Mémoire: Intitulé

‫الــجمهورية الــجزائرية الــديمقراطية الــشعبية‬
République Algérienne Démocratique et Populaire

‫وزارة التعليم العالي والبحث العلمي‬
Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique
‫جامعــة محمد البشير اإلبراهيمي برج بوعريريج‬
Université Mohammed El Bachir El Ibrahimi B.B.A
‫كلية علوم الطبيعة والحياة وعلوم األرض والكون‬
Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie et des Sciences de la Terre et de l’Univers
‫قسم العلوم البيولوجية‬
Département des Sciences Biologiques
Mémoire
En vue de l’obtention du diplôme de Master
Domaine des Sciences de la Nature et de la Vie
Filière : Sciences Alimentaires
Spécialité : Qualité des Produits et Sécurité Alimentaire
Intitulé :
Immobilisation enzymatique : une étude

bibliographique basée sur les techniques et les supports
utilisés.
Présenté par :
ARIBI Hadjer & ROUABEH Hanan & ZAIDI Ikram
: Soutenu le24 /06/2023, Devant le Jury
Nom & Prénom Grade Affiliation / institution
Président : Mme. MEZITI Asma MCB Université de Bordj Bou Arreridj
Encadrant : Mme. BOUTANA Wissem MAA Université de Bordj Bou Arreridj
Examinateur : Mme. HIHAT Soraya MAA Université de Bordj Bou Arreridj
Année Universitaire 2022/2023

Remerciement
Avant toute chose, nous remercions ‫ هللا‬Le tout-puissant, l'omniscient et le miséricordieux, de
nous avoir donné la force et la patience pour achever ce travail.
Nous tenons à exprimer notre gratitude envers toutes les personnes qui nous ont aidés dans la
réalisation de ce mémoire.
Tout d'abord, nous remercions notre encadrante, BOUTANA Wissem, pour sa précieuse
orientation et ses conseils avisés tout au long de ce projet. Ses commentaires et son expertise
ont grandement contribué à l'amélioration de ce travail.
Nous tenons également à remercier les membres de notre jury, pour leur temps, leurs
commentaires constructifs et leur soutien durant l'évaluation de ce mémoire.
Nous voudrions également remercier notre famille et nos amis pour leur encouragement et leur
soutien tout au long de nos études supérieures. Leurs encouragements ont été une source
d'inspiration constante. Enfin, nous tenons à remercier toutes les personnes qui ont contribué
de près ou de loin à la réalisation de ce travail. Votre aide a été très appréciée. Sincèrement.
Dédicace
Toutes les lettres ne sauraient trouver les mots qu’il faut… Tous les mots ne sauraient exprimer
la gratitude, l’amour, Le respect, la reconnaissance… que j’ai pour mon entourage ….
A ma très chère mère
Quoi que je fasse ou que je dise, je ne saurai point te remercier comme il se doit. Ton affection
me couvre, ta bienveillance me guide et ta présence à mes côtés a toujours été ma source de
force pour affronter les différents obstacles.
A mon très cher père
Tu as toujours été à mes côtés pour me soutenir et m'encourager. Que ce travail traduit ma
gratitude et mon affection.
A mes chers frères Oussama, Mohamed, Younes, et mes chères sœurs Asma, Chaïma, et Lina.
Lumière de ma vie et la famille Zaidi.
Mes sœurs et mes collèges de travail : hadjer et hanan.
A mes amis
Asma Messadi, Assia Amara, Houda Mabrek, Khaoula Samai, Fadila Akli, Sara Far,
Chaïma Ben Ali, Mahdi, Badr el Dinne Azib. Vos encouragements et votre soutien étaient la
bouffée d’oxygène qui me ressourçait dans les moments pénibles, de solitude et de souffrance.
Ce mémoire est donc dédié à toutes les personnes qui ont joué un rôle dans mon parcours
académique et qui ont contribué à ma réussite.
Ikram.
Dédicace
Je dédie ce travail
A mon père, pour son soutien. Son affection et la confiance qu’il m’a accordé (chabroutti)
A ma mère, pour son amour. Ses encouragements et ses sacrifies
A mes grands-parents et à ma tante, que Dieu ait leur âme.
A mes frères Akram et Adel qui m'ont apporté leur soutien.
A mes collègues avec lesquelles j'ai partagé le travail et les efforts. Hadjer et Ikram.
A notre encadrante qui nous a prodigué des conseils et des orientations précieux tout au long
de cette période. BOUTANA WISSEM.
HANAN.
Dédicace
A ma chère famille
Je vous dédie tout mon amour et ma gratitude pour votre soutien et votre présence dans ma vie.
Vous êtes ma source d'inspiration et de motivation, et je suis reconnaissant(e) pour chaque
moment passé ensemble. Merci d'être là pour moi et de m'aimer inconditionnellement.
À ma chère encadrante,
Je tiens à vous remercier pour votre précieuse guidance tout au long de ce projet. Votre
expertise, vos conseils avisés et votre disponibilité ont été inestimables pour moi. Merci
infiniment pour votre soutien et votre encouragement.
À mes chers binômes,
Merci pour cette collaboration fructueuse et agréable. Votre contribution a été inestimable.
HADJER.
Table des Matières
Liste des abréviations

Liste des figures
Liste des tableaux
Résumés
Introduction générale ………………………………………………………………… 1
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LES ENZYMES
1.1. Historique des enzymes ……………………………………………………. 3

1.2. Définition …………………………………………………………………... 3
1.3. Structures …………………………………………………………………... 4
1.4. Nomenclature ………………………………………………………………. 5
1.5. Classification des enzymes …………………………………………………. 6
1.6. Application des enzymes …………………………………………………. 7
1.7. Problèmes relevés concernant l’utilisation des enzymes …………………. 8
CHAPITRE II : LES ENZYMES IMMOBILISEES
2.1. Historique des enzymes immobilisées ………………………………… 10
2.2. Définition ……………………………………………………………… 11

2.3. Objectif et principe de l’immobilisation ………………………………… 12
2.4. Méthodes d’immobilisations …………………………………………… 13
2.4.1. Méthodes chimiques …………………………………………………… 14

2.4.1.1 Immobilisation par liaison covalente avec le support …………………… 14
2.4.1.2 Immobilisation par réticulation ………………………………………… 15
2.4.1.3 Immobilisation par liaison ionique ……………………………………… 18

2.4.2 Méthodes physiques …………………………………………………… 20
2.4.2.1 Immobilisation par adsorption physique ……………………………… 20
2.4.2.2 Immobilisation par inclusion …………………………………………… 23

2.5. Comparaison entre les différentes méthodes d’immobilisation ………… 26
2.6. Le choix de type d’immobilisation ……………………………………… 27
2.7. Propriétés des enzymes immobilisées …………………………………… 27
2.7.1 Propriétés des enzymes immobilisées physiquement …………………… 27

2.7.2 Propriétés des enzymes immobilisées chimiquement …………………… 28
2.8. Effet de l’immobilisation de l’enzyme sur leur activité ………………… 28

2.9. Facteurs influençant sur l’immobilisation enzymatique ………………… 29
2.10. Les type de supports utilisés pour l’immobilisation enzymatique ……… 30
2.10.1 Les supports organiques ………………………………………………… 30

2.10.2 Les supports inorganiques ……………………………………………… 31
CHAPITRE III : EXEMPLE D’ENZYME IMMOBILISEE (Trypsine)
3.1. Généralité sur la trypsine ………………………………………………… 32
3.2. L’importance de trypsine ………………………………………………… 33
3.3. L’activité catalytique de l’enzyme libre ………………………………… 33
3.4. Effet du pH sur l’activité enzymatique de trypsine ……………………… 34
3.5. Les Techniques d’immobilisation de la trypsine …………………………… 35
3.5.1 Immobilisation de la trypsine sur les billes de verre avec le 35

glutaraldéhyde………………………………………………………………
3.5.2 Immobilisation de la trypsine sur les billes de verre via DITC …………… 36
3.5.3 Immobilisation de la trypsine sur les billes de verre via le carbodiimide 37

soluble dans l’eau …………………………………………………………
3.6. Étude de la variation du pH sur l’activité de l’enzyme immobilisée ……… 38
3.7. Effet de l’immobilisation sur l’activité enzymatique de trypsine ………… 39
Conclusion générale ………………………………………………………………… 40

Références bibliographiques
Liste des abréviations
ACS: American Chemical Society.

ARN: Acide ribonucléique.
ATP: Adénosine triphosphate.
BSA: Bovine Sérum Albumine.
DITC: N, N-ditio-carboamoyl-2-iodo-Salicyle.
EC : Classe de l’enzyme.
EDC : Éthylène Diamine Citrate.
IUBMB : L’union internationale de biochimie et de biologie moléculaire.
NAD : Nicotinamide Adénine Dinucléotide (Coenzyme).
PBS: Phosphate Buffered Salin (tampon).
PEI : PolyEthylène Imine.
UniProt : Universal Protein Resource (Base de données de séquences de protéines).
Liste Des Figures
Figure 1 : Présentation des différentes structures de l’enzyme ………………………… 4

Figure 2 : Les techniques de l’immobilisation des enzymes …………………………. 11
Figure 3 : Technique d’immobilisation par liaison covalente …………………………. 14
Figure 4 : Technique d’immobilisation des enzymes par réticulation ………………… 15
Figure 5 : Technique d’immobilisation des enzymes par liaison ionique ……………... 18
Figure 6 : Technique d’immobilisation des enzymes par adsorption …………………... 20
Figure 7 : Technique d’immobilisation des enzymes par inclusion (encapsulation) …... 23
Figure 8 : La structure du trypsinogène …. ……………………………………………. 31
Liste Des Tableaux
Tableau I : Différentes classes d’enzyme et leurs réactions ……………………………... 7
Tableau II : Les méthodes d’immobilisation des enzymes (inconvénients et avantages) ... 26

Résumé
L'immobilisation des enzymes est une approche largement utilisée pour améliorer la
stabilité et l'efficacité des enzymes dans diverses applications biotechnologiques et
industrielles. Plusieurs techniques d'immobilisation sont étudiées, notamment l’adsorption
physique, la covalence et l'encapsulation. Différents supports sont utilisés pour l'immobilisation
des enzymes, tels que les supports inorganiques (oxydes métalliques, verres, céramiques), les
supports organiques (résines, polymères) et les supports hybrides (combinant matériaux
inorganiques et organiques). Ces supports peuvent être adaptés en fonction des exigences de
l'enzyme et de l'application. Chaque technique et chaque support présentent des avantages et
des inconvénients spécifiques, qui doivent être pris en compte lors de la sélection d'une méthode
d'immobilisation. Ce travail met également en évidence quelques exemples d'applications de
l'immobilisation des enzymes, notamment dans les domaines de la biocatalyse et de la
biotransformation. La dernière partie du mémoire est consacré pour la présentation d’un
exemple d'utilisation de la trypsine avec trois méthodes d'immobilisation possibles.
Mots-clés : enzymes, immobilisation, supports, encapsulation, trypsine.

Abstract
Enzyme immobilization is an approach widely used to enhance the stability and efficiency of
enzymes in various biotechnological and industrial applications. Several immobilization
techniques are being studied, including physical adsorption, covalence, and encapsulation.
Different supports are employed for enzyme immobilization, such as inorganic supports (metal
oxides, glasses, ceramics), organic supports (resins, polymers), and hybrid supports (combining
inorganic and organic materials). These supports can be tailored according to the enzyme and
application requirements. Each technique and support have specific advantages and
disadvantages that need to be considered when selecting an immobilization method. This work
also highlights some examples of enzyme immobilization applications, particularly in the fields
of biocatalysis and biotransformation. The last part of the study focuses on presenting an
example of trypsin utilization with three possible immobilization methods.
Keywords : enzyme, immobilization, supports, encapsulation, trypsin.

