Phytochimie Master1 : Biodiversité et Environnement

MASTER : BIODIVERSITE ET ENVIRONNEMENT

INTITULE DE LA MATIERE : PHYTOCHIMIE

RESUME DES CHAPITRES

Crédits : 2
Coefficients : 1
Enseignante : Sabah BOUMERFEG

CONTENU DE LA MATIERE

I- PHARMACOGNOSIE ET CHIMIE DES PRODUITS NATURELS

D’ORIGINE VEGETALE

1. LES METABOLITES PRIMAIRES

1.1. Les protéines
1.2. Les glucides
1.3. Les lipides

2. LES METABOLITES SECONDAIRES

2. 1. Les composes phénoliques
2.1.1. Classification
2.1.1.1. Les acides phénoliques
2.1.2.1. Les tanins
2.1.3.1. Flavonoïdes
2. 2. Les alcaloïdes
2.2.1. Rôle des alcaloïdes chez la plante
2.2.2. La classification des alcaloïdes
2.2.3. Structure et activités biologiques de quelques alcaloïdes
2. 3. Les terpénoïdes
2.3.1. Classification, biosynthèse et structure des terpénoïdes
2.3.2. Les huiles essentielles
2.3.3. Rôle biologique des terpenoïdes

II. CHIMIE ANALYTIQUE : TECHNIQUES UTILISEES EN PHYTOCHIMIE

1- Extractions.
2- Chromatographie.
3- Méthodes d’analyse structurale « spectroscopiques ».

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CHAPITRE 1 : PHARMACOGNOSIE ET CHIMIE DES PRODUITS

NATURELS D’ORIGINE VEGETALE

1. LES METABOLITES PRIMAIRES

Définition : Un métabolite primaire est un type de métabolite qui est directement impliqué dans la croissance, le
développement et la reproduction normale d'un organisme ou d'une cellule. Ce composé a généralement une
fonction physiologique dans cet organisme, c'est-à-dire une fonction intrinsèque. Un métabolite primaire est
typiquement présent dans de nombreux organismes taxonomiquement éloignés. Il est également désigné par
métabolite central, qui prend même le sens plus restrictif de métabolite présent dans tous les organismes ou
cellules en croissance autonome. Inversement, un métabolite secondaire n'est pas directement impliqué dans ces
processus physiologiques fondamentaux (indispensables) d'un organisme, mais possède typiquement une
fonction écologique importante, c'est-à-dire une fonction relationnelle. Un métabolite secondaire est typiquement
présent dans un ensemble taxonomiquement restreint d'organismes (Plantes, Champignons, Bactéries...). Les
métabolites primaires sont caractérisés par leur caractère nécessaire et vital à la survie de la cellule, de
l’organisme :
- les acides aminés, source primaire de construction des Protéines
- les glucides, source d’énergie, paroi cellulaire
- les lipides, source d’énergie, membranes cellulaires
1.1. Les protéines : Une protéine est une macromolécule biologique composée d’une ou plusieurs
chaînes d'acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques (chaine polypeptidique). En général,
on parle de protéine lorsque la chaîne contient au moins 20 acides aminés, et de peptide pour des
assemblages de plus petite taille. Les protéines sont des éléments essentiels de la vie de la cellule : elles
peuvent jouer un rôle structurel (comme l'actine), un rôle dans la mobilité (comme la myosine), un rôle
catalytique (les enzymes), un rôle de régulation de la compaction de l'ADN (les histones) ou
d'expression des gènes (les facteurs de transcription), etc. En somme, l'immense majorité des fonctions
cellulaires sont assurées par des protéines.
1.2. Les glucides: Les glucides forment 1 à 2% de la masse cellulaire. Ils contiennent du carbone, de
l’hydrogène et de l’oxygène. Ces deux derniers atomes sont présents dans le même rapport 2 :1 que
dans l’eau, c’est pourquoi les glucides sont parfois appelés hydrates de carbone. Ce sont des molécules
organiques caractérisées par la présence de chaînons carbonés porteurs de groupements hydroxyles, et
de fonctions aldéhydes ou cétoniques. En fonction de leur volume et de leur solubilité, les glucides sont
classés en monosaccharides ou oses (1 sucre), en disaccharides ou osides (2 sucres), et en
polysaccharides ou polyosides (nombreux sucres).
1.3. Les lipides : Les lipides sont des graisses qui se trouvent dans la nature sous deux formes :
- les triglycérides qui ont essentiellement un rôle énergétique
- les phospholipides formés à partir de diglycérides qui ont un rôle physiologique au niveau des
membranes cellulaires.
- les stérols dans laquelle on trouve le célèbre cholestérol. Ce sont aussi les composants essentiels
de certaines hormones (les stéroïdes) et de la membrane cellulaire des eucaryotes. .
Les acides gras saturés qui sont principalement d’origine animale ont une forme linéaire. Ils sont
généralement solides à température normale. Ces molécules forment des structures compactes qui ont
tendance à rigidifier les membranes cellulaires et à limiter les échanges.
les acides gras insaturés (monoinsaturés et poly-insaturés) ont une forme en V ou en U qui favorisent
la fluidité membranaire car l’empilement des phospholipides est moins compact. Les acides gras
polyinsaturés sont généralement liquides à la température de la pièce et se retrouvent principalement
dans les huiles végétales (maïs, soja, tournesol, noix, lin).
2. LES METABOLITES SECONDAIRES
Définition : Les métabolites secondaires ne participent pas directement aux processus vitaux de la
cellule, mais assurent néanmoins des fonctions écologiques importantes. Chez les plantes, les
métabolites secondaires sont importants à la survie et à la propagation de l'espèce. Il joue chez celles-ci
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différents rôles, comme des phéromones ou des signaux chimiques permettant à la plante de s'adapter à
l'environnement, de moyens de défense contre les herbivores, les pathogènes ou les compétiteurs.
D'autres protègent la plante des radiations solaires ou encore facilitent la dispersion du pollen et des
graines.
Les métabolites secondaires sont des composés organiques :
- Molécules existant en très grand nombre, d’une variété structurale extraordinaire
- Marquent l’identité d’une espèce, familles ou genres
- Impliquées dans une écologie chimique inter-espèces
- Applications pharmaceutiques
TYPES ET ORIGINE DES METABOLITES SECONDAIRES
On peut identifier trois types de métabolites secondaires:
- Molécules (phénoliquesVoie de l’acide shikimique et acétate/malonate).
- Alcaloïdes (Acides aminés).
- Terpénoïdes ( l’IPP (isopentenyl diphosphate), une molécule à 5 C).
2.1. LES POLYPHENOLES
Les polyphénoles constituent un des groupes le plus nombreux et largement distribué des substances dans le
royaume des végétaux, avec plus de 8000 structures phénolique connues. Ils résultent de deux voies synthétiques
principales : la voie shikimate et acétate. Les polyphénoles possèdent plusieurs groupement phénoliques, avec ou
sans d’autres fonctions (OH, carboxyle, …).
Les polyphénoles peuvent être subdivisés en 03 classes principales : les acides phénoliques, les flavonoïdes et les
tanins.

