UNIVERSITE ADVENTISTE COSENDAI ADVENTISTE UNIVERSITY COSENDAI

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Institut Supérieur des sciences de la santé Higher Institute of Health Science
Web site : www.uacosendai-edu.net Web site : www.uacosendai-edu.net

DEPARTEMENT DE BIOLOGIE DEPARTMENT OF CLINICAL

CLINIQUE BIOLOGY

LICENCE III : BIOLOGIE CLINIQUE

Etude de la circulation de la COVID-19

au sein de la population estudiantine de
l’UAC
Protocole de Recherche en vue de l’obtention du diplôme de Licence
en Biologie Clinique

Proposé par

THEO THEO ZAMBA JEREMIE

Matricule 23541

Sous la Direction de
Mr. ATANGANA BERTIN MAMERE
MASTER BIOLOGIE CLINIQUE

Année Académique 2022 – 2023

 SOMMAIRE
LISTE DES ABREVIATIONS, ACRONYMES ET SIGLES................................................................II
LISTE DES TABLEAUX.....................................................................................................................III
LISTE DES ANNEXES........................................................................................................................IV
RÉSUMÉ...............................................................................................................................................V
INTRODUCTION..................................................................................................................................1
Chapitre 1 GÉNÉRALITÉS...................................................................................................................6
Chapitre 2 APPROCHE MÉTHODOLOGIQUE...................................................................................7
Chapitre 3 RÉSULTATS ATTENDUS................................................................................................14
Chapitre 4 CALENDRIER DE L’ÉTUDE...........................................................................................16
Chapitre 5 BUDGET DE L’ÉTUDE....................................................................................................17
BIBLIOGRAPHIE...............................................................................................................................19
ANNEXES...........................................................................................................................................20

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II
 LISTE DES ABREVIATIONS, ACRONYMES ET SIGLES

BUCREP Bureau central des recensements et des études de population

CoV Coronavirus
COVID-19 Coronavirus Disease 2019
ẟCoV Delta Coronavirus
ELISA Enzyme Linked Immune Sorbent Assay
ƔCoV Gamma Coronavirus
IgG Iimmunoglobuline G
MERS Middle East Respiratory Syndrome
OMS Organisation Mondiale de la Santé
RGPH Recensement général de la population et de l’habitat
RT-PCR Reverse Transcriptase – Polymerization Chain Reaction
SARS-CoV-2 Severe Acute Respiratory Syndrome – related Coronavirus 2
SRAS Syndrome Respiratoire Aigüe Sévère
TDR – Ag Test Diagnostic Rapide de détection Antigénique
UAC Université Adventiste Cosendai
αCoV Alpha Coronavirus
βCoV Béta Coronavirus

LISTE DES TABLEAUX

Tableau I : Matériel de collectes et d’analyse des échantillons............................................................8

Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE

III
Tableau II : Résultats attendus en fonction des objectifs.....................................................................14
Tableau III : Chronogramme des activités..........................................................................................16
Tableau IV : Budget de l’étude............................................................................................................17

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IV
 LISTE DES ANNEXES
Annexes 1 : Notice d'information.......................................................................................................i
Annexes 2 : Formulaire consentement éclairé...................................................................................iii
Annexes 3 : Questionnaire................................................................................................................iv

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V
 RESUME

Protocole d’Etude de la circulation du SARS-CoV-2, agent de la COVID-19 au sein de la

population estudiantine de l’UAC
Population Tous les étudiants de l’Université Adventiste Cosendai

L’objectif global est de vérifier le contact de la population vis-

à-vis du SARS-Cov-2, virus responsable de la COVID-19.
Dans cette orientation, nous aurons spécifiquement pour
objectifs secondaires, de décrire les caractéristiques
sociodémographiques de la population d’étude, de connaitre le
Objectifs et résultats nombre de cas (symptomatiques ou asymptomatiques), de
potentiels comparer les taux d’anticorps chez les personnes exposées
connues (malades et vaccinés) et chez les personnes non
connues, de mettre en évidence les facteurs de risques liés à la
maladie et le niveau d’exposition de la population cible.,
d’évaluer les connaissances, attitudes et pratiques au sein de la
population d’étude vis-à-vis de l’infection à COVID-19
Méthode Une étude descriptive transversale et prospective auprès des
étudiants de l’Université Adventiste Cosendai
Durée Notre étude se fera de Novembre 2022 à Mai 2023 avec une
période de collecte en Février 2023.

Données et échantillons • Données : données épidémiologiques, ce qui inclut les

minimaux à recueillir caractéristiques démographiques et cliniques de base des
auprès des participants sujets à l’étude.
• Échantillons : échantillons de sang en vue d’en extraire
le sérum pour analyse par la technique ELISA.