‫ملخص‬
‫يعتبر تثبيت اإلنزيمات نهجا ً يستخدم على نطاق واسع لتحسين استقرار وكفاءة اإلنزيمات في مجموعة متنوعة من التطبيقات‬
‫البيو تكنولوجية والصناعية‪ .‬يتم دراسة عدة تقنيات لتثبيت اإلنزيمات‪ ،‬بما في ذلك االمتصاص الفيزيائي‪ ،‬والروابط الكوفالنتية‪،‬‬
‫والتجليد‪ .‬يتم استخدام أنواع مختلفة من الدعائم لتثبيت اإلنزيمات‪ ،‬مثل الدعائم غير العضوية (أكاسيد المعادن‪ ،‬الزجاج‪،‬‬
‫السيراميك)‪ ،‬والدعائم العضوية (الراتنجات‪ ،‬البوليمرات)‪ ،‬والدعائم المختلطة (تجمع مواد غير عضوية وعضوية)‪ .‬يمكن‬
‫تعديل هذه الدعائم وفقا ً لمتطلبات اإلنزيم والتطبيق‪ .‬تحتوي كل تقنية ودعم على مزايا وعيوب محددة يجب مراعاتها عند‬
‫ضا على بعض أمثلة تطبيقات تثبيت اإلنزيمات‪ ،‬وال سيما في مجاالت التحفيز‬
‫اختيار طريقة التثبيت‪ .‬يسلط هذا العمل الضوء أي ً‬
‫الحيوي والتحويل الحيوي‪ .‬تتركز الجزء األخير من الدراسة على تقديم مثال الستخدام اإلنزيم "تربسين" باستخدام ثالث طرق‬
‫ممكنة للتثبيت‪.‬‬
‫الكلمات المفتاحية‪ :‬إنزيمات‪ ،‬تثبيت‪ ،‬دعائم‪ ،‬تغليف‪ ،‬تربسين‪.‬‬

Introduction générale
L’unité fonctionnelle en biologie est la cellule. Chaque cellule animale, végétale ou

bactérienne est un être organisé et très finement structuré. Dans cette organisation, les enzymes
jouent un rôle essentiel, en catalysant pratiquement toutes les réactions biochimiques de la
cellule (Silman et Katchlski, 1966).
Les enzymes sont des systèmes complexes dans la fonction et intrinsèquement liée à leur
structure et forme (Silman et Katchlski, 1966). Leur rôle spécifique étant réalisable
uniquement à cause d'une architecture adéquate à cet effet comme les enzymes. Au cours de
ces dernières années, la demande en produits d’intérêt thérapeutiques, agroalimentaires ou
cosmétiques s’est fortement accrue, de même que les exigences en matière de procédés de
synthèse respectueux de l’environnement. Dans ce contexte, l’utilisation des enzymes s’est
fortement développée (Naidja et al., 1997).
Au niveau industriel, les avantages de l’utilisation des enzymes sont principalement

leurs dépenses énergétiques faibles, des étapes de purification simplifiées, des conditions
expérimentales douces, évitant la dégradation des substrats et des produits. Leur récupération
et réutilisation pour un processus économiquement réalisable. Cependant, la stabilité de la
préparation enzymatique finale doit être suffisamment élevée pour permettre son utilisation de
nouveaux dans d’autres opérations d’hydrolyse ou de synthèse (Francesco, 2013).
L’amélioration de la stabilité enzymatique, considérée comme un facteur majeur dans

l’application des enzymes et leur réutilisation dans tous les processus industriels et
thérapeutiques, a conduit au développement de stratégies en appliquant des techniques qui
permettent de stabiliser les enzymes contre leur dénaturation naturelle.
L’immobilisation est une technologie ancienne qui a trouvé une application ces
dernières années, elle est devenue une nécessité pour la plupart des enzymes à utiliser comme
biocatalyseurs dans les processus industriels, car elle est utile pour séparer les enzymes du
milieu réactionnel à la fin du processus et les réutiliser à nouveau (Mateo et al., 2002).
Dans ce contexte, l’objectif de ce présent travail a été focalisé sur l’étude bibliographique des
différentes techniques et supports utilisés dans le domaine de l’immobilisation des enzymes.
1
Le mémoire est subdivisé en trois chapitres ; le premier chapitre présente des généralités sur la
structure, le principe et la classification des enzymes ; le deuxième chapitre est réservé aux
enzymes immobilisées et les différentes techniques et supports utilisés ; le dernier chapitre
représente une étude sur un exemple d’enzyme immobilisé ; la trypsine.
2
CHAPITRE I : GENERALITES
SUR LES ENZYMES
Chapitre1 : Généralités sur les enzymes
1.1 Historique sur les enzymes
Les enzymes ont été découvertes pour la première fois par Louis Pasteur, un chimiste
français, dans les années 1850. Pasteur a montré que certaines réactions chimiques ne pouvaient
avoir lieu qu'en présence de cellules vivantes, ce qui a conduit à l'idée que les cellules
contiennent une substance nécessaire pour que les réactions aient lieu (Pasteur, 1862). En 1878,
un chimiste allemand, Eduard Buchner, a isolé la substance responsable de la fermentation
alcoolique dans les cellules de levure. Il a découvert que cette substance était en fait un composé
chimique plutôt qu'un organisme vivant, ce qui a conduit à la découverte d'enzymes. Buchner
a nommé ce composé « zymase », qui signifie « levure » en grec (Buchner, 1897).
Le terme « enzyme » a été proposé pour la première fois en 1878 par le physiologiste
allemand Wilhelm Kuhn, qui a reconnu que les enzymes sont responsables de la dégradation
des aliments dans le tube digestif (Kühne, 1877).
Pendant des décennies, les scientifiques ont continué à étudier les enzymes et leur rôle
dans les processus biologiques. En 1926, James Sumner fut le premier à isoler et à purifier une
enzyme « l'uréase » d'un organisme vivant. Dans les années 1930, Northrop et Stanley ont
découvert que les enzymes sont constituées de molécules de protéines (Sumner, 1926 ;
Northrop et Stanley, 1931). Depuis ces premières découvertes, les enzymes ont été largement
utilisées dans l'industrie, la médecine et la recherche. Elles sont utilisées dans la production
d'aliments, de textiles, de papier et de produits pharmaceutiques, et sont essentielles pour le
diagnostic et le traitement médical (Fessner et Arroyo, 2010).
1.2 Définition
Les enzymes sont des catalyseurs biologiques de nature protéique, qui agissent sur des
substrats de manière spécifique. Ils sont capables de décomposer et de transformer divers
composés présents dans le milieu vivant. Les catalyseurs augmentent la vitesse d'une réaction
lente ou imperceptible, en abaissant l’énergie d’activation sans qu’elle rentre dans la réaction
(enzyme régénérée) (Fersht, 1985 ; Piccolino, 2000 ; Aldridge, 2013). Elles peuvent provenir
de différentes origines mais les enzymes d’origine microbiennes sont les plus produites. Les
microorganismes constituent la principale source d’enzymes industrielles : 50% proviennent
des champignons et des levures, 35% des bactéries, alors que 15% sont d’origine végétale ou
animale (Bennour, 2022).
3
1.3 Structure
Les enzymes sont constituées d'une chaîne polypeptidique repliée dans une structure
tridimensionnelle spécifique, qui leur confère l’activité catalytique. La structure des enzymes
est donc essentielle pour comprendre leur fonctionnement (Berg et al., 2002).
Il existe plusieurs niveaux de structure dans les enzymes, qui sont les suivants :
1. Structure primaire : C'est la séquence d'acides aminés qui composent la chaîne

polypeptidique de l'enzyme. Cette structure est déterminée par la séquence d'ARN
messager qui code pour l'enzyme (Berg et al., 2002 ; Voet et Voet, 2011).
H3N+-CHR1-CO-NH-CHR2-CO-NH-CHR3-CO-………. -NH-CHRnCOO
2. Structure secondaire : La chaîne polypeptidique s'enroule autour d'elle-même pour
former des motifs réguliers comme des hélices alpha et des feuillets bêta (Branden et
Tooze, 1999 ; Alberts, 2002).
3. Structure tertiaire : C'est la structure tridimensionnelle complète d'une enzyme, résultant
de l'interaction entre différents résidus d'acides aminés de la chaîne polypeptidique
(Berg et al., 2002 ; Voet et Voet, 2011).
4. Structure quaternaire : Certaines enzymes sont constituées de plusieurs chaînes
polypeptidiques qui se rejoignent pour former une structure fonctionnelle. Cette
structure s'appelle la structure quadrilatère (Lehninger et al., 2005).
La spécificité de l’enzyme est souvent attribuée à sa structure tridimensionnelle permettant la
formation du site actif responsable de la catalyse enzymatique (Fernandes et al., 2002).
Les enzymes sont étudiées par plusieurs techniques, dont la cristallographie aux rayons
X, la résonance magnétique nucléaire et la microscopie électronique. Ces techniques ont permis
de déterminer la structure de nombreuses enzymes et de comprendre leur action au niveau
moléculaire (Lehninger et al., 2005) (figure1) :
Figure 1 : Présentation des différentes structures de l’enzyme (Kidd et al., 2001).

4
1.4 Nomenclature
La nomenclature des enzymes est un système de classification basé sur les réactions
qu'elles catalysent. Développé par le Comité de nomenclature des enzymes de L’Union
Internationale De Biochimie et De Biologie Moléculaire (IUBMB). La nomenclature de
l'enzyme se compose d'un numéro à quatre chiffres précédés par l’abréviation EC, qui
correspondent à la classe de l'enzyme, à sa sous-classe, à son groupe fonctionnel et à son numéro
de séquence dans la nomenclature (Cornish-Bowden, 2014).
Par exemple, la lactase, qui catalyse la dégradation du lactose en glucose et galactose, est une
hydrolase de liaison β-galactosidique avec le numéro EC 3.2.1.108 (Cornish-Bowden, 2014).
Les enzymes sont souvent nommées en fonction de leurs substrats ou de leur fonction,
comme la pepsine, une enzyme digestive produite dans l'estomac, ou la catalase, une enzyme
qui décompose le peroxyde d'hydrogène en eau et en oxygène (Webb, 1992).
Le suffixe "ase" est utilisé pour décrire l'enzyme, il est parfois associé au substrat (uréase,
phosphatase, etc.), mais généralement lié au type de réaction catalysée (hydrolase, oxydase,
isomérase, etc.) (Georges 1986 ; Fernandes et al., 2002). Par exemple, l'enzyme qui catalyse
la conversion du glucose en fructose est appelée glucose isomérase (Webb, 1992).
La nomenclature des enzymes est régulièrement mise à jour et révisée pour refléter les
dernières découvertes dans le domaine de la biochimie. En outre, la base de données UniProt
fournit une importante source d'informations sur les enzymes, y compris leurs noms, numéros
EC, séquences et structures. La connaissance de la nomenclature des enzymes est essentielle
pour comprendre la biochimie et trouver de nouveaux médicaments et thérapies à base
d'enzymes (Rawlings et al., 2010).
1.5 Classification des enzymes
La classification des enzymes dépend principalement du type de réaction catalysée et de la

nature de la molécule réactive. Il existe sept grandes classes d'enzymes, chacune correspondant
à un type de réaction catalytique (Berg et al., 2002) :
 Oxydoréductases : elles catalysent les réactions d’oxydoréductions, y compris le

transfert d'électrons entre deux molécules. Par exemple, la lactate déshydrogénase
est une oxydoréductase qui catalyse la conversion du lactate en pyruvate en
transférant des électrons du lactate à une coenzyme appelée NAD+.
 Transférases : elles catalysent le transfert d'un groupement chimique d'une molécule
à une autre. Par exemple, une kinase est une transférase qui catalyse le transfert d'un
5
groupe phosphate d'une molécule donneuse d'énergie, telle que l'ATP, vers une
protéine cible (Berg et al., 2002).
 Hydrolases : c’est de loin le groupe le plus important, car il ne nécessite pas de co-
enzyme. Cette classe permet l’hydrolyse d’esters, d’anhydrides, de glycosides,
d’amides et permet aussi la transestérification des alcools. Cette classe d’enzyme est
la plus utilisée (Danieli et al., 1994).
 Lyases : elles catalysent les réactions de clivage de liaisons covalentes sans l'addition
d'eau ou d'autres groupes fonctionnels. Par exemple, la pyruvate décarboxylase est
une lyase qui catalyse la décarboxylation du pyruvate en acétaldéhyde et dioxyde de
carbone (Berg et al., 2002).
 Isomérases : elles catalysent les réactions d'isomérisation, c'est-à-dire le changement
de configuration moléculaire d'un isomère à un autre. Par exemple, la
triosephosphate isomérase est une isomérase qui catalyse la conversion de la
dihydroxyacétone phosphate en glycéraldéhyde 3-phosphate.
 Ligases : elles catalysent la formation de liaisons covalentes entre deux molécules en
utilisant de l'énergie fournie par l'hydrolyse de l'ATP. Par exemple, la synthétase
d'acides gras est une ligase qui catalyse la formation de liaisons covalentes entre des
acides gras et des molécules de coenzyme A (Berg et al., 2002).
 Translocase : Ces enzymes sont responsables du transport actif de substances à
travers les membranes cellulaires.
Ces classes peuvent être subdivisées en sous-classes et sous-sous-classes en fonction de la
nature des groupes chimiques impliqués dans la réaction catalysée.
Les enzymes peuvent être classées en fonction de leur localisation dans la cellule ou
dans l'organisme, en plus de leur classification basée sur la réaction catalysée. Par exemple, les
enzymes cytoplasmiques se trouvent dans le cytoplasme des cellules, tandis que les enzymes
mitochondriales sont présentes dans les mitochondries (Alberts et al., 2002).
Enfin les enzymes peuvent aussi être classées selon leur structure tridimensionnelle. Par
exemple, elles peuvent être classées comme enzymes à feuillet β, à hélice α ou comme enzymes
contenant des motifs structurels particuliers (Fersht, 1999).
Dans le tableau suivant, nous avons résumé les classifications des enzymes et les réactions
spécifiques associées à chaque classification
6
Tableau I : Différentes classes d’enzyme et leurs réactions (Lehninger et al., 2017).
Classe Réactions catalysée

