Cours du Prof.
Noureddine BOURHIM 2020
TD DE BIOCHIMIE
CORRECTION EXERCICE TD REGULATION
EXERCICE 1
L’hexokinase et la glucokinase sont deux isoenzymes du métabolisme des sucres. On se
propose d’étudier les caractéristiques cinétiques de ces deux enzymes vis à vis de leur
substrat commun ; le glucose. Les vitesses des réactions ont été mesurées pour des
concentrations différentes du glucose à 25°C et à pH=7. Les résultats obtenus sont présentés
au niveau du tableau I. La concentration en enzyme utilisée pour les deux séries
d’expériences est la même.
Tableau I : cinétique de la glucokinase et l’hexokinase.
GLUCOKINASE HEXOKINASE
[Glucose] en Vi [Glucose] en Vi
10-3M µM/min 10-3M µM/min
5,0 1,61 5,0 0,490
6,7 2,00 6,7 0,575
10,0 2,67 10,0 0,607
20,0 2,93 20,0 0,806
50,0 4,17 50,0 0,893
1/ Déterminer les paramètres cinétiques pour ces deux enzymes. Comparer les deux
paramètres cinétiques. Quelles conclusions déduisez-vous ?
2/Sachant que la concentration intracellulaire hépatique de glucose est de 5 mM (glycémie
normale) :
a- Calculer en pourcentage de Vmax, les vitesses initiales des réactions catalysées par les
deux enzymes.
b- Quelle serait l’influence d’une augmentation importante de la glycémie?
c- Indiquer laquelle de ces deux enzymes est susceptible d’intervenir efficacement en cas
d’élévation de la concentration en glucose au-delà de 5 mM. Justifier votre réponse.
3/La cinétique de l’hexokinase en absence ou en présence du glucose-6-phosphate (G-
6-P) donne les résultats présentés
En présence de 5 mM G6P
sur la figure 1 en représentation de
Lineweaver-Burk. Interpréter ce
résultat 1/V
Figure 1 : Effet du En absence du G6P
Glucose-6-phosphate sur
L’activité de l’hexokinase.
1/[Glucose]
CORRECTION
1/ Détermination de Km et Vmax : Représentation de v en fonction de [S] et Représentation
en coordonnées indirectes (représentations de Lineveaver-Burk, 1/v = 1/(S)):
Vmax
GLUCOKINASE
V µM/min
Vmax/2
Vmax
Vmax/2
HEXOKINASE
Km
Km [Glucose] mM
!
+ ,-!" . /01
!
"#$%
!
"#$%
! !
- -
2/ 2/
!
"#$%&'( )* !"
Glucokinase : Km = 9,470 mM; Vmax = 4,810 µM/min.
Vmax/Km = 0,50 (efficacité catalytique globale élevée)
Hexokinase : Km = 5,1 mM; Vmax = 0,984 µM/min.
Vmax/Km = 0,19 (efficacité catalytique globale élevée faible)
2/ a- L’hexokinase présente plus d’affinité pour le substrat (glucose) que la glucokinase, car son Km
est plus petit par rapport à celui de la glucokinase. Néanmoins, la vitesse maximale de la glucokinase
est supérieure à celle de de l'hexokinase.
Le fait que le rapport Vmax/Km de l'hexokinase (0,19) est inférieur à celui de la glucokinase (0,50);
montre que L'hexokinase est une enzyme relativement peu spécifique que l'on trouve dans toutes les
cellules et qui catalyse la phosphorylation d'hexoses comme le D-glucose, le D-mannose et le D-
fructose. Elle déclenche la glycolyse (forte affinité pour le glucose).
2/ b- Avec une glycémie égale à 5 mM, la glucokinase est à peu près à 35% de son Vmax. Par contre,
l'hexokinase est à 51% de son Vmax. Si on a une glycémie supérieure à 5 mM (exemple 4 fois la
glycémie normale càd 20 mM), la glucokinase n'est encore qu'à 66% , environ, de son Vmax. Par
contre l'hexokinase est proche de son Vmax (81%, environ, de son Vmax). Même en glycémie légèrement
élevée, l'hexokinase fonctionne pratiquement à sa vitesse maximale. En cas d’élévation de la
concentration en glucose au-delà de 5 mM, c'est la glucokinase (Vmax = 4,810 µM/min) qui serait
susceptible d'intervenir efficacement. Comme, elle a une affinité faible pour le glucose, elle ne va pas
phosphoryler de façon exagérée tout le stock de glucose (évitant un déficit).
2/ c- Dans une réaction enzymatique pour que Vmax soit atteinte, il faut que [S] >> Km. Ce n’est
pas le cas ici, faisant penser au fonctionnent au ralenti des enzymes dans les conditions
physiologiques. Si la glycémie augmente de manière importante, la vitesse des enzymes augmentera
pour se rapprocher de Vmax. De plus, le Km de la glucokinase vis-à-vis du glucose est élevé. Donc, elle
n'agit de manière significative que lorsque le taux de glucose intracellulaire est augmenté.
Contrairement à l'hexokinase qui est adaptée au besoin des tissus périphériques se résumant dans la
capture au maximum de molécules de glucose plasmatique pour pouvoir s'en servir comme substrat
énergétique via la glycolyse, contrairement au foie et au pancréas qui possèdent la glucokinase,
enzyme adaptée à ces deux tissus (voir cours).
3/Le glucose-6-phosphate est un inhibiteur
Glucose Inhibition non compétitive
non compétitif de l'hexokinase qui se fixe avec
Glucose-6-Phosphate
la même affinité à la fois sur l'enzyme libre et
l'enzyme complexée avec le glucose. Comme le
G-6-P est un produit de la réaction de En présence de 5 mM G6P
phosphorylation du glucose, ce composé joue le Hexokinase 1/V
!
rôle d'un régulateur de l'activité (inhibiteur). "!"#"$$
Le glucose-6-Phosphate joue le En absence du G6P
rôle d’Inhibiteur non compétitif !
-"
vis à vis du glucose au niveau ! !
de l’hexokinase, Mais au niveau "!"#
de la glucokinase. 1/[Glucose]
