Synthèse Des Nanoparticules D'argent Par Méthode Biologique Pour Des Applications Antibactériennes Et Photocatalytiques

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REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE EPOPULAIRE

MINISTERE DE L'ENSEIGNEMENT SUPERIEUR

ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

UNIVVRSITÉ KASDI MERBAH OUARGLA

Faculté des sciences appliquées

Département de Génie des procédés

Mémoire

MASTER ACADEMIQUE

Domaine : Sciences et Technologies


Filière : Génie des procédés
Spécialité : Génie chimique
Présenté Par :

BOULKOUMANE Kenza & MOUISSI Firdous Madjda

Thème:

Synthèse des nanoparticules d’argent par


méthode biologique pour des applications
antibactériennes et photocatalytiques

Soutenu publiquement le : 26/06/2021

Devant le jury composé de :

Mr HENNI Abdellah MCA (UKM Ouargla) Président


Mr ACHI Fethi MCA (UKM Ouargla) Examinateur
Mr SELLOUM Djamel MCA (UKM Ouargla) Encadreur

Année Universitaire : 2020/2021


Remerciements
Tout au long de ce cycle universitaire après de gros efforts et de
persévérance de la part de tous ceux qui nous ont accompagné, aidé, encouragé et
encadré, nous tenons à exprimer notre profonde gratitudes et remerciements à :

Dieu le tout puissant de nous avoir donné la santé et la volonté pour


réaliser ce travail.

Nous tenons particulièrement à adresser nos remerciements à Monsieur


SELLOUM Djemal notre promoteur, pour avoir dirigé ce travail et accepter de
nous encadrer, conseiller et de nous orienter dans cette démarche scientifique.

Nous remercions également Monsieur HENNI Abdellah d'avoir Accepté


la présidence du jury de notre travail, c’est également un grand honneur pour
nous d'être jugé par vous.

Nous tenons à exprimer notre reconnaissance envers ACHI Fethi d'avoir


accepté d'examiner notre mémoire. Nous aimerions exprimer notre gratitude et
nos remerciements à tous les membres de jury.

Nous tenons à remercier Monsieur BOURICHA M’hamed pour nous aider


dans la partie biologique de cette étude.

Nos remerciements vont aussi à tous les membres de l'équipe de laboratoire


CRAPC de l’Université Kasdi Merbah Ouargla. En particulier à son chef
Monsieur BELKHALFA Hakim de nous avoir accueillis au sein du laboratoire.
Dédicace
Je dédie ce travail modeste :
À mes chers parents pour tout leur sacrifice, leur amour, leur
tendresse, soutien et leurs prières tout au long de ma vie scolaire et
universitaire. Vous êtes le pilier solide et incontournable en mon
parcours, que Dieu vous donne la santé et la vie
À ma chère sœur Boutheina qui m'a aidé à surmonter les difficultés
que j'ai rencontrées au cours de ce travail. Elle m'a énormément
soutenu
À mon adorable sœur Nour El-Houda pour ses encouragements et
son soutien indéfectible
À mon binôme Firdous et mon amie Amina
Vous avez tous contribué à m'aider et à m'encourager, vous avez
toujours fait et ferez toujours partie de ma vie. A tous, du fond du
cœur je dédie ce travail

Kenza
Dédicace
Je dédie ce travail modeste:
À mon très cher père
À ma très chère mère lumière de ma vie, source d’amour et de qui
grâce à luit je suis arrivé à ce stade
Soutien éternel
À ma grand-mère deuxième maman
À mon frère : Fares
À ma sœur : Louiza
À mes ami(e)s
A vous toutes/tous, et plus spécialement Kenza, ma copine au travail,
Amina, Isra et Anfel
Comme signe de notre profonde amitié

Firdous
Liste des tableaux
Tableau I. 1: Quelques avantages et inconvénients des nanoparticules. ..................................... 13
Tableau I. 2: Quelques recherches sur la synthèse de nanoparticules à l'aide des plantes. ......... 18
Tableau I. 3: Quelques recherches sur la synthèse des nanoparticules à l'aide de
microorganismes. .......................................................................................................................... 19
Tableau I. 4: Avantages et inconvénients des différentes techniques de synthèse des
nanoparticules................................................................................................................................ 24
Tableau I. 5: Applications des nanoparticules d‘argent dans des différents secteurs. ................. 28
Tableau I. 6: Propriétés physiques et chimiques du colorant de bleu de méthylène. .................. 32
Tableau II. 1: Taxonomie de Pseudomonas aeruginosa. ............................................................ 59
Tableau II. 2: Taxonomie de Listeria monocytogenes. ............................................................... 60
Tableau II. 3: Taxonomie d‘Escherichia coli. ............................................................................. 61
Tableau II. 4: Taxonomie de Bacillus subtilis . ........................................................................... 62
Tableau II. 5: Sensibilité des souches microbiennes en fonction des zones d‘inhibition............ 63
Tableau III. 1: Zone d'inhibition des nanoparticules d‘argent contre diverses bactéries
pathogènes. .................................................................................................................................... 79

I
Liste des figures
Figure I. 1: Différentes tailles de matière. ..................................................................................... 8
Figure I. 2: Exemples de matériaux naturels et biologiques contenant des particules
nanoscopiques. .............................................................................................................................. 11
Figure I. 3: Synthèse des nanomatériaux (NPs) VIA approches top-down et bottom-up............ 14
Figure I. 4: Différentes méthodes de synthèse des nanoparticules. ............................................. 15
Figure I. 5: Synthèse de nanoparticules à partir d'extrait végétal . .............................................. 17
Figure I. 6: Voie écologique et bon marché pour la synthèse verte de nanoparticules à l'aide
d'extraits de plantes. ...................................................................................................................... 18
Figure I. 7: a) Tableau périodique des éléments qui ont été synthétisés par des bactéries ; b)
Représentation schématique de la synthèse bactérienne des NPs ; les processus intracellulaire et
extracellulaire sont inclus. ............................................................................................................. 21
Figure I. 8: Schéma général de synthèse de nanoparticules de métaux par des micro-organismes.
....................................................................................................................................................... 24
Figure I. 9: Pépite d'argent. .......................................................................................................... 26
Figure I. 10: a) Résonance plasmonique de surface (SPR) pour les AgNPs à une longueur d'onde
spécifique ; b) Image de microscopie en champ noir des AgNPs. ................................................ 27
Figure I. 11: Différents semi-conducteurs avec leur valeur de potentiel redox. .......................... 30
Figure I. 12: Mécanisme global de la photocatalyse par photocatalyseur à semi-conducteur. .... 31
Figure I. 13: Structure chimique du bleu de méthylène. .............................................................. 32
Figure I. 14: Système d'oxydoréduction réversible du bleu de méthylène et du bleu de
leucométhylène.............................................................................................................................. 32
Figure I. 15: Mécanismes de l'activité antibactérienne des nanoparticules. ................................ 35
Figure I. 16: Mécanismes de résistance aux antimicrobiens et actions des nanoparticules. ........ 36
Figure II. 1: Etapes de synthèse de nanoparticules d‘argent. ...................................................... 54
Figure II. 2: Etapes de séchage de nanoparticules d‘argent. ........................................................ 55
Figure II. 3: Pseudomonas aeruginosa sous microscope électronique........................................ 58
Figure II. 4: Image de Listeria monocytogenes: (A) Observation de Listeria monocytogenes par
microscope optique, (B) Observation de Listeria monocytogenes par microscope électronique. 59
Figure II. 5: Escherichia coli sous microscope électronique. ...................................................... 60
Figure II. 6: a) Coloration de Gram de Bacillus subtilis ; b) B. subtilis vue sous microscopie
électronique. .................................................................................................................................. 61
Figure II. 7: Etapes de l‘activité antibactérienne des nanoparticules d‘argent. ........................... 63

II
Figure III. 1: a) Intensité de couleur des nanoparticules d'argent synthétisées par Pseudomonas
aeruginosa ; b) Spectre UV-visible de nanoparticules d'argent synthétisées................................ 68
Figure III. 2: Représentation schématique de la synthèse de nanoparticules d'argent à partir
d'ions argent en forme réduite d'atome d'argent par l'activité de l'enzyme nitrate réductase. ....... 69
Figure III. 3: Poudre de nanoparticules d‘argent. ........................................................................ 69
Figure III. 4: a) Changement de couleur en fonction de pH ; b) Effet du pH sur la synthèse des
nanoparticules d‘argent. ................................................................................................................ 70
Figure III. 5: a) Changement de couleur en fonction de concentration de nitrate d‘argent ; b)
Effet de la concentration en ions nitrate d‘argent sur la biosynthèse des nanoparticules d'argent.
....................................................................................................................................................... 71
Figure III. 6: a) Changement de couleur en fonction de temps d‘incubation ; b) Effet du temps
d‘incubation sur la biosynthèse des nanoparticules d'argent. ........................................................ 72
Figure III. 7: a) Changement de couleur en fonction du rapport de volume ; b) Effet du rapport
de volume sur la biosynthèse des nanoparticules d'argent. ........................................................... 73
Figure III. 8: a) Changement de couleur en fonction de l‘agitation ; b) Spectre UV-vis des
AgNPs en fonction de l‘agitation et sans agitation. ...................................................................... 74
Figure III. 9: a) Changement de couleur en fonction de lumière et l‘obscurité ; b) Spectre UV-
vis des nanoparticules d‘argent en fonction de lumière et l‘obscurité. ......................................... 75
Figure III. 10: Changement de couleur en fonction d‘aération. .................................................. 76
Figure III. 11: a) Observation visuelle du changement de couleur du bleu de méthylène à
l'incolore à différents intervalles de temps ; b) Spectres d'absorption d'une solution aqueuse de
bleu de méthylène traitée avec 10 mg de nanoparticules d'argent synthétisées en utilisant P.
aeruginosa à différents intervalles de temps. ................................................................................ 77
Figure III. 12: Dégradation du bleu de méthylène (%) par des nanoparticules d'argent
synthétisées (30 mg). ..................................................................................................................... 78
Figure III. 13: Activité antibactérienne des nanoparticules d'argent contre diverses souches
bactériennes pathogènes. ............................................................................................................... 79

III
Liste des abréviations
Ag Argent
Ag+ Ion d‘argent
AgNO3 Nitrate d‘argent
AgNPs Nanoparticules d‘argent
Au Or
h Heure
IR Infrarouge
mg Milligramme
mM Milimolaire
NADH Nicotinamide adénine dinucléotide (NAD) + hydrogène (H)
nm Nanomètre
NPs Nanoparticules
pH potentiel d‘Hydrogène
PUF Particules ultrafines
SPR Résonance plasmonique de surface
tr Tour
UV Ultra-violet
Vis Visible
ZnO Oxyde de zinc
°C Degré Celsius
μ Micro
μl Microlitre
µm Micromètre
% Pourcentage

IV
Table des matières

Liste des tableaux .............................................................................................................................I


Liste des figures ............................................................................................................................. II
Liste des abréviations ....................................................................................................................IV
Table des matières .......................................................................................................................... V
Introduction générale .................................................................................................................... 1

Chapitre I. Généralités
I.1. Nanomètre ............................................................................................................................... 7

I.2. Nanomonde .............................................................................................................................. 8

I.3. Nanoscience ............................................................................................................................. 8

I.4. Nanotechnologie ...................................................................................................................... 9

I.5. Nanomatériaux ........................................................................................................................ 9

I.6. Nanoparticules ...................................................................................................................... 10

I.6.1. Sources de nanoparticules ................................................................................................ 10


I.6.1.1. Sources naturelles ...................................................................................................... 11
I.6.1.2. Sources anthropiques ................................................................................................. 12
I.6.1.2.1. Nanoparticules accidentelles. .............................................................................. 12
I.6.1.2.2. Nanoparticules artificielles ................................................................................. 12
I.6.2. Avantages et inconvénients des nanoparticules ............................................................... 13
I.6.3. Méthodes de synthèse des nanoparticules ........................................................................ 14
I.6.3.1. Méthodes physiques et chimiques de synthèse des nanoparticules ........................... 15
I.6.3.2. Méthodes biologiques (Synthèse verte) ..................................................................... 16
I.6.3.2.1. Plantes ................................................................................................................. 16
I.6.3.2.2. Microorganismes................................................................................................. 19
a) Bactéries.................................................................................................................. 20
b) Champignons .......................................................................................................... 21
c) Levures.................................................................................................................... 22
d) Algues ..................................................................................................................... 22
e) Actinomycètes ........................................................................................................ 23
I.6.3.2.2.1. Mécanismes de formation des nanoparticules par les microorganismes...... 23

V
I.7. Nanoparticules d’argent ....................................................................................................... 25

I.7.1. Présentation générale de l‘argent...................................................................................... 25


I.7.2. Nanoparticules d‘argent.................................................................................................... 26
I.7.2.1. Propriétés des nanoparticules d‘argent ...................................................................... 26
I.7.2.1.1. Propriétés optiques .............................................................................................. 26
I.7.2.1.2. Structures cristallines .......................................................................................... 27
I.7.2.1.3. Propriétés thermiques.......................................................................................... 27
I.7.2.1.4. Propriétés catalytiques ........................................................................................ 27
I.7.2.2. Applications des nanoparticules d‘argent .................................................................. 28
I.8. Photocatalyse ......................................................................................................................... 29

I.8.1. Généralités sur la photocatalyse ....................................................................................... 29


I.8.2. Photocatalyseurs ............................................................................................................... 29
I.8.3. Mécanisme de photocatalyse ............................................................................................ 30
I.8.4. Structure et propriétés de bleu de méthylène ................................................................... 31
I.9. Activité antibactérienne des nanoparticules ...................................................................... 33

I.9.1. Mécanisme ........................................................................................................................ 34


I.10. Recherche bibliographique sur les nanoparticules d'argent .......................................... 36

Références bibliographiques ......................................................................................................... 39


Chapitre II. Matériels et Méthodes
II.1. Lieu et durée de l’étude ...................................................................................................... 53

II.2. Matériel biologique ............................................................................................................. 53

II.2.1. Origine de souches utilisées ............................................................................................ 53


II.3. Méthodes .............................................................................................................................. 53

II.3.1. Synthèse des nanoparticules d‘argent ............................................................................. 53


II.3.1.1. Séchage de la solution de nanoparticules d‘argent ................................................... 55
II.3.2. Optimisation de divers paramètres opérationnels .......................................................... 56
II.3.2.1. Effet du pH ............................................................................................................... 56
II.3.2.2. Effet de concentration .............................................................................................. 56
II.3.2.3. Effet de temps d‘incubation ..................................................................................... 56
II.3.2.4. Effet du rapport de volume....................................................................................... 57
II.3.2.5. Effet d‘agitation, de lumière et d‘aération ............................................................... 57
II.3.3. Dégradation du bleu de méthylène .................................................................................. 57
VI
II.3.3.1. Principe..................................................................................................................... 57
II.3.4. Evaluation de l‘activité antibactérienne .......................................................................... 58
II.3.4.1. Taxonomie et caractéristiques des souches bactériennes testées ............................. 58
II.3.4.1.1. Pseudomonas aeruginosa .................................................................................. 58
II.3.4.1.2. Listeria monocytogenes ..................................................................................... 59
II.3.4.1.3. Escherichia coli ................................................................................................. 60
II.3.4.1.4. Bacillus subtilis.................................................................................................. 61
II.3.4.2. Milieux de cultures utilisés ...................................................................................... 62
II.3.4.3. Détermination de l'activité antibactérienne par la méthode de diffusion ................. 62
Références bibliographiques ......................................................................................................... 64
Chapitre III. Résultats et discussion
III.1. Synthèse de nanoparticules d'argent ............................................................................... 67

III.2. Optimisation de divers paramètres opérationnels.......................................................... 70

III.2.1. Effet du pH..................................................................................................................... 70


III.2.2. Effet de concentration .................................................................................................... 71
III.2.3. Effet de temps d‘incubation ........................................................................................... 72
III.2.4. Effet du rapport de volume ............................................................................................ 72
III.2.5. Effet d‘agitation, de lumière et d‘aération ..................................................................... 73
a) Effet d‘agitation ...................................................................................................... 73
b) Effet de lumière ...................................................................................................... 74
c) Effet d‘aération ....................................................................................................... 75
III.3. Dégradation du bleu de méthylène................................................................................... 76

III.4. Activité antibactérienne .................................................................................................... 78

Références bibliographiques ......................................................................................................... 80


Conclusion générale .................................................................................................................... 83

Annexes
Résumé

VII
Introduction générale
Introduction générale

Introduction générale
Les nanosciences et les nanotechnologies ont suscité un grand intérêt au cours des
dernières années en raison de leur impact potentiel sur de nombreux domaines scientifiques tels
que l'énergie, la médecine, les industries pharmaceutiques, l'électronique et les industries
spatiales…etc. Cette technologie traite de petites structures et de matériaux de petite taille de
dimensions allant de quelques nanomètres à moins de 100 nanomètres [1]. Les nanoparticules
(NPs) présentent des propriétés chimiques, physiques, biologiques, diélectriques, électriques,
thermique, optique [2], électronique, magnétique, mécanique [3] et photocatalytique [4] uniques
qui sont significativement différentes de la matière [5-6-7]. Ces propriétés spéciales et uniques
pourraient être liées à leurs petites dimensions, leurs grandes surfaces [8], leur forme, et leur
taille (1 à 100 nm) [9].

