Université Mohamed khider de Biskra

Faculté des sciences exactes et sciences de la nature et de la vie

Département des sciences de la nature et de la vie

MÉMOIRE DE MASTER
Domaine : Sciences de la nature et de la vie
Filière : Sciences biologiques
Spécialité : Microbiologie appliquée
Réf. : ………………………………………………

Présenté et soutenu par :

Rabia Rezgui et Dalal Makhloufi
Le : mercredi ;;; JUIN 2022

Etude des activités antibactérienne

nne et
antifongique des l’huiles essentielles
d’Artemisia
Artemisia Herba Alba

Jury :

Mme Nefoussi Fatima MAA Université Biskra Rapporteur

Mme Gamez Samir MAA Université Biskra Président

Mme Djouamaa Manel MAA Université Biskra Examinateur

Année universitaire : 2021/2022

Remerciements

Remerciements

Avant tout nous remercions Allah le tout puissant, de nous

avoir guidé tout au long de nos années d'études et de nous
avoir donné la volonté, la patience et le courage pour achever
ce travail.
Nous tenons à exprimer nos remerciements les plus
cordiaux et notre vive reconnaissance à notre encadreur, le
Professeur Neffoussi Fatima qui a bien voulu accepter de
diriger ce travail, pour son encouragement, ses conseils
précieux, sa disponibilité, ses suggestions pertinentes, ses
critiques constructives et pour sa patience tout au long de ce
projet et sans lesquels, ce travail n'aurait pu aboutir.
Nous remercions les membres du jury, d'avoir accepté
d’évaluer ce mémoire.
 Dédicace

Dédicace

Je présente cet humble travail, qui a été fait, si dieu le veut, à tous:

A la source de tendresse, ma chère mère "Fatma", à qui je ne suffirai pas à son

droit, peu importe combien j’exprime mon amour.

Au compagnon de route, au bon cœur, mon cher père "Djilani"qui n’a cessé de
me pousser en avant, et peu importe la difficulté des circonstances, il s’en fiche.

A celui qui m’a donné la force et la détermination, pour continuer le chemin, et

la raison de continuer mes études était mon cher mari "Samir".

A mes sœurs "Khawla", "Sabah", "Mimi", "Wisal", "Layane"etkatkota "Alaa"

qui dieu les protège.

Aux fils de mon foie, que dieu ait pitié d’eux et qu’il me les dédommage, si dieu
le veut.

A tous les oncles, tantes, oncles et tantes dirigés par mon oncle "Saleh" et
"Djomai" et ma tante "Djamila", et mon oncle "Mohammed" qui a été mon
modèle dans cette vie.

A mon grand-père "Amer" et ma grand-mère "Massouda", que dieu les protège

et prolonge leur vie.

A mon grand-père "Djomai" et ma grand-mère "Maraim" que dieu leur fasse

miséricorde et les mette en paix.
A l’âme de ma grand-mère, ma mère, "Lala Fatma" la pure, que dieu ait pitié
d’elle.

A mon beau-frère "Saad", que dieu lui fasse miséricorde et qu’il repose en paix.

A tous les membres de la famille éducative en Algérie.

Rabia
 Dédicace

Dédicace

Nous dédions notre travail à notre parent, qu’ils

Trouvent ici toute notre gratitude pour leur soutien
Tout au long de nos études.
A nos frères et nos sœurs.
A tous nos oncles et nos tantes
A tous notre cousins et cousines
A notre amies

Dalal
 Table des matières

Table des matières

Liste des Figures ...................................................................................................................... II

Liste des Abréviations ............................................................................................................ III

Introduction générale............................................................................................................... 1

Partie I: Synthèse bibliographique

Chapitre 1: Généralité sur L’Atimisia herba alba

1.1. L’historique des plates médicinales en Algérie .............................................................. 3

1.1.2. Définition : ...................................................................................................................... 3

1.2. Généralités sur Artemesia herba-alba .............................................................................. 3

1.2.1Taxonomie .. ...................................................................................................................... 3

1.2.2. Noms vernaculaires : .……….. ..................................................................................... 4

1.2.3.Systématique … ............................................................................................................. 4

1.2.4. Description botanique …………. .................................................................................. 5

1.2.5. Partie souterraine . ........................................................................................................ 5

1.2.6. Partie aérienne …. ........................................................................................................ 5

1.2.6.1. Tige ............................................................................................................................... 5

1.2.6.2. Feuilles et les rameaux .............................................................................................. 5

Chapitre 2: Métabolites secondaire

2.1. Définition ............................................................................................................................ 6

2.2. Polyphénols ........................................................................................................................ 6

2.2.1. Flavonoïdes ..................................................................................................................... 6

2.2.2. Tannins :.......................................................................................................................... 6

2.3. Alcaloïdes ........................................................................................................................... 7

2.4.Terpénoïdes ......................................................................................................................... 7

2.4.1. Huiles essentielles : ......................................................................................................... 7

2.4.1.1. Composition chimique ................................................................................................ 8

a. Monoterpènes ....................................................................................................................... 8
 Table des matières

b. Sesquiterpènes ..................................................................................................................... 9

2.5. Activité antibactérienne et antifongique .................................................................. 9

Partie II théorique

Matériel et méthode

3.2. Extraction ......................................................................................................................... 12

3.3. Détermination du rendement ......................................................................................... 12

3.5. Etude de l’activité antibactérienne ................................................................................ 13

3.5.1. Souches bactériennes .................................................................................................... 13

3.5.2. Méthode de diffusion par disque ................................................................................. 14

3.5.3. Détermination de la CMI et de la CMB ..................................................................... 14

3.6. Etude de l’activité antifongique : ................................................................................... 15

3.6.1. Méthode de diffusion par disque ................................................................................ 15

3.6.2. Détermination de la CMI et de la CMF...................................................................... 16

Les résultats ...................................................................................... Erreur ! Signet non défini.

Tableau 1: Composition chimique des huiles essentielles ................ Erreur ! Signet non défini.

Tableau 2: Diamètre des zones d’inhibition............................................................................ 21

Tableau 3 : Concentrations minimales inhibitrices (CMI) et bactéricides (CMB).................. 23

Tableau 4: Diamètres des zones d’inhibition des souches fongiques ..................................... 23

Tableau 5: Concentrations minimales inhibitrices (CMI) et fongicides (CMF) ..................... 24

Discussion

4. 1.Rendement ....................................................................................................................... 16

4.2. Composition chimique .................................................................................................... 17

4.3. Activité antibactérienne : ................................................................................................ 21

4.4. Activité antifongique ....................................................................................................... 24

Conclusion ............................................................................................................................... 26

Bibliographie........................................................................................................................... 28

Résumé
 Liste des Tableaux

Liste des Tableaux

Tableau 1: Composition chimique des huiles essentielles………………………..………….17
Tableau 2 : Diamètre des zones d’inhibition………………………………………………...21
Tableau 3 : Concentrations minimales inhibitrices (CMI) et bactéricides (CMB)……......…23
Tableau 4: Diamètres des zones d’inhibition des souches fongiques………..……......……..24
Tableau 5 : Concertation minimale inhibitrices(CMI) et fongicides(CMF)……..……..........24

I
 Liste des Figures

Liste des Figures

Figure 1 :La plante d’Artemesia herba alba (Dupont ,1990)…………………………… ……..…..….4

Figure 2 : Morphologie générale de plante d’Artemisia herba alba (POTTER,1981) Wikipédia……..5

Figure 3: Structure d’un flavonoïde (Badaoui et al., 2013)…………………..……………...…………6

Figure 4 : Structure des différents terpènes (Kahlouche, 2013)……………………..……...………….7

Figure 5 : acyclique: myrcène (Mouchem Metahri, 2015)……………………...………..…....……….8

Figure 6 : monocyclique: thymol (Mouchem Metahri, 2015)……………………….…...…..………..8

Figure 7 : Zone d’échantillonnage(Bertella ,2019)……………………..………...………….11

Figure 8 :Préparation du matériel végétal(Bertella ,2019)………………………..……...…..12

II
 Liste des Abréviations

Liste des Abréviations

AHA: Artemisia Halba-albaAsso
ATCC: American Type Culture Collection
C : Carbone
CMB: Concentration Minimale Bactéricide
CMF: Concentration Minimale Fongicide
CMI: Concentration Minimale Inhibitrice
CPG: Chromatographie en Phase Gazeuse
DMSO: Diméthylsulfoxide
EO: Essential Oil
FID: Flame Ionization Detector
GC/MS : Chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse
GC: Chromatographie gazeuse
HE: Huile essentielle
HEs : Huiles Essentielles
IC50:Concentration inhibitrice50
IndR: Indice de rétention
m/z: Rapport masse/charge électronique
P: poids
PSA: Potato succhrose Agar
PSB:PotatoSuchroseBroth
SM :Spectrométriede Masse
UFC: Unité Formant Colonie
ug: microgramme
ul:microlitére
v/v:volume par volume
α:alpha
β:béta
γ: gamma
δ: delta