Mots clés : SARS-Cov-2 ; COVID-19 ; ELISA ; Immunoglobuline

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VI
 INTRODUCTION

Les coronavirus (CoVs) sont des virus de la famille des Coronaviridae qui appartiennent à
l'ordre des Nidovirales. Ce sont de virus de très grande taille (80 à 160 nm de diamètre),
enveloppés et possèdent une capside à symétrie hélicoïdale. Ils sont responsables d'infections
respiratoires et intestinales chez de nombreuses espèces aviaires (ƔCoV, ẟCoV) et
mammifères (αCoV, βCoV, ƔCoV), dont l'Homme. Leur intérêt en santé publique était limité
jusqu'à l'émergence de la souche zoonotique du SRAS-CoV, responsable du syndrome
respiratoire aigu sévère (SRAS) (Graham et al., 2013). Très peu d’informations sur la
COVID-19 sont connues. S’il est facile de mettre en évidence sa grande contagiosité, sa forte
morbidité et sa forte mortalité dans certains pays, d’autres facteurs tels que le grand âge et le
sexe ; différentes conditions médicales préexistantes, telles que l’hypertension artérielle, les
maladies cardiovasculaires, le diabète ou l’atteinte de la fonction rénale, sont associées à un
décours plus sévère de la COVID-19 (Petrilli et al., 2020). Lors de la pandémie par le virus
H1N1 en 2009 et, plus récemment, lors de l’épidémie liée au Middle East Respiratory
Syndrome-related CoronaVirus (MERS-CoV), le diabète s’est révélé être un risque majeur de
mortalité (Alqahtani et al., 2018). Ces patients avaient tous un âge avancé ce qui rendait leur
système immunitaire vulnérable au virus. Depuis l’apparition du virus à Wuhan (Chine) en
Décembre 2019, les statistiques en début Novembre 2022 témoignent du fait que plus de 9%
de la population mondiale sont atteints (World Health Organisation[WHO], 2022). Dans le
contexte camerounais où les coûts de prises en charge sont élevés, le dépistage de masse n’est
pas effectué et la vaccination n’est pas accepter par les populations à cause des différents
préjugés sur l’origine de l’infection. Il serait nécessaire d’orienter le suivi de la circulation du
virus au sein de la population. C’est pourquoi, nous voulons à travers ce protocole définir une
démarche scientifique primaire généralisable dans un contexte et un cadre approprié. Le
présent protocole permettra spécifiquement d’étudier la circulation de la COVID-19 au sein
de la population estudiantine de l’UAC.
A cet effet, une étude transversale prospective et analytique auprès des étudiants de l’UAC à
risque et potentiellement exposés sera menée. Nous emploierons la technique ELISA pour le
diagnostic biologique confirmant les cas et une enquête par un questionnaire adressé à chaque
sujet retenu dans le cadre de notre étude. La saisie, le traitement et l’analyse des données sera
faite à l’aide du logiciel Microsoft Excel, SPSS 20.
L’initiation de notre étude sera secondaire à l’autorisation du/ recteur de l’UAC.

1
Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
Les informations fiables et utiles attendues de notre étude, nous l’estimons, contribueront à
actualiser les données sur la COVID-19 en considérant les facteurs associés à la dynamique
de la transmission, afin d’améliorer et renforcer les techniques de diagnostic de masse en zone
d’endémie, et tout particulièrement de promouvoir d’une part l’élaboration d’une politique
santé permanente dans les structures à fortes interactions sociales, et d’autre part d’apporter
des éléments statistiques de base permettant le suivi efficient et stratégique des cas
asymptomatiques dans le soucis de contrôler et de neutraliser de façon plus conséquente la
chaine de transmission du SARS-Cov2.

Situation contextuel de l’étude

Le SARS-Cov2, virus responsable de la COVID-19, est depuis l’apparition du virus à Wuhan

(Chine) en Décembre 2019, l’une des pathologies respiratoires les plus mortelles dans le
monde. L’infection, la propagation et la virulence du SARS-Cov2 au sein d’une population
humaine s’accompagnent d’un certain degré d’incertitude quant aux caractéristiques
épidémiologiques, cliniques (pathognomonique en cas de COVID-19) et virologiques
spécifiques de ce dernier. La surveillance initiale de la COVID-19 fut principalement
concentrée sur les cas de patients gravement atteints (symptomatologie aigüe sévère comme
dans les cas grave du SRAS ou du MERS). Cette réalité fait écho dans les structures à haute
interaction sociale où les cas confirmés mais asymptomatiques sont très souvent négligés (non
suivis) augmentant les risques de propagation incontrôlée du virus. Les données actualisées
relatives à la circulation du virus souffrent ainsi de nombreux manquement, et tout
spécialement dans un cadre où la population réticente aux vaccins, exposée ou à risque, n’est
pas seulement sujette à des contacts restreints mais potentiellement ouverts. Par ailleurs, les
protocoles standards proposés par l’OMS ont été conçu précocement afin de répondre
efficacement à l’évolution rapide de la COVID-19 dans le monde. Ces derniers ne traitent pas
directement de la circulation du SARS-Cov2 au sein de la population vivante en zone de
faible prévalence et où la vaccination de masse fait face à des préjugés et des réticences. Les
recherches proposées par les précédents protocoles traitent des cas d’infection bien définis, les
facteurs de risques auxquels les personnels de santé sont exposés, la séro-épidémiologie de
l’infection et les procédures d’usage des prélèvements d’échantillons de surface pour le
diagnostic biologique de l’infection. Il est vrai qu’un protocole d’enquête de la transmission
du virus dans les écoles fut proposé par l’OMS en 2020, mais ce dernier est difficilement
applicable dans le nouveau contexte des établissements d’enseignement camerounais en
raison de l’absence de cas concrets et de ressources techniques adéquates. L’inexistence d’un

2
Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
protocole de recherche plus spécifique limite et rend complexe l’analyse des données locales
sur la circulation de la COVID-19 dans un cadre comme le nôtre. Par ailleurs, la forte
réduction de la prévalence de la COVID-19 au Cameroun et le faible nombre de la population
jeune Camerounaise infectée même pendant la flambée, laisse supposer une forte résilience de
la jeunesse face à la maladie. Cette particularité pourrait être lié à des caractéristiques
sérologiques assurant une immunité des jeunes préalablement exposé au virus. Il serait donc
important de déterminer le profil sérologique des jeunes instruits, suffisamment informés, à
risque et potentiellement exposé de l’UAC.