EC 1 Oxydo-réductases Oxydo-réduction
EC 2 Transférases Transfert de groupes fonctionnels
EC 3 Hydrolases Coupure une molécule avec fixation d’eau
EC 4 Lyases Coupure autre que l’hydrolyse
EC 5 Isomérases Remaniement interne d’une molécule
EC 6 Ligases Formation de liaisons covalentes entre deux
molécules
EC 7 Translocase catalysent le mouvement des ions ou des
molécules à travers les membranes (Transport
membranaire)
1.6 Application des enzymes

Les enzymes sont largement utilisées dans de nombreuses applications industrielles, telles que
la production de biocarburants, de médicaments, de produits alimentaires et chimiques. De
manière concrète, voici quelques exemples d'applications spécifiques des enzymes :
a) Production de biocarburants : Les enzymes ont pour fonction de convertir les matières
premières renouvelables, telles que les huiles végétales et les sucres, en biocarburants
tels que l'éthanol et le biodiesel, ce qui en fait un outil indispensable dans la production
de ces derniers (Zhang et Lynd, 2005).
b) Fabrication de médicaments : Tels que les antibiotiques et les hormones, les enzymes
jouent également un rôle important. En effet, la production de la pénicilline, un
antibiotique, implique la fermentation d'une souche de Penicillium chrysogenum à partir
de laquelle les enzymes sont utilisées pour sa synthèse (Chopra et Harwood, 2003).
c) Production de produits alimentaires : L'industrie alimentaire utilise également les
enzymes pour améliorer la texture, la saveur et la durée de conservation des aliments.
À titre d'exemple, la chymosine, une enzyme très courante, est utilisée pour la
fabrication du fromage (Fox et McSweeney, 2013).
d) Production de produits chimiques : Les enzymes trouvent également une utilisation dans
la production de divers produits chimiques, tels que les colorants, les polymères et les
produits pharmaceutiques. À titre d'exemple, la lipase est une enzyme qui joue un rôle
7
important dans la production de biodégradables et de plastiques (Torres-Salas et al.,
2015).
En somme, les enzymes sont largement utilisées dans diverses applications industrielles et
revêtent une importance cruciale dans la production de produits énergétiques, alimentaires,
pharmaceutiques et chimiques.
1.7. Problèmes relevés concernant l’utilisation des enzymes
Lors de l'utilisation des enzymes dans différents domaines, les chercheurs peuvent
rencontrer plusieurs problèmes, notamment :
 Les coûts : La production et la purification des enzymes peuvent être coûteuses, ce qui
peut restreindre leur utilisation dans diverses applications. Des avancées ont été
réalisées dans les techniques de production et de purification des enzymes, mais selon
une étude publiée par Hong et Lee en 2020 les coûts de production demeurent élevés
(Hong et Lee., 2020).
 La stabilité : La stabilité et l'efficacité des enzymes peuvent être impactées par diverses
conditions environnementales telles que le pH, la température, etc. Cependant, une
étude récente publiée en 2021 dans ACS Catalysis a mis en lumière que l'ingénierie des
enzymes peut améliorer leur stabilité et leur efficacité dans les réactions catalytiques.
(Gao et al., 2021).
 La sélection : En raison de la grande diversité et de la complexité des enzymes
disponibles, il peut être difficile de sélectionner celle qui convient le mieux à une
application donnée. Toutefois, une étude parue en 2019 dans Trends in Biotechnology
indique que les progrès dans les techniques de criblage peuvent faciliter l'identification
rapide des enzymes appropriées pour une application donnée (Chakraborty et
Makhija, 2019).
 La récupération : La récupération des enzymes après leur utilisation peut s'avérer
coûteuse et difficile, ce qui a un impact sur leur durabilité en termes d'utilisation.
Néanmoins, une étude publiée en 2018 dans Biotechnology Advances a révélé que
l'utilisation de techniques de séparation, comme la chromatographie, peut permettre le
développement de méthodes de récupération plus efficaces (Bhatia et al., 2018).
 La réglementation : Les enzymes employées dans les domaines alimentaires,
pharmaceutiques et industriels sont soumises à des réglementations rigoureuses quant à
leur sécurité et leur efficacité, ce qui peut entraver leur utilisation dans certains cas.
Pourtant, une étude de 2019 parue dans Regulatory Toxicology and Pharmacology a
8
souligné qu'une évaluation minutieuse de la sécurité des enzymes est impérative avant
leur emploi dans les produits alimentaires et pharmaceutiques (Gao et Hua, 2019).
En conclusion, malgré le potentiel important des enzymes dans de nombreuses applications,
leur utilisation est confrontée à des défis significatifs. Les scientifiques doivent donc continuer
à rechercher des moyens d'améliorer de la production, la sélection, la stabilité et la récupération
des enzymes tout en assurant leur sécurité et leur efficacité dans diverses applications (Gao et
Hua, 2019).
9
CHAPITRE II : LES ENZYMES
IMMOBILISEES
Chapitre 2 : Les enzymes immobilisées
2.1 Historique des enzymes immobilisées
Les enzymes immobilisées ont une longue histoire et ont été largement étudiées dans le domaine
de la biotechnologie : Au début du XXe siècle, les scientifiques ont commencé à explorer
l'immobilisation des enzymes. En 1916, Kastle et Loevenhart ont expérimenté avec
l'immobilisation de la pepsine, une enzyme digestive, en utilisant de l'oxyde de fer. Ils ont
constaté que l'activité enzymatique était supérieure à celle de la pepsine non immobilisée
(Kastle et Loevenhart, 1916).
Au fil des décennies suivantes, de multiples techniques d'immobilisation ont vu le jour,

telles que l'adsorption sur des supports solides, la covalence avec des agents de couplage,
l'encapsulation dans des polymères ou encore la liaison covalente sur des matrices poreuses.
Chaque méthode a fait l'objet d'études minutieuses portant sur ses avantages et ses limites
(Sheldon, 2007).
À partir des années 1970, l'utilisation industrielle des enzymes immobilisées s'est généralisée,
notamment dans l'industrie alimentaire. Cette technique a été largement employée pour la
fabrication d'édulcorants artificiels tels que l'aspartame (Gainer, 1982).
Au fil du temps, de nouvelles applications ont été découvertes pour les enzymes immobilisées,
notamment dans la production de biocarburants, la dépollution des eaux usées, la synthèse de
médicaments, et la fabrication de biopolymères (Mateo et al., 2007).
Plus récemment, les scientifiques se sont intéressés à l'utilisation de nanomatériaux, tels que les
nanoparticules métalliques, les nanotubes de carbone et les graphènes, pour l'immobilisation
des enzymes. Ces nouveaux matériaux présentent des avantages tels qu'une plus grande surface
de contact et une plus grande stabilité de l'enzyme (Li et al., 2019).
En somme, l'immobilisation des enzymes est un domaine de recherche dynamique qui

a considérablement évolué au cours des dernières décennies. Les enzymes immobilisées sont
devenues incontournables dans diverses applications industrielles et présentent un potentiel
pour résoudre des problèmes environnementaux (Li et al., 2019).
2.2 Définition
Les enzymes immobilisées sont des enzymes qui ont été liées à un support insoluble, comme
des billes de gel ou des membranes, dans le but de faciliter leur utilisation dans des processus
industriels ou biologiques. En immobilisant l'enzyme, on améliore sa stabilité et sa capacité de
réutilisation, ainsi que sa séparation des autres composants du mélange réactionnel. Cette
9
technique permet également de maintenir une activité enzymatique élevée, tout en réduisant la
perte d'enzyme et en diminuant les coûts de production. (Ulijn, 2006).
D'après une étude réalisée par DeMoss et ses collaborateurs en 1977, il existe plusieurs
méthodes pour immobiliser des enzymes, comme la liaison covalente, l'adsorption,
l'encapsulation et l'inclusion. Chacune de ces techniques comporte des avantages et des
inconvénients, mais elles ont toutes pour but de fixer l'enzyme sur un support solide de manière
réversible ou irréversible. En choisissant la méthode d'immobilisation la plus appropriée, on
peut optimiser les performances de l'enzyme dans le contexte spécifique de son application.
(DeMoss et al, 1977).
Selon les conclusions de l'étude réalisée par Mateo et son équipe en 2007, l'immobilisation des
enzymes est capable d'améliorer leur stabilité et leur activité, même dans des conditions
extrêmes telles que les variations de température, les pH acides ou basiques, ainsi que la
présence de solvants organiques. Cette caractéristique rend les enzymes immobilisées très
avantageuses pour les processus de bioconversion et de biocatalyse industrielle, car elles offrent
une plus grande efficacité et une durée de vie prolongée dans des conditions difficiles (Mateo
et al., 2007).
En somme, les enzymes immobilisées sont des enzymes qui ont été fixées à un support
solide, ce qui leur permet de bénéficier d'une stabilité accrue et facilite leur utilisation dans
divers processus biologiques et industriels. Il existe plusieurs méthodes d'immobilisation qui
peuvent être choisies en fonction de leurs avantages et inconvénients respectifs. Les enzymes
immobilisées sont largement utilisées dans plusieurs domaines tels que l'industrie alimentaire,
la médecine et la biotechnologie et peuvent être particulièrement bénéfiques dans des conditions
extrêmes telles que des températures élevées ou basses, des pH acides ou basiques et en
présence de solvants organiques (Mateo et al., 2007) (figure2).
10
Figure 2 : Les techniques de l’immobilisation des enzymes (Brena et Batista-Viera, 2006).
2.3 Objectif et principe de l’immobilisation des enzymes
L'immobilisation des enzymes est une méthode qui consiste à fixer les enzymes sur une
surface solide ou un support, pour améliorer leur stabilité et leur capacité catalytique. Les
enzymes immobilisées sont utilisées dans diverses applications industrielles et médicales telles
que la production d'aliments, de médicaments et de biocarburants (Katchalski et Wilchek,
1976).
Le principe fondamental de l'immobilisation des enzymes est que ces dernières sont
capables de maintenir leur activité catalytique même lorsqu'elles sont fixées sur une surface
solide ou un support. Cette fixation peut être réalisée selon différentes méthodes, telles que
l'adsorption, la covalence, le piégeage et la micro encapsulation (Sheldon et van, 2013).
Dans ce contexte, les objectifs principaux de l'immobilisation des enzymes sont les suivants :
 Améliorer la stabilité des enzymes : Les enzymes immobilisées sont généralement plus
stables que les enzymes solubles équivalentes. L'immobilisation protège en effet
l'enzyme contre les conditions environnementales défavorables telles que les variations
de pH, les températures élevées et les solvants organiques, ce qui permet d'allonger sa
durée de vie et, par conséquent, de réduire les coûts de production. (Sheldon, 2007).
 Permettre la réutilisation des enzymes : Il est possible de récupérer les enzymes
immobilisées après leur utilisation dans un processus industriel, ce qui permet de les
11
réutiliser économiquement et réduit la quantité d'enzyme nécessaire pour la production
(Mateo et al., 2007).
 Améliorer la sélectivité des enzymes : Altérer les propriétés de l'enzyme, telles que son
affinité pour le substrat, sa stéréosélectivité et sa régiosélectivité, ce qui peut améliorer
la sélectivité de l'enzyme pour un substrat ou un produit spécifique (Torres et al., 2015).
 Augmenter la cinétique des réactions enzymatiques : Augmenter la vitesse des réactions
enzymatiques en favorisant la concentration d'enzyme active près du substrat, en
minimisant les effets de diffusion et en optimisant les conditions de réaction (Hanefeld
et al., 2009).
 Améliorer la résistance aux inhibiteurs et aux toxines : Protéger ces dernières contre les
inhibiteurs et les toxines présents dans le milieu réactionnel, améliorant ainsi leur
stabilité et leur durée de vie (Betancor et al., 2015).
 Permettre l'utilisation d'enzymes dans des environnements non aqueux : Permet leur
utilisation dans des environnements non aqueux, comme les solvants organiques,
élargissant ainsi leur champ d'application dans les processus industriels (Mateo et al.,
2007).
En conclusion, l'immobilisation des enzymes présente de multiples avantages et peut être
employée pour accroître l'efficacité des processus industriels (Sheldon, 2014).
2.4 Méthodes d’immobilisations
L’immobilisation malgré leurs nombreux avantages, leur utilisation à grande échelle

