CHRISTIEANS.

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Viande hachée artisanale

Qualité,

Science et technique
DLC
et challenges
tests

Que ce soit sur le plan

bactériologique ou
biochimique les
viandes hachées
artisanales sont en
général de bonne
Durant les trois dernières décennies, l’industrie de la viande qualité. Cependant les
fraîche a beaucoup changé ainsi que le comportement des
consommateurs. Ces derniers attendent que la viande et les taux de contamination,
produits à base de viande qui leur sont proposés répondent à notamment par
trois critères :
- Conformité dans leur composition par rapport à la réglemen-
L. monocytogenes
tation. sont étroitement liés
- Respect des critères microbiologiques en vigueur. aux conditions de
- Bonnes qualités organoleptiques.
stockage et en tout
Par ailleurs, les contraintes microbiologiques strictes sont de premier lieu à la
plus en plus renforcées, notamment pour les viandes hachées
(dont la consommation annuelle en France est d’environ
chaîne du froid qui
400 000 tonnes). Face à ces contraintes et à la refonte des dis- doit être parfaitement
positifs réglementaires, le secteur artisanal doit anticiper au maîtrisée.
risque de se voir imposer des critères sévères (germes
pathogènes ou d’altération).

Dans ce contexte, les professionnels souhaitent compléter les

connaissances relatives à la qualité microbiologique et biochi-
mique de leurs produits afin de disposer d’informations sup-
plémentaires sur les viandes hachées artisanales. L’objectif
premier de cette étude est de :
- déterminer la réalité actuelle de la contamination initiale de
la viande hachée artisanale et de sa qualité biochimique, CHRISTIEANS S.
- situer ces viandes artisanales en terme de DLC, par le biais
des challenges tests (Listeria monocytogenes). ADIV
2, rue Chappe
63039 Clermont Ferrand Cedex 2

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PROTOCOLE

Étape 1: Contamination initiale et qualité biochimique des viandes hachées artisanales

Science et
Technique Prélèvements
Pour cette première partie de l’étude, les prélèvements ont été concentrés dans deux régions : la région Auvergne et la région parisienne.
Pour chaque région, l’étude a été réalisée en partenariat avec 10 bouchers artisans. Par atelier, environ 15 steaks hachés ont été prélevés.
Afin de garantir la fiabilité des analyses, les échantillons ont été collectés de façon aseptique, mis dans des sacs Stomacher stériles, trans-
portés dans des glacières isothermes à 4 °C, puis analysés dans les 24 h.

Les analyses microbiologiques

Pour chaque boucher artisan, 10 steaks hachés ont fait Germes analysés Méthodes employées
l’objet d’analyses microbiologiques : 5 échantillons ont été
analysés à J0 (le jour de la préparation et du prélève- Flore totale (ou micro-organismes
ment). Les 5 autres ont été stockés pendant 4 jours selon aérobies 30 °C) NF V08-051
la norme NF V01 003 (1/3 du temps à 4 °C puis 2/3 du Pseudomonas NF V04-504
temps à 8 °C) et ensuite analysés à J4. Entérobactéries NF V08-054
Chaque échantillon (n = 5) a fait l’objet d’une analyse
individuelle complète. Pour chaque steak, les analyses E. coli NF V08-053
résumées dans le tableau ci-dessous ont été réalisées à S. aureus NF V08-057-1
partir d’un prélèvement cœur + surface. Recherche de salmonelle Test SRT (Oxoïd), NF V08-052
Recherche Listeria NF V08-055

Analyses Méthodes employées

Matière sèche NF V04-401 Les analyses physico-chimiques

Afin de déterminer la qualité biochimique des viandes hachées artisa-
Humidité NF V04-401
nales, 5 steaks ont été analysés à J0 (jour de fabrication et de prélève-
Lipides libres NF V04-403 ment). Pour chaque échantillon, les analyses réalisées apparaissent
Protéines NF V04-407 dans le tableau ci-dessous :
Collagène NF V04-415
Collagène/protéines NF V46-002
Traitements statistiques
Dans un premier temps, les résultats obtenus à J0 ont été comparés avec les prescriptions réglementaires et normatives des viandes
hachées. Puis dans un deuxième temps, les données ont été traitées avec le logiciel Statview dans le but de mettre en évidence les flores qui
présentent des variations significatives en fonction du site de prélèvement, de la région de prélèvement et de la durée de stockage.