III
 Introduction générale

Introduction générale
Depuis la préhistoire, l’être humain recherche dans son environnement (plantes,
animaux, pierres) de quoi soulager ses maux et traiter ses blessures. La médecine moderne
occidentale rejeté la plupart de ces recours pour développer des médicaments à base de
produits chimiques et une technique de soins sophistiquée. Elle continue cependant d’utiliser
certains remèdes à base de plantes médicinales. Une tendance récente conduit même à
rechercher dans les plantes de nouveaux produits de substitution pour certaines maladies.
Selon l'organisation mondiale de la santé (OMS, 2002), près de 80 % des populations
dépendent de la médecine traditionnelle pour des soins de santé primaire. Des avantages
économiques considérables dans le développement de cette médecine et dans l'utilisation des
plantes médicinales pour le traitement des diverses maladies ont été constatés (Muthu et al.,
2006).

Parmi les diverses activités biologiques de ceux-ci, l’effet antibactérien a beaucoup

attiréles scientifiques, vue leur pouvoir contre certains micro-organismes pathogènes.
Pour cette raison on a choisi une plantes médicinales aromatiques très connue dans notre
région appelée Artemisia Herba Alba, communément Chih. Recommandé dans les troubles
gastriques, les ballonnements intestinaux, d'aérophagie et de constipation, soit essentiellement
en cas des maladies du tractus digestif.

L’objectif de notre étude est d’analyser l’artiste de Bertilla (2019) «Etude de l’activité
antimicrobienne et antioxydant des huiles essentielles d’Artemisia herba-alba,» université
Oran et comparez le avec d’autre articles pour répondre aux préoccupions suivantes :

Le programme d’action pour la réalisation de ce travail doit répondre aux

préoccupations suivantes:
Quel sera le rendement en huile essentielle Artemisia Herba Alba des conditions
spécifiques?
Est-ce que l’huile essentielle a une activité antibactérienne et antifungique et à quel
pourcentage se manifeste cette activité?

Ce présent travail de recherche s’articule sur trois chapitres: D’abord le chapitre I est consacré
à une revue, ensuite le chapitre II détaille le matériel utilisé et les méthodes d’étude des
différents paramètres abordés.

1
 Introduction générale

Le chapitre III donne tous les résultats obtenus après étude de déférents articles sur
l’activité antimicrobienne, l’activité antifongique et la composition chimique, ainsi que leurs
interprétations suivis d’une discussion, d’une conclusion et des perspectives.

2
 Partie I
Synthèse bibliographique
 Chapitre 1
Généralité sur
L’Atimisia herba alba
 Chapitre 1: Généralité sur L’Atimisia herba alba

1.1. L’historique des plates médicinales en Algérie

Chaque culture a une histoire d’utilisation des plantes médicinales pour guérir les
maladies. En Algérie, l’usage de plantes médicinales est une tradition de mille ans
(Laghouiter, 2011).
Les premiers écrits sur les plantes médicinales ont été faits au ΙΧème siècle par Ishâ-
Ben-Amranet Abdallah-Ben-Lounès né à Oran, et qui décrit l’usage de beaucoup de plantes
médicinales, mais la plus grande production de livres a été réalisée au dix-septième et au dix-
huitième siècle. (Mouchem Metahri ,2015).

1.1.2. Définition
La définition d'une plante médicinale est très simple. En fait il s'agit d'une plante qui est
utilisée pour prévenir, soigner ou soulager divers maux, Elle possède des activités
pharmacologiques, pouvant conduire à des emplois thérapeutiques.
(Khireddine,2012;Aribi,2012).
1.1.3. Intérêt de l'étude des plantes médicinales
La plupart des espèces végétales contiennent des substances qui peuvent agir, à un
niveau ou un autre, sur l'organisme humain et animal. (Iserin, 2001).

Les plantes médicinales sont donc importantes pour la recherche pharmaceutique et

l'élaboration des médicaments, directement comme agents thérapeutiques, mais aussi comme
matière première pour la synthèse des médicaments ou comme modèle pour les composés
pharmaceutique actifs. (Decaux, 2002; Bruneton, 2009)

1.2. Généralités sur Artemesia herba-alba

L'Armoise blanche a été décrite par l'historien grec Xénophon au début du IV siècle,
dans les steppes de la Mésopotamie. C'est une plante essentiellement fourragère, très
appréciée par le bétail, elle présente une odeur caractéristique d'huile de thymolet un goût
amer d'où son caractère astringent (Joannes, 2001).
L'Artémisia est le nom de guerre des armoises, il provient de celui de la déesse grecque
de la chasse Artémis, la diane des romains, patronne des vierges à cause des bienfaits de cette
herbe.Herba alba signifie herbe blanche. (Zeguerroual.; 2013)

1.2.1Taxonomie
Artemisia herba alba est décrite pour la première fois par ASSO en 1779. Ce dernier en
fait une seule et unique espèce alors que Lamarck (cité par Willcomm et Lance, 1981 in

3
 Chapitre 1: Généralité sur L’Atimisia
’Atimisia herba alba

Pourrat 1974) reconnaît deux espèces A. aragonensis(blanc

(blanc velu) et A. Valentina (vert
glabre). (Aiddod,1988;Houamel,
Houamel, 2018).

1.2.2. Noms vernaculaires

Armoise blanche, thym des steppes, absinthe des steppes (français) nommée chih
(arabe) en Afrique du nord et au Moyen-Orient.
Moyen Worm wood (anglais) fait allusion à
son pouvoir vermifuge bénéfique pour l'homme et le bétail (Houamel;
Houamel; 2018)
2018).

Figure1. Plante d’Artemesia

d herba alba (Dupont ,1990)

1.2.3.Systématique
Le genre Artemisia comporte plus de 200 espèces .L‘Artemisia
.L‘Artemisia herba
herba-alba fait partie de
la famille des composées provenant de l‘embranchement de phanérogames. C‘
C‘est une famille
qui compte plus de 1000 genres et 1500 espèces.
espèces
Selon Quezel et Santa(1963), l‘armoise blanche est classée comme suit :

Embranchement : Phanérogames
Sous embranchement : Angiospermes
Classe : Dicotylédones
Sous classe : Gamopétales
Ordre : Astérales
Familles : Composées
Sous famille : Tubilifoidées
Tribu : Antimidées
Genre : Artemisia
Espèce : Artemisia herba-alba
alba Asso

4
 Chapitre 1: Généralité sur L’Atimisia
’Atimisia herba alba

1.2.4. Description botanique

L‘Artemisia herba-alba
alba est une plante herbacée à tiges ligneuses et ramifiées, de 30 à50
cm, très feuillées avec une souche épaisse.
épaisse Les feuilles sont petites, sessiles, pubescentes et à
aspect argenté (Pottier,1981)
1981) .

Morphologie générale de plante d’Artemesia

Figure 2:Morphologie d’ herba alba (POTTER ,1981)

1.2.5. Partie souterraine

L‘armoise blanche présente une racine principale, épaisse et ligneuse, bien distincte
des racines secondaires, qui s‘enfoncent dans le sol comme un pivot (Pourrat, 1974).

1.2.6. Partie aérienne

Elle est présentée par la partie ligneuse, la tige, les feuilles et les fleurs.

1.2.6.1. Tige
L‘armoise présente une tige principale très épaisse, rougeâtre, très ramifiée qui se
prolonge par de nombreuses tiges de plus en plus fines ; chaque tige se distingue par une
taille allant de 30 à 50 cm (Bendahou, 1991).
1.2.6.2. Feuilles et les rameaux
Les feuilles sont courtes , blanches, laineuses, argentées, elles sont très petites et
entières, ce qui réduit considérablement la surface transpirante et permet ainsi à la plante
de résister à la sécheresse (Pourrat, 1974).
1.2.6.3. Fleur
La floraison s‘effectue en automne à partir du mois de septembre. La fleur est
formée d‘inflorescences en capitules. Ces derniers sont très petits, étroits (1 à 1.5 mm)
ovoïdes à involucres scarieux ne contenant que 3 à 8 fleurs. (Ozenda, 1985).
5
Chapitre 2: Métabolites
secondaires
 Chapitre 2: Métabolites secondaires

2.1. Définition

Les métabolites secondaires sont des molécules organiques complexes synthétisées par
les plantes autotrophe, qui sont divisés principalement en trois familles : les polyphénols,les
alcaloïdes, les terpènes (Charif et Louizini, 2016).

