République Algérienne démocratique et populaire

Ministère de l‘Enseignement Supérieur et de la Recherche

Scientifique Université des Sciences et de la Technologie Houari Boumediene

Faculté Des Sciences Biologiques

Département De Biologie Et Physiologie Des Organismes

Spécialité : Biotechnologies et Valorisation Des Plantes

Master : 1ére année

Année universitaire : 2023/2024

RAPPORT DE TRAVEUX PRATIQUE DU MODULE DE CYTOGENETIQUE

ET POLYPLOIDE
PAERTIE 1 : LA MITOSES
Sommaire :
I) Introduction générale.
II) Développement :

TP 01 : La Mitose.

1) But et objectif.
2) Résulta et discussions.

TP 02 : Dénombrement et observation des mitoses somatiques.

1) But et objectif.
2) Matérielle utilisé.
3) Protocole expérimentale.
4) Résulta.

TP 03 : Etude de la morphologie et types de chromosome.

1) But et objectif.
2) Interprétation d’une plaque métaphasique, du caryotype et de l’idiogrammes.
III) Conclusion générale.
IV) Référence bibliographique.
I) Introduction générale :
Les chromosomes végétaux sont des structures filiformes qui se trouvent dans le noyau des
cellules et qui contiennent l'information génétique sous forme de molécules d'ADN. Les
molécules d'ADN sont associées à des protéines nommées histones, qui permettent de
compacter l'ADN et de lui donner une structure organisée.

Le nombre, la taille et la forme des chromosomes végétaux varient selon les espèces de
plantes. Certains ont un seul chromosome par cellule, d'autres en ont plusieurs. Certains ont
des chromosomes linéaires, d'autres ont des chromosomes circulaires.

La fonction des chromosomes dans une cellule végétale est de transporter et de transmettre
l'information génétique. Ils jouent un rôle crucial dans la division cellulaire des plantes,
notamment dans des processus tels que la mitose et la méiose. Lors de la division cellulaire, les
chromosomes se répliquent puis se ségrégent en Cellules filles.

La mitose est une forme de division cellulaire qui permet aux organismes multicellulaires de
grandir, de se développer et de se réparer. Elle est un processus très contrôlé qui consiste à
copier et à répartir le matériel génétique pour former deux cellules filles identiques.

La mitose est importante pour préserver l'intégrité et la stabilité des informations génétiques d'un
organisme. Elle se déroule en plusieurs étapes : prophase, métaphase, anaphase, télophase et
cytokinèse. Chaque étape a des caractéristiques spécifiques et remplit une fonction clé dans le
processus global de la mitose.

La structure des chromosomes végétaux est un sujet fascinant d'étude en génétique, car elle
révèle les particularités et les complexités de l'hérédité végétale. Pour l’étudier on utilise
plusieurs techniques, mais dans notre étude on choisit le caryotype et l’idiogramme.

Le caryotype est une technique de laboratoire utilisée pour visualiser et analyser le nombre,
la taille et la forme des chromosomes dans les cellules d'un individu.

Un idiogramme est une image simplifiée d'un caryotype, qui montre la forme et la taille des
chromosomes. Les chromosomes sont classés par paires selon leur longueur et la position de
leur centromère, qui est le point d'attache des fibres du fuseau lors de la division cellulaire.
Un idiogramme permet d'analyser la structure et le nombre des chromosomes, et de détecter
d'éventuelles anomalies chromosomiques.
III) Développement :
TP 01 : La Mitose