Étape 2: Tests de croissance (challenges tests)

Viandes
Comme le préconise l’Afssa, les challenges tests ont été réalisés sur des échantillons provenant de trois lots différents et à raison de trois
répétitions. Pour cette deuxième étape, les prélèvements sur viandes hachées ont été effectués chez trois bouchers de la même région, trans-
portés dans des glacières isothermes (à 4 °C) puis acheminés au laboratoire P2+ de l’Adiv pour les ensemencements artificiels.

Origine des souches de L. monocytogenes

Sur la base des lignes directrices de l’avis de l’Afssa, pour les trois lots, deux souches ont été employées dans cette étude. La souche de réfé-
rence CIP 78.38 (sérovar 4b, de l’Institut Pasteur) et une souche de terrain. Cette dernière est une souche provenant de viande hachée
industrielle, isolée dans le cadre d’un autre programme.

Préparation des inoculum, taux et modes d’ensemencements

Les souches sont conservées congelées à – 20 °C. Avant les manipulations, elles sont décongelées, puis entraînées par trois repiquages suc-
cessifs dans le bouillon Trypticase Soja à 37 °C. Vingt-quatre heures avant la réalisation des tests de croissance, les bactéries sont ense-
mencées dans des Erlenmeyer de 250 mL et laissées en agitation pendant 12 à 18 h, jusqu’au début de la phase stationnaire. Les calculs
sont ensuite effectués de façon à obtenir le taux d’ensemencement de l’ordre de 103 germes/g de produit.
Les manipulations ont été réalisées séparément pour chaque souche de L. monocytogenes, à raison de 3 répétitions par lot, avec une ino-
culation en surface et en profondeur (en se rapprochant le plus possible des conditions naturelles de contamination).

Conditions et durée de conservation des échantillons

Comme l’indique la note de l’Afssa, les modalités de conservation permettent de distinguer un test de phase 1 et un test de phase 2. Le pre-
mier est réalisé à une température de 30 °C, donc dans des conditions très éloignées de la réalité pratiquée. Le test correspondant à la
phase 2 doit tenir compte des obligations réglementaires et des conditions proches de la réalité selon les modes de distribution, transport,
consommation finale.
Dans la présente étude, le test de phase 1 étant très éloigné de la réalité, nous sommes directement intéressés au test de phase 2. Les diffé-
rents échantillons de viandes hachées témoins ou ensemencés ont été conditionnés dans des barquettes sous film étirable, puis stockés à
deux températures différentes selon deux modalités :
- en régime statique à 2 températures distinctes : 0 à 4 °C, température correspondant à celle de la réglementation, (2 °C) et simulant une
chaîne de froid bien maîtrisée et 7 à 8 °C correspondant à la température de frigos ménagers (voire une chaîne de froid mal maîtrisée),
- selon la norme Afnor NF V01 003 : avec 1/3 du temps à 4 °C et 2/3 du temps à 8 °C.
Ces différentes modalités de température de stockage permettront de faire des extrapolations à d’autres cas de figure et fourniront des
données pour des études de courbes de croissance ou de la microbiologie prédictive.

Analyses et dénombrement
L’analyse des différents échantillons inoculés et témoins a été effectuée à J0 (vérification du taux de départ), J1 et J4,
Le dénombrement de L. monocytogenes a été effectué selon la norme NF EN ISO 11 290-2 et une confirmation de la souche L. monocyto-
genes a été réalisée par isolement sur gélose spécifique (gélose Aloa) et par un test biochimique (monoconfirm test).

Traitement des données

Afin d’avoir une répétitivité des résultats et de dégager les résultats les plus significatifs, pour chaque essai, trois répétitions ont été réa-
lisées et des traitements statistiques effectués avec Statview (test ANOVA) ont permis de comparer les variances et les moyennes obtenues
avec les différents protocoles de stockage.