Cadre contextuel de l’étude

L'Université Adventiste Cosendai est une institution privée confessionnelle de l'église

Adventiste du Septième jour. Elle fut créée en 1996 et a accueilli depuis sa fondation de
nombreux étudiants. L'UAC était à ses débuts la seule université Adventiste de la sous-région
Afrique centrale. De ce fait, nombreux étudiants étrangers y ont étudié notamment les
étudiants Tchadiens, Comoriens, Gabonais, Congolais, Guinéens, Centrafricains et bien
d'autres. Depuis 2020, le lancement effectif du projet social d'aide (PSA) ayant offert des
bourses d'études, a permis d'accroître le nombre d'étudiants de l'université. Malgré quelques
variations entre 2020 et 2022, le nombre d'étudiants restent relativement important par rapport
aux années antérieures. Les caractéristiques démographiques étant importantes dans la
propagation d'un agent infectieux, l'augmentation du nombre d'étudiants dans un cadre a forte
interaction sociale a été un facteur à risque. Malgré les mesures restrictives appliqués dans la
région de Nanga et spécialement à l’UAC, certains cas ont été recensés en début 2021,
d'abord à l'hôpital de district de Nanga-Eboko puis à l'UAC selon les constats postérieurs à
une campagne de dépistage organisée au sein de l'établissement. Après un confinement des
zones à risque, la vie estudiantine a plus ou moins repris son cours ; les cas faiblement
symptomatiques et majoritairement asymptomatiques ayant pris de l'ascendant. L'application
des mesures barrières depuis fin 2021 s'est amenuisée au point de disparaitre quasiment en
2022 dans la population générale. La situation des populations dans la région de Nanga-
Eboko par exemple, semble se refléter au sein de la population estudiantine de l'UAC. En
dépit du niveau d'instruction au sein de l'établissement, le faible respect des mesures barrières
systématiques et les interactions sociales communes aux structures de formation universitaire,
sont fortement remarqués. A cela s'ajoute la réticence relative à la vaccination contre le virus
en cause de la maladie à Coronavirus 2019.

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Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
Problème et Question de recherche

Les facteurs tels que le grand âge , l’obésité, les maladies cardiometaboliques et le sexe, sont
associées à un décours plus sévère de la COVID-19 .dans une zone ou la pharmacopée était la
principale source médicale, nous avons observé un faible taux d’infection au COVID-19 ceci
s’ajoute à la population camerounaise qui est relativement jeune constitué à plus de 50%
(Tchakounte & Ndzomo, 2010) chiffre qui serai bien supérieur aujourd’hui vu que l’âge
médian est passé de 18 ans selon le rapport du troisième recensement général de la population
et de l’habitat (RGPH) fourni par le Bureau central des recensements et des études de
population (BUCREP) en 2010, à 17,5 ans en 2021 (United Nations, Department of
Economic and Social Affairs, [UN DESA], 2022), ce qui en corrélation avec les données
statistiques révélant un faible taux de cas aigue ou grave des jeunes, justifierait le nombre
restreint de cas sévères due à l’infection à COVID-19 d’une part et d’autres part le faible taux
de test réalisé depuis le début de l’épidémie et le refus des populations à se faire vacciner
entrainent naturellement un affaiblissement de la politique santé et les nombreux efforts des
pouvoirs publics à endiguer définitivement la maladie ou du moins à réduire plus
conséquemment sa prévalence. Les étudiants représentant une tranche de la population jeune,
et pour la plupart instruits, il serait facile pour nous de mettre en œuvre le présent protocole
ensuite de déterminer quelles sont les caractéristiques particulières de la circulation du SARS-
CoV-2 au sein de la population estudiantine de l’UAC, de vérifier si la présence d’un taux
d’anticorps élevé chez les participants signe une immunisation et si la jeunesse elle-même
constitue un facteur de résilience contre l’infection à la COVID-19 dans notre contexte.

Hypothèses de la recherche

La circulation d’un agent pathogène au sein d’une population à contacts restreints ou

non peut être silencieuse en raison du profil sérologique particulier des sujets associés à la
COVID-19 ou à défaut ne peut être silencieuse indépendamment du profil sérologique
particulier des sujets associés à la maladie. L’évaluation de la circulation du virus peut être ou
non associé à un contexte social caractérisé par l’ignorance, le relâchement et la négligence
des mesures prophylactiques. La forte prévalence des cas asymptomatiques (négligés) de la
COVID-19 peut ou non constituer un facteur de risque d’une potentielle réémergence de la
maladie dans les conditions où la vaccination et le traitement sont faiblement considérés.

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Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
Objectifs de l’étude

L’objectif principal de notre recherche sera donc de vérifier le contact de la population vis-à-
vis du SARS-Cov-2, virus responsable de la COVID-19. Dans cette orientation, nous aurons
spécifiquement pour objectifs secondaires, de décrire les caractéristiques
sociodémographiques de la population d’étude, de connaitre le nombre de cas
(symptomatiques ou asymptomatiques), de comparer les taux d’anticorps chez les personnes
exposées connues (malades et vaccinés) et chez les personnes non connues, de mettre en
évidence les facteurs de risques liés à la maladie et le niveau d’exposition de la population
cible., d’évaluer les connaissances, attitudes et pratiques au sein de la population d’étude vis-
à-vis de l’infection à COVID-19

Intérêt De l'étude
- Actualisation des données relatives à la circulation du SARS-Cov-2 dans un
cadre à forte interaction sociale après la mise en place d’un système de santé
permettant de contrôler la maladie
- Contextualisation des informations notables de base sur la circulation de l’agent
pathogène de la COVID-19 dans les structures de formations universitaires afin
d’élaborer ou de renforcer les réponses stratégiques face à la progression de la
maladie.
- Apport des éléments de base pour l’élaboration d’une politique santé permanente
dans les structures à fortes interactions sociales,
- Apport des éléments statistiques de base permettant le suivi efficient et
stratégique des cas asymptomatiques dans le souci de contrôler et de neutraliser
de façon plus conséquente la chaine de transmission du SARS-Cov-2.
- Vulgariser l’approche méthodique pour une surveillance de la maladie

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Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
Chapitre 1 GENERALITES

Définitions de quelques concepts

Circulation : De manière générale, ce mot fait référence à un déplacement qui se fait par des
voies de communications mais nous contextualisons cette définition pour désigner la
répartition de la maladie au sein de la population supposant des mouvements du virus d’un
individu à l’autre de ladite population ainsi que des anticorps (principalement des IgG)
dérivant du contact antérieur des sujets avec le SARS-CoV-2.

SARS-CoV-2 : littéralement ce nom donné par le comité international de taxonomie des virus
signifie Severe Acute Respiratory Syndrome – related Coronavirus 2. C’est un
bétacoronavirus enveloppé à ARN simple brin de polarité positive possédant environ 29,9kb
et responsable de la maladie à coronavirus – 2019.