peut être entravée par leur instabilité et leur coût élevé. Afin de pallier ces limitations, des
scientifiques ont développé des méthodes d'immobilisation des enzymes, qui consistent à les
fixer à un support solide tel qu'une membrane ou des billes de gel. Cette technique offre de
nombreux avantages, notamment la possibilité de réutiliser les enzymes, de stabiliser leur
structure et d'améliorer leur résistance dans des conditions extrêmes, comme nous l'avons
précédemment mentionné (Katti et al.,2004).
En somme, les méthodes d'immobilisation des enzymes sont un domaine de recherche en

constante évolution, offrant de nombreuses opportunités pour l'industrie et la recherche
scientifique. Des recherches sont actuellement en cours pour développer de nouvelles
techniques d'immobilisation des enzymes physiques et chimiques qui présentent une efficacité
accrue, une durée de réutilisation prolongée et une performance améliorée dans des conditions
extrêmes (Mahajan et al., 2016).
12
2.4.1. Méthodes chimiques
2.4.1.1. Immobilisation par liaison covalente avec le support
L’immobilisation enzymatique par liaison covalente implique la fixation d’une enzyme sur un
support solide par une liaison chimique stable. Cette méthode offre plusieurs avantages,
notamment la stabilité de l’enzyme, la réutilisation du support et l’amélioration des
performances enzymatiques.
Les étapes de l’immobilisation enzymatique par liaison covalente incluent la préparation du

support, l’activation chimique du support, la fixation de l’enzyme sur celui-ci, et la purification
du produit immobilisé (Brady et Jordaan, 2009).
- Préparation du support : La sélection d’un support approprié est essentielle, car il doit
être compatible avec l’enzyme et avoir des propriétés physiques et chimiques adaptées
à l’application visée. Les supports les plus fréquemment employés sont les résines
déchange d’ions, les supports à base de polysaccharides et les supports à base de
polymères synthétiques (Mateo et al., 2019).
- Activation chimique du support : le support est ensuite activé chimiquement pour
permettre la formation de liaisons covalentes avec l’enzyme. Les méthodes
fréquemment utilisées comprennent l’emploi de réactifs comme le glutaraldéhyde, le
carbodiimide ou le cyanogène bromure. Ces réactifs permettent de créer des groupes
réactifs à la surface du support pour la fixation de l’enzyme (Sheldon, 2016).
- Fixation de l’enzyme : Après activation chimique du support, l’enzyme est fixée par une
réaction de liaison covalente. Les méthodes les plus fréquentes sont l’adsorption
physique, la liaison covalente directe et la liaison covalente indirecte. Bien que
l’adsorption physique soit la méthode la plus simple, elle n’assure pas une fixation stable
de l’enzyme. La liaison covalente directe implique une liaison covalente directe entre
l’enzyme et le support activé chimiquement. En revanche, la liaison covalente indirecte
utilise des agents de couplage, comme le glutaraldéhyde, pour créer une liaison
covalente entre l’enzyme et le support. Après fixation de l’enzyme sur le support, il est
nécessaire de purifier le produit immobilisé afin d’éliminer les enzymes non fixées ainsi
que les impuretés. Les méthodes fréquemment employées pour cela sont la dialyse, la
filtration et la centrifugation (Wang et Lu, 2004) (figure3).
13
Figure 3 : Technique d’immobilisation par liaison covalente (Brena et Batista-Viera,

2006).
Avantages :
L'immobilisation par liaison covalente offre plusieurs avantages par rapport à d'autres méthodes
d'immobilisation. Elle permet souvent une plus grande stabilité de l'enzyme et une meilleure
réutilisation, car l'enzyme est liée de manière permanente au support. De plus, la liaison
covalente peut être utilisée pour orienter l'enzyme de manière spécifique sur le support, ce qui
peut améliorer son activité (Brady et al, 2004).
Inconvénients :
Cependant, il convient de noter que l'immobilisation par liaison covalente peut également
présenter des inconvénients. Par exemple, l'enzyme peut perdre une partie de son activité après
l'immobilisation en raison de changements conformationnels. De plus, la liaison covalente peut
être difficile à réaliser et peut nécessiter des conditions de réaction spécifiques (Wang et al.,
2016).
2.4.1.2. Immobilisation par réticulation (Cross-Linking) :
La méthode d’immobilisation enzymatique par réticulation est une méthode couramment

utilisée pour fixer des enzymes sur des supports insolubles. Cette technique présente plusieurs
avantages, notamment une amélioration de la stabilité de l’enzyme ainsi que sa réutilisation
facile (figure4).
- Choix du support : Pour choisir le support de réticulation, il est important de prendre en

compte les propriétés de l’enzyme à immobiliser ainsi que les conditions de réaction.
14
Les supports les plus fréquemment utilisés pour l’immobilisation enzymatique par
réticulation sont les résines acryliques, les supports d’agarose et les supports de silice,
etc. (Li et al., 2018).
- Activation du support : Pour activer le support, on ajoute des groupes fonctionnels
réactifs tels que des groupes époxy ou des groupes aldéhydes. Cette étape permet de
former des liaisons covalentes entre l’enzyme et le support, facilitant ainsi
l’immobilisation enzymatique par réticulation (Sheldon, 2011).
- Immobilisation de l’enzyme : Une fois que le support est activé, l’enzyme est ajoutée et
la réaction de réticulation est initiée en présence d’un agent réticulant tel que le
glutaraldéhyde. Cette étape permet de former des liaisons covalentes entre l’enzyme et
le support, fixant ainsi de manière stable l’enzyme sur le support (Sheldon, 2011).
- Élimination des impuretés : Une fois que l’enzyme est immobilisée, les impuretés sont
éliminées par lavage répété du support immobilisé. Cette étape est importante pour
éliminer tout composant indésirable qui pourrait affecter la performance de l’enzyme
immobilisée (Li et al., 2018).
- Caractérisation de l’enzyme immobilisée : Il est essentiel de caractériser l’enzyme
immobilisée pour évaluer ses propriétés enzymatiques, notamment son activité, sa
cinétique de réaction, sa stabilité thermique et sa réutilisabilité. Les techniques
courantes utilisées pour caractériser l’enzyme immobilisée incluent la
spectrophotométrie, la chromatographie et la microscopie électronique (Sheldon,
2011).
Figure 4 : Technique d’immobilisation des enzymes par réticulation (Cross-Linking) (Brena

et Batista-Viera, 2006).
15
Avantages :
-Stabilité accrue : Les enzymes immobilisées par réticulation présentent une plus grande
stabilité en comparaison aux enzymes libres, car elles sont fixées dans une matrice et protégées
contre les conditions environnementales défavorables. De plus, les enzymes immobilisées par
réticulation ont une plus grande résistance aux pH extrêmes et à la température élevée, ce qui
en fait des candidats pour les applications industrielles (Jia et al., 2018).
-Réutilisation : Les enzymes immobilisées par réticulation peuvent être réutilisées plusieurs fois
sans perdre leur activité enzymatique. Cela réduit les coûts de production et augmente
l'efficacité de la réaction enzymatique (Sheldon., 2011).
-Facilité de séparation : La méthode d'immobilisation par réticulation permet de facilement

séparer l'enzyme de la solution réactionnelle, ce qui facilite la purification du produit final (Guo
et al., 2013).
Inconvénients :
-Coût élevé : La méthode d'immobilisation par réticulation est plus coûteuse que d'autres
méthodes d'immobilisation, car elle nécessite l'utilisation d'agents de réticulation tels que le
glutaraldéhyde, qui sont coûteux. De plus, la réticulation peut également altérer la structure et
l'activité enzymatique, ce qui peut entraîner une perte d'activité enzymatique (Singh et al.,
2016).
-Faible capacité d'immobilisation : La méthode d'immobilisation par réticulation a une faible

capacité d'immobilisation par rapport à d'autres méthodes d'immobilisation telles que
l'adsorption. Cela signifie qu'elle ne peut pas être utilisée pour immobiliser des quantités
importantes d'enzymes pour des réactions à grande échelle (Krajewska, 2004).
-Limitations liées à la matrice de support : La matrice de support utilisée pour immobiliser les
enzymes peut affecter l'activité enzymatique et la stabilité. Par exemple, si la matrice de support
n'est pas compatible avec l'enzyme, cela peut entraîner une perte d'activité enzymatique (Mateo
et al., 2007).
2.4.1.3. Immobilisation par liaison ionique :
La méthode d'immobilisation des enzymes par liaison ionique est une technique qui
consiste à lier des enzymes à un support solide, tel que des billes de résine, en utilisant des
interactions électrostatiques entre des groupes chargés de l'enzyme et des groupes opposés
chargés sur le support. Cette méthode est souvent utilisée pour améliorer la stabilité et la
16
réutilisabilité des enzymes dans des applications industrielles et biotechnologiques (Mateo et
al., 2007). Les étapes de cette technique sont les suivantes :
- Préparation de la surface de support : La première étape du processus implique la

préparation de la surface de support. Cette étape nécessite le nettoyage et la modification
de la surface pour qu’elle soit compatible avec la liaison ionique. Afin d’optimiser la
liaison ionique, diverses techniques peuvent être utilisées, notamment la salinisation,
qui permet de modifier la surface et de la rendre plus propice à la liaison ionique (John,
2013).
- Sélection de l’enzyme : Le choix de l’enzyme à immobiliser dépend de son activité et
de sa stabilité dans les conditions de la réaction. Cette sélection est cruciale pour assurer
l’efficacité du processus. L’enzyme peut être obtenue en purifiant des sources naturelles
ou en la produisant par génie génétique en laboratoire (Mateo et al., 2013).
- Préparation de la solution d’immobilisation : La préparation de la solution
d’immobilisation implique la dissolution de l’enzyme dans un tampon approprié, suivi
de l’ajout d’ions chargés pour faciliter la liaison ionique. Les ions métalliques, tels que
le cuivre, le fer ou le nickel, sont couramment utilisés à cette fin (Chen et al., 2015).
- Immobilisation de l’enzyme : Après préparation de la surface de support, la solution
d’immobilisation est appliquée sur celle-ci. Les ions chargés présents dans la solution
se lient à la fois à la surface de support et à l’enzyme, permettant ainsi l’immobilisation
de cette dernière sur la surface de support. Une fois cette étape terminée, un rinçage est
effectué pour éliminer toute trace d’enzyme qui ne serait pas immobilisée (Azmi et al.,
2013).
- Caractérisation de biocatalyseur immobilisé : Il est crucial de caractériser l’enzyme
immobilisée afin d’évaluer son activité et sa stabilité. Pour cela, diverses techniques
peuvent être utilisées, telles que la spectroscopie UV-visible ou encore l’analyse de la
cinétique enzymatique. Ces méthodes permettent d’obtenir des données précises sur
l’enzyme immobilisée (Rezaei et Mohammadi, 2016) (figure5).
17
Figure 5 : Technique d’immobilisation des enzymes par liaison ionique (Brena et Batista-
Viera, 2006).
Avantages :
-Facilité de fabrication : La méthode d'immobilisation par liaison ionique est relativement

simple à réaliser, et ne nécessite pas d'agents de réticulation coûteux comme dans le cas de la
réticulation. De plus, la technique peut être réalisée à température ambiante, ce qui permet
d'économiser de l'énergie par rapport aux méthodes d'immobilisation nécessitant des conditions
de température élevées (Ma et al., 2017).
-Sélectivité améliorée : Les groupes fonctionnels spécifiques présents sur la surface de l'enzyme
peuvent être utilisés pour former des liaisons ioniques avec des charges opposées sur la surface
du support, ce qui permet une immobilisation sélective de l'enzyme. Cela peut permettre de
conserver l'activité enzymatique et de limiter les réactions secondaires indésirables (Roy et al.,
2003).
-Capacité d'immobilisation élevée : La méthode d'immobilisation par liaison ionique permet