2.2. Polyphénols

Les polyphénols constituent une famille de molécules très largement répandues dans le
règne végétal. On les trouve dans les plantes, dès les racines jusqu’aux fruits. Les polyphénols
sont des métabolites secondaires, ce qui signifie qu’ils n’exercent pas des fonctions directes
au niveau des activités fondamentales de l’organisme végétal, comme la croissance et la
production.On peut distinguer les différentes classes des polyphénols.(Badaouiet etal., 2013).

2.2.1. Flavonoïdes

Les flavonoïdes sont des métabolites secondaires des végétaux. Ils constituent un des
plus vastes groupes de polyphénols naturels. Ce sont des substances colorées et sont
responsables de la coloration de nombreux fruits, légumes, fleurs,…

Biochimiquement, les flavonoïdes appartiennent à la famille des benzopyrones, la sous-classe

des gamma –benzopyrones (figure3).

Les flavonoïdes sont présents dans différentes parties des végétaux supérieurs, selon le
type de l’espèce ils peuvent se trouver dans : les racines, les tiges, les feuilles, les fleurs, le
pollen, les fruits, les graines, le bois….(Badaoui et al., 2013).

Figure 3 : Structure d’un flavonoïde (Badaoui etal., 2013).

2.2.2. Tannins :
Les tannins sont un groupe des polyphénols à haut poids moléculaire. Les tannins sont
des molécules fortement hydroxylés et peuvent former des complexes insolubles lorsqu’ils

6
 Chapitre 2: Métabolites secondaires

sont associés aux glucides, aux protéines et aux enzymes digestives, réduisant ai
ainsi la
digestibilité des aliments. Ils peuvent être liés à la cellulose et aux nombreux éléments .
2.3. Alcaloïdes

Les alcaloïdes sont des composés azotés complexes, de nature basique, présentant
généralement de puissants effets physiologiques. Ce sont pour la plupart des poisons végétaux
très actifs, dotés d’une action spécifique.Les
spécifique Les alcaloïdes ont donné naissance à de nombreux
médicaments. (Zerrouak et Hadji, 2019)

2.4.Terpénoïdes

Les terpènes forment une classe d'hydrocarbures, produits par

par de nombreuses plantes, en
particulier les conifères. Ce sont des composants majeurs de la résine et de l'essence de
térébenthine produite à partir de résine.

Leur squelette de carbone est constitué d'unités isoprèniques reliées entre eux. C'est ce que
l'on appelle la règle de l'isoprène. Ces squelettes peuvent être arrangés de façon linéaire ou
bien former des cycles.

Deux de propriétés fondamentales de terpènes sont leurs caractères odoriférants

(géranium) et leurs sensibilités à la lumière. Un grand nombre d’entre eux possède des
propriétés antiseptiques (Kahlouche, 2013).

Figure 4: structure des différents terpènes (Kahlouche, 2013).

2.4.1. Huiles essentielles

Les huiles essentielles sont des substances odorantes concentrées, obtenues à partir de
plantes par entraînement à la vapeur d‘eau, hydrodistillation ou expression (pression à froid).
Le terme ―huile essentielleǁ a été inventé au 16ième siècle par le médec
médecin suisse Paras
7
 Chapitre 2: Métabolites secondaires

celsusvonHohenheim afin de désigner le composé actif d‘un remède naturel. Il existe

aujourd‘hui approximativement 3000 huiles essentielles, dont environ 300 sont réellement
commercialisées, destinées principalement à l‘industrie des arômes et des parfums.

Les huiles essentielles contenues dans les herbes aromatiques sont responsables des
différentes senteurs que dégagent les plantes. Elles sont très utilisées dans l‘industrie des
cosmétiques, de la parfumerie et aussi de l‘aromathérapie. Les huiles essentielles vont servir
de signaux chimiques permettant à la plante de contrôler ou réguler son environnement (rôle
écologique): attraction des insectes pollinisateurs. Ces huiles sont stockées dans des structures
cellulaire spécialisées (cellules à huile essentielle, poils sécréteurs (comme dans la menthe),
canaux sécréteurs) et ont vraisemblablement un rôle défensif : protection du bois contre les
insectes et les champignons, action répulsive contre les animaux herbivores. (Mouchem
Metahri,2015).

2.4.1.1. Composition chimique

La composition chimique des huiles essentielles est souvent caractérisée par deux ou
trois composés majeurs qui constituent de 20 à 70 %, alors que les autres composants sont
présents à l’état de trace et elle peut différer d’une partie de la plante à une autre. Le groupe
de terpène des huiles essentielles est souvent représenté par les monoterpènes, sesquiterpènes
et même les diterpènes (Dorman et Deans, 2000), ainsi que leurs dérivés oxygénés tels que les
alcools, aldéhydes, esters, phénols et cétones.. Ces composés sont responsables de l’odeur et
des activités biologiques des huiles essentielles (Bertella, 2019).
a. Monoterpènes
Les monoterpènes sont les plus simples constituants des terpènes dont la majorité est
rencontrée dans les huiles essentielles (90%).
Ils comportent deux unités isoprène (C5H8), selon le mode de couplage « tête-queue».
Ils peuvent être acycliques, monocycliques ou bicycliques. A ces terpènes se rattachent au
certain nombre de produits naturels à fonctions chimiques spéciales (Mouchem
Metahri,2015).

Figure 5 : acyclique : myrcène Figure 6 : monocyclique : thymol

8
 Chapitre 2: Métabolites secondaires

b. Sesquiterpènes
Ce sont des dérivés d'hydrocarbures en C15H22 (assemblage de trois unités isoprènes).
Il s'agit de la classe la plus diversifiée des terpènes qui se divisent en plusieurs catégories
structurelles, acycliques, monocycliques, bicycliques, tricycliques, polycycliques.
Ils se trouvent sous forme d'hydrocarbures ou sous forme d'hydrocarbures oxygénés comme
les alcools, les cétones, les aldéhydes, les acides et les lactones dans la nature. (Mouchem
Metahri, 2015).
2.5. Activité antibactérienne et antifongique
Les plantes médicinales sont toujours une source de remèdes sous forme de préparation
traditionnelles ou principes actifs purs (Farnworth et al,. 1986).
Le criblage biologique est une étape très importante dans l’étude de ces plantes ou
dans l’isolement et la caractérisation de leurs principes actifs. Il s’agit d’appliquer certains
tests biologique tels que : l’activité antibactérienne, l’activité antioxydant, l’activité
antifongique,...etc. (Henni M 2018).
L’activité antibactérienne des agents naturels, telles que les huiles végétales, ont été
reconnueet utilisée depuis des siècles, notamment dans la conservation des aliments
(Tajkarimiet al.,2010).
Selon la même référence, les agents naturels antimicrobiens sont utilisés dans les
aliments pour deux raisons principales:

 pour contrôler les processus d’altération naturelle (conservation des aliments).

 pour prévenir / contrôler la croissance des microorganismes, y compris les micro-
organismes pathogènes (sécurité alimentaire).
Mighri et al,. 2010 ont observés que tous les types d’huiles essentielles extraites de
la partie aérienne d’Artemisia herba alba, ont une importante activité antimicrobienne
vis-à-vis les souches testées. Une autre étude réalisée sur quatre populations de cette
espèce (Artemisia herba-alba), a montré que toutes les huiles ont également une
activité anti- bactérienne dans un intervalle de concentration de 1-2 mg / ml (Yashphe et al.,
1979).
D’après (Seddik et al,. 2010) les extraits de la partie aérienne de l’Artemisia
herba-alba présentent une activité antibactérienne très pauvre vis-à-vis des souches
testés, y compris l’Escherichia coli. En revanche, les composés phénoliques, en
particulier les acides phénoliques (acide gallique, l'acide caféique et l'acide tannique) ont
montre une activité inhibitrice contre le Staphylococcus aureus, mais pas contre les autres
bactéries (Kyeong et al, 2007;Benarab ,2021).
9
Partie II
Théorique
MATERIEL ET
METODES
 Chapitre 3 : Matériel et Méthodes

Toutes les manipulations ont été réalisées par BERTELLA (2019) Oran1dans
deux laboratoires de recherche, l’extraction de l’huiles essentielles, les
expérimentations de l’étude de l’activité antimicrobienne ont été conduites au sein
du Laboratoire de Microbiologie Appliquée (LMA), à l’université d’Oran 1.
L’analyse de la composition chimique des huiles essentielles par CPG-SM a été
effectuée dans le laboratoire de l’unité de recherche QOPNA, à l’université d’Aveiro
au Portugal.