COVID-19 : Ce sigle désigne la maladie à coronavirus 2019. C’est une pathologie infectieuse
causée par le SARS-CoV-2 et responsable d’une pneumopathie à symptômes bénins ou
graves, potentiellement mortelle si couplé à certaines comorbidités.

ELISA : le test (dosage) d’immunoabsorption par –enzyme liée [Enzyme-Linked

Immunosorbant Assay] est un test immunologique permettant la détection et le dosage de
biomolécules dans un échantillon biologique. La technique ELISA employé dans notre
contexte sera indirect car utilisée afin de doser des anticorps spécifiques (IgG) produis à la
suite d’un contact avec le virus SARS-CoV-2 (infection antérieure ou vaccination).

Immunoglobuline : c’est une protéine appartenant au groupe des gammaglobulines présentes

dans le sérum et d’autres liquides de l’organisme, ayant des propriétés d’anticorps. Parmi les
cinq classes d’immunoglobulines connues, nous nous intéresserons particulièrement aux
Immunoglobuline G produite plus tardivement dans le cas de l’infection à SARS-CoV-2 mais
majoritairement responsable de l’immunité à long terme contre la maladie.

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Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
Chapitre 2 APPROCHE MÉTHODOLOGIQUE

I- METHODE
1. Type d’étude
Une étude descriptive transversale et prospective auprès des étudiants de l’Université
Adventiste Cosendai à risque et potentiellement exposés.

2. Lieu d’étude
Notre étude se déroulera au sein du campus de l’université Adventiste Cosendai de
Nanga-Eboko pour la collecte d’échantillons et à l’hôpital de référence de Sangmélima pour
les différents dosages.

3. Durée d’étude
Notre étude se déroulera de Novembre 2022 à Mai 2023 avec une période de collecte
en Février 2023.

4. Population d’étude
a. Population source :
Notre population d’étude sera constituée de tous les étudiants de l’université
Adventiste Cosendai de Nanga-Eboko.

b. Population cible
Notre population cible sera constituée de tous les étudiants de la filière Sciences de la
Santé de l’université Adventiste Cosendai de Nanga-Eboko.

c. Critères
 Critères d’inclusions

Seront inclus dans notre étude :

- Tout étudiant ayant consenti à faire partir de notre étude

 Critère de non inclusions

- Tout étudiant en phase active de l’infection à Covid-19
- Tout étudiant n’ayant pas accepté de faire partir de l’étude

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5. Méthode d’échantillonnage
 Type d’échantillonnage

Nous allons réaliser un échantillonnage non probabiliste en strate

- Participant vacciné contre la Covid-19

- Participant ayant fait la maladie
- Participant dont le statut n’est pas connu

 Taille de l’échantillon

Nous allons travailler avec 600 échantillons

II. MATERIELS

Tableau I : Matériel de collectes et d’analyse des échantillons

Matériel
Matériel de prélèvement
d’enregistrement
 Fiche de clairance  Les tubes de prélèvement, (conservés au sec et verticaux
éthique dans un porte-tubes).
 Autorisation  Des gants non stériles bien ajustés
administrative  Aiguilles de prélèvement
 Matériels  Support de prélèvement
bureautiques  Un garrot
 Formats  Une solution hydro-alcoolique (SHA) au mieux
 Bloc note  Alcool à 70 % pour la désinfection de la peau
 Registre  De la gaze ou du coton à appliquer sur le site de ponction
 Stylo  Du matériel pour écrire (stylo, crayons, …)
 Crayons  Des sacs et des conteneurs de transport résistant
 Gommes  Un collecteur pour déchets piquants

Équipement de transport et d’analyse des échantillons

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Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
Équipement de transport Équipement d’analyse des échantillons
o Matériel de conservation (glacier de  Consommable
transport)  Kit ELISA COVID-19

6. Méthode de collecte des données

L’enquête
Des entretiens seront menés auprès des étudiants ayant donnés leur
consentements/assentiments éclairés, en vue de recueillir des renseignements
sociodémographiques et cliniques ainsi que des informations sur l’exposition.

Le prélèvement
Conformément aux directives de l’OMS et à l’utilisation du kit vacuette, nous commencerons
par assembler le matériel de prélèvement et nous enregistrerons le patient. Nous préparerons
respectueusement le patient puis nous choisirons le site de prélèvement (préférentiellement la
fosse intercubitale). Nous poserons ensuite le garrot au-dessus de la zone de ponction (4 à 5
largeurs de doigts). Nous nous appliquerons à respecter l’hygiène des mains (avec la solution
hydro-alcoolique [SHA] si salissures non visibles) puis nous enfilerons les gants de soins.
Nous désinfecterons le site d’entrée avec l’alcool à 70% pendant environ 30secondes et
veillerons à ce que la zone sèche avant de procéder délicatement à la ponction veineuse.
Durant ce procédé de ponction il sera question pour nous d’immobiliser la veine (cubitale ou
ulnaire en tenant le bras du patient et en plaçant un pouce au-dessous du site de ponction ; de
demander au patient de fermer le poing de manière à ce que les veines soient plus
proéminentes ; de pénétrer rapidement dans la veine avec un angle de 30° ou moins et
continuer à introduire l’aiguille dans la veine avec l’angle de pénétration le plus facile ;
veillant à ce que la main utilisée pour la ponction ne lâche pas le dispositif de ponction en
évitant tout changement inutile de la main. Nous insérerons de la main gauche le tube sous
vide dans le porte-tube et nous relâcherons la compression dès que le sang affluera dans les
tubes de prélèvement sanguin (remplissage jusqu’au trait de jauge recommandé). Nous
Retirerons ensuite délicatement l’aiguille et nous appliquerons une pression légère sur le site
avec une compresse ou un morceau de coton sec. Si le flux du sang ralentit considérablement,
nous reprendrons brièvement la compression. Ensuite nous demanderons au patient de
maintenir cette compresse ou ce morceau de coton en place, en gardant le bras étendu et
soulevé et nous le prierons de ne pas plier le bras car cela provoquerai un hématome.
9
Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
Après le prélèvement, nous nettoierons la zone en éliminant toute salissures et toutes traces
éventuelle de sang et nous préparerons les échantillons pour le transport (emballage dans un
sac approprié).