Ces dernières années, les nanoparticules sont impliquées dans de nombreuses applications
dans des domaines tels que les technologies de l'information et de la communication, l'ingénierie
électrique, l'ingénierie industrielle, la médecine [10], et la photocatalyse [11]. La synthèse des
nanoparticules est la véritable division dans le domaine des nanotechnologies et nanosciences
pertinentes [12] et en raison de l'importance de leurs applications dans les progrès de la
nanotechnologie, les scientifiques ont les synthétisées par plusieurs méthodes [13]. La synthèse
des nanoparticules a attiré de plus en plus d'attention ces dernières années parce que les
particules dont la taille de l'ordre de quelques nanomètres se comportent différemment que les
particules les plus grosses [14].

La synthèse de nanoparticules peut être effectuée par diverses méthodes telles que les
approches physiques, chimiques et biologiques. En général, les méthodes physiques et chimiques
sont considérées comme les meilleures pour obtenir des nanoparticules de taille uniforme avec
une stabilité à long terme. Cependant, ces approches sont coûteuses et libèrent des matières
toxiques et dangereuses dans l'environnement. Les produits chimiques toxiques utilisés pour la
synthèse des nanoparticules dans les méthodes chimiques rendent les nanoparticules obtenues
moins adaptées aux applications médicales, cosmétiques ou alimentaires. Étant donné que
plusieurs nanoparticules ont été largement utilisées dans les produits médicaux, le diagnostic des
maladies et la cosmétique, il est très important d'améliorer la biocompatibilité des nanoparticules
[15]. Par conséquent, une synthèse verte ou synthèse biologique des nanoparticules en utilisant
les micro-organismes et les extraits des plantes [16] est souhaitable pour fournir une voie de
synthèse économique, écologique [17], facilement disponible et plus propre [18]. La synthèse
biogénique a non seulement un impact environnemental réduit, mais peut également produire de
1
Introduction générale

grandes quantités de nanoparticules qui sont exemptes de contamination et ont une taille et une
morphologie bien définies. Les voies de biosynthèse peuvent en fait fournir des nanoparticules
d'une taille et d'une morphologie mieux définies que certaines des méthodes physico-chimiques
de production. En raison de leur aptitude à la fonctionnalisation biologique, les nanoparticules
biologiques trouvent des applications importantes dans le domaine de la médecine [16]. Parmi
diverses nanoparticules, les nanoparticules d'argent (AgNPs) ont été l'un des objets d'étude les
plus populaires au cours des dernières décennies années [19] en raison de leur potentiel [8-13].
Les bactéries sont une bonne alternative pour les études car elles peuvent s'adapter à diverses
conditions telles que la température, l'aération et le temps d'incubation. Les bactéries sont
également à croissance rapide et peu coûteuses [20]. Parmi ces bactéries se trouvent Escherichia
coli [21-22], Staphylococcus aureus [23], Klebsiella pneumoniae [24], Salmonella typhi [25],
Lactobacillus plantarum [26] et Pseudomonas aeruginosa [27].

Le bleu de méthylène (BM) est l'un des colorants utilisés dans le papier à colorier, la
teinture des cotons, des laines, etc. Il a des effets très nocifs sur les êtres vivants provoquant des
difficultés respiratoires, des vomissements, de la diarrhée et des nausées [28]. Pour éviter les
problèmes potentiels de pollution par les colorants, les nanoparticules ont été largement étudiées
comme photocatalyseurs en les employant pour la décoloration de ces polluants [29]. Parmi ces
nanoparticules les nanoparticules d‘argent jouent un rôle important dans la photocatalyse [30].

Plusieurs études ont fourni des preuves directes que l'utilisation généralisée des
antibiotiques a conduites à l'émergence de souches bactériennes multirésistantes. La plupart des
mécanismes de résistance aux antibiotiques sont sans intérêt pour les NPs car le mode d'action
des NPs est un contact direct avec la paroi cellulaire bactérienne, sans nécessité de pénétrer dans
la cellule; cela laisse espérer que les NPs seraient moins susceptibles de favoriser la résistance
des bactéries que les antibiotiques. Par conséquent, l'attention s'est concentrée sur de nouveaux
matériaux passionnants à base de NPs ayant une activité antibactérienne [31]. Les nanoparticules
d'Ag sont attrayantes car elles ne sont pas toxiques pour le corps humain à faible concentration et
elles ont une efficacité antimicrobienne puissante contre divers micro-organismes pathogènes
[32].

Ce manuscrit est devisé en trois chapitres :

Le chapitre I est consacré aux généralités sur les nanoparticules et plus particulièrement
les nanoparticules d‘argent, la photocatalyse et l‘activité antibactérienne.

2
Introduction générale

Le chapitre II décrit la méthodologie suivie pour: la biosynthèse des nanoparticules


d‘argent à partir de Pseudomonas aeruginosa, l‘optimisation de différent paramètres
opérationnels, la photocatalyse et l‘activité antibactérienne.

Le dernier chapitre, le chapitre III présente l‘ensemble des résultats expérimentaux de


cette étude et leurs discussions.

3
Introduction générale

Références bibliographiques

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5
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6
Chapitre I
Généralités
Chapitre I Généralités

Chapitre I. Généralités

Dans ce chapitre se trouve la présentation des généralités sur les nanoparticules, leurs
sources d‘origine, les différentes méthodes de synthèse utilisées pour leurs obtention et leurs
avantages et inconvénients, suivie par des informations sur les nanoparticules d‘argent, leurs
applications dans des différents domaines et leurs utilisations dans la photocatalyse comme des
photocatalyseurs et dans l‘activité antibactérienne comme des agents antibactériens.

I.1. Nanomètre

Le préfixe «nano» signifie très petit, il vient du mot grec « nanos ». Ce préfixe est
également utilisé pour indiquer la taille dans la série kilomètre, millimètre, micromètre et
nanomètre [1]. Le terme nano ne désigne pas toujours un objet très petit. Par exemple, en
astronomie, une nanostar est une étoile ayant une masse comparable à notre soleil ou même
moins [2].

Le nanomètre (de symbole nm) est une unité du système international d'unités (SI), il est
considéré comme une unité de longueur à l‘échelle nanométrique et il est équivalent à 10-9
mètres (m) [3]. L‘échelle nanométrique est considérée comme l‘échelle de longueur s'étendant
approximativement de 1 nm à 100 nm [4-5-6].

Tant que c'est difficile d'imaginer à quel point le nanomètre est petit voici quelques
exemples:

- Un seul cheveu humain mesure environ 80 000 nm de large.


- Un globule rouge mesure environ 7 000 nm de large.
- Une molécule d'ADN 2-2,5 nm.
- L‘atome d‘hydrogène est d'environ 0,1 nm.
- Un virus peut mesurer environ 100 nm [7].

7
Chapitre I Généralités

Figure I. 1: Différentes tailles de matière [8].

I.2. Nanomonde

Le monde des nanosciences et des nanotechnologies « le nanomonde », recouvre les


objets de taille nanométrique dont certains phénomènes et effets sont inattendus. Ces spécificités
leur ouvrent un large éventail d‘applications et même si certaines sont déjà autour de nous, leur
potentiel de développement est considérable [9].

Le nanomonde fournit aux scientifiques un riche ensemble de matériaux utiles pour


sonder les fondamentales natures de la matière. Ces matériaux ont des structures uniques et des
propriétés accordables. Cela les rend précieux pour de nombreuses applications du monde réel
[10].

I.3. Nanoscience

La nanoscience est l'étude des phénomènes et de la manipulation des matériaux aux


échelles atomique, macromoléculaire et moléculaire, où les propriétés diffèrent considérablement
de ceux à plus grande échelle [11-12].

La nanoscience est un domaine scientifique émergent qui s'intéresse à l'étude des


matériaux qui ont de très petites dimensions, de l'échelle nanométrique. Le mot lui-même est une
combinaison du mot «nano» qui signifié petit, et du mot «science» signifiant connaissance. C'est
un domaine interdisciplinaire qui cherche à faire émerger des nanotechnologies matures, en se
concentrant sur l'intersection à l'échelle nanométrique de domaines tels que la physique, la
biologie, l'ingénierie, la chimie et l'informatique… [10].
8
Chapitre I Généralités

I.4. Nanotechnologie

La nanotechnologie a été définie de diverses manières par différents scientifiques. Selon


l‘Initiative Nationale de Nanotechnologie (National Nanotechnology Initiative = NNI) aux États-
Unis: «la nanotechnologie, c‘est la recherche et le développement technologique aux niveaux
atomique, moléculaire ou macromoléculaire (1 à 100 nm), la capacité à contrôler ou manipuler à
l'échelle atomique et la création et l‘utilisation de structures, dispositifs et systèmes qui ont de
nouvelles propriétés et fonctions en raison de leur petite et moyenne taille [13]. Une autre
définition donnée par la société royale et l‘académie royale d'ingénierie est «la nanotechnologie
est la conception, la caractérisation, la production et l'application de structures, de dispositifs et
de systèmes en contrôlant la forme et la taille à l'échelle nanométrique » [12-14-15-16]. Ainsi,
l'amélioration des propriétés des matériaux par la maîtrise de leurs structures nanométriques est
au cœur de la nanotechnologie [17].

Cette définition suggère la présence de deux conditions pour la nanotechnologie. La


première est l'échelle: la nanotechnologie a pour but d'utiliser les structures en contrôlant leur
forme et leur taille à l'échelle nanométrique. La deuxième condition est liée à la nouveauté: la
nanotechnologie doit traiter de petites choses d'une manière qui tire parti de certaines propriétés
en raison de l'échelle nanométrique [8].

La nanotechnologie peut être classée en catégories. Ce sont des procédés de


nanofabrication, des nanodispositifs pour de nouvelles fonctionnalités de haute performance, de
nanomesure et des nanomatériaux [18].

I.5. Nanomatériaux

Il existe plusieurs définitions du terme nanomatériau, établies par divers organismes et


instances:

 L‘organisation nationale de normalisation (ISO) fut le premier organisme international à


établir en 2008 une définition, dans un document référencé TS 27687 et actualisé depuis
[19]. Cette organisation a défini «un nanomatériau» comme « un matériau ayant une
dimension externe à l'échelle nanométrique [20] ou ayant une structure interne ou une
structure de surface en échelle nanométrique » [21-22-23].
 La commission européenne (CE) a adopté la recommandation en 2011 sur la définition
des nanomatériaux. «Nanomatériau», un matériau naturel, accessoire ou manufacturé
contenant des particules, à l'état non lié ou en tant qu'agrégat ou en agglomérat et où,
9
Chapitre I Généralités

pour 50% ou plus des particules dans la distribution de taille en nombre, une ou plusieurs
dimensions externes sont dans la plage de tailles de 1 nm à 100 nm [24-25].

Un nanomatériau remplit au moins l‘un des critères suivants :

- Il a des structurations internes ou de surface avec au moins une dimension dans la gamme
1-100 nanomètres.
- Il est composé de particules avec au moins une dimension dans la gamme 1-100
nanomètres, pour au moins 1% d‘entre elles.
- Il a une surface spécifique de plus de 60 m2 /cm3, en excluant les matériaux formés de
particules de tailles inférieures au nanomètre [26].

Deux grandes familles de nanomatériaux sont ainsi distinguées : les nano-objets et les
matériaux nanostructurés [27-28-29].

I.6. Nanoparticules

Le terme de « nanoparticule » est utilisé lorsque la particule a au moins une de ses


dimensions inférieure à 100 nm [30-31]. Le rayon typique d‘un atome étant de l‘ordre de 0,1 nm,
une NP peut être constituée de quelques dizaines à plusieurs centaines d‘atomes. Par exemple,
les NPs les plus célèbres, les fullerènes, sont constituées de seulement 60 ou 70 atomes de
carbone. Leur très petite taille donne aux NPs des surfaces spécifiques très importantes [32].

Le terme de NPs fait référence à différentes classes de particules :

- NPs à base de carbone : tels que les fullerènes, les nanofeuillets de graphène, les
nanofibres de carbone, le noir de carbone, les nanomousses de carbone.
- Les métaux tels que l‘argent, l‘or, le cuivre et le fer et les oxydes métalliques tels que les
oxydes de fer, de zinc, et de cuivre.
- NPs organiques tels que les polymères organiques.
- NPs d‘origine biologique [33].

I.6.1. Sources de nanoparticules

Les NPs peuvent provenir de sources naturelles et anthropiques (NPs artificielles et


indésirables ou accidentelles) [34].

10
Chapitre I Généralités

I.6.1.1. Sources naturelles

Les NPs sont abondantes dans la nature, car elles sont produites dans de nombreux
processus naturels, y compris les réactions photochimiques, les incendies de forêt les éruptions
volcaniques et l'érosion simple, et par les plantes et les animaux, comme le perdre de la peau et
les cheveux [35], les embruns, les nuages, et la tempête de poussière [36].

Les NPs biologiques naturelles comprennent les bactéries, les champignons [37], les virus
(qui sont de tailles diverses mais nanoparticulaires) les protéines (BSA, insuline, etc.), les
lipides, les glucides (glucose, fructose, etc.) et d'autres biomolécules inorganiques qui sont de
niveau nanoparticulaire [38].

Les NPs naturelles sont généralement monodispersées en raison de la sélection naturelle


de la taille, de la diminution de la toxicité, de la richesse en eau et en groupes hydroxyle en
raison de l'abondance de l'environnement hydraté, de l‘agrégation en formes complexes et de
l‘absence de ligands spécifiques liés à leurs surfaces [39].