d'obtenir une capacité d'immobilisation élevée, ce qui permet d'immobiliser des quantités
importantes d'enzymes pour les réactions à grande échelle (Bornscheuer, 2013).
Inconvénients :
-Stabilité limitée : Les enzymes immobilisées par liaison ionique sont moins stables que les
enzymes immobilisées par réticulation. Elles sont plus susceptibles de se désintégrer en raison
de la force de liaison relativement faible entre l'enzyme et le support (Brady et Jordaan, 2009).
-Faible réutilisabilité : Les enzymes immobilisées par liaison ionique ont une faible
réutilisabilité en comparaison aux enzymes immobilisées par réticulation, car les liaisons
ioniques peuvent être rompues facilement au cours des cycles de réutilisation. Cela peut
18
entraîner une perte d'activité enzymatique au fil du temps et augmenter les coûts de production
(Guzik et Hupert, 2013).
-Perte d'activité enzymatique : Les conditions de l'immobilisation par liaison ionique peuvent
entraîner une perte d'activité enzymatique en raison de l'interaction électrostatique entre
l'enzyme et le support, ce qui peut modifier la conformation de l'enzyme et réduire son activité
enzymatique (Garcia et al., 2011).
2.4.2. Méthodes physiques
2.4.2.1. Immobilisation par adsorption
L'adsorption est une technique d'immobilisation enzymatique qui utilise des forces
d'interaction physiques ou chimiques pour lier des enzymes à des supports solides. Comparée
à d'autres méthodes d'immobilisation enzymatique, cette méthode présente de nombreux
avantages tels que la simplicité, la rapidité, la réversibilité et le faible coût. Dans ce document,
nous allons examiner en détail cette méthode d'immobilisation étape par étape et fournir des
références pour chaque étape (John Brady, 2009) (figure6).
- Choix du support solide : La sélection du support solide est une étape cruciale lors de
l'immobilisation enzymatique par adsorption, car le support doit répondre à des critères
spécifiques, tels que la porosité, l'inertie, la stabilité, la non-toxicité et la disponibilité
en grandes quantités. Les résines échangeuses d'ions, les polymères, les nanoparticules,
les membranes, les fibres et les billes magnétiques sont les supports les plus couramment
utilisés. Pour faciliter l'adsorption des enzymes, la plupart de ces supports sont
fonctionnalisés avec des groupes chimiques, tels que les groupes amine, carboxyle,
hydroxyle ou sulfonate. Des références bibliographiques seront fournies pour chaque
type de support (Brady, 2009 ; Zhang et al., 2014).
- Préparation de l'enzyme : Afin d'améliorer l'efficacité de l'immobilisation, l'enzyme doit
être préalablement purifiée et concentrée avant l'adsorption. Les méthodes courantes de
purification comprennent la chromatographie d'exclusion, la chromatographie d'affinité
et la dialyse Afin d'améliorer l'efficacité de l'immobilisation, l'enzyme doit être
préalablement purifiée et concentrée avant l'adsorption. Les méthodes courantes de
purification comprennent la chromatographie d'exclusion, la chromatographie d'affinité
et la dialyse. Suite à la purification, l'enzyme est souvent lyophilisée ou congelée pour
une utilisation ultérieure. Des références bibliographiques pour chaque méthode de
purification seront également fournies. Suite à la purification, l'enzyme est souvent
lyophilisée ou congelée pour une utilisation ultérieure. Des références bibliographiques
19
pour chaque méthode de purification seront également fournies (Hodge et Cukier,
1990).
- Adsorption de l'enzyme sur le support solide : Lorsqu'on souhaite fixer une enzyme sur
un support solide, il est possible de procéder de deux manières : soit en plongeant le
support dans une solution contenant l'enzyme, soit en versant la solution contenant
l'enzyme sur le support. Pour faciliter l'adsorption de l'enzyme sur le support, il est
recommandé de l'agiter, de maintenir un pH optimal et une température optimale. Une
fois que l'enzyme est adsorbée sur le support, il est nécessaire de laver ce dernier afin
d'éliminer toute enzyme qui n'a pas été fixée (Roussos et Velonia, 2013 ; Baharifar et
al., 2018).
- Caractérisation du biocatalyseur immobilisé : Une fois que l'enzyme est immobilisée, il
est important de caractériser le biocatalyseur afin d'évaluer son activité enzymatique, sa
stabilité, sa réutilisabilité et sa cinétique. Les méthodes de caractérisation les plus
courantes incluent la spectrophotométrie, la chromatographie, l'électrophorèse, la
microscopie et la mesure de l'activité enzymatique (Saxena et al., 1999 ; Xie et Lu.,
2014).
- Applications de l'immobilisation enzymatique par adsorption : L'adsorption pour
immobiliser les enzymes est une technique couramment utilisée dans différents
domaines tels que la production d'enzymes, la catalyse enzymatique, la biosynthèse, la
biotransformation et la dégradation des polluants. Cette méthode est utilisée pour
diverses applications, notamment dans la production de biocarburants, la fabrication de
produits pharmaceutiques, la synthèse de polymères et la dégradation des colorants
(Zhou et al., 2010 ; Balaji et al., 2015).
Figure 6 : Technique d’immobilisation des enzymes par adsorption (Brena et Batista-

Viera, 2006).
20
Avantages :
-Facilité d'utilisation : La méthode d'absorption est accessible aux chercheurs et aux ingénieurs
qui n'ont pas une expertise spécialisée en immobilisation d'enzymes, car elle est simple et facile
à utiliser. En outre, elle est économiquement avantageuse par rapport à d'autres méthodes car
elle ne nécessite ni équipement coûteux ni réactifs spécifiques (Olajuyigbe et Fatokun, 2018).
-Conservation de l'activité enzymatique : Les enzymes qui sont immobilisées par absorption
ont souvent une activité enzymatique élevée car leur structure et leur fonction ne subissent pas
de modifications chimiques ou physiques qui pourraient les altérer (Sheldon, 2007).
-Flexibilité : Grâce à la méthode d'absorption, les enzymes peuvent être immobilisées sur divers
supports, tels que des billes, des membranes ou des fibres, ce qui donne aux chercheurs la
possibilité de choisir le support le mieux adapté à leur application spécifique (Olajuyigbe et
Fatokun, 2018).
-Réversibilité : La méthode d'absorption est souvent réversible, ce qui implique que les enzymes
peuvent être facilement retirées du support, si besoin est. Cette caractéristique peut s'avérer
bénéfique pour les applications qui nécessitent le recyclage ou la récupération des enzymes
(Sheldon, 2007).
Inconvénients :
-Faible stabilité : La méthode d'absorption physique peut entraîner une stabilité relativement
faible pour les enzymes immobilisées en raison des forces de liaison peu fortes. Cette faible
stabilité peut entraîner la libération de l'enzyme dans le milieu réactionnel, ce qui peut réduire
son efficacité catalytique. De plus, il existe un risque que l'enzyme se détache complètement de
la matrice, limitant ainsi sa capacité à être réutilisée (Krajewska, 2004).
-Perte d'activité : L'immobilisation par absorption peut causer une diminution d'activité de
l'enzyme immobilisée. Cette diminution peut être attribuée aux changements conformationnels
subis par l'enzyme pendant l'immobilisation ou aux interactions défavorables entre l'enzyme et
la matrice d'immobilisation (Tischer et Wedekind, 2002).
-Difficulté à contrôler la densité d'enzyme : Il est difficile de contrôler précisément la densité

d'enzyme immobilisée sur la matrice lors de l'immobilisation par absorption. Cette densité peut
varier considérablement d'un lot à l'autre, ce qui peut avoir un impact sur les performances de
l'enzyme immobilisée (Polakovič et Švitel, 2002).
4-Sensibilité aux conditions environnementales : Les enzymes immobilisées par absorption

peuvent être influencées par les conditions environnementales telles que la température, le pH
21
et la force ionique. Ces facteurs peuvent impacter la stabilité et l'activité de l'enzyme
immobilisée (Sheldon, 2007).
2.4.2.2. Immobilisation par inclusion (encapsulation)
La technique d'immobilisation enzymatique par inclusion est fréquemment employée et

implique l'encapsulation des enzymes dans une matrice support. Cette méthode présente
plusieurs avantages, tels que la stabilité enzymatique accrue, la résistance aux conditions
environnementales et la possibilité de réutiliser facilement les enzymes (figure7).
Le processus d'immobilisation enzymatique par inclusion peut être divisé en trois étapes : la
préparation de la matrice, l'encapsulation de l'enzyme et la caractérisation de la biocatalyse
(Carrier, 2017).
- Préparation de la matrice : Il convient de choisir une matrice de support adaptée aux

caractéristiques physico-chimiques de l'enzyme, aux conditions de réaction ainsi qu'aux besoins
du système de réaction. Les matériaux les plus fréquemment employés pour immobiliser les
enzymes par inclusion sont les polymères, qu'ils soient naturels ou synthétiques, les hydrogels
ainsi que les sols minéraux (Hwang et Shim, 2004).
- Encapsulation de l'enzyme : Plusieurs méthodes permettent d'encapsuler les enzymes dans

une matrice, notamment en les incorporant directement dans la matrice support ou en ayant
recours à des techniques d'encapsulation telles que la micro encapsulation, la coacervation ou
la gélification. Il convient d'optimiser les conditions de réaction, telles que la température, le
pH et la concentration en enzyme, afin d'obtenir une encapsulation homogène et efficace (Wang
et al., 2013).
- Caractérisation du biocatalyseur : Il est essentiel de caractériser le biocatalyseur immobilisé

par inclusion pour évaluer sa stabilité et son efficacité. Diverses techniques, notamment la
spectroscopie, la microscopie et la mesure de l'activité enzymatique, sont mises en œuvre pour
évaluer les propriétés physiques et chimiques du biocatalyseur (Sheldon, 2007).
22
Figure 7 : technique d’immobilisation des enzymes par inclusion (encapsulation) (Brena et

Batista-Viera, 2006).
Avantages :
-Meilleure stabilité : Les enzymes peuvent être immobilisées en les incluant dans des matériaux
poreux, ce qui présente plusieurs avantages par rapport aux autres méthodes d'immobilisation.
En effet, cette méthode offre une meilleure stabilité thermique à ces enzymes et les rend plus
résistantes aux conditions environnementales extrêmes telles que les pH élevés ou bas (Wei et
Li, 2017).
-Meilleure réutilisation : Il est possible de réutiliser les enzymes immobilisées par inclusion
plusieurs fois sans observer de diminution significative de leur activité enzymatique (Mateo et
al., 2002).
-Facilité de préparation : La méthode d'immobilisation d'enzymes par inclusion est simple à

utiliser et ne requiert pas de conditions ou de traitements chimiques particuliers (Cao et al.,
1990).
-Possibilité de contrôler l'immobilisation : elle permet de contrôler précisément la quantité

d'enzyme immobilisée et sa répartition à l'intérieur du matériau (Ferrer et al., 2001).
-Meilleure rétention de l'activité enzymatique : Comparées à d'autres méthodes

d'immobilisation d'enzymes, celles qui sont immobilisées par inclusion dans des matériaux
poreux présentent une meilleure rétention de leur activité enzymatique (Wei et al.,2017).
Inconvénients :
-Perte d'activité enzymatique : Lorsqu'on inclut une enzyme dans une matrice, il peut y avoir
une diminution de son activité enzymatique en raison des interactions avec la matrice ou de
23
modifications de la conformation de l'enzyme. Cette perte d'activité peut avoir un impact sur la
performance globale de la réaction enzymatique (Rathi et al., 2013).
-Faible stabilité à long terme : Au fil du temps, les enzymes incluses dans une matrice peuvent
perdre leur activité enzymatique en raison de leur interaction avec la matrice ou de la
dégradation de cette dernière. Cette perte d'activité peut rendre la méthode d'inclusion moins
adaptée pour une utilisation à long terme (Sheldon, 2007).
-Difficulté de régénération : La régénération de la matrice peut se révéler ardue, ce qui peut

conduire à une diminution de l'activité enzymatique et une instabilité à long terme de l'enzyme
(Sheldon, 2007).
-Faible contrôle du microenvironnement : L'inclusion d'une enzyme dans une matrice peut
restreindre le contrôle du microenvironnement de l'enzyme, ce qui peut altérer la spécificité et
la sélectivité de la réaction enzymatique. De plus, les conditions de la réaction peuvent être
difficiles à optimiser en raison de la complexité de l'environnement dans lequel l'enzyme est
incluse (Rathi et al., 2013).
-Coût élevé : L'inclusion d'une enzyme dans une matrice peut être coûteuse, surtout si
l'utilisation de matériaux particuliers est nécessaire pour la matrice. Par ailleurs, le coût de la
régénération de la matrice peut également s'avérer élevé (Sheldon, 2007).
2.5 Comparaison entre les différentes méthodes d’immobilisation :
Le tableau 2 représente une comparaison entre les différentes méthodes d'immobilisation des
enzymes en soulignant les avantages et les inconvénients de chaqu’une d’entre eux.
24
Tableau II : Les avantages et les inconvénients de chaque méthodes (Sangeetha et
Abraham, 2014 ; Wang et al., 2016 ; Nadar et al., 2018).
Méthode
Avantages Inconvénients Références
d'immobilisation
Simple, rapide, faible

