Rapport de laboratoire

Expérience : Analyse spectrophotométrique de solutions de KMnO4

Objectifs:
i. Détermination de la longueur d'onde de l'absorbance maximale
ii. Vérification de la bière loi de Lambert

Introduction :
Un spectrophotomètre est un instrument qui mesure la quantité de photons (l'intensité de la lumière)
absorbés après son passage dans la solution de l'échantillon. Avec le spectrophotomètre, la quantité
d'une substance chimique connue (concentrations) peut également être déterminée en mesurant
l'intensité de la lumière détectée. Selon la gamme de longueurs d'onde de la source lumineuse, elle
peut être classée en deux types différents :
Spectrophotomètre UV-visible : utilise la lumière dans le domaine de l'ultraviolet (185 - 400 nm)
et du visible (400 - 700 nm) du spectre des rayonnements électromagnétiques.
Spectrophotomètre IR : utilise la lumière dans la gamme infrarouge (700 - 15000 nm) du spectre
de rayonnement électromagnétique.
En spectrophotométrie visible, l'absorption ou la transmission d'une certaine substance peut être
déterminée par la couleur observée. Par exemple, un échantillon de solution qui absorbe la
lumière dans toutes les gammes visibles (c'est-à-dire qui ne transmet aucune des longueurs
d'onde visibles) apparaît noir en théorie. D'autre part, si toutes les longueurs d'onde visibles sont
transmises (c'est-à-dire qu'elles n'absorbent rien), l'échantillon de solution apparaît blanc. Si un
échantillon de solution absorbe la lumière rouge (~700 nm), il apparaît vert car le vert est la
couleur complémentaire du rouge. Les spectrophotomètres visibles utilisent un prisme pour
réduire une certaine gamme de longueurs d'onde (pour filtrer les autres longueurs d'onde) afin
que le faisceau de lumière particulier passe à travers un échantillon de solution.

Beer-Lambert Law

La loi de Beer-Lambert (également connue sous le nom de loi de Beer) stipule qu'il existe une
relation linéaire entre l'absorbance et la concentration d'un échantillon. Pour cette raison, la loi de
Beer ne peut être appliquée que lorsqu'il existe une relation linéaire. La loi de la bière s'écrit
comme suit :

A= Ɛ. L. C
 A : est la mesure de l'absorbance (pas d'unités),
 Ɛ : est le coefficient d'extinction molaire ou absorptivité molaire (ou coefficient d'absorption)
L : est la longueur du chemin

 C : est la concentration.
Le coefficient d'extinction molaire est donné comme une constante et varie pour chaque
molécule. L'absorbance ne porte pas d'unités. Étant donné que l'absorption, l'epsilon et la
longueur du trajet sont connus, nous pouvons calculer la concentration c de l'échantillon.
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Rapport de laboratoire

Appareil:
 Tubes à essai, support de tube à essai, éprouvette de mesure, pipette, erlenmeyer,
spectrophotomètre
Produits chimiques requis :
 KMnO4
 Eau
Procédure:

1. Préparation de 100 mL d'une solution étalon mère de 0,001 M KMnO4. Peser avec précision
126 mg de KMnO4 solide. Transférer quantitativement dans une fiole jaugée de 100 mL et
remplir d'eau jusqu'au repère. C'est la solution stock.

2. Préparer six étalons dans une fiole jaugée de 100 mL avec des concentrations de 0,0004 M
(solution #1), 0,0002 M (solution #2), 0,0001 M (solution #3) et 0,00005 M (solution #4)
en diluant la solution mère préparée à l'étape 1 et c'est ce qu'on appelle la dilution en série.

3. Rincez l'une des cuvettes avec de l'eau distillée et remplissez-la d'eau. Mettre la cuvette dans
l'échantillon

Compartiment. C'est la solution de référence. Réglez la longueur d'onde sur 400 nm, puis
réglez l'absorbance sur zéro.