2.1.1. Les acides phénoliques

Les acides phénoliques se trouvent dans un certain nombre de plantes agricoles et médicinales. Comme exemple
d’acides phénoliques, on cite : acide caffeique, acide protocatechique, acide ferulique, acide sinapique et acide
gallique. Ils sont considérés comme substances phytochimiques avec des effets prebiotique, antioxydant,
antibactérien, antifongique, anti-inflammatoire et chélateurs.
2.1.2. Les tanins
Ce sont des polyphénoles polaires d’origine végétale, existent dans presque chaque partie de la plante : écorce,
bois, feuilles, fruits et racines, leurs poids moléculaire s’étendent de 500 à 3000 et ils peuvent avoir plusieurs
activités biologiques dont l’activité antioxydante, anti-inflammatoire, antifongique, antitumorale, antivirale et
antidiarrhééique.
2.1.3. Les flavonoïdes
Les flavonoïdes représentent une classe de métabolites secondaires largement répandus dans le règne végétal.
Presque toujours hydrosolubles, ce sont des pigments quasiment universels des végétaux et sont en partie
responsables de la coloration des fleurs, des fruits et parfois des feuilles. Les flavonoïdes sont susceptibles
d’assurer la protection des tissus contre les effets nocifs du rayonnement UV, ils jouent aussi un rôle dans la
défense des plantes contre les micro-organismes pathogènes, dans la fertilité des plantes et dans les interactions
plante-microbe. Ces pigments représentent des signaux visuels qui attirent des animaux pollinisateurs (les
anthocynes, les aurones et les chalchones). Les flavonoïdes sont largement abondants dans les légumes, les
feuilles (salade, chou, épinards, etc.), ainsi que dans les téguments externes des fruits.
2.1.3.1. Structure chimique, classification et biosynthèse
Plus de 4000 flavonoïdes ont été identifiés, ils ont une origine biosynthétique commune et par conséquent,
possèdent tous un même squelette de base à quinze atomes de carbones, constitué de deux unités aromatiques,
deux cycles en C6 (A et B), reliés par une chaîne en C3. Le pont à 3 carbones entre les deux phényles forme
généralement un troisième cycle pyrone. (Figure1). Le réarrangement de ce squelette selon un motif 1, 2-
diphénylpropanique permet d’engendrer des isoflavonoïdes ;
Les flavonoïdes peuvent être regroupés en une douzaine de classes selon le nombre, la position et la nature des
substituants (groupements hydroxyles, méthoxyles et autres) sur les deux cycles aromatiques A et B et la chaîne
en C3 intermédiaire. Dans les plantes, les flavonoïdes peuvent être présents sous forme C- ou O-glycosylés. La
partie du flavonoïde autre que le sucre est appelée aglycone ou génines (Tableau1).

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Tableau1 : Classification et structure des flavonoïdes

Classe Structure générale Flavonoïde Substituant

Flavanol catéchine 3, 5, 7, 3’, 4’-OH
epicatéchine 3, 5, 7, 3’,4’-OH

Flavone chrysine 5,7-OH

apigenine 5, 7, 4’-OH
rutine 5, 7, 3’, 4’-OH, 3-rutinose
5, 7, 3’, 4’-OH
luteoline

Flavonole kaempferole 3, 5, 7, 4’-OH

quercétine 3, 5, 7, 3’, 4’-OH
myricetine 3, 5, 7, 3’, 4’, 5’-OH
tamarixetine 3, 5, 7, 3’-OH, 4-OMe

Flavanone naringene 5,4’OH,7rhamnoglucose

(dihydroflavone) naringenine 5, 7, 4’-OH
taxifoline 3, 5, 7, 3’, 4’-OH

Isoflavone genistine 5, 4’-OH, 7-glucose

genisteine 5, 7, 4’-OH
daidzine 4’-OH, 7-glucose
daidzeine 7, 4’-OH

Anthocyanidines apigenidine 5, 7, 4’-OH

cyanidine 3, 5, 7, 4’-OH, 3, 5-OMe

2.1.3.2. Activité biologiques des flavonoïdes : L’activité antioxydante des flavonoïdes, dont leur capacité à
piéger les radicaux libres, chélation des ions métalliques ou inhiber les enzymes responsables de la formation des
radicaux, a permet de les attribuer plusieurs activités biologiques ; Antiallergiques Anti-inflammatoires
Anti-ulcéreux Anticancéreux Antidiabétique Antiviral Anticarcinogène Hypotenseur et diurétique
Antispasmodique, Anti-bactérien, Hépatoprotectrice, Vasodilatateur.

2.2. LES ALCALOÏDES : Les alcaloïdes sont des substances naturelles et organiques provenant
essentiellement des plantes et qui contiennent au moins un atome d'azote dans leur structure chimique, avec un
degré variable de caractère basique. Depuis l'identification du premier alcaloïde - à savoir la morphine - à partir
de l’opium en 1806, plus de dix mille alcaloïdes ont été isolés des plantes. Les alcaloïdes sont principalement
extraits des plantes fleurissantes, mais on les trouve également chez quelques animaux comme les fourmis, les
grenouilles et les coccinelles. Ce sont des composés relativement stables qui sont stockés dans les plantes en tant
que produits de différentes voies biosynthétiques, la plupart du temps à partir des acides aminés tels que la
lysine, l’ornithine, la tyrosine et le tryptophane. Les alcaloïdes peuvent se trouver dans toutes les parties de la
plante, mais selon l'espèce de la plante, ils s’accumulent uniquement dans les écorces, dans les racines, dans les
feuilles ou dans les fruits. Dans la pomme de terre, les tubercules comestibles ne contiennent pas d'alcaloïdes,
tandis que les parties vertes contiennent la solanine toxique (Solanum Tuberosum). La partie dans laquelle les
alcaloïdes s'accumulent n'est pas forcément celle où ils sont synthétisés. Dans le tabac par exemple, la nicotine
(Nicotiana Tabacum) (2) est produite dans les racines mais transférée ensuite vers les feuilles où elle est stockée.

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2.2.1. Rôle des alcaloïdes chez la plante

Le rôle des alcaloïdes dans les plantes est souvent inconnu, et leur importance dans le métabolisme de la plante
n’est pas très bien définie. Une plante peut contenir plus de cent alcaloïdes différents, mais en général leur
concentration ne représente pas plus de 10% du poids sec. L’existence de plantes ne contenant pas d'alcaloïdes
démontre que ces composés ne sont apparemment pas essentiels à leur reproduction. Pourtant, plusieurs
alcaloïdes sont très toxiques et offrent, par conséquent, un arsenal chimique de défense des plantes contre
l'attaque des herbivores et des micro-organismes. La nicotine empêche la croissance des larves du tabac. Le
composé pur est également appliqué comme insecticide efficace. En outre, des alcaloïdes protègent les plantes
contre les dommages provoqués par la lumière UV. Ils constituent aussi une réserve de substances capables de
fournir l'azote ou d'autres fragments nécessaires au développement de la plante. Parfois, ils n’ont pas de rôle
précis et sont simplement des sous-produits du métabolisme végétal.