3.1. Préparation du matériel végétale

La partie aérienne de plante: Artemisia herba-alba Asso , a été récoltée en pleine

floraison pendant la période d’Octobre-Novembre 2015 dans la région de Bouilef à Batna à
l’est de l’Algérie (Figure 7).
L’identification des espèces a été réalisée au sein du Laboratoire Ecologie (LE) par le
Professeur: Hadjadj-Aoul S., du Département de Biologie, à l’université d’Oran 1 Ahmed Ben
Bella et des spécimens ont été déposés dans l’herbier du même Département. Des codes
voucher ont été attribués pour A.herba-alba. Ces plantes sélectionnées ont été séchées à
l’ombre et à l’air libre pendant 20 jours, en suite ont broyé. Dans autre étude les parties
aériennes parts de A.herba-alba ont été collectées pendant la phase d’écoulement (juillet,
2008) et la phase végétative de la plante (octobre et novembre) dans différentes localités
d’Algérie (Benifouda; Bougaa; Boussaada et Boutaleb), caractérisées par des conditions
géographiques et climatiques diverses .Le matériel végétal a été séché dans l’obscurité ,à
température ambiante(Figure 8).(Bertella ,2019 ;Belhattab et al.,2012).

10
 Chapitre 3 : Matériel et Méthodes

Figure 7 : Zone d’échantillonnage(Bertella ,2019)

11
 Chapitre 3 : Matériel et Méthodes

Séchage

AHA

Extraction
Collecte Broyage

Figure 8 :Préparation du matériel végétal(Bertella ,2019)

3.2. Extraction
D échantillon de 200 g ont été soumis à l’hydrodistillation dans un appareil de type Clevenger
modifié pendant 3 h. L’huile essentielle a été récupérée par décantation et desséchée avec du
sulfate de sodium (Na2SO4), puis conservée dans des flacons opaques et hermétiques à 4°C
(Makhloufi et al. 2012 ; Bertella ,2019).

3.3. Détermination du rendement

Le rendement en huile essentielle est défini comme étant le rapport de la masse de
l’huile essentielle et la masse du matériel végétal utilisé pendant l’extraction, il est calculé
selon la formule suivante (Bertella ,2019 ; Mouchem Metahri ,2015).

RHE = MHE/MPS × 100

RHE : Rendement en huile essentielle (%)

MHE : Masse de l’huile essentielle obtenue (g)
MPS : Masse de la plante sèche traitée(g)

12
 Chapitre 3 : Matériel et Méthodes

3.4 .Analyse de la composition chimique par CPG-SM

Les composés volatils isolés ont été analysés par chromatographie en phase gazeuse
couplée à la spectrométrie de masse (CPG-SM) en utilisant un chromatographe Shimadzu
(GC/MS-QP2010) avec une colonne capillaire DB-5 en silice fondue (la même que celle
utilisée dans l'analyse CPG/FID (Bertella ,2019 ; Akrout et al ., 2010).

La température du four a été programmée à 50°C pendant 3 minutes, puis augmentée à

raison de 2°C/min pour atteindre 250°C, puis maintenue à ce même degré pendant 10
minutes. La température de l’injecteur était de 250°C alors que celle du détecteur était de
280°C (rapport de division : 1/100). L’Hélium (99,995% de pureté) était le gaz vecteur avec
un débit de 1,2mL/min. Les conditions du spectromètre de masse étaient d’une tension
d'ionisation de 70 eV et d’une température de la source d'ions de 150°C, tandis que les
spectres de masse par ionisation électronique ont été acquis dans la plage de masse 50-550
m/z (Bertella ,2019 ; Sami et al., 2010) .

À partir du chromatogramme des ions totaux, les pics ont été identifiés par comparaison
de leurs spectres de masse avec la bibliothèque de spectres de masse de l'équipement utilisé
dans notre expérimentation.

3.5. Etude de l’activité antibactérienne

3.5.1. Souches bactériennes

Les souches bactériennes choisies pour cette étude sont des bactéries pathogènes,
souvent responsable de maladies et infections nosocomiales dont plusieurs sont résistantes
aux antibiotiques, voir même multi-résistantes. Certaines de ces bactéries aussi peuvent être
impliquées dans la contamination et l’altération des denrées alimentaires.
L’activité antibactérienne a été étudiée contre 21 souches bactériennes Gram + et Gram -,
dont ; 6 souches ATCC : Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC
43300, Bacillus cereus ATCC 11778, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Escherichia
coli ATCC 25922 et Klebsiella pneumoniae ATCC 70603 .
Et 15 souches cliniques dont certaines sont résistantes aux antibiotiques ;3souches de
Staphylococcu saureus resistant à la Methicilline (SARM B1, SARM B2 et SARM B3), 5
souches productrices de bétalactamase à spectre étendu ; 2 Escherichia coli (ECB1 BLSE
ECB2 BLSE) , 2Klebsiella pneunomoniae (KPB1 BLSE et KPB2 BLSE) et Proteus mirabilis
(PMB1 BLSE),7souchesdebactériessensibles:Staphylococcus epidermidis (SEpiB1) ,
Staphylococcus haemolyticus (SH B1), 2 Acinetobacter baumannii (AB B1 et AB B2),Proteus

13
 Chapitre 3 : Matériel et Méthodes

mirabilis (PMB2), Salmonella enteritidis (SEntB1) et Klebsiella oxytoca (KOB1). Ces souches
nous ont été fournies par le service de bactériologie du laboratoire central , au centre
hospitalo-universitaire d’Oran (Bertella ,2019).

3.5.2. Méthode de diffusion par disque

L’activité antibactérienne a été étudiée par la technique de diffusion par disque.1 mL
d’une suspension (Ajustée a une densité bactérienne de 1.107 UFC/mL) a été étalé sur une
boite de pétri contenant la gélose Mueller-Hinton, puis l’excédent a été éliminé par aspiration.
Un disque de papier filtre (6 mm de diamètre) a été déposé aseptiquement au centre de la
boite, sur lequel 6 µL d’huile essentielle ont été ajoutés. Les boites ont été laissées pendant 15
min à température ambiante (un seul disc utilisé par boite), puis incubées à 37°C pendant 24h.
Les zones d’inhibition ont été mesurées en millimètre. La streptomycine (10 µg/disque) a été
utilisée comme témoin positif. Les expériences ont été conduites en triples et la moyenne a été
calculée (Bertella ,2019 ; Sbayou et al.,2014).
Selon le diamètre d’inhibition, les souches ont été classées en se basant sur leur
sensibilité aux huiles essentielles comme suit : résistante pour un diamètre inférieur à 8 mm,
moyennement sensible pour un diamètre compris entre 8-14 mm, sensible pour un diamètre
de 14 à 20 mm et hautement sensible pour un diamètre supérieur à 20 mm (Sfeir et al.,
2013 ;Bertella ,2019 ).

3.5.3. Détermination de la CMI et de la CMB

La concentration minimale inhibitrice (CMI) a été déterminée en diluant l’huile

essentielle a été diluée dans du diméthylsulfoxide (DMSO) à 40 % (v/v) et ajoutée au bouillon
Mueller-Hinton pour avoir une série de concentrations finales de 80, 40, 20, 10, 5, 2,5, 1,25 et
0,67 mg/mL. Un témoin négatif de DMSO et bouillon Mueller-Hinton a été préparé, la
concentration finale du DMSO ne doit pas excéder 1%. Ensuite, une culture jeune
(1.107UFC/mL) a été préparée dans de l’eau physiologique et une aliquote de 100 µL a été
ajoutée dans chaque tube. Après 24h d’incubation à 37°C, la CMI a été déduite à partir de la
première concentration présentant une absence de croissance bactérienne (Bertella
,2019 ;Sbayou et al., 2014).
Pour déterminer la concentration minimale bactéricide (CMB), un volume de 10 µl de
chaque tube n’ayant pas présenté de cultures bactériennes a été étalé sur gélose Mueller-

14
 Chapitre 3 : Matériel et Méthodes

Hinton selon la méthode décrite par Sfeir et al. (2013). La CMB représente la plus faible
concentration qui ne donne aucune croissance après 24h d’incubation à 37°C.
La CMI et CMB ont été exprimées en mg/mL et chaque expérience a été répétée trois fois
successivement.
Le rapport CMB/CMI a été utilisé pour classifier les substances antibactériennes en
fonction de leur activité bactéricide (CMB/CMI inférieur à 4) ou bactériostatique (CMB/CMI
supérieur à 4) (Sbayou et al., 2014 ;Jaber et al.,2021)

3.6. Etude de l’activité antifongique :

L’activité antifongique des huiles essentielles a été testée sur cinq souches de
moisissures : Aspergillus niger, Aspergillus fumigatus, Aspergillus terreus, Fusarium
oxysporum , Penicillium sp.(Bertella ,2019).