4. Rincez une deuxième cuvette une fois avec de l'eau distillée et une fois avec la solution
étalon #1, puis remplissez-la avec la solution étalon #1 (0,001M KMnO4). Placez la
cellule dans le compartiment à échantillons, mesurez l'absorbance à 410.

5. Répétez cette procédure (étapes 3 et 4 ci-dessus) pour les deux cuvettes aux longueurs d'onde 420,
430,440,

450.......600 nm. D'abord régler A = 0 pour la cuvette avec de l'eau, puis mesurer A pour la
cuvette avec 0,001 M KMnO4, en enregistrant l'absorbance à chaque longueur d'onde.
Enregistrer dans le tableau de données.

6. Préparez un graphique de l'absorbance A en fonction de la longueur d'onde λ et déterminez λmax

(longueur d'onde maximale).

7. Réglez la longueur d'onde à 550 nm (λmax). Placez la cuvette avec de l'eau distillée dans le
compartiment de la cellule et réglez à nouveau l'absorbance à zéro.

8. Mesurez et enregistrez l'absorbance de chacune des six solutions étalons, en commençant

par l'étalon le plus dilué. Après chaque mesure, rincez la cuvette avec l'étalon suivant, et
non avec de l'eau distillée.

9. Dessinez un tracé dont l'axe X est la concentration (mole/L) et l'axe Y l'absorbance à λmax
(550 nm).

10. Utilisez la loi de Beer pour calculer ε de KMnO4, étant donné que la largeur de la cellule
(longueur du chemin l) est de 1 cm.
 Fig. : Spectrophotométrie UV

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Observations et calculs
Le spectre d'absorption de KMnO4 :

S. Longueur d'onde (nm) Absorbance

#
1 410 0.056
2 420 0.033
3 430 0.037
4 440 0.077
5 450 0.237
6 460 0.239
7 470 0.401
8 480 0.585
9 490 0.940
10 500 1.173
11 510 1.616
12 520 1.751
13 530 2.10
14 540 1.81
15 550 2.019
16 560 1.287
17 570 1.168
18 580 0.686
19 590 0.311
20 600 0.217
 Absorption Spectrum of KMnO4
2.5
Absorbance

1.5

0.5

0
0 100 200 300 400 500 600 700
Wavelength (nm)

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Rapport de laboratoire

Absorbance des solutions à différentes concentrations :

À λmax = 550 nm

S. # Concentrations Absorbance
(M)
1 2.5×10-5 0.033
2 0.00005 0.186
3 0.0001 0.352
4 0.0002 0.531
5 0.0004 0.665
6 0.001 2.019
 Absorbance Vs Concentration
0.8
0.7
y = 0.1609x - 0.1293
0.6
R² = 0.9983
0.5
Absorbance A 0.4

0.3
0.2
0.1
0

0 1 2 3 4 5 6
Concentration (mol/L)

Résultat:
Le résultat de l'expérience montre que plus la concentration est grande, plus l'absorbance sera grande.
La valeur de l'absorbance augmente à mesure que l'on augmente la concentration de KMnO 4 à
λmax, c'est-à-dire qu'elle est égale à 550 nm. Le résultat de l'expérience permet de vérifier la loi
de Beer Lambert.

Discussion:
Sur le graphique, la ligne de tendance ne passe pas exactement par zéro. C'est comme prévu, cela
peut être dû aux statistiques du point de données, qui ne sont pas exactement sur la ligne droite
en raison d'erreurs aléatoires dans la concentration et/ou la lecture de l'absorbance, ou au fait
qu'il reste une absorbance de solution (par rapport au blanc) pour les étalons. Enfin, la pente de la
ligne de tendance est le coefficient d'extinction molaire (absorption molaire). L'équation y =
0,1609x - 0,1293 pour cette application doit être lue comme suit : A= ε.C +constante, avec la
constante = ordonnée à l'origine.

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