2.2.2. La classification des alcaloïdes

On estime qu’il y a plus de 10 000 alcaloïdes différents déjà isolés (ou détectés) à partir de sources végétales,
animales ou de micro-organismes. Proposer une classification pour les alcaloïdes est une tâche difficile, en
raison du grand nombre de composés connus et surtout à cause de la diversité structurale. L’atome d’azote dans
les alcaloïdes provient, en général, d’un acide aminé dont la structure carbonée reste souvent intacte dans la
structure finale de l’alcaloïde. Une façon raisonnable est alors de classer les alcaloïdes en groupes, selon leur
précurseur biosynthétique. Il existe cependant un grand nombre d’alcaloïdes qui n’ont pas forcément un acide
aminé comme précurseur. Dans ces cas-là, l’atome d’azote est incorporé à un stade avancé de la biosynthèse par
réactions d’amination sur des intermédiaires aldéhydes ou cétones (tableau 2).
Tableau 2 : quelques types d’alcaloïdes et leur précurseur acide aminé

2.3. LES TERPENOÏDES

Les terpènes sont des hydrocarbones naturels, de structure soit cyclique soit à chaîne ouverte : leur
formule brute est (C5HX)n dont le x est variable en fonction du degré d’insaturation de la molécule et n
peut prendre des valeurs (1-8) sauf dans les polyterpènes qui peut atteindre plus de 100 ( le
caoutchouc). La molécule de base est l’isoprène de formule C5H8. Le terme terpénoïde désigne un
ensemble de substances présentant le squelette des terpènes avec une ou plusieurs fonctions chimiques
(alcool, aldéhyde, cétone, acide, lactone, etc.)
2.3.1. Classification, biosynthèse et structure des terpénoïdes
Les terpènes ont été isolés chez les champignons, des algues marines et des insectes, mais la plus
grande partie des ces substances est retrouvée dans les plantes. La synthèse des tetrpénoïdes est
généralement associée à la présence des structures histologiques spécialisées, souvent situées sur ou à
proximité de la surface de tissus des plantes. Les principales structures cellulaires produisant les tetrpénoïdes
sont soit des cellules à essence, soit des poils sécréteurs stipités ousessiles, soit des poches sécrétrices, soit enfin
des canaux sécréteurs. Le réticulum endoplasmique et dans certains cas les plastes sont les organites dans
lesquels les tetrpénoïdes sont synthétisés.
Les terpénoïdes sont classés dans la catégorie des métabolites secondaires (avec les flavonoïdes et les
alcaloïdes). Leur classification est basée sur le nombre de répétitions de l’unité de base isoprène : hémiterpènes
(C5), monoterpènes (C10), sesquiterpènes (C15), diterpènes (C20), sesterpènes (C25), triterpènes (C30),
tetraterpènes (C40) et polyterpènes

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2.3.1.1. Hémiterpènes
Dans la nature, il existe peu de composés naturels ayant une formule de C5 ramifiée; parmi certains composés
naturels trouvés chez les plantes qui peuvent être considérés comme hémiterpène, seul l’isoprène a toutes les
caractéristiques biogénétiques des terpènes.
2.3.1.2. Monoterpènes
Plus de 900 monoterpènes connus se trouvent principalement dans 3 catégories structurelles : les monoterpènes
linéaires (acyclique), les monoterpènes avec un cycle unique (monocycliques) et ceux avec deux cycles
(bicycliques) (fig.B2). Ils résultent d’une fusion typique tête-à-queue des unités d’isoprène.
a) Les monoterpènes acycliques
Le géranyl pyrophosphate (GPP), le premier composé issu du mévalonate est le précurseur de cette catégorie de
monoterpènes. Dans ce groupe, le géraniol est le plus répandu dans le règne végétal.
b) Les monoterpènes monocycliques
Ces composés sont formés à partir du néryl pyrophosphate (NPP) ou du géranyl pyrophosphate (GPP). Les
composés aromatiques sont les plus importants dans cette catégorie, comme le p-cymène et ses dérivés
hydroxyles qui se trouvent associés avec le _-terpinène.
Ces composés se trouvent dans un grand nombre d’huiles essentielles, surtout celles issus des conifères. La
plupart de ces monoterpènes font partie des familles pinane, bornane ou thujane tandis que les familles fenchane
et carane sont moins représentées. Les monoterpènes majeurs issus du pinane sont l’pinène et le pinène qui sont
largement distribués dans les plantes. Le bornéol, l’isobornéol et le camphre sont les terpènes les plus importants
dans la famille bornane. Les terpènes les plus communs de thujane sont les cétones thujone et isothojone, les
alcools et les hydrocarbones associés. Le 17 fenchone (cétone) et les alcools (_-fenchol et _-fenchol ) sont des
constituants majeurs de la famille fenchane. Enfin, le car-3-ene est le seul monoterpène commun de la famille
carane.
2.3.1.3. Sesquiterpènes
Il s’agit de la classe la plus diversifiée des terpènes puisqu’elle contient plus de 3000 molécules dont les plus
caractéristiques sont présentées à la figure 4. Les sesquiterpènes se divisent en plusieurs catégories structurelles,
acyclique, monocyclique, bicyclique, tricyclique, polycyclique .
a) Les sesquiterpènes acycliques
Ils sont susceptibles d’être dérivés de trans, trans-farnésyl pyrophosphate (FPP) qui constitue l’analogue de la
génération des monoterpènes acycliques à partir de GPP. Généralement tous les monoterpènes acycliques ont un
analogue sesquiterpène direct.
b) Les sesquiterpènes monocyclique
Les sesquiterpènes monocycliques sont divisés principalement en 4 familles: Bisabolan, Germacran, Eleman et
Humulan (figure B4). Le zingibérène est un exemple de la famille du Bisabolan, que l’on retrouve par exemple
dans l'essence de Gingembre. Le periplanone dérivé du germacrane est une phéromone sexuelle chez la blatte.
c) Les sesquiterpènes polycycliques
Parmi les sesquiterpènes polycycliques, le caryophyllène est le plus important, que l’on retrouve principalement
dans le poivre et certaines épices.
2.3.1.4. Diterpènes
Les diterpènes sont des substances avec 20 atomes de carbone (C20) élaborées à partir de 4 unités d’isoprène ; ils
se forment à partir de leur précurseur, le géranylgéranylpyrophosphate (GGPP). Ces composés sont
principalement présents dans les plantes supérieures dans les résines ou les gibbérellines, ainsi que dans les
champignons.
2.3.1.5. Sesterpènes
Les sesterpènes sont des composés en C25, construits à partir de 5 unités d’isoprène. L’acide mévalonique
(MVA) semble être le précurseur de cette classe. Ils ont été isolés des plantes, des champignons, des insectes, et
des éponges. Il y a plus de 150 sesterpènes bien connus, parmi lesquels une trentaine a une structure de
furfurane, dérivé du 3,7,11,15,19- Pentamethyleicosane.
Les sesterterpènes sont plutôt rares dans la nature ; ils se trouvent soit sous forme linéaire soit cyclique, avec un,
deux, trois ou quatre cycles.
2.3.1.6. Triterpènes
Les triterpènes en C30 sont produits à partir de deux molécules de farnésylpyrophosphate (FPP) par une fusion
de tête-à tête. Il y a plus de 1700 triterpènes dans la nature dont la majorité est sous forme tétracyclique ou
pentacyclique, la forme acyclique étant très rare. Parmi les triterpènes acycliques, le squalène (figure B8) est le
précurseur des autres triterpènes, et aussi des stéroïdes végétaux. La plupart de triterpènes sont des alcools, sous