Figure I. 2: Exemples de matériaux naturels et biologiques contenant des particules


nanoscopiques [37].

11
Chapitre I Généralités

I.6.1.2. Sources anthropiques

I.6.1.2.1. Nanoparticules accidentelles (ou nanoparticules non manufacturées).

Dans cette catégorie nous retrouvons les particules atmosphériques « ultrafines » (PUF)
[40]. Ces particules, sont émises notamment par les véhicules diesel, les véhicules à essence et
les chauffages urbains.

Mis à part les PUF, d‘autres NPs sont produites par l‘homme de façon accidentelle, non
intentionnelle ou non manufacturées. Dans cette classe, il existe principalement les particules
présentes dans la fumée de soudage [41]. Les NPs sont générées également par des activités
intérieures courantes, telles que: la cuisine, le tabagisme, le nettoyage et la combustion (par
exemple, bougies, cheminées) [42]. Parmi les NPs produites par des activités intérieures se
trouvent: les fibres textiles, les particules de peau, les spores, les excréments d'acariens, les
produits chimiques, la fumée des bougies, la cuisine et les cigarettes [43].

I.6.1.2.2. Nanoparticules artificielles (ou nanoparticules manufacturées)

Les NPs artificielles, manufacturées ou intentionnelles sont des particules produites


artificiellement en raison de leurs propriétés utiles. Ils peuvent être constitués d'un seul élément
comme C ou Si, ou d'un mélange d'éléments différents [44].

Les principales caractéristiques des NPs artificielles ont une surface spécifique élevée,
une transformation de phase inhabituelle en raison de leur nature artificielle, une stabilisation
inhabituelle des défauts, une déformation de surface élevée et une agrégation contrôlée par
cristallographie [44]. Cette source de NPs incluent les fullerènes, les nanotubes de carbone, les
dendrimères, les points quantiques, le TiO2, les NPs d'or et d'argent [45].

Des différences existent entre les PUF et les NPs manufacturées (NPsM), les PUF ont
généralement une assez large distribution de taille et une composition chimique complexe tandis
que les NPsM ont souvent une distribution étroite et une composition chimique définie. Très
schématiquement, il existe des NPsM métalliques (dioxyde de titane et de zinc, par exemple) et
des NPsM carbonées. Parmi celles-ci, les nanotubes de carbone qui occupent une place
importante [41].

12
Chapitre I Généralités

I.6.2. Avantages et inconvénients des nanoparticules


Tableau I. 1: Quelques avantages et inconvénients des nanoparticules.

Avantages Inconvénients
 Améliorer la diffusion Rayleigh  Les NPs peuvent subir une transformation,
 Diffusion Raman améliorée en car elles sont thermodynamiquement
surface. instables et se situent dans la région des
 Forte absorption plasmatique. minima locaux à haute énergie. Cela
 Imagerie du système biologique. conduit à une détérioration de la qualité,
 Déterminer les informations une mauvaise résistance à la corrosion, et
chimiques sur un substrat métallique le principal souci est que la conservation
à l'échelle nanométrique [46]. de la structure devient difficile.
 L'augmentation de la surface  Lors de la synthèse de NPs, la formation
spécifique entraîne une dissolution peut être aggravée par l'environnement
plus rapide de l'agent actif dans un impur. Comme les NPs sont très réactives,
environnement aqueux, tel que le il peut également y avoir de fortes chances
corps humain [47]. d'impureté.
 Les NPs ont été signalées comme toxiques,
cancérigènes et irritants car elles
deviennent transparentes pour le derme
cellulaire.
 La combustion exothermique peut
entraîner une explosion, car les fines
particules métalliques agissent comme des
explosifs puissants.
 Lors de la synthèse de NPs, il faut
l'encapsuler, car il est extrêmement difficile
de conserver la taille des nanoparticules
sous forme de solution [46].
 Les NPs en raison de leur petite taille
peuvent causer des problèmes d'inhalation
et de nombreuses autres maladies
mortelles en inhalant simplement pendant
60 secondes dans l'air contenant des
nanoparticules peuvent facilement
endommager les poumons.
 Les NPs augmentent la pollution [48].
 Il a été démontré que les NPs, qui
pénètrent dans le foie, peuvent induire
localement un stress oxydatif [49].

13
Chapitre I Généralités

I.6.3. Méthodes de synthèse des nanoparticules

Il existe deux approches différentes utilisées pour synthétiser les NPs, l'approche
descendante «top-down», qui est basée sur des méthodes physiques, et l'approche ascendante
«bottom-up», qui est basée sur des méthodes chimiques [51-52-53].

L'approche descendante part d'un matériau en vrac qui incorpore des détails
nanométriques critiques. Dans cette approche, un biomatériau est conçu en réduisant une entité
complexe en ses composants, comme la création de petits cristaux à partir d'un tissu dur
minéralisé en vrac par gravure à l'acide. En revanche, l'approche ascendante assemble des
matériaux à l'échelle nanoscopique, tels que des molécules et des atomes, pour former des
structures plus grandes (Figure I.3) [54].

Figure I. 3: Synthèse des nanomatériaux (NPs) VIA approches top-down et bottom-up [52].

14
Chapitre I Généralités

La synthèse des nanoparticules fait appel à des méthodes chimiques, physiques et


biologiques. Les procédures biologiques sont encore au stade de développement (Figure I.4)
[55].

Figure I. 4: Différentes méthodes de synthèse des nanoparticules [50].

I.6.3.1. Méthodes physiques et chimiques de synthèse des nanoparticules

 La réduction chimique, qui est la réduction d'un sel ionique dans un milieu approprié en
présence de tensioactif à l'aide d'agents réducteurs. Certains des agents réducteurs
couramment utilisés sont le borohydrure de sodium, l'hydrate d'hydrazine, le chlorate
d'aura de potassium et le citrate de sodium.
 La synthèse solvothermique, qui est une voie polyvalente à basse température dans
laquelle des solvants polaires sous pression et à des températures supérieures à leur point
d'ébullition sont utilisés. Dans des conditions solvothermiques, la solubilité des réactifs
augmente de manière significative, permettant à la réaction d'avoir lieu à une température
plus basse.

15
Chapitre I Généralités

 La technique sol-gel, qui est une technique chimique par voie humide utilisée pour la
fabrication d'oxydes métalliques à partir d'une solution chimique qui agit comme un
précurseur pour un réseau intégré (gel) de particules discrètes ou de polymères. Le sol
précurseur peut être soit déposé sur le substrat pour former un film, soit coulé dans un
récipient approprié avec la forme souhaitée pour synthétiser des poudres.
 L'ablation au laser, qui consiste à retirer le matériau d'une surface solide par irradiation
avec un faisceau laser. Le matériau est chauffé par l'énergie laser absorbée et s'évapore
ou se sublime à faible flux laser. À flux plus élevé, le matériau est converti en plasma. La
quantité de matière éliminée par une seule impulsion laser et la profondeur sur laquelle
l'énergie laser est absorbée dépend des propriétés optiques du matériau et de la longueur
d'onde du laser. Des nanotubes de carbone peuvent être produits par cette méthode.
 La condensation de gaz inerte, où différents métaux sont évaporés dans des creusets
séparés à l'intérieur d'une chambre à ultra-vide rempli d'hélium ou d'argon gazeux à une
pression typique de quelques 100 pascals. À la suite de collisions inter-atomiques avec
des atomes de gaz dans la chambre, les atomes métalliques évaporés perdent leur énergie
cinétique et se condensent sous la forme de petits cristaux qui s'accumulent sur un doigt
froid rempli d'azote liquide. Par exemple, des nanoparticules d'or ont été synthétisées à
partir de fils d'or [56].

I.6.3.2. Méthodes biologiques (Synthèse verte)

En raison du taux élevé de produits chimiques toxiques et de l'environnement extrême


utilisé dans la production physique et chimique de ces NPs, des méthodes vertes utilisant des
plantes, des champignons, des bactéries et des algues ont été adoptées [57].

I.6.3.2.1. Plantes

L'utilisation d'extraits de plantes offre certains avantages par rapport à ses homologues,
comme la facilité de se procurer et la sécurité à manipuler. Le processus de synthèse verte des
NPs à l'aide d'extraits végétaux implique généralement la réaction entre l'extrait végétal et les
précurseurs à base de métaux. Dans cette réaction, l'extrait végétal agit comme un agent
réducteur et coiffant qui réduit le précurseur à base de métal qui agit comme un agent oxydant
pour former des NPs à base de métal [58-59].

Des extraits de plantes ont été produits à partir de différentes parties, les graines, les
feuilles et les fleurs, pour étudier leurs capacités à synthétiser les NPs [60-61]. La capacité d'un

16
Chapitre I Généralités

extrait végétal à synthétiser les NPs réside sur la présence des composés phytochimiques dans la
plante qui sont responsables de ses capacités de synthèse [62]. Ces composés phytochimiques
comprennent les flavonoïdes, les saponines, les terpénoïdes, les glucides, les protéines et les
alcaloïdes [63]. Ils sont des agents d'extinction d'oxygène, des agents réducteurs et stabilisants,
des agents chélateurs de métaux et des donneurs d'hydrogène. La réduction des ions métalliques
par ces substances dans les extraits végétaux conduit à la formation de nanomatériaux respectifs
[64].

L'utilisation des plantes dans la synthèse des NPs a attiré plus d'intérêt des travailleurs car
elle fournit un processus de biosynthèse en une seule étape de biosynthèse et possède un large
spectre de métabolites qui peuvent aider dans le processus de la réduction [65-66]. Les plantes
offrent une option supérieure pour la synthèse des NPs, car les protocoles impliquant des sources
végétales sont exempts de substances toxiques; en outre, les agents de coiffage naturels sont
facilement fournis par les plantes (Figure I.5).

Stirring recovery
Metal

Figure I. 5: Synthèse de nanoparticules à partir d'extrait végétal [67].

Pour la synthèse des NPs, la partie de la plante qui doit être utilisée en synthèse est lavée
et bouillée avec de l'eau distillée. Après avoir pressé, filtré et ajouté les solutions respectives des
nanoparticules que nous voulons synthétiser, la couleur de la solution commence à changer,
dévoilant la formation de NPs et nous pouvons les séparer (Figure I.6) [68].

17
Chapitre I Généralités

Figure I. 6: Voie écologique et bon marché pour la synthèse verte de nanoparticules à l'aide
d'extraits de plantes [68].

Le mécanisme exact et les composants responsables des NPs synthétiques d'origine


végétale restent à élucider. Il a été proposé que les protéines, les acides aminés, les acides
organiques, les vitamines, ainsi que les métabolites secondaires, tels que les flavonoïdes, les
alcaloïdes, les polyphénols, les terpénoïdes, les composés hétérocycliques et les polysaccharides,
ont des rôles importants dans la réduction des sels métalliques et, en outre, agissent comme
agents de coiffage et stabilisants pour les NPs synthétisées. Par exemple, le groupe d‘El-Kassas
[69] a montré que le groupe fonctionnel hydroxyle des polyphénols et le groupe carbonyle des
protéines de l'extrait de Corallina officinalis pouvaient aider à former et à stabiliser les NPs d'or
[70].
Tableau I. 2: Quelques recherches sur la synthèse de nanoparticules à l'aide des plantes.

Plantes Parties de plantes Produits Taille (nm) Références

Prunus yedoensis Feuilles Ag 20 - 70 [71]


Potentilla fulgens Racines Ag 10 - 15 [72]
Platycodon grandiflorum Feuilles Au 15 [73]
Pimpinella tirupatiensis Feuilles Pd 15,4 [74]
Cassia auriculata Feuilles CuO 23 [75]
Terminalia arjuna Feuilles Au 15 - 30 [76]
Camellia sinensis Feuilles Fe 116 [77]
Plectranthus Amboinicus Feuilles Cu 16 - 25 [78]

18
Chapitre I Généralités

I.6.3.2.2. Microorganismes

Les bactéries procaryotes, les actinomycètes, les champignons, les algues et les levures
sont largement utilisés comme bio-réacteurs pour la synthèse des NPs. D'énormes efforts
scientifiques ont été déployés pour développer cette stratégie de production d'une variété de NPs
(Ag, Au, Pd, TiO2, CdS, etc.) [79].

La synthèse des NPs avec des bactéries et des champignons a gagné plus d'intérêt que la
synthèse avec des actinomycètes et des levures car la technologie bien mûre est disponible en
synthèse par des bactéries et des champignons que par des actinomycètes et des levures [80].
Quelques recherches récentes sur la synthèse des NPs à l'aide de microbes sont résumées dans le
tableau (I.3).

Tableau I. 3: Quelques recherches sur la synthèse des nanoparticules à l'aide de


microorganismes.

Microorganisme Produit Taille (nm) Référence

Bactéries
Klebsiella pneumonia Ag 26,84 - 44,42 [81]
E. coli Ag 20 - 50 [82]
Shewanella algae Pt Environ 5 [83]
Lactobacillus acidophilus Se 2 - 15 [84]
Staphylococcus aureus Ag 160 - 180 [85]
Bacillus subtilis ZnO 16 - 20 [86]
Pseudomonas aeruginosa Ag 30 à 75 [87]
Pseudomonas aeruginosa Au 30 [88]
Pseudomonas sp Ag 10 - 30 [89]

Champignons
Penicillium duclauxii Ag 13 [90]
Helminthosporum solani Au 2 - 70 [91]
P. rugulosum Au 20-80 [92]
Candida albicans Au 5 [93]
Aspergillus tubingensis P 28,2 [94]
Alternaria alternate Au 12 [95]
Phoma glomerata Ag 60 - 80 [96]

Levures
Yarrowia lipolytica Au 15 [97]

Actinomycètes Ag 10 - 20 [98]
Streptomyces sp. Au 10 [99]
19
Chapitre I Généralités

Algues
Caulerpa racemosa Ag 5 - 25 [100]
Spirulina platensis Au 20 - 30 [101]
Padina sp Ag 25 - 60  [102]
Sargassum latifolium Se 22,31 - 95,16 [103]

a) Bactéries

Parmi les méthodes biologiques, les bactéries sont un outil particulièrement important
pour fabriquer les NPs en raison de leur variété et de leur grande adaptabilité aux conditions
extrêmes [104]. À ce jour, de nombreuses études sur la biosynthèse des NPs par les bactéries, y
compris les substances et composés élémentaires (comme le montre la figure I.7), ont été
rapportées dans la littérature [105].

En outre, de nombreuses études ont montré que non seulement les bactéries vivantes,
mais également les entités mortes de certaines bactéries peuvent également être utilisées pour la
biosynthèse des NPs. Cependant, les mécanismes de ces processus sont différents. En général, le
processus métabolique peut être responsable de la bioréduction des NPs dans les bactéries
vivantes. Cependant, pour les entités mortes, les ions métalliques et métalloïdes sont liés aux
cellules bactériennes qui fournissent des sites de nucléation pour les NPs [104].

20
Chapitre I Généralités

Figure I. 7: a) Tableau périodique des éléments qui ont été synthétisés par des bactéries ; b)
Représentation schématique de la synthèse bactérienne des NPs ; les processus intracellulaire et
extracellulaire sont inclus [104].

b) Champignons

L'exploration de l'implication des champignons dans la nanotechnologie est considérée


comme importante. À cet égard, les champignons ont attirés plus d'attention concernant la
recherche sur la production biologique de NPs métalliques en raison de leur tolérance et de leur
capacité de bioaccumulation des métaux [106].