1-Adsorption physique coût. Faible stabilité et (Sangeetha et
reproductibilité, faible Abraham, 2014 ;
capacité d'immobilisation Nadar et al., 2018).
2-Liaison Covalent Stabilité, reproductibilité, Complexité, coûts élevés, (Sangeetha et
haute capacité risques de dénaturation et Abraham, 2014 ;
d'immobilisation. d'inactivation. Wang et al., 2016).
3-Inclusion Stabilité, protection Faible perméabilité et (Sangeetha et
contre les conditions de activité de l'enzyme, Abraham, 2014 ;
réaction défavorables. coûts élevés. Nadar et al., 2018).
Simple, rapide, faible Faible stabilité et
4-Liaison ionique coût. reproductibilité, faible(Sangeetha et
capacité Abraham, 2014 ;
d'immobilisation. Nadar et al., 2018).
Stabilité, reproductibilité, (Sangeetha et
5-Cross-linking haute capacité Complexité, coûts élevés, Abraham, 2014 ;
d'immobilisation. risques de dénaturation et Wang et al., 2016).
d'inactivation.
2.6 Le choix de type d’immobilisation des enzymes
Plusieurs facteurs sont à prendre en compte pour choisir le type d'immobilisation

d'enzymes, tels que la nature de l'enzyme, le support utilisé, les conditions de réaction, les
exigences industrielles et les coûts associés à chaque méthode (Sheldon, 2007).
Les techniques d'immobilisation d'enzymes les plus fréquemment employées sont la liaison
covalente, l'adsorption physique, l'encapsulation, l'inclusion et la formation de films minces. La
méthode de liaison covalente est généralement considérée comme la plus fiable et la plus
performante pour immobiliser des enzymes, car elle est stable, réutilisable et permet de
maintenir l'activité enzymatique (Cao et al., 2003).
Dans certains cas, l'adsorption physique peut être une option privilégiée, surtout si la
réutilisation de l'enzyme n'est pas considérée comme prioritaire et si une immobilisation rapide
et facile est souhaitée. Les techniques courantes d'immobilisation des enzymes comprennent
également l'encapsulation et l'inclusion, qui sont particulièrement adaptées aux enzymes
sensibles aux conditions de réaction (Mateo et al., 2019).
25
Les techniques de formation de films minces sont relativement récentes et continuent d'être
développées pour l'immobilisation d'enzymes. Cette méthode est fréquemment employée pour
immobiliser des enzymes sur des substrats souples tels que des textiles et des polymères (Singh
et al., 2013).
2.7 Propriétés des enzymes immobilisées :
Il existe plusieurs méthodes pour obtenir des enzymes immobilisées, notamment

l'adsorption physique ou la formation de liens chimiques. Les propriétés des enzymes
immobilisées peuvent différer selon la méthode d'immobilisation employée. Voici un aperçu
des propriétés courantes des enzymes immobilisées obtenues par des méthodes physiques et
chimiques (Sheldon et Van,2013).
2.7.1 Propriétés des enzymes immobilisées physiquement :
L'immobilisation physique des enzymes peut entraîner une amélioration de leur stabilité
thermique et de leur résistance aux conditions de pH extrêmes. Les enzymes immobilisées par
adsorption physique ont également tendance à présenter une activité spécifique plus élevée par
unité de masse d'enzyme que les enzymes libres. Toutefois, il convient de noter que l'adsorption
physique peut être réversible et peut causer une diminution progressive de l'activité
enzymatique au fil du temps (Zhou et al.,2012 ; Malaekeh et Morshedi, 2013).
2.7.2 Propriétés des enzymes immobilisées chimiquement :
L'immobilisation chimique peut contribuer à renforcer la stabilité de l'enzyme et à

augmenter son activité en conditions extrêmes de pH et de température. En outre, les enzymes
immobilisées par cette méthode sont souvent plus stables sur le plan opérationnel, plus
réutilisables et plus résistantes aux inhibiteurs. Toutefois, il convient de souligner que
l'utilisation de réactifs chimiques peut influencer la conformation de l'enzyme et réduire son
activité catalytique (Tischer et Wedeking, 1991 ; Cao, 2005 ; Sheldon et Van, 2013).
Il existe d'autres techniques d'immobilisation, telles que l'encapsulation et l'inclusion,

qui présentent des avantages tels qu'une stabilité accrue de l'enzyme et une plus grande capacité
de réutilisation. Toutefois, il convient de noter que ces méthodes peuvent avoir un impact sur
l'activité enzymatique de l'enzyme immobilisée et peuvent nécessiter des conditions de réaction
particulières (Singh et Kumar, 2007 ; Mateo et al., 2007 ; Sheldon et Van, 2013).
26
2.8 Effet de l’immobilisation de l’enzyme sur leur activité :
L'activité enzymatique peut être affectée de manière significative par l'immobilisation

de l'enzyme, qui varie en fonction de la méthode d'immobilisation choisie. Certaines méthodes
peuvent entraîner une diminution de l'activité enzymatique, tandis que d'autres peuvent mener
à une augmentation de cette activité (Liu, 2019).
Zhang et al. (2018) ont mené une étude comparative de l'activité enzymatique de la lipase
immobilisée par deux méthodes : l'adsorption physique et la liaison covalente. Les résultats ont
indiqué que la méthode de liaison covalente a entraîné une diminution de l'activité enzymatique,
tandis que la méthode d'adsorption physique a conduit à une augmentation de l'activité
enzymatique (Zhang et al., 2018). Des résultats similaires ont été observés dans d'autres études.
Par exemple, Liu et al. (2019) ont comparé l'activité enzymatique de la glucose oxydase
immobilisée par covalent bonding et adsorption physique. Les résultats ont montré que la
méthode d'adsorption physique a produit une activité enzymatique supérieure à celle de la
méthode de covalent bonding (Liu et al.,2019).
Cependant, il est à noter que certaines méthodes d'immobilisation peuvent augmenter la

stabilité de l'enzyme, même si cela peut entraîner une légère diminution de son activité
enzymatique. Par exemple, une étude menée par Zang et al (2017) a révélé que l'immobilisation
de la lactase par covalent bonding a entraîné une diminution de l'activité enzymatique, mais a
amélioré la stabilité thermique de l'enzyme (Zang et al., 2017).
En résumé, l'impact de l'immobilisation sur l'activité enzymatique dépend de nombreux

facteurs, notamment la méthode d'immobilisation, les conditions de réaction et les propriétés
du support. Pour maximiser l'activité enzymatique de l'enzyme immobilisée pour une
application donnée, les chercheurs doivent donc considérer ces facteurs de manière appropriée
(Zang et al., 2017).
2.9 Factures influençant l’immobilisation enzymatique
Plusieurs facteurs influencent l'efficacité de l'immobilisation enzymatique. Tout

d'abord, il est important de prendre en compte la nature de l'enzyme et du support utilisé. Les
enzymes sont des molécules complexes avec une structure tridimensionnelle spécifique qui peut
être altérée lorsqu'elles sont immobilisées. De plus, la surface du support doit être compatible
avec l'enzyme pour favoriser son immobilisation. En outre, l'activité enzymatique peut être
affectée par des paramètres tels que le pH, la température et la concentration des réactifs lors
de l'immobilisation (Chen et al., 2013).
27
Outre les facteurs précédemment évoqués, d'autres éléments tels que le mode
d'immobilisation, la densité d'enzyme immobilisée, la taille et la forme des particules, ainsi que
la durée d'immobilisation peuvent influer l'efficacité de l'immobilisation enzymatique. En effet,
pour une utilisation industrielle efficace, il est crucial que l'enzyme immobilisée soit stable.
Cela implique qu'elle doit être capable de conserver son activité catalytique pendant une longue
période et de résister aux conditions de réaction défavorables (Krajewska, 2004).
Afin d'optimiser l'immobilisation enzymatique en fonction de l'application spécifique,

il est essentiel de bien comprendre ces facteurs. Des études ont été menées pour évaluer l'impact
de ces facteurs sur l'immobilisation enzymatique, ainsi que sur les propriétés des enzymes
immobilisées (Krajewska,2004 ; Sheldon, 2007 ; Chen et al., 2013).
2.10. Supports utilisés pour l’immobilisation enzymatique
2.10.1. Les supports organiques
Les propriétés des supports organiques tels que la compatibilité avec les organismes vivants,
la stabilité chimique et mécanique, ainsi que la perméabilité aux réactifs, en font un choix
populaire pour l'immobilisation d'enzymes. Les types les plus répandus de supports organiques
utilisés pour cette application sont les polymères synthétiques, les polymères naturels et les
hydrogels (Liu et al., 2019).
 Supports à base de polymères synthétiques :

En raison de leur capacité à offrir une grande stabilité, une résistance élevée à la dégradation
et une grande flexibilité, les polymères synthétiques tels que le polyacrylamide, le
polyuréthane, le polystyrène, le polyvinyle alcool et le polyacrylonitrile ont été
abondamment utilisés comme supports pour l'immobilisation enzymatique (Dwevedi et
Kayastha, 2019).
 Supports à base de polysaccharides :

L'immobilisation enzymatique utilise également des polysaccharides naturels tels que
l'alginate, la chitosane, la cellulose, la gomme arabique et le carraghénane. Ces matériaux
sont appréciés pour leur biocompatibilité, leur faible toxicité et leur capacité à former des
gels (Ramanathan et al., 2017).
 Supports à base de protéines :

Des protéines naturelles telles que la gélatine, le collagène, l'albumine sérique bovine et la
caséine peuvent également servir de supports pour l'immobilisation enzymatique en raison
de leur biocompatibilité et de leur capacité à former des gels (Guo et al.,2019).
28
 Supports à base de lipides :
Les lipides naturels tels que la lécithine, le cholestérol et les acides gras sont également
utilisés comme supports pour l'immobilisation enzymatique en raison de leur capacité à
former des membranes lipidiques et leur biocompatibilité (Li et al.,2018).
 Supports à base de nanoparticules :

En raison de leur capacité à stabiliser les enzymes et leur grande surface spécifique, les
nanoparticules métalliques telles que l'or, l'argent, le cuivre et le platine, ainsi que les
nanoparticules de silice, sont utilisées comme supports pour l'immobilisation enzymatique
(Wei et al.,2020).
2.10.1. Les supports inorganiques
Les supports inorganiques sont couramment utilisés pour l'immobilisation enzymatique en