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forme libre ou glycoside (les saponines) ou ester. Les triterpènes libres sont des composants principaux des
résines ou du latex des végétaux. La vitamine D2 est un produit dérivé de triterpène.
2.3.1.7. Tetraterpènes
Les caroténoïdes sont des tetraterpènes, les plus typiques étant les apocaroténoïdes, les diapocaroténoïdes, les
mégastigmanes.
2.3.1.8. Polyterpènes
En général, les polyterpènes ou polyisoprènes se composent de plus de 8 unités d’isoprène. Ces terpènes se
trouvent souvent sous deux formes isomèriques cis- et trans. Le cis-polyisoprène se trouve dans le caoutchouc
indien, alors que le polyisoprène-trans est la partie principale de gutta-percha. En plus Chicle représente un
mélange de 1:2 de deux isomères cis- et trans-. Les prenylchoinones sont des polyterpènes comptant jusqu'à 10
unités d’isoprène, parmi eux, on rencontre les vitamines K1 et K2 et la vitamine E
2.3.2. Les huiles essentielles
Depuis l’antiquité, certaines caractéristiques et fonctions biologiques de terpènes étaient connues pour l’homme
et celles-ci ont été utilisés indirectement par l’exploitation des épices en tant que parfums et conservateurs. Plus
tard, la recherche sur les composés actifs a abouti à l’extraction des terpènes notamment volatils à partir des
plantes. Ces extraits vegetaux dont les composants majeurs sont les mono- et sesquiterpènes s’appellent les
huiles essentielles (HES).
Les HES ou les volatiles, sont des liquides aromatiques obtenus a partir de différentes parties de plantes (fleurs,
bourgeons, graines, feuilles, brindilles, écorce, fruits, herbes et bois) le plus souvent par la méthode de
distillation à la vapeur d’eau Les terpénoïdes et les phénylpropanoïdes constituent les composants actifs les plus
importants des HES, dont les mono- et sesquiterpénoïdes forment la majeure partie
2.3.3. Rôle biologique des terpénoïdes
Les plantes produisent une grande variété de produits formés à base d’isoprène, certains d’entre eux sont des
métabolites primaires comme des stéroïdes et des groupes prosthétiques des enzymes et vitamines en chaînes
latérales (vitamine K, E). Certains sont des hormones végétales comme l’acide abscisique ou les gibbérellines
(diterpènes). Cependant la majorité des composés terpéniques sont des métabolites secondaires sans fonction
directe dans la croissance des végétaux. Ces métabolites sont responsables de la couleur et l’odeur des plantes et
des épices (piments, curies), certains d’entre eux ont des fonctions écologiques importantes mais la majorité (les
mono- et sesquiterpènes) possèdent une activité antimicrobienne contre un large éventail des bactéries et
champignons. Par ailleurs, un certain nombre de terpènes ont des propriétés toxiques, répulsives ou attractives
pour d'autres organismes, ce qui a conduit à la conviction qu'ils ont des rôles écologiques dans les interactions
antagonistes ou mutualistes entre les plantes et plantes-animaux. Ici nous avons évoqué deux rôles principaux
des tetrpénoïdes connus dans la nature. Certains terpènes sont toxiques vis-à-vis de certains insectes ou
nématodes. Cette action pouvant s’effectuer par une action directe sur les récepteurs du goût.

CHAPITRE 2 : CHIMIE ANALYTIQUE : TECHNIQUES UTILISEES EN PHYTOCHIMIE

1 . EXTRACTIONS.
L’extraction est utilisée pour extraire sélectivement un ou plusieurs composés d’un mélange initial, sur la base
de propriétés chimiques ou physiques. Le but de l’extraction est d’isoler une ou plusieurs molécules à partir d’un
organisme (animal ou végétal) selon diverses techniques.
1.1. TECHNIIQUES D’EXTRACTION : L’homme utilise des colorants, des parfums, des arômes, et des
extraits de produits naturels depuis la haute Antiquité, par différentes techniques:
a. La filtration: Depuis les temps préhistoriques, l’homme utilise un lit de sable ou de mousse pour rendre une
eau boueuse (pleine de boue) limpide (claire et transparente).
b. Le pressage : Consiste à exercer une pression sur une orange pour obtenir le jus, ou à écraser des fleurs pour
extraire les arômes.
c. L’enfleurage : Est une forme d’extraction utilisée en parfumerie. Il repose sur le pouvoir d’absorption d’une
huile essentielle par les corps gras. Par exemple, les fleurs fragiles sont posées sur des cadres enduits de
graisse animale très pure et inodore qui absorbe le parfum des fleurs au contact; en fin de séchage, les
graisses sont imprégnées de substances odorantes.
d. La décoction : Cette méthode est très ancienne. Elle consiste à chauffer la racine ou l’écorce d’une plante
avec de l’eau; jusqu’à ce que cette dernière soit bouillante et les constituants se dissolvent.

