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Chapitre II Yasmine Et Imen

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Chapitre II : Matériel et méthode

I. Présentation du cadre général


Pendant une durée de trois mois, de février à avril 2024 et au sein du laboratoire de produits
finis de la centrale laitière de Sidi Bouzid, on a mené à analyser la composition du lait UHT et
à évaluer l'incidence de ses composants sur la qualité du produit fini.

D’une part, on a surveillé la qualité un lot de lait UHT ayant une date limite de
consommation (DLC) précise en effectuant des analyses physico-chimiques et des analyses
microbiologiques à chaque semaine. Ces analyses incluent le pH, la stabilité, le test
d'ébullition, l’acidité ainsi que l’activité enzymatiques telles que l'activité protéolytique et
l'activité lipolytique et des analyses microbiologiques. (nommer l’analyse)

D’autre part, on a procédé à des analyses pour identifier la composition en protéines et en


minéraux du lait UHT.

I.1 Les analyses physico-chimiques


I.1.1 Le pH
 Principe

Le pH représente l’acidité du lait à un moment donné. On la mesure habituellement à l’aide


d’un pH mètre électronique en plongeant l’électrode dans le bécher contenant du lait, Cet
appareil doit être étalonné à l’aide de deux solutions tampons à pH 7 et 4. L’étalonnage est
répété toutes les deux heures. Le pH d’un lait normal varie entre 6,6 et 6,8 (norme lait cru)
(Amiot et al., 2002).

I.1.2 Le niveau de stabilité


 Principe

Le test de stabilité du lait vise à évaluer la capacité du lait à maintenir sa qualité et ses
caractéristiques physico-chimiques pendant une période donnée, généralement en relation
avec sa durée de conservation. Le principe de ce test implique souvent l'observation de divers
paramètres, tels que la présence de sédiments, la phase de séparation, les changements de
couleur et de texture, ainsi que d'autres altérations perceptibles qui pourraient indiquer une
détérioration.
 Mode opératoire

- Dans un tube à essai, prélevez avec précision 5 ml de lait UHT à l'aide d'une pipette
graduée ou d'une burette volumétrique. Assurez-vous de manipuler le lait avec
précaution pour éviter toute contamination ou perte de matière.
- Dans le cas où le lait approche de sa date limite de consommation (DLC) de J+90, et
afin de maintenir des conditions similaires à celles d'un lait plus récent, nous allons
ajuster la quantité de KHPO4 ajoutée pour l'analyse. Pour cela, nous prévoyons trois
ajouts progressifs :
Ajout de 1,5 mL de KH2PO4 pour les échantillons proches de la DLC.
Ajout de 1,6 mL de KH2PO4 pour les échantillons légèrement plus éloignés de la DLC.
Ajout de 1,7 mL de KH2PO4 pour les échantillons encore plus éloignés de la DLC.
- Une fois que les échantillons de lait UHT avec les différentes quantités de KH2PO4
ont été préparés dans leurs tubes respectifs, vous pouvez les placer dans un bain-marie
préchauffé à la température appropriée pendant 7 minutes. aprés ce temps comment
….

I.1.3 Le test d’ébullition

 Principe
Le test d'ébullition est une méthode utilisée pour évaluer la stabilité thermique du lait, en
particulier pour détecter la présence de substances anormales ou de contaminants qui
pourraient altérer sa composition ou sa qualité.

 Mode opératoire
- Sur une plaque chauffante, préparez un bécher contenant 300 mL d'eau à une
température spécifique et contrôlée.
- Une fois que vous avez placé le bécher contenant les échantillons de lait dans l'eau sur
la plaque chauffante, vous attendez jusqu'à ce que le lait atteigne le point d'ébullition.
- Pendant le chauffage, observez visuellement le comportement du lait. Un lait de bonne
qualité devrait avoir une ébullition régulière, sans formation excessive de mousse ou
de dépôts.

I.1.4 L’acidité
 Principe
La mesure de l’acidité s’effectue par dosage en utilisant une base (NaOH) (N/9) en
présence de phénol phtaléine (solution de phénolphtaléine à 1% dans l’éthanol 95%,
indicateur coloré). La méthode de dosage de l’acidité par titrage permet de quantifier la
teneur totale d’acide lactique présent dans le lait (Vignola, 2002).

 Mode opératoire

Afin de réaliser ce test, deux gouttes de phénolphtaléine sont mélangées à 10 ml de lait ; la


colonne de l’acidimètre est remplie avec la soude (N/9). L’échantillon de lait à doser est
positionné sous l’acidimètre. La soude est versée goutte à goutte, le bécher est agité
constamment jusqu'à l’apparition de la couleur rose très pâle persistante (10 secondes
environ). Le volume de la soude versé est noté. (À refaire)

 Acidité Dornic (°D) = volume de soude en ml X 10

I.2 Les analyses enzymatiques


I.2.1 L’activité protéolytique
 Principe

Destruction des protéines en leurs éléments constitutifs, qui est assurée dans la cellule vivante
par des enzymes dites protéolytiques. (Méd. Flamm. 1975). L'activité protéolytique employé
la caséine isoélectrique comme substrat.

 Mode opératoire

L’activité protéolytique est mesurée dans le surnageant de la réaction entre la caséine et la


solution enzymatique obtenu à la suite d’une centrifugation à 12000 rpm. En déterminant la
concentration des peptides solubles dans l’acide trichloracétique (TCA 20%). L’activité
protéolytique est estimée selon le protocole suivant :

- Mélanger 0,5 ml d’une solution de caséine (1% w/v) dans un tampon 100mM à différents
pH avec 0,5 ml de solution enzymatique préalablement diluée.

- Incuber 15 min à 40°C.

- Arrêter la réaction par l’addition de 0,5 ml de TCA à 20% (w/v) (le TCA précipite la caséine
non hydrolysée).

- Centrifuger le milieu réactionnel durant 15 min à 12000rpm.

- Mesurer l’absorbance à 280 nm.


Une unité d’activité protéolytique est définie comme étant la quantité d’enzyme qui libère 1ug
de tyrosine/ml/min. dans ces conditions expérimentales. Une courbe d’étalonnage (0 à 100μg)
tyrosine est réalisée dans les mêmes conditions. Il en a été déduit que 1ug/ml de tyrosine
correspond à une DO280 de 0,0055.

I.2.2 L’activité lipolytique


 Principe

Le principe de l'activité lipolytique concerne la décomposition des graisses en acides gras et


en glycérol par des enzymes telles que la lipase. Cette dégradation des lipides est essentielle
pour la digestion des graisses, la production d'énergie et le stockage des réserves de graisses.
Les enzymes lipolytiques hydrolysent les triglycérides en acides gras et en glycérol,
permettant leur utilisation par les cellules ou leur stockage.

 Mode opératoire

L'appareil Milkascan détermine la valeur de l'activité lipolytique en mesurant le taux d'acides


gras libres par unité de volume, exprimé en milliéquivalents d'acides gras par 100 MG
(meqAG/100MG).

I.3 Les analyses microbiologiques


Ou la suite

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