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CONTAMINATION INITIALE ET
Figure 1 : UNE FLORE TOTALE INITIALEMENT ÉLEVÉE
QUALITÉ BIOCHIMIQUE DES
VIANDES HACHÉES
ARTISANALES Science et
Les résultats de la première étape ont
Technique
montré que sur le plan bactériologique,
les viandes hachées artisanales présen-
tent une bonne qualité. En effet, sur la
quasi totalité des produits analysés,
nous avons noté une absence de micro-
organismes pathogènes (Listeria, Jours

Salmonelle et Staphylococcus aureus), Évolution de la flore totale au cours de la conservation,

ainsi que des dénombrements inférieurs des différents produits analysés dans une région donnée
au seuil de détection (< 10 germes/g de
produit) pour E. coli et ASR. Ces résul-
tats se sont maintenus pendant 4 jours
de stockage des produits. Par contre, à Figure 2 : LE TAUX DE PSEUDOMONAS ÉVOLUE
J0 la flore totale, les Pseudomonas et les RAPIDEMENT
Entérobactéries étaient présents à des
taux non négligeables dans ces produits
et leurs taux ont tendance à augmenter
rapidement pendant la durée du stocka-
ge. En effet, la figure 1 montre l’évolu-
tion de la flore totale mésophile dans les
différents produits analysés dans une
région donnée. On constate que cette
flore est assez élevée dès le premier jour
de prélèvement (J0). Elle est en moyen-
ne de l’ordre de 106 germes/g, dans les Jours

deux régions puis sa concentration aug- Évolution des Pseudomonas au cours de la conservation,
mente de façon régulière pendant la des différents produits analysés dans une région donnée
durée du stockage. Cette évolution d’en-
viron 1 à 1,5 log selon la région confir-
me la fragilité microbiologique de la
Figure 3 : ÉVOLUTION LINÉAIRE DES ENTÉROBACTÉRIES
viande hachée, qui est en effet une
matrice propice au développement
bactérien.
Les Pseudomonas sont les germes psy-
chrotrophes majoritaires dans les
viandes et représentent une bonne partie
de la flore totale (figure 2). Leur popula-
tion de départ est d’environ
105/6 germes/g, puis leur taux évolue au
cours du stockage des échantillons. Au
Jours
bout de 4 jours de conservation, on
atteint des concentrations d’environ Évolution des entérobactéries au cours de la conservation,
107 germes/g de produit, représentant des différents produits analysés dans une région donnée
ainsi la quasi totalité de la flore totale de
la viande hachée
Comme pour les Pseudomonas, le taux Figure 4 : UNE CONTAMINATION VARIABLE AU SEIN D’UNE
des entérobactéries évolue de façon MÊME RÉGION
linéaire et similaire dans les différents
produits issus des 2 régions (figure 3).

L’analyse des différents échantillons

pris séparément par boucher montre
qu’il existe une variabilité entre bou-
chers au sein d’une même région. En
effet, certains échantillons semblent être
beaucoup plus chargés en flore totale, en
Pseudomonas et/ou en entérobactéries Bouchers

(exemple des Pseudomonas dans la

figure 4). Ce résultat est probablement Évolution de la population des Pseudomonas par boucher artisan
en corrélation avec la qualité de la et au cours du temps de conservation dans la région 2
matière première employée pour la
fabrication des steaks hachés.

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Il est possible que les résultats obte-

nus pour ces trois flores soient liés à Figure 5 : LE RAPPORT COLLAGÈNE/PROTÉINES
la durée de maturation qui est plus EST FAIBLE
Science et importante chez les bouchers artisans.
Technique Cependant, il serait nécessaire pour
ces derniers de mettre en place des
actions qui puissent leur permettre de
diminuer la charge initiale en flore
totale et Pseudomonas. En effet, si de
tels produits doivent répondre aux
critères réglementaires, ils peuvent
être classés « non satisfaisants », uni-
quement à cause de la flore totale.
Résultats du rapport Col/P pour la totalité des échantillons analysés,
D’un point de vue biochimique, les issus d'une région donnée
viandes hachées artisanales peuvent Pour tous les échantillons collectés
être également qualifiées de qualité
supérieure, avec un taux du rapport Figure 6 : LE RAPPORT COL/P
collagène/protéines faible, une très DÉPEND DES MUSCLES UTILISÉS
faible teneur en matière grasse et sur-
tout des teneurs en protéines élevées.