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e. L’infusion : Elle consiste à verser de l’eau bouillante sur des plantes (les feuilles ou les fleurs) finement
broyées puis les laisser tremper pour dissoudre leurs principes actifs.
f. La macération : Consiste à laisser séjourner à froid un solide dans un liquide pour en extraire les
constituants solubles dans ce liquide.
1.1.7. L’EXTRACTION PAR SOLVANT : C’est un procédé qui permet d’extraire des composés qui ne
peuvent pas l’être avec de l’eau. Elle consiste à faire passer, par solubilisation, la substance à extraire dans un
solvant. Celui-ci peut être de l’eau, mais généralement il s’agira d’un solvant organique: éthanol, cyclohexane,
éther de pétrole, toluène, etc. L’extraction par solvant fait intervenir trois étapes.
 La mise en contact du solvant avec la substance contenant le composé à extraire
 La décantation; Est réalisée à l’aide de l’ampoule à décanter.
 Le séchage et la filtration ; Afin d’éliminer le peu d’eau susceptible d’avoir été retenue dans la
phase organique, on fait agir un déshydratant. On filtre ensuite pour ne recueillir que la phase organique
exempte d’eau. Généralement, par la suite le solvant est évaporé pour récupérer l’extrait seul
 Le choix du solvant obéit à des critères et nécessite la connaissance les paramètres physique et
caractéristiques de ce solvant.
- L’état physique du solvant: Le solvant doit être liquide à la température et à la pression où la réalisation
de l’extraction.
- La miscibilité du solvant: Le solvant doit être non miscible à la phase qui contient initialement le
composé à extraire.
- La solubilité: Le composé à extraire doit être très soluble dans le solvant. C’est-à dire, beaucoup plus
soluble dans le solvant que dans le milieu où il se trouve initialement (milieu aqueux en général).
- La densité du solvant: ce paramètre détermine si la phase organique, contenant le composé à extraire, se
trouve au dessus ou en dessous de la phase aqueuse dans l’ampoule à décanter. Les solvants d’extraction
doivent être aussi:
- Facilement éliminés : après extraction et donc avoir un point d’ébullition bas. Leur point d’ébullition
doit être le plus éloigné possible de celui des produits à extraire
- Inertes chimiquement vis-à-vis de la solution à extraire.
- Peu toxiques que possible.
 L’ENTRAINEMENT A LA VAPEUR OU L’HYDRODISTILLATION : Elle consiste à extraire les
parfums des plantes (huiles parfumées ou huiles essentielles) par la vapeur
 L’entraînement à la vapeur: Consiste à bouillir un mélange d’eau et de substance naturelle contenant le
composé à extraire (huile essentielle). La vapeur entraîne les huiles essentielles contenues dans le produit
brut. Par la suite, ces vapeurs sont condensées à l’aide d’un réfrigérant.
 Le relargage: est une technique qui consiste à séparer une substance en solution de son solvant en
introduisant une autre substance plus soluble qui prend sa place. Le relargage peut être suivi
d'une distillation.)
 La décantation: Est réalisée dans une ampoule à décanter, dans laquelle le mélange se sépare en deux
phases non miscibles. Une phase aqueuse, plus dense, se situe dans la partie inférieure et une phase
organique, de densité plus faible et contenant les huiles essentielles se situent au dessus
 Le séchage et la filtration: Afin d’éliminer le peu d’eau susceptible d’avoir été retenue dans la phase
organique, il est important de faire agir un déshydratant (C’est le séchage). Pour ne recueillir que la phase
organique exempte d’eau il faut réaliser une filtration.
2 .CHROMATOGRAPHIE.
La chromatographie, méthode d'analyse physico-chimique, sépare les constituants d'un mélange (un soluté ou
extrait brut en plusieurs fractions. Cette séparation se fait par entraînement d'une phase mobile le long d'une
phase stationnaire. il y a donc une distribution ou partition des composants entre ces deux types de phase.
TYPES DE CHROMATOGRAPHIE
Chromatographie sur colonne et chromatographie de surface

I. CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE : La phase mobile permet aux composés du soluté de se

déplacer dans la colonne selon une vitesse différente, en fonction de:

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 L’affinité à la phase stationnaire (Une substance qui a une affinité a la phase stationnaire, elle sera fixé et
donc le déplacement dans la colonne est très lent
 La solubilité dans la phase mobile (Une substance qui est très soluble dans la phase mobile, elle déplace
dans la colonne très vite).
Ce qui donne des Vitesses de déplacement différentes, et ça permet leur séparation

Equipement chromatographique

Soluté ou extrait brut: Solution qui contient les différents constituants cellulaires qu’on veut purifier.
La phase stationnaire: phase fixe ou un gel (constituée de microbilles ou granules) se trouve dans une
colonne, ces granules :
 Peuvent être poreuse
 Portent une charge ionique
 Portent un site d’affinité
La phase mobile: est un liquide ou tampon qui passe et se déplace à travers la phase stationnaire, en
entraînant les constituants du soluté. Elle doit être soluble, Elle ne doit pas interagir avec la phase
stationnaire mais uniquement avec les constituants du soluté.
La colonne : Elle peut être en verre, plastique ou en inox (forte pression), la dimension est variable. C’est
le support qui porte la phase stationnaire (gel ou résine) à travers ce gel, la phase mobile passe.
La pompe : Permet de régler le débit de la phase mobile à travers la colonne.
Le détecteur : Cet élément évalue la quantité de chacun des constituants séparés. Le détecteur envoie un
signal électronique vers un enregistreur
L’enregistreur : dessinera les pics en fonction de leur intensité. L'ensemble des pics est appelé
chromatogramme.
Le collecteur de fractions : un appareil qui permet de collecter les différents fractions du soluté (par exp.
2ml/tube
MODE OPERATOIRE
1. Préparation du gel
2. Remplissage de la colonne
3. Équilibration de la colonne (tampon A)
4. Injection de l’échantillon
5. Élution (tampon B)
6. Récupération des fractions
7. Analyse du chromatogramme
8. Régénération du gel (tampon de régénération)

1. CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION STERIQUE OU FILTRATION SUR GEL

Il s'agit ici d'une séparation des protéines selon leur taille ou forme utilisant un tamis moléculaire. Une colonne
de chromatographie pour filtration sur gel est remplie d’un gel (billes creuses et poreuses). C’est une
chromatographie dont la colonne est remplie d’un gel poreux, le diamètre des pores est proche de la taille des
molécules à séparer.

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Les grosses molécules dont le diamètre est supérieur a celui des pores sont exclues et donc élués en premier. Les
petites molécules et les molécules de taille moyenne sont éluées plus tardivement, elles pénètrent dans les pores
du gel (sont inclus dans le gel), leurs migration est donc retardée.
1.2. Caractéristique des gels
 La porosité : Détermine le pouvoir filtrant (microporeux ou macroporeux)
 Inertie chimique : Pas de pouvoir adsorbant vis-à-vis des solutés ni d’interaction avec la phase mobile
 Stabilité physicochimique : Résistance âu T°, pression (gel rigide: 5-20 atm, gel mous, pression <1atm)
 Granulométrie : La taille des granules du gel (10-120µM: pour les particules plus ou moins grosse,
<40µM: particules fines)
 La Forme : La forme qui assure un écoulement uniforme de la phase mobile est la forme sphérique)
 La nature : les gels peuvent etre en dextran, polyachrylamide et agarose.
Application:
 Dessalage
 Purification
 Élimination des virus (stérilisation)
 Détermination du PM
2. CHROMATOGRAPHIE SUR ECHANGEUR D’ION : est une technique ou la séparation est en fonction
de la charge électrique. La phase stationnaire est un échangeur d'ions constitué par une résine porteuse de
groupements ionisés négativement ou positivement, exerçant des interactions électrostatiques (ioniques) avec
des protéines ionisées. Dans cette chromatographie, la colonne est remplie d’une phase stationnaire porteuse
de groupements ionisés négativement ou positivement. Il s'agit d'une séparation des protéines basée sur des
interactions ioniques réversible entre:
1. une phase stationnaire appelée échangeurs d’ion et
2. des contre ions échangeable ou mobile et
3. un solute ou protein chargé
La phase stationnaire est constitué d’une matrice (résine ou gel) sur la quel est fixé des groupements chargés

2.2. Les différents types d’échangeurs

a- Échangeur anionique : qui échange réversiblement des anions. Un échangeur anionique est chargé
positivement.
b- Échangeur cationique : qui échange réversiblement des cations. Un échangeur cationique est chargé
négativement.