Le choix des souches fongiques était basé sur leurs implications dans la contamination,
l’altération des denrées alimentaires, de certains produits végétaux -lors du stockage- de
transport et de leur pathogénicité pour certaines espèces végétales ainsi que leur pouvoir
de production de mycotoxines.

Une partie des souches fongiques faisant l’objet de cette étude provient de la collection du
laboratoire de Microbiologie Appliquée (LMA), alors que d’autres nous ont été fournies
par le Laboratoire de Microbiologie et Sécurité Sanitaire des Aliments (LMSSA) de
l’université de Béchar (Bertella ,2019)

3.6.1. Méthode de diffusion par disque

L’activité antifongique des huiles essentielles a été étudiée par la technique de

diffusion sur disque, une suspension sporale de 1.106 spore/mL a été préparée et ajustée
convenablement. Un volume de 1 mL de cette préparation est ajouté au milieu de culture
à l’extrait de malt en surfusion (MEA) en suite bien homogénéisé. Ce milieu a été coulé
dans des boites de pétri et laissé pour solidification. Des disques de papier filtre (6 mm de
diamètre) ont été déposés au centre de chaque boite et imbibé d’huile essentielle à raison
de 8 µL/disque. Toutes les expériences ont été réalisées en triplicata, après incubation de
7 jours à 25°C ; la moyenne du diamètre de la zone d’inhibition autour du disque et
l’écart type ont été calculés pour chaque test (Bertella ,2019 ;Viljoen et al., 2003).

15
 Chapitre 3 : Matériel et Méthodes

3.6.2. Détermination de la CMI et de la CMF

La concentration minimale inhibitrice (CMI) a été déterminée par la méthode de dosage

par dilution en tube, une dilution en série de l'huile essentielle a été préparée dans du DMSO
(1% v/v) pour obtenir des concentrations finales de 2,5, 5, 10 et 20 μL/mL. Un volume de 1
mL de chaque concentration a été ajouté à des tubes contenant 1 mL de PSB et 1 mL d'une
suspension sporale de 1.106 spore/ml puis incubé à 25°C pendant 7 jours. Le test a été répété
trois fois. La valeur de la CMI a été estimée comme étant la plus faible concentration qui ne
présentait aucune croissance visible à l’œil nu par rapport au tube témoin (Bertella
,2019 ;Saxena et al. 2012).

Pour déterminer la concentration minimale fongicide (CMF), des fractions de (100 μL)
ont été prélevées en double à partir des tubes présentant une absence de croissance et
transférées dans des boîtes de Pétri (55 mm) contenant déjà le PSA comme milieu de culture.
Après incubation pendant 5 jours à 25°C, on déduit la CMF à partir des premières boites qui
ne présentent aucune croissance fongique (Bertella ,2019 ; Abouamama et al.,2018)

16
RESULTATS
ET
DISCUSSION
 Chapitre 4 : Résultats et discussion

4. 1.Rendement

Le rendement en huiles essentielles d’Artemisia herba-alba, à été de 0,64%

(Bertella ,2019).

On remarque que la teneur en huiles essentielles d’Artemisia herba alba obtenue par
hydro distillation, diffèrent d’une référence à une autre.
Le rendement en huiles d’Artemisia herba-alba pour notre cas était moyen par rapport à
celui trouvé précédemment par certains auteurs, ce rendement est étroitement proche de celui
trouvé par Bekka et al (2022) qui était de 0,7 % et celui trouvé aussi par Akrout et al (2004)
qui était de 0,65%.

En Algérie, On note que le rendement en HE d’Artemisia herba-alba de Tébessa

obtenu par Fenghour et al (2021) (1.21%) est supérieur à celui obtenu par, Ouchellil
et al (2021) (0.93%) de Boussaâda. En revanche, Bekka , ( 2021) de Bejaia est obtenu le
pourcentage le plus bas(0.7%).
En cette différence de rendement entre plantes peut s'expliquer en fonction de
l'origine géographique de la plante, des conditions et de la durée de stockage, et de la
période de récolte (Ghanmi et al., 2010 ).

16
 Chapitre 4 : Résultats et discussion

4.2. Composition chimique

Tableau 1: Composition chimique des huiles essentielles

retention Composés* Composition biochimique

tR InDR 2  AHA

8,535 948 948 -Pinène < 0,4

9,324 950 953 Camphène 2,42  0,16

10,536 898 897 Sabinène nd

10,755 943 943 -Pinène < 0,4

11,496 958 958 -Myrcène < 0,4

13,011 1051 1052 -Terpinène < 0,4

13,505 1040 1042 o-Cymène < 0,4

13,747 1018 1018 Limonène nd

13,862 1059 1059 Eucalyptol 8,19  0,31

14,280 976 976 (E)--Ocimène nd

14,908 955 958 (E)--Ocimène nd

15,572 998 998 -Terpinène < 0,4

4-Méthyl-3-(1-
17,268 1022 1023 méthyléthylidène) nd
-1-cyclohexene

18,243 1107 1106 Filifolone 1,46  0,06

18,673 1110 1110 α-Thuyone 12,71 0,12

19,428 1115 1115 -Thuyone 9,97  0,09

19,674 1120 1119 Chrysanthénone 8,19  0,19

17
 Chapitre 4 : Résultats et discussion

Suite de tableau 1

tR rétention Composés*
Composition biochimique
[1] [2]
IndR IndR Artemisia herba alba
23,633 1137 1137 4-Terpinéol 0,78  0,01
24,642 1141 1143 -Terpinéol nd
27,444 1291 1290 cis-3- nd
Hexénylvalérate
36,221 1221 1221 -Copaène < 0,4
36,664 1337 1339 β-Bourbonène nd
37,527 1345 1347 2-Phényl-1,3- nd
e
cyclohexadiene
38,908 1494 1494 β-Caryophyllène nd
40,071 1386 1386 Alloaromadendrène nd
41,146 1579 1579 Humulène nd
41,365 1438 1440 β-Farnésène nd
42,495 1434 1435 -Muurolène nd
42,761 1515 1515 Germacrène D 0,62  0,02
42,994 1524 1524 -Curcumène nd
43,230 1468 1469 β-Sélinène nd
43,662 1603 1603 Germacrène B nd
45,148 1470 1469 -Cadinène nd
48,556 1537 1536 Spathulénol 0,94  0,04
Oxide de
48,625 1506 1507 0,60  0,08
50,426 1586 1586 Geranylisovalérate nd
54,770 1622 1625 -Bisabolol nd
1,2,3,4,5,6,7,8-
61,795 1714 1714 Octahydro-1- nd
méthyl-anthracène
1,2,3,4,4a,9,10,10a-

Ces résultats regroupés dans le Tableau 1. En dominance au camphre (50,5%, 0,5102

mg) de cet étude, ce chémotype de l’huile essentielle d’Artemisia herba-alba est similaire à
celui rapporté par Imelouane et al.( 2010),et aussi le champhre est dominance dans plusieurs
région en Algérie avec un pourcentage de camphre de 49,3%, trouvé chez A herba-alba
collectée dans la région de Boussaâda (Algérie). Un fait intéressant est que le camphre est
le principal composé de l’huile essentielle des plantes récoltées à Bousssadaa ( 16,6%)
,Ouchelil et al.(2021), Bejaia(32%), Bekka hadji et al .(2021) Oum el Bouaghi (15,6%)

18
 Chapitre 4 : Résultats et discussion

,Rekkab et al.( 2016).

Les huiles essentielles d'A.herba alba du Djelfa est composée principalement de

davanone (62,20%) accompagné d'autres constituants à des teneurs relativement faibles :
carvacrol (4,88%), davanaethèr (3,62%), camphore (3,48%), eucalyptol (2,24%) (Touil et al.,
2011).
Les huiles essentielles d'A.herba alba présente un polymorphisme chimique très
important. , En effet, la composition chimique de l'HE de l'armoise blanche de Djelfa est
largement différente de celle de la région de Boussâada qui est dominée par le
Chrysanthenone (24,1%), Camphor (16, 2 %), la α-Thujone(12,8 %)(Ouchellil et al., 2021),
elle est aussi différent de l'HE d'A.herba alba de lybia qui contient en majorité cis Thujone
(13,61 %), de trans-Thujone(4 %), de Flifone(4,8%) (Bekka et al., 2021) .
C'est le cas aussi pour A.herba alba de la sud de Tunis, il est montré que l'huile
essentielle de cette espèce originaire est dominée par β-thujone (30 %), le α-thujone (25,07
%) (Akrout et al., 2010).