Le transport
Les échantillons seront transportés dans les conditions adéquats (température de
conservation, temps) en fonction des tubes choisis et des délais recommandés. Les
échantillons de sérum obtenu par séparation à partir de sang total devront idéalement être
stockés et expédiés à 4 °C, ou congelé à une température égale ou inférieure à -20 °C avant
d’être transporté dans de la glace carbonique ou un dispositif de conservation équivalent.

7. L’analyse en laboratoire : Dosage par la technique ELISA

Définition

Le dosage d'immunoabsorbtion par enzyme liée (Enzyme Linked

Immunosorbent Assay) C’est une technique immuno-enzymatique de détection qui se
fait en laboratoire et qui permet de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à
une réaction colorée produite par l’action sur un substrat d’une enzyme préalablement
fixée à l’anticorps. (Jean-Luc Gala et al. 2020)

But

Détection et dosage des anticorps (immunoglobulines) présents dans le sérum.

Principe

Des plaques de Microtitrage sont recouvertes d'antigènes spécifiques pour lier les
anticorps correspondants de l'échantillon. Après le lavage des puits pour éliminer l'échantillon
détaché, un conjugué enzymatique est ajouté. Ce conjugué se lie aux anticorps capturés. Dans
une deuxième étape de lavage, le conjugué non lié est éliminé. Le complexe immun formé par
le conjugué lié est visualisé par l'addition tétraméthylbenzidine (TMB) qui donne un produit
de réaction bleu. L'intensité de ce produit est proportionnelle à la quantité d'anticorps
spécifiques dans l'échantillon. L'acide sulfurique est ajouté pour arrêter la réaction. Cela
produit un changement du bleu au jaune. L'absorbance à 450/620 nm est lue en utilisant un
Photomètre de Plaque de Microtitrage ELISA.

10
Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
 Mode opératoire

Un embout de pipette propre et jetable doit être utilisé pour distribuer chaque
étalon/contrôle et échantillon. Nous réglerons l'incubateur à 37 ± 1 °C. nous pipeterons
ensuite 100 µL des étalons/contrôles et d’Échantillons dilués dans leurs puits respectifs. Nous
garderons le puits A1 pour le blanc substrat. Nous couvrirons ensuite les puits avec le
couvercle, fourni dans le kit et nous incuberons pendant 1 heure ± 5 minutes à 37 ± 1 °C. A la
fin de l'incubation, nous enlèverons le couvercle, aspirerons le contenu des puits et laverons
chaque puits trois fois avec 300 µL du Tampon de Lavage en évitant les débordements des
puits de réaction et en respectant l'intervalle entre le cycle de lavage et l'aspiration, soit moins
de 5 secondes. À la fin de ce procédé, nous enlèverons soigneusement le liquide restant en
tapotant les barrettes sur du papier absorbant avant la prochaine étape. Ensuite nous
pipeterons 100 µL du Conjugué dans tous les puits sauf le puits Blanc A1 et nous incuberons
pendant 30 minutes à température ambiante (20 à 25 °C) sans exposer à la lumière directe du
soleil. Nous répéterons l'étape de lavage. Puis nous pipeterons 100 µL de la Solution de
Substrat TMB dans tous les puits et incuberons pendant exactement 15 minutes à température
ambiante (20 à 25 °C) dans l'obscurité. Une couleur bleue se produit en raison d’une réaction
enzymatique. Nous Pipeterons 100 µL de la Solution d’Arrêt dans tous les puits dans le même
ordre et à la même vitesse que pour la Solution de Substrat TMB, ainsi, il y aura un
changement du bleu au jaune. Après quoi nous mesurerons l'absorbance à 450/620 nm dans
les 30 minutes après l'addition de la Solution d’Arrêt.

III. Analyses statistiques des données

Les données sont recueillies sur la fiche de paillasse. Puis ceux-ci sont saisis et
analysées sur Excel, SPSS 20.

IV. Considération éthique et administrative

Dans le souci du respect de l’éthique de la recherche médicale, nous allons
entreprendre une démarche administrative afin d’obtenir,
‫ ﬦ‬Autorisation du Recteur de l’université Cosendai de Nanga-Eboko
‫ ﬦ‬Une clairance éthique du comité d’éthique de la région du centre
‫ ﬦ‬L’autorisation du directeur de l’hôpital de référence de Sangmélima : Seuls les
participants informés et consentants librement à participer à l’étude pourront
être enroulé, toutes les informations et données recueillis seront tenues
confidentielles et des codes seront attribués au cours des manipulations au

11
Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
 laboratoire. Les données recueillies seront traitées sous forme de tableaux
statistiques ou un patient ne pourra pas être identifié.

V. Risques et inconvénient de la recherche :

 Le prélèvement : Lors du prélèvement nous avons le risque AES, hématomes
et allergies. Par conséquent les règles d’asepsies et de précisions seront
respectés au mieux que possible avant tout prélèvement. Nous prévoyons le
nécessaire pour les premiers gestes de secours en cas d’accident.
 Avantage : Toutes les analyses de la recherche sont entièrement gratuites aux
participants.

VI. Information aux participants

Les résultats de la recherche sont communiqués uniquement aux participants ayant
signé la fiche de consentement libre et éclairée, ils sont contactés par le responsable
du laboratoire qui expédier les différents résultats sous-pli ferme aux différents
participants.

 Consentement écrit ou verbal : chaque participant recevra une notice

d’information lui indiquant son droit d’accès ou de rectification aux données
collectées, nous obtiendrons le consentement libre et éclairé.