MODE OPERATOIRE
1. Choix du gel
2. Choix de la phase mobile
3. Conditions de travail
4. Remplissage de la colonne
5. Équilibration de la colonne (fixation des contres ions)
6. Injection de l’échantillon (l’étape de fixation ou adsorption des protéines)
7. Élution (étape de désorption par la Fi ou pH)
8. Récupération des fractions
9. Analyse du chromatogramme
10. Régénération du gel
L’élution est réalisé en modifiant le pH ou en augmentant la force ionique. Le pH influe sur la charge nette de la
protéine (caractère amphotère) :

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 Si pH>Pi: pn- : Pour éluer cette protéine, il est nécessaire de diminuer le pH, La protéine sera
chargé positivement, elle décrochera de la résine
 Si pH<Pi: pn+ : Pour éluer cette protéine, il est nécessaire augmenter le pH, La protéine sera chargé
négativement, elle décrochera de la résine
3. CHROMATOGRAPHIE D’AFFINITE
C’est une méthode de purification ou séparation basée sur les interactions spécifiques réversibles entre un ligand
et une protéine. Le ligand est fixé sur une matrice (résine) directement ou indirectement à l’aide d’un bras
espaceur.

Matrice ou résine : Peut être en dexran, agarose et polyachrylamide, elle Permet la fixation chimique du ligand
(directement ou indirectement)
Bras espaceur c’est une Chaine polycarbonnée(C6-C8) intercalé entre la matrice et le ligand
Ligand : C’est la molécule fonctionnelle, Fixée directement ou indirectement sur la matrice.
MODE OPERATOIRE
1. Choix de la phase mobile
2. Remplissage de la colonne
3. Équilibration de la colonne
4. Injection de l’échantillon
5. Lavage de la colonne pour éliminer les substances non adsorbées
6. Élution des substances adsorbée ou fixée :
- Élution non spécifique : C’est l’augmentation de la concentration en sels, ou en changeant le pH.
- Élution spécifique : L’utilisation d’un tampon d’élution qui contient un compétiteur « ligand non fixé »
7. Récupération des fractions
8. Analyse du chromatogramme
9. Régénération du gel

II. CHROMATOGRAPHIE DE SURFACE : La chromatographie sur couche mince (CCM) est basée sur
des phénomènes d'adsorption. la phase mobile ou l’éluant est un solvant ou un mélange de solvants, qui
progresse le long d'une phase stationnaire fixée sur une plaque de verre ou sur une feuille semi-rigide
5.2. PRINCIPE

 déposer l'échantillon dans la cuve,

 l'éluant ou le solvant monte à travers la phase stationnaire
 Chaque composant de l'échantillon se déplace à sa propre vitesse derrière le front du solvant.
 Cette vitesse est en fonction de:

1. L’affinité à la phase stationnaire

2. La solubilité dans la phase mobile

3 . METHODES D’ANALYSE STRUCTURALE « SPECTROSCOPIQUES ».

1. Definition: Le mot spectrophotomètre est dérivé du latin spectrum, qui signifie image, et du grec phos
ou photos, qui signifie lumière. Les méthodes spectroscopiques se basent sur l’absorption ou l’émission de
radiation du spectre électromagnétique par beaucoup de molécules quand les électrons changent de niveaux
énergétiques. L’interaction de l’énergie de la lumière avec la matière est utile pour déterminer les composés et
leur concentration dans des mélanges de matière. Le spectre électromagnétique se situe dans la gamme des
rayons-γ jusqu’aux ondes radio de très basse énergie. Beaucoup de régions du spectre sont utilisées pour obtenir
des informations sur la composition des échantillons (Figure 1).

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Figure 1. Le spectre électromagnétique.

2.SPECTROSCOPIE ET SPECTROMÉTRIE
La spectroscopie est la science qui traite des interactions de différents types de rayonnement avec la matière. Les
mesures spectroscopiques sont largement appliquées aux analyses environnementales inorganiques, telles que les
analyses de spéciation des métaux.
La spectrométrie, quant à elle, concerne l'instrumentation et les mesures pour des études spectroscopiques, à
l'heure actuelle, la majorité des méthodes analytiques environnementales pour les polluants organiques sont
basées sur des mesures spectrométriques couplées à des techniques séparatives telles que la chromatographie.
Lorsqu'un atome est chauffé où qu'il subit une décharge électrique, un de ses électrons de sa couche périphérique
(ou plus rarement des couches internes) passe du niveau fondamental à un niveau d'énergie supérieur appelé
niveau d'état excité. Ce phénomène s'appelle l'absorption. Lorsque l'électron redescend, il émet de l'énergie sous
forme lumineuse (photon) : c'est l'émission. Ces deux phénomènes peuvent être exploités pour servir de
méthodes d'identification.

3. TYPES DE SPECTROSCOPIE
Les techniques spectroscopiques peuvent être classées selon le processus de mesure : absorption, émission et
diffusion du rayonnement électromagnétique (Figure2).
L'interaction rayonnement-matière peut causer une redirection du rayonnement et/ou des transitions entre les
niveaux d'énergie des atomes ou des molécules.
 Une transition d'un niveau inférieur vers un niveau plus haut d'énergie avec transfert d'énergie du champ
de rayonnement vers l'atome ou la molécule est appelée absorption.
 Une transition d'un niveau plus élevé vers un niveau inférieur est appelée émission si l'énergie est
transférée de l'atome ou de la molécule vers le champ de rayonnement.
 La déviation de la lumière due à l'interaction avec la matière est nommée diffusion, et s'effectue avec ou
sans transfert d'énergie, c'est-à-dire que le rayonnement diffusé a une longueur d'onde légèrement
différente ou égale à celle du rayonnement incident.

Conclusion : La spectroscopie est la mesure de l’analyse de la radiation électromagnétique absorbée,

dispersée ou émise par des atomes, molécules ou d’autres espèces chimiques. Les analyses se réalisent dans
les régions de l’ultraviolet, du visible, de l’infrarouge (IR), du rayonnement X, des micro-ondes et de la
fréquence radio du spectre électromagnétique.

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L’absorption de la radiation produit une transition des électrons entre les niveaux électroniques de la
molécule. Ensuite, l’électron peut revenir à son état d’équilibre par émission de radiation ou par fluorescence,
correspondant à des différences d’énergie (Tableau 1).

