation
des produits pharmaceutiques et alimentaires, matière plastique, pansements, boites Pétri, les
conserves.
2.5/La stérilisation par les agents chimiques

Ils sont utilisés en général pour la destruction des germes portés par des instruments souillés.
Ce mode de stérilisation doit être systématiquement pratiqué dans le laboratoire pour les
lames et pour la verrerie qui ne passe pas en autoclave.
Par exemple :
a/Les aldéhydes : les deux aldéhydes les plus couramment utilisés, le formaldéhyde et le
glutaraldéhydes.
b/Les gaz stérilisants : de nombreux objets thermosensibles, tels que les seringues et les
boites Petri en plastique à usage unique, les fils de suture et les cathéters, sont stérilisés à
l’oxyde d’éthylène.

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b/Le four Pasteur (Air chaud) : C’est un four étuve à air

2.4/La stérilisation par radiations

2.5/La stérilisation par les agents chimiques

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