 Protection des données à caractère personnel : toutes les informations

relatives aux participants seront confidentielles et protégés par le secret
professionnel. Les données recueillies par cette étude seront soumises à
l’exigence de confidentialité et les données ne seront communiqués qu’au
participant lui-même, seules les personnes inclus dans l’équipe de recherche
pourront avoir accès à ces données, les données recueillis seront conservées sur
support numérique et manuscrit, les procédures d’anonymisation des donnés
seront un système de codification binaire. Les données seront détruites 10 ans
après la publication finale du rapport de recherche et des articles ; elles ne
seront pas utilisées à d’autres fins que celles décrites dans le présent document.
 Utilisation ultérieure des données : les résultats de la recherche pourront être
diffusés sous forme d’articles, de rapport de recherche. Les données présentes

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dans le mémoire et dans l’article pourront être disponible et utiliser dans les
recherches ultérieures. A travers la fiche d’information, les participants seront
informés des modalités d’usage ultérieur des données.

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Chapitre 3 RÉSULTATS ATTENDUS

Tableau II : Résultats attendus en fonction des objectifs

Objectifs Approche et Résultats attendus

Détection et dosage des anticorps

L’objectif global est de vérifier le contact spécifiques (IgG) témoignant de l’infection
de la population vis-à-vis du SARS-Cov-2, antérieur (contact avec le virus). Le nombre
virus responsable de la COVID-19. de participant exposé devant atteindre un
pourcentage considérable pour pouvoir
généraliser l’étude

Établir un profil des participants en fonction

Décrire les caractéristiques de leur âge (jeune principalement), leur
sociodémographiques de la population sexe, leur niveau d’éducation, leur revenu…
d’étude et de connaitre le nombre de cas afin de pouvoir plus ou moins généraliser
(symptomatiques ou asymptomatiques), (sur une population ayant plus ou moins les
mêmes caractéristiques) les données
recueillies.
Les taux d’anticorps des personnes exposés
connus doivent plus ou moins être inférieur
Comparer les taux d’anticorps chez les en cas de faible circulation du virus et plus
personnes exposées connues (malades et moins équivalent en cas de forte circulation
vaccinés) et chez les personnes non du SARS-CoV-2. La comparaison des taux
connues, d’anticorps des vaccinés avec les non-
vaccinés serait aussi révélateur ou non de la
pertinence de la vaccination.
Déplacement vers des zones à risque
De mettre en évidence les facteurs de potentielles (à forte densité) ; le niveau
risques liés à la maladie et le niveau d’hygiène ; l’accès à l’eau potable ; La
d’exposition de la population cible., position géographique (plus ou moins
favorable à la circulation du virus
notamment l’humidité et la température).

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 Le nombre de participant respectant les
Evaluer les connaissances, attitudes et mesures barrières et ceux ne le faisant pas :
pratiques au sein de la population d’étude Le nombre de personnes informées, sous-
vis-à-vis de l’infection à COVID-19 informées ou non informées au sujet du
SARS-CoV-2 et de la COVID-19.

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 Chapitre 4 CALENDRIER DE L’ETUDE
Chronogramme
Tableau III : Chronogramme des activités
Activités 2022 2023 Responsable
Nov Dec Janv Fev Mars Avril Mai Juin
1. Revue de la littérature Equipe de recherche

2. Rédaction du protocole Equipe de recherche

de recherche
3. Activités préparatoires Equipe de recherche
(conception des outils
de collecte)
4. Collecte des données Equipe de recherche
(enquête)
5. Traitement/Exploitation Equipe de recherche
des données
6. Analyse des données et Equipe de recherche
préparation du mémoire
7. Finalisation du Equipe de recherche
mémoire et Soutenance

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Chapitre 5 BUDGET DE L’ETUDE
Élaboration du Budget
Tableau IV : Budget de l’étude
Coût Total
Rubriques Objet de financement Quantité unitaire (FCFA)
(FCFA)
Revue
Frais de communication Forfaitaire / 3 000
Frais de déplacement 15 000
Frais d’achat crédit 3 3 000 9 000
internet (forfaits)
Sous-total 1 (S1) 27 000
Collecte des
données
Photocopies 600 25 15 000
Rames de papiers 1 2 500 2 500
Stylos, crayons, gommes 1 000
Aiguilles de prélèvement Paquet de 2 500 15 000
100
Coton 1 500 500
Alcool à 70% 1 1 000 1 000
Gants non stérile Paquet de 2 000 6 000
100

Sous-total 2 (S2) 44 000

Diffusion des
résultats
Production rapport final 3 000 5 15 000
Sous-total 4 (S3) 15 000
Total S1 + S2 + S3 86 000

Justification du Budget
Frais de communication : c’est le coût nécessaire pour maintenir la communication entre les
membres de l’équipe de recherche et pour contacter au besoin des participants et d’autres
collaborateurs éventuels durant toute la période de l’étude.

17
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Frais de déplacement : ils permettront au membre/responsable de l’étude de se déplacer
notamment pour la collecte des échantillons, le transport vers le lieu de dosage des
échantillons et autres déplacements nécessaires.
Frais d’achat crédit internet : ils permettront d’être constamment à jour durant toute la
période d’étude, d’effectuer des recherches complémentaires pour assurer un travail diligent
le plus actualisé possible.
Photocopies : permettront de multiplier les exemplaires des fiches et formulaires pour la
collectes des données d’enquêtes.
Rames de papiers : ils serviront de support pour la collecte des données d’enquête.
Stylos, crayons, gommes : ils seront utilisés comme outils didactique lors de l’enquête sur le
terrain et des analyses en laboratoire.
Production rapport final : c’est le coût pour la finalisation et le rendu du mémoire de
recherche en plusieurs exemplaires.
Aiguilles de prélèvement : matériel de prélever à usage unique que nous utiliserons pour la
ponction veineuse afin de recueillir les échantillons sanguins à analyser après centrifugation.
Coton : matériel de collecte (usage unique par tampon) qui nous servira à nettoyer la zone de
ponction avant et après le prélèvement.
Alcool à 70% : matériel (solution) que nous utiliserons pour désinfecter la zone de
prélèvement.
Gants non stérile : matériel de collecte à usage unique que nous utiliserons comme
protection manuelle durant le procédé de prélèvement et l’analyse en laboratoire.