Tableau1 : t e c h n i q u e s s p e c t r o m é t r i q u e s

Techniques Principe Applications

Spectroscopie Arc/spark
Spectrométrie d’émission de Plasma Émission atomique
Photométrie de Flamme

Spectrométrie de fluorescence aux rayons X Analyse quantitative des métaux

Émission fluorescence atomique
Spectrométrie de fluorescence atomique

Spectrométrie d’absorption atomique Absorption atomique

Spectrométrie UV, Vis, IR Absorption moléculaire Analyse quantitative des éléments et composés

RMN Absorption nucléaire Analyse structurelle des composés organiques

3.1. SPECTROSCOPIE ATOMIQUE

La spectroscopie d’absorption ou d’émission atomique est probablement la plus ancienne méthode analytique
utilisée dans le monde. Elle inclut deux méthodes d’analyse quantitative qui peuvent être utilisées pour mesurer
les concentrations d’environ 70 éléments (métaux, métalloïdes et non-métaux).
3.1.1. Principe: Le principe dépend des mesures faites dans un analyte qui est transformé sous la forme
d’atome libre (atomisation). Une fois que les atomes ne peuvent plus tourner ou vibrer comme les molécules,
dans ce cas seulement, des transitions électroniques ont lieu quand l’énergie est absorbée. Les atomes dans l'état
fondamental absorbent l’énergie dans une certaine longueur d'onde produite par une source composée par les
mêmes atomes à être analysé à partir d'une source (lampe avec cathode creuse). Cette source produit une
radiation électromagnétique intense avec une longueur d’onde similaire à celle absorbée par les atomes. (Figure)
Lorsqu'on excite un atome par un apport externe d'énergie (énergie thermique, rayonnement électromagnétique,
bombardement de neutrons, etc.), les électrons de la couche externe de cet atome peuvent passer d'un état
énergétique Em à un état d'énergie supérieure En −. Ces électrons passent alors à un niveau supérieur instable,
plus éloigné du noyau, puis tendent ensuite à revenir à leur niveau initial par une transition durant laquelle ils
émettent un photon d'énergie E définie par la relation :
| En – Em | = hνnm = hc / λnm

Où - h est la constante de Planck (h = 6,63 × 10−34 J · s),

- c la vitesse de la lumière (c = 3,00 × 108 m · s−1),
- λnm la longueur d'onde
- νnm la fréquence du rayonnement associé au photon
La sensibilité se situe dans la gamme des parties par million (ppm) et parties par milliard (ppb), avec des
avantages additionnels notamment la vitesse, la grande sensibilité et les coûts modérés de l'instrument.
3.1.2. T E C H N I Q U E S D E S P E C T R O M É T R I E A T O M I Q U E
La sélection de la méthode à utiliser dépend du nombre d’analyses et de la concentration à déterminer
Tableau 1. Techniques de spectrométrie atomique
Technique Excitation Détection
Photométrie par flamme Flamme chimique UV-Vis radiation émise
Spectrométrie par Absorption atomique (AAS) Absorption de radiation EM Radiation EM absorbée
Spectroscopie Arc/spark Décharge électrique UV-Vis radiation émise
Spectrométrie d’émission de Plasma Plasma Gazeux UV-Vis radiation émise
Plasma – Spectrométrie de masse Plasma Gazeux Ions
Spectrométrie de fluorescence de rayons X Spectrométrie Irradiation par rayons X Rayons X Fluorescents
3.1.3. APPLICATIONS : La spectrométrie d'absorption atomique permet le dosage de nombreux matériaux
inorganiques (roches et minerais, métaux et alliages..., citons notamment :
 En métallurgie : l'analyse des altérations du bronze, l'effet des produits de nettoyage de l'argent,

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 l'analyse des constituants majeurs et mineurs de céramiques,

 le dosage du Ca, Sr, Zn dans les os,
 analyse des éléments traces pour identification des pierres,
 la dégradation des verres.
 L'AAS trouve aussi des applications à l'étude et la conservation des documents graphiques :
 dosage des charges minérales dans les papiers, en particulier pour l'étude des
 méthodes de désacidification
 dosage des particules métalliques (Cu, Fe...) dans le papier
3.2. SPECTROSCOPIE PAR RESONANCE MAGNETIQUE NUCLEAIRE (RMN)
RMN signifie Résonance magnétique nucléaire: il s'agit d'une technique d'analyse qui permet de déterminer la
structure d'une molécule organique. Elle consiste à soumettre une molécule à un champ magnétique. Ce dernier
permet de faire résonner les atomes d’hydrogène de la molécule. Les différentes fréquences de résonance des
atomes d’hydrogène sont consignées dans un graphique permettant de déterminer la structure de la molécule
- Propriétés magnétiques du noyau de l’atome d’hydrogène : Un atome d'hydrogène ne comporte qu'une
seule particule dans son noyau. Le proton se comporte comme un petit aimant : le noyau de l'atome d'hydrogène
possède des propriétés magnétiques dues à une grandeur typiquement quantique appelée le spin. Un aimant
possède un moment magnétique que l'on peut symboliser par un vecteur. En l'absence de champ magnétique les
moments magnétiques sont orientés de manière aléatoire. Soumis à un champ magnétique les moments
magnétiques des noyaux s'orientent. Deux orientations sont possibles :
 même sens que le champ magnétique
 sens opposé au champ magnétique
3.2.1. Principe : La résonance magnétique nucléaire (RMN) est une technique spectroscopique qui repose sur le
magnétisme du noyau. Elle est fondée sur la mesure de l’absorption d’une radiation dans le domaine des
fréquences radio par un noyau atomique dans un champ magnétique fort. Elle constitue l’une des plus puissantes
méthodes de détermination de la structure des espèces aussi bien organiques qu’inorganiques.
Le principe de la RMN du proton consiste à :
1- Utiliser un champ magnétique H0 pour orienter les "spins" nucléaires des atomes,
2- Exciter ces spins par une onde radio à la fréquence de résonance, ce qui fait basculer certains spins
3- Après l'excitation, les spins reviennent à leur état initial (relaxation).
Grâce à la spectroscopie RMN, on peut identifier des noyaux d'atomes comme celui de l'hydrogène ou du
carbone. Cette technique est très efficace avec les molécules organiques car l'hydrogène est très présent(Figure).
3.2.2. APPLICATIONS DE RESONANCE MAGNETIQUE NUCLEAIRE
 la résonance magnétique nucléaire (RMN) qui est à la base de l’imagerie par résonance
magnétique (IRM) ; technique d’imagerie médicale permettant d’obtenir des vues en deux ou trois
dimensions de l’intérieur d’un corps ;
 la résonance paramagnétique électronique (RPE) ou résonance de spin électronique (RSE), qui est
notamment utilisée pour l’analyse de matériaux et en datation archéologique.
 Dans le domaine de la chimie, cette spectrométrie permet d’identifier des composés organiques. Elle
permet d'étudier des protéines, des acides nucléiques à des concentrations milli molaires.
 Dans la dynamique nucléaire, les études par RMN des liquides mettent en œuvre la relaxation nucléaire
(phénomène d'évolution d'un système de spins nucléaires vers l'équilibre thermodynamique suite aux
interactions avec son environnement).
 Dans les polymères, la RMN est utilisée pour étudier les mouvements moléculaires. On peut également y
rechercher le taux de cristallinité.
3.3. SPECTROSCOPIE MOLÉCULAIRE
Tout comme les atomes, les molécules possèdent des niveaux d'énergie correspondant à leurs énergies
de rotation et de vibration. Par conséquent, un spectre moléculaire est bien plus complexe qu'un spectre
atomique. On observe généralement des groupements de raies caractéristiques appelés bandes et l’on qualifie
souvent les spectres moléculaires de spectres de bandes.
3.3.1. SPECTROSCOPIE DE VIBRATION DANS L’INFRAROUGE I (IR)
Le rayonnement infrarouge, découvert par Frédéric Wilhelm Hershel en 1800, est une onde électromagnétique
qui s’étend de 0,8 μm à 1000 μm. Il est arbitrairement divisé en 3 régions,
- Proche-IR 0,8-2,5  13300-4000 cm-1
- IR moyen 2,5-25 4000-400 cm-1
- IR-lointain 25-1000 400-10 cm-
Même si les régions du proche et du lointain IR ont suscité un certain intérêt, l’utilisation de la spectroscopie
moyen IR, reste la plus adaptée pour l’élucidation de la composition moléculaire d’un composé(Figure).