Quant à l’HE de l’armoise blanche de la Sud Jordan, elle présente cis-Chrysanthenol,

1,8-Cineole , cis-Limonene ,comme principaux composés (13,83 et 12,84 et 12,57 %
respectivement), elle aussi différent d’HEs de Jordan qui contient santolina (13,01%)
(Abou El-Hamd et al.,2010).

La diversité de la composition de l'huile de plantes Artimisia herba alba cultivées

dans différents pays et même ceux de différentes localités d'un même pays ont conduit
aux nombreux chémotype soléodépendants attribués à la plante. (Abou El-Hamd et
al.,2010).

D’autres études ont révélé la présence d’autres composés majoritaires tels que l
études de Benouda et al .(2017 ) au Maroc rapporte les profils chimiques des HE extraites de
neuf populations d'AHA qui ont été recueillies de différents habitats contrastés au Maroc
,qui a été montre que les échantillons d'AHA peuvent être caractérisés par la concentration
des principaux composants de leur volatil huiles et pourraient être classés en trois groupes
principaux qui représentent les chémotypes suivants : le camphre (populations Talazzert, Ain
Aghbal, TiziLafaka et Lakhtatba) ; l'α-thuyone (BniBoufrah, Boudnib et Tata populations);
le davanone (population d'Es-Samara) ; le camphre/davanone (population Ighrem) et le α-
thuyone/camphre (population Tata). Géographiquement, les populations croissant dans des
habitats éloignés les uns des autres.

19
 Chapitre 4 : Résultats et discussion

D’autre étude ont révélé l’effet de la période de récolte sur le rendement et la

composition chimique tel que l’étude de Ghanmi et al.( 2010 )montré que l’armoise blanche
récoltés au mois de juin avec un taux de 1,23 ± 0,07 % par rapport à ceux obtenus au cours
des collectes des mois d’avril et septembre qui sont respectivement de 0,86 ± 0,06 et 0,56
± 0,05 %.
Les HEs de ces trois périodes de collecte montrent une grande différence entre la
collecte du mois de septembre par rapport à celles des mois d’avril et de juin. En effet, les
collectes d’avril et juin sont caractérisées par la présence de chrysanthénone comme
principal constituant (respectivement 47,71 et 48,45 %) suivi du camphre (respectivement
21,59 et 24,85 %) et de l’α-thujone (respectivement 4,06 et 4,40 %). Ils sont accompagnés
d’autres constituants dont les teneurs sont relativement importantes : l’α-pinène (4,31, 2,16
%), le β-germacrène (3,15, 0,77 %), et le β-elemène (2,86, 1,78 %). Par contre, les
échantillons récoltés au mois de septembre se distinguent par la présence du camphre
comme composé majoritaire suivi de l’α-terpin-7-al avec des taux respectifs de 45 et 22 %.
L’étude qui a été menée par Ouaritini et al. (2016) confirme que l'huile essentielle
obtenu à partir de parties aériennes sèches et fraîches a été caractérisé par GC-MS a été
distingué un a l’autre . L’huile essentielle obtenu à partir de parties aériennes fraîches a été
constitué de cinq composés volatils les plus abondants ont été identifiés, le bornéol (35,68%)
s'est avéré être le composé principal suivi de l'α-terpinéol (33,36%) et Le γ-Cardinol
(12,07%), tandis que l'acétate de Myrtényle et l'Eugénol étaient minoritaires. Les composants
les plus abondants retrouvés dans la partie aérienne sèche étaient l'α-terpinéol (47,33%),
l'acétate de myrtényle (22,22%) et l'acétate de chrysanthényle (20,55). Le camphre et
l'eugénol sont moins abondants.

20
 Chapitre 4 : Résultats et discussion

4.3. Activité antibactérienne

Tableau 2: Diamètre des zones d’inhibition
Diamètre de la zone d’inhibition (mm)
Bactéries Artemisia Streptomycine
herba-alba 10 µg/disque
Gram +
Staphylococcus aureus SA A1 16,3 ± 0,5 14,3 ± 0,5
Staphylococcus aureus SARM A1 21,3 ± 0,5 15,3 ± 0,5
Staphylococcus aureus SARM B1 28,3 ± 0,5 16 ± 1
Staphylococcus aureus SARM B2 26,3 ± 0,5 15,6 ± 0,5
Staphylococcus aureus SARM B3 28 ± 1 14,3 ± 0,5
Staphylococcus epidermidis SEpi B1 10,7 ± 0,5 16,6 ± 0,5
Staphylococcus haemolyticus SH B1 17,7 ± 0,5 11,3 ± 0,5
Bacillus cereus BC A1 24 ± 1 25 ± 1
Gram -
Pseudomonas aeruginosa PA A1 <8 ± 0,0 21,6 ± 0,5
Escherichia coli EC A1 11 ± 1 15 ± 1
Klebsiella pneunomoniae KP A1 13 ± 1 18 ± 1
Escherichia coli EC B1 BLSE 10,3 ± 0,5 R
Escherichia coli EC B2 BLSE 11,3 ± 0,5 7 ± 0,0
Klebsiella pneumoniae KP B1 BLSE 11 ± 1 8 ± 0,0
Klebsiella pneumoniae KP B2 BLSE 11,7 ± 0,5 R
Acinetobacter baumannii AB B1 30,7 ± 1,5 13,6 ± 0,5
Acinetobacter baumannii AB B2 27,3 ± 0,5 10 ± 1
Proteus mirabilis PM B1 BLSE 17 ± 1 R
Proteus mirabilis PM B2 17,7 ± 1,1 8±1
Salmonella enteritidis SEnt B1 21,7 ± 0,5 13 ± 1
Klebsiella oxytoca KO B1 31,3 ± 0,5 16 ± 1

Valeurs représentées en moyenne des trois répétitions ± l’écart type.

R: résistante.

21
 Chapitre 4 : Résultats et discussion

Ces résultats regroupés dans le Tableau 2 révèlent une importante activité

antibactérienne des les huiles essentielles d’Artemisia herba- alba sur la plupart des souches
bactériennes testées. Les diamètres de la zone d’inhibition les plus élevés ont été remarqués
sur Klebsiella oxytoca, Acinetobacter baumannii et Staphylococcus aureus et avec des valeurs
de 31,3, 30,7et 28,3 mm. Une action antibactérienne modérée a été observée sur le reste des
souches à l’exception de l’espèce Pseudomonas aeruginosa qui a montré une certaine
résistance avec une zone d’inhibition inférieur à 8mm.

Les huiles essentielles d'A. herba alba a une large spectre d'activité antibactérienne
contre les bactéries Gram + et Gram -.

Des résultats similaires ont été rapportés par Akrout et al.(2010) qui montre que l'huile
essentielle a une très forte activité contre S. aureus et E. coli avec des zone d’inhibition
respectivement (30,12mm); également Fenghoure et al.(2021) a montré aussi que P.
aeruginosa a une résistance pouvoir et K peumonia est sensible à l'activité de l'huile
essentielle ,et aussi par Ouedehiri(2022 ) , a montré que S aureus (12,16mm)et E coli(11mm)
sont plus sensible.

D’autre étude a été menée que Le Gram négatif P. aeruginosa semble être résistant à
la huile étudiée avec une CMI de 21,00 mg/ml. Une activité maximale a été observée contre le
K. pneumoniae, N. meningitidis et H. influenzae avec une CMI de 0,041 mg/ml pour l'huile.
L'huile a montré l'effet inhibiteur le plus élevé contre les bactéries Gram positives. S. aureus
avec CMI de 0,016 mg/ml et S. epidermidis(0,33 mg/ml). Les souches d'E. coli testées a
montré une CMI de 0,66 ± 0,01 mg/ ml). Sur le d'autre part, P. mirabilis et S. pneumoniae
étaient les derniers sensibles avec un CMI de1,33 mg/ml. (melouane et al . ,2010)

En effet, la sensibilité des micro-organismes dépend de la composition chimique et de

la concentration des huiles essentielles utilisées et du type de micro-organismes testés
Fenghoul et al.(2021) Les extraits bruts d'A. herba alba a agi en inhibant sensiblement la
croissance de certaines Bactérie pathogène. Une activité inhibitrice des huiles essentielles a
été retrouvée contre les bactéries gram-positives et les bactéries gram-négatives. Différentes
enquêtes ont examiné l'efficacité des huiles essentielles contre le gramme bactéries positives
et négatives, et montré que les bactéries gram positives sont plus sensible aux huiles (Smith-
Palmer, 1998;Inouye., 2001).

