Chromatographie sur couche mince

2010-2011

Introduction :

La chromatographie est une méthode physique de séparation de mélanges en leurs

constituants; elle est basée sur les différences d’affinité des substances à l’égard de deux
phases, l’une stationnaire ou fixe, l’autre mobile.
La chromatographie sur couche mince, ou sur plaque (CCM), est effectuée surtout en vue
d’une analyse d’un mélange.
La phase stationnaire solide est fixée sur une plaque, et la phase mobile liquide, nommée
éluant, est un solvant ou un mélange de solvants.
On dépose sur la phase fixe une petite quantité du mélange à séparer et on met cette
phase au contact de la phase mobile.
La phase mobile migre de bas en haut, par capillarité, le long de la phase fixe en
entraînant les constituants du mélange. C’est le phénomène d’élution, qui permet la
séparation des constituants du mélange à analyser.
Chaque constituant migre d’une certaine hauteur, caractéristique de la substance, que l’on
appelle rapport frontal ou rétention frontale (Rf) :
Hauteur de la tache
Rf =
----------------------------------------------
--------------
Chaque tache correspond à un constituant et on l’identifie par comparaison du Rf avec un
témoin (une même substance migre à la même hauteur dans des conditions opératoires
identiques; même Rf).
Les techniques chromatographiques sont utilisées pour la séparation de mélanges en leurs
constituants.
Les deux techniques chromatographiques utilisées sont :
- la chromatographie sur colonne, qui permet de séparer un mélange en vue d’isoler de
petites quantités de chacun des constituants séparés de ce mélange.
- la chromatographie sur couche mince (CCM), qui est destinée surtout à la séparation
en vue d’analyse d’un mélange.
Caractérisation de notre substance à analyser :

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Eucalyptol

Nom chimique 1,3,3-trimethyl-2-oxabicyclo[2,2,2]octane

C10H18O  [Isomères]
Formule chimique
154,249703 g∙mol-1

Numéro CAS 470-82-6

Densité 0,9225

Température de
1,5 °C ( 274,66 K)
liquéfaction

Température d'ébullition 176 - 177 °C (449 - 450 K)

SMILES CC1(C2CCC(O1)(CC2)C)C

L'eucalyptol est un composé naturel organique incolore. C'est un éther cyclique et

un mono terpène. Il porte également toute une série d'autres noms équivalents : 1,8
cinéol, cinéol.

Caractérisation la phase stationnaire :

Gel de silice

Surface du gel de silice sec et hydraté

Le gel de silice est un polymère d'acide silicique Si(OH)4 préparé à partir de silicate de
sodium.

Structure et propriétés :

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Perles de gel de silice

L'intérieur de chaque grain de silice est composé d'atomes de silicium reliés entre eux par
des atomes d'oxygène (un silicate). En surface, des groupes silanol (Si–OH) subsistent et
sont responsables de la très forte polarité du gel de silice. En présence d'eau, cette surface
s'hydrate ce qui provoque une diminution de la polarité.
Les grains de gel de silice sont poreux et la taille des grains et des pores dépend très
fortement de la méthode de préparation utilisée. Cette structure est responsable de la très
grande surface spécifique, typiquement 500-600 m2/g.

Principe de la CCM :

Lorsque la plaque sur laquelle on a déposé l'échantillon est placée dans la cuve, l'éluant
monte à travers la phase stationnaire, essentiellement par capillarité. En outre, chaque
composant de l'échantillon se déplace à sa propre vitesse derrière le front du solvant.
Cette vitesse dépend d'une part, des forces électrostatiques retenant le composant sur la
plaque stationnaire et, d'autre part, de sa solubilité dans la phase mobile. Les composés se
déplacent donc alternativement de la phase stationnaire à la phase mobile, l'action de
rétention de la phase stationnaire étant principalement contrôlée par des phénomènes
d'adsorption. Généralement, en chromatographie sur couche mince, les substances de
faible polarité migrent plus rapidement que les composants polaires.

 
 
 
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Les applications de la CCM :

Lorsque les conditions opératoires sont réunies, elle permet d’identifier facilement et
rapidement la pureté d’un composé organique, si l’élution est effectué par diverse
solvant et révèle sur le même composé, on outre elle est connue comme une technique
d’essai pour choisir les phases stationnaires ce chois qui s’extrapole directement à la
technique sur colonne puisque elles utilisent les mêmes phases fixes

Montage et mode opératoire :

Repenses aux questions :

1- Observation

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Après avoir immergé les deux plaques sur lesquelles nous avons déposé deux goutes
une le référence et l’autre de notre échantillon obtenue par extraction (à partir des feuilles
d’Eucalyptus) de manière que les gouts soit de même niveau que l'éluant ; ce dernier
migre par capillarité dans l’adsorbant (la silice), entraînant avec lui des traces de notre
substance ainsi que la référence. Lorsque le niveau de l'éluant atteint ¾ de la plaque.
Sous la hotte Nous X la plaque séchée a des vapeurs de diiode qui va révéler les traces
de notre substance, des taches de couleur (marron) apparaissent sur la section de
séparation chromatographique ce qui indique la position des taches cela est bien observé
sous une lampe UV. Ces couleurs subsistent uniquement pendant une courte durée et il
faut les marquer immédiatement au crayon afin de déterminer les de chaque tache.