La facilité de mise à l'échelle des champignons est un privilège distinct de les utiliser
dans la synthèse de NPs (par exemple, en utilisant une technique de fermentation sur substrat
solide mince). Étant donné que les champignons sont des sécréteurs très efficaces d'enzymes
extracellulaires, il est donc possible de réaliser une vaste production d'enzymes [107].

Parmi les champignons, Fusarium spp joue un rôle important dans la synthèse des NPs et
21
Chapitre I Généralités

peut être considérée comme une nano-usine pour la fabrication de NPs. Parmi ceux-ci, F.
oxysporum a démontré un potentiel élevé pour la synthèse des AgNPs. On suppose que l'enzyme
nitrate réductase NADH-dépendante sécrétée par F. oxysporum est responsable de la réduction
des ions argent aqueux en AgNPs [108].

c) Levures

En raison de la production de masse de NPs, de la facilité de contrôle des levures en


laboratoire, de la synthèse de nombreuses enzymes et de la croissance rapide avec l'utilisation de
nutriments simples, les souches de levure possèdent plus d'avantages par rapport aux bactéries.
Certaines études ont été menées pour étudier la synthèse de NPs métalliques utilisant la levure.
Cependant, dans ce but, en utilisant les systèmes eucaryotes, à savoir Candida glabrata et S.
pombe, l'une des principales méthodes d'utilisation du matériel biologique a été atteinte [109].

L'applicabilité possible des NPs formées par la levure a été démontrée par quelques
recherches. Pour la fabrication d'une diode cadmium, des NPs de sulfure synthétisées de façon
intracellulaire par S. pombe ont été appliqués, qui avaient un fonctionnement à basse tension et
une valeur de courant direct élevée. On suppose que ces propriétés peuvent former la structure
artificielle une diode parfaite [110].

Il a été démontré que les levures extrémophiles, isolées du drainage minier acide au
Portugal, sont capables de se développer en présence d'ions Ag et Au et peuvent être exploitées
pour produire des particules nanocristallines d'argent et d'or [111].

Pour la première fois, l'utilisation potentielle d'une souche de levure nouvellement isolée
(P. kudriavzevii) pour synthétiser des ZnO-NPs à l'aide d'une méthode verte est démontrée dans
l‘étude de Moghaddam et al. [112].

d) Algues

Les algues sont un groupe diversifié d'organismes photoautotrophes, eucaryotes,


aquatiques, unicellulaires / multicellulaires et ont été classées en fonction de la pigmentation
qu'elles libèrent, qui comprend les algues brunes (phaéophytes), les algues rouges (rhodophytes)
et les algues vertes (chlorophytes). Les algues sont couramment utilisées pour la biosynthèse de
divers NPs d'oxydes métalliques et métalliques, car elles poussent rapidement, sont faciles à
manipuler et leur croissance de la biomasse, en moyenne, est dix fois plus rapide que les plantes
supérieures. Différentes souches d'algues ont été étudiées pour la synthèse verte de différents

22
Chapitre I Généralités

types de NPs à ce jour [113].

e) Actinomycètes

Les actinomycètes représentent un groupe attrayant de bactéries filamenteuses à gram


positif avec des activités naturelles variées et sont également désignées comme «champignons
des rayons». Ils partagent des caractéristiques importantes à la fois des procaryotes (bactéries) et
des eucaryotes (champignons). Les actinomycètes ont une capacité inégalée à produire divers
métabolites secondaires comme les anti-toxines ou les antibiotiques. La synthèse biologique des
NPs métalliques a été rapportée avec succès par les actinobactéries et sur cette base, les
actinomycètes ont été considérés comme des bionanofactories pour la synthèse des NPs [114].

I.6.3.2.2.1. Mécanismes de formation des nanoparticules par les microorganismes

Des mécanismes spécifiques de formation de NPs dans différents organismes, à la fois


unicellulaire et multicellulaire, ont été établis. Cependant, la synthèse des NPs suit un schéma
généralisé dans lequel les ions métalliques sont capturés par les cellules microbiennes ou
regroupés à la taille des NPs en présence d'une enzyme. La biosynthèse des NPs est réalisée en
cultivant des micro-organismes dans des milieux nutritifs spécifiques contenant les ions
correspondants. Selon le site de localisation, la synthèse de NPs par des microorganismes
(notamment bactéries, champignons, actinomycètes, levures et même virus) est classée en
intracellulaire et extracellulaire. Les ions métalliques pénètrent dans la cellule bactérienne par
des canaux ioniques, par transport actif, endocytose ou pénétration à travers la membrane
lipidique. Le processus de synthèse intracellulaire implique le processus de piégeage, de
bioréduction et de coiffage de diverses NPs. La synthèse extracellulaire comprend la sécrétion
d'enzymes, la bioréduction et le coiffage des particules. La plupart des rapports publiés ont fait
valoir que la synthèse extracellulaire de NPs est préférable car les processus à faible débit et de
purification sont plus faciles par rapport aux méthodes intracellulaires. Une enzyme couramment
utilisée est le nitrate réductase, qui peut être responsable de la synthèse de NPs, telles que les
NPs d'argent et d'or. Dans le processus de bioréduction (Figure I.8), les enzymes individuelles
jouent un rôle important dans le transport des électrons des donneurs vers l'ion métallique positif
[115].

23
Chapitre I Généralités

Figure I. 8: Schéma général de synthèse de nanoparticules de métaux par des micro-organismes


[115].

Tableau I. 4: Avantages et inconvénients des différentes techniques de synthèse des


nanoparticules [55].

Produits chimiques /
Technique Avantages Inconvénients
micro-organismes utilisés
La production en une Jointure ferme, déconcertée
seule étape, dans les données et la note
précurseurs et d'efficacité étant des NPs
potentiel de Fournit l'expansion
Physique production à grande cristalline, synthèse des
échelle avec des particules
rendements élevés.
[116].

24
Chapitre I Généralités

Coûteux d'esprit faible en Agents réducteurs, tels que


figure et sortie par le méthoxy polyéthylène
conséquent réclamation de glycol, le borohydrure de
produits chimiques mortels sodium, le bitartarate de
Monodispersité élevée
Chimique Remarque environnemental potassium, l'hydrazine Des
(5–15%).
facile à traiter résolution de agents stabilisants tels que
NP Gérer le développement la polyvinylpyrrolidone, le
des cristaux, synthèse des dodécyl benzyl sulfate de
particules faible rendement. sodium.
Faible monodispersité Il est difficile de déterminer Levures, bactéries,
(~ 40–50%), les composants réactifs des champignons, algues,
respectueux de plantes car les extraits de plantes, virus et
l'environnement. plantes contiennent de actinomycètes.
nombreux composés
organiques.
biologique
Pas économique car la
culture des bactéries est
fastidieuse. le processus de
réduction est également
lent, allant d'une heure à
plusieurs jours [117].

I.7. Nanoparticules d’argent

I.7.1. Présentation générale de l’argent

L'argent est un élément chimique avec le symbole Ag [118] de couleur gris blanc [119].
C‘est un métal malléable, ductile et précieux qui a été connu depuis des temps anciens (ses
premiers débuts vers 5000 avant notre ère) et est situé dans le groupe 11 (Ib) et la période 5 du
tableau périodique. L'argent est largement distribué dans la nature. Mais son abondance dans la
croûte terrestre est très faible (0.05 ppm) par rapport aux autres métaux. L'argent a le numéro
atomique 47 et le poids atomique de 107.880, et sa configuration électronique à l'état
fondamental est [Kr] 4d105s1. La plupart du temps, l'argent peut exister dans un mélange
d'isotopes, 107Ag et 109Ag. L'Ag est visiblement diamagnétique et sa susceptibilité magnétique est
presque indépendante de la température de la température ambiante à juste en dessous du point
de fusion [120].

25
Chapitre I Généralités

Figure I. 9: Pépite d'argent [121].

I.7.2. Nanoparticules d’argent

Les nanoparticules d‘argent ou nano-argent sont des molécules ayant une taille de 20-40
nm, composées à 80% d‘atomes d‘argent et à 20% d‘ions argent. Elles sont, devant les nanotubes
de carbone et les NPs de titane, les NPs les plus vendues et relâchées dans l‘environnement. Les
AgNPs sont très prisés par l‘industrie pharmaceutique et agroalimentaire, de part notamment leur
propriété biocide. Néanmoins, l‘utilisation de ces NPs reste controversée de par leur risque sur la
santé et l‘environnement [122].

I.7.2.1. Propriétés des nanoparticules d’argent

Les AgNPs ont des propriétés physico-chimiques distinctives, notamment une


conductivité électrique et thermique élevée, une diffusion Raman améliorée en surface, une
stabilité chimique, une activité catalytique et un comportement optique non linéaire [123].

I.7.2.1.1. Propriétés optiques

Étant donné que les AgNPs sont extrêmement efficaces pour absorber et diffuser la
lumière et contrairement à de nombreux colorants et pigments, ont une couleur qui dépend de la
taille et de la forme de la particule. La forte interaction du nano-argent avec la lumière se produit
parce que les électrons de conduction sur la surface du métal subissent une oscillation collective
lorsqu'ils sont excités par la lumière à des longueurs d'onde spécifiques connues sous le nom de
résonance plasmonique de surface (Figure I. 10 : a, b) et se traduit par des propriétés de diffusion
et d'absorption inhabituellement fortes [124].

26
Chapitre I Généralités

Figure I. 10: a) Résonance plasmonique de surface (SPR) pour les AgNPs à une longueur
d'onde spécifique ; b) Image de microscopie en champ noir des AgNPs [124].

I.7.2.1.2. Structures cristallines

La structure cristalline des AgNPs peut être dérivée des diagrammes de diffraction des
rayons X. Plusieurs études ont rapporté que les AgNPs ont la structure cubique, montrant des
pics à 38.06°, 44.22°, 64.48° et 77.32° correspondant à l'angle de diffusion 2θ des plans (1 1 1),
(2 0 0), (2 2 0 ), et (3 1 1), respectivement. De plus, le diagramme de diffraction des AgNPs se
produit à 38.5°, 44° et 64.5° (2θ). Ces modèles peuvent être indexés sur les plans (111), (200), et
(220) de l'argent cubique face centrée (fcc) [125].

I.7.2.1.3. Propriétés thermiques

Une propriété remarquable des NPs métalliques est leur faible température de fusion due
à l'effet de taille thermodynamique [125].

I.7.2.1.4. Propriétés catalytiques

Les AgNPs ont été utilisées comme agents catalytiques efficaces pour la réduction de
divers colorants tels que le bleu de méthylène, le jaune-12, le 4-nitrophénol, le rose Bengale,
l'éosine et le méthyl-orange [125].

27
Chapitre I Généralités

I.7.2.2. Applications des nanoparticules d’argent

Ces dernières années, il y a eu diverses estimations de la production mondiale d‘AgNPs.


Il est prévu que l'industrie mondiale des nanotechnologies continuera de croître de manière
significative, plus précisément, la production d'AgNPs. Plusieurs études ont montré que les
AgNPs ont une plus grande valeur marketing que les autres NPs et que leur présence dans les
produits de consommation est plus largement annoncée [126].

Le tableau suivant montre les applications des AgNPs dans des divers domaines :

Tableau I. 5: Applications des nanoparticules d‘argent dans des différents secteurs [127].

Domaine Application des AgNPs


 Réalisation antibactérienne
 Réalisation antifongique
 Réalisation antivirale
Applications biomédicales
 Réalisation anti-inflammatoire
 Activité anti-angiogénique
 Exploit anticancéreux
 Textile bloquant les rayons UV
Applications textiles
 Textiles et dispositifs médicinaux
 Nanotechnologie et emballage alimentaire
Industries alimentaires
 Transformation alimentaire
 Désinfection de l'air
 Désinfection de l'eau
Traitement environnemental  Désinfection de l'eau potable
 Désinfection des eaux souterraines et des
eaux usées biologiques
 Activité antimicrobienne
Applications pharmacologiques  Activité larvicide
 Propriété de cicatrisation des plaies
Utilisation dans :
 Les cellules solaires
Applications optiques  L'imagerie médicale
 Les limiteurs optiques
 Les dispositifs plasmoniques [128]
 Les écrans LCD
Applications conductrices  LED haute intensité
 Ecrans tactiles [128]
 Catalyseur de pile à combustible
Catalyse  Catalyseur d'additif pour carburant
 Production d'hydrogène [126]
28
Chapitre I Généralités

I.8. Photocatalyse

I.8.1. Généralités sur la photocatalyse

Photocatalyse est un mot d‘origine grec, qui se compose de deux parties: la préfixe
«photo» signifie (Phos: lumière) et la «catalyse» traite (katalyo: briser, décomposer) [129]. La
photocatalyse est une réaction qui utilise la lumière pour activer une substance qui modifie la
vitesse d'une réaction chimique sans être elle-même impliquée [130]. Les exigences de
photocatalyse sont résumées comme suites:

 La réaction thermochimique doit être une réaction endothermique.


 Le processus de photocatalyse doit être cyclique et sans réactions secondaires
pour éviter la dégradation des réactifs photochimiques.
 La réaction photochimique doit être utilisée dans une large gamme de lumière,
c'est-à-dire UV, visible et une partie d'IR, par conséquent, le spectre solaire est
approprié économiquement.
 La contre-réaction doit être très lente pour faciliter le stockage des produits, tandis
que, pour récupérer le contenu énergétique, la réaction doit être rapide.
 Les produits de la réaction photochimique doivent être faciles à conserver et à
transporter [129].

La photocatalyse peut être comparée à la photosynthèse naturelle qui se produit chez les
plantes. La chlorophylle des plantes est le photocatalyseur naturel typique. La différence entre le
photocatalyseur de chlorophylle et le photocatalyseur à semi-conducteur artificiel; la
chlorophylle capte la lumière du soleil pour transformer l'eau et le dioxyde de carbone (CO 2) en
oxygène (O2) et glucose, mais au contraire, le photocatalyseur à semi-conducteur crée un
puissant agent d'oxydation et des trous électroniques pour décomposer la matière organique en
CO2 et en eau (H2O) en présence de photocatalyseur, de lumière et d'eau [130].

I.8.2. Photocatalyseurs

Un photocatalyseur idéal doit être stable, peu coûteux, non toxique et, bien sûr,
hautement photoactif. Un autre critère principal de dégradation des composés organiques est que
le potentiel redox du couple H2O / • OH (OH− → • OH + e− ; E 0 = −2. 8V) se situe dans la bande
interdite du semi-conducteur. Plusieurs semi-conducteurs ont des énergies de bande interdite
suffisantes pour catalyser une large gamme de réactions chimiques. Celles-ci incluent TiO2,
WO3, SrTiO3, α-Fe2O3, ZnO, ZnS [131].
29
Chapitre I Généralités

Les photocatalyseurs à nanoparticules métalliques ont suscité un intérêt récent en raison


de leur forte absorption de la lumière visible et ultraviolette Il existe maintenant de nombreux
exemples de réactions réussies catalysées par des nanoparticules supportées de métaux purs et
d'alliages métalliques entraînés par la lumière à des températures ambiantes ou modérées. Ces
exemples démontrent que ces matériaux constituent un nouveau groupe de photocatalyseurs
efficaces pour convertir l'énergie solaire en énergie chimique [132].

