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T STL TP BIOCHIMIE N°05
DOSAGE DU GLUCOSE PAR LA METHODE DE BERTRAND
I. PROTOCOLE OPERATOIRE
1. Etalonnage de la solution de KMnO4 par pesée d’oxalate de sodium
- Remplir la burette de solution de permanganate de potassium.
- Dissoudre moxalate de sodium (nécessaire pour avoir une chute de burette proche de 15 mL) dans une fiole d’Erlenmeyer en utilisant environ 50 mL d’eau distillée bouillie (donc privée d’O2) et refroidie. - Ajouter après dissolution complète environ 20 mL de solution d’acide sulfurique à 2,2 mol.L-1. - Chauffer la fiole d’Erlenmeyer sans faire bouillir (environ 50°C) afin de favoriser la réaction rédox. - Verser à la burette la solution de permanganate en agitant constamment. La fin du dosage est repérée par une coloration rose persistante 30 secondes.
Recommencer l’étalonnage avec une nouvelle masse d’oxalate de sodium.
2. Dosage d’une solution de glucose inconnue
a) Réduction de la solution cuivrique (Cu2+) par la solution de
glucose
Dans une fiole erlenmeyer de 250 mL propre (lavée avec HCl dilué et rincée soigneusement), placer : - Environ 20 mL de la solution cuivrique : liqueur de Fehling A. - Environ 20 mL de la solution tartro-sodique : liqueur de Fehling B. - E = 10,0 mL de la solution de glucose à doser. - V = 10 mL d’eau distillée. - Une ou deux pierres ponce afin de régulariser l’ébullition et éviter les projections.
- Chauffer jusqu’à ébullition et maintenir une ébullition douce pendant
3 minutes exactement.
- 20 mL de la solution cuivrique (Fehling A)
- 20 mL de la solution tartro-sodique (Fehling B) - E = 10 mL de glucose à doser - 10 mL H2O - pierres ponce
Chauffer 3 min exactement à ébullition douce
Remarque : Dès que cette étape est finie, chauffer de l’eau distillée (environ 300 mL)
- Laisser refroidir le mélange en maintenant la fiole inclinée pour décanter
(déposer) le précipité rouge d’oxyde de cuivre.
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Attention : Ne jamais laisser le précipité de
Cu2O à l’air (risque d’oxydation). Toujours précipité rouge le maintenir couvert d’une couche de de Cu2O liquide
Remarque : le surnageant doit être franchement bleu indiquant que le Cu 2+ est en
excès. Dans le cas contraire, recommencer avec une prise d’essai plus faible ou une dilution de la solution à doser.
b) Lavage du précipité d’oxyde de cuivre
- Laver le filtre d’Allihn (verre fritté de porosité n°4) avec HCl dilué puis le rincer soigneusement à l’eau distillée. L’adapter sur une fiole à vide. - Verser le surnageant sur le filtre à l’aide d’un agitateur. Prendre soin d’entrainer le moins de précipité possible et de ne jamais le laisser en contact avec l’air en le maintenant toujours recouvert d’une couche de liquide (Erlen incliné). - Faire une légère aspiration pour faire passer le liquide versé précédemment sur le filtre, débrancher la trompe à vide alors qu’il reste une hauteur de 1 cm environ de liquide sur le filtre afin d’éviter toute oxydation de quelques particules de précipité éventuellement passées prématurément sur le filtre. - Recommencer l’opération jusqu’à ce qu’il reste le minimum de surnageant dans l’Erlen.
faire passer le surnageant (bleu) pour ne
garder que le précipité de Cu2O dans l’Erlen
toujours débrancher ici
Filtre d’Allihn ne jamais avant de fermer le robinet laisser à l’air (sinon retour d’eau) (sec) trompe à eau (création du vide)
- Verser environ 20 mL d’eau distillée bouillante dans la fiole d’Erlenmeyer,
l’agiter pour laver le précipité et laisser décanter le précipité, fiole inclinée. - Verser à nouveau le surnageant de la fiole d’Erlenmeyer sur le filtre selon la technique décrite précédemment et recommencer le lavage au moins 6 fois afin d’éliminer toute trace de tartrate. - A la fin du lavage, on obtient : 1 cm de liquide
minimum d’H2O possible
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c) Oxydation du précipité de Cu2O par une solution ferrique (Fe3+)
- Vider la fiole à vide, la rincer soigneusement et replacer le filtre.