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Figure 1 : Domaines de l’IR dans le spectre électromagnétique

3.3.1.1. Principe
Les mouvements des atomes d’une molécule peuvent être classés en trois catégories:
les translations
les rotations
les vibrations
La spectroscopie infrarouge (IR) étudie les vibrations des molécules lorsqu’elles sont irradiées par une onde
électromagnétique comprise dans le domaine de l’infrarouge, dont la fréquence correspond à sa fréquence
propre. Ce faisant, elle absorbe la radiation. Chaque type de liaison (C-C, C-H, C-O, …)
possèdeune fréquence de résonance qui lui est spécifique
Quel que soit l'état (solide, liquide ou gazeux), les mouvements de vibrations modifient légèrement et
périodiquement la longueur et l'orientation des liaisons. Il existe différents type de déformation des liaisons. Par
exemple, pour les molécules possédants minimum 3 atomes, voici les principaux :
 Etirement symétrique : les deux atomes "extérieurs" s'éloignent et se rapprochent simultanément de
l'atome central.
 Étirement asymétrique : quand l'un des atomes "extérieurs" se rapproche, l'autre s'éloigne de l'atome
central.
 Cisaillement : les atomes "extérieurs" se rapprochent et s'éloigne l'un de l'autre dans le plan de la
molécule.
 Torsion : un des atomes "extérieurs" se déplace d'avant en arrière du plan de la molécules, tandis que
l'autre effectue le chemin inverse.
Le principe d’une spectroscopie IR est d’envoyer des radiations IR sur un échantillon à tester. Certaines
longueurs d’onde sont alors absorbées par les liaisons chimiques des molécules se trouvant dans l’échantillon.
On génère alors un spectre IR, qui permet de déterminer ces liaisons chimiques.
Une spectroscopie infrarouge peut ainsi avoir différentes finalités:
- Identifier et caractériser une molécule inconnue, en référençant ses liaisons.
- Tester la présence ou l’absence d’une molécule dans un échantillon
2.3.1.3. Les groupes fonctionnels : Les groupements d’atomes (appelés aussi groupes fonctionnels) les plus
courants et détectables par spectre IR sont :
 Les alcohols, Les acides carboxyliques , Les aldéhydes, Les cétones, Les esters , Les amines, Les amides

3.3.1.4. Applications : L’utilisation de spectrophotometrie infrarouge est largement répandue dans un grand
nombre d'industries donnant lieu nombre d'industries donnant lieu à des applications analytiques très diverses :
Industrie agro –alimentaire ;
Industrie pharmaceutique ;
Domaines des matériaux (polymères,) ;
3.3.2. SPECTROSCOPIE D’ABSORPTION MOLECULAIRE DANS L’UV-VISIBLE
La spectrométrie se base sur l’absorption de la radiation électromagnétique dans la longueur qui correspond à
une gamme entre l’Ultra-violet (UV) et l’infrarouge (IR) dans le spectre de la radiation électromagnétique. La
Spectrophotométrie UV-Vis utilise la radiation électromagnétique entre l’UV (200-400 nm) et le visible (400-
750 nm) comme source de lumière pour promouvoir énergétiquement les électrons dans une molécule en
solution à un niveau énergétique plus élevé. Le spectrophotomètre UV-Vis mesure la quantité d’énergie
absorbée.

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2.3.2.1. Principe
L’absorption d’un rayonnement ultraviolet ou visible correspond a une interaction des photons avec les électrons
des couches externes des atomes ou des molécules. La position du maximum d’absorption correspond à la
longueur d’onde de la radiation qui provoque la transition électronique. Les molécules qui possèdent des doubles
liaisons, des triples liaisons, des cycles aromatiques ou des cycles hétérocycles absorbent dans l’UV.
La loi de beer-lambert. : Un faisceau lumineux monochromatique (une longueur d’onde fixe) de
longueur l et intensité I0 traverse une cuve à base carrée contenant une solution d’une substance de
concentration C, à une distance L (L=longueur de la cuve).

 Si :I0= I, milieu transparent

 Si :I0> I, milieu partiellement absorbant
 Si :I= 0, milieu opaque (absorption totale)
On définit :
 La transmittance (T): qui est le pourcentage de transmission T%=I/I 0.100
 Absorbance (A) ou densité optique (DO) qui représente la valeur du logarithme décimale de l’inverse de T
 A= log (1/T) = el. L .C
La loi de Beer Lambert : Aλ = ελ. L .C
• Aλ = l’absorbance a une longueur l
• ελ = coefficient d’absorption molaire (M-1cm-1)
• L= trajet optique (cm)
• C= concentration de la solution (M)
D’après Beer Lambert, l'absorbance Aλ est fonction de la concentration C de la solution, du coefficient
d'absorption molaire et de la longueur de solution à traverser L
Condition de validité de la loi de Beer Lambert : cette loi n’est pas valable que dans certaines conditions:
1. le monochromatisme (une seule longueur d’onde lmax )
2. Les faibles concentrations (diluées)
3. empérature stable(e dépends de la Température)
4. pH stable
5. Clarté du milieu
2.3.2.3. PRINCIPES DES DOSAGES
a- Méthode de dosage directe : Si la substance à doser possède un pic d’absorption caractéristique, on
mesure l’absorbance à λ max et on calcule directement la concentration par la loi de Beer Lambert (e doit être
connue). Exp: dosage des protéines a une longueur de 280nm
b- Méthode de dosage indirecte
Ces méthodes sont utilisées dans le cas ou la substance à doser ne possède pas un pic d’absorbance
caractéristique (λmax):
 Utilisation d’un réactif coloré
 Utilisation d’une gamme d’étalonnage
Remarque : La lecture est effectué contre une solution appelée le blanc, qui contient tout les constituants du
milieu sauf la substance a doser (échantillon), pour que l’absorbance soit pour la substance a doser.
2.3.2.4. APPLICATION :
 La Détermination de la concentration en acides nucléiques – ADN et ARN
Détermination de la concentration en protéines par mesure directe ou par essais colorimétriques, étude
des réactions enzymatiques et suivi des courbes de croissance des suspensions de cellules bactériennes

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