Figure I. 11: Différents semi-conducteurs avec leur valeur de potentiel redox [133].

I.8.3. Mécanisme de photocatalyse

Un matériau semi-conducteur est caractérisé par deux bandes d'énergie séparées par
l'énergie de la bande interdite, par exemple (Figure I.12). Un semi-conducteur à zéro absolu est
un isolant, car la bande de valence (niveau d'énergie inférieur) est complètement occupée et la
bande de conduction (niveau d'énergie supérieur) totalement vide. Pour devenir conducteur, des
porteurs de charge doivent être créés, généralement par photoexcitation via l'irradiation de la
lumière. Lorsqu'une surface semi-conductrice est irradiée par la lumière (hν ≥ Eg), un pair
d‘électron / trou (e− / h +) est générée en favorisant l'électron de la bande de valence (VB) à la
bande de conduction (CB). Le caractère oxydant des trous (h+) dans la bande de valence montre
que des radicaux OH étaient générés par l'oxydation des molécules H 2O ou des ions OH-
adsorbés à la surface du semi-conducteur, celle capable d'oxyder directement les molécules
organiques. La photoexcitation du photocatalyseur semi-conducteur, le mécanisme global peut
être vu sur la figure (I.12) [130].

30
Chapitre I Généralités

Figure I. 12: Mécanisme global de la photocatalyse par photocatalyseur à semi-conducteur


[130].

Cependant pour les nanoparticules métalliques par exemple, les NPs d'or et d‘argent les
mécanismes sont distincts de ceux des photocatalyseurs semi-conducteurs. L'énergie absorbée
par les électrons de conduction métallique et les champs électriques intenses à proximité
immédiate, créés par l'effet de résonance plasmonique de surface localisée (RPSL), contribuent
de manière cruciale à l'activation des molécules sur les nanoparticules métalliques, ce qui facilite
la transformation chimique [132].

I.8.4. Structure et propriétés de bleu de méthylène

Le bleu de méthylène (chlorure de méthylthionine) est un composé chimique aromatique


hétérocyclique de formule moléculaire (C16H18ClN3S, 3H2O) (Figure I.13) avec le nom chimique
[3, 7-bis (diméthylamino) -phenazathionium chlorure Tetramethylthionine chloride]. Le bleu de
méthylène (BM) est un colorant thiazine cationique, bleu foncé à l'état oxydé alors qu'il est
incolore sous sa forme réduite (bleu de leucométhylène). Le BM et le bleu de leucométhylène
existent en tant que couple redox en équilibre et forment ensemble une oxydation réversible
[134].

Le BM apparaît comme un solide inodore à température ambiante. C'est une poudre verte
foncée et donne une solution bleue lorsqu'elle est dissoute dans l'eau. Il a une forte
caractéristique d'adsorption sur un solide avec une longueur d'onde d'absorption maximale de
668 nm [135].

31
Chapitre I Généralités

Figure I. 13: Structure chimique du bleu de méthylène [134].

Figure I. 14: Système d'oxydoréduction réversible du bleu de méthylène et du bleu de


leucométhylène [136].

Tableau I. 6: Propriétés physiques et chimiques du colorant de bleu de méthylène [137].

Propriétés physico-chimiques Valeurs


Température de fusion 180 ºC
Température d'ébullition Aucune donnée (se décompose)
solubilité dans l'eau 35.5 g/L
pH 3 (10 g/L H2O)
Masse moléculaire 319.09 g/mol
Bleu-vert foncé sous forme oxydée, incolore sous
Couleur forme Bleu-vert foncé sous forme oxydée, incolore
sous forme réduite (Bleu de leucométhylène)
Formule chimique C16H18N3ClS

32
Chapitre I Généralités

I.9. Activité antibactérienne des nanoparticules

Plusieurs caractéristiques des NPs en font des alternatives aux antibiotiques traditionnels.
Premièrement, le grand rapport surface / volume des NPs augmente la surface de contact avec les
organismes cibles. Les NPs peuvent agir comme des molécules à l'échelle nanométrique
interagissant avec les cellules bactériennes, régulant la pénétration de la membrane cellulaire et
interférant avec les voies moléculaires. Deuxièmement, les NPs peuvent renforcer les effets
inhibiteurs des antibiotiques. Enfin, les combinaisons d'antibiotiques et de NPs fournissent des
mécanismes antimicrobiens complexes pour surmonter la résistance aux antibiotiques [138].

Les NPs en particulier ont démontré des propriétés antibactériennes à large spectre contre
les bactéries à Gram positif et à Gram négatif [139]. De nombreuses études ont montré que les
bactéries Gram-positives sont plus résistantes aux mécanismes d'action du NPs. On émet
l'hypothèse que les parois cellulaires différentes sont la raison pour laquelle ce phénomène
existe. Dans le cas des bactéries à Gram négatif, comme l‘Escherichia coli, les cellules
bactériennes sont recouvertes d'une couche de lipopolysaccharides (1 à 3 µm d'épaisseur) et de
peptidoglycanes (~ 8 nm d'épaisseur). Cet agencement peut faciliter l'entrée des ions libérés des
NPs dans la cellule. D'autre part, les bactéries Gram-positives telles que Staphylococcus aureus
possèdent une couche de peptidoglycane beaucoup plus épaisse que les bactéries Gram-
négatives, s'étendant sur plus de 80 nm avec des acides teichoïque et teichuronique attachés de
manière covalente. La destruction de la paroi cellulaire résultant de l'interaction physique entre
les NPs et la paroi cellulaire est plus préjudiciable aux bactéries Gram-négatives car elles n'ont
pas l'épaisse couche de peptidoglycane trouvée dans les bactéries Gram-positives qui pourrait
éventuellement agir comme une couche protectrice. Une autre raison potentielle de la sensibilité
Gram-négative aux NPs est que les bactéries Gram-négatives sont recouvertes de molécules de
lipopolysaccharides, qui portent une charge négative. Ces molécules chargées négativement ont
une affinité plus élevée pour les ions positifs que la plupart des NPs libèrent, conduisant à une
accumulation et à une absorption accrue d'ions, qui provoquent alors des dommages
intracellulaires. D'autres facteurs peuvent inclure le processus de formulation, l'environnement,
le mécanisme de défense bactérienne et les caractéristiques physiques du NPs [140].

Il a été bien documenté dans la littérature que les NPs de plus petite taille présentaient des
activités antimicrobiennes plus élevées en raison d'une plus grande superficie [141]. Certaines
études ont montrés que les NPs plus grosses sont plus efficaces, ce qui indique que la taille seule
n'est pas le facteur le plus important de leur toxicité [142].

33
Chapitre I Généralités

Parmi les nombreux NPs prometteurs, les NPs d‘Ag semblent être des agents
antibactériens potentiels en raison de leurs grands rapports surface-volume et de leurs cristaux
[143] ce qui permet un meilleur contact avec les micro-organismes [144]. Sondi et Salopek-
Sondia [145], ont démontrés l'activité antimicrobienne des Ag NPs contre Escherichia coli, dans
laquelle des cellules d'E. Coli traitées avec des Ag NPs ont montré l'accumulation de NPs d‘Ag
dans la paroi cellulaire et la formation de «fosses» dans la paroi cellulaire bactérienne,
conduisant éventuellement à la mort cellulaire.

Les NPs d‘Ag pourraient fréquemment libérer les ions argent (Ag+), ce qui pourrait être
considéré comme l'un des mécanismes à l'origine de l'activité bactéricide des NPs d‘Ag. Les Ag+
chargés positivement jouent un rôle vital pour présenter les activités antibactériennes ou de
toxicité de l'argent et pour maintenir ses activités antibactériennes ou de toxicité, l'Ag doit
essentiellement être dans son état ionisé. Les ions Ag+ forment des complexes avec les acides
nucléiques et que par rapport aux groupes phosphate, ils interagissent spécifiquement avec les
nucléosides des acides nucléiques.

En raison des attractions électrostatiques et de l'affinité envers les protéines de soufre, les
ions Ag+ adhèrent au cytoplasme et à la paroi cellulaire, et améliorent considérablement la
perméabilité, conduisant à des perturbations des enveloppes bactériennes. Dès que les ions Ag+
libres sont absorbés par les cellules, les enzymes respiratoires sont désactivées, entraînant la
production d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) et l'interruption de la libération d'adénosine
triphosphate (ATP) [146].

I.9.1. Mécanisme

Diverses théories et explications ont été proposées pour différentes nanoparticules pour
leur activité microbicide (Figure I.16) et ont été étudiées sur la base des changements
morphologiques et structurels des cellules bactériennes.

 Il a été démontré que les NPs ont la capacité de s'ancrer à la paroi cellulaire
bactérienne et de la pénétrer par la suite, provoquant ainsi des changements
structurels dans la perméabilité de la membrane cellulaire conduisant à la mort
cellulaire [147-148].
 Les NPs peuvent cibler la membrane bactérienne, conduisant à une dissipation de la
force motrice du proton qui à son tour provoque le blocage de la phosphorylation
oxydative [149].

34
Chapitre I Généralités

 Un autre mécanisme impliqué dans l'activité microbicide est la génération de radicaux


libres par les NPs qui ont la capacité d'endommager la membrane cellulaire et de la
rendre poreuse, ce qui peut finalement conduire à la mort cellulaire.
 Les NPs métalliques ont l'affinité d'interagir avec les biomatériaux contenant du
soufre et du phosphore présents dans la cellule bactérienne, par exemple les bases
d'ADN. Les NPs métalliques peuvent agir sur ces bases molles et détruire l'ADN qui
conduirait à la mort cellulaire.
 Les NPs sont connues pour moduler la transduction du signal bactérien.
 Les NPs déphosphorylent les substrats peptidiques sur les résidus tyrosine, ce qui
conduit à l'inhibition de la transduction du signal et à l'inhibition de la croissance
bactérienne.
 Il est également montré qu'il pourrait y avoir une libération d'ions argent à partir des
nanoparticules d'Ag et que ces ions peuvent interagir avec les groupes thiol de
nombreuses enzymes vitales et les inactiver, provoquant une perturbation des
fonctions cellulaires.
 Les NPs exercent également leurs activités antibactériennes soit en réduisant le
potentiel membranaire et en inhibant les activités ATPase pour diminuer le niveau
d'ATP et l'autre en inhibant la sous-unité du ribosome de se lier à l'ARNt [150].

Figure I. 15: Mécanismes de l'activité antibactérienne des nanoparticules [150].


35
Chapitre I Généralités

Figure I. 16: Mécanismes de résistance aux antimicrobiens et actions des nanoparticules [138].

I.10. Recherche bibliographique sur les nanoparticules d'argent

En 2021, Ahamad et al. [151] ont fait une étude sur la synthèse des AgNPs par Anabaena
variabilis. Les conditions optimales pour la préparation de l'extrait étaient le chauffage du
mélange d'extraction à 100 °C pendant 5 min, tandis que pour la synthèse d'AgNPs, les
conditions optimales étaient de (extrait cellulaire: AgNO3 (1 mM)), pH 7.4 et températures de
réaction de 30°C. Les AgNPs synthétisées ont été caractérisées initialement par
spectrophotomètre UV-Vis et le pic d'absorbance maximum a été obtenu à 440 nm. La technique
DRX a confirmé leur nature cristalline. Le MEB avec EDX a montré 66% d'argent élémentaire
en poids, ce qui signifiait la pureté des AgNPs. L'étude de la diffusion de lumière dynamique
(Dynamic light scattering = DLS) a montré les natures presque monodispersées des AgNPs.
L'observation sur la microscopie électronique à transmission (MET) a confirmé la synthèse de
NPs sphériques de 11 à 15 nm. L'analyse FTIR des AgNPs synthétisés a montré les fractions
fonctionnelles responsables de leur bioactives. Les biomolécules d‘AgNPs ont été confirmées
par LCMS/MS. Les AgNPs synthétisées par Anabaena variabilis ont montré une bonne activité
antibactérienne et antifongique. En association avec des agents antibiotiques standards
(streptomycine) et antifongiques (amphotéricine B, fluconazole), les AgNPs ont montrées un
effet synergique significatif. Le mélange de propriétés antibactériennes et antifongiques, couplé à
36
Chapitre I Généralités

leur synthèse intrinsèque «verte» et facile, a rendu ces nanoparticules biogènes attractives en
nanomédecine.

En 2021, [152], des AgNPs sont biosynthétisées et caractérisées à l'aide de la bactérie


Paenarthrobacter nicotinovorans MAHUQ-43, leur activité antimicrobienne a été étudiée contre
les bactéries Gram-positives Bacillus cereus et Gram-négatives Pseudomonas aeruginosa.
L'analyse spectrale UV-Vis a montré une bande d'absorption à 466 nm qui assuraient la synthèse
des AgNPs. L'analyse FE-TEM a confirmé la forme sphérique de nanoparticules dont la taille
varie de 13 à 27 nm. L'analyse EDX et XRD a assuré la nature cristalline des AgNPs
biosynthétisées. Les AgNPs synthétisées à médiation bactérienne ont inhibé la croissance des
pathogènes B. cereus et P. aeruginosa et ont développé une zone claire d'inhibition (ZOI). Cette
étude a montré une synthèse écologique, facile et rapide des AgNPs à l'aide de P. nicotinovorans
MAHUQ-43.

Une autre étude [153] a montré une bonne activité catalytique des AgNPs sur la réduction
du bleu de méthylène. Au cours de ces travaux, le miel a été choisi pour la préparation de
nanoparticules d'argent. Par microscopie électronique à transmission (MET), la taille et la forme
des nanoparticules d'argent ont révélé que les particules sont sphériques et monodispersées sans
agglomération majeure, la taille des particules allant de 5 à 25 nm, en outre, les plus grands
niveaux de densité de particules sont de 5 à 10 nm. Le spectrophotomètre UV-Vis et la HPLC
ont été utilisés pour étudier et analyser les performances de dégradation des nanoparticules
d'argent sur le bleu de méthylène. Les résultats montrent que 92% du bleu de méthylène a été
dégradé après 72 h. De plus, plusieurs nouveaux pics sont apparus après le traitement des
échantillons par HPLC.

Des AgNPs ont été synthétisées [154] en utilisant une nouvelle bactérie de Pseudomonas.
Après incubation des cultures de Pseudomonas avec 1 mM d'AgNO3 à 22 °C, ils ont obtenu des
AgNPs en 24 h. La microscopie électronique à balayage électronique (MEB) et la microscopie
électronique à transmission (MET) ont révélé des AgNPs sphériques polydispersées dans la
gamme de tailles de 20 à 70 nm. La taille moyenne était d'environ 50 nm. La spectroscopie
infrarouge à transformée de Fourier (FTIR) a révélé la présence d'une grande quantité de
protéines et d'autres métabolites secondaires. La diffraction des rayons X (XRD) a révélé un
spectre de diffraction cubique à faces centrées de nature cristalline. Une étude comparative entre
les AgNPs synthétisées avec la méthode chimique et biologique (Pseudomonas) a révélé une
activité antibactérienne plus élevée de ce dernier contre les microorganismes pathogènes,
notamment l‘Escherichia coli, les Staphylococcus aureus et les Candida albicans. Cette étude

37
Chapitre I Généralités

rapporte une synthèse efficace, stable et rapide des nanoparticules d‘Ag par la méthode
biologique en utilisant la bactérie Pseudomonas.