 Le noyau des cellules végétales contient la molécule d'ADN qui porte l'information
génétique des plantes est organisée en structures appelées chromosome dont le nombre
dépend de l'espèce. Ils sont invisibles quand la cellule n'est pas en train de se diviser.
 Ces chromosomes sont formés par l'enroulement de l'ADN autour de petites boules de
protéines (histones). Quand la cellule végétale commence à se diviser, on l'appelle la
mitose, La mitose est responsable de la croissance et du développement de tissus
végétaux.
 Pendant la division, la chromatine va se compacte davantage pour donner des
chromosomes qui sont visibles au microscope photonique. Ils sont composés de deux
chromatides génétiquement identiques unies par le centromère, qui va se détachée en
deux, pour que chaque chromatide se sépare et va dans une cellule-fille.
 Les stades de la mitose sont : interphase, prophase, métaphase, anaphase et la
télophase.
 Le nombre de chromosomes dans les cellules végétales peut varier selon les espèces.
Différentes plantes ont des nombres différents de chromosomes, qui peuvent varier de
cinq à plus de 201. Selon les espèces.
 Exemple 1 : Prospero oblusi folium de la famille des hyacinthaceae, une espèce
diploïde a 2n=2x=8.
 Exemple 2 : Dactylis glomerata de la famille poaceae est une espèce tétraploïde a
2n=4x=28.

1) But et objectif :
 Observation des stades de la mitose au microscope photonique.
 Décrire en détail chaque différent stade de la division cellulaire (la mitose).

2) Résulta et discussion :

Observation des stades de la mitose au microscope photonique :

a. L'interphase :
  L'interphase est la première étape du cycle cellulaire, qui permet à la cellule de se
préparer à se diviser.
 La cellule réalise plusieurs processus pendant l'interphase, comme la duplication de
l'ADN et l'augmentation de sa taille, voire (figure 01).
 La chromatine, qui est le matériel génétique de la cellule, commence à se compacter et
à former des structures séparées nommées chromosomes.
 Les chromosomes portent l'information génétique de la cellule et sont essentiels pour
la bonne répartition du matériel génétique pendant la mitose.

Figure 01 : Observation de la mitose au stade de l'interphase chez une cellule végétale

(racine d’un bulbe d’oignon). ×40

b. La prophase :
 La prophase est la première étape de la mitose, le processus de division cellulaire.
 La chromatine, qui est l'ensemble des molécules d'ADN et de protéines, se compacte
et forme des chromosomes visibles au microscope. Voire (figure 02).
 L'enveloppe nucléaire, qui protège le noyau de la cellule, se désintègre et libère les
chromosomes dans le cytoplasme.
 Les centrioles, qui sont des organites impliqués dans l'organisation du cytosquelette,
migrent vers les pôles opposés de la cellule et produisent des fibres du fuseau.
 Les fibres du fuseau sont des filaments qui vont attacher les chromosomes et les
séparer lors des étapes suivantes de la mitose.
Figure 02 : Observation de la mitose au stade de prophase chez une cellule végétale (racine
d’un bulbe d’oignon). ×40

c. La métaphase :
 Les chromosomes se positionnent au milieu de la cellule, formant la plaque
équatoriale. Voire (figure 03). Cette disposition assure que les deux cellules filles
héritent du même nombre de chromosomes après la division cellulaire.
 Les fibres du fuseau, qui proviennent des centrioles, se lient aux centromères des
chromosomes et les stabilisent. Cette organisation est essentielle pour la séparation
correcte du matériel génétique aux cellules filles.

Figure 03 : Observation de la mitose au stade de métaphase chez une cellule végétale (racine
d’un bulbe d’oignon). ×40

d. L’anaphase :
 L'anaphase est l'étape où les chromatides sœurs se séparent et migrent vers les pôles de
la cellule, leur séparation est assurée par les fibres du fuseau, qui se contractent et les
tirent par les centromères. Voire (figure 04).
  Cette étape assure que chaque cellule fille reçoit un jeu complet et égal de
chromosomes. L'anaphase est une étape où les chromosomes apparaissent comme des
fils étirés et mobiles.

Figure 04 : Observation de la mitose au stade de l'anaphase chez une cellule végétale (racine
d’un bulbe d’oignon). ×40

e. La télophase :
 La mitose se termine par la télophase, où les chromosomes se regroupent aux
extrémités de la cellule.
 Deux enveloppes nucléaires se forment autour des chromosomes, créant deux noyaux
séparés.
 Les chromosomes se relâchent et redeviennent de la chromatine. La cytokinèse divise
le cytoplasme en deux cellules filles.