Mobilisation du Budget (Financement)

Le budget nécessaire à la réalisation de notre projet, outre les éléments non mentionnés dans
ce dernier, sera couvert par une subvention des proches et parents soucieux de sa réalisation
efficiente.

18
Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
BIBLIOGRAPHIE
Alqahtani, F. Y., Aleanizy, F. S., Ali El Hadi Mohamed, R., Alanazi, M. S., Mohamed, N.,
Alrasheed, M. M., . . . Alhawassi, T. (2018). Prevalence of comorbidities in cases of
Middle East respiratory syndrome coronavirus: a retrospective study. Epidemiology
and infection. Cambridge University Press. Récupéré sur 1017/S0950268818002923
Dittmann, M. (2009). Guide et notices explicatives pour le prélèvement sanguin veineux.
Your Power for Health (éd. 6ième). Récupéré sur www.gbo.com/preanalytics
Graham, R. L., Donaldson, E. F., & Baric, R. S. (2013). A decade after SARS: strategies for
controlling emerging coronaviruses. Nature reviews. Microbiology.
doi:10.1038/nrmicro3143
Jean-Luc Gala, O. N.-F. (2020). Méthodes diagnostiques du COVID-19. Louvain.
LIONEX GmbH. (2020). COVID-19 ELISA – Human IgG. Rev. 2.0. Récupéré sur
www.lionex.de
Organisation mondiale de la santé. (2009). Lignes directrices de l’OMS applicables aux
prélèvements sanguins : meilleures pratiques en phlébotomie. Genève.
Organisation mondiale de la santé. (2020). Protocole d’enquête sur la maladie à coronavirus
2019 (COVID-19) – Les X premiers cas et contacts (FFX). Récupéré sur
https://www.who.int/emergencies/diseases/novel-coronavirus-2019/technicalguidance/
earlyinvestigations
Organisation mondiale de la santé. (2020). Protocole d'enquête séroépidémiologique
stratifiée par tranche d'âge sur l'infection par le coronavirus 2019 (COVID-19).
Récupéré sur
https://www.who.int/emergencies/diseases/novelcoronavirus-2019/technical-
guidance/earlyinvestigations
Petrilli, C. M. (2020). Factors associated with hospital admission and critical illness among
5279 people with coronavirus disease 2019 in New York City: prospective cohort
study. BMJ (Clinical research ed.). doi:10.1136/bmj.m1966
Tchakounte Nana, F., & Ndzomo Nkama, F. A. (2010). Résultats du troisième recensement
général de la population et de l’habitat, Volume II, Analyses thématiques. Résumé –
Etat et structures de la population. BUCREP. Consulté le Novembre 22, 2022, sur
http://www.bucrep.cm
United Nations Department of Economic and Social Affairs. (2022). World Population
Prospects 2022: Summary of Results. Récupéré sur http://www.unpopulation.org
World Health Organization. (2020). Surface sampling of COVID-19 virus: a practical “how
to” protocol for health care and public health professionals. Récupéré sur
https://www.who.int/emergencies/diseases/novel-coronavirus-2019/technicalguidance/
earlyinvestigations

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Protocole de recherche proposé par THEO THEO ZAMBA JEREMIE
World Health Organization. (2022). COVID-19 Weekly Epidemiological Update (éd. 119).
Récupéré sur
https://www.who.int/emergencies/diseases/novcoronavirus-2019/situation-reports

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 ANNEXES
Annexe 1 : Notice d’information

Invitation à participer au projet de recherche portant sur la « Circulation du SARS-CoV-2,

agent de la COVID-19 au sein de la population estudiantine de l’UAC »
Mme, Mlle, M.
Vous êtes sollicité à participer à l’étude intitulée : « Circulation du SARS-Cov-2, agent de la
COVID-19 au sein de la population estudiantine de l’UAC ». Il s’agira de mieux comprendre
la dynamique de la circulation de la COVID-19 au sein de la population estudiantine à risque
et potentiellement exposé afin de déterminer si la jeunesse est un facteur de résilience de la
COVID-19 et d’élaborer ou de renforcer les réponses stratégiques face à la progression de la
maladie.
Objectifs
L’objectif de ce projet de recherche est d’actualiser les données relatives à la circulation du
virus dans un cadre à fortes interactions sociales après la mise en place d’un système de
contrôle de la maladie ainsi que les informations notables de base sur les facteurs associés à la
circulation de cet agent pathogène dans les institutions de formation universitaire.
Tâche
Votre participation à ce projet de recherche permettra de comprendre de déterminer à travers
l’utilisation des informations consignées dans les questionnaires que vous allez remplir.
Risques
Vous ne courez aucun risque à participer à cette étude.
Bénéfice
Toutes les analyses de la recherche sont entièrement gratuites aux participants. De plus les
résultats vous aideront d’une part à connaitre votre situation sanitaire, et d’autre part, ils
permettront d’améliorer voire optimiser la politique santé dans les structures à fortes
interactions sociales tel que l’UAC, la prise en charge plus adéquate des patients affectés par
la COVID-19 (même en cas de faible prévalence de la maladie), et surtout d’initier un suivi
stratégique efficient pour neutraliser la chaine de transmission du virus.
Confidentialité
Les résultats de la recherche ne permettront pas de vous identifier. Les données recueillies
seront conservées pendant 2 ans dans une clé USB avec un code d’entrée, puis détruites après
diffusion avec l’accord du comité d’éthique. Ces données ne seront pas utilisées à d’autres
fins que celles décrites dans le présent document.

i
Participation à l’étude
Votre participation à cette étude est volontaire. Vous êtes entièrement libre de participer ou
non sans avoir à fournir d’explications.
Responsable de la recherche
Pour obtenir de plus amples renseignements ou pour toute question concernant ce projet
de recherche, vous pouvez communiquer avec THEO T. Z. JEREMIE. Téléphone : (+237)
693 94 44 72/ 670 60 47 25 ; email : [email protected]

ii
 Annexe 2 : Formulaire Consentement éclairé

Je soussigné, Nom(s) et prénom(s) : …………………………………………………….