Dans ce chapitre, quelques généralités et quelques définitions sont présentées sur le


domaine des nanoparticules en général à savoir leurs sources, méthodes de leurs synthèses, les
avantages et les inconvénients de ces particules, et sur les nanoparticules d‘argent en particulier,
en touchant particulièrement l‘application de ces nanoparticules dans la dégradation du colorant
de bleu de méthylène et dans l‘activité antibactérienne.

38
Chapitre I Généralités

Références bibliographiques

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52
Chapitre II
Matériels et méthodes
Chapitre II Matériels et Méthodes

Chapitre II. Matériels et méthodes

Dans ce chapitre, nous allons décrire la méthodologie utilisée pour la synthèse des
nanoparticules d‘argent et présenter les différents paramètres opérationnels pour optimiser la
synthèse. Nous allons ainsi présenter la méthode de photocatalyse et l‘activité antibactérienne.

II.1. Lieu et durée de l’étude

Ce travail a été entièrement réalisé au niveau de l‘université Kasdi Merbah Ouargla


(nouveau pôle universitaire), précisément dans le Centre de Recherche Scientifique et Technique
en Analyses Physico – Chimiques (CRAPC), est une institution à caractère particulier
principalement destiné à la recherche de nouvelles méthodes d'analyses physiques et chimiques
ainsi qu'à l'élaboration de nouveaux protocoles chimiques de synthèse et d'application, le centre
est également invité à se spécialiser dans les analyses les plus complexes qui nécessitent les
derniers équipements technologiques. Cette étude a été effectuée durant la période du 21 Mars au
27 mai 2021. Ce travail a pour objectif de biosynthétiser des nanoparticules d‘argent (AgNPs)
pour des applications dans la photocatalyse et l‘activité antibactérienne.

II.2. Matériel biologique

II.2.1. Origine de souches utilisées

Quatre souches de référence ATCC (American Type Culture Collection) fournies par le
laboratoire de bactériologie médical de laboratoire interne de l‘hôpital "Mohamed Boudhiaf"
Ouargla, ont été utilisées dans cette étude : Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 à la fois pour
la synthèse des AgNPs et l‘activité antibactérienne et Listeria monocytogenes ATCC 13932,
Escherichia coli ATCC 25922 et Bacillus subtilis ATCC 14531 pour l‘activité antibactérienne
seulement.

II.3. Méthodes

II.3.1. Synthèse des nanoparticules d’argent

La réalisation de ce test a été faite par le protocole décrite par Peiris et al. [1].

La souche étudiée « Pseudomonas aeruginosa » a été inoculée dans un flacon de 250 ml


contenant 100 ml de bouillon nutritif (BN) stérile. Le milieu inoculé a été incubé à 37 °C dans un
incubateur à 120 tr/min pendant 24 heures. Après 24 heures, la culture a été centrifugée pour
53
Chapitre II Matériels et Méthodes

séparer le surnageant et le culot. La centrifugation a été effectuée à 3500 tr/min à température de


5°C pendant 20 minutes. Le surnageant obtenu après la centrifugation a été utilisé pour la
synthèse des AgNPs [2].

Le surnageant a été mélangé avec une solution d'AgNO3 à une concentration de 2 mM


puis incubé à 100 tr/min à 37 °C pendant 48 h. La synthèse a été contrôlée par le changement de
couleur du milieu de culture du jaune au brun par inspection visuelle du flacon de culture (Figure
II.1) [3].

Figure II. 1: Etapes de synthèse de nanoparticules d‘argent.

54
Chapitre II Matériels et Méthodes

II.3.1.1. Séchage de la solution de nanoparticules d’argent

La solution d‘AgNPs obtenue après 48 h est placée dans la centrifugeuse à 9000 tr/min
pendant 10 minutes. Le culot obtenu a été soigneusement nettoyé avec de l'eau distillé, et ce
mélange a été placé dans l‘ultrason pendant une minute, ensuit la solution a été placée dans une
centrifugeuse à 9000 tr/min pendant 10 minutes, ce procédé a été répété 3 fois. Après
centrifugation, une petite quantité d'éthanol a été mélangé avec des pastilles, ce mélange a été
placé dans l‘ultrason puis séché à l'étuve. Les AgNPs purifiées ont été séchées et obtenues sous
forme de poudre (Figure II.2).

Figure II. 2: Etapes de séchage de nanoparticules d‘argent.


55
Chapitre II Matériels et Méthodes

II.3.2. Optimisation de divers paramètres opérationnels

La réaction de biosynthèse des AgNPs est très sensible et dépend de certains paramètres
opérationnels importants [4]. Ce sont des facteurs qui influencent la synthèse des NPs quelle que
soit la technique utilisée [5]. Dans cette étude, l‘évaluation de plusieurs facteurs expérimentaux
importants, y compris le pH, la concentration de solution d‘AgNO3, le temps d‘incubation, le
rapport de volume, l‘agitation, la lumière, et l‘aération à une température fixe de 37 °C.

Avant de commencer l‘étude de l‘optimisation de divers paramètres opérationnels, un


mélange de surnageant et de solution AgNO3 (2 mM) (80:20 V/V) a été utilisé dans tous les
cas.

II.3.2.1. Effet du pH

Cet effet est réalisé par le protocole décrit par Khan et al. [6]. 8 ml de surnageant est
incubé avec 2 ml d‘AgNO3 pendant 48 h à cinq pH différents soit 2, 4, 6, 8, 10. Des solutions
d‘acide chlorhydrique (HCl) et d'hydroxyde de sodium (NaOH) ont été utilisées pour ajuster le
pH. La synthèse des AgNPs a été confirmée par analyse spectrométrique UV-Visible.

II.3.2.2. Effet de concentration

Cet effet est réalisé suivant le protocole de Khandel et al. [7]. Pour étudier l'effet de la
concentration de la solution d‘AgNO3 sur la synthèse des AgNPs, diverses concentrations
d‘AgNO3 (0.5, 1, 2 et 10 mM) ont été utilisées en gardant les deux autres paramètres fixes. Au
cours de la synthèse, 2 ml de chaque concentration et 8 ml de surnageant ont été prélevés et
incubés pendant 48 h. La synthèse des NPs d'Ag a été confirmée par une analyse spectrométrique
UV-Visible.

II.3.2.3. Effet de temps d’incubation

Cet effet est réalisé suivant le protocole d‘Arya et al. [4]. Tout d'abord, pour
l'optimisation du temps d‘incubation, les réactions ont été effectuées pour trois différentes durées
de temps, 24h, 48h et 72h, en maintenant le volume de d‘AgNO3 de 2ml et le volume de
surnageant de 8 ml pour former la solution mère. Après cela, toutes les réactions ont été
contrôlées par un spectrophotomètre UV-visible.

56
Chapitre II Matériels et Méthodes

II.3.2.4. Effet du rapport de volume

Cet effet est réalisé suivant le protocole d‘Alzahrani et al. [8]. Différents rapports de
surnageant et de solution d‘AgNO3 ont été étudiés, 100, 80:20, 60:40, 40:60 et 20:80 (surnageant
: solution d‘AgNO3) pendant 48h afin de trouver la production maximale d‘AgNPs. La synthèse
des NPs d'Ag a été confirmée par une analyse spectrométrique UV-Visible.

II.3.2.5. Effet d’agitation, de lumière et d’aération

8 ml de surnageant sont ajoutés à 2 ml AgNO3, la réaction a été réalisé dans des


différentes conditions (agitation et sans agitation ou aération et sans aération ou lumière et
obscurité) pendant 48h. En utilisant un spectrophotomètre UV-visible, l'absorption a été
enregistrée à des longueurs d'onde de 200 à 800 nm.

II.3.3. Dégradation du bleu de méthylène

La dégradation du bleu de méthylène par les AgNPs s a été effectuée selon le protocole
de Kumar et al. [9].

II.3.3.1. Principe

8 mg de colorant bleu de méthylène a été ajouté à 100 ml d'eau distillée (0,01 mM).
Environ 30 mg de nanoparticules d'argent ont été ajoutés à 10 ml de solution de colorant bleu de
méthylène. Le contrôle a également été maintenu sans ajouter les nanoparticules d'argent. Avant
l'exposition aux rayonnements, la solution a été bien mélangée pendant quelques minutes dans
un agitateur. Ensuite, il a été appliqué et examiné à des intervalles spécifiques (1,3 et 5 min), les
suspensions ont été ensuite centrifugées pendant quelques secondes et utilisés pour évaluer la
photolyse du colorant. Le spectre d'absorption du surnageant a ensuite été mesuré avec un
spectrophotomètre UV-Visible à différentes longueurs d'onde. La concentration de colorant
pendant l'hydrolyse a été calculée par la valeur d'absorbance à environ 660 nm [9].

Le pourcentage de dégradation du colorant a été estimé par la formule suivante:

% Décoloration = 100 × (C0 – C) / C

 Où C0 est la concentration initiale de la solution de colorant et C est la concentration


de la solution du colorant après dégradation photocatalytique [10].

57
Chapitre II Matériels et Méthodes

II.3.4. Evaluation de l’activité antibactérienne

II.3.4.1. Taxonomie et caractéristiques des souches bactériennes testées

II.3.4.1.1. Pseudomonas aeruginosa

L‘espèce bactérienne Pseudomonas aeruginosa du grec pseudo (« imitation ») et du latin


aeruginosus (« couvert de rouille ») autre- fois appelée « bacille pyocyanique », du grec puon («
pus ») et kuanos (« bleu foncé »), a été décrite en 1872 par Schroeter, puis en 1882 par un
pharmacien militaire français, A. Gessard. [11].

P. aeruginosa est une bactérie Gram-négative hétérotrophe, mobile, en forme de


bâtonnet, d'environ 1 à 5 µm de long et de 0.5 à 1.0 µm de large. C'est un aérobie facultatif qui se
développe via la respiration aérobie et la respiration anaérobie [12].

C'est un micro-organisme très polyvalent capable de tolérer des conditions de faible


teneur en oxygène. Il peut survivre avec de faibles niveaux de nutriments et croître à des
températures allant de 4 à 42 °C [13]. Pseudomonas aeruginosa est une bactérie commune, un
pathogène opportuniste capable d'infecter les humains avec des défenses naturelles compromises
et de provoquer une maladie pulmonaire grave [14].

Figure II. 3: Pseudomonas aeruginosa sous microscope électronique [15].

58
Chapitre II Matériels et Méthodes

Tableau II. 1: Taxonomie de Pseudomonas aeruginosa [16].

Règne Bacteria
Embranchement Prokaryota
Division Proteobacteria
Classe Gammaproteobacteria
Ordre pseudomonadales
Famille Pseudomonadaceae
Genre Pseudomonas
Espèce Pseudomonas aeruginosa

II.3.4.1.2. Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes est un bâtonnet Gram-positif, facultativement anaérobie, non


spore formant, catalase positive [17], cette bactérie est psychrotrophique et se développe sur une
plage de température de 0 ° à 45 ° C, avec un optimum autour de 37 ° C. L. monocytogenes peut
croître à des pH compris entre 4,4 et 9,4 et à des activités de l'eau ≥ 0,92 avec du chlorure de
sodium (NaCl) comme soluté. L. monocytogenes est largement répandu dans l'environnement et
a été isolé à partir de diverses sources, notamment le sol, la végétation, l'ensilage, les matières
fécales, les eaux usées et l'eau [18]. Elle provoque la listériose et est l'un des agents pathogènes
zoonotiques d'origine alimentaire les plus dangereux [19].

Figure II. 4: Image de Listeria monocytogenes: (A) Observation de Listeria monocytogenes par
microscope optique [20], (B) Observation de Listeria monocytogenes par microscope
électronique [21].

59
Chapitre II Matériels et Méthodes

Tableau II. 2: Taxonomie de Listeria monocytogenes [22-23].

Règne Eubactéries
Phylum Firmicutes
Classe Bacilli
Ordre Bacillalles
Famille Listeriaceae
Genre Listeria
Espèce Listeria monocytogenes

II.3.4.1.3. Escherichia coli

Escherichia coli est une bactérie gram-négative en forme de bâtonnet. Elle mesure 1-3 x
0,4-0,7 µm et 0,6 à 0,7 µm de volume, et se trouve disposée seule ou en paires. Certaines
souches sont mobiles à cause des flagelles péritriches. Elles sont des anaérobies facultatifs et
non sporulants. Sa croissance se produit sur une large plage de températures de 15 à 45 °C [24].
Cette bactérie habite principalement dans le tractus intestinal inférieur des animaux à sang
chaud, y compris les humains, et est souvent rejetée dans l'environnement par les excréments ou
les effluents d'eaux usées [25]. La plupart des souches sont inoffensives, mais certaines
acquièrent des entérotoxines ou des facteurs d'invasion de bactériophages ou d'ADN plasmidique
et deviennent pathogènes [26].

Figure II. 5: Escherichia coli sous microscope électronique [24].

60
Chapitre II Matériels et Méthodes

Tableau II. 3: Taxonomie d‘Escherichia coli [27].

Règne Bacteria
Embranchement Proteobacteria
Classe Gamma proteobacteria
Ordre Enterobacteriales
Famille Enterobacteriaceae
Genre Escherichia
Espèce Escherichia coli

II.3.4.1.4. Bacillus subtilis

Bacillus subtilis est une bactérie du sol, à Gram positif, mobile par des flagelles
peritriches, aérobie, mais dans le cas de la présence de glucose et de nitrate, une croissance
anaérobie peut se produire. Cette bactérie est capable de produire une endospore ayant une haute
résistance aux conditions défavorables. Bacillus subtilis est connue par sa production abondante
de protéines [28]. Les cellules sont en forme de bâtonnet mesurent généralement de 2 à 6 µm de
long et un peu moins de 1 µm de diamètre. La température de croissance optimale est d'environ
30 à 35 °C, ce qui donne un temps de doublement d'à peine 20 min [29].

(a) (b)

Figure II. 6: a) Coloration de Gram de Bacillus subtilis ; b) B. subtilis vue sous


microscopie électronique [30].

61
Chapitre II Matériels et Méthodes

Tableau II. 4: Taxonomie de Bacillus subtilis [29-31].

Domaine Bacteria
Phylum Firmicutes
Classe Bacilli
Ordre Bacillales
Famille Bacillaceae
Genre Bacillus
Espèce Bacillus subtilis

II.3.4.2. Milieux de cultures utilisés

Un seul milieu de culture a été utilisé pour tester l‘action d‘AgNPs synthétisées contre
les souches décrites, il s‘agit de milieu "MRS".

II.3.4.3. Détermination de l'activité antibactérienne par la méthode de diffusion

L‘activité antibactérienne des AgNPs synthétisées est effectuée par la méthode de bien-
diffusion citée par Oza et al. [2]. Les AgNPs synthétisées à partir de Pseudomonas aeruginosa
ont été testées pour l'activité antibactérienne par la méthode de bien-diffusion contre des
organismes pathogènes testés, les cultures pures des bactéries ont été repiquées sur la gélose de
MRS à 37 °C sur un incubateur à 100 tr/min. L‘étape finale de la réalisation de l'activité
antibactérienne par la méthode de bien diffusion est la déposition à la surface de la gélose à
l‘aide d‘une pince, des disques stériles de 6 mm de diamètre (du papier Wathman N° 04) imbibés
d‘environ 20 μl à l'aide d'une micropipette de l'échantillon de solution d‘AgNPs. Après
incubation à 37 °C pendant 18 heures, les différents niveaux de zone d'inhibition ont été mesurés
[2].