TP 02 : Dénombrement et observation des mitoses somatiques.

 La mitose est la division cellulaire qui produit deux cellules identiques à partir d'une
cellule mère. Elle se déroule en quatre phases : prophase, métaphase, anaphase et
télophase assurent la continuité du patrimoine génétique et la stabilité du nombre de
chromosomes dans les cellules somatiques.
 La mitose est essentielle pour le développement embryonnaire, la croissance des
tissus, et la régénération des cellules.
1. But et objectif :
 Dénombrement de la cellule végétative pour observer les chromosomes sous le
microscope photonique dans toute les phase de la mitose.

2. Matérielle utilisé :
 Matérielle végétale : un bulbe d’oignon d’Allium cepa et de Narcissus pachybolbus,
 Lame et lamelle.
 Boite de pétrie et bicher.
 Pince.
 L’alcool.
 Bain marie.
 Eau distillée.
 Le réactif de Schiff.
 Carmin acétique.

3. Protocole expérimentale : (technique de Feulgen)

 Les dénombrements chromosomiques sont effectués au niveau de méristèmes
racinaires d’un bulbe d’oignon d’Allium cepa et de Narcissus pachybolbus, qui sont
des tissus végétaux en division active.
 Pour prétraiter les radicules de 5 mm, les plonger dans une solution saturée d'u-
bromonaphtalène pendant 2 heures à la température ambiante ou 10 heures à 4°C
selon les espèces.
 Le prétraitement avec un poison du fuseau achromatique (colchicine, a-
bromonaphtalène...) provoque la dépolarisation des microtubules et bloque les cellules
en métaphase. La condensation chromosomique n'est pas affectée par le prétraitement.
 La fixation consiste à préserver les structures cellulaires et tissulaires en les rendant
insolubles et résistantes aux traitements ultérieurs. Elle est réalisée soit directement
dans l'alcool à 70° après un rinçage dans l'alcool à 90° pour éliminer l'excès d'a-
bromonaphtalène, soit dans un mélange d'alcool acétique 3 :1. Cette méthode permet
de fixer les tissus vivants, à 4°C, sans les ne déshydrater ni les durcir.
 Stockage et conservation : la conservation suit la fixation, les racines sont stockées au
froid dans le fixateur dans 70% d’alcool acétique.
 Hydrolyser les pointes racinaires en les trempant dans une solution 2 M de HCl à 60
°C pendant 2 à 7 minutes au bain marie. Voire (figure 05).

Figure 05 : bain marie

 Rincer les pointes racinaires à l'eau distillée pour éliminer l'excès d'acide. Voire figure
06.

Figure 06 : rinçage des racines un bulbe d’oignon d’Allium cepa.

 L'hydrolyse acide permet de rompre les liaisons glucidiques des bases puriques et de
libérer des groupements aldéhydes, qui réagiront avec le réactif de Schiff.
 La coloration se fait dans le réactif de Schiff pendant 30 à 60 minutes, à température
ambiante mais à l'obscurité. La coloration de la chromatine est obtenue par réaction du
réactif de Schiff sur les groupements aldehydes.
 Les racines sont ensuite plongées dans de l'eau distillée pendant 5 à 10 minutes pour
augmenter le contraste entre chromosomes et cytoplasme.
 Le montage est fait entre lame et lamelle dans une goutte de carmin acétique ou bien
dans de l'acide acétique à 45%. Une fois le squash réalisé, les observations sont faites
au microscope photonique. Voire figure 07.
 Figure 07 : préparation des lamelles

4. Résulta :

Observation des stades de la mitose au microscope photonique :

a. L'interphase : voire figure 08.