raison de leur stabilité, de leur capacité à résister à la dégradation et de leur aptitude à favoriser
l'interaction enzymatique avec le substrat. Les types de supports inorganiques suivants sont
présentés ci-dessous (Liu et al., 2019).
 Supports minéraux :
Les supports minéraux sont des matériaux inorganiques d'origine naturelle ou synthétique,
tels que les argiles, la silice, le verre et les zéolithes, qui sont utilisés pour l'immobilisation
enzymatique. Ils offrent une grande surface spécifique pour l'immobilisation des enzymes
et peuvent être modifiés chimiquement pour améliorer leur interaction avec ces dernières.
Les argiles, qui présentent une grande surface spécifique et une porosité intéressante, sont
couramment utilisées comme supports minéraux pour l'immobilisation enzymatique (Liu et
al., 2019).
 Supports métalliques :
Les supports métalliques sont constitués de métaux tels que le fer, l'aluminium et le titane,
ainsi que d'oxydes métalliques tels que l'oxyde de zinc et l'oxyde de titane. Ces supports
sont utilisés pour l'immobilisation enzymatique en raison de leur grande stabilité et de leur
surface spécifique élevée. Les oxydes métalliques sont particulièrement utiles pour
l'immobilisation enzymatique, comme l'illustre l'exemple de l'oxyde de zinc, qui a été utilisé
comme support pour immobiliser la lipase (Azmi et al., 2020).
 Supports en verre :
Les supports en verre sont des matériaux inorganiques transparents qui offrent une surface
plane et lisse pour l'immobilisation enzymatique. Ils peuvent être modifiés chimiquement
pour améliorer leur interaction avec les enzymes. Le verre de silice a été utilisé comme
29
support pour immobiliser la glucose oxydase, illustrant l'utilité des supports en verre pour
l'immobilisation enzymatique (Zhang et al., 2015).
 Supports de carbones :
Les supports carbonés incluent le charbon actif et les nanotubes de carbone. En raison de
leur surface spécifique élevée, ils sont utilisés pour l'immobilisation enzymatique et peuvent
être modifiés chimiquement pour améliorer leur interaction avec les enzymes. Pour
l'immobilisation de la lipase, le charbon actif a été utilisé comme support (Arumugam et
al., 2018).
30
CHAPITRE III : EXEMPLE
D’ENZYME IMMOBILISEE
(Trypsine).
Chapitre 3 : Exemple d’enzyme immobilisée (Trypsine)
CHAPITRE III : EXEMPLE D’ENZYME IMMOBILISEE (Trypsine).
3.1 Généralité sur la trypsine :
L'enzyme trypsine est une enzyme protéolytique cruciale dans la digestion des protéines
dans l'intestin grêle chez les mammifères. Elle est initialement produite sous forme inactive,
connue sous le nom de trypsinogène, par les cellules acineuses du pancréas. Pour devenir active,
elle est ensuite activée par une protéase pancréatique appelée entérokinase, une fois dans
l'intestin grêle (Polgar, 2005).
La trypsine est une endopeptidase qui a la capacité de couper les liaisons peptidiques
situées à l'intérieur des chaînes polypeptidiques (Laskowski et Kato, 1980). Elle est
spécifiquement conçue pour reconnaître et couper les liaisons contenant des résidus d'acides
aminés basiques, tels que l'arginine ou la lysine. En biochimie, la trypsine est également utilisée
pour cliver les protéines afin d'analyser leur structure et leur fonction (Deryugina et Quigley,
2006) (figure8).
La trypsine peut être impliquée dans d'autres processus physiologiques tels que la
signalisation cellulaire et la migration cellulaire. En outre, des recherches ont démontré que la
trypsine pourrait être impliquée dans la progression de certains types de cancers, ce qui en fait
une cible prometteuse pour le développement de thérapies anticancéreuses (Kouno et al., 2019)
Figure 8 : La structure du trypsinogène (à gauche) et de la trypsine (à droite) (Elgendy, 2016).
31
3.2 Importance de la trypsine :
L'enzyme trypsine est une enzyme digestive produite dans le pancréas qui joue un rôle
crucial dans la digestion des protéines. Les principales importances de l'enzyme trypsine sont :
-Digestion des protéines : la trypsine joue un rôle clé dans la digestion des protéines en
décomposant les liaisons peptidiques et en fragmentant les protéines en peptides et en acides
aminés. Cette décomposition permet une absorption optimale par l'organisme. Cette fonction
est essentielle car les protéines sont nécessaires pour la croissance et la réparation des tissus
corporels (Walsh et Neurath, 1971).
-Contrôle de la digestion : Outre son rôle clé dans la digestion des protéines, la trypsine joue un
rôle important dans la régulation de la digestion. Elle participe notamment à la libération
d'autres enzymes digestives, notamment la chymotrypsine, l'élastase et la carboxypeptidase
(Laskowski, 1971).
-Utilisation dans la recherche scientifique : Enfin, la trypsine trouve également des applications
en laboratoire pour des recherches scientifiques, notamment la purification des protéines, la
détermination de la séquence des acides aminés et la production de peptides (Jankowski et al.,
2004).
3.3. Activité catalytique de l’enzyme libre :
La trypsine est une enzyme digestive synthétisée par le pancréas et qui joue un rôle clé
dans la décomposition des protéines en acides aminés dans l’intestin grêle. Cette activité
catalytique est vitale pour la digestion des protéines et la nutrition des organismes. Dans les
prochaines lignes, je vais vous expliquer plus en détail l’activité catalytique de la trypsine :
C'est une enzyme qui agit en coupant les liaisons peptidiques voisines de la lysine et de
l'arginine dans les chaînes polypeptidiques. Elle fragmente les protéines en peptides plus petits
qui seront ensuite décomposés en acides aminés par d'autres enzymes. La trypsine est
hautement spécifique pour ces acides aminés grâce à la présence d'un site actif contenant une
triade catalytique composée d'histidine, d'aspartate et de sérine. Cette triade est responsable de
l'activité protéolytique de la trypsine (Hedstrom, 2002).
Avant d'être fonctionnelle, la trypsine est produite sous forme de trypsinogène, son
précurseur inactif. L'entérokinase, une protéase pancréatique, est responsable de l'activation du
trypsinogène. Ce processus d'activation nécessite la coupure d'un peptide spécifique, ce qui
permet l'exposition du site actif de la trypsine (Salvesen et Nagase, 1987).
32
L'activité catalytique de la trypsine est régulée par plusieurs mécanismes. L'un de ces
mécanismes est l'inhibition, qui peut être exercée par des inhibiteurs spécifiques de la trypsine
tels que l'aprotinine, le benzamidine et le soja trypsine inhibiteur. Ces inhibiteurs se lient au
site actif de la trypsine et empêchent son activité catalytique (Bode et Huber, 1992).
Outre l’inhibition par des inhibiteurs spécifiques, la trypsine est également régulée par
l’inhibition allostérique. Un exemple de régulation positive est lion calcium, qui peut se lier à
la trypsine et stimuler son activité catalytique (Lin et Tang, 2003).
3.4. Effet du pH sur l’activité enzymatique de trypsine :
Le pH est un facteur important qui peut influencer l’activité enzymatique de la trypsine.

La trypsine est une enzyme protéolytique qui décompose les protéines en peptides plus petits
en clivant les liaisons peptidiques C-terminal des acides aminés arginine et lysine (Polgár,
2005).
Plusieurs études ont été menées pour évaluer l’impact du pH sur l’activité enzymatique
de la trypsine, et il a été établi que la trypsine a une activité maximale lorsque le pH est compris
entre 7,5 et 8,5. En dehors de cette plage de pH, l’activité enzymatique de la trypsine diminue
considérablement. Lorsque le pH est inférieur à 7,5, la structure de l’enzyme se dénature, ce
qui entraîne une diminution rapide de son activité enzymatique. De même, lorsque le pH est
supérieur à 8,5, la charge de surface de l’enzyme est modifiée, affectant ainsi l’interaction entre
l’enzyme et le substrat et entraînant une diminution de l’activité enzymatique. Ces résultats
soulignent l’importance du pH optimal pour la trypsine et son rôle clé dans le maintien de son
activité enzymatique Il a été observé que des variations de pH peuvent non seulement affecter
l’activité enzymatique de la trypsine, mais aussi réguler son activité (Dubois et al., 1956).
En effet, plusieurs études ont montré que la trypsine peut être activée ou inhibée en
fonction des variations de pH. Par exemple, lorsque le pH est inférieur à 7,5, des ions H+ se
lient aux résidus d’histidine présents dans la structure de l’enzyme, ce qui peut entraîner une
inhibition de l’activité enzymatique de la trypsine. En revanche, lorsque le pH est supérieur à
8,5, des ions OH- peuvent augmenter la réactivité des résidus d’histidine dans la structure de
l’enzyme, ce qui conduit à l’activation de l’activité enzymatique de la trypsine. Ces résultats
démontrent l’importance de la régulation du pH pour maintenir l’activité enzymatique optimale
de la trypsine (Dubois et al., 1956). Il est important de noter que la trypsine est sensible aux
variations de pH dans son environnement de travail. La présence de substances acides ou
basiques dans l’échantillon peut modifier le pH, ce qui peut avoir un impact significatif sur
l’activité enzymatique de la trypsine. Par conséquent, il est crucial de maintenir un pH stable et
33
optimal pour assurer une activité enzymatique maximale de la trypsine. Ce facteur doit être pris
en compte lors de l’utilisation de la trypsine en laboratoire pour éviter les erreurs expérimentales
et obtenir des résultats précis et fiables (Boyer, 1971).
3.5. Les Techniques d’immobilisation de la trypsine
Les techniques d'immobilisation de la trypsine peuvent être réalisées à l'aide de

différents supports, tels que les supports inorganiques et organiques. Les supports inorganiques
incluent des matériaux comme la silice, l'alumine, le verre et les nanoparticules métalliques,
tandis que les supports organiques comprennent les polymères synthétiques et naturels (Adhav
et Singhal., 2016).
Plusieurs méthodes ont été développées pour immobiliser la trypsine, notamment

l'immobilisation physique, l'immobilisation chimique. Chaque méthode a ses avantages et ses
inconvénients en termes d'efficacité, de stabilité et de réutilisation de l'enzyme immobilisée
(Alves et al., 2011). Ces dernières années, des recherches ont été menées pour améliorer les
performances des enzymes immobilisées, notamment en combinant différentes techniques
d'immobilisation pour produire des supports hybrides. Ces derniers peuvent améliorer la
stabilité, l'activité et la réutilisation de la trypsine immobilisée (Chibata et Tosa, 2013).
3.5.1. Immobilisation sur les billes de verre avec le glutaraldéhyde
L'immobilisation de la trypsine sur des billes de verre avec du glutaraldéhyde est une
méthode fréquemment utilisée pour augmenter la stabilité de l'enzyme et améliorer sa
réutilisabilité dans les réactions enzymatiques. Les étapes clés de la technique d'immobilisation
de la trypsine sur des billes de verre avec du glutaraldéhyde sont les suivantes :
 Préparation des billes de verre : Les billes de verre sont lavées avec de l'eau distillée pour
éliminer les impuretés. Ensuite, elles sont activées avec de l'acide chlorhydrique et traitées
avec une solution de polyéthylène imine (PEI) pour fournir des groupes amine pour la
liaison avec la trypsine (Chakraborty et Srinivasan, 2012).
 Traitement avec le glutaraldéhyde : Les billes de verre sont traitées avec une solution de
glutaraldéhyde à 2,5 % pour former des ponts de liaison entre les groupes amine de la PEI
et la trypsine. La concentration optimale de glutaraldéhyde varie en fonction de la taille et
du type de la bille de verre utilisée (Kim et Lee, 2001).
 Liaison de la trypsine : La trypsine est ajoutée à la solution de billes de verre traitée avec le
glutaraldéhyde et incubée pendant une période de temps déterminée pour permettre la
formation de liaisons covalentes entre les groupes amine de la PEI et la trypsine. La quantité
34
de trypsine à ajouter dépend du volume de la solution de billes de verre et de la concentration
de trypsine (Li et al., 2011).
 Lavage des billes de verre : Les billes de verre sont lavées avec une solution tampon pour
éliminer les résidus de glutaraldéhyde et de trypsine non liée. Ce processus est répété
plusieurs fois pour éliminer toutes les impuretés potentielles (Li et al., 2011).
 Stockage et utilisation : Les billes de verre immobilisées avec de la trypsine peuvent être
stockées à des températures appropriées et utilisées dans diverses réactions enzymatiques.
Les billes de verre peuvent être réutilisées plusieurs fois pour la digestion des protéines, ce
qui augmente l'efficacité de l'immobilisation de la trypsine (Kim et Lee.,2001 ; Li et al.,
2011).
3.5.2. Immobilisation sur les billes de verre via DITC :
L'immobilisation de la trypsine sur les billes de verre peut être réalisée à l'aide du DITC
(N,N'-ditio-carbamoyl-2-iodo-salicyle) (Karami et al.,2017). Le DITC est utilisé pour
introduire des groupes thiocarbamoyl sur les billes de verre, qui peuvent ensuite réagir avec les
groupes amine de la trypsine, formant ainsi une liaison covalente stable entre la trypsine et les
billes de verre (Lu Y et al., 2009).
Le processus d'immobilisation de la trypsine sur les billes de verre via le DITC peut
être divisé en plusieurs étapes. Tout d'abord, les billes de verre sont traitées avec du DITC pour
introduire les groupes thiocarbamoyl sur leur surface. Ensuite, la trypsine est ajoutée aux billes
de verre fonctionnalisées, et les groupes amine de la trypsine réagissent avec les groupes
thiocarbamoyl des billes de verre pour former une liaison covalente stable (Yu et al., 2011).
Le processus d'immobilisation peut être optimisé en ajustant les conditions de réaction,