Pour quantifier l'activité antibactérienne, le diamètre de l'inhibition a été mesuré avec une
règle et exprimé en millimètre (Tableau II.5) [32].

62
Chapitre II Matériels et Méthodes

Figure II. 7: Etapes de l‘activité antibactérienne des nanoparticules d‘argent.

Tableau II. 5: Sensibilité des souches microbiennes en fonction des zones d‘inhibition [33].

Sensibilité Zone d’inhibition


Non sensible ou résistante (-) diamètre < 8mm
Sensible (+) diamètre compris entre 9 à 14 mm
Très sensible (++) diamètre compris entre 15 à 19 mm
Extrêmement sensible (+++) diamètre > 20 mm

Ce chapitre a présenté les différentes méthodes suivies pour la biosynthèse des


nanoparticules d‘argent à partir de Pseudomonas aeruginosa, les méthodes de l‘optimisation des
paramètres opérationnels pour la biosynthèse maximale et ainsi que la méthode de photocatalyse
et l‘activité antibactérienne.

63
Chapitre II Matériels et Méthodes

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66
Chapitre III
Résultats et discussion
Chapitre III Résultats et discussion

Chapitre III. Résultats et discussion

Dans ce chapitre, la biosynthèse des nanoparticules d‘argent par la souche bactérienne


Pseudomonas aeruginosa, l‘optimisation de différents paramètres opérationnels, la photocatalyse
et l‘activité antibactérienne seront discutés. Le choix d‘une bactérie pour la synthèse est en
fonction de son adaptation à diverses conditions telles que la température, l'aération et le temps
d'incubation, également à sa croissance rapide et pour essayer à remplacer les méthodes
chimique et physique qui sont toxique et dangereux pour la santé et l‘environnement.

III.1. Synthèse de nanoparticules d'argent

La synthèse des AgNPs a été confirmée par le changement de couleur caractéristique,


jaune au brun (Figure III. 1a). Le milieu réactionnel est passé de couleur jaune pâle à la grise
pâle, lors de l'ajout d‘AgNO3. Un autre changement de couleur a été observé, du gris pâle au
brun foncé après environ 24 heures de stockage à 37 °C.

En fait, la couleur brune des AgNPs résulte de la vibration concomitante d'électrons libres
de l'argent métallique qui sont en résonance avec l'onde lumineuse. Cela explique l'origine de
l'absorption par résonance plasmonique de surface (SPR) souvent observée avec des NPs
métalliques [1].

La confirmation de la synthèse des particules des AgNPs en solution a été contrôlée par
l‘analyse spectrale UV-vis pour laquelle des aliquotes du mélange réactionnel (après achèvement
de la réaction) ont été prélevées et utilisées pour les mesures de spectroscopie UV-vis. Dans le
spectre d'absorption UV-vis, un pic large et fort, situé à environ 440 nm, a été observé pour les
nanoparticules synthétisées à l'aide du surnageant de culture (Figure III. 1b). Ce pic indiquait une
résonance plasmonique de surface (SPR), qui a déjà été bien documentée pour diverses
nanoparticules métalliques avec des tailles allant de 2 nm à 100 nm [2].

67
Chapitre III Résultats et discussion

(a) (b)

Figure III. 1: a) Intensité de couleur des nanoparticules d'argent synthétisées par Pseudomonas
aeruginosa ; b) Spectre UV-visible de nanoparticules d'argent synthétisées.

Le principe de la préparation des AgNPs à l'aide de microorganismes est un processus de


bioréduction, les ions argent sont réduits par les enzymes réductases extracellulaires produites
par les micro-organismes en métal argenté dans une plage nanométrique. Le mécanisme
largement accepté pour la synthèse des AgNPs est la présence d'une enzyme qui est le nitrate
réductase et c'est une enzyme du cycle de l'azote responsable de la conversion du nitrate en
nitrite. La réduction médiée par la présence de l'enzyme dans l'organisme s'est avérée être
responsable de la synthèse d‘AgNPs. L'utilisation d'une enzyme spécifique a-NADPH nitrate
réductase dépendante dans la synthèse in vitro de NPs est importante. Pendant la catalyse, le
nitrate est converti en nitrite et un électron sera transporté vers les ions d'argent entrants. La
figure (III.2) montre que le nitrate réductase présente dans les bactéries peut aider à la synthèse
de NPs d‘Ag. Bien que la synthèse d‘AgNPs soit considérée comme une capacité de l'organisme,
elle est principalement considérée comme un mécanisme de défense par les organismes contre
les ions d'argent très réactifs entrants. Les ions argent sont très réactifs et sont connus pour se lier
à divers composants vitaux des cellules induisant la mort cellulaire [3].

68
Chapitre III Résultats et discussion

Figure III. 2: Représentation schématique de la synthèse de nanoparticules d'argent à partir


d'ions argent en forme réduite d'atome d'argent par l'activité de l'enzyme nitrate réductase [4].

III.1.2. Séchage de la solution de nanoparticules d’argent

La poudre d‘AgNPs obtenue après le séchage de solution d‘AgNPs dans l‘étuve est
présentée dans la figure (III.3):

Figure III. 3: Poudre de nanoparticules d‘argent.

69
Chapitre III Résultats et discussion

III.2. Optimisation de divers paramètres opérationnels

L'optimisation de l'environnement externe est importante afin de contrôler les paramètres


de réaction pour atteindre des conditions optimales où un rendement maximum de produit qui
pourrait être obtenu [5].

III.2.1. Effet du pH

Le pH est considéré comme un paramètre important dans la synthèse des AgNPs [6].

La figure (III. 4a) montre que lorsque le pH augmente, le rendement de production


d'AgNPs augmente et ce, c‘est indiqué par le développement d‘une coloration brune foncée. La
coloration de milieu réactionnel reste jaune pâle à pH acide (pH = 2 et 4), tandis que à pH
presque neutre (pH = 6) cette coloration commence à transformer, pour qu‘être plus remarquable
à pH 8 et 10.

Les résultats de l'inspection visuelle sont confirmés par leur absorbance à 440 nm à des
pH de 2, 4, 6, 8 et 10 (figure III. 4b), qui montrent également que l‘absorbance augment avec
l‘augmentation de pH.

L‘absence de formation des AgNPs dans la gamme acide et l‘augmentation progressive


de la production des AgNPs avec l‘augmentation du pH suggère que l'enzyme nitrate réductase
était active en milieu alcalin [7] et qu'il existe des conditions optimales liées au pH pour
augmenter la production d'AgNPs [8].

(a) (b)

Figure III. 4: a) Changement de couleur en fonction de pH ; b) Effet du pH sur la synthèse des


nanoparticules d‘argent.
70
Chapitre III Résultats et discussion

III.2.2. Effet de concentration

L'influence de la concentration d'AgNO3 sur la production d‘AgNPs a été évaluée en


faisant varier la concentration d'AgNO3 (Figure III.5a). Nous avons observé que lors de la
synthèse des AgNPs à différentes concentrations, la couleur des échantillons passait
progressivement du jaune au brun foncé (Figure III.5a). Tous les échantillons étaient transparents
et sont devenus plus foncés avec l'augmentation des concentrations d'argent.

L'effet de diverses concentrations de substrat dans le mélange réactionnel a été montré


également dans la figure (III. 5b) obtenue par spectrophotomètre. Il est clair qu'elles ont eu une
influence évidente sur la biosynthèse des AgNPs. Cette figure montre que la densité optique
augment avec l‘augmentation de concentration d‘AgNPs. Une concentration de 10 mM
d‘AgNO3 s'est avérée être la concentration optimale pour le processus de biosynthèse. Alors que
les autres concentrations (0.5, 1, 2 mM) permettent la synthèse de AgNPs mais avec des
quantités faibles. À ces concentrations plus faibles d'AgNO3, la disponibilité du substrat pour
l'enzyme était insuffisante, ce qui a montré une diminution de la production d‘AgNPs [9]. Nous
avons choisi la concentration de 2 mM en raison de leur moindre toxicité par rapport aux autres
concentrations.

L‘étude de Lee et al. [10] a montrée également que la biosynthèse maximale des
AgNPs était pour une concentration de 10 mM, alors que celle de Dada et al. [11] était pour 1
mM.

(a) (b)

Figure III. 5: a) Changement de couleur en fonction de concentration de nitrate d‘argent ; b)


Effet de la concentration en ions nitrate d‘argent sur la biosynthèse des nanoparticules d'argent.

71
Chapitre III Résultats et discussion

III.2.3. Effet de temps d’incubation

Au fur et à mesure que la durée d‘incubation augmente, la couleur des solutions devient
plus foncée et donc plus les AgNPs se forment. Le temps optimal requis pour l'achèvement de la
réaction de notre étude était de 72 h (Figure III. 6a).

La figure (III. 6b) montre l'effet de différentes périodes d'incubation (temps) sur la
biosynthèse des AgNPs en fonction de l‘absorption. Plus la période d'incubation augmente, plus
la valeur d'absorbance augmente également jusqu'à 72 h.

En raison de l'instabilité des AgNPs, une durée optimale est requise, car l'agglomération
des nanoparticules d'argent après la durée optimale se traduit par des tailles de particules plus
grandes [12].

(a) (b)

Figure III. 6: a) Changement de couleur en fonction de temps d‘incubation ; b) Effet du temps


d‘incubation sur la biosynthèse des nanoparticules d'argent.

III.2.4. Effet du rapport de volume

La figure (III.7a) montre que lorsque le volume de surnageant augment, le


développement d‘une coloration brune indiquant la production d'AgNPs augment pour les
volumes de 80:20, 60:40, 40:60 et 20:80 (surnageant : solution d‘AgNO3) alors que pour le
volume contenant 100% de surnageant cette coloration diminue.

La figure (III.7b) obtenue par le spectrophotomètre, montre que l‘absorbance augment


avec l‘augmentation de volume jusqu‘ à le volume 80:20 après cette volume, l‘absorption

72
Chapitre III Résultats et discussion

commence à diminuer. La meilleure absorption a été donnée par le volume 80:20 alors que la
faible absorption a été le volume de 100% surnageant.

(a) (b)

Figure III. 7: a) Changement de couleur en fonction du rapport de volume ; b) Effet du rapport


de volume sur la biosynthèse des nanoparticules d'argent.

III.2.5. Effet d’agitation, de lumière et d’aération

a) Effet d’agitation

L'influence de l‘agitation sur la production d‘AgNPs a été évaluée en faisant soumis le


mélange à l‘agitation et à sans agitation. Lors de la synthèse, la couleur des deux échantillons
passait progressivement du jaune au brun foncé (Figure III.8a).

Les spectres d'absorption avec et sans agitation sont présentés dans la figure (III.8b). La
bande d'absorption de plasmon de surface caractéristique a été observée à environ 440 nm pour
les deux échantillons. Les deux spectres sont presque identiques, sachant que le pic d‘échantillon
avec agitation est légèrement plus grand que l‘autre, donc l‘agitation ne montre pas d'effet
significatif sur la production des AgNPs et peut donc être négligée.

L‘étude de Kareem et al. [13] a révélé le rôle important de l'agitation lors de la synthèse
verte des NPs.

73
Chapitre III Résultats et discussion

(a) (b)

Figure III. 8: a) Changement de couleur en fonction de l‘agitation ; b) Spectre UV-vis des


AgNPs en fonction de l‘agitation et sans agitation.

b) Effet de lumière

L'influence de la lumière sur la production d‘AgNPs a été évaluée en faisant étudier le


mélange sous et sans lumière (Figure III.9a). En observant la couleur des solutions, on peut dire
que le changement de couleur du jaune au brun foncé, indiquant la formation d‘AgNPs, ne s'est
produit que dans l'échantillon exposé à la lumière du soleil. Cela confirme le rôle de la lumière
du soleil dans l'induction de la formation de nanoparticules d'argent [14], alors que dans
l‘échantillon sans lumière, la couleur n‘était pas changée (Figure III.9a).

Pour confirmer les conclusions de l'inspection visuelle, des spectres UV-visible ont été
prisent. La figure (III.9b) montre les spectres UV-Vis des échantillons étudiés. Nous pouvons
clairement voir que le pic n'est présent que dans l'échantillon exposé à la lumière directe du
soleil, ce qui corrobore à nouveau la conclusion de l'inspection visuelle des échantillons en figure
(III.9b). Dans l‘échantillon exposé à la lumière, une augmentation de l'absorbance du pic et la
forme asymétrique du pic indique un nombre croissant d'AgNPs individuels ainsi que la
formation d'agrégats AgNPs [15] et à partir du pic large dans le spectre UV-Vis, on a supposé
que les particules sont polydispersées [14].

Les AgNPs sont extrêmement efficaces pour absorber et diffuser la lumière. La forte
interaction des AgNPs avec la lumière se produit parce que les électrons de conduction sur la
surface du métal subissent une oscillation collective lorsqu'ils sont excités par la lumière à des
74
Chapitre III Résultats et discussion

longueurs d'onde spécifiques. Connue sous le nom de résonance plasmonique de surface (SPR),
cette oscillation se traduit par des propriétés de diffusion et d'absorption exceptionnellement
fortes [16].

L‘étude de groupe de Kumar [14] a trouvée également les mêmes résultats que notre
étude alors que celle de groupe de Büyük [17] montre que la lumière ne montre pas d'effet
significatif sur la production de nanoparticules de chitosane (CS NPs) et peut donc être négligée.

(a) (b)

Figure III. 9: a) Changement de couleur en fonction de lumière et l‘obscurité ; b) Spectre UV-


vis des nanoparticules d‘argent en fonction de lumière et l‘obscurité.

c) Effet d’aération

L'influence d‘aération sur la production des AgNPs a été évaluée (Figure III.10). Lors de
la synthèse, la couleur des deux échantillons passait progressivement du jaune au brun foncé
mais la coloration est plus remarquée dans le cas de l‘aération.

75
Chapitre III Résultats et discussion

Sans Aération
aération

Figure III. 10: Changement de couleur en fonction d‘aération.

III.3. Dégradation du bleu de méthylène

La dégradation photocatalytique du colorant de bleu de méthylène en utilisant des


d‘AgNPs synthétisées a été initialement identifiée par une observation visuelle. Initialement,
après 1 min d'incubation avec des AgNPs, la couleur du colorant est passée du bleu foncé au bleu
clair (Figure III.11a). Par conséquent, le bleu clair s'est transformé en vert clair après 3 min.
Enfin, le processus de dégradation a été achevé après 5 min et a été identifié par le changement
de couleur du mélange réactionnel en incolore.

Pour étudier la photodégradation du bleu de méthylène, nous avons comparé les courbes
de l‘UV-Vis de bleu de méthylène avant et après la photodégradation. Dans cette partie, nous
avons d‘abords étudié les propriétés optiques du BM avant l‘exposition à la lumière.

A partir de la figure (III.11b), on remarque l‘existence de quatre bandes d‘intensité


variable et localisés, respectivement à 246 nm, 292 nm, 612 nm et 664 nm, ces deux derniers
sont probablement dues aux transitions n-π* de l'azote et du soufre de la structure du bleu de
méthylène. A noter aussi, que le bon choix de la dilution et la bonne précision laisse montrer des
faibles épaulements entre 350 et 550 nm, dues probablement à la résonnance du système
conjugué.