Figure 08 : Observation de la mitose au stade de l'interphase chez une cellule végétale

(racine d’un bulbe d’oignon). ×40

b) La prophase : voire figure 09.

Figure 09 : Observation de la mitose au stade de prophase chez une cellule végétale (racine
d’un bulbe d’oignon). ×40

c. La métaphase : voire figure 10.

Figure 10 : Observation de la mitose au stade de métaphase chez une cellule végétale (racine
d’un bulbe d’oignon). ×40

d. L’anaphase : voire figure 11.

Figure 11 : Observation de la mitose au stade de l'anaphase chez une cellule végétale (racine
d’un bulbe d’oignon). ×40

e. La télophase : voire figure 12.

Figure 12 : Observation de la mitose au stade de l'anaphase chez une cellule végétale (racine
d’un bulbe d’oignon). ×40

TP 03 : Etude de la morphologie et types de chromosome.

 Le centromère est la région du chromosome qui se rétrécit lors de la division
cellulaire, il permet l'attachement des fibres du fuseau qui séparent les chromatides.
 La position du centromère détermine la forme du chromosome et sa classification en
quatre types : métacentrique, submétacentrique, acrocentrique et télomérique. Grace
au formule et paramètre pour réaliser un idiogramme Le rapport des longueurs des
bras : r= BL/BC. L’indice centromérique : I=BC/LT*100.

1) But et objectif :
 Déterminer la morphologie et la forme des chromosomes chez l’espèce d Allium cepa.
 L'espèce d’Allium cepa présente 2n=2x=16, donc c’est une espèce diploïde. Le
nombre total des paires chromosomiques est de 8 paires. Voir tableau 01.

Paire 1 3 4 Paire 5 2 13
12 10 15 5
Paire 2 5 14 Paire 6 15 7
16 9 8 4
Paire 3 10 12 Paire 7 1 16
 8 3 13 14
Paire 4 9 11 Paire 8 8 6
11 1 7 6
Tableau 01 : 8 paires chromosomique

2) Interprétation d’une plaque métaphasique, du caryotype et de l’idiogrammes :

Figure 13 : plaque métaphasique d’Allium cepa 2n=2x=16 (individu 1)

Caryotype de l’individu 1
 Figure 09 : plaque métaphasique d’Allium cepa 2n=2x=16 (individu 2)

Caryotype de l’individu 2

Figure 14 : Représentation de l’idiogrammes d’Allium cepa de deux individus différents.

III) Conclusion générale :
L'analyse cytogénétique des chromosomes permet de connaître le niveau de ploïdie du
matériel analysé. La morphologie des chromosomes dépend de plusieurs facteurs : longueur,
position du centromère, existence ou non de satellites ou de structures secondaires.

La mitose est le processus par lequel les cellules se divisent et se reproduisent. Elle permet
de maintenir le nombre de chromosomes constant dans les cellules filles, qui sont
génétiquement identiques à la cellule mère. La mitose est essentielle pour la croissance, le
développement, la réparation et le renouvellement des tissus chez les organismes
multicellulaires. Elle se déroule en plusieurs étapes : la prophase, la métaphase, l'anaphase et
la télophase, suivies par la cytokinèse. Chaque étape implique des changements
morphologiques et moléculaires au niveau du noyau et du cytoplasme des cellules.

Les chromosomes des plantes sont des entités linéaires qui assurent la structuration et la
conservation du patrimoine génétique végétal. Leur morphologie, leur organisation et leur
coloration sont des aspects fondamentaux pour plusieurs branches de la science végétale,
telles que la génétique, la cytogénétique et le mappage génétique. En analysant les
chromosomes des plantes, on comprend mieux les processus complexes impliqués dans la
croissance, le développement et l'évolution des plantes.
V) Référence bibliographique :
Structure des chromosomes végétaux : 7 faits à connaître - (lambdageeks.com)

Étapes de la mitose : un guide complet pour comprendre la division cellulaire -

(lambdageeks.com)