Remarque : Nous avons observé des taches de différentes intensités de couleur, cela
est dû au volume de la goutte et l’affinité de notre substance avec la phase
stationnaire.

2- Le mécanisme de rétention :

Dans le cas de la chromatographie sur couche mince, le gel de silice est mélangé à
un liant, comme du plâtre, auquel on ajoute souvent un pigment fluorescent qui permet
une détection des composés par exposition à une lumière ultraviolette. Le mélange est
déposé sur un support inerte (plaque de verre, de plastique, d'aluminium), laissé sécher
puis activé à chaud. Les énergies d’adsorption varient avec la nature des silanols (selon
qu’ils sont libres ou liés) et selon qu’ils sont ou non recouverts par une molécule d’eau.
Pour des solvants de polarité moyenne, les énergies d’adsorption des solutés avec les
silanols liés et avec les silanols libres recouverts d’une molécule d’eau sont sensiblement
identiques mais nettement plus faibles qu’avec les silanols libres (recouverts par des
molécules de solvant autre que l’eau). Autrement dit, d’un point de vue énergétique, la
silice est un solide hétérogène, ce qui complique beaucoup les modèles théoriques. Une
approche simplifiée peut être faite si le taux de recouvrement en eau des silanols libres
est maintenu constant : on définit une constante de distribution moyenne du soluté qui
prend en compte, selon leurs poids respectifs, l’adsorption et la désorption du soluté sur
les deux types de site (silanols liés ou silanols libres recouverts d’une molécule d’eau,
silanols libres recouverts d’une molécule de solvant). L’eau (qui est toujours présente
dans le ou les solvants constituant la phase mobile) joue, en chromatographie
d’adsorption, un rôle privilégié dans la mesure où elle s’adsorbe préférentiellement sur
les silanols libres et modifie ainsi la constante de distribution des solutés

3- La réaction de révélation :

 Sécher la plaque à l’aide d’un sèche cheveux

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 les composantes sont incolores, il faut donc les révéler au diiode. Pour cela sous la
hotte placer un cristal de diiode dans un bécher de 250ml, le fermer avec une boite
pétrie et chauffer le cristal pour qu’il se sublime .introduire la plaque de
chromatographie à l’intérieur
 le diiode gaz va alors révéler les différents composants. Sortir le plaque avant quelle
ne soit complètement saturé
 cercler les taches et calculer les rapports frontaux pour chaque composé

4- Détermination Les valeurs de Rf :

- Les points de couleur sont alors déterminés par :

d i : distance parcourue par le composé (mesuré au centre de la tache)
d s : distance parcourue par l’éluant

Rf = d i / d s

Référence :

Experience 1: d i = 3.7 Cm
d s = 5.4 Cm Rf1= 0.68

Experience 2: d i = 3.8 Cm Rf2= 0.67

d s = 5.6 Cm

Echantillon :

Experience 1: d i = 3.9Cm
RF’1= 0.72
d s = 5.4 Cm

Experience 2: d i = 4.1 Cm
d s = 5.6 Cm RF’2= 0.73

5- Interprétation des résultats :

En comparant les deux expériences 1 et 2 on constate que notre échantillon extrait

des feuilles d’Eucalyptus et celle du produit pharmaceutique supposé comme Eucalyptol
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pur sont de même nature car les rapports frontaux pour la première expérience Rf 1 et
Rf’1 qui sont presque identiques, de même pour la deuxième expérience ; Donc d’après
ces résultats obtenus, on peut conclure que l’échantillon extrait des feuilles s’agit bien de
l’Eucalyptol ce qui signifie que l’extraction à partir des feuilles d’Eucalyptus été bonne et
le produit obtenu contient bel et bien d’Eucalyptol.

Conclusion :
Dans ce présent TP , on a piu atteindre son objectif , en commençant par
l’extraction d’eucalyptol à partir des feuilles de l’eucalyptus et en l’identifiant grâce à la
chromatographie sur couche mince, nous avons pas vraiment trouvé des bons résultats
car cette méthode exige l’utilisation des cuve spécifique et de plus la référence utilisée
n’est pas pure à 100% acaude des additifs .La chromatographie sur couche mince est une
méthode d’analyse qualitative très simple qui indique le nombre de composants d’un
mélange, une séparation généralement moins bonne. Elle n’est pas coûteuse, on peut
l’employer pour suivre la progression d’une réaction.
A travers tout ce qu'on a vu dans ce TP, on peut conclure que la chromatographie
sur couche mince est une méthode d'analyse, certes plus qualitative que quantitative,
mais elle d'un très grand intérêt dans le domaine de l'analyse dans les lieux ou on ne peut
pas utiliser les techniques qui demandent plusieurs conditions : appareils, des
laboratoires…, c'est le cas typique de l'analyse des toxiques de guerres sur le terrain, là
ou elle est très utilisée vue sa simplicité et efficacité, et enfin il faut savoir que la ccm a
d'autres domaines d'applications comme l'analyse des aliments, le taux de stabilisants
dans les propergols (pyrotechnie)…