Les résultats du rapport collagène

/protéine apparaissent dans la figure 5
où on constate que ce rapport est qua-
siment identique dans les deux
régions étudiées et qu’il se situe aux
environs de 3,9 %. Ce rapport est très
faible en comparaison avec le maxi-
Bouchers
mum autorisé par le code des usages
des viandes hachées industrielles
(10 %) ou avec celui de la norme NF Résultats du rapport Col/P par boucher artisan dans une région donnée
V46-002, qui, elle autorise un maxi-
mum de 12 %. Ce faible rapport, bien
qu’il permette de qualifier les pro- Figures 7 et 8 : ÉVOLUTION LINÉAIRE DES
duits analysés de qualité supérieure, ENTÉROBACTÉRIES
peut poser des problèmes quand à la
jutosité et la liaison des produits. Ce
résultat peut s’expliquer par le parage
des muscles et par la nature des
muscles employés. Une enquête
menée auprès des bouchers ayant par-
ticipé à l’étude, a montré que la natu-
re des muscles utilisés pour la fabri-
cation des steaks est variable. En
effet, la quasi totalité des bouchers
questionnés utilise pour la fabrication
un mélange de deux ou trois muscles.
Le muscle gîte à la noix est commun,
presque à tous les artisans, et l’utilisa-
tion des autres muscles est variable Résultats de la teneur en matière grasse pour la totalité des échantillons
d’un atelier à un autre. On trouve analysés, issus d’une région donnée
ainsi un ou deux parmi les muscles
suivants : jumeau, collier, épaule plat
de côte, dessus de côte, aiguillette
d’épaule, rond de gîte, macreuse,
paleron… etc. Cette variabilité de la
nature du muscle employé est claire-
ment corrélée aux résultats de la figu-
re 6 où le rapport Col/P représenté par
boucher dans une région donnée
(moyenne de 5 répétitions) montre
une variabilité d’un artisan boucher à Bouchers

un autre, avec des valeurs qui oscil- Résultats de la teneur en matière grasse par boucher artisan dans une
lent entre 2,4 % et 6,2 % région donnée

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dans une région donnée, la teneur en des échantillons analysés affiche une la figure 10. Les produits stockés à
matière grasse pour chaque boucher et teneur élevée, qui varie entre 22,2 % et 4 °C ne présentent pas de croissance
pour la totalité des échantillons analysés 22,8 %. Ce résultat similaire entre les en Listeria pour les deux souches
pour une région donnée apparaît dans deux régions et pour tous les produits testées, avec un maintien du taux de Science et
les figures 7 et 8. La teneur en matière
grasse est variable d’un boucher à un
analysés témoigne de la qualité nutri-
tionnelle des viandes hachées artisa-
départ, correspondant à un allonge-
ment de la phase de latence. Par
Technique
autre et même d’une région à une autre. nales. En effet, les analyses de routine contre les échantillons conservés à
En effet, dans la région 1, cette teneur au laboratoire des viandes hachées 8 °C permettent une croissance des
est proche de 3 %, alors qu’elle est industrielles montrent des teneurs deux souches, même si cette croissan-
autour de 2,4 % pour l’autre région. moyennes en protéines de l’ordre de 18 ce est lente et reste non significative
Cette teneur en matière grasse est très à 19 %, pour des produits à 15 % de (< à 0,5 log). Il est également observé
faible et peut poser des problèmes orga- matière grasse. Cette teneur est quasi- qu’à 8 °C, la souche isolée de la vian-
noleptiques des viandes hachées artisa- ment identique pour tous les échan- de bovine s’adapte mieux dans les
nales car de telles teneurs peuvent tillons analysés pour un boucher artisan produits dès les premières 24 h, alors
entraîner des problèmes de flaveur et de donné. que la souche de référence reste
moelleux des produits. constante et n’amorce sa croissance
qu’entre J1 et J4.
Comme pour le critère Col/P, cette ÉTAPE 2 : TESTS DE Comme le montre la figure 10, les
faible teneur en matière grasse est pro- CROISSANCE (CHALLENGES 3 modalités testées permettent une
bablement en relation avec le parage et TESTS) bonne extrapolation entre 4 °C et 8 °C
la nature des muscles employés. La car la courbe selon la norme (1/3 du
figure 10 montre en effet que le taux de Les résultats obtenus (moyenne des temps à 4 °C ; 2/3 du temps à 8 °C) se
matière grasse varie entre 2 % et 5 %. trois répétitions) pour chaque souche trouve bien située au milieu.
Enfin, la teneur en protéine représentée de Listeria (souche de terrain : a ou
dans la figure 9 montre que la totalité souche Pasteur : b), apparaissent dans Les résultats de l’évolution de
L. monocytogenes au cours du stocka-
ge en fonction de la température et du
Figure 9 : UNE BONNE QUALITÉ NUTRITIONNELLE mode de conditionnement montrent
que la température de stockage des
viandes présente un effet indéniable.
Il est clair qu’une chaîne de froid bien
maîtrisée ne permet pas la croissance
de L. monocytogenes et maintien
constant une éventuelle contamina-
tion. La température de 8 °C, corres-
pondant à un frigo ménager ou à une
chaîne de froid mal maîtrisée est
favorable au développement de
Listeria monocytogenes.