Le spectre d'absorption (Figure III.11b) a montré que les bandes d‘absorption de bleu de
méthylène diminuent pour différents intervalles de temps. Initialement, les bandes d'absorption
de bleu de méthylène commencent à partir de 660 nm puis diminuaient progressivement avec

76
Chapitre III Résultats et discussion

l'augmentation du temps d'exposition et cela indique bien la réaction de dégradation


photocatalytique du bleu de méthylène. L'achèvement de la dégradation photocatalytique des
colorants est connu grâce à la diminution progressive de la valeur d'absorbance du colorant
approchant la ligne de base. Le pourcentage d'efficacité de dégradation des nanoparticules
d'argent a été calculé à 92,7 % à 5 min (Figure III.12). Le pourcentage de dégradation a
augmenté en augmentant le temps d'exposition du complexe de nanoparticules d'argent/colorant.
Le pic d'absorption du colorant bleu de méthylène a diminué et finalement il a disparu en
augmentant le temps de réaction, ce qui indique que le colorant avait été dégradé (Figure
III.11b).

Rasheed et al. [18] ont constaté que la synthèse des nanoparticules réduit les avantages
des composés organiques qui sont hautement pollués dans l'environnement, y compris les
colorants azoïques toxiques, utilisés dans les méthodes chimiques et physiques. La méthode
biologique a été choisie comme méthode d'élimination des colorants principalement parce que
c'est une méthode très facile et non toxique comme mentionné par Robinson et al. [19].

Les nanoparticules d'argent sont considérées comme une option très efficace pour le
traitement photocatalytique car ils peuvent accueillir à la fois les régions UV et visible du spectre
électromagnétique pour un fonctionnement réel [20].

Témoin 1min 3min 5min


(a) (b)

Figure III. 11: a) Observation visuelle du changement de couleur du bleu de méthylène à


l'incolore à différents intervalles de temps ; b) Spectres d'absorption d'une solution aqueuse de
bleu de méthylène traitée avec 10 mg de nanoparticules d'argent synthétisées en utilisant P.
aeruginosa à différents intervalles de temps.

77
Chapitre III Résultats et discussion

Degré de dégradation du colorant


(%)
100 92,7

80
Dégradation (%)

69,2

60 47,45
40 Degré de dégradation du
colorant (%)
20
0
0
Témoin 1 3 5
Temps d'exposition (minute)

Figure III. 12: Dégradation du bleu de méthylène (%) par des nanoparticules d'argent
synthétisées (30 mg).

III.4. Activité antibactérienne

Les AgNPs ont montrées un certain degré d'activité antibactérienne comme on peut le
voir dans les boites de pétri utilisées dans le test de diffusion (Figure III.13). La taille moyenne
de la zone d'inhibition mesurée pour toutes les souches est présentée dans le tableau (III.1),
Listeria monocytogenes, Bacillus subtilis et Escherichia coli étaient les souches les plus
sensibles respectivement alors que la Pseudomonas aeruginosa était la souche la moins sensible.

L'efficacité des AgNPs a montré une meilleure activité pour contrôler les bactéries Gram-
positives contre les bactéries Gram-négatives. Par contre des autres études comme l‘étude de
Kora et al. [21], montrent le contraire et cela était probablement lié aux différentes structures de
la paroi cellulaire et aux différents mécanismes antibactériens de l'Ag contre différentes cellules.
Par exemple, les bactéries Gram-négatives possèdent une fine couche de peptidoglycane, tandis
que les bactéries Gram-positives possèdent une épaisse couche de peptidoglycane, qui est plus
résistante à la diffusion d‘Ag+ [22].

78
Chapitre III Résultats et discussion

Figure III. 13: Activité antibactérienne des nanoparticules d'argent contre diverses souches
bactériennes pathogènes.

Tableau III. 1: Zone d'inhibition des nanoparticules d‘argent contre diverses bactéries
pathogènes.

La souche La zone d’inhibition La sensibilité


Pseudomonas aeruginosa 10 mm Sensible (+)
Listeria monocytogenes 14 mm Sensible (+)
Escherichia coli 12 mm Sensible (+)
Bacillus subtilis 13 mm Sensible (+)

Le travail réalisé dans ce chapitre a permis de synthétiser les nanoparticules d‘argent à


partir de Pseudomonas aeruginosa, de connaitre les paramètres opérationnels pour la synthèse
optimale, d‘utiliser les nanoparticules d‘argent pour la dégradation de bleu de méthylène et
l‘activité antibactérienne.

79
Chapitre III Résultats et discussion

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[18] Rasheed, T., Bilal, M., Li, C., Nabeel, F., Khalid, M., & Iqbal, H. M. N., 2018. Catalytic
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degradation of environmental pollutants. Journal of Photochemistry and Photobiology B:
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[19] Robinson, T., McMullan, G., Marchant, R., & Nigam, P., 2001. Remediation of dyes in
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[20] Rani, P., Kumar, V., Singh, P.P., Matharu, A.S., Zhang, W., Kim, K.H., Singh, J. and
Rawat, M., 2020. Highly stable AgNPs prepared via a novel green approach for catalytic and
photocatalytic removal of biological and non-biological pollutants. Environment
International, 143, p.105924.

81
Chapitre III Résultats et discussion

[21] Kora, A.J. and Sashidhar, R.B., 2015. Antibacterial activity of biogenic silver
nanoparticles synthesized with gum ghatti and gum olibanum: a comparative study. The
Journal of antibiotics, 68(2), pp.88-97.
[22] Saravia, S.G.G.D., Rastelli, S.E., Angulo-Pineda, C., Palza, H. and Viera, M.R., 2020.
Anti-adhesion and antibacterial activity of silver nanoparticles and graphene oxide-silver
nanoparticle composites. Matéria (Rio de Janeiro), 25(2).

82
Conclusion générale et
perspectives
Conclusion générale et perspectives

Conclusion générale
L‘objectif de ce travail vise à biosynthétiser des nanoparticules d‘argent à partir de la
bactérie Pseudomonas aeruginosa et à optimiser les paramètres opérationnels, puis les utiliser
pour évaluer la dégradation de bleu de méthylène et l‘activité antibactérienne.

Dans ce travail, nous avons synthétisé avec succès des nanoparticules d'argent par une
méthode biologique simple en utilisant le surnageant de culture d‘une souche de référence de
Pseudomonas aeruginosa et sans aucun agent réducteur nocif. La présente étude indique la
synthèse extracellulaire des nanoparticules d'argent très stables.

Dans ce travail, nous avons réussi aussi à faire l‘optimisation des paramètres
opérationnels pour la synthèse des nanoparticules d‘argent. Il a été montré que la synthèse de ces
nanoparticules dépend de divers paramètres expérimentaux. On peut conclure que le pH de 10, la
concentration de 10 mM, le temps d‘incubation de 72 h, le rapport volumique de 80:20
(surnageant : solution d‘AgNO3), la présence de la lumière, l‘aération et l‘agitation et l‘absence
de l‘agitation favorisent un rendement optimal des nanoparticules d‘argent.

L'activité photocatalytique des nanoparticules d'argent synthétisées a été examinée par


dégradation du bleu de méthylène. Les nanoparticules d'argent synthétisées dégradaient
efficacement le colorant de près de 92,7% à 5 minute de temps d'exposition. Dans la présente
étude, il s'avère que l'utilisation d'agent réducteur naturel, renouvelable et écologique pour la
synthèse des nanoparticules d'argent présente une excellente activité photocatalytique contre les
molécules de colorant. Ces nanoparticules peuvent être utilisées dans les systèmes de purification
de l'eau et le traitement des effluents du colorant.

Les nanoparticules d'argent biosynthétisées à l'aide de la souche Pseudomonas


aeruginosa ont montré une excellente activité antibactérienne contre les bactéries Gram positives
et Gram négatives. L'activité antibactérienne a été bien démontrée par une zone d'inhibition
considérable de 10, 14, 12 et 13 mm contre Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes,
Escherichia coli et bacillus subtilis respectivement. Ce résultat pourrait être intéressant dans les
domaines pharmacologique et médical.

83
Conclusion générale et perspectives

Perspectives

Faire varier d‘autres paramètres comme : le temps d'agitation, le régime de mélange et la


température de réaction, pour l'optimisation de la synthèse de AgNPs.
Faire la dégradation d‘autres colorants comme le méthyle orange (MO).
Tester l‘activité antimicrobienne sur d‘autres microorganismes comme les virus et les
champignons.
Faire la synthèse d‘AgNPs à partir d‘autres souches microbiennes.
Tester d‘autres activités biologiques comme l‘activité antioxydante,

84
Annexes
Annexes

Annexe 01 : Matériels

- Becher en verre
- Erlenmeyer en verre
- Micropipette
- Pipette
- Bec benzène
- Spatule
- Flacon en verre
- Tube en verre
- Boite de pétri
- Cylindre gradué
- Balance
- Agitateur

Annexe 02 : Produits chimiques

- Nitrate d‘argent (AgNO3)


- Poudre de bleu de méthylène
- Acide chlorhydrique (HCl)
- Eau distillée
- Hydroxyde de sodium (NaOH)
- Ethanol

Annexe 03 : Appareils
- Centrifugeuse (ROTINA 380 R) (Sigma 2-16P)
- Autoclave vertical à vapeur (AE-75 DRY)
- Ultrasons (H.D)
- pH-mètre (starter 5000)
- Etuve (Memmert)
- Spectrophotomètre (UV 2300 II)
- Vortex multitubes (BenchmixerTM XL BV1010)
- Agitateur-incubateur de paillasse KS 3000
Annexes

Annexe 04 : Milieux de culture (Composition en g / l d‘eau distillée)

 BN Bouillon nutritif
- BN.................................................................................................. 08 g
- Glucose........................................................................................... 10 g
 MRS (GELOSE) (De Man, Rogosa, Sharpe)
- Polypeptone.....................................................................................10 g
- Extrait de viande ..............................................................................8 g
- Extrait de levure ..............................................................................4 g
- Glucose............................................................................................20 g
- Tween 80.......................................................................................1,08 g
- Phosphate dipotassique .....................................................................2 g
- Acétate de sodium..............................................................................5 g
- Citrate d‘ammonium..........................................................................2 g
- Sulfate de magnésium...................................................................0,20 g
- Sulfate de manganèse....................................................................0,05 g
- Agar.................................................................... ............................10 g
Résumé
Résumé

La biosynthèse de nanoparticules d'argent (AgNPs) a été réalisée avec succès en utilisant le surnageant
de la souche Pseudomonas aeruginosa . Sept paramètres opérationnels impératifs (pH, concentration,
temps d’incubation, rapport volumique, lumière, agitation, aération) essentiels à la synthèse des
nanoparticules d'argent ont été étudiés. L'étude a montré que le pH de 10, la concentration de 10 mM, le
temps d’incubation de 72 h, le rapport volumique 80:20 (surnageant : solution d’AgNO3), la présence de
la lumière, l’aération et soit l’agitation ou l’absence de l’agitation étaient importants pour optimiser la
synthèse des nanoparticules d'argent. Cette étude a montré la bonne activité photocatalytique des
nanoparticules d'argent sur la dégradation du colorant bleu de méthylène à près de 92,7% à 5 minutes
de temps d'exposition. Les propriétés antibactériennes des nanoparticules d'argent ont été confirmées à
la fois par les bactéries gram positive et négative, Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes,
Escherichia coli et Bacillus subtilis avec des zones d’inhibition de 10, 14, 12, et 13 mm respectivement.
Mots clés : Biosynthèse, Nanoparticules d’argent, Pseudomonas aeruginosa , Photocatalyse, Bleu de
méthylène, Activité antibactérienne.

‫ملخص‬

‫ حًج‬.Pseudomonas aeruginosa ‫( بُجاح باسخخذاو طاف سالنت‬AgNPs) ‫حى حُفٍذ انخخهٍك انحٍىي نجسًٍاث انفضت انُاَىٌت‬
(‫ انخهىٌت‬، ‫ انخحزٌك‬، ‫ انضىء‬، ‫ َسبت انحجى‬، ‫ ولج انخاليس‬، ‫ انخزكٍش‬، (pH) ًٍُ‫دراست سبع يخغٍزاث حشغٍهٍت )انزلى انهٍذروج‬
‫ ساعت‬72 ‫ وسيٍ انحضاَت‬، 10 mM ‫ وحزكٍش‬، 10 ًٍُ‫ أوضحج انذراست أٌ انزلى انهٍذروج‬.‫األساسٍت نخخهٍك جسًٍاث انفضت انُاَىٌت‬
‫ وانخحزٌك أو عذو وجىد انخحزٌك حعخبز يهًت نخخهٍك‬،‫ وانخهىٌت‬،‫ ووجىد انضىء‬، (AgNO3 ‫ يحهىل‬:‫ )طاف‬80:20 ‫ وَسبت انحجى‬،
‫ أظهزث هذِ انذراست انُشاط انخحفٍشي انضىئً انجٍذ نجسًٍاث انفضت انُاَىٌت فً ححهم صبغت‬.‫ألصى نهجسًٍاث انُاَىٌت انفضٍت‬
‫ حى حأكٍذ انخصائص انًضادة نهبكخٍزٌا نجسًٍاث انفضت‬.‫ دلائك يٍ ولج انخعزض‬5 ً‫ ف‬٪92.7 ٍ‫انًٍثٍهٍٍ انشرلاء إنى يا ٌمزب ي‬
،Listeria monocytogenes ،Pseudomonas aeruginosa ، ‫انُاَىٌت بىاسطت كم يٍ انبكخٍزٌا انًىجبت وانسانبت‬
.ً‫ يهى عهى انخىان‬13 ، 12 ، 14 ، 10 ‫ بألطار حثبٍظ‬Bacillus subtilis ‫ و‬Escherichia coli
‫ انًٍثٍهٍٍ األسرق‬،ً‫ انخحفٍش انضىئ‬،Pseudomonas aeruginosa ،‫ انجسًٍاث انُاَىٌت انفضٍت‬، ‫ انخخهٍك انحٍىي‬:‫الكلمات المفتاحية‬
.‫ انُشاط انًضاد نهبكخٍزٌا‬،

Abstract

The biosynthesis of silver nanoparticles (AgNPs) has been successfully carried out using the supernatant
of the Pseudomonas aeruginosa strain. Seven imperative operational parameters (pH, concentration,
incubation time, volume ratio, light, agitation, and aeration) essential to the synthesis of silver
nanoparticles were studied. The study showed that the pH 10, the concentration of 10 mM, the
incubation time of 72 h the volume ratio 80:20 (supernatant: AgNO3 solution), the presence of light, the
aeration and either the agitation or absence of agitation was important for the maximum synthesis of the
silver nanoparticles. This study showed the good photocatalytic activity of silver nanoparticles on the
degradation of methylene blue dye to nearly 92.7% at 5 minutes of exposure time. The antibacterial
properties of silver nanoparticles were confirmed by both gram positive and negative bacteria,
Pseudomonas aeruginosa , Listeria monocytogenes, Escherichia coli and Bacillus subtilis with zones of
inhibition of 10, 14, 12, and 13 mm respectively.
Keywords: Biosynthesis, Silver nanoparticles, Pseudomonas aeruginosa , Photocatalysis, Methylene
blue, Antibacterial activity.

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