Compte Rendu Biologie Moléculaire
Compte Rendu Biologie Moléculaire
Compte Rendu Biologie Moléculaire
Boumediene (USTHB)
Faculté des Sciences Biologiques (FSB)
Département de Biologie Cellulaire et Moléculaire (BCM)
Compte rendu
Licence L3 biochimie
- Réalisé par :
Matériel utilisé :
10ml de TRIS 1M 20ml EDTA 0.5M On complète avec 970ml Solution de Lyse des
d’eau distillé globules rouges
SLB : (Solution de lyse des globules blancs)
Dans une éprouvette graduée (1000ml),
On ajoute :
10ml de TRIS 1M 10ml de EDTA 0.5m On complète avec 980ml Solution de Lyse des
1M d’eau distillé globules blanches
- Répéter les lavages (les deux étapes précédentes) (3 lavages faits) jusqu'à
obtention d'un culot clair sans globules rouges.
Lyse des GB:
- Resuspendre le culot dans 3ml de solution de lyse des globules blancs (SLB) et
vortexer
- On ajoute :
- Incubation toute une nuit à 37°C dans un bain marie sous agitateur ou à 65°C
pendant 3H. (Pour un résultat plus rapide on la incubé pendant 1heure)
Centrifuger 5
- Vérifier la présence de protéines au fond du tube et transférer leminutes
surnageant
à
dans un nouveau tube. 2000tour/min à
Précipitation de l'ADN + 4°C.
- Ajouter :
Agiter
3ml de NaCl doucement, la
2 volumes
d’Ethanol absolu méduse
100% glacé commence à
(-20°C) apparaitre
(-20°C)
Créer des puits avec une peigne et laisser 20min jusqu’à la polymérisation.
Préparation d’échantillons :
On réalise les tubes d’ADN pour l’amplification par le thermocycleur,
Dans
d’Ep
On mets :
- ADN (20- 50
g/l) →
1l
- dNTPs →
5l H₂O → 20l
- Amorce sens et anti-sens → 2l/amorce
- Taq Polymérase → 1l MgCl₂ → 2l
- Cycle de
PCR :
- Pré
dénaturation à 95°C → 3minutes