Reconnais avoir été invité à participer au travail de recherche intitulé « Circulation du
SARS-Cov2, agent de la COVID-19 au sein de la population estudiantine de l’UCAC »
dont l’investigatrice est Monsieur THEO THEO ZAMBA JEREMIE ; Etudiant en Licence
à l’ISSS/UAC. Téléphone : (+237) 693 94 44 72 / 670 60 47 25 ; email :
[email protected]
 J’ai lu et bien compris la notice d’information qui m’a été remise concernant l’étude ;
 J’ai bien compris l’intérêt et les objectifs de cette étude ;
 J’ai reçu toutes les réponses aux questions que j’ai posé ;
 Les risques et bénéfices liés à l’étude m’ont été présentés et expliqués ;
 J’ai bien compris que je suis libre d’accepter ou de refuser d’y participer ;
 Mon assentiment ne décharge pas l’investigateur de sa responsabilité
 Je conserve tous mes droits garantis par la loi.
J’accepte librement de participer dans les conditions précisées dans la notice de l’étude,
notamment :
 De contribuer à fournir les informations médicales nécessaires pour mon suivi ;
 D’informer de mon observance et de mon état de santé durant l’entretien.
Je donne donc mon accord pour ma participation à cette étude.

Investigateur du site d’étude Participant

(Nom et adresse)
(Nom et adresse)

Signature
Signature

Annexe 3 : Questionnaire
Questionnaire sur la circulation de la COVID-19 au sein de la population estudiantine de l’UAC

iii
Code du participant :
Instructions : Répondez aux questions suivantes en écrivant ou en cochant (V) dans l'espace prévu à
cet effet.

A. Informations sociodémographiques
1. Age (années). _______________________________________________________________
2. Sexe : Homme___/ Femme___/
3. État civil : Célibataire_____, /Marié_____ /Divorcé/séparé_____ /Veuf/veuve_____/
4. Niveau d'études : Aucun____ /Primaire____/Secondaire/lycée____ /Supérieur_____/
5. Religion : Adventiste__/Catholique__/Protestant__/Pentecotiste__/Musulman__/autres___/
6. Lieu de résidence : ____________________________________________________________
B. Sensibilisation au COVID 19
7. Avez-vous déjà entendu parler de COVID 19 (CORONA) ? Oui___/Non___/
8. Connaissez-vous comment le COVID 19 se transmet aux autres ? Oui___/Non___/
Si oui à la question 8, demandez au client d'expliquer et d'apporter des précisions. Si non,
expliquez-lui comment COVID 19 se transmet ______________________________________
___________________________________________________________________________
9. Savez-vous comment prévenir le COVID 19 ? Oui___/Non___/
Si oui à la question 9, demandez au client d'expliquer et d'apporter des précisions. Si non,
expliquez-lui comment prévenir le COVID 19. _____________________________________
___________________________________________________________________________
10. Avez-vous déjà été testé pour le COVID-19 7 Oui ____ /Non____ /
11. Si oui à la question 10, quel a été le résultat ? Négatif ___ /Positif ____ /
C. Vaccin contre le COVID 19/Vaccination
12. Avez-vous déjà entendu parler du vaccin contre le COVID 19 ? Oui___ / Non___ /
13. Si oui à Q12, précisez la source : réseaux sociaux__/ radio__/ TV__ / hôpital__/ Centre de
santé___ / Lieu de travail___ /Quartier___/Communauté___ /Domicile___ /Communication
universitaire ___/
14. Avez-vous déjà reçu le vaccin contre le COVID 19 ? Oui ___ /Non ___ /
15. 1. Si oui à Q14, précisez le type de vaccin : Sinopharm ___ / AstraZeneca ___ / Johnson and
Johnson ___ /Pfizer ___/
Autres/Combien de doses ? Une ___ / Deux___ /
15. 2. Si non à la Q14, pourquoi ? Peur ___/ Pas de confiance ___/ Pas nécessaire ___ / Raisons
religieuses ___ / Préfère la médecine traditionnelle ___ / Le COVID-19 est fini ____ / Déjà/
vacciné ___ / Autres ________________________ /
 Taux : IgG …………………………. UI

iv
Table des matières
SOMMAIRE..........................................................................................................................................II
LISTE DES ABREVIATIONS, ACRONYMES ET SIGLES...............................................................III
LISTE DES TABLEAUX.....................................................................................................................IV
LISTE DES ANNEXES.........................................................................................................................V
RESUME..............................................................................................................................................VI
INTRODUCTION..................................................................................................................................1
Chapitre 1 GENERALITES................................................................................................................6
Définitions de quelques concepts.....................................................................................................6
Chapitre 2 APPROCHE MÉTHODOLOGIQUE..............................................................................7
I- METHODE.......................................................................................................................................7
1. Type d’étude.........................................................................................................................7
2. Lieu d’étude..........................................................................................................................7
3. Durée d’étude........................................................................................................................7
4. Population d’étude................................................................................................................7
5. Méthode d’échantillonnage..................................................................................................8
II. MATERIELS........................................................................................................................8
6. Méthode de collecte des données.........................................................................................9
7. L’analyse en laboratoire : Dosage par la technique ELISA............................................10
III. Analyses statistiques des données......................................................................................11
IV. Considération éthique et administrative...........................................................................11
V. Risques et inconvénient de la recherche :.............................................................................12
VI. Information aux participants.............................................................................................12
Chapitre 3 RÉSULTATS ATTENDUS.............................................................................................14
Chapitre 4 CALENDRIER DE L’ETUDE.......................................................................................16
Chronogramme...............................................................................................................................16
Chapitre 5 BUDGET DE L’ETUDE.................................................................................................17
Élaboration du Budget...................................................................................................................17
Justification du Budget..................................................................................................................17
Mobilisation du Budget (Financement)........................................................................................18
BIBLIOGRAPHIE...............................................................................................................................19
ANNEXES...........................................................................................................................................20
Annexe 1 : Notice d’information......................................................................................................i
Annexe 2 : Formulaire Consentement éclairé................................................................................iii
Annexe 3 : Questionnaire................................................................................................................iv