telles que la concentration de DITC, la durée de la réaction, la température, le pH, etc. Des
études ont montré que des conditions optimales peuvent augmenter l'efficacité d'immobilisation
et améliorer la stabilité de l'enzyme immobilisée (Yu et al., 2011).
L'immobilisation de la trypsine sur les billes de verre via le DITC présente plusieurs
avantages par rapport à l'immobilisation sur d'autres supports. Les billes de verre ont une grande
surface spécifique et une bonne stabilité mécanique, ce qui permet une forte densité
d'immobilisation de l'enzyme et une longue durée de vie de l'immobilisation (Cui et al., 2011).
De plus, la trypsine immobilisée sur les billes de verre via le DITC peut être facilement
récupérée et réutilisée, ce qui permet une économie de coûts et une amélioration de l'efficacité
du processus (Li et al., 2004).
3.5.3. Immobilisation sur les billes de verre avec le carbodiimide
35
L'immobilisation de la trypsine sur les billes de verre peut être réalisée via la méthode
du carbodiimide. Cette méthode implique l'utilisation d'un agent de couplage pour former une
liaison covalente entre la trypsine et les billes de verre (Kohn et al., 2011). Les étapes de
l'immobilisation sont :
-Activation des billes de verre : Les billes de verre sont d'abord activées en les incubant dans
une solution de carbodiimide, comme le N-(3-diméthylaminopropyl) -N'-éthylcarbodiimide
(EDC), pendant une période de temps déterminée. L'activation des billes de verre permet de
créer des sites réactifs sur leur surface (Kohn et al., 2011).
-Préparation de la solution de trypsine : La trypsine est préparée sous forme de solution dans
un tampon approprié, tel que le tampon phosphate salin (PBS) (Hwang et al., 2013).
-Couplage de la trypsine aux billes de verre : La solution de trypsine est ajoutée aux billes de
verre activées et incubée pendant une période de temps déterminée. Pendant cette période, la
trypsine se lie covalentement aux sites réactifs sur les billes de verre via l'agent de couplage
EDC (Hwang et al., 2013).
-Blocage des sites réactifs restants : Les sites réactifs restants sur les billes de verre sont bloqués
avec une solution de bloqueur, comme la solution de bovin sérique albumine (BSA), pour éviter
la liaison non spécifique de protéines ultérieures (Hwang et al., 2013 ; Ouyang et al., 2014).
-Lavage des billes de verre : Les billes de verre sont lavées plusieurs fois avec un tampon
approprié pour éliminer les résidus non liés de trypsine et d'autres réactifs (Ouyang et al.,
2014).
-Stockage des billes de verre : Les billes de verre immobilisées sont stockées dans une solution
tampon appropriée, telle que le PBS, à une température appropriée jusqu'à leur utilisation
ultérieure (Ouyang et al., 2014).
3.6. Étude de la variation du pH sur l’activité de l’enzyme immobilisée :
La trypsine est une enzyme dont l'activité est affectée par plusieurs facteurs, notamment
la concentration de l'enzyme, la température et le pH. Afin d'étudier l'impact de la variation du
pH sur l'activité de la trypsine immobilisée, il est possible de mesurer son activité enzymatique
à différents pH (Hussain et Ahmad, 2018), vu que la variation du pH peut avoir un effet
particulièrement important sur l'activité enzymatique de la trypsine immobilisée (Roberts,
1975). Selon plusieurs études, la trypsine a une activité optimale dans des conditions de pH
alcalines, qui se situent généralement entre 7,5 et 9 (Roberts, 1975). En dehors de cette plage
de pH, son activité enzymatique diminue rapidement. Si le pH descend en dessous de cette
36
plage, la trypsine devient inactive, et elle se dénature complètement à un pH de 2 (Khan et
Khan, 2016).
Le pH influence l'activité enzymatique de la trypsine en affectant sa structure et sa

charge électrique. À un pH bas, la trypsine est protonée et les charges électriques sur les résidus
d'acides aminés clés sont modifiées, ce qui affecte la conformation de l'enzyme et réduit son
activité. À un pH élevé, la trypsine est déprotonée et adopte une conformation plus ouverte et
plus active (Pan et Wu, 2019).
Choi et al (2015) ont étudié l'effet de différents pH (3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, et 10) sur l'activité
et la stabilité de l'enzyme immobilisée trypsine dans des solvants organiques. Les résultats ont
montré que l'activité maximale a été atteinte à pH 7 et que l'enzyme immobilisée était plus
stable dans des solvants organiques à pH acide (3-5) (Choi et al., 2015).
Une autre étude de Mousavi et al (2019) a testé l'effet de différents pH (4, 7, et 10) et de
températures (30, 40, et 50°C) sur l'activité de la trypsine immobilisée sur des nanoparticules
magnétiques fonctionnalisées. Les résultats ont montré que l'activité maximale a été atteinte à
pH 7 et une température de 40°C (Mousavi et al., 2019).
Cependant, il est important de noter que l'impact du pH sur l'activité enzymatique de la

trypsine peut dépendre des conditions spécifiques de l'expérience, telles que la concentration
en substrat et la présence de cofacteurs. Par conséquent, l'optimisation du pH pour l'activité
enzymatique de la trypsine doit être effectuée pour chaque application spécifique (Roberts,
1975 ; Pan et Wu., 2019).
3.7. Effet de l’immobilisation sur l’activité enzymatique
L'activité enzymatique de la trypsine peut être significativement altérée par son

immobilisation. Cette enzyme protéolytique est impliquée dans l'hydrolyse des liaisons
peptidiques des protéines et trouve des applications dans divers domaines industriels tels que la
production d'acides aminés et de peptides, la préparation de protéines purifiées et la digestion
des protéines dans les aliments. Toutefois, son utilisation en tant qu'enzyme libre peut présenter
certaines limitations en raison de sa faible stabilité et de sa dégradation facile (Cao, 2003).
L'immobilisation de la trypsine peut avoir des avantages tels que l'amélioration de sa

stabilité et l'augmentation de sa durée de vie, en plus d'améliorer son rendement et son efficacité
dans les applications industrielles. Les méthodes d'immobilisation couramment utilisées pour
la trypsine comprennent l'immobilisation sur support solide, l'immobilisation en gel et
l'immobilisation en phase liquide (Li, 2017).
37
L'immobilisation de la trypsine peut impacter ses propriétés catalytiques, notamment
son activité enzymatique. Des études ont mis en évidence que l'activité enzymatique de la
trypsine immobilisée peut différer de celle de l'enzyme libre en raison de modifications de sa
conformation et de son environnement micro-environnemental (Li et Wang.,2016).
Malgré les effets potentiels sur l'activité enzymatique de la trypsine immobilisée, des études
ont montré que cette dernière peut également être améliorée en utilisant des supports adaptés et
des méthodes d'immobilisation efficaces (Li et Wang, 2016).
En somme, l'immobilisation de la trypsine peut avoir des conséquences significatives

sur son activité enzymatique, mais elle peut également améliorer sa stabilité et son rendement
dans les applications industrielles. Cependant, pour optimiser les méthodes d'immobilisation de
la trypsine pour des applications spécifiques, des études complémentaires sont nécessaires pour
comprendre les mécanismes sous-jacents de ces effets (Guo et al., 2019).
38
Conclusion générale
Conclusion générale
En conclusion, l'immobilisation enzymatique est une technique importante pour

améliorer la stabilité, l'efficacité et la durée de vie des enzymes dans les applications
industrielles. Toutefois, il est important de choisir une méthode d'immobilisation et un support
adapté en fonction de l'enzyme et de l'application spécifiques. Les effets de l'immobilisation sur
l'activité enzymatique peuvent varier et ont été étudiés en détail pour plusieurs enzymes, y
compris la trypsine. Des études ont montré que l'activité enzymatique peut être altérée en raison
de changements de conformation et de microenvironnement, mais des améliorations ont
également été observées en utilisant des supports adaptés et des méthodes d'immobilisation
efficaces (Amaral et al., 2017).
Parmi les supports les plus couramment utilisés figurent les supports solides, les gels et
les phases liquides. Des études supplémentaires sont nécessaires pour comprendre les
mécanismes sous-jacents de ces effets et pour optimiser les méthodes d'immobilisation de
manière à maximiser l'activité enzymatique pour des applications spécifiques (Zanetti-Ramos
et al., 2015).
Les différentes techniques d'immobilisation de la trypsine comprennent

l'immobilisation sur un support solide, l'immobilisation dans un gel et l'immobilisation en phase
liquide. Chacune de ces méthodes présente des avantages et des inconvénients en termes de
coût, de stabilité, d'efficacité et de facilité d'utilisation. D'autres approches, comme
l'encapsulation des enzymes dans des nanoparticules biocompatibles, peuvent également être
utilisées pour réduire leur toxicité potentielle (Singh et al., 2014).
Les recherches futures devraient se concentrer sur l'optimisation des méthodes

d'immobilisation pour des applications spécifiques, ainsi que sur l'amélioration de la
compréhension des mécanismes sous-jacents des effets de l'immobilisation sur l'activité
enzymatique. Les avancées dans la conception et la synthèse de supports innovants pourraient
également conduire à des améliorations significatives de la performance enzymatique (Torres
et al., 2019).
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‫الــجمهورية الــجزائرية الــديمقراطية الــشعبية‬

République Algérienne Démocratique et Populaire

Immobilisation enzymatique : une étude

ARIBI Hadjer & ROUABEH Hanan & ZAIDI Ikram

: Soutenu le24 /06/2023, Devant le Jury

Nom & Prénom Grade Affiliation / institution

Président : Mme. MEZITI Asma MCB Université de Bordj Bou Arreridj

Encadrant : Mme. BOUTANA Wissem MAA Université de Bordj Bou Arreridj

Examinateur : Mme. HIHAT Soraya MAA Université de Bordj Bou Arreridj

Année Universitaire 2022/2023

A ma très chère mère

A mon très cher père

Mes sœurs et mes collèges de travail : hadjer et hanan.

A ma mère, pour son amour. Ses encouragements et ses sacrifies

A mes grands-parents et à ma tante, que Dieu ait leur âme.

A mes frères Akram et Adel qui m'ont apporté leur soutien.

de cette période. BOUTANA WISSEM.

Vous êtes ma source d'inspiration et de motivation, et je suis reconnaissant(e) pour chaque

moment passé ensemble. Merci d'être là pour moi et de m'aimer inconditionnellement.

infiniment pour votre soutien et votre encouragement.

À mes chers binômes,

Liste des abréviations

CHAPITRE I : GENERALITES SUR LES ENZYMES

1.1. Historique des enzymes ……………………………………………………. 3

CHAPITRE II : LES ENZYMES IMMOBILISEES

2.1. Historique des enzymes immobilisées ………………………………… 10

2.2. Définition ……………………………………………………………… 11

2.4.1. Méthodes chimiques …………………………………………………… 14

2.4.1.3 Immobilisation par liaison ionique ……………………………………… 18

2.4.2.2 Immobilisation par inclusion …………………………………………… 23

2.7.1 Propriétés des enzymes immobilisées physiquement …………………… 27

2.8. Effet de l’immobilisation de l’enzyme sur leur activité ………………… 28

2.10.1 Les supports organiques ………………………………………………… 30

CHAPITRE III : EXEMPLE D’ENZYME IMMOBILISEE (Trypsine)

3.1. Généralité sur la trypsine ………………………………………………… 32

3.2. L’importance de trypsine ………………………………………………… 33

3.3. L’activité catalytique de l’enzyme libre ………………………………… 33

3.4. Effet du pH sur l’activité enzymatique de trypsine ……………………… 34

3.5. Les Techniques d’immobilisation de la trypsine …………………………… 35

3.5.1 Immobilisation de la trypsine sur les billes de verre avec le 35

3.5.3 Immobilisation de la trypsine sur les billes de verre via le carbodiimide 37

3.6. Étude de la variation du pH sur l’activité de l’enzyme immobilisée ……… 38

3.7. Effet de l’immobilisation sur l’activité enzymatique de trypsine ………… 39

Conclusion générale ………………………………………………………………… 40

ACS: American Chemical Society.

Figure 1 : Présentation des différentes structures de l’enzyme ………………………… 4

Liste Des Tableaux

Tableau I : Différentes classes d’enzyme et leurs réactions ……………………………... 7

Tableau II : Les méthodes d’immobilisation des enzymes (inconvénients et avantages) ... 26

Mots-clés : enzymes, immobilisation, supports, encapsulation, trypsine.

Keywords : enzyme, immobilization, supports, encapsulation, trypsin.

‫الكلمات المفتاحية‪ :‬إنزيمات‪ ،‬تثبيت‪ ،‬دعائم‪ ،‬تغليف‪ ،‬تربسين‪.‬‬

L’unité fonctionnelle en biologie est la cellule. Chaque cellule animale, végétale ou

Au niveau industriel, les avantages de l’utilisation des enzymes sont principalement

L’amélioration de la stabilité enzymatique, considérée comme un facteur majeur dans

1.1 Historique sur les enzymes

1. Structure primaire : C'est la séquence d'acides aminés qui composent la chaîne

Figure 1 : Présentation des différentes structures de l’enzyme (Kidd et al., 2001).

1.5 Classification des enzymes