Les résultats ont également indiqué qu'un volume plus élevé d'huile essentielle était

22
 Chapitre 4 : Résultats et discussion

nécessaire pour inhiber la croissance de toutes les bactéries Gram positives et Gram négatives
testées. Ces résultats sont similaires à ceux trouvés par (Fenghour et al., 2021).

Les étude de Talbi et al(2015) ont été montre que les lactones sesquiterpéniques de
l'extrait chloroformique de l'Artemisia herba-alba (Taurin 1, Erivanin 2, Isoerivanin 3 et
Herbalbin 4) ont été testés pour leurs activités antibactériennes contre cinq espèces
bactériennes :Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Pseudomonas
aeruginosa et Mycobacterium smegmatis.

Tableau 3 : Concentrations minimales inhibitrices (CMI) et bactéricides (CMB)

Artemisia herba- alba
Bactérie
MIC MBC
(mg/mL) (mg/mL)
Gram +
Staphylococcus aureus SASMA1 5 10
Staphylococcus aureus SARMB1 5 10
Staphylococcus aureus SARMB2 10 20
Staphylococcus aureus SARMB3 10 20
Bacillus cereus BCA1 5 10
Gram(-)
Acinetobacter baumannii ABB1 10 20
Acinetobacter baumannii ABB2 10 20
Proteus mirabilis PMB1 BLSE 10 20
Proteus mirabilis PMB2 10 20
Salmonella enteritidis SEntB1 10 20
Klebsiella oxytoca KOB1 10 20

Selon le tableau 3, Les concentrations minimales inhibitrices (CMI) et bactéricides

(CMB) de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba de cette étude sont plus élevées que
celles trouvées auparavant, Ed-dra et al.(2021) ont obtenu une CMI et CMB de 0,625 mg/mL
et 0,625 mg/mL sur E. coli. Les résultats de Peda et al.(2015) sur les souches S. aureus avec
une CMI de 0,05 et CMB de 0,125 mg/mL, et aussi sur B. cereus où la CMI était de 0,05
mg/mL et une CMB de 0,125 mg/mL. Ces résultats sont en concordance avec les travaux
précédents qui attribuent l’activité antibactérienne à la présence d’une bonne quantité
camphre Mighri et al(2010). Par ailleurs, le composant le plus abondant dans huile essentielle
d'A.herba alb, camphre, a ont été signalés comme présentant une activité bactériostatique

23
 Chapitre 4 : Résultats et discussion

contre P.aeruginosa, et ce composé est un constituant majeur dans un certain nombre d'huiles
essentielles antibactériennes ( Magiatis, 2002; Tirillini, 1996)

4.4. Activité antifongique

Tableau 4: Diamètres des zones d’inhibition des souches fongiques

Diamètre de la zone d’inhibition (mm)

Souche fongique Artemisia herba- alba

Aspergillus niger 53,7 ± 1,5

Aspergillus fumigatus 30,7 ± 0,6
Aspergillus terreus 12,3 ± 0,6
Fusarium oxysporum 19,0 ± 2,0
Penicillium sp. 32,7 ± 1,5
Valeurs représentée en moyenne des trois répétitions ± l’écart type.

A partir des résultats obtenus (Tableau 4), l’activité antifongique des huiles essentielles
semble variable, l’huile essentielle d’Artemisia herba-alba montre un potentiel antifongique
remarquable notamment sur l’espèce Aspergillus niger par un diamètre de la zone d’inhibition
de 53,7 mm, suivi de Penicillium sp. par une zone d’inhibition de 32,7 mm.

Tableau 5: Concentrations minimales inhibitrices (CMI) et fongicides (CMF)

Artemisia herba- alba
Souche fongique CMI CMF
(µL/mL) (µL/mL)
Aspergillus niger 2,5 >20
Aspergillus fumigatus 10 10
Aspergillus terreus 5 20
Fusarium oxysporum >20 >20
Penicillium sp. 10 10

Les résultats rapportés dans le (Tableau 5) montrent que la majorité des concentrations
minimales inhibitrices et fongicides enregistrées étaient entre 2,5 et 20 µL/mL, sauf pour
certaines souches là ou ces valeurs étaient >20 µL/mL, l’huile essentielle d’Artemisia herba-
alba est capable d’inhiber la croissance d’Aspergillus niger à une concentration de 2,5
µL/mL.

L’huile d’Artemisia herba-alba possède l’activité antifongique la plus importante. Une

activité importante est traduite par un diamétre de la zone d’nhibition de 53,7 mm sur la
souche d’Aspergillus nige

24
 Chapitre 4 : Résultats et discussion

Et aussi dans l’étude de Ouchelli et al.,( 2021) il montre un bon pouvoir inhibiteur
contre tous les antifungiques testés (CMI n'excédant pas 2 μg/mL) sauf pour Candida albican
(CMI = 5 μg/mL). a indiqué que ,Fusarium oxysporum, Penicillium expansum ,Asregillus
ochraceus et étaient les plus micro-organismes sensibles testés (CMI < 0,5 μg/mL ).

Après l’ étude sur la pathogénicité, il a montré que l'utilisation de T. longibrachiatum et

de l'huile essentielle d'Artemisia herba alba, en lutte biologique contre le Foa, nous a permis
de enregistrer des résultats importants pour inhiber la capacité du mycélium croissance du Foa
en confrontation directe. (Mehani, et al., 2016)

De plus, les différents effets d'une même huile essentielle sur les différentes souches
fongiques peuvent être due à la variation du génotype, bien que les cinq souches appartiennent
à la même espèce de Candida albicans. L'activité antifongique de ces huiles essentielles peut
être attribuée à sa richesse en monoterpènes oxygénés (80,85%) et en hydrocarbure
monoterpènes (11,4%) (Boukhennoufa et al., 2019).

En effet, la concentration de 1/500 v/v était suffisante pour inhiber les trois bactéries
Escherichia coli, Bacillus subtilis et Micrococcusluteus et toutes les espèces de champignons
testés. L’activité antibactérienne et antifongique des huiles de l’armoise blanche peut être
expliquée par leurs richesses en composés oxygénés (chrysonthénone, camphre, α-terpin- 7-
al et trans-β-terpinéol). (Ghamni et al.; 2015).

Les huiles essentielles d'A. herba alba à montré une activité antifongique presque
identique ou légèrement inférieure à celle du bifonazole. L’huiles testées à montré un meilleur
effet antifongique que le kétoconazole, Considérant que l'huile essentielle A. herba alba a la
teneur la plus élevée en composés oxygénés, on s'attend à ce qu'elle ait le meilleur effet
antibactérien et antifongique, les monoterpènes oxygénés présentent une activité
antimicrobienne élevée sur les cellules entières. En revanche, les dérivés d'hydrocarbures ont
une activité antimicrobienne plus faible en raison de leur solubilité et de leur diffusion plus
faibles à travers le milieu (Soković et al., 2002).

25
 Conclusion

Conclusion
Les extraits des plantes commencent à avoir beaucoup d’intérêt comme source
potentielle de molécules naturelle bioactives non toxique s'utilisant dans une lutte moins
nocive et plus raisonnée, il s’agit de la lutte biologique d'origines végétales dans l'espoir de
substituer les produits chimiques.
Dans la présente étude, nous nous sommes intéressés à présenter les études précédents
qui ont été réalisé par des chercheurs pour découvrir l’activité biologique des extraits
méthanoïque et des huiles essentielles de la plante aromatique Artemisia herba alba.
La détermination du rendement d'extraction des huiles essentielles d’artimisia herba alba
par hydro-distillation de type Clevenger a montré une rendements faible par rapport le
rendement d’autre études enregistre des déférent région en Algérie ou d’autre payé.

Il existe une grande variabilité dans la composition chimique de l'huile essentielle

d'Artemisia herba-alba cultivée dans différents pays et différentes localités d'un même pays.
Cela a conduit à la caractérisation de nombreux chémotypesoléo dépendants attribués à la
plante. D’autres avaient en général une composition d'huile essentielle différente en raison de
la différence de climat, de sol et de biotiques facteurs et selon la période et lieu de récolte.