Il est également important de noter

que dans cette étape de tests de crois-
Résultats de la teneur en protéines pour la totalité des échantillons ana-
sance, des témoins non ensemencés
lysés, issus d’une région donnée
en L. monocytogenes ont été égale-
ment suivis dans les mêmes condi-
Figure 6 : LA TEMPÉRATURE DE STOCKAGE tions opératoires. Pour ces témoins
A UN RÔLE MAJEUR les résultats obtenus ont montré une
absence à tous les stades lors du stoc-
kage à 0/4 °C. Pour la température
7/8°C, dans certains cas, nous avons
noté une présence à J4, mais avec un
dénombrement qui est resté inférieur
à 100 germes/g de produit.
Traditionnellement, les tests de crois-
sance sont utilisés comme un outil de
décision complémentaire aux tests de
vieillissement pour évaluer la DLC
Jours
des produits. Cependant, la pertinen-
a : souche de terrain (isolée de viande hachée) ; b : souche de référence ce de ces tests (conditions de réalisa-
A : conservation selon la norme XP V01-003 tion, le nombre de points d’analyses,
B : conservation à une température constante de 0/4 °C le taux d’inoculum…) ne nous permet
C : conservation à une température constante de 7/8°C
pas d’extrapoler un résultat donné à
Évolution de la population de L. monocytogenes ensemencée une famille de produit. Il est impor-
dans la viande hachée artisanale, selon la nature de la souche tant de souligner que, depuis la réali-
et le régime de température appliqué sation de ce programme, l’avis de
l’Afssa a été révisé et s’est traduit par
la nouvelle note du 9 mars 2005.

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CONCLUSION De plus, l’examen des flores d’alté- (29/10/2001) sur les viandes
ration du type : Pseudomonas et hachées artisanales. De l’ensemble
Dans cette étude cofinancée par Entérobactéries sont également de ces résultats de cette deuxième
Science et l’Interbev et l’Ofival et menée par présentes à des taux non négli- étape on peut conclure que l’évolu-
Technique l’Adiv, les artisans bouchers sou-
haitaient évaluer la qualité micro-
geables dans les viandes hachées
artisanales et leurs taux ont tendan-
tion de la population de L. monocy-
togenes dépend de la température
biologique et biochimique de leurs ce à augmenter rapidement pendant de stockage et de la souche ense-
viandes hachées. Puis, dans un la durée du stockage. mencée. L. monocytogenes est un
deuxième temps, réaliser des tests germe psychrotrophe qui croit à des
de croissance sur ces mêmes Sur le plan biochimique, les basses températures. Cependant,
viandes. viandes hachées artisanales peu- une chaîne de froid bien maîtrisée
vent être également qualifiées de ne permet pas la croissance de ce
Les résultats de la première étape très bonne qualité, avec un taux du germe et maintient constante une
ont montré que sur le plan bactério- rapport collagène/protéines faibles, éventuelle contamination tout au
logique, les viandes hachées artisa- une très faible teneur en matière long de la durée du stockage, alors
nales présentent une bonne qualité. grasse et des teneurs en protéines qu’une chaîne de froid mal maî-
En effet, sur la quasi totalité des élevées. Même si le faible rapport trisée favorise la croissance de L.
produits analysés, nous avons noté Col/P et la basse teneur en matière monocytogenes.
une absence de micro-organismes grasse témoignent de la qualité
pathogènes (Listeria, Salmonelle et supérieure des produits sur le plan
Staphylococcus aureus), ainsi que technologique et nutritionnel, ces
des dénombrements inférieurs au très faibles teneurs peuvent jouer
seuil de détection (< 10 germes/g un rôle défavorable sur la qualité
de produit) pour le germe E. coli. organoleptique des produits.
Par contre, si on doit situer ces pro-
duits sur le plan réglementaire, à J0 Concernant la deuxième partie de
la charge de la flore totale ne serait l’étude, les challenges tests ont été
pas conforme et n’est donc pas en réalisés selon la méthodologie
faveur de ces produits. décrite dans l’avis de l’Afssa

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