- Verser 10 mL de solution ferrique sur le précipité (resté dans la fiole d’Erlenmeyer) puis, agiter la fiole erlenmeyer jusqu’à complète dissolution du précipité. La solution devient verte (présence de fer II). - Verser cette solution sur le filtre en veillant à dissoudre les particules de précipité qui se trouveraient sur celui-ci. Faire passer lentement le liquide dans la fiole à vide.
Filtrer lentement
10 mL de Eviter le retour d’eau car le
3+ solution Fe contenu de la fiole est précieux et sera dosé par KMnO4
Agitation jusqu’à dissolution
complète du précipité Cu2O couleur verte
- Rincer la fiole erlenmeyer avec 2 x 10 mL de solution ferrique, transvaser sur
le filtre et faire passer lentement. - Laver encore la fiole erlenmeyer à 3 reprises avec de l’eau distillée et faire passer les eaux de rinçage sur le filtre.
d) Dosage du fer ferreux formé (Fe2+) par manganimétrie
- Effectuer le dosage des ions fer II formés, directement dans la fiole à vide à l’aide de la solution de permanganate de potassium étalonnée la semaine précédente. - Verser le permanganate jusqu’à coloration rose persistant 30 secondes. Noter le volume équivalent.
Recommencer le dosage avec une nouvelle prise d’essai de solution de
glucose.
II. SECURITE
produits Identification du danger
Solution de KMnO4 à ≈ 0,02 mol/L
Acide sulfurique à 2,2 mol.L-1
Liqueur de Fehling B portée à
ébullition
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Eau distillée bouillie
III. COMPTE-RENDU
1. Etalonnage de la solution de KMnO4
a) Quels sont les précautions à adopter ?
b) Donner le principe de l’étalonnage (avec les équations). Quel est le rôle de l’acide sulfurique ? c) Réaliser un schéma de la manipulation en indiquant les données de départ. d) Etablir le bilan moléculaire à l’équivalence. e) Calculer l’ordre de grandeur de la masse d’oxalate de sodium à peser pour une chute de burette d’environ 15 mL. f) Etablir la formule littérale permettant de calculer CKMnO4. g) Réaliser un tableau de résultats selon le modèle suivant :
Essai m oxalate de sodium (en g) V MnO4- (en mL) CMnO4- (en mol.L-1) 1 2
h) Calculer CKMnO4 (sr = 2.10-4 mol.L-1).
2. Dosage de la solution de glucose inconnue par la méthode de
Bertrand
a) Quels sont les précautions à adopter ?
b) Rappeler la concentration de la solution de KMnO4 étalonnée. Noter les volumes V1 et V2 de KMnO4 versé. Calculer le volume moyen Vm.
Utilisation de la table de Bertrand
c) A partir du volume Vm de KMnO4, calculer la masse de cuivre en mg ayant réagit (MCu = 63,54 g.mol-1). d) En déduire la masse de glucose contenue dans la prise d’essai E à l’aide de la table de Bertrand. e) Calculer la concentration massique puis molaire de la solution de glucose inconnue (Mglucose = 180 g.L-1).
Utilisation de la table de Kertesz’s
f) Calculer le volume de permanganate à 0,02 mol.L-1 (= VKMnO4 de la table) correspondant à Vm. g) En déduire la masse de glucose contenue dans la prise d’essai E à l’aide de la table de Kertesz’s. h) Calculer la concentration massique puis molaire de la solution de glucose inconnue (Mglucose = 180 g.L-1). i) Conclure en comparant la concordance des résultats obtenus à partir des 2 tables.