L’activité antibactérienne de ces HEs varie d’une espèce à l’autre et aussi selon les
souches testées, une activité puissante revient à l’HE d’AHA, notamment sur les souches de
Klebsiellaoxytoca, Acinetobacter baumanniiet Staphylococcus aureus résistant à la
méthicilline avec des diamètres de la zone d’inhibition allant jusqu'à 31,3 mm. Une activité
remarquable des composés volatils de l’huile essentielle d’AHA par méthode de
microatmosphère, notamment sur la souche d’Acinetobacterbaumanniavec un diamètre de la
zone d’inhibition de 47,6 mm.

L’activité antifongique sur cinq souches de moisissures a révélé que l’HE d’AHA est
active sur l’ensemble des souches est notamment sur la souche d’Aspergillus niger.

Les études faites pour l’activité antimicrobienne, les méthodes quantitative et qualitative
réalisées dans plusieurs travaux ont permis de mettre en évidence le pouvoir antibactérien et
antifongique des huiles essentielles d’ Artemisia herba alba.

On conclut le contrôle de l’huile essentielle de l’armoise blanche par les caractères

physiques et chimiques permet de mettre en évidence la qualité de cette huile, se distingue par
un indice d‘acide et des propriétés comparable à ceux obtenues par la littérature concernant

26
 Conclusion

les huiles essentielles d‘une façon générale.

Ces résultats ont permis d’assurer de la pureté de cette huile essentielle. La bonne
miscibilité de l’huile essentielle de l’armoise blanche montre la possibilité de l’utiliser dans
les préparations pharmaceutiques.
L’huile essentielle de l‘armoise blanche présente un effet antimicrobien intéressant
contre toutes les souches testées.

Ce travail va nous ouvrir des horizons de recherche ciblés dans le domaine des plantes
utilisées en médecine traditionnelle, notamment en termes de mise en évidence des principes
actifs et évaluation de leurs activités biologiques.

 Il peut remplacer les antibiotiques et dispenser certains des composés fabriqués en

raison des dommages qu’ils contiennent pour l’organisme.

Nous espérons approfondir l’étude quantitative et qualitative en séparant ses différents

composants et en les identifiant et en étudiant leur efficacité biologique.

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34
 Résumés

‫ﻣﻠﺨﺺ‬

‫ ﺑﺎﻹﺿﺎﻓﺔ إﻟﻰ ﺗﺮﻛﯿﺒﮭﺎ‬، ‫اﻟﮭﺪف ﻣﻦ ھﺬا اﻟﻌﻤﻞ ھﻮ ﺗﺴﻠﯿﻂ اﻟﻀﻮء ﻋﻠﻰ اﻟﺘﺄﺛﯿﺮ اﻟﻤﻀﺎد ﻟﻠﻤﯿﻜﺮوﺑﺎت ﻟﻠﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ اﻟﻤﺴﺘﺨﺮﺟﺔ ﻣﻦ أﻧﻮاع اﻟﺸﯿﺢ‬
.‫ ﺧﺼﺎﺋﺼﮭﺎ اﻟﻌﻄﺮﯾﺔ‬، ‫اﻟﻜﯿﻤﯿﺎﺋﻲ‬

‫ ﺳﻤﺢ اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ اﻟﻠﻮﻧﻲ ﻟﻠﻐﺎز إﻟﻰ ﺟﺎﻧﺐ ﻗﯿﺎس اﻟﻄﯿﻒ اﻟﻜﺘﻠﻲ‬.٪0.65 ‫ﻣﺴﺘﺨﻠﺺ اﻟﺰﯾﺖ اﻟﻌﻄﺮي اﻟﻤﺴﺘﺨﺮج ﺑﺎﻟﺘﻘﻄﯿﺮ اﻟﻤﺎﺋﻲ ﻣﻦ ﻧﺒﺎت اﻟﺸﯿﺢ ھﺎم ﺑﻤﻌﺪل‬
‫ ﯾﻜﺸﻒ اﻟﻨﺸﺎط اﻟﻤﻀﺎد‬.(٪50.47) ‫ اﻟﻤﺮﻛﺒﺎت اﻟﺮﺋﯿﺴﯿﺔ ﻟﻠﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ ﻟﻠﺸﯿﺢ ھﻲ اﻟﻜﺎﻓﻮر‬.‫ ﻣﺮﻛﺒًﺎ ﻛﯿﻤﯿﺎﺋﯿًﺎ ﻓﻲ اﻟﻤﺠﻤﻮع‬41 ‫( ﺑﺘﺤﺪﯾﺪ‬GPC-MS)
Acinetobacter ‫ و‬Klebsiella oxytoca ‫ وﻻ ﺳﯿﻤﺎ ﻋﻠﻰ ﺳﻼﻻت‬، ‫ ﻋﻦ طﺮﯾﻖ ﺗﻘﻨﯿﺔ اﻧﺘﺸﺎر اﻟﻘﺮص‬، ‫ﻟﻠﺒﻜﺘﯿﺮﯾﺎ ﻋﻦ اﻟﺘﺄﺛﯿﺮ اﻟﻤﺤﺘﻤﻞ ﻟﺰﯾﺖ‬
‫ﻧﺸﺎط ﻣﻀﺎد ﻟﻠﻔﻄﺮﯾﺎت ﻟﺰﯾﺖ ھﻮ ﯾﻨﻌﻜﺲ ﺑﺸﻜﻞ رﺋﯿﺴﻲ‬% 31 ‫ ﺑﺄﻗﻄﺎر ﻣﻦ ﻣﻨﻄﻘﺔ اﻟﺘﺜﺒﯿﻂ ﺗﺼﻞ إﻟﻰ‬، Staphylococcus aureus ‫ و‬baumannii
.Aspergillus niger ‫ ﻣﻢ ﻋﻠﻰ‬53.7 ‫ﻣﻦ ﺧﻼل ﺗﺜﺒﯿﻂ ﻗﻄﺮه‬

. ‫اﻟﺰﯾﻮت اﻷﺳﺎﺳﯿﺔ‬, ‫اﻟﺸﯿﺢ اﻷﺑﯿﺾ‬, ‫ اﻟﻨﺸﺎطﺎت اﻟﻤﻀﺎدة اﻟﻔﻄﺮﯾﺎت‬، ‫ اﻟﻨﺸﺎطﺎت اﻟﻤﻀﺎدة ﻟﻠﻤﯿﻜﺮوﺑﺎت‬، ‫اﻟﺸﯿﺢ‬: ‫اﻟﻜﻠﻤﺎت اﻟﻤﻔﺘﺎﺣﯿﺔ‬

Résumé

L’objectif de ce présent travail est de mettre en évidence l’effet antimicrobien d' huiles essentielle extraites
d' espèce d’Artemisia herba-alba, ainsi que sa composition chimique, profil aromatique.

Le rendement de l’huile essentielle extraite par hydrodistillation le plus important revient à AHA avec un taux
de 0,65 % . L’analyse par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CPG-SM) a
permet l’identification de 41 composés chimiques au total. Les composés majeurs des huiles essentielles d’AHA,
RT sont le camphre (50,47 %) . L’activité antibactérienne révèle le potentiel effet de l’huile d’AHA, par
technique de diffusion sur disque notamment sur les souches de Klebsiella oxytoca, Acinetobacter baumannii et
Staphylococcus aureus, avec des diamètres de la zone d’inhibition allant jusqu'à 31,3 Une importante activité
antifongique de l’huile d’AHA, est traduite principalement par un diamètre d’inhibition de 53,7 mm sur
Aspergills niger.
Mots clés : Atemisia herba-alba, Activités antimicrobiennes, Activité antifungique , Armoise blanche, Huiles
essentielles.

ABSTRACT

The objective of this present work is to highlight the antimicrobial effect of essential oils extracted from species
of Artemisia herba-alba, as well as its chemical composition, aromatic profile.

The yield of the essential oil extracted by hydrodistillation the most important goes to AHA with a rate of 0.65%.
Analysis by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS) allowed the identification of 41
chemical compounds in total. The major compounds of essential oils of AHA, RT are camphor (50.47%). The
antibacterial activity reveals the potential effect of AHA oil, by disk diffusion technique, in particular on strains
of Klebsiella oxytoca, Acinetobacter baumannii and Staphylococcus aureus, with diameters of the inhibition
zone of up to 31 ,3 A significant antifungal activity of AHA oil is mainly reflected by an inhibition diameter of
53.7 mm on Aspergillus niger.

Key words: Atemisia herba-alba, Antimicrobial activity, Antifungal activity. White